桉柠蒎肠溶微囊及其制备方法与流程

1.本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及桉柠蒎肠溶微囊及其制备方法。


背景技术：

2.桉油精、柠檬烯和α-蒎烯药物组合物是一种黏液溶解性祛痰药，适用于急慢性鼻窦炎、急慢性支气管炎、肺炎等呼吸系统疾病，具有祛痰、消炎、促进造影剂排出的作用。目前桉油精、柠檬烯和α-蒎烯药物组合物的已上市制剂为口服肠溶软胶囊剂，该药品治疗效果明确，通过肠溶技术掩盖挥发油类药物的刺激性气味。但仍有部分患者用药后发生反味、胃部刺激等不良反应。该不良反应发生的原因可能是软胶囊肠溶包衣破裂后，大量药物快速释放，刺激胃肠道。
3.因此，需要开发基于桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的新型肠溶制剂，将药物分散包裹于肠溶微粒中，再按给药剂量制成胶囊或片剂等最终制剂。每个贮药微粒均有肠溶效果，进而可以有效降低药物在胃部的突释风险，减少刺激性。


技术实现要素：

4.本技术是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：
5.目前已上市的桉柠蒎口服肠溶软胶囊剂对于吞咽困难的患者顺应性较差，不适用于儿童和老年人服用，且已上市的桉油精、柠檬烯和α-蒎烯药物组合物制剂，需要每天服用三次，服药次数较多容易发生漏服的现象。
6.本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。
7.发明人利用微粒给药技术，开发了含有桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的新型口服制剂，使其便于吞咽服用，提高患者顺应性，同时，通过缓控释技术制备新型缓释制剂，减少给药次数。
8.在本发明的第一方面，本发明提出了一种桉柠蒎肠溶微囊。根据本发明的实施例，所述桉柠蒎肠溶微囊包括：微囊芯油相，所述微囊芯油相包括活性成分，所述活性成分包括桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的至少之一；微囊皮，所述微球皮包裹于所述活性成分的表面，所述微囊皮由明胶-阿拉伯胶络合物构成。根据本发明实施例的桉柠蒎肠溶微囊便于吞咽服用，提高了患者顺应性，同时具有缓释效果，可有效减少给药次数。发明人发现，桉柠蒎肠溶微囊可以延长达峰时间、提高血药浓度，有效提高桉柠蒎的生物利用度，具有良好的应用前景。
9.根据本发明的实施例，上述桉柠蒎肠溶微囊还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
10.根据本发明的实施例，所述微囊皮是由明胶、阿拉伯胶在固化剂和增塑剂的至少之一存在的条件下络合而成的。根据本发明的具体实施例，将溶液ph值调至明胶的等电点以下使之带正电(ph 4.0～4.5时明胶带正电)，而阿拉伯胶仍带负电，由于电荷互相吸引交联形成正、负离子的络合物，溶解度降低而凝聚成囊皮。
11.根据本发明的实施例，所述活性成分与明胶、阿拉伯胶的质量比为(0.5～3.0)：(2～4)：(2～4)，优选地，(0.5～2.0)：3：4，更优选地(1.5～2.0)：3.5：3，更优选地，2.0：3：3。发明人发现，活性成分与明胶、阿拉伯胶的质量比为(0.5～3.0)：3：3，明胶、阿拉伯胶对桉柠蒎(活性成分，包括桉油精、柠檬烯和α-蒎烯的至少之一)的乳化效果好；活性成分与明胶、阿拉伯胶的质量比为(0.5～2.0)：3：3，微囊包封率高；当活性成分与明胶、阿拉伯胶的质量比为(1.5～2.0)：3：3，微囊包封率可达60％以上。
