本发明涉及畜禽养殖
技术领域：
，具体涉及一种艾草中药微生态发酵制剂及其制备方法和应用。
背景技术：
：很多食品安全问题都是因为在畜禽产品中检测出了抗生素残留，这是由于养殖者在养殖过程中没有按照国家标准或是没有严格遵循药品休药期所导致的。抗生素的过量使用一直以来都是我国养殖业的安全隐患，不仅容易导致抗生素残留，而且长期使用抗生素会引起动物的内源性感染和二重感染，降低动物生产性能及使用年限。其中，内源性感染是指抗生素会引起微生物菌群失调，使动物体内有益菌群减少，肠道内原有的耐药性病原菌占了优势，引起动物疾病。一切能促进正常微生物群生长繁殖的制剂以及抑制致病菌生长繁殖的制剂都称为“微生态制剂”。其是运用微生态学原理，利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经培养、发酵、干燥、加工等工艺制成的制剂。微生态制剂以其无毒副作用、无耐药性、无残留、成本低、效果显著、不污染环境等特点，逐渐得到广大养殖界同仁的认可。饲料添加剂将由抗生素时代进入微生态时代，益生菌系列产品的研发和应用将具有非常广阔的前景和良好的经济效益。当前微生态制剂在畜禽养殖产业中的使用还存在几个问题：活菌制剂易受肠道胆汁酸、盐酸等影响，发挥作用大打折扣，所以基因工程技术应致力于有益菌种的筛选、选育，最后选择出耐性较好的菌种，加以改造开发；另外，活菌制剂在加工、运输、储藏过程中容易失去活性，所以微囊工艺的开发对于益生菌生长、干燥有较好的效果，根据菌种的特性以生产出稳定高效活菌数高的益生菌；产品质量良莠不齐，微生态制剂的搭配、含量、安全性不明确。所以应科学配伍、最大限度地发挥益生菌制剂的效用。技术实现要素：本发明的目的是提供一种艾草中药微生态发酵制剂及其制备方法和应用，以改善现有微生态制剂在畜禽养殖产业中存在的问题。本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：本发明的艾草中药微生态发酵制剂，包括鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198菌悬液和艾草，所述鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198菌悬液与艾草的用量比为：体积:重量＝1l:100kg～1l:500kg；所述鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198，该鼠李糖乳杆菌已于2020年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctccno：m2020781。作为优选的实施方式，所述鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198菌悬液与艾草的用量比为：体积:重量＝1l:300kg。本发明的艾草中药微生态发酵制剂的制备方法，包括以下步骤：将鼠李糖乳杆菌yl198接种于液体mrs培养基，37～45℃静置培养16～25h，4～10℃、4000～8000rpm离心5～10min，收集菌体沉淀；用发酵灭菌培养基水溶液悬浮，调整活菌数为1.0×109～1.0×1010cfu/ml，获得yl198菌悬液；新鲜艾草的地上部分自然干燥，用0.5～1％的食盐水侵泡2次，清水洗净，发酵池底部放入太赫兹矿石，装入艾草，艾草上面覆盖太赫兹矿石，太赫兹矿石的总重量为艾草总重量的1～2％，加入yl198菌悬液，覆盖塑料膜密封，恒温30～35℃，发酵10～20天，发酵结束后固液分离，将艾草在相同条件下重复发酵一次，合并两次发酵液，经过滤、包装获得艾草中药微生态发酵制剂，ph值在3.0～3.5之间。作为优选的实施方式，本发明的艾草中药微生态发酵制剂的制备方法，包括以下步骤：将鼠李糖乳杆菌yl198接种于液体mrs培养基，37℃静置培养16h，4℃、6000rpm离心8min，收集菌体沉淀；用发酵灭菌培养基水溶液悬浮，调整活菌数为1.0×109cfu/ml，获得yl198菌悬液；新鲜艾草的地上部分自然干燥，用0.75％的食盐水侵泡2次，清水洗净，发酵池底部放入太赫兹矿石，装入艾草，艾草上面覆盖太赫兹矿石，太赫兹矿石的总重量为艾草总重量的1.5％，加入yl198菌悬液，yl198菌悬液与艾草的用量按照体积:重量＝1l:300kg添加，覆盖塑料膜密封，恒温30℃，发酵10天，发酵结束后固液分离，将艾草在相同条件下重复发酵一次，合并两次发酵液，经过滤、包装获得艾草中药微生态发酵制剂，ph值在3.0～3.5之间。