参芪提取物及其活性组分在制备治疗或预防中枢神经炎症药物中的应用的制作方法

1.本发明涉及药学技术领域，特别涉及参芪提取物及其活性组分在制备治疗或预防中枢神经炎症药物中的应用。


背景技术：

2.研究指出阿尔兹海默症(alzheimer’s disease,ad)，帕金森症(parkinson’s disease,pd)、肿瘤、抑郁、焦虑、疲劳、头痛等疾病均与中枢神经炎症有关。小胶质细胞是巨噬细胞的在中枢神经系统中的分支，是中枢神经系统的固有免疫细胞，在中枢神经炎症的发生和发展中起着重要调节作用。正常生理状态下，小胶质细胞保持静息态，维持神经组织微环境平衡，并保持免疫监视作用，包括识别和清除侵入体内的病原微生物、识别和清除神经细胞碎片和其它发生变异的细胞。
3.在病理状态下，压力(hpa轴激活)、外力损伤、药物刺激、老化损伤等因素的刺激下，小胶质细胞的免疫功能会被激活并发生极化，分别为：经典激活态(m1型)、选择激活态(m2型)。两种极化形态的小胶质细胞分泌两大类不同作用的炎症因子，经典激活态小胶质细胞m1分泌与炎症疾病状态相关(促炎型)，而选择激活态m2与保护神经系统免受m1型炎症反应影响相关(抗炎型)，极化为m2型的小胶质细胞可以高表达精氨酸酶-1(arginase-1,arg-1)、并释放转化生长因子-β(transforming growth factor,tgf-β)等因子，来实现抑制中枢神经炎症、修复神经组织和恢复微环境稳态的功能。arg-1和tgf-β的表达量通常与功能成正比，可将这些标志物表达量作为评价小胶质细胞m2型活性的指标。基于小胶质细胞在不同亚型之间的可塑性和可转化性。因此，开发能够调节小胶质细胞向对机体有利的状态转化(m2型)的药物具有重要的研究价值。


