一种抗菌促修复止血防粘连膜及其制备方法与流程

本发明属于生物医用材料技术领域，涉及一种抗菌促修复止血防粘连膜及其制备方法。本申请的医用止血防粘连膜具有可快速止血的同时，起到高粘附、防止位移、抗菌、促修复、防粘连的功效。

背景技术：

在突发性事故的急救、手术以及在战争中，50%的死亡是因大量出血导致。一些传统的止血材料，例如止血纱布、止血绷带、止血棉纱等，他们的止血能力有限，止血效果并不十分理想。因此，开发出高效而且快速可吸收的止血材料及产品，在出血发生后的1-2分钟，甚至更短的时间内，有效地快速止血，这成为止血材料研发的主要目标之一。止血膜是一种用于在进行外科手术时对伤口进行止血的材料，当将止血膜贴敷到血管破损处时，其中亲水性高分子材料会与血小板发生粘着和凝聚作用，然后形成血小板血栓，继而凝成纤维蛋白栓塞来堵住血管破损处，从而达到止血作用。

在伤口修复过程，防止愈合过程中感染已经成为很重要的方面。壳聚糖能够增加细菌细胞外膜和内膜的渗透性，且其质子化的氨基可破坏细菌细胞膜的结构和功能，进而使细胞膜的完整性遭到破坏，从而抑制细菌活性。故壳聚糖已经被广泛应用于止血膜的制备。

例如在申请号为201410748532.3的发明专利中，公开了一种复合止血膜材料，包括壳聚糖膜层和淀粉/明胶膜层，所述壳聚糖膜层和淀粉/明胶膜层的质量比为(1:1)～(1:20)；此发明还公开了一种复合止血膜材料的制备方法，将配制的壳聚糖溶液置于模具中干燥成型，制得壳聚糖膜层；将淀粉溶液与明胶溶液按质量为(1:1)～(5:1)共混配制共混液，将共混液加入所述的壳聚糖膜上，固化成型，得到复合止血膜。此发明中的复合止血膜可同时启动几种止血机制，高效止血，同时与创面有较佳的粘附性；另外，此发明制备的复合止血膜材料具有良好的生物相容性、可吸收降解，有效止血的同时具有一定的抑菌性、促愈合作用。但该止血膜由于单纯为生物可降解材料组成，存在吸收血液后溶胀率偏大、机械性能偏低、粘附性能不佳、抑菌和促愈合效率低的缺点。

申请号为201210500299.8公布了一种羧化壳聚糖的制备方法和用途。其用戊二醛与壳聚糖反应制备了羧化壳聚糖。羧化壳聚糖溶于酸溶液中，将该溶液注于模具中，在其上密闭覆盖单向渗透膜，再将模具浸泡碱性介质中制得壳聚糖凝胶，然后去离子水洗至中性；再将其浸入氯化钙溶液中，交联，取出，洗涤干净；再将凝胶浸泡在丙三醇溶液中，取出后沥干；然后置于无水乙醇环境中单面熏蒸，干燥即得羧化壳聚糖止血膜。此专利获得的止血膜中交联有适量的氯化钙，在止血过程中科提供一定量的钙离子，因此可增强凝血作用；该羧化壳聚糖止血膜经过塑化和单面乙醇熏蒸之后，使得羧化壳聚糖止血膜的一面具有较强的创面粘附性能，而另一面（乙醇熏蒸面）经过乙醇熏蒸处理之后无粘结性，与周围组织起到隔离作用。但该止血膜与创面粘附作用主要是分子间作用力，与共价键相比较弱，且该止血膜附有单向渗透膜，虽然可起到防止粘连作用，但是其不可降解，生物相容性较差。

市场上常见的大清可吸收止血膜是由透明质酸钠和羧甲基壳聚糖经共混、分装、冷冻干燥、裁剪、包装和辐照等工序制得。该止血膜与伤口接触后，短时间内可编程凝胶，吸附于创面上，大大节约手术时间，提高手术效率，降低手术风险。但该止血膜存在吸收血液后仍存在溶胀率偏大、机械性能偏低、粘附性能不佳的缺点。

综上所述，临床上急需一种生物相容性好、单面粘附性高、强度高、具有长效高效抑菌和促修复功能的止血防粘连膜。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种生物相容性好、单面粘附性高、强度高、具有长效高效抑菌和促修复功能的止血防粘连膜。