12.根据本发明的具体实施例，所述固化剂为戊二醛。
13.根据本发明的具体实施例，所述增塑剂为甘油。
14.根据本发明的实施例，所述活性成分、明胶、阿拉伯胶以及甘油的质量比为(0.5～3.0)：3：3：(0.5～2)，优选地，(0.5～3.0)：3：3：(0.5～1)，更优选地，(0.5～3.0)：3：3：1，更优选地，3.0：3：3：1或2.0：3：3：1。发明人发现，所述活性成分、明胶、阿拉伯胶以及甘油的质量比为(0.5～3.0)：3：3：(0.5～2)，明胶、阿拉伯胶对桉柠蒎的乳化效果好，微囊包封率高；当质量比为(0.5～3.0)：3：3：1，微囊包封率进一步提高；当质量比为3.0：3：3：1，明胶、阿拉伯胶对桉柠蒎的乳化效果进一步提高，微囊包封率进一步提高；当质量比为2.0：3：3：1，微囊包封率显著提高，可达60％以上。
15.根据本发明的实施例，桉柠蒎肠溶微囊的剂型为颗粒剂或混悬剂。所述桉柠蒎肠溶微囊制成颗粒剂或混悬剂的剂型，更加便于吞咽，减少制备过程中药物的挥发和浪费。
16.在本发明的第二方面，本发明提出了一种制备前面所述的桉柠蒎肠溶微囊的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将预定量的明胶与所述活性成分进行第一混合处理，以便获得初乳；将所述初乳与预定量的阿拉伯胶进行第二混合处理；将第二混合处理产物与任选的预定量的增塑剂或固化剂进行固化处理，以便获得所述桉柠蒎肠溶微囊。所述“预定量”的剂量如前面所述。根据本发明实施例的方法所制备的桉柠蒎肠溶微囊便于吞咽服用，患者顺应性高，缓释效果佳。
17.根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
18.根据本发明的实施例，所述第一混合处理是在2000rpm～8000rpm的转速下进行5～25min剪切的条件下进行的。发明人发现，在2000rpm～8000rpm的转速下随着剪切转速的增加，微囊包封率先增加后降低，且随着剪切时间的增加，微囊包封率也是先增加后降低。
19.根据本发明的优选实施例，所述第一混合处理是在6000rpm的转速下进行10min剪切的条件下进行的。发明人发现，在6000rpm的转速下进行10min剪切，微囊包封率在38％～42％范围内，微囊包封率高。
20.根据本发明的实施例，所述固化处理的时间为1～4h。发明人发现，固化处理时间在1～4h，桉柠蒎微囊的肠溶效果好，在胃液中不破裂，在肠液中的崩解。
21.根据本发明的实施例，所述固化处理的时间为1.5～2.5h，优选地，2h。发明人发现，固化处理时间在1.5～2.5h，桉柠蒎微囊的肠溶效果更好，在肠液中的崩解时间适当，药效更佳。
22.根据本发明的实施例，所述活性成分与明胶、阿拉伯胶的质量比为(0.5～3.0)：(2～4)：(2～4)，优选地，(0.5～2.0)：3：4，更优选地，(1.5～2.0)：3.5：3，更优选地，2.0：3：3。发明人发现，活性成分与明胶、阿拉伯胶的质量比为(0.5～3.0)：3：3，明胶、阿拉伯胶对桉柠蒎的乳化效果好；活性成分与明胶、阿拉伯胶的质量比为(0.5～2.0)：3：3，微囊包封率
高；当活性成分与明胶、阿拉伯胶的质量比为(1.5～2.0)：3：3，微囊包封率可达60％以上。
