一种板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法与流程

本发明涉及中药有效成分的提取
技术领域：
，特别涉及一种板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法。
背景技术：
：口服液是以中药汤剂为基础，提取药物有效成分，加入矫味剂、抑菌剂等添加剂，制成的一种无菌或半无菌的口服液体制剂；服用方便，适用于现今节奏快速的生活。板连败毒口服液由板蓝根、连翘、知母、广藿香、石菖蒲、生地黄、石膏、芦根和郁金9味药材组成，具有清热解毒、凉血利咽的功效。该口服液以板蓝根的有效成分告依春和连翘的有效成分连翘苷为主要药效成分，告依春为君药，连翘苷为臣药，两者均具有清热解毒、凉血利咽的功效，可作为指标成分，准确指示本口服液的质量。现有技术中，板连败毒口服液有效成分的提取一般采用浸渍提取法，以纯净水作为水提剂，存在提取效率低、提取得到的有效成分稳定性差的问题。可见，现有技术还有待改进和提高。技术实现要素：鉴于上述现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法，旨在解决现有技术中上述提及的至少一个技术问题。为了达到上述目的，本发明采取了以下技术方案：一种板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法，包括：s01.将组成所述板连败毒口服液的中药材板蓝根、连翘、知母、广藿香、石菖蒲、生地黄、石膏、芦根和郁金分别置于50℃的烘箱中烘至恒重，破碎成粉末；s02.按照板连败毒口服液中各成分的含量称取上述中药材粉末，置于提取罐中，加入甲醇，浸泡30min，超声提取2～4h，重复提取3～4次，合并提取液；s03.蒸发浓缩提取液，然后转移至冻干管中冻干，保藏至4℃的冰箱中。所述板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法中，所述步骤s01中，所述中药材粉碎至200目以下。所述板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法中，所述步骤s02中，中药与甲醇的重量体积比为1∶8～12。所述板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法中，所述步骤s02中，中药与甲醇的重量体积比为1∶10。所述板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法中，所述步骤s02中超声提取时间为3h，提取次数为3次。所述板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法中，所述步骤s03中，将提取液在80℃下蒸发浓缩至原生药浓度为1g/ml。有益效果：本发明提供了一种板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法，所述方法操作简单，过程可控性强，效率高，分离效果好，重复性好，分离出的物质具有较高的稳定性，可以有效控制板连败毒口服液的质量。附图说明图1为本发明提供的所述板连败毒口服液有效成分与对照品的薄层色谱图；其中，a图为板蓝根，a图中1表示标准品溶液，2表示阴性对照溶液，3表示对照药材溶液，4和5表示供试品溶液；b图为连翘，b图中1表示阴性对照溶液，2表示对照药材溶液，3表示标准品溶液，4和5表示供试品溶液；c图为知母，c图中1表示阴性对照溶液，2表示对照药材溶液，3表示标准品溶液，4和5表示供试品溶液；d图为石菖蒲，d图中1表示阴性对照溶液，2和3表示对照药材溶液，4和5表示供试品溶液。具体实施方式本发明提供板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照附图并举实施例对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。以下实施方式中涉及的主要仪器包括：岛津lc-20a型高效液相色谱仪，日本岛津公司；dhg-9075a电热鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司；结盟jp-100超声清洗仪，深圳结盟清洗设备有限公司；航方fts-100分体式煎药壶，潮州市一壶百饮电器实业有限公司；bsa124s万分之一电子天平，赛多利斯科学仪器背景有限公司；jcs-6102c百分之一电子天平，朱恒电子有限公司；freezone2.5冷冻干燥机，美国labconco公司。涉及的主要试剂和药物包括：告依春标准品(批号170154)、连翘苷标准品(批号161271)均购自中国食品药品检定研究院；板蓝根、连翘、知母、广藿香、石菖蒲、生地黄、石膏、芦根、郁金均购自北京同仁堂国药有限公司；硅胶g薄层板，硅胶gf254薄层板，购自青岛海洋化工有限公司；磷酸、乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水。其它没有特别说明的均为市售的普通分析纯试剂和药物。本发明提供一种板连败毒口服液水溶性有效成分的提取方法，包括：将组成所述板连败毒口服液的中药材板蓝根、连翘、知母、广藿香、石菖蒲、生地黄、石膏、芦根和郁金分别置于50℃的烘箱中烘至恒重，粉碎至200目以下的粉末；由于不同类型的药材吸水性的差异以及晒干程度的不同，其含水量可能存在较大的差异。将中药材原料烘干至恒重，在后续称量、配重时能够更加精准地定量每一种成分的含量，使得到的产物的配比更加接近于原配方。50℃烘干不会损坏中药材的有效成分，而且能够使水分快速挥发，提高效率。粉碎后的中药材的表面积增大，使中药材中的有效成分更容易溶解到提取液中；而且粉碎后各成分之间混合得更加的均匀，使提取效果更加均衡。200目的规格易于实现，一般中药粉碎机可以实现。按照板连败毒口服液中各成分的含量称取上述中药材粉末，置于提取罐中，加入与中药材的重量比为1∶8～12体积的甲醇，浸泡30min，超声提取2～4h，重复提取3～4次，合并提取液；优选实施方式中，中药与甲醇的重量体积比为1∶10，超声提取时间为3h，提取次数为3次。