作为优选的实施方式，所述发酵灭菌培养基水溶液采用以下方法制备：每升液体培养基中加入玉米浆粉30g和糖蜜30g，121℃、高压灭菌15min即得。作为优选的实施方式，所述艾草中药微生态发酵制剂的剂型为水剂、粉剂或片剂。本发明的艾草中药微生态发酵制剂作为饲料添加剂的应用。本发明的有益效果是：本发明所采用的鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198，于2020年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctccm2020781。本发明针对畜禽“无抗养殖”的技术需求，利用鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198发酵中药艾草，同时配合使用太赫兹矿石产生的磁场辅助益生菌发酵以及辅助艾草生物活性成分的发酵转化，制备一种艾草中药微生态发酵制剂，制备方法简单、高效，能够显著提高制剂中有效成分的含量，增强疗效。所制备的艾草中药微生态发酵制剂具有增强机体免疫、调节肠道菌群、改善胃肠等功能，同时还具有良好的改善畜禽生长性能、改善血清生化指标、提高机体免疫力、降低血清炎症因子表达、维持肠道微生态平衡、促进新陈代谢和提高肉品质等作用。本发明所制备的艾草中药微生态发酵制剂绿色、环保、安全、有效、稳定，能够作为替代或减少抗生素使用的饲料添加剂。本发明所提供的中药微生物发酵制剂能够有效解决抗生素所产生的抗药性以及动物体内残留等问题，从而为饲料添加剂提供一种更为绿色、安全、环保的选择。具体实施方式本发明的艾草中药微生态发酵制剂，主要包括鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198菌悬液和艾草，鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198菌悬液与艾草的用量比为：体积:重量＝1l:100kg～1l:500kg；优选的，鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198菌悬液与艾草的用量比为：体积:重量＝1l:300kg。其中，所采用的鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198，该鼠李糖乳杆菌已于2020年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内(武汉大学保藏中心)，保藏编号为：cctccno：m2020781。本发明的艾草中药微生态发酵制剂，是以中药艾草为药效原料，经鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198发酵得到，具体包括以下步骤：将鼠李糖乳杆菌yl198接种于液体mrs培养基，37～45℃静置培养16～25h(优选的，37℃静置培养16h)，4～10℃、4000～8000rpm离心5～10min(优选的，4℃、6000rpm离心8min)，收集菌体沉淀；用发酵灭菌培养基水溶液悬浮，调整活菌数为1.0×109～1.0×1010cfu/ml，获得yl198菌悬液；新鲜艾草的地上部分自然干燥，用0.5～1％(优选0.75％)的食盐水侵泡2次，清水洗净，发酵池底部放入太赫兹矿石，装入艾草，艾草上面覆盖太赫兹矿石，太赫兹矿石的总重量为艾草总重量的1～2％(优选1.5％)，加入yl198菌悬液，压实，覆盖塑料膜密封，恒温30～35℃(优选的，恒温30℃)，发酵10～20天(优选的，发酵10天)，发酵结束后固液分离，将艾草在相同条件下重复发酵一次，合并两次发酵液，经过滤、包装获得艾草中药微生态发酵制剂，ph值在3.0～3.5之间。优选的，发酵灭菌培养基水溶液采用以下方法制备：每升液体培养基中加入玉米浆粉30g和糖蜜30g，121℃、高压灭菌15min即得。