23.根据本发明的实施例，所述活性成分、明胶、阿拉伯胶以及甘油的质量比为(0.5～3.0)：3：3：(0.5～2)，优选地，(0.5～3.0)：3：3：(0.5～1)，更优选地，(0.5～3.0)：3：3：1，更优选地，3.0：3：3：1或2.0：3：3：1。发明人发现，所述活性成分、明胶、阿拉伯胶以及甘油的质量比为(0.5～3.0)：3：3：(0.5～2)，明胶、阿拉伯胶对桉柠蒎的乳化效果好，微囊包封率高；当质量比为(0.5～3.0)：3：3：1，微囊包封率进一步提高；当质量比为3.0：3：3：1，明胶、阿拉伯胶对桉柠蒎的乳化效果进一步提高，微囊包封率进一步提高；当质量比为2.0：3：3：1，微囊包封率显著提高，可达60％以上。
24.本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
25.本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
26.图1是根据本发明实施例的桉柠蒎肠溶微囊和桉柠蒎海藻酸钠肠溶微球的溶出效果对比结果。
具体实施方式
27.下面参考具体实施例，对本发明进行描述，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
28.此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
29.实施例1筛选复凝聚法囊材
30.固定桉柠蒎的加入量及囊材溶液的体积不变，采用不同的囊材进行微囊制备，通过微囊形态、包封率筛选优选的囊材。试验组设计如表1所示:。
31.表1：
32.编号桉柠蒎油明胶浓度复配囊材囊材浓度13g3％阿拉伯胶3％23g3％黄原胶3％33g3％壳聚糖3％43g3％海藻酸钠3％
33.试验结果如表2所示。
34.表2：
35.试验编号微囊形态包封率1圆形单层微囊41.5％2极少量微囊6.8％
3极少量微囊9.2％4少量微囊14.3％
36.试验结果表明，与明胶复配作为复凝聚法的囊材筛选中，阿拉伯胶形成的微囊微囊效果最好，包封率最高，因此选择明胶-阿拉伯胶作为复凝聚法的囊材，进行后续研究。
37.实施例2筛选明胶-阿拉伯胶处方比例
38.固定桉柠蒎的加入量固定，明胶和/或阿拉伯胶的总体积不变，通过微囊形态、包封率研究不同明胶、阿拉伯胶的用量对制备微囊的影响。试验组设计如表3所示，试验结果如表4所示。
39.表3：
40.编号123456桉柠蒎油3g3g3g3g3g3g50ml明胶02％2.5％3％3.5％4％50ml阿拉伯胶3％3％3％3％3％3％编号789101112桉柠蒎油3g3g3g3g3g3g50ml明胶3％3％3％3％3％3％50ml阿拉伯胶02％2.5％3％3.5％4％
41.表4：
42.试验编号微囊形态包封率1不能形成微囊-2少量圆形微囊17.2％3圆形微囊28.3％4圆形微囊39.7％5圆形微囊38.5％6圆形微囊35.2％7极少量微囊5.2％8少量圆形微囊20.3％9圆形微囊31.0％10圆形微囊36.4％11圆形微囊35.5％12圆形微囊35.9％
43.试验结果表明，单独使用阿拉伯胶不能形成微囊，单独使用明胶通过调节ph可以形成极少量。复凝聚法仍需通明胶和阿拉伯胶的协同作用形成微囊。由于复凝聚法依靠明胶和阿拉伯胶携带相反电荷、中和后沉淀形成微囊，因此明胶与阿拉伯胶等比例时中和效果最好。当明胶和阿拉伯胶的浓度不相等时，生成的微囊与含量较少的物料浓度相关。由试验结果可知，当明胶和阿拉伯胶的比例在2.5％～4％之间时可以形成微囊，包封率较好。
44.实施例3
45.1、处方：
