一种具有减肥及降脂作用的酸枣叶水提物的制作方法

本发明属于食品、保健品、化妆品及医药领域，具体涉及一种酸枣叶水提物及其制备方法，特别涉及一种具有减肥及降脂作用的酸枣叶水提物及其制备方法及其在食品、保健品、化妆品及医药领域中的应用。

背景技术：

在过去几十年间，肥胖症逐渐成为一种流行病。据国家统计局和卫计委的一组数据显示：青少年肥胖率呈现出逐年上升的趋势，肥胖率已从2002年的11.35％上升到2019年的28.27％，中老年肥胖人数也在不断攀升，预计2020年将达到3亿。肥胖已经成为重要健康问题。与正常人相比肥胖患者更容易患高血压，高血脂，高血糖等疾病。随着肥胖人数的增加，社会对肥胖人群的关注也逐渐升温。改善肥胖状况，不仅是个人的需求，更是社会的大趋势。故此，减肥降脂产品蕴含着巨大的市场需求。

酸枣叶又名“棘叶”，是一种野生资源广泛分布于我国北方地区，其蕴藏量丰富。酸枣叶中有丰富的黄酮，皂苷，氨基酸，核苷，微量元素等营养成分，其中总黄酮为酸枣叶的主要成分，含量最高可达8％左右。酸枣叶是一种药食兼用型植物资源，具有多种药理作用及保健功能，如改善睡眠，抗氧化，保护肝脏，抗真菌等。研究表明部分叶类中药具有减肥的作用。fuji等研究发现普洱茶长期使用能减轻大鼠肾周围脂肪量及血清胆固醇(赵亚华,桑守强,余霜,等.普洱茶水溶性茶色素降脂减肥作用研究[j].西南农业学报,2014,27(3):1256-1259.)。朱佳妮等探究藏茶的保健作用发现，藏茶样品具有有减肥及辅助降低血清甘油三酯的作用(朱佳妮,张天泉,李诗竹,等.藏茶降脂减肥作用的动物实验研究[j].食品科技,2015,40(4):151-154)。然而目前还没有研究表明酸枣叶的水提物或茶具有减肥及降脂的功效。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种酸枣叶水提物及由其制备的具有减肥及降脂作用的产品。

本发明所提供的酸枣叶水提物，通过包括以下步骤的方法制备得到：

1)取酸枣叶粉碎，过筛，加蒸馏水浸泡；

2)对步骤1)中浸泡后的酸枣叶进行提取，滤过，收集提取液；

3)将步骤2)得到的提取液减压浓缩，得到酸枣叶水提物。

上述方法步骤1)中，所述酸枣叶粉碎粒度为10～50目；所述蒸馏水的用量为酸枣叶质量的6～16倍，具体可为14倍；所述浸泡时间可为0～6h，端点值0不可取，具体可为1h；

步骤2)中，所述酸枣叶的提取方式为加热回流提取或超声提取或浸提，

采用加热回流提取时，所述提取的温度可为70～100℃；提取的时间可为0.5～4h；

所述提取可进行多次，具体可为1～3次；

具体可为加热回流提取，每次加热回流提取0.5h，提取3次；

步骤3)所述减压浓缩的温度可为50～90℃；所述减压浓缩的压强可为0～0.5mpa；浓缩后的密度可为0.4～4g/ml，所得酸枣叶水提物中总黄酮含量为31.90～39.65mg/g，芦丁含量为8.93～11.70mg/g。

上述酸枣叶水提物在制备具有减肥及降脂作用的产品的应用也属于本发明的保护范围。

所述产品可为：食品、保健品、化妆品和药品。

具体地，所述酸枣叶水提取物可制成酸枣叶茶饮料，果冻，饼干；减肥降脂速溶茶，软糖等；减肥降脂按摩膏，面霜；减肥降脂胶囊，软胶囊，颗粒剂，丸剂，片剂等。

本发明制备的酸枣叶水提物具有以下优点和效果：

(1)针对酸枣叶蕴藏量大这一特点，本发明充分的利用酸枣叶资源，扩大了新的应用范围，包括食品、保健品、化妆品、药品行业，对酸枣叶产品的开发具有重要的意义。

(2)本发明通过动物实验的减肥效果确定酸枣叶水提取的优化工艺，得到最佳提取工艺为提取加入14倍的水，浸泡1h，加热回流提取0.5h，提取3次。该提取工艺过程基本稳定可行、经济有效，可用于工业化大生产。

