苦参提取物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及植物提取
技术领域：
，特别是涉及一种苦参提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
：抗氧化是抗氧化自由基的简称，人体因为与外界的持续接触，包括呼吸(氧化反应)、外界污染、放射线照射等因素不断的在人体体内产生自由基。科学研究表明，癌症、衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联。研究抗氧化可以有效克服其所带来的危害，所以抗氧化被保健品、化妆品企业列为主要的研发方向之一，也是市场最重要的功能性诉求之一。另外，痤疮是毛囊、皮脂腺的一种慢性炎症性皮肤病，也是美容皮肤科最常见的病种之一。在化妆品中，对于痤疮的预防或者说祛痘主要有赖于具有抑菌功效的活性组分，而此类活性组分大多存在高刺激性和高敏感性的问题，导致相应产品的市场接受度较低。苦参(sophoraflavescens)，又名地槐、好汉枝、山槐子、野槐。苦参用途广泛，其中，苦参根含苦参碱(matrine)和金雀花碱(cytisine)等，入药有清热利湿，抗菌消炎，健胃驱虫之效，常用作治疗皮肤瘙痒，神经衰弱，消化不良及便秘等症；苦参种子可作农药；苦参茎皮纤维可织麻袋等。目前，对于苦参中研究较多的成分为苦参碱。苦参碱是一种对人类健康有显著保健作用的天然或新物质，经研究证明，苦参碱具有抗肿瘤、升白细胞、平喘祛痰、镇痛、抗过敏以及免疫抑制等作用。但是，传统的苦参提取物难以兼顾好的抗氧化和抑菌功效。技术实现要素：基于此，有必要提供一种苦参提取物的制备方法。该制备方法制备得到的苦参提取物能够兼顾好的抗氧化功效和抑菌功效，且刺激性低、抗过敏性佳。具体技术方案如下：一种苦参提取物的制备方法，包括如下步骤：取苦参根，以体积浓度为50～70％乙醇水溶液进行提取，所得提取液浓缩，制备第一提取物；所述提取是指在温度为30～50℃的温度条件下浸提25～35min；于所述第一提取物中加入氨水进行碱化至ph为8～11，所得碱化液以氯仿进行萃取，收集氯仿层浓缩至干，制备第二提取物；所述萃取是指按照所述碱化液与氯仿的体积比为1：(0.5～2.5)加入氯仿进行萃取；以大孔吸附树脂对所述第二提取物进行纯化，采用的解析液为体积浓度为55～65％的乙醇水溶液。在其中一个实施例中，所述萃取是指按照所述碱化液与氯仿的体积比为1：(0.8～1.2)加入氯仿进行萃取。在其中一个实施例中，所述碱化是指碱化至ph为9～10。在其中一个实施例中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为58～62％。在其中一个实施例中，所述提取是指在温度为35～45℃的温度条件下浸提25～35min。在其中一个实施例中，进行所述提取前，先将所述苦参根粉碎并过筛，使所得苦参根粉的粒径不大于425μm。本发明还提供一种苦参提取物，采用所述的苦参提取物的制备方法制备得到。在其中一个实施例中，所述的苦参提取物以活性成分的重量百分比计，包含60～85％的苦参总碱。本发明还提供所述的苦参提取物在制备化妆品中的应用。在其中一个实施例中，所述化妆品为具有祛痘、抗衰老或抗氧化功效的化妆品。与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：本发明在对苦参提取物进行研究的过程中偶然发现，采用氨-氯法进行苦参活性成分的提取，即对乙醇水溶液提取获得的提取物先以氨水进行碱化，再以氯仿进行萃取，再结合大孔吸附树脂进行纯化，由此获得的苦参提取物中包含苦参总碱以及其它活性成分，通过功效验证偶然发现，该苦参提取物能够兼顾优异的抗氧化和抑菌功效，且刺激性低、抗过敏性佳。同时，在此基础之上合理调控乙醇水溶液的浓度、提取工艺、碱化程度和氯仿的萃取比例等参数，能够获得更佳的抗氧化和抑菌功效。此外，该制备方法耗时短、成本低，可实现工厂化大规模生产。附图说明图1为实施例1制备的苦参提取物的200-800nm吸光度谱图；图2为苦参碱标准曲线；图3为金黄色葡萄球菌抑菌圈实验最佳稀释倍数选择；图4为表皮葡萄球菌抑菌圈实验最佳稀释倍数选择；图5为痤疮丙酸杆菌抑菌圈直径的测定；图6为金黄色葡萄球菌抑菌圈直径的测定；图7为表皮葡萄球菌抑菌圈直径的测定。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明的苦参提取物及其制备方法和应用作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的