料液比，提取时间和提取次数均是影响提取率的重要因素，当料液比，提取时间和提取次数的参数落在上述范围时，所述粉碎后的中药材的提取率达到最好的范围。特别是当中药与甲醇的重量体积比为1∶10，超声提取时间为3h，提取次数为3次时，提取效率最高。料液比过高、提取时间过短、提取次数过少，均会造成提取不完全，降低提取率；料液比过高，浪费溶剂，也延长了后续浓缩的时间；单次提取时间超过4h后，对提取的提高基本没有贡献，提取次数超过4次后，提取率提高不明显，而且降低工作效率，浪费溶剂。将提取液在80℃下蒸发浓缩至原生药浓度为1g/ml，然后转移至冻干管中冻干，保藏到4℃的冰箱中。提取液浓缩、冻干后保藏，提取物的稳定性更高，更利于保存。所述板连败毒口服液有效成分的提取率＝冻干粉质量/投药量×100％；下面提供6个实施例对本发明的提取效果作进一步的说明，各实施例的具体参数如下表所示：过程参数实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5实施例6料液比1∶101∶101∶81∶81∶91∶9提取时间/h324342提取次数/次343443提取率/％5.65.65.45.55.65.4由上表所知，实施例1-6所述板连败毒口服液有效成分的提取率均达5％以上，提取效率高。以下实施例的供试品溶液均由实施例1中的最终产物制备。实施例6精密度和重复性的测定板连败毒口服液中板蓝根为君药，连翘为臣药，因此板蓝根的有效成分告依春和连翘的有效成分连翘苷是板连败毒口服液的主要有效成分，下面以告依春和连翘苷为指标，测定实施例1得到的提取物的精密度和重复性。6.1精密度6.1.1对照品溶液的制备：精密称取告依春标准品10mg，连翘苷对照品2mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇制成0.2mg/ml溶液，作为对照品母液。对照品母液精密倍比稀释6个梯度，作为标准曲线工作溶液。6.1.2供试品溶液的制备精密称取实施1制备的冻干粉20g，用乙酸乙酯萃取6次，每次25ml，合并，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至10ml容量瓶中，作为供试品溶液。6.1.3色谱条件：色谱柱为agilenthypersilods柱(250mm×4.0mm，5μm)；流动相：乙睛-0.01％磷酸溶液梯度洗脱：20/80(0-16mim)→25/75(16-25min)→60/40(25-30min)→100/0(30-33min)→20/80；流速：1ml/min；检测波长为277nm；进样量20μl。6.1.4制定标准曲线按照浓度由低到高的顺序依次将上述6个梯度的对照品溶液进样测定，以峰面积为横坐标(x)，浓度为纵坐标(y)，得出回归方程。6.1.5精密度的测定吸取同一份对照品溶液20μl，重复进样6次，测定峰面积，求出告依春与连翘苷的rsd值。6.1.6稳定性的测定取供试品溶液，24h内，分别在0、4、8、12、24h进样20μl，测定告依春与连翘苷峰面积，求出rsd值。经计算得出，不同时间内5次测定得到的告依春的rsd为2.7％，连翘苷rsd为2.1％；表明，实施例1所提取的板连败毒口服液的有效成分在24h内稳定性良好。6.1.7重复性的测定按照实施例1的方案分别提取6组产物，每组产物配制3份供试品溶液，分别测定告依春和连翘苷的含量，分别计算rsd值。经计算得出，18份供试品测定得到的告依春的rsd为2.5％，连翘苷rsd为2.2％；表明，所述提取方法的重复性好，能够产出质量稳定的板连败毒口服液。实施例7提取物成分的鉴定本实施例中的供试品溶液采取实施例1所提取的浓缩后的板连败毒口服液有效成分的提取物制备。7.1板蓝根精确量取2ml上述提取物，以甲醇定容于10ml容量瓶中，超声提取30min，过滤，取滤液，蒸干得到残渣加甲醇完全溶解，制成供试品溶液。另取板蓝根对照药材1g与缺板蓝根的板连败毒口服液2ml，同法制成对照药材溶液与阴性对照溶液。另取告依春标准品1mg，定容至10ml容量瓶中，作为标准品溶液。按照薄层色谱法(通则0502)，用毛细管吸取上述溶液各3μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm波长的紫外光灯下检视。7.2连翘精密量取上述提取物20ml，加入乙酸乙酯20ml，超声提取6次，取乙酸乙酯层，合并提取液，水浴蒸干得到残渣，加甲醇5ml溶解，配制成供试品溶液。另取1g连翘对照药材与缺连翘的板连败毒口服液20ml，同法制成对照药材溶液与阴性对照溶液。另取连翘苷对照品1mg定容至10ml容量瓶中作为标准品溶液。按照薄层色谱法(通则0502)，用毛细管吸取上述溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰。7.3知母精确量取2ml上述提取物，用30％丙酮定容至10ml容量瓶中，超声处理20min，取上清作为供试品溶液，取知母对照药材与缺知母的板连败毒口服液溶液同法制成对照药材溶液与阴性对照溶液。另取知母皂苷bⅱ对照品1mg，定容至10ml容量瓶中，作为对照品。按照薄层色谱法(通则0502)，用毛细管吸取上述溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上。以正丁醇-冰醋酸-水(4:1:5)展开，晾干，香草醛硫酸溶液为显色剂，105℃加热至斑点显色明显。7.4石菖蒲精确称取2ml上述提取物与石油醚20ml，超声处理30min，过滤弃滤渣，滤液蒸干，残渣加石油醚1ml溶解，作为供试品。另取1g石菖蒲对照药材与缺石菖蒲的板连败毒口服液制成对照药材溶液与阴性对照溶液。按照薄层色谱法(通则0502)，用毛细管吸取上述溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，晾干，放置1h，再以碘蒸气熏至斑点清晰。上述显色结果如图1所示，各供试品薄层色谱与对照品在相应的位置上，显同样的颜色斑点，阴性对照无干扰。可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。当前第1页12