一种抗菌促修复止血防粘连膜，所述止血防粘连膜由n-马来酰化壳聚糖、透明质酸钠、丙烯酰胺、ε-聚赖氨酸、丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和n,n'-亚甲基双丙烯酰胺充分反应后，加入丙烯酸和第一部分光引发剂，在紫外灯下预聚合后，单面雾化喷涂丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯、丙烯酰胺、丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和第二部分光引发剂的混合液，在紫外灯下二次聚合后，经程序真空干燥、灭菌制得。

进一步的，所述n-马来酰化壳聚糖重量百分比为2-4%，优选为2.5-3.5%。透明质酸钠重量百分比为0.5-1.5%，优选为0.75-1.25%。丙烯酰胺重量百分比为25-35%，优先为27.5-32.5%。丙烯酸重量百分比为10-20%，优选为12.5-17.5%。ε-聚赖氨酸重量百分比为0.10-0.20%，优选为0.125-0.175%。丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯重量百分比为4-8%，优选为5-7%。n,n'-亚甲基双丙烯酰胺重量百分比为0.01-0.02%。第一部分光引发剂重量百分比为1.1-1.7%。表面喷涂溶液中丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯重量百分比为1-2%，优选为1.25-1.75%。丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯重量百分比为2-4%，优选为2.5-3.5%。丙烯酰胺重量百分比为1-2%，优选为1.25-1.75%。第二部分光引发剂重量百分比为0.05-0.10%。

所述n-马来酰化壳聚糖的分子量为20-200kda，马来酰化取代度为20-40%。

所述透明质酸钠由高分子量透明质酸钠和低分子量透明质酸钠组成，其中高分子量透明质酸钠的分子量为1500-2200kda，低分子量透明质酸钠的分子量为10-100kda，高分子量透明质质酸与低分子量透明质酸钠的质量比为4:1。

所述第一部分光引发剂和第二部分光引发剂为2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮。

所述预聚所用紫外灯功率为150w，波长为365nm，照射时间为20-40min。所述二次聚合所用紫外灯功率为150w，波长为365nm，照射时间为10-20min。

所述ε-聚赖氨酸分子量为3600-4300da。

所述丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯分子量为1-3.4kda。

本发明还提供了抗菌促修复止血防粘连膜的制备方法包括以下步骤：

（1）交联反应：将n-马来酰化壳聚糖、透明质酸钠、丙烯酰胺、ε-聚赖氨酸、丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解后，继续搅拌20min，得经交联反应后的混合液。

（2）预聚反应：将步骤（1）中得到的混合液，加入丙烯酸和第一部分光引发剂，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，置于紫外灯下预聚，得凝胶预聚体。

（3）二次聚合反应：向步骤（2）中得到的凝胶预聚体单面均匀涂布丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯、丙烯酰胺、丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和第二部分光引发剂的混合液，使混合液均匀分散到凝胶预聚体表面，在紫外灯下二次聚合，得凝胶产物。

（4）真空干燥：将步骤（3）中得到的凝胶状产物置于模具中，置入程序真空干燥机中，经程序真空干燥后得到未灭菌抗菌促修复止血防粘连膜。

（5）灭菌：将步骤（4）中得到的未灭菌可粘附抗菌促修复止血防粘连膜，经包装、15-25k电子束辐照灭菌，得可粘附抗菌促修复止血防粘连膜成品

所述的一种抗菌促修复止血防粘连膜的制备方法步骤（3）中所述使混合液均匀涂布到凝胶预聚体表面的方法为雾化喷涂法。

所述的一种抗菌促修复止血防粘连膜的制备方法步骤（4）中所述程序真空干燥的方法为：首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1-2h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥2-4h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1-2h。

本发明所使用的组分均可以是商购产品，其结构和组成也是本领域技术人员所知晓的。

本发明提供的技术方案带来的有益效果是：

1.本发明n-马来酰化壳聚糖、丙烯酰胺和ε-聚赖氨酸上的氨基可与丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯发生亲核取代反应，而丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯中的双键又可与n-马来酰化壳聚糖、丙烯酰胺、丙烯酸、n,n'-亚甲基双丙烯酰胺在光引发剂下发生自由基聚合反应，从而形成多维度和高混度的化学交联方式，保证了止血防粘连膜溶胀后的机械强度。