技术领域：
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。如无特别说明，本文所采用的“％”均为体积浓度。“氨水”是指含氨25％～28％的水溶液，在具体实施例中，可以采用含氨28％的水溶液。本发明提供一种苦参提取物的制备方法，包括如下步骤：取苦参根，以体积浓度为50～70％乙醇水溶液进行提取，所得提取液浓缩，制备第一提取物；提取是指在温度为30～50℃的温度条件下浸提25～35min；于第一提取物中加入氨水进行碱化至ph为8～11，所得碱化液以氯仿进行萃取，收集氯仿层浓缩至干，制备第二提取物；萃取是指按照碱化液与氯仿的体积比为1：(0.5～2.5)加入氯仿进行萃取；以大孔吸附树脂对第二提取物进行纯化，采用的解析液为体积浓度为55～65％的乙醇水溶液。可以理解地，“所得提取液浓缩”是指浓缩去除大部分或全部的乙醇。在其中一个具体的示例中，萃取是指按照碱化液与氯仿的体积比为1：(0.5～2.5)加入氯仿进行萃取。进一步地，碱化液与氯仿的体积比包括但不限于如下比例：1：0.5、1：0.8、1：0.9、1：1、1：1.1、1：1.2、1：1.5、1：2、1：2.5。作为优选地，碱化液与氯仿的体积比为1：(0.8～1.2)。在其中一个具体的示例中，碱化是指碱化至ph为9～10。在其中一个具体的示例中，乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为50～70％。进一步地，乙醇水溶液中乙醇的体积浓度包括但不限于以下体积浓度：50％、55％、58％、60％、62％、65％、70％。作为优选地，乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为58～62％。在其中一个具体的示例中，提取是指浸提。传统的针对苦参总碱的苦参提取方法通常采用超声提取，但是在本发明的苦参提取物的制备方法的研究过程中发现，经超声功率单因素考察，结果显示从超声功率0w至380w为平台期，即采用超声波提取对苦参提取物功效的影响不明显，从生产成本、节约能源的角度考虑，采用浸提法进行本发明的苦参提取物的制备即可。作为优选地，提取是指在温度为35～45℃的温度条件下浸提25～35min。进一步地，提取的温度包括但不限于如下温度：35℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、45℃。提取的时间包括但不限于如下时间：25min、28min、30min、32min、35min。在其中一个具体的示例中，甲醇水溶液与苦参根的体积比为(10～20)：1。进一步地，甲醇水溶液与苦参根的体积比包括但不限于如下比例：10：1、12：1、14：1、15：1、16：1、18：1、20：1。在其中一个具体的示例中，纯化包括如下步骤：将第二提取物复溶后，吸附至大孔吸附树脂，以体积浓度为55～65％的乙醇水溶液作为解析液进行洗脱，收集洗脱液。进一步地，解析液(55～65％的乙醇水溶液)的体积浓度包括但不限于以下体积浓度：55％、58％、60％、62％、65％。在其中一个具体的示例中，大孔吸附树脂为hpd-100树脂。在其中一个具体的示例中，第二提取物复溶后，所得复溶液中第二提取物的浓度为0.8～1.2mg/ml。进一步地，复溶采用的溶剂为水。在其中一个具体的示例中，解析液的流速为1.5～2bv/h。在其中一个具体的示例中，进行提取前，先将苦参根粉碎并过筛，使所得苦参根粉的粒径不大于425μm，或，将苦参根粉碎并过40目筛。另外，在其中一个具体的示例中，收集大孔吸附树脂后的洗脱液，浓缩除去大部分或全部的乙醇，进行冻干，制备有效成分的冻干粉。