(3)本发明采用动物实验的方法评价了酸枣叶水提物的减肥作用。结果为给药6周后给药组相比对照组大鼠体重，总胆固醇、甘油三酯含量显著降低(p<0.05)。实验结果表明酸枣叶水提物具有显著性的减肥降脂作用。

本发明采用酸枣叶作为开发对象，开发其减肥降脂功能，扩大酸枣叶的应用，同时减少了资源的浪费。

附图说明

图1为紫外分光光度法测总黄酮含量的标准曲线。

图2为hplc-uv法测芦丁含量的标准曲线。

图3为330nm测定酸枣叶对照品、供试品溶液高效液相色谱图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中使用硝酸铝比色法测定酸枣叶水提物的总黄酮含量的操作为：

取芦丁对照品适量，精密称定，加70％的乙醇定容至25ml容量瓶中，摇匀，得浓度为1mg.ml^-1的芦丁对照品储备液。分别精密量取0.3ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml的芦丁对照品储备液置于10ml比色管中，先加5％亚硝酸钠溶液0.3ml摇匀，放置6min；加10％硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，再放置6min；加4％氢氧化钠溶液4ml；各加70％乙醇定容至10ml，摇匀，放置15min，在波长505nm处测定各管中溶液的吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y＝7.6486x+0.0484，r＝0.9989。结果表明芦丁0.03～0.08mg·ml^-1范围内呈良好的线性关系，结果见图1。根据芦丁含量的标准曲线，计算其总黄酮含量。

下述实施例中使用hplc-uv法测定酸枣叶水提物的芦丁含量的操作为：

对照品溶液的制备：取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇定容至15ml容量瓶中，摇匀，得浓度为1.0mg.ml^-1的芦丁对照品储备液。分别精密量取芦丁对照品储备液0.01ml，0.02ml，0.1ml，0.15ml，0.3ml，0.4ml，0.6ml置于1ml的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超声混匀，13000r·min^-1离心10min，滤过，取续滤液。利用高效液相色谱法测定峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y＝1e+07x+10965。r＝0.9995。结果表明芦丁0.01mg·ml^-1～0.62mg·ml^-1范围内呈良好的线性关系。结果见图2。根据芦丁含量的标准曲线，计算其总黄酮含量。

液相条件：色谱柱：agelavenusilmpc18色谱柱(250nm×4.6nm，5μm)；流动相：0.1％的甲酸水(a)-乙腈(b)，流速1.0ml·min^-1，梯度条件：0～5min，a90％；5～15min，a80％；15～25min，a80％；25～35min，a70％；35～45min，a55％；45～65min，a35％；60～65min，a90％。检测波长：330nm；柱温：30℃；进样量：10μl。在此条件下对照品和供试品溶液的各色谱峰分离良好，如图3，由图3可知，酸枣叶水提物中除了含有芦丁外，还含有其他成分，酸枣叶水提物中各成分协同作用达到减肥降脂的功效。

精密度试验：取同一浓度对照品溶液(0.15mg·ml-1)按上述色谱条件，连续进样6次，以芦丁峰面积计算rsd值(n＝6)为2.37％，说明仪器的精密度良好。重复性实验：取同一样品6份，同样方法处理即用酸枣叶10g，加10倍量水，浸泡0.5h，提取1次，用高效液相色谱法测定，记录峰面积，计算rsd值为3.4％。稳定性实验：取同一供试品溶液6份，在相同的色谱条件下，于0、2、4、6、8h进行测定，记录峰面积，计算rsd值为2.69％。表明供试品溶液在8h内基本稳定。

下述实施例中评价酸枣叶水提物具有减肥及降脂作用的动物实验为：

1.试验材料

1.1受试药品

酸枣叶采集地为山西省晋中市榆次区乌金山镇(东经112°44'52"，北纬37°46'2")，经山西中医药大学裴香萍副教授鉴定为鼠李科植物酸枣叶。

1.2试验动物

6周龄，spf级sd大鼠130只大鼠(雌雄各半)，体重180-200g。

1.3试验仪器

大鼠笼26个、大鼠灌胃针、电子天平，(型号：fa2104，上海精科天平)、neusoftnsa-400全自动生化分析仪；一次性使用自损毁型无菌注射器，江西青山堂医疗器械有限公司提供，规格型号：a3型5ml，一次性使用人体静脉血样采集容器(edta、k2)2ml，江苏省康捷医疗器械有限公司提供，批号：20170101，一次性使用人体静脉血样采集容器(无添加剂)5ml，江苏省康捷医疗器械有限公司提供，批号：20170402。

