一种毛诃子提取物及毛诃子多酚的应用的制作方法

本发明涉及医药技术领域，尤其是涉及一种毛诃子提取物及毛诃子多酚的应用。

背景技术：

毛诃子是毗黎勒植物terminaliabellerica(gaert.)roxb.(tb)的干燥成熟果实，化学成分包括酚酸、鞣质、木脂素和萜类等，作为人们常用的藏药，可抗氧化抵抗炎症，抑制肿瘤。炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,ibd)是一类临床表现为反复发作的腹痛、腹泻和黏液脓血便的慢性非特异性肠道炎症性疾病,其致病因素与免疫，遗传和环境相关，近年来在我国发病率大幅度增加。由于发病机理还存在着很多未知领域，整个病程多迁延且不易根治。以前受限于经济和科学水平，我国部分地区的医疗对ibd并未重视，很多患者都是在肠病反复发作导致不可逆性肠损伤，肠穿孔甚至肠癌时才得以确诊，结果终身都需要治疗，为自己和家庭带来极大地苦痛，因此进一步寻找新的有效肠炎治疗药物非常迫切。

鉴于此，特提出本发明。

技术实现要素：

本发明的第一发明目的在于提供一种毛诃子提取物在制备治疗炎症性肠病的药物中的应用。

本发明的第二发明目的在于提供一种毛诃子提取物在制备用于抑制树突细胞的成熟的药物中的应用。

本发明的第三发明目的在于提供毛诃子多酚在制备治疗炎症性肠病的药物中的应用。

本发明的第四发明目的在于提供毛诃子多酚在制备用于抑制树突细胞的成熟的药物中的应用。

为了完成本发明的发明目的，采用的技术方案为：

本发明提供一种毛诃子提取物在制备治疗炎症性肠病的药物中的应用。

本发明还提供一种毛诃子提取物在制备用于抑制树突细胞的成熟的药物中的应用。

可选的，所述毛诃子提取物为采用含水有机溶剂提取得到，优选的，所述提取方法至少包括以下步骤：

s1、粉碎毛诃子药材，用含水有机溶剂提取后浓缩，得浓缩物；

s2、将所述浓缩物加水稀释后离心，用大孔树脂柱吸附洗脱，回收，浓缩，干燥，即得所述毛诃子提取物。

可选的，所述含水有机溶剂为75～95％乙醇，优选90％的乙醇。

可选的，所述含水有机溶剂的质量为所述毛诃子药材的8～15倍，优选8～10倍。

可选的，所述提取的条件为采用所述含水有机溶剂提取2～5次，每次8～16小时；优选为提取3次，每次8～12小时。

可选的，s1和s2中，所述浓缩为减压回收浓缩，所述减压回收浓缩的条件为-0.08～-0.09mpa，42～45℃。

可选的，所述离心的条件为2000～3000rpm/min离心20～30min。

可选的，在s2中，将所述浓缩物加水稀释的步骤中，所加水的质量为所述浓缩物质量的1～3倍，优选2倍。

本发明还提供毛诃子多酚在制备治疗炎症性肠病的药物中的应用。

本发明还提供毛诃子多酚在在制备用于抑制树突细胞的成熟的药物中的应用。

本发明的技术方案至少具有以下技术效果：

本发明发现毛诃子提取物和毛诃子多酚能抑制树突细胞的成熟，可有效缓解炎症反应，具有治疗肠炎的作用。

附图说明

图1为阴性对照组的结肠粘膜he染色图；

图2为造模组的结肠粘膜he染色图；

图3为毛诃子提取物处理组的结肠粘膜he染色图；

图4为transwell迁移实验的柱状图。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例提出一种毛诃子提取物在制备治疗炎症性肠病的药物中的应用。本发明实施例经实验证实，毛诃子提取物明显缓解了ibd肠道炎性细胞浸润，减轻了肠壁增厚和水肿现象，证实了毛诃子提取物对肠炎的治疗效果。

本发明实施例提出一种毛诃子提取物在制备用于抑制树突细胞的成熟的药物中的应用。树突细胞(dc)作为最强的抗原呈递细胞，是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁：未成熟dc捕获外来抗原后，迁移到淋巴结分化为成熟dc，呈递抗原激活初始t细胞及b细胞发挥免疫效应。生理状态下，未成熟dc少量缓慢地进入淋巴组织，虽然行使抗原呈递功能，但对t细胞作用是形成耐受。当炎症发生时，未成熟dc快速持续地向炎症组织迁移，刺激初始t细胞激发免疫反应，也就是说dc迁移可被视为是炎症反应的启动和维持因素。本发明实施例经实验证实，毛诃子提取物可显著降低树突细胞迁移能力。