46.桉油精1.07g柠檬烯0.70gα-蒎烯0.23g明胶3.0g阿拉伯胶3.0g甘油1.0g10％醋酸适量10％氢氧化钠溶液适量25％戊二醛溶液适量蒸馏水200ml
47.2、制备方法
48.取处方量明胶置于100ml蒸馏水中，40℃水浴加热使其分散，用10％氢氧化钠溶液调节ph至7～8。之后加入处方量的桉油精、柠檬烯和α-蒎烯，6000rpm高速剪切10min，分散得初乳。取处方量阿拉伯胶置于100ml蒸馏水中，40℃水浴加热使其分散。将初乳加入阿拉伯胶溶液中，于40℃、100rpm恒温磁力搅拌10min。之后加入1g甘油，继续搅拌5min。缓慢加入10％醋酸调节ph至3.8，搅拌10min。加入30-40℃蒸馏水200ml稀释，移去热水浴，搅拌降温至30℃后，迅速冰水浴冷却至10℃以下。加入10％氢氧化钠溶液调节ph至中性，加入25％戊二醛溶液0.5ml，搅拌2h固化。将湿囊过滤，用蒸馏水洗涤至无醛味，30℃低温干燥，即得桉柠蒎肠溶微囊。
49.以下实施例将对本技术桉柠蒎微囊的处方和制备方法的前期筛选工作进行描述。
50.实施例4活性成分与明胶-阿拉伯胶的处方比例筛选
51.固定3％明胶溶液和3％阿拉伯胶溶液的用量，筛选处方中桉柠蒎的加入量，通过初乳的制备状态考察桉柠蒎加入量。考察表如表5所示。
52.表5：
53.编号12345桉柠蒎油2g2.5g3g3.5g4g3％明胶100ml100ml100ml100ml100ml3％阿拉伯胶100ml100ml100ml100ml100ml
54.试验结果如表6所示。
55.表6：
56.试验编号初乳外观气味1淡黄色乳液略有桉柠蒎气味2淡黄色乳液略有桉柠蒎气味3黄色乳液略有桉柠蒎气味4黄色乳液有油滴气味明显5黄色乳液有油滴气味明显
57.结论：随着桉柠蒎油加入量的增加，明胶-阿拉伯胶对桉柠蒎的乳化效果降低，选择3g桉柠蒎油进行后续试验。
58.实施例5增塑剂用量筛选
59.固定处方中桉柠蒎、明胶、阿拉伯胶的用量不变，选取甘油作为增塑剂，通过微囊的形态、包封率考察不同增塑剂用量对微囊的影响。考察表如表7所示。
60.表7：
61.编号12345增塑剂用量0g0.5g1.0g1.5g2.0g
62.试验结果如表8所示。
63.表8：
64.试验编号微囊形态包封率1圆形微囊较少10.8％2圆形微囊25.4％3圆形微囊37.9％4圆形微囊36.1％5圆形微囊38.5％
65.结论，随着甘油用量的加入，微囊的产率逐渐增加，当微囊加入量达到1.0g时，再增加甘油则微囊的产率变化不大，因此选择1.0g甘油进行后续研究。
66.实施例6初乳的剪切转速的筛选
67.固定处方中桉柠蒎、明胶、阿拉伯胶和甘油的用量不变，固定高速剪切时间为10min，通过微囊的形态、粒径、包封率考察不同剪切转速对微囊的影响。考察表如表9所示。
68.表9：
69.编号1234剪切转速2000rpm4000rpm6000rpm8000rpm
70.试验结果如表10所示。
71.表10：
72.试验编号微囊形态包封率1圆形微囊22.6％2圆形微囊30.3％3圆形微囊40.7％4圆形微囊35.1％
73.试验结果表明，随着剪切转速的增加，微囊包封率先增加后降低，表明当剪切速率过高时会破坏已形成的微囊。选取6000rpm进行后续研究。
74.实施例7初乳的剪切时间筛选
75.固定处方中桉柠蒎、明胶、阿拉伯胶和甘油的用量不变，固定高速剪切转速为6000rpm，通过微囊的形态、粒径、包封率考察不同剪切时间对微囊的影响。考察表如表11所示。
76.表11：
77.编号12345剪切时间5min10min15min20min25min