优选的，艾草中药微生态发酵制剂的剂型为水剂、粉剂或片剂。本发明的艾草中药微生态发酵制剂作为饲料添加剂的应用。本发明的艾草中药微生态发酵制剂，主要是通过利用鼠李糖乳杆菌yl198的发酵转化作用，一方面鼠李糖乳杆菌yl198发酵艾草，将艾草中的有效成分转化成有利于提高畜禽生长性能、增强畜禽免疫力的药效成分，提高艾草的药效；另一方面鼠李糖乳杆菌yl198在含有艾草的培养基中增殖，同时代谢产生各类生物活性酶、有机酸、氨基酸、生物多糖、维生素等功能物质和营养成分，具有促进畜禽消化、补充营养的作用。同时，在发酵时配合使用太赫兹矿石产生的磁场辅助益生菌发酵和艾草生物活性成分的发酵转化，进一步增加艾草乳酸菌微生态制剂产品的功能。通过试验证实本发明的艾草中药微生态发酵制剂具有预防和治疗便秘和腹泻、调节肠道菌群、减少疾病的发生和提高生产性能等功能，且具有绿色环保、疗效确实、能减少或代替抗生素的使用的优点下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例1菌株的分离、鉴定和保藏一、菌株的分离从自然发酵艾草样品放入运输培养基中，迅速置于冰盒内送至实验室进行菌株分离。将酸菜样品研磨、梯度稀释后，采用乳杆菌选择性培养基对样品中的乳杆菌进行分离，于37℃培养48h，挑取平板上的典型菌落(乳白色、圆形、边缘整齐、凸起、不透明、表面湿润光滑)，划线培养mrs固体培养基，分离得到纯菌落。纯培养的菌种接种到液体mrs培养基培养，然后加入60％甘油，-80℃冰箱保存。将其中1株乳杆菌命名为yl198。二、菌株的鉴定yl198的生理生化鉴定结果：革兰氏染色阳性，过氧化氢酶试验阴性，联苯胺试验阴性，吲哚试验阴性，乙酰甲基甲醇试验阳性；不水解淀粉，不液化明胶，不产生硫化氢，发酵葡萄糖产酸不产气；不运动的杆菌；在15℃和45℃能够生长，最适生长温度37～42℃；适宜ph为5.0～7.0；耐受6.5％nacl；yl198在液体mrs培养基中呈均匀浑浊生长，久置菌体呈白色沉淀。yl198的api50ch(法国梅里埃公司)鉴定结果如下表：上表中，“+”表示菌株为阳性反应；“-”表示菌株为阴性反应。16srdna序列同源性分析：提取yl198基因组dna，利用乳杆菌引物(16sf：5＇-agagtttgatcctggctcag-3＇；16sr：5＇-agaaaggaggtgatccagc-3＇)对其进行pcr扩增，将扩增产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司测序，所获得的16srdna序列如序列表中的序列1所示。将16srdna序列通过blast程序在genbank数据库中进行同源性比对分析，发现yl198与lactobacillusrhamnosus同源性达到99％。根据以上结果，菌株yl198被鉴定为鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)。三、菌株的保藏本发明中的鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198，已于2020年11月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，简称cctcc，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内(武汉大学保藏中心)，保藏编号为：cctccno：m2020781。实施例2本发明的艾草中药微生态发酵制剂的制备一、发酵菌悬液的制备鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)yl198(以下均用yl198表示)接种于液体mrs培养基，37℃静置培养16h，4℃、6000rpm离心8min，收集菌体沉淀，用发酵灭菌培养基水溶液悬浮，调整活菌数为1.0×109cfu/ml，获得yl198菌悬液；其中，发酵灭菌培养基水溶液采用以下方法制备：每升液体培养基中加入玉米浆粉30g和糖蜜30g，121℃、高压灭菌15min。