环糊精用于抑制口腔细菌生长的组合物的用途的制作方法

本发明属于环糊精针对口腔护理的用途技术领域，特别地，涉及一种环糊精抑制口腔细菌生长的用途。

背景技术：

口腔是一个复杂而完整的微生态系统，透过微生物、微生物代谢物、口腔与口腔分泌物之间的交互作用形成的生物膜，为各种微生物的生长繁殖提供了适宜的环境和条件。研究指出若干口腔疾病，例如龋齿、结石、牙周病、牙龈炎等的发生，都与生长于口腔生物膜的有害细菌的繁殖有关。若能抑制有害细菌在口腔中大量生长，可避免并改善口腔疾病。

目前，对于口腔有害细菌的控制，主要依靠广谱化学杀菌剂、抗生素等方法。然而，因广谱化学杀菌剂、抗生素，具有高度刺激性，长期使用会造成口腔细菌大量死亡或引发细菌耐药性，使口腔菌群失调，甚至造成口腔细胞变异，引发其它疾病。此外，由于广谱化学杀菌剂或抗生素往往需以有机溶液(例如酒精)作为溶剂，使用时还会有破坏口腔黏膜的风险。

因此，如何提供温和、安全、具有抑菌功效又不会产生抗药性的口腔抑菌剂，是待解决的问题。

技术实现要素：

本发明提供了一种环糊精用于制造抑制口腔细菌生长的组合物的用途。

根据本发明的实施方案，所述组合物包含维持于口腔中特定时间以抑制口腔细菌的活性成分，其中所述活性成分包含环糊精。

根据本发明优选的实施方案，环糊精为抑制细菌的唯一活性成分。

根据本发明的实施方案，口腔细菌包含链球菌属、嗜血杆菌属、放线菌属、雷沃氏菌属、大肠杆菌属、葡萄球菌属或其组合。例如，可以为肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌或大肠杆菌。

根据本发明的实施方案，环糊精包括ɑ-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、δ-环糊精、或各自的衍生物中的至少一种。

根据本发明的实施方案，组合物为口腔护理用品。

根据本发明的实施方案，环糊精在组合物中的重量百分比为0.1％至1.5％。

根据本发明的实施方案，口腔护理用品选自漱口水、牙膏、牙凝胶、牙粉、凝胶、慕斯、泡沫、口腔喷雾、口含锭、或泡腾片。

根据本发明的实施方案，口腔护理用品的成分还包括界面活性剂、杀菌剂、消炎剂、止血剂、去敏感剂、抗龋蚀剂、抗氧化剂、循环改善剂、维生素、益生菌、益生菌提取物或其组合。

根据本发明的实施方案，口腔护理用品的成分还包括增稠剂、螯合剂、缓冲剂、保湿剂、风味剂或其组合。

根据本发明的实施方案，抑制口腔细菌包含抑制口腔中的细菌形成生物膜。

本发明还提供了一种环糊精用于制造抑制牙齿表面的菌斑、酸蚀、结石或前述组合的组合物的用途。

根据本发明的实施方案，所述组合物维持于口腔中特定时间以抑制牙齿表面的菌斑、酸蚀、结石或前述组合。

本发明还提供了一种环糊精用于制造改善牙龈疾病的组合物的用途，其中组合物维持于口腔中特定时间以改善牙龈疾病，其中牙龈疾病包含牙龈炎或牙周炎，所述牙周炎包括牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质。

有益效果

本发明提供的环糊精用于抑制口腔细菌生长的用途，无须使用对身体细胞具有高刺激性的杀菌剂(例如季铵盐等)以及有机溶剂，即可抑制细菌的生长。并且口感温和，可提升使用者的使用意愿。此外，环糊精同时具有助溶的特性，可藉由提升其他功能活性成分的溶解上限，协同性地增进其他功能活性成分所对应的医疗效用或是生理活性。

附图说明

图1为实施例一中羟丙基-β-环糊精对肺炎克雷伯氏菌在不同作用时间(1分钟以及6小时)以及不同作用浓度(0.1％、1％、10％)下，单位体积的菌数变化的比较图。

图2为实施例一中羟丙基-β-环糊精对金黄色葡萄球菌在不同作用时间(1分钟以及6小时)以及不同作用浓度(0.1％、1％、10％)下，单位体积的菌数变化的比较图。

图3为实施例一中羟丙基-β-环糊精对大肠杆菌在不同作用时间(1分钟以及6小时)以及不同作用浓度(0.1％、1％、10％)下，单位体积的菌数变化的比较图。

图4为实施例一中羟丙基-β-环糊精对口腔细菌作用1分钟后，不同重量百分比的羟丙基-β-环糊精的抑菌力比较图。

图5为实施例一中羟丙基-β-环糊精对口腔细菌作用6小时后，不同重量百分比的羟丙基-β-环糊精的抑菌力比较图。

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明组合物及其应用做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