技术实现要素：

4.基于此，有必要提供一种参芪扶正注射液及其活性组分在抑制中枢神经炎症中的应用。
5.一种活性组分的应用，所述活性组分为黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷中的至少一种，所述应用是指用于制备治疗或预防中枢神经炎症的药物。
6.一种活性组分的应用，所述活性组分为黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷中的至少一种，所述应用是指用于制备治疗或预防中枢神经炎症所导致疾病的药物，或伴有中枢神经炎症的疾病的药物。
7.在其中一实施例中，所述中枢神经炎症所导致的疾病为阿尔兹海默症、帕金森症，所述伴有中枢神经炎症的疾病为肿瘤、糖尿病、抑郁、焦虑、疲劳、头痛或中风。
8.在其中一实施例中，所述中枢神经炎症为压力、外力损伤、药物刺激、老化损伤、或疾病的刺激下所导致的中枢神经炎症。
9.在其中一实施例中，所述治疗或预防是指促m2型小胶质细胞arg-1mrna和tgf-βmrnab表达。
10.在其中一实施例中，所述药物中活性组分的质量百分含量为大于或等于0.2％。
11.一种活性组分的应用，所述活性组分为黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷中的至少一种，所述应用是指用于制备促m2型小胶质细胞arg-1mrna和tgf-βmrnab表达的药物。
12.一种药物组合物的应用，所述药物组合物包括黄芪提取物和党参提取物中的至少一种；所述应用是指用于制备治疗或预防中枢神经炎症、或中枢神经炎症所导致的疾病的药物、或伴有中枢神经炎症的疾病的药物。
13.在其中一实施例中，所述药物组合物为黄芪提取物和党参提取物组合而成的参芪提取物。
14.在其中一实施例中，所述药物组合物为参芪扶正注射液。
15.有益效果：
16.本发明技术人员在研究中发现，黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷能够有效地促进m2型小胶质细胞arg-1mrna和tgf-βmrna的表达，能够达到抑制中枢神经炎症的目的，进而可以用于预防或治疗由中枢神经炎症或由其所导致的疾病或伴有中枢神经炎症的疾病。
附图说明
17.图1为参芪扶正注射液以及其中的活性组分对m2型bv-2细胞标志物arg-1mrna表达量的影响；
18.图2为参芪扶正注射液以及其中的活性组分对m2型bv-2细胞标志物tgf-βmrna表达量的影响；
19.图3为参芪扶正注射液以及其中的活性组分对m2型bv-2细胞存活率的影响。
具体实施方式
20.为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
21.除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
22.使用方法
[0023]“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内适于施用患者且与合理益处/风险比相称的那些配体、材料、组合物和/或剂型。
[0024]“药学上可接受的载体”指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封材料。如本文所用，语言“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的缓冲剂、注射用无菌水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗
剂及吸收延迟剂及诸如此类。在与配制物中其他成分兼容且对患者无害的意义上，每种载体必须为“药学上可接受的”。合适的实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉及经取代或未经取代的β-环糊精；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；及(21)药物配制物中所采用的其他无毒兼容物质。
[0025]
利用本发明所得的活性组分或药物组合物可给药于人，可以注射(静脉内、肌肉内或皮下)、口服或局部给药(粉剂、软膏剂或滴剂)。
[0026]
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
[0027]
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的至少一种形成微胶囊形式。
[0028]
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
[0029]
除了这些惰性稀释剂外，上述组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
[0030]
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
[0031]
注射剂的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
[0032]
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
[0033]
详细解释
[0034]
本发明一实施方式提供了一种活性组分的应用，活性组分为黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷中的至少一种，活性组分用于制备治疗或预防中枢神经炎症的药物。
[0035]
黄芪皂苷i(cas rn：84680-75-1)、黄芪异黄烷苷(cas rn：94367-43-8)、芒柄花苷(cas rn:486-62-4)为中草药黄芪中的有效组分，其中，黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷主要用于治疗肾炎、高血压、冠心病等疾病，芒柄花苷作为一种甘草黄酮，具有扩张血管的作用，故常用于制备血管舒张药物；党参炔苷(cas rn：136085-37-5)和党参炔二糖苷(cas rn：142451-48-7)为中草药党参中的有效组分，其主要具有抗菌、抗炎、镇静、降压的作用。
[0036]
本发明技术人员，在研究中发现，上述组分能够有效地促进m2型小胶质细胞arg-1mrna和tgf-βmrna的表达，说明其具有抗中枢神经炎症的潜能，特别适宜制备治疗或预防中枢神经炎症的药物。
[0037]
进一步地，中枢神经炎症为压力、外力损伤、药物刺激、老化损伤、或疾病等的刺激下所导致的炎症。
[0038]
本发明还提供了一种预防或治疗中枢神经炎症的方法，包括以下步骤：向待处理对象施加有效量的活性组分，活性组分为黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷中的至少一种。
[0039]
进一步地，优选待处理对象为哺乳动物；更进一步地，优选待处理对象为人。
[0040]
本发明还提供了一种活性组分的应用，活性组分包括：黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷中的至少一种，应用是指用于制备治疗或预防中枢神经炎症所导致疾病的药物，或伴有中枢神经炎症的疾病的药物。
[0041]
本发明技术人员在研究中发现，黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷能够有效地促进m2型小胶质细胞arg-1mrna和tgf-βmrna的表达，能够达到抑制中枢神经炎症的目的，进而可以用于预防或治疗由中枢神经炎症所导致的疾病，或伴有中枢神经炎症的疾病。