二、艾草中药微生态发酵制剂的制备新鲜艾草的地上部分自然干燥，用1.75％的食盐水侵泡2次，清水洗净，发酵池底部放入太赫兹矿石，装入艾草，艾草上面覆盖太赫兹矿石，太赫兹矿石的总重量为艾草总重量的1.5％，加入yl198菌悬液，yl198菌悬液与艾草的用量按照体积:重量＝1l:300kg添加，压实，覆盖塑料膜密封，恒温30℃，发酵10日，发酵结束后固液分离，将艾草在相同条件下重复发酵一次，合并两次发酵液，经过滤、包装获得艾草中药微生态发酵制剂。发酵结束后，所得中药发酵产物中，发酵菌体含量不小于2.5亿/ml，ph值在3.0～3.5之间。本实施例所得艾草益生菌发酵产物即艾草中药微生态发酵制剂可以直接作为饲料添加剂使用。实施例3本发明的艾草中药微生态发酵制剂对断奶仔猪生长性能和血清生化指标的影响1、试验选择日龄、体重相近且健康状况良好的断奶仔猪40头，随机分成对照组和实验组，每组2个重复，每个重复10头仔猪。从21日龄断奶开始，除正常饲料饲喂外，实验组饮用水中添加艾草中药微生态发酵制剂(含量为3％)，对照组仅饲喂正常饲料和自由饮水，不添加艾草中药微生态发酵制剂，连续饲喂30d。2、生长性能指标记录仔猪每天的采食量，称取每个重复的仔猪在21日龄和51日龄的体重。计算平均日采食量(adfi)、平均日增重(adg)和料重比(f/g)。结果如表1所示。表1*表示与对照组比较，差异显著(p<0.05)，**表示与对照组比较，差异极显著(p<0.01)。由表1可知，平均日采食量实验组略低于对照组，但两组差异均不显著(p＞0.05)；实验组的平均日增重显著高于对照组；实验组的料重比显著低于对照组。由此说明，本发明的艾草中药微生态发酵制剂能显著提高仔猪的生长性能。3、腹泻率测定记录每天每个重复的腹泻头数，计算腹泻率。腹泻率(％)＝[每个重复总腹泻仔猪头日数/(每个重复仔猪总头数×试验天数)]×100。结果，对照组腹泻率为3.34％，而实验组腹泻率明显低于对照组，仅为1.46％。由此说明，本发明的艾草中药微生态发酵制剂能显著降低仔猪腹泻率。4、血清生化指标测定仔猪33日龄时，随机从每个重复中各取1头体况正常的猪，进行前腔静脉采血10ml，离心分离出血清，置于-20℃下冷冻保存，待测定血清总蛋白(tp)、白蛋白(alb)、球蛋白(glb)、葡萄糖、尿素氮(un)、免疫球蛋白g(igg)、免疫球蛋白m(igm)和免疫球蛋白a(iga)含量及谷丙转氨酶(gtp)、谷草转氨酶(got)活性。血清指标采用全自动生化分析仪进行测定。结果如表2所示。表2*表示与对照组比较，差异显著(p<0.05)，**表示与对照组比较，差异极显著(p<0.01)。由表2可知，实验组血清总蛋白和白蛋白含量显著高于对照组，实验组血清球蛋白含量与对照组相比，差异极显著，由此说明组织蛋白质合成能力强，能促进组织器官的生长，因此血清蛋白含量是衡量动物营养状况的一个重要指标。含量可以准确的反映动物体内蛋白质代谢和氨基酸之间的平衡状况，实验组血清尿素氮含量低于对照组，较低的血清尿素氮含量表明氨基酸平衡好，机体蛋白质合成率较高。实验组igg含量显著高于对照组，说明本发明的艾草中药微生态发酵制剂对仔猪的免疫系统发育有促进作用，有助于激活机体的体液免疫应答。实施例4本发明的艾草中药微生态发酵制剂对鸡免疫功能的影响1、选取14日龄无特定病原体(spf)雏鸡60羽，随机分为2组，每组5个重复，每个重复6羽。对照组饲喂基础饲料和自由饮水，不添加艾草中药微生态发酵制剂，实验组饲喂基础饲料和自由饮水，饮水中添加艾草中药微生态发酵制剂(含量为1％)，连续饲喂21d。2、生长性能测定于试验第1天和21天称体重、称饲料，以重复为单位计算雏鸡试验期间的平均日采食量(adfi)、平均日增重(adg)和料重比(f/g)。结果如表3所示。表3*表示与对照组比较，差异显著(p<0.05)，**表示与对照组比较，差异极显著(p<0.01)。由表3可知，实验组平均日采食量略低于对照组，但两组差异均不显著(p＞0.05)，实验组的平均日增重显著高于对照组，实验组料重比显著低于对照组。由此说明，本发明的艾草中药微生态发酵制剂能显著提高雏鸡的生长性能。3、抗体与细胞因子于试验第21天各组每个重复中各随机取1羽鸡，心脏无菌采集血液，4℃静置1h，3000r/min离心15min，分离血清，-20℃保存。用酶联免疫吸附法测定雏鸡血清中iga、igm、igg、il-1、il-2、il-4、il-6含量。结果如表4和表5所示。