于本文中，除非内文中对于冠词有所特别限定，否则“一”与“该”可泛指单一个或多个。将进一步理解的是，于本文中所使用之“包含”、“包括”、“具有”及相似词汇，指明其所记载的特征、区域、整数、步骤、操作、元件与/或组件，但不排除其它的特征、区域、整数、步骤、操作、元件、组件，与/或其中之群组。

虽然下文中利用一系列的操作或步骤来说明本发明，但是这些操作或步骤所示的顺序不应被解释为本发明的限制。例如，某些操作或步骤可以按不同顺序进行及/或与其它步骤同时进行。此外，并非必须执行所有操作、步骤及/或特征才能实现本发明的实施方式。再者，在此所述的每一个操作或步骤可以包含数个子步骤或动作。

于本文中，“口腔护理用品”系指一组成物就其希望用途可包括口腔护理、口腔卫生或口腔外观，或就其希望的使用方法可包括投予口腔。在一些实施例中，口腔护理组成物不会经过吞咽，而是停留在口腔中一段足以进行所希望用途之时间。

于本文中，“生物膜”意指，嵌在细菌和唾液来源之聚合物基质中的牙齿表面或牙周表面上的各种微生物群落，生物膜的形成涉及较早细菌聚落和此薄膜间的相互作用。随后，第二菌落附着至已黏附的早期菌落(共聚集)且此过程使得成熟的生物膜生成。抑制生物膜的生长可防止和减少细菌再附着至牙齿表面或牙周表面。

举例而言，牙菌斑是多种口腔细菌组成的生物膜，以三维结构黏附在牙齿表面，复杂的结构使它能包涵对氧有不同敏感性的细菌，这些细菌嵌入在由多糖、蛋白质和矿物质组成的聚合物基质中生长、发育和衰亡。牙菌斑中的某些细菌，会产生代谢物酸蚀牙釉质或牙龈，导致蛀牙或敏感性牙齿，或是产生菌斑沉积在牙齿上，导致结石…等症状，是牙龈疾病(例如牙龈炎或牙周炎)的主要致病因素。

在本发明内容的一些实施方式中，提供环糊精(cyclodextrin；cd)用于抑制口腔细菌的用途，包含维持环糊精于口腔中特定时间。在一些实施方式中，口腔细菌包括但不限于链球菌属(streptococcus)、嗜血杆菌属(haemophilus)、放线菌属(actinomyces)、雷沃氏菌属(prevotella)、大肠杆菌属(escherichia)、或葡萄球菌属(staphylococcus)。在一些实施方式中，特定时间包含0.5至10分钟。在一实施方式中，至少0.5分钟、1分钟、5分钟、10分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时或前述任意间隔之时间，可达到抑制口腔细菌生长的效果。在一些实施方式中，抑制口腔细菌可包含抑制口腔中的细菌形成生物膜。

环糊精为不饱和六元杂环化合物，对人体无害，口感温和无刺激性，并具有疏水性内腔以及亲水性外壳的两性分子特点，内腔可作为包涵体，容纳多种疏水性分子，以往多见于助溶、固定分子、输送药物、除臭等用途。值得注意的是，本发明内容中的一些实施方式利用环糊精的两性结构特性，包覆口腔细菌产生的代谢物，避免细菌生物膜的形成，首度将环糊精用于抑制口腔细菌的生长。在一些实施方式中，环糊精包括ɑ-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、δ-环糊精、或其衍生物中的一种或多种，不同环糊精具有不同的疏水性分子包覆能力以及水溶性，可根据需求选用适当的环糊精。举例而言，羟丙基-β-环糊精(hydroxypropyl-β-cyclodextrin；hp-β-cd)由β-环糊精修饰而成，不仅便宜并且来源广泛易于取得，具有优异的水溶性，可直接以水配置为漱口水，使用上不仅成本低且并具有高度便利性。