本发明还提供一种苦参提取物，采用上述苦参提取物的制备方法制备得到。进一步地，以活性成分的重量百分比计，该苦参提取物包含60～85％的苦参总碱。本发明还提供所述的苦参提取物在制备化妆品中的应用。进一步地，化妆品为具有祛痘、抗衰老或抗氧化功效的化妆品。以下为具体的实施例，如无特别说明，实施例采用的原料均为市售产品。实施例1本实施例提供一种苦参提取物的制备方法，步骤如下：(1)取苦参的干燥根，粉碎，过40目筛，得到苦参粉末。(2)取步骤(1)获得的苦参粉末，以体积比1:15加入体积浓度为60％的乙醇水溶液，在温度为40℃条件下以浸提法提取30min，离心后过滤，取滤液进行减压浓缩，直至无乙醇味，得除醇浓缩液。(3)取步骤(2)中除醇浓缩液，加适量浓氨试液碱化至ph为9～10后，用氯仿以体积比1：1进行多次萃取，直至氯仿层无颜色，合并氯仿层，浓缩并回收溶剂至干，得干膏。(4)取步骤(3)制备的干膏，加水复溶，并使样液浓度为1.031mg/ml，经过预处理(使用无水乙醇将hpd-100树脂浸泡24h)的hpd-100树脂用蒸馏水洗至无乙醇味，在层析柱1.7cm×30cm中填充树脂，并使树脂填充密实，将样液以固定流速0.9bv/h流经树脂，样液过柱950ml。(5)先对(4)中上样吸附后的树脂以适量的水洗，水洗流出液弃去，再以体积浓度60％乙醇解析液进行解析，固定解析液流速为1.8bv/h流经树脂，解析液过柱250ml，收集洗脱液。(6)取步骤(5)的洗脱液减压浓缩至无乙醇后，进行冷冻干燥。实施例2～5实施例2～5提供四种苦参提取物的制备方法，其步骤同实施例1，主要区别在于：步骤(2)中，以氯仿进行萃取的体积比不同，碱化液与氯仿的体积比依次为1:0.5、1:1.5、1:2、1:2.5。具体步骤如下：(1)取苦参的干燥根，粉碎，过40目筛，得到苦参粉末。(2)取步骤(1)获得的苦参粉末，以体积比1:15加入体积浓度为60％的乙醇水溶液，在温度为40℃条件下以浸提法提取30min，离心后过滤，取滤液进行减压浓缩，直至无乙醇味，得除醇浓缩液。(3)取步骤(2)中除醇浓缩液，加适量浓氨试液碱化至ph为9～10后，用氯仿以相应体积比进行多次萃取，直至氯仿层无颜色，合并氯仿层，浓缩并回收溶剂至干，得干膏。(4)取步骤(3)制备的干膏，加水复溶，并使样液浓度为1.031mg/ml，经过预处理的hpd-100树脂用蒸馏水洗至无乙醇味，在层析柱1.7cm×30cm中填充树脂，并使树脂填充密实，将样液以固定流速0.9bv/h流经树脂，样液过柱950ml。(5)先对(4)中上样吸附后的树脂以适量的水洗，水洗流出液弃去，再以体积浓度60％乙醇解析液进行解析，固定解析液流速为1.8bv/h流经树脂，解析液过柱250ml，收集洗脱液。(6)取步骤(5)的洗脱液减压浓缩至无乙醇后，进行冷冻干燥。对比例1本对比例提供一种苦参提取物的制备方法，其步骤同实施例1，主要区别在于：步骤(2)中，提取的温度为60℃。具体步骤如下：(1)取苦参的干燥根，粉碎，过40目筛，得到苦参粉末。(2)取步骤(1)获得的苦参粉末，以体积比1:15加入体积浓度为60％的乙醇水溶液，在60℃条件下以浸提法提取30min，离心后过滤，取滤液进行减压浓缩，直至无乙醇味，得除醇浓缩液。(3)取步骤(2)中除醇浓缩液，加适量浓氨试液碱化至ph为9～10后，用氯仿以体积比1:1进行多次萃取，直至氯仿层无颜色，合并氯仿层，浓缩并回收溶剂至干，得干膏。(4)取步骤(3)制备的干膏，加水复溶，并使样液浓度为1.031mg/ml，经过预处理的hpd-100树脂用蒸馏水洗至无乙醇味，在层析柱1.7cm×30cm中填充树脂，并使树脂填充密实，将样液以固定流速0.9bv/h流经树脂，样液过柱950ml。(5)先对(4)中上样吸附后的树脂以适量的水洗，水洗流出液弃去，再以体积浓度60％乙醇解析液进行解析，固定解析液流速为1.8bv/h流经树脂，解析液过柱250ml，收集洗脱液。(6)取步骤(5)的洗脱液减压浓缩至无乙醇后，进行冷冻干燥。对比例2对比例1提供一种苦参提取物的制备方法，其步骤同实施例1，主要区别在于：未进行步骤(3)。具体步骤如下：(1)取苦参的干燥根，粉碎，过40目筛，得到苦参粉末。