[0042]
进一步地，中枢神经炎症所导致的疾病为阿尔兹海默症或帕金森症，伴有中枢神经炎症的疾病为肿瘤、糖尿病、抑郁、焦虑、疲劳、头痛或中风。上述疾病与m2型小胶质细胞arg-1mrna和tgf-βmrnab表达密切相关，例如：阿尔兹海默症【calsolaro v.,edison p.neuroinflammation in alzheimer's disease:current evidence and future directions.alzheimers dement.12,719-732(2016)；regen f.,hellmann-regen j.,costantini e.,reale m.neuroinflammation and alzheimer's disease:implications for microglial activation.curr alzheimer res.14,1140-1148(2017)；shi y.,holtzman d.m.interplay between innate immunity and alzheimer disease:apoe and trem2 in the spotlight.nat.rev.immunol.18,759-772(2018).】,帕金森症【hassanzadeh k.,rahimmi a.oxidative stress and neuroinflammation in the story of parkinson's disease:could targeting these pathways write a good ending.j.cell physiol.234,23-32(2018)；vivekanantham s.,shah s.,dewji r.,dewji a.,khatri c.,ologunde r.neuroinflammation in parkinson's disease:role in neurodegeneration and tissue repair.int.j.neurosci.125,717-725(2015).】，肿瘤
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[0043]
本发明还提供了一种预防或治疗中枢神经炎症所导致的疾病或伴有中枢神经炎症的疾病的方法，包括以下步骤：向待处理对象施加有效量的活性组分，活性组分为黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷中的至少一种。
[0044]
进一步地，优选待处理对象为哺乳动物；更进一步地，优选待处理对象为人。
[0045]
本发明还提供了一种活性组分的应用，活性组分为黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷中的至少一种，活性组分用于制备促m2型小胶质细胞arg-1mrna和tgf-βmrnab表达的药物。
4,il-4)诱导。
[0057]
试验实施例1：体外抗神经炎症实验
[0058]
(1)试验材料
[0059]
bv-2小鼠小胶质细胞(购自中国科学院细胞库)。
[0060]
阳性对照为白介素-4(interleukin-4,il-4)溶于含1％bsa的pbs溶液，ph＝7.4。参芪扶正注射液(丽珠集团利民制药厂提供)，单体成分黄芪皂苷i、黄芪异黄烷苷、芒柄花苷、党参炔苷和党参炔二糖苷(购于上海诗丹德标准技术服务有限公司)。待测化合物用dmso溶解，配成20μm溶液，然后用dmem稀释成2μm溶液。
[0061]
(2)试验方法
[0062]
实时荧光定量pcr法(real-time quantitative pcr,rt-qpcr)：
[0063]
(3)实验操作及结果
[0064]
根据细胞生长速率，将处于对数生长期的bv-2细胞以2.5ml/孔接种于6孔培养板，贴壁生长16h。加入dmem和250μl/孔作为溶剂对照组，加入参芪扶正注射液250μl/孔或2μm的带测化合物250μl/孔，加入200ng/ml il-4250μl/孔作为阳性对照，细胞在37℃、5％co2条件下培养1h。然后，在溶剂对照组中加入1％bsa 250μl/孔，其余组加入200ng/ml il-4 250μl/孔，继续培养4h。然后，依次按照rnaprep pure培养细胞/细菌总rna提取试剂盒，fastking cdna第一链合成试剂盒，superreal premix plus(sybr green)/superreal荧光定量预混试剂盒，根据说明书的操作，运用实时荧光定量pcr法，进行相关蛋白测定。实验结果如下图1和图2所示；
[0065]
分析及结论：
[0066]
如图1所示，il-4为m2型bv-2细胞的诱导剂，其标志物arg-1mrna在模型组的表达量升高了510倍，说明造模成功，同时il-4也可以作为阳性对照，增加il-4的剂量，arg-1mrna的表达量继续升高至660倍，说明该模型可以评价化合物提高arg-1mrna的活性。测试结果表明参芪扶正注射液及其他活性成分能够明显促进m2型bv-2细胞中arg-1mrna的表达，说明测试活性组分具有抗神经炎症活性。
[0067]
同样地，如图2所示，il-4的m2型bv-2细胞的标志物tgf-βmrna提高了1倍，增加il-4的剂量，tgf-βmrna的表达量继续升高至2.9倍。测试结果表明参芪扶正注射液及其他活性成分能够明显促进m2型bv-2细胞中tgf-βmrna的表达，其中的芒柄花苷对tgf-βmrna的表达量升高至4.2倍。arg-1mrna和tgf-βmrna表达量的提高，其说明测试活性组分均具有抗神经炎症活性。
[0068]
试验实施例2：体外存活率实验
[0069]
(2)试验方法
[0070]
cell counting kit-8(cck-8)法
[0071]
(3)实验操作及结果
[0072]
根据细胞生长速率，将处于对数生长期的bv-2细胞以8*104个/ml,100μl/孔接种于96孔培养板，贴壁过夜倾去培养液(含血清高糖培养液即10％fbs+dmem)后换为新鲜培养液(5％fbs+dmem)160μl/孔。加入dmem20μl/孔和1％bsa 20μl/孔作为溶剂对照组，加入dmem 20μl/孔和200ng/ml il-4 20μl/孔作为模型组，加入200ng/ml il-4 40μl/孔作为阳性对照组，其余测试组组加入200ng/ml il-4 20μl/孔和参芪扶正注射液20μl/孔，或加入
200ng/ml il-4 20μl/孔和参芪扶正注射液20μl/孔或2μm的带测化合物20μl/孔，每个浓度设6个复孔。bv-2细胞在37℃、5％co2条件下培养24h，然后倾去培养液，加入dmem 100μl/孔，再加入cck-8 10μl/孔，在37℃、5％co2条件下培养30min后，酶标仪450nm波长下测定吸光度a值按以下列公式计算bv-2细胞的细胞活力：
[0073]
细胞活力％＝(样品吸光值
–
空白吸光值)/(阴性对照吸光值
–
空白吸光值)
×
100％
[0074]
参芪扶正注射液以及其他活性组分成分对m2型bv-2细胞存活率进行了测试，如图3所示，测试结果表明参芪扶正注射液及其他活性组分对m2型bv-2细胞没有显著影响，说明测试化合物没有毒性作用。
[0075]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0076]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。