在一些实施方式中，组合物可以包含于口腔护理用品中。在一实施方式中，环糊精在口腔护理用品中的重量百分比为0.1％至1.5％，例如0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、或前述任意间距的重量百分比。环糊精浓度过高或过低均无法达成抑制细菌生长的效果，浓度过高反而会使部分细菌(例如肺炎克雷伯氏菌)生长，浓度过低则效果不彰。

在一些实施方式中，口腔护理用品选自漱口水、牙膏、牙凝胶、牙粉、凝胶、慕斯、泡沫、口腔喷雾、口含锭、或泡腾片。在一实施方式中，口腔护理组成物可用于非人类哺乳动物例如宠物(如狗和猫)，以及人类。在一实施例中，口腔护理组成物只适用于人类。

在一些实施方式中，口腔护理用品的成分还包括界面活性剂、功能活性成分或同时包含两者。在一实施方式中，界面活性剂在口腔护理用品中的重量百分比为0.01％至30％，例如0.01％、0.1％、1％、5％、10％、15％、30％、或前述任意间距的重量百分比。在一实施方式中，功能活性成分在口腔护理用品中的重量百分比为0.01至10％，例如0.01％、0.1％、1％、5％、10％、或前述任意间距的重量百分比。

在一实施方式中，界面活性剂选自阴离子界面活性剂、阳离子界面活性剂、非离子界面活性剂、或两性界面活性剂中的一种或多种。

功能活性成分泛指具有医疗效用或是生理活性的成分，例如杀菌剂、消炎剂、止血剂、去敏感剂、抗龋蚀剂、抗氧化剂、循环改善剂、维生素、益生菌、或益生菌提取物。

在一实施方式中，杀菌剂包含阳离子杀菌剂、苯甲酸盐、碘类、澳氯苯酚、三氯氢基二苯醚和柠檬酸锌、过氧化氢、卤素化二苯基醚(例如三氯沙)、香草萃取物和精油(例如迷迭香萃取物、茶萃取物、木兰萃取物、百里醇、薄荷醇、桉油醇、香叶醇、香芹酚、柠檬醛、扁柏酚、儿茶酚、水杨酸甲酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素、没食子酸、美斯瓦克(miswak)萃取物、沙棘萃取物)或其组合。

在一实施方式中，消炎剂包括甘草提取物(例如甘草中的黄酮类化合物(举例而言甘草二钾、甘草氨、或甘草次酸等))、消炎用激素(例如糖皮质激素)、紫丁花抽出物、赤芍、玄参、紫草、茜草、丹皮或其组合。

在一实施方式中，止血剂包括传明酸。

在一实施方式中，去敏感剂包括尿嚢素、硝酸锶、氯化锶、柠檬酸钾、氟化亚锡、氯化钾、葡萄籽萃取物、山竹萃取物、苹果萃取物中的一种或多种。

在一实施方式中，抗龋蚀剂包括氟化物类，例如氟化亚锡、氟化钠、氟化钾、单氟磷酸钠、氟硅酸钠、氟硅酸铵、氟化胺、氟化铵、氟化钛、六氟硫酸盐或其组合。

在一实施方式中，抗氧化剂包括维生素、动植物提取物中的抗氧化活性成分或同时包含两者。

在一实施方式中，循环改善剂包含维生素e及其衍生物、依克多因、植物提取物或其组合。

值得说明的是，环糊精存在口腔护理用品中时，可同时作为助溶剂，例如提升其他功能活性成分的溶解度上限，提升功能活性成分因溶解度受限，因此最高含量受限的情况。也就是，环糊精除了可抑制口腔细菌生长外，还具有同步提升其他功能活性成分的功效上限的协同功效。

在一些实施方式中，口腔护理用品的成分还包括辅料(又称赋形剂)，主要在于提升功能活性成分的作用，或在最终型态中促进溶解、吸收以增强有效成分的发挥。例如增稠剂、螯合剂、缓冲剂、保湿剂、风味剂或其组合。在一实施方式中，辅料在口腔护理用品中的重量百分比为0.02至20％，例如0.02％、0.1％、1％、5％、10％、15％、20％或前述任意间距的重量百分比。