1.4试验试剂

总胆固醇测定试剂盒(tc)，批号：16-1205；甘油三酯测定试剂盒(tg)，批号：16-1011，蒸馏水：市售。生理盐水：市售。

2.试验方法

2.1动物分组及剂量

取180g～220g大鼠130只，雌雄各半，将大鼠随机分为酸枣叶低剂量组5g/kg、高剂量组20g/kg、对照组(等剂量蒸馏水)，每组10只。

2.2给药方法及途径

每天在规定的给药时间范围内(上午9：00～10：00)灌胃给药，给药量为1ml/200g，对照组给等剂量蒸馏水。每天记录饮水量，每周记录体重，连续给药6周。最后1次给药后禁食不禁水12h，麻醉，采血(一部分储存于抗凝管中，另一部分盛装在普通试管中，离心，取上清液)进行指标含量分析。

2.3检查指标

体重变化，总胆固醇(tc)，甘油三酯(tg)等指标。

2.4统计学处理

-

该实验采用统计软件进行数据处理，结果以均值加减标准差(x±s)表示，p<0.05表示有统计学意义。

实施例1

取干燥后的酸枣叶粉碎，过10目(1号)筛，称取20g，精密称定，加入10倍量的蒸馏水浸泡1h，70℃加热回流提取1h，提取2次，滤过，55℃、0.2mpa下浓缩，得到酸枣叶水提物，其浓缩密度为0.33g/ml。精密称取1g酸枣叶水提物，使用蒸馏水稀释至一定体积，采用硝酸铝比色法测定总黄酮含量，测得总黄酮含量为36.90mg/g。精密称取1g酸枣叶水提物，用甲醇稀释一定倍数，滤过，利用高效液相色谱法测芦丁含量。试验平行两次求平均值。测得芦丁的含量为11.29mg/g。

选取对照组，低剂量组，高剂量组大鼠并称量，体重分别为181.23±8.57g，175.60±12.90g，180.05±5.31g。各组连续灌胃给药本实施例制备的酸枣叶水提物6周，结束后称量对照组，低剂量组，高剂量组大鼠体重分别为318.41±38.29g，312.60±29.47g，287.00±38.57g。给药组大鼠体重相比对照组有所下降，但无差异。给药6周后大鼠血中各组总胆固醇含量分别为1.43±0.03mmol/l，1.41±0.30mmol/l，1.30±0.18mmol/l。给药组相比对照组总胆固醇含量有所下降，但无差异性；各组甘油三酯含量分别为0.46±0.03mmol/l，0.42±0.05mmol/l，0.41±0.07mmol/l。给药组相比对照组甘油三酯含量有所下降，但无差异性。

实施例2

取干燥后的酸枣叶粉碎，过10目(1号)筛，称取20g，精密称定，加入12倍量的蒸馏水浸泡1h，75℃加热回流提取0.5h，提取2次，滤过，60℃、0.2mpa下浓缩，得到酸枣叶水提物，其浓缩密度为0.35g/ml。精密称取1g酸枣叶水提物，使用蒸馏水稀释至一定体积，采用硝酸铝比色法测定总黄酮含量测得总黄酮含量为35.53mg/g。精密称取1g酸枣叶水提物，甲醇稀释一定倍数，滤过，利用高效液相色谱法测芦丁含量。试验平行两次求平均值。测得芦丁的含量为11.58mg/g。

选取对照组，低剂量组，高剂量组大鼠并称量，体重分别为181.23±8.57g，176.75±11.96g，183.07±7.51g。各组连续灌胃给药本实施例制备的酸枣叶水提物6周，结束后称量对照组，低剂量组，高剂量组大鼠体重分别为318.41±38.29g，312.80±30.53g，282.60±22.17g。给药组大鼠体重相比对照组显著降低(p<0.05)。给药6周后大鼠血中各组总胆固醇含量分别为1.43±0.03mmol/l，1.41±0.24mmol/l，1.30±0.18mmol/l。给药组相比对照组总胆固醇含量有所下降，但无差异性；各组甘油三酯含量分别为0.46±0.03mmol/l，0.42±0.07mmol/l，0.41±0.09mmol/l。给药组相比对照组有所下降，但无差异性。

实施例3

取干燥后的酸枣叶粉碎，过10目(1号)筛，称取20g，精密称定，加入10倍量的蒸馏水浸泡1h，加热回流提取2h，提取3次，滤过，60℃、0.2mpa下浓缩，得到酸枣叶水提物，其浓缩密度为0.38g/ml。精密称取1g酸枣叶水提物，使用蒸馏水稀释至一定体积，采用硝酸铝比色法测定总黄酮含量，测得总黄酮含量为31.90mg/g。精密称取1g酸枣叶水提物，用甲醇稀释一定倍数，滤过，利用高效液相色谱法测芦丁含量。试验平行两次求平均值。测得芦丁的含量为8.93mg/g。