2.本发明止血防粘连膜外层含有酰胺键，内层含有酰胺键和羧基，内外层通过吸水动力学，可快速清除止血防粘连膜与伤口组织界面中的水分，使止血防粘连膜中的聚丙烯酰胺链段和n-羟基琥珀酰亚胺酯基团与组织产生强共价键和分子间作用力，再加上止血防粘连膜具有高机械强度，从而使止血防粘连膜可通过机械压迫，高效止血，且不受血液与组织液影响。

3.本发明利用高分子量的透明质酸物理交联入止血膜内，可使止血防粘连膜具有防粘连的作用。

4.本发明将壳聚糖、低分子量透明质酸钠和ε-聚赖氨酸通过化学和物理交联到止血防粘连膜整个网络体系中，随着止血防粘连膜在伤口处的降解，可缓慢释放壳聚糖、低分子量透明质酸和ε-聚赖氨酸，不但起到了长效高效抑菌的作用，而且可对伤口起到促愈合的作用。

5.本发明利用特定的程序冻干、灭菌和保存工艺，在保证止血防粘连膜无菌提供的同时，还可保证止血防粘连膜高效粘附功能。

附图说明

附图1是实施例1所述止血防粘连膜随时间降解曲线图。

附图2是止血防粘连膜结构图。

具体实施方式

以下结合实施例和比较例对本发明的技术方案作进一步的详细说明。但本发明不受这些具体实施例的限制。实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。本发明中对止血防粘连膜的检测采用以下检测方法：

（1）表面粘附力测试

将大鼠背部皮肤切开一个1cm×1cm的创面，然后将试验材料贴附于创面区域，按压10min后，从材料侧面进行剥离，测定拉力值，即为创面表面粘附力强度，每个样品测试6次取平均值。

（2）破裂强度试验

按照astmf2392-04的方法测定可粘附促愈合止血防粘连膜的破裂强度，重复5次取平均值。

（3）体积溶胀率试验

体积的测试方法选用排液法，将止血防粘连膜材料置于装有一定体积液体的量筒中，读取液面升高数值，分别测得止血防粘连膜材料吸水溶胀前的体积v0及充分吸水溶胀后的体积v1。体积溶胀率计算方法为：饱和溶胀后的体积v1与初始体积v0的差值占初始体积v0的百分比，每个样品测试6次取平均值。

（4）吸水倍率试验

将0.025g止血防粘连膜置于2ml水中进行静置10min，然后在500rpm转速下进行离心10分钟后取出，称重计算残液量，每个样品测试6次取平均值。

（5）吸水速率试验

将1cm×1cm，厚度为1mm的止血防粘连膜，用移液枪滴加20μl纯化水，记录水滴被吸收时间，即为止血防粘连膜的吸水速率，每个样品测试5次取平均值。

（6）体外细胞毒性试验

按照医疗器械生物学评价第5部分：细胞毒性试验gb/t16886.5-2017进行。

（7）皮肤刺激和致敏试验

按照医疗器械生物学评价第10部分：刺激与迟发型超敏反应试验gb/t16886.10-2017进行。

实施例1将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、6%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

实施例2将质量分数为4.0%的n-马来酰化壳聚糖（20-80kda，取代度20-30%）、0.4%高分子量透明质酸钠、0.1%低分子量透明质酸钠、25%丙烯酰胺、0.1%的ε-聚赖氨酸、8%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.010%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.25%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合40min，取出预聚体，在单面雾化喷涂2.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（1kda）、1.0%丙烯酰胺、2.0%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.05%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合10min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.0h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥4.0h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.0h，经包装、15k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

实施例3将质量分数为2.0%的n-马来酰化壳聚糖（20-80kda，取代度20-30%）、1.2%高分子量透明质酸钠、0.3%低分子量透明质酸钠、25%丙烯酰胺、0.2%的ε-聚赖氨酸、4%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.02%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入20%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合20min，取出预聚体，在单面雾化喷涂4.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（3.4kda）、2.0%丙烯酰胺、2.0%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.10%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合20min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥2h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥4h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥2h，经包装、25k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

实施例4将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、1.2%高分子量透明质酸钠、0.3%低分子量透明质酸钠、35%丙烯酰胺、0.20%的ε-聚赖氨酸、8%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.020%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入20%丙烯酸和1.7%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