具体的，毛诃子提取物为采用含水有机溶剂提取得到，优选再利用大孔吸附树脂对成份进行富集。

具体的，本发明实施例的提取方法至少包括以下步骤：

s1、粉碎毛诃子药材，用含水有机溶剂提取后浓缩，得浓缩物；

s2、将所述浓缩物加水稀释后离心，用大孔树脂柱吸附洗脱，回收，浓缩，干燥，即得毛诃子提取物。

可选的，含水有机溶剂为75～95％乙醇，优选90％的乙醇。

可选的，含水有机溶剂的质量为毛诃子药材的8～15倍，优选8～10倍。如果含水有机溶剂过多或过少都会影响提取效率。

可选的，提取的条件为采用含水有机溶剂提取2～5次，每次8～16小时；优选为提取3次，每次8～12小时。

可选的，在s1和s2中，浓缩为减压回收浓缩，减压回收浓缩的条件为-0.08～-0.09mpa，42～45℃。

可选的，离心的条件为2000～3000rpm/min离心20～30min。

可选的，在s2中，将浓缩物加水稀释的步骤中，所加水的质量为浓缩物的质量的1～3倍，优选2倍。

将制备得到的毛诃子提取物进行分析，参考国标gbt8313-2008茶叶中茶多酚含量的检测方法，用福林酚试剂检测多酚，证明其含有多酚成分。说明毛诃子多酚在治疗炎症性肠病、抑制树突细胞的成熟具有与毛诃子提取物相同的效果。

实施例1

1、粉碎毛诃子药材，使用10倍量的含水有机溶剂90％乙醇提取3次，每次10小时，过滤后在-0.08～-0.09mpa，45℃条件下减压回收浓缩。

2、收集以上提取物，加2倍水稀释后3000rpm/min离心30min后，利用大孔树脂柱吸附洗脱，-0.08～-0.09mpa，45℃条件下减压回收浓缩干燥，即为毛诃子提取物。

实施例2肠炎模型构建以及治疗

取雄性4-5周c57bl/6小鼠15只，分为3组：阴性对照组、造模组、毛诃子提取物处理组，每组5只。

将造模组、毛诃子提取物处理组的实验动物采用化学介质葡聚糖硫酸钠(dss)诱导建立ibd模型：小鼠称重后给予4％dss溶液换取正常饮用水，每日观察小鼠粪便形状并收集用于隐血试验检测。5天后边出现血便，体重减轻，粒细胞浸润或隐血试验强阳性则造模成功，进行he染色和dai评分，观察结肠粘膜炎症损伤情况后用于实验。

将毛诃子提取物处理组而定实验动物每两日经尾静脉注射20％浓度的实施例1制备得到的毛诃子提取物，治疗第7日观察结肠粘膜炎症损伤情况。

得到的试验结果如图1～图3所示所示。图1阴性对照组，图2为造模组，显示ibd模型建立成功，4％dss组结肠上皮增厚，水肿明显，肠壁粘膜出现明显损伤，杯状细胞减少。图3为毛诃子提取物处理组，显示明显缓解了ibd肠道炎性细胞浸润，减轻了肠壁增厚和水肿现象，证实了毛诃子提取物对肠炎的治疗效果。

实施例3肠炎模型树突细胞提取

取雄性4-5周c57bl/6小鼠或ibd模型小鼠，处死后75％酒精浸泡10min，解剖取出股骨和胫骨，用rmpi1640培养基反复冲洗骨髓腔直至骨变白。离心后取中间白膜层，用骨髓来源树突细胞完全培养基(含500u/mlrmgm-csg和rmil-4的rmpi1640培养基)重悬细胞，以2×10⁶每孔的密度分种至6孔板。隔日换液，补加相同浓度的细胞因子，尽量保留悬浮细胞。第6天收集所有悬浮细胞，流式检测树突细胞表面分子cd11c的表达以评估bmdc树突细胞的纯度后用于实验。流式结果显示cd11c阳性率为85％以上。

调整细胞浓度至1×10⁶。在24孔板下室加入含200ng/mlcxcl12的培养基500μl，将transwell小室放置于24孔板，在上室加入100μl树突细胞悬液。温箱内孵育12h后取出小室，固定染色后置于显微镜下观察，随机取5个视野计数计算平均值。

统计试验结果如图4所示。由图4可知，毛诃子提取物(tb)处理使树突细胞迁移能力降低，证实毛诃子提取物能缓解炎症。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。