表4*表示与对照组比较，差异显著(p<0.05)，**表示与对照组比较，差异极显著(p<0.01)。由表4可知，实验组雏鸡血清细胞因子il-2、il-6、il-1水平含量显著低于对照组，由此说明，本发明的艾草中药微生态发酵制剂具有降低雏鸡血清炎症的作用。表5组别iga(ng/ml)igm(ng/ml)igg(ng/ml)对照组121.36±6.33432.01±10.23633.98±14.01实验组134.29±7.25*496.32±9.88*788.21±13.02***表示与对照组比较，差异显著(p<0.05)，**表示与对照组比较，差异极显著(p<0.01)。由表5可知，实验组雏鸡血清中iga、igm的含量均显著高于对照组，实验组雏鸡血清中igg的含量显著高于对照组，差异极显著(p<0.01)，由此说明本发明的艾草中药微生态发酵制剂能够激活雏鸡的免疫系统。实施例5艾草中药微生态发酵制剂对育肥羊生产性能和肉品质的影响1、选择体重约20kg的杜寒杂交f1肉用羊20只，随机分成对照组和实验组，每组10只(公母各半)，两组分开饲养。两组除正常的配合饲料喂养外，实验组的饮用水中添加艾草中药微生态发酵制剂(含量为1.5％)，对照组常规自由饮水，不添加艾草中药微生态发酵制剂，连续饲养100d。2、日增重和料肉比日增重采用早晨空腹分别测定试验羊只初始体重和终末体重，计算其平均日增重，记录试验期间各组的饲料平均日消耗量，计算其饲料报酬。结果如表6所示。表6*表示与对照组比较，差异显著(p<0.05)，**表示与对照组比较，差异极显著(p<0.01)。由表6可知，与对照组相比，实验组的平均日增重显著高于对照组。在平均日采食量差异不显著的情况下，实验组料肉比显著低于对照组，由此说明，本发明的艾草中药微生态发酵制剂明显提高了育肥羊的生产性能。3、屠宰率和腹脂率屠宰率为酮体总重占宰前活体总重的百分比，腹脂率为腹脂总重占活体总重的百分比。屠宰率和腹脂率计算结果如表7所示。表7组别屠宰活重/kg热胴体重/kg屠宰率/％热腹脂重/kg腹脂率/％对照组38.65±1.5425.03±0.9964.76±1.351.10±0.322.84±0.12实验组47.96±1.36**28.87±0.97*60.19±1.520.94±0.41*1.96±0.22**表示与对照组比较，差异显著(p<0.05)，**表示与对照组比较，差异极显著(p<0.01)。由表7可知，屠宰性能各指标中，在初始体重基本相同的情况下，终末屠宰活重实验组比对照组高，差异极显著(p<0.01)；热胴体重实验组比对照组提高，差异显著(p<0.05)，但屠宰率差异不显著(p>0.05)。实验组的腹脂率比对照组的降低，腹脂率的降低有效说明了饲喂本发明的艾草中药微生态发酵制剂能明显降低腹部脂肪的沉积。4、艾草中药微生态发酵制剂对育肥羊肉品质的影响对照大理石花纹等级图片确定眼肌横切面处大理石花纹等级，大理石花纹共分为1、1.5、2、2.5、3、3.5和4级，1级为大理石花纹极丰富、2级为大理石花纹丰富、3级为大理石花纹少量、4级为大理石花纹几乎没有，介于两级之间为0.5级。肉色等级按颜色深浅分为1～8个等级，以3～5等级最好。ph采用直测式胴体ph计测定，分别测定屠宰后45min和24h的ph。失水率是对羊肉屠宰前后肌内蛋白质变化的一种评定指标，直接影响羊肉的新鲜度、风味和色泽。熟肉率是测定羊肉在一定温度下加热特定时间后减少的重量。按照现有技术测定本发明的艾草中药微生态发酵制剂对育肥羊肉品质的影响。结果如表8所示。表8*表示与对照组比较，差异显著(p<0.05)，**表示与对照组比较，差异极显著(p<0.01)。由表8可知，实验组大理石花纹优于对照组，肉色两组之间没有显著性差异。分别测定育肥羊屠宰45min时背最长肌间的ph和4℃条件下贮藏24h时背最长肌间的ph，结果表明，随着时间的延长，两组的ph都有不同程度的降低，这种现象可能因屠宰后，血液循环停止，肌细胞处于无氧状态，动用体内肌糖元产生乳酸，从而降低了肉ph。对于熟肉率，两组间差异不显著(p>0.05)。失水率反映屠宰后肌内蛋白质发生变化、肌肉内水分丢失的程度，失水率的多少直接影响羊肉的嫩度、风味和色泽等。实验组失水率显著低于对照组，失水率越低，保水性能就越强，肉质就越嫩，由此说明本发明的艾草中药微生态发酵制剂可改善育肥羊肉的保水性能。