增稠剂是指提供所欲的稠度或安定、增进口腔护理用品的性能的物质。在一实施方式中，增稠剂例如透明质酸、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、寡聚醣、葡萄糖基甘油、羧乙烯聚合物、角叉菜胶、羟乙基纤维素(hydroxyethylcellulose；hec)、天然和合成的黏土(例如硅酸铝镁盐(veegum)和锂皂石(例如商品laponite))、纤维素醚之水溶性盐类(例如羧甲基纤维素钠(carboxymethylellulose；cmc)和羧甲基羟乙基纤维素钠)、天然胶(例如刺梧桐胶、三仙胶、阿拉伯胶和黄蓍胶)、胶状硅酸镁铝、硅氧(例如细粉状硅氧)、聚乙烯基吡咯酮、卡波腊(carbowaxe)、脂肪酸及其盐类或其组合。

螯合剂是指可与碱土金属和重金属离子形成稳定的水溶性配合物的化合物。在一实施方式中，螯合剂包含例如依地酸盐。

缓冲剂可将口腔护理组成用品的ph调整到，例如，约ph4.0至约ph8.0的范围。在一实施方式中，缓冲剂包含氯化钠或氟化钠、碳酸氢钠、磷酸钠(例如，磷酸二氢钠(nah2po4)、磷酸氢二钠(na2hpo4)、磷酸三钠(na3po4))、氢氧化钠、碳酸钠、酸式焦磷酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠及其混合物或其组合。

保湿剂是指当口腔护理用品暴露于空气中时，避免硬化的成分。在一实施方式中，保湿剂例如甘油、山梨醇、丙二醇或其组合。

风味剂是指调控口腔护理用品的口感或是味道的物质。在一实施方式中，风味剂可提供清凉味道，例如薄荷及其提取物(例如薄荷脑、薄荷油)、冰片(樟科植物的枝或叶经萃取加工制成的结晶)、精油以及各种调味醛类、酯类(例如乳酸薄荷酯)、或醇类中的一或多种。精油可包括薄荷油、椒薄荷油、冬青油、黄樟油、丁香油、鼠尾草油、尤加利油、马郁兰油、肉桂油、柠檬油、莱姆油、葡萄柚油、柳橙油或其组合。在一实施方式中，风味剂在口腔护理用品中的重量百分比为0.005至2％，例如0.005％、0.01％、0.1％、0.15％、0.2％、或前述任意间距的重量百分比。

在本发明内容的一些实施方式中，也提供环糊精用于制造抑制牙齿表面的菌斑、酸蚀、结石或前述组合的组合物的用途，其中组合物维持于口腔中特定时间以抑制牙齿表面的菌斑、酸蚀、结石或前述组合。

在本发明内容的一些实施方式中，也提供环糊精用于制造改善牙龈疾病的组合物的用途，其中组合物维持于口腔中特定时间以改善牙龈疾病。

为进一步说明本发明之各种实施方式所提供之环糊精用于抑制口腔细菌生长的用途，遂进行以下实施。应注意的是，下述实施例仅提供作为示范目的，而非限制本发明。

实施例一、环糊精的抑菌试验

为测试环糊精对于口腔细菌的抑制性，将不同作用浓度的羟丙基-β-环糊精(重量百分比包含0.1％、1％、以及10％)分别与肺炎雷伯氏菌(klebsiellapneumoniae)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、以及大肠杆菌(escherichiacoli)混合作用特定时间(1分钟以及6小时)，其中各组细菌的初始反应浓度为1x10⁵cfu/ml，检测各组细菌在单位体积下的菌落数，将结果绘制为图1至图3。

结果呈现，作用浓度为0.1％以及1％的羟丙基-β-环糊精的组别，不论是作用1分钟或是6小时，均可抑制细菌的生长。然而，若是浓度提升至10％时，反而会促进肺炎雷伯氏菌的生长(47x10⁵cfu/ml)。也就是，需将环糊精控制于适当的浓度下，方具有抑制口腔细菌生长的效果。

进一步地，将羟丙基-β-环糊精的抑菌力(％)定义为(控制组的菌量-实验组的菌量)/控制组的菌量，并换算出图1至图3中的0.1％以及1％羟丙基-β-环糊精对于各组细菌的抑菌力，绘制为图4和图5。

结果呈现，大体而言，1％羟丙基-β-环糊精具有较佳的抑菌力，并且在作用1分钟时，即可达到同时抑制三种细菌生长的效果。此外，随着作用时间的提升，对于部分细菌的抑菌力也随之提升。