(2)取步骤(1)获得的苦参粉末，以体积比1:15加入体积浓度为60％的乙醇水溶液，在40℃条件下以浸提法提取30min，离心后过滤，取滤液进行减压浓缩，直至无乙醇味，得除醇浓缩液。(4)取除醇浓缩液，并以水调节使样液浓度为1.031mg/ml，经过预处理的hpd-100树脂用蒸馏水洗至无乙醇味，在层析柱1.7cm×30cm中填充树脂，并使树脂填充密实，将样液以固定流速0.9bv/h流经树脂，样液过柱950ml。(5)先对(4)中上样吸附后的树脂以适量的水洗，水洗流出液弃去，再以体积浓度60％乙醇解析液进行解析，固定解析液流速为1.8bv/h流经树脂，解析液过柱250ml，收集洗脱液。(6)取步骤(5)的洗脱液减压浓缩至无乙醇后，进行冷冻干燥。对实施例1～5和对比例1～2的制备得到的苦参提取物进行检测。1、酸性染料比色法测量苦参总碱的含量1.1试剂的配制(1)邻苯二甲酸-盐酸缓冲溶液：精密称取10.211g邻苯二甲酸氢钾，加水定容至250ml，配成0.2mol/l的溶液，取其中50ml，称取盐酸1.4584g(浓盐酸换算36％-38％)配制200ml的溶液，取其中20ml，加水130ml，混匀，精密测定其ph调至3即可。(2)溴甲酚绿溶液(bcg)：精密称取溴甲酚绿140mg，加入到2.5m1)0.1mol/l氢氧化钠(0.4g氢氧化钠溶于100ml水)溶液中溶解，研磨加蒸馏水至100ml，即得。(3)标准品溶液的制备：准确称取苦参碱标准品10mg，加50％乙醇定容至50ml制备成浓度为200ug/ml的标准品溶液，备用。1.2检测波长的选择取配制好的标准品溶液0.5ml于具塞试管中，加入ph3的邻苯二甲酸-盐酸缓冲溶液4ml，溴甲酚绿0.5ml，摇振后加入氯仿7ml，剧烈摇振1min，静置1h，待两相彻底分开后，分离氯仿层。取苦参提取物样品(实施例1)操作同上，在200-800nm波长范围内以1为间隔单位检测对应波长的吸光度，确定最大吸收波长为414nm见图1。1.3苦参碱标准曲线的绘制精密称取0ml、0.1ml、0.15ml、0.2ml、0.25ml、0.3ml的200ug/ml的标准品溶20ml具塞试管中，分别加入50％乙醇0.5ml、0.4ml、0.35ml、0.3ml、0.25ml、0.2ml(即各加至0.5ml)，再分别加入ph＝3.0邻苯二甲酸缓冲液4ml，溴甲酚绿溶液0.5ml，振摇后加入氯仿7ml，振荡1min，静置1h，待两相彻底分开后，分离氯仿层，于414nm处测定其吸光度，绘制苦参碱含量标准曲线，见图2。1.4纯化后冻干粉样品的测定将样品溶解并稀释至一定倍数，准确量取样品液0.5m1，其余操作同3，相应稀释的溶剂作空白对照。通过苦参碱的标准曲线可以算出稀释后样品液的浓度，按如下公式计算冻干粉苦参总碱的含量、提取率和冻干粉得率。结果如下表1所示：表1苦参总碱的含量苦参总碱提取率实施例180.26％1.086％实施例264.56％1.059％实施例379.43％1.064％实施例472.49％1.026％实施例567.15％0.947％对比例165.12％1.023％对比例267.16％1.045％对比例359.49％1.029％2、牛津杯抑菌圈法定性检测对三种痤疮致病菌的抑菌活性金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌是主要的病原体。痤疮丙酸杆菌，也称痤疮杆菌、疮疱丙酸杆菌或革兰氏阳性厌氧杆菌，是一种细胞内寄生菌，属于皮肤的正常菌群，一般寄生在皮肤的毛囊及皮脂腺中，它可以分泌蛋白质、酶、脂多糖等成分，为条件致病菌，引起的感染均为内源性感染，是造成青春痘的主要细菌。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，能够在痤疮病灶上加重感染发炎，导致痤疮更严重，曾有研究证实，当金黄色葡萄球菌感染得到控制时，痤疮明显好转。表皮葡萄球菌是人体皮肤和黏膜上定居的正常菌群之一，从痤疮病患分离其致病菌，发现痤疮病损中葡萄球菌的检出率与痤疮丙酸杆菌接近，且应用葡萄球菌菌苗治疗痤疮收到了良好的效果，说明葡萄球菌与痤疮发病有密切的关系。