本发明公开了一种艾草中药微生态发酵制剂及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文所述的产品进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。序列表<110>上海植酵盛生物科技有限公司<120>艾草中药微生态发酵制剂及其制备方法和应用<160>1<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>1310<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>1ttggaaacagatgctaataccgcataaatccaagaaccgcatggttcttggctgaaagat60ggcgtaagctatcgcttttggatggacccgcggcgtattagctagttggtgaggtaacgg120ctcaccaaggcaatgatacgtagccgaactgagaggttgatcggccacattgggactgag180acacggcccaaactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccacaatggacgcaagtc240tgatggagcaacgccgcgtgagtgaagaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttgga300gaagaatggtcggcagagtaactgttgtcggcgtgacggtatccaaccagaaagccacgg360ctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggatttattg420ggcgtaaagcgagcgcaggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccga480ggaagtgcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccatgtgt540agcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggcggctgtctggtctg600taactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaacaggattagataccctggtagtcc660atgccgtaaacgatgaatgctaggtgttggagggtttccgcccttcagtgccgcagctaa720cgcattaagcattccgcctggggagtacgaccgcaaggttgaaactcaaaggaattgacg780ggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttacc840aggtcttgacatcttttgatcacctgagagatcaggtttccccttcgggggcaaaatgac900aggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacga960gcgcaacccttatgactagttgccagcatttagttgggcactctagtaagactgccggtg1020acaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctac1080acacgtgctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatctctt1140aaagccattctcagttcggactgtaggctgcaacttccgtacatggagtcggaatcgcta1200tagattgcgaccctgcctcagtacgtggtaacaaggtagcggtagagtttgatcgtggct1260cagtaagtggtaacaaggtaaccgtagagtttgatcatggctcagtaagt1310当前第1页12