78.试验结果如表12所示。
79.表12：
80.试验编号微囊形态包封率1圆形微囊31.4％2圆形微囊38.9％3圆形微囊35.7％4圆形微囊32.0％5圆形微囊30.1％
81.试验结果表明，随着剪切时间的增加，微囊包封率先增加后降低，表明剪切时间过长会影响微囊的形成。最终确定剪切时间为10min。
82.实施例8固化时间筛选
83.固定处方中桉柠蒎、明胶、阿拉伯胶、增塑剂和固化剂的用量不变，考察不同固化时间对微囊肠溶效果的影响。考察表如表13所示。
84.表13：
85.编号12345固化时间0.5h1h2h4h8h
86.试验结果如表14所示。
87.表14：
[0088][0089][0090]
随着固化时间的延长，桉柠蒎微囊的肠溶效果逐渐增大，固化时间过长则会导致肠液中的崩解时间延长，不符合肠溶制剂的要求。因此选择固化时间为2h。
[0091]
实施例9包封率优化
[0092]
本实施例进一步优化处方中的桉柠蒎比例和明胶、阿拉伯胶的比例，设计筛选试验如下表15所示。
[0093]
表15：
[0094][0095]
其他处方及制备工艺不变，检测样品包封率及产量如表16所示。
[0096]
表16：
[0097]
试验编号外观包封率1圆形微囊53.2％2圆形微囊55.4％3圆形微囊60.9％4圆形微囊62.3％5圆形微囊45.6％6圆形微囊39.8％
[0098]
由试验结果可知，随着桉柠蒎加入量的增加，微囊包封率先缓慢增大后减小。桉柠蒎加入量过大时，部分桉柠蒎无法被微囊包封，因此在后续洗涤过程中造成损失。因此选择桉柠蒎包封率较大的处方配比(0.5～2):3:3作为优选比例。
[0099]
实施例10
[0100]
在此实施例中，发明人对比了桉柠蒎肠溶微囊和桉柠蒎海藻酸钠肠溶微球的溶出效果。
[0101]
其中，桉柠蒎海藻酸钠肠溶微球的处方和制备方法如下所述：
[0102]
表17：桉柠蒎海藻酸钠肠溶微球的处方
[0103]
桉油精1.6g柠檬烯1.05gα-蒎烯0.35g海藻酸钠8.0g吐温800.5g聚氧乙烯蓖麻油0.75g氯化钙3.75g壳聚糖0.8g1％醋酸溶液375ml
[0104]
桉柠蒎海藻酸钠肠溶微球的制备方法：
[0105]
取处方量海藻酸钠置于300ml蒸馏水中，50℃水浴加热使其溶解，作为水相。取处方量桉油精、柠檬烯、α-蒎烯、吐温80和聚氧乙烯蓖麻油置于烧杯中混合均匀，作为油相。在
50℃水浴加热下，将油相缓慢滴入水相中，6000rpm高速剪切15min，得初乳。取处方量氯化钙加入1％醋酸溶液中，完全溶解后加入处方量壳聚糖，得氯化钙-壳聚糖醋酸溶液。用注射器将初乳以每分钟20滴速度滴入氯化钙-壳聚糖醋酸溶液，滴完后放置6h，得白色小球。用蒸馏水冲洗小球表面，转移至真空干燥箱中40℃干燥12h。
[0106]
分别取含有1.0g桉柠蒎油的桉柠蒎肠溶微囊和桉柠蒎海藻酸钠肠溶微球，置于ph1.2和ph6.8的溶出介质中，采用篮法进行溶出度检测。分别于加药后0min、15min、30min、1h、1.5h、2h取样，检测溶出液中的桉油精含量。试验结果如图1所示。
[0107]
由试验结果可知，在ph1.2的溶出介质中，桉柠蒎肠溶微囊在2h内无桉油精释放，而桉柠蒎海藻酸钠肠溶微球在1.5h开始有少量药物释放。在ph6.8的溶出介质中，桉柠蒎肠溶微囊可以在30min左右完成药物释放，而桉柠蒎海藻酸钠肠溶微球的药物释放量较低。可见，桉柠蒎肠溶微囊相比于桉柠蒎海藻酸钠肠溶微球，在胃液酸性环境中释放更加缓慢，在肠道肠液环境中释放更加迅速，肠溶效果更优。