2.1材料及供试菌种：痤疮丙酸杆菌(atcc11827)、金黄色葡萄球菌(atcc10231)、表皮葡萄球菌(atcc49134)、bhi(脑心浸液肉汤培养基)、bhia(脑心浸液琼脂培养基)、tsa(大豆酪蛋白琼脂培养基)、tsb(大豆酪蛋白液体培养基)、3.5l厌氧产气袋(日本三菱瓦斯化学株式会社)，厌氧指示剂(日本三菱瓦斯化学株式会社)，3.5l厌氧培养袋(日本三菱瓦斯化学株式会社)，卡那霉素，罗红霉素。2.2方法步骤：细菌培养及细菌悬液制备：痤疮丙酸杆菌从琼脂平板培养基用无菌接种环接种于脑心浸液肉汤培养基，置于厌氧培养袋，加入厌氧发生袋1包，在37℃细菌培养箱中培养48h，从斜面琼脂培养基用无菌接种环取金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌接种于tsb，置于37℃的细菌培养箱中，培养24h。取培养过后的痤疮丙酸培养基依次稀释10-1、10-2、10-3。在无菌操作条件下，各取100μl稀释后的痤疮丙酸杆菌菌液，均匀涂布于培养基上，置于厌氧培养袋，加入厌氧发生袋1包，在37℃细菌培养箱中培养48h，选择单层铺满致密菌为抑菌圈实验最佳稀释倍数，10-1为痤疮丙酸杆菌抑菌圈实验最佳稀释倍数。取培养过后的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌培养基依次稀释10-3、10-4、10-5。在无菌操作条件下，各取100μl稀释后的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌菌液，均匀涂布于培养基上，置于37℃的细菌培养箱中，培养24h。观察结果，如图3选择单层铺满致密菌为抑菌圈实验最佳稀释倍数，10-3为金黄色葡萄球菌抑菌圈实验最佳稀释倍数，如图4选择10-4为表皮葡萄球菌的抑菌圈实验最佳稀释倍数，各依据相应稀释倍数稀释制备菌悬液。2.3抑菌直径测定：分为金黄色葡萄球菌组、痤疮丙酸杆菌组、表皮葡萄球菌组3组。在无菌操作条件下，取制备好的痤疮丙酸杆菌菌悬液100μl，均匀涂布于培养基上，将三个牛津杯放在培养基表面，编号1、2、3。取200μl实施例1的苦参提取物，以20％乙醇水溶液溶解配制浓度为50mg/ml的样品液，加入牛津杯，编号为1，另外两个牛津杯分别加入200μl20％乙醇空白和生理盐水，编号为2、3，作为空白对照和阴性对照，同样操作另一个平板三个牛津杯各加200μl红霉素阳性对照(200ug/ml)，厌氧培养操作同上，测得结果见图5。金黄色葡萄球菌组，取制备好的金黄色葡萄球菌菌悬液100μl，均匀涂布于培养基上，将四个牛津杯放在培养基表面，编号1、2、3、4取200μl样品液加入牛津杯其中一个编号为1，另外三个牛津杯分别加入200μl20％乙醇空白、生理盐水和卡那霉素(100ug/ml)编号为2、3和4，作为空白对照、阴性对照和阳性对照，在37℃恒温箱中培养24h后，结果见图6。表皮葡萄球菌组操作同上金黄色葡萄球菌组，样品液浓度设定分别为12.5mg/ml和6.25mg/ml，结果见图7。实施例2～5和对比例1～2同理检测。同时检测“实施例1+苦参总碱”组，其为在实施例1制备得到的苦参提取物中混入适量苦参碱标准品，使其中苦参碱的含量为90％。药物敏感实验判定标准如下表2所示：表2抑菌圈直径(毫米)敏感度20以上极敏15～20高敏10～14中敏10以下低敏0不敏各组的检测结果汇总如下表3～5所示：表3表4表5由表3～5可知，本发明提取的苦参提取物对三种痤疮致病菌均具有抑制效果，特别是对痤疮主要致病菌痤疮丙酸杆菌和表皮葡萄球菌有极强的抑制效果。3、透明质酸酶体外抑制法测定抗敏性能采用透明质酸酶体外抑制法测定化妆品原料及化妆品产品的抗过敏功效。透明质酸酶是过敏反应的参与者，分解体内的透明质酸(ha)，使其变成低分子量的酸性刺激源，引起组胺释放，诱导机体产生敏感症状，研究表明透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，许多抗过敏药物有强抑制透明质酸酶活性的作用。