实施例5将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.4%高分子量透明质酸钠、0.1%低分子量透明质酸钠、25%丙烯酰胺、0.10%的ε-聚赖氨酸、4%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.010%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入10%丙烯酸和1.1%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

实施例6将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、5%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂2.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（3.4kda）、1.0%丙烯酰胺、1.0%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.05%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合10min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

实施例7将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、5%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合40min，取出预聚体，在单面雾化喷涂4.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（1kda）、2.0%丙烯酰胺、2.0%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.10%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合20min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

实施例8将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、5%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥2h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

实施例9将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、5%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥2h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥4h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥2h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

比较例1将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、6%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

比较例2将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、6%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

比较例3将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、0.15%的ε-聚赖氨酸、6%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

比较例4将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、6%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

比较例5将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

比较例6将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、6%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥1.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥3h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥1.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

比较例7将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、6%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥4h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥6h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥4h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

比较例8将质量分数为3.0%的n-马来酰化壳聚糖（90-120kda，取代度25-35%）、0.8%高分子量透明质酸钠、0.2%低分子量透明质酸钠、30%丙烯酰胺、0.15%的ε-聚赖氨酸、6%的丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯、0.015%n,n'-亚甲基双丙烯酰胺加入到纯化水中，在100-200rpm下搅拌至完全溶解，继续搅拌20min，加入15%丙烯酸和1.4%的2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮，在100-200rpm下搅拌至溶液均匀，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下预聚合30min，取出预聚体，在单面雾化喷涂3.0%丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯（2kda）、1.5%丙烯酰胺、1.5%丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯和0.07%2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮的混合液，在功率为150w，波长为365nm，紫外灯下聚合15min。聚合完成的凝胶状产品喷涂面朝上置于模具中，置入程序真空干燥箱中，首先在真空度为80pa、温度为4℃下干燥0.5h，然后在真空度为30pa、温度为10℃下干燥1h，最后在真空度为15pa、温度为15℃下干燥0.5h，经包装、20k电子束灭菌，得到可粘附促愈合止血防粘连膜。

分别按照表面粘附力测试方法、破裂强度试验方法、体积溶胀率试验方法、吸水倍率试验方法、吸水速率试验方法、体外细胞毒性试验方法、皮肤刺激和致敏试验方法对止血防粘连膜的理化性能和生物学进行了检测，结果如表1和表2所示。

通过表1中实施例1-3、表2比较例2-6可知，止血防粘连膜的表面粘附力与与膜表面丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯、聚丙烯酰胺、丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯接枝率，膜的吸水速率，膜的体积溶胀率有关。膜的体积溶胀率越低，吸水速率越快，膜表面丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯、聚丙烯酰胺、丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯接枝率越高，止血防粘连膜的粘附力越强。

通过表1中实施例1-8和表2中比较例1-8可知，止血防粘连膜的破裂强度与膜表面粘附力及膜内交联密度有关。止血防粘连膜的表面粘附力越强、膜内交联密度越大，止血防粘连膜的破裂强度越高。

通过表1中实施例1-8和表2中比较例1-8可知，止血防粘连膜的体积溶胀率、吸水倍率与膜中的交联密度有关，当膜中氨基含量、丙烯酸n-羟基琥珀酰亚胺酯含量及交联剂含量越高时，膜的交联密度越高，膜的体积溶胀率和吸水倍率越低。另外，通过表1中实施例1和表2中比较例2-3可知，体积溶胀率和吸水倍率与膜中羧基和酰胺基含量有关，羧基和酰胺基含量越高，膜体积溶胀率和吸水倍率越高。

通过表1实施例1-9可知，止血防粘连膜的生物相容性较好，止血防粘连膜的细胞毒性试验、皮肤刺激和致敏试验均符合医用止血防粘连膜的生物相容性要求。

取实施例1所述样品，按以下试验方案，做了体外降解试验，结果如附图1所示，止血防粘连膜可在116天内完全降解。

体外降解时间的检测：

1.待测样品的制备：将样品切成1cm*1cm*1cm的正方体膜备用。

2.配制ph值为7.4的pbs缓冲溶液。

3.体外降解时间的检测：将1制备好的样品放入装有pbs缓冲溶液的密闭容器中，并转移到37±1℃培养箱内，每隔72h称量一次重量，观察样品在缓冲液中的变化情况，直至肉眼看不见为止，即为样品体外降解时间。