实施例二、环糊精的清洁试验

为测试使用含有羟丙基-β-环糊精的漱口水，移除口腔菌的清洁效果，使用培养管分别培养大肠杆菌、霉菌/酵母菌混合液两天后，倒掉菌液。接着，使用棉花棒涂抹管壁，使用食品法规范之测试片(jncskneofilm^tw微生物快检片)检测棉花棒所沾取到的菌量，其中大肠杆菌使用jnc大肠杆菌/大肠杆菌群测试片(型号#6635)检测，霉菌/酵母菌则使用jnc酵母菌与霉菌测试片(型号#6640)检测，计算获得各组初始菌量均为1x10⁴cfu/ml。接着，倒入漱口水，摇晃1分钟后，倒掉漱口水，其中漱口水包含三组，分别为含有1％的25℃环糊精水溶液、65℃的逆渗透热水、以及25℃的逆渗透常温水。接着，再度以棉花棒涂抹管壁，培养棉花棒所沾取到的菌两天，再度使用食品法规范之测试片计算菌量，结果如下表1所示。

表1环糊精的清洁效果比较表

表1结果呈现，使用环糊精水溶液作为漱口水，经过冲洗培养管步骤模拟漱口流程，则环糊精水溶液相较于65℃或25℃的逆渗透水，可以达到更好的细菌以及真菌的移除效果，具有较佳的清洁作用。

实施例三、含环糊精的漱口水

为进一步确认含环糊精的口腔护理用品的实际使用情形，将环糊精添加天然物成分，配制为浓缩漱口水(按质量份计，配方包含47.5％羟丙基-β-环糊精、3.5％丙二醇、3.5％天然薄荷脑、1.0％乳酸薄荷酯、4.5％甘草二钾、以及水)后，分别进行稳定性以及稀释后的使用感受问卷调查。实施例3中的浓缩漱口水在应用于口腔时，需采用水稀释，实施例三中的浓缩漱口水以水稀释为羟丙基-β-环糊精为1％-3％的漱口水。

1.浓缩漱口水的稳定性测试

将浓缩漱口水分别放置于室温/12个月、30℃/12个月、以及45℃/6个月再观测浓缩漱口水的外观、气味、内容物含量以及检测微生物的产生(检测是否产生真菌、霉菌、大肠杆菌、绿脓杆菌(pseudomonasaeruginosa)、或金黄色葡萄球菌，其中检测下限为10cfu/g)，结果请见表2。

表2、浓缩漱口水的稳定性结果表

结果呈现，在45℃下，浓缩漱口水可至少保存6个月不变质，并且在室温以及30℃下，至少可保存12个月不变质。

2.浓缩漱口水的使用感受问卷调查

征求受测者共13位，经水漱口后，分别使用测试组(将实施例三中的浓缩漱口水以水稀释为羟丙基-β-环糊精为1％的漱口水)以及市售品(李施德林薄荷除菌漱口水)漱口水，接着填写使用者感受问卷。受试者依感受的强烈度由1至5评分。例如刺激感评分为5，表示刺激性高，评分为1，表示刺激性低；清凉持久度评分为5，表示持久时间长，评分为1，表示持久时间短；清爽感评分为5，表示清爽性高，评分为1，表示清爽性低。接着，以统计分析检测市售品与测试品间的给分平均值是否具显着差异。最后，将问卷结果整理为表3至表5。

表3浓缩漱口水的使用感受评分表-刺激感

表4浓缩漱口水的使用感受评分表-清凉持久度

表5浓缩漱口水的使用感受评分表-清爽感

结果显示，市售品与测试品在刺激性具有显着差异，而清凉持久度以及清爽感则无显着差异。本发明中实施例中测试品的口感，较市售品温和无负担。

本发明内容的一些实施方式所提供的环糊精用于抑制口腔细菌生长的用途，首度将环糊精作为口腔保健的功能活性成分，不须使用常规上对身体细胞具有高刺激性的杀菌剂，即可抑制细菌的生长，避免生物膜的生成以及细菌产生抗药性的风险，还具有极佳的移除细菌以及真菌的效果，并且不需使用防腐剂，即可达到至少一年的保存期限。此外，环糊精的口感温和，可溶于水，因此，所配制而成的口腔护理用品对口腔黏膜不具有刺激性，可提升使用者的使用意愿。

此外，环糊精与其他功能活性成分还具有协同作用，环糊精可利用自身结构上两性分子的助溶特性，增加功能活性成分的溶解度上限，进一步地增进功能活性成分所对应的医疗效用或是生理活性。

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。