分别配置以下试剂：①1200u/ml透明质酸酶溶液；②醋酸缓冲溶液(ph＝5.6)；③2.5mmol/mlcacl2溶液；④0.5mg/ml透明质酸钠溶液；⑤0.4mol/lnaoh溶液；⑥乙酰丙酮溶液；⑦p-dab显色剂；⑧以20％乙醇水溶液溶解配制5mg/ml浓度的待测样品溶液(实施例1～5、对比1～3以及“实施例1+苦参总碱”)。实验步骤如下：分别取a～d管，按照如下表6进行组分配制和步骤处理：表6每个样品做3个平行样。按照如下公式计算透明质酸酶抑制率：透明质酸酶抑制率(％)＝[(c-d)-(a-b)]/(c-d)×100％式中：a——(透明质酸酶+样品+透明质酸钠)试样溶液的od值；b——(醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲液)试样空白的od值；c——(透明质酸酶+去离子水+透明质酸钠)对照溶液的od值；d——(醋酸缓冲液+去离子水+醋酸缓冲液)对照空白的od值。结果如下表7所示：表74、abts+·清除能力测定抗氧化abts在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的abts+·，在抗氧化物存在时abts+·的产生会被抑制，在734nm测定abts的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。分别配制以下试剂：①2.45mmol/l过硫酸钾；②7mmol/l的abts储备液；③0.2mol/l的pbs(ph＝7.4)；⑤以20％乙醇水溶液溶解配制1mg/ml样品溶液(实施例1～5、对比1～3以及“实施例1+苦参总碱”)。取abts储备液，用无水乙醇或10mmol/l的pbs(ph＝7.4)稀释40～50倍，使其在734nm处吸光值为0.7±0.02(30℃)，得到abts工作液；分别吸取5mlabts工作液和50μl样品溶液于具塞试管中，振荡10s，30℃条件下静置6min，测定734nm处吸光值a1；分别吸取5mlpbs缓冲液和50μl样品溶液于具塞试管中，振荡10s，30℃条件下静置6min，测定734nm处吸光值a2；分别吸取5mlabts工作液和50μlpbs缓冲液于具塞试管中，振荡10s，30℃条件下静置6min，测定734nm处吸光值a3。每个样品做3个平行样。按照如下公式计算abts清除率：式中：a1——(abts工作液+样品溶液)样品溶液的od值；a2——(pbs缓冲液+样品溶液)样品空白的od值；a3——(abts工作液+pbs缓冲液)试剂空白的od值。结果如下表8所示：表8样品(1mg/ml)abts清除率实施例165.16％实施例262.06％实施例354.24％实施例461.42％实施例563.79％对比例154.71％对比例263.12％对比例365.37％实施例1+苦参总碱63.15％5、dpph·清除实验测定抗氧化dpph·又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代dpph·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。配制0.2mmol/l的dpph·甲醇(或无水乙醇)溶液；以20％乙醇水溶液溶解配制浓度为1mg/ml样品溶液(实施例1～5、对比1～3以及“实施例1+苦参总碱”)。分别吸取2ml样品溶液和2mldpph·溶液于具塞试管中，混匀，避光反应30min，测定517nm波长下的吸光值a1；分别吸取2ml样品溶液和2ml甲醇于具塞试管中，混匀，避光反应30min，测定517nm波长下的吸光值a2；分别吸取2mldpph·溶液和2ml甲醇于具塞试管中，混匀，避光反应30min，测定517nm波长下的吸光值a0。每个样品做3个平行样。按照如下公式计算dpph·清除率：式中：a1——(dpph·溶液+样品溶液)样品溶液的od值；a2——(样品溶液+甲醇)样品空白的od值；a3——(dpph·溶液+甲醇)试剂空白的od值。结果如下表9所示：表9以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。当前第1页12