止血试验：

取实施例1所述样品（试验组）和比较例6所述样品（对照组），按以下试验方案，做了相关止血试验，结果如表3所示。

（1）股动脉止血试验

以sd大鼠的股动脉损伤出血为模型，麻醉后剃掉腿部毛，露出腹股沟与后肢，横切大腿皮肤和肌肉，露出动脉，手术针刺穿动脉制造大出血。将0.5g样品立即覆盖在伤口处，并用纱布按压操作，每隔5s抬起纱布观察，直到止血结束。统计止血时间和出血量。

（2）肝创伤止血试验

以sd大鼠的肝脏损伤出血为模型，通过水合氯醛水溶液腹腔注射麻醉及腹毛而剃掉，在腹部被打开，露出肝脏。用手术刀开一个长度1cm，深度1cm的伤口。用0.1g材料直接洒在出血肝脏的顶部，盖上纱布垫，同时实施常规的按压操作。每隔5s抬起纱布，观察出血情况直到止血，统计出血时间和出血量。

伤口愈合试验：

小鼠皮肤伤口模型的建立：

小鼠经乙醚麻醉，背部剪毛，用剃毛刀将背侧毛剃干净，70%乙醇清洗皮肤消毒。在脊柱左右两侧相同位置各做一个稍大于直径1cm的圆形记号，无菌条件下用直径1cm的皮肤活检打孔器在圆形记号内制造一个全层皮肤伤口。造模后伤口暴露，单笼饲养。将致伤当天记为第0天。

试验动物分组

54只spf级18-22g雄性昆明种小白鼠，适应性喂养1周后，随机分为3组，每组18只，包括对照组1、对照组2和试验组。试验组采用实施例1中的配方，对小鼠皮肤伤口进行治疗；对照组1采用比较例1所述样品，对照组2采用比较例2所述样品对小鼠皮肤伤口进行治疗。在20天内观察伤口愈合情况，记录感染率。

小鼠皮肤伤口愈合率的测定

致伤后每两天给小鼠伤口拍照，采用image-proplusversion6.0图像分析软件计算小鼠的伤口面积，直至伤口愈合。

愈合率=（原始伤口面积-未愈合伤口面积）/原始伤口面积×100%

伤口愈合（创面完全上皮化）标准：愈合面积大于原始伤口面积的95%或者伤口面积小于原始伤口面积的5%即为完全愈合。

肝创伤止血后粘连试验

分别取实施例1（试验组）、比较例1（对照组1）和比较例2（对照组2）所述样品，做以下肝脏止血试验，术后140天观察肝脏伤口粘连情况。每种样品做5组试验。

以sd大鼠的肝脏损伤出血为模型，通过水合氯醛水溶液腹腔注射麻醉及腹毛而剃掉，在腹部被打开，露出肝脏。用手术刀开一个长度1cm，深度1cm的伤口。用0.1g材料直接洒在出血肝脏的顶部，盖上纱布垫，同时实施常规的按压操作。每隔5s抬起纱布，观察出血情况直到止血，止血后取走纱布垫，将皮肤缝合、消炎处理后正常饲养。

由表3可知，在用抗菌促修复止血防粘连膜进行的肝脏止血和股动脉止血试验效果明显好于对照组，其肝脏止血时间较对照组下降49.7%，肝脏出血量下降56.8%，股动脉止血时间较对照组下降68.3%，股动脉出血量下降51.2%。可见，丙烯酸酯peg-n羟基琥珀酰亚胺酯和聚丙烯酰胺的加入，可使止血效果有较大提升。

由表4可知，在用抗菌促修复止血防粘连膜进行的对小鼠皮肤伤口愈合试验效果明显好于对照组，试验组在12天便可促进伤口愈合，而对照组促进伤口愈合的时间为20天和18天。可见，在止血防粘连膜中引入透明质酸及ε-聚赖氨酸，并经过特定的程序化真空干燥工序后的止血防粘连膜具有良好的促愈合功能，其中ε-聚赖氨酸的加入，起到抑菌的同时，减少了感染率，间接促进了伤口的愈合。

由表5可知，试验组伤口感染率和粘连率明显少于对照组。可见，透明质酸的引入使粘连情况明显好转，而ε-聚赖氨酸的加入，明显降低了伤口的感染率。

以上公开的仅为本发明的几个具体实施例，但是，本发明并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。