[0108]
实施例11：桉柠蒎肠溶微囊的药物动力学研究
[0109]
1、试验剂量与分组
[0110]
设定两个试验组，每组2只雄性动物。给药途径、给药剂量、给药频率见表18。
[0111]
表18：动物分组情况表
[0112][0113]
2、动物活体检测指标
[0114]
笼旁观察：分组前全部动物及分组后试验中的动物每日观察1次。观察动物死亡情况、外观及被毛、活动状况、神经反应、呼吸状态、姿势等。
[0115]
体重测定：使用电子台秤进行称重。动物接收和动物分组时称量全部动物体重；分组后首次给药前称量试验中的动物体重。
[0116]
3、生物样本采集
[0117]
在适应性饲养期间，每只beagle犬从前肢静脉采集全血10ml，按照血浆样品处理方法，制备出空白血浆，用于样品检测所用的标准曲线和qc样品的配制。样本采集之后在冷藏(冰袋)条件下，转移至多地点试验场所进行检测。
[0118]
动物在给药前禁食过夜(12～16h)，给药后2h内恢复喂饲，禁食过程中动物自由饮水。血浆样品采集时间点如下所述：给药前、给药后15min，30min，40min，50min，1h，1.25h，1.5h，2h，2.5h，3h，4h，8h，12h，24h。，共15个时间点。每个采集点采集全血约2ml并肝素钠抗凝。血样采集后立即置于冰箱中。血样采集后2小时内在4℃条件下进行离心(3500rpm，10min，4℃)，取上清血浆，保存于-70℃。样本采集之后在冷藏(冰袋)条件下，转移至多地点试验场所进行检测。
[0119]
使用das 2.0软件对血浆经时浓度进行数据拟合计算药代动力学参数。使用microsoft office 2016进行平均值和标准差的计算并制图，数据以平均值
±
标准差表示。
[0120]
4、试验结果
[0121]
饲养及给药期间对试验动物进行笼旁观察和体重测定，分组前及给药前后所有动物未见异常。beagle犬单次经口给予桉柠蒎油或桉柠蒎肠溶微囊60mg/kg。分别对血浆中桉柠蒎(桉油精、柠檬烯、α-蒎烯)含量进行检测，结果如下：
[0122]
给予桉柠蒎油的动物，桉油精含量检测结果显示，仅1只动物(动物号1)有3个时间点可检出，且含量很低，另1只动物(动物号2)无检出。血浆中柠檬烯浓度的经时变化两组动物均有检出。α-蒎烯含量仅1只动物(动物号2)3个时间点可检出，且含量很低，无法进行参数计算，另1只动物(动物号1)血浆中α-蒎烯浓度可以检测到5个数据。给予桉柠蒎肠溶微囊的动物，血浆中桉油精、柠檬烯和α-蒎烯浓度均可检出。主要药代动力学参数见表19和表20。
[0123]
表19：beagle犬单次经口给予桉柠蒎油血浆中桉柠蒎的药代动力学参数
[0124][0125]
表20：beagle犬单次经口给予桉柠蒎肠溶微囊血浆中桉柠蒎的药代动力学参数
[0126][0127]
根据统计矩参数可知，桉柠蒎油组与桉柠蒎肠溶微囊组的达峰时间(t
max
)差异较大，肠溶微囊可以明显延长桉柠蒎的达峰时间。另外，桉柠蒎肠溶微囊还可以明显提高桉柠蒎进入体内的药量，将柠檬烯的生物利用度提高一倍，将α-蒎烯的生物利用度提高约1.5～4倍。药动学预实验表明，桉柠蒎肠溶微囊可以延长达峰时间、提高血药浓度，有效提高桉柠蒎的生物利用度，具有良好的应用前景。
[0128]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0129]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。