选取对照组，低剂量组，高剂量组大鼠并称量，体重分别为181.23±8.57g，182.75±11.14g，181.07±10.32g。各组连续灌胃给药本实施例制备的酸枣叶水提物6周，结束后称量对照组，低剂量组，高剂量组大鼠体重分别为318.41±38.29g，304.70±35.84g，282.28±25.36g。给药组大鼠体重相比对照组显著降低(p<0.05)。给药6周后大鼠血中各组总胆固醇含量分别为1.43±0.03mmol/l，1.43±0.21mmol/l，1.25±0.20mmol/l。给药组相比对照组总胆固醇含量显著降低(p<0.05)；各组甘油三酯含量分别为0.46±0.03mmol/l，0.42±0.01mmol/l，0.41±0.08mmol/l。给药组相比对照组有所下降，但无差异性。

实施例4

取干燥后的酸枣叶粉碎，过10目(1号)筛，称取20g，精密称定，加入14倍量的蒸馏水浸泡1h，加热回流提取2h，提取2次，滤过，55℃、0.2mpa下浓缩，得到酸枣叶水提物，其浓缩密度为0.39g/ml。精密称取1g酸枣叶水提物，使用蒸馏水稀释至一定体积，采用硝酸铝比色法测定总黄酮含量，测得总黄酮含量为39.27mg/g。精密称取1g酸枣叶水提物，用甲醇稀释一定倍数，滤过，利用高效液相色谱法测芦丁含量。试验平行两次求平均值。测得芦丁的含量为11.66mg/g。

选取对照组，低剂量组，高剂量组大鼠并称量，体重分别为181.23±8.57g，178.35±11.96g，181.12±5.64g。各组连续灌胃给药本实施例制备的酸枣叶水提物6周，结束后称量对照组，低剂量组，高剂量组大鼠体重分别为318.41±38.29g，308.03±36.97g，291.16±30.26g。给药组大鼠体重相比对照组有所下降，但无差异性。给药6周后大鼠血中各组总胆固醇含量分别为1.43±0.03mmol/l，1.42±0.22mmol/l，1.25±0.12mmol/l。给药组相比对照组总胆固醇含量显著降低(p<0.05)；给药6周后大鼠血中各组甘油三酯含量分别为0.46±0.03mmol/l，0.41±0.03mmol/l，0.40±0.04mmol/l。给药组相比对照组甘油三酯含量显著降低(p<0.05)。

实施例5

取干燥后的酸枣叶粉碎，过10目(1号)筛，称取20g，精密称定，加入12倍量的蒸馏水浸泡1h，80℃下加热回流提取1h，提取3次，滤过，50℃、0.2mpa下浓缩，得到酸枣叶水提物，其浓缩密度为0.41g/ml。精密称取1g酸枣叶水提物，使用蒸馏水稀释至一定体积，采用硝酸铝比色法测定总黄酮含量，测得总黄酮含量为39.40mg/g。精密称取1g酸枣叶水提物，用甲醇稀释一定倍数，滤过，利用高效液相色谱法测芦丁含量。试验平行两次求平均值。测得芦丁的含量为11.62mg/g。

选取对照组，低剂量组，高剂量组大鼠并称量，体重分别为181.23±8.57g，180.75±12.06g，182.16±6.43g。各组连续灌胃给药本实施例制备的酸枣叶水提物6周，结束后称量对照组，低剂量组，高剂量组大鼠体重分别为318.41±38.29g，310.23±28.16g，280.62±22.09g。给药组大鼠体重相比对照组显著下降(p<0.05)。给药6周后大鼠血中各组总胆固醇含量分别为1.43±0.03mmol/l，1.45±0.28mmol/l，1.31±0.13mmol/l。给药组相比对照组总胆固醇含量显著降低(p<0.05)；各组甘油三酯含量分别为0.46±0.03mmol/l，0.44±0.03mmol/l，0.40±0.08mmol/l。给药组相比对照组甘油三酯含量有所下降，但无差异性。

实施例6

取干燥后的酸枣叶粉碎，过10目(1号)筛，称取20g，精密称定，加入14倍量的蒸馏水浸泡1h，75℃加热回流提取0.5h，提取3次，滤过，55℃、0.2mpa下浓缩，得到酸枣叶水提物，其浓缩密度为0.43g/ml。精密称取1g酸枣叶水提物，使用蒸馏水稀释至一定体积，采用硝酸铝比色法测定总黄酮含量，测得总黄酮含量为39.65mg/g。精密称取1g酸枣叶水提物，用甲醇稀释一定倍数，滤过，利用高效液相色谱法测芦丁含量。试验平行两次求平均值。测得芦丁的含量为11.70mg/g。

选取对照组，低剂量组，高剂量组大鼠并称量，体重分别为181.23±8.57g，183.75±9.66g，178.07±7.38g。各组连续灌胃给药本实施例制备的酸枣叶水提物6周，结束后称量对照组，低剂量组，高剂量组大鼠体重分别为318.41±38.29g，314.84±35.08g，282.96±24.00g。给药组大鼠体重相比对照组显著降低(p<0.05)。给药6周后大鼠血中各组总胆固醇含量分别为1.43±0.03mmol/l，1.43±0.24mmol/l，1.27±0.15mmol/l。给药组相比对照组显著降低(p<0.05)；各组甘油三酯含量分别为0.46±0.03mmol/l，0.40±0.03mmol/l，0.41±0.06mmol/l。给药组相比对照组显著降低(p<0.05)。

实施例7

取密度为1.5g/ml酸枣叶水提物，加蒸馏水稀释至300ml，取30％的稀释液，加入白砂糖量6％、柠檬酸量0.05％、膳食纤维量0.5％、精制卡拉胶0.05％、混匀即得酸枣叶水提物茶饮料。

实施例8

取密度为0.5g/ml酸枣叶水提物，无热量甜味剂0.1～1％、酸味剂0.5～4％、食用胶0.4～1.0％。食用胶在热水中充分溶解，冷却，加入上述主成分和调味剂混匀，即得酸枣叶水提物果冻。

实施例9

取密度为0.3g/ml酸枣叶水提物，加入小麦粉30～50％，苦荞粉4～20％，南瓜粉1～10％，玉米粉4～8％，山药粉3～10％，鸡蛋6～12％，植物油8～30％，淡奶粉0.5～3％，香兰素0.2～1％，蛋白糖0.1～0.2％，甜菊糖0.1～0.2％，加入适量的水，烘烤，即得酸枣叶水提物饼干。

实施例10

取密度为1.5g/ml酸枣叶水提物，与蜂蜜按照质量比1:0.6的比例混合，搅拌均匀后，喷雾干燥，即得酸枣叶水提物减肥降脂速溶茶。

实施例11

取密度为1g/ml酸枣叶水提物，用蒸馏水稀释至50ml，加入卡拉胶、食用糖后在煮糖锅中煮成膏状体时加入柠檬酸，混合均匀，成形后干燥、包装。即得酸枣叶水提物减肥降脂软糖。

实施例12

取密度为0.4g/ml酸枣叶水提物，将其与一定量得冰片、左旋肉碱、聚乙二醇、单硬脂酸甘油酯放入带搅拌器的容器中在50～60℃的恒温下搅拌1～2个小时，冷却乳化成均匀的膏状后灌装制备而成。即得酸枣叶水提物按摩膏。

实施例13

取密度为1g/ml酸枣叶水提物，加入2.5％s2a，十六十八混醇3.5％，液体石蜡8％，gtcc3％，羊毛脂0.8％，尼铂金甲酯0.3％，甘油3％，丙二醇5％，纯化水67.18％，1％透明质酸5％，香精0.02％，混合均匀，采用面霜制备工艺制备，即得酸枣叶水提物面霜。

实施例14

取密度为0.5g/ml酸枣叶水提物，冷冻干燥，加微粉硅胶适量，混合均匀，采用胶囊制备工艺制备，即得酸枣叶水提物胶囊。

实施例15

取密度为0.5g/ml酸枣叶水提物，冷冻干燥，加植物油适量，混匀，用明胶作囊壳材料，压制成软胶囊酸枣叶水提物软胶囊。

实施例16

取密度为0.5g/ml酸枣叶水提物，冷冻干燥，加2倍量糊精，混合均匀，制粒，过筛，干燥，即得酸枣叶水提物颗粒剂。

实施例17

取密度为0.5g/ml酸枣叶水提物，冷冻干燥，加2倍量糊精，混合均匀，制粒，过筛，干燥，将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即得酸枣叶水提物片剂。

实施例18

取密度为0.5g/ml酸枣叶水提物，冷冻干燥，加入纤维素-水羟硅钠石复合气凝胶粉末，搅拌均匀，干燥，加入聚乙烯吡咯烷酮醇液制备成母核；再加入糊精、聚乙烯吡咯烷酮醇液进行包衣，制备成丸剂，即得酸枣叶水提物丸剂。