用于预防和/或治疗突触核蛋白病的瑞巴派特发明领域1.本发明涉及用于预防和/或治疗突触核蛋白病，尤其是用于患有肠通透性增加或处于肠通透性增加风险中的那些受试者的瑞巴派特。
背景技术：
：：2.突触核蛋白病是与脑神经元中存在由α‑突触核蛋白聚集体形成的路易体相关的神经变性疾病。已知α‑突触核蛋白的寡聚体和聚集体导致神经元死亡，而多巴胺依赖性神经元主要受这种机制的影响。然而，还存在突触核蛋白病，例如帕金森病中隐含的神经元死亡的其它机制，包括氧化应激、蛋白质聚集、线粒体活性降低、蛋白酶体和溶酶体系统功能障碍。3.α‑突触核蛋白是主要存在在神经组织中的未知功能的蛋白质。其存在于脑神经元以及肠神经系统中。α‑突触核蛋白是固有无序的蛋白质；假定它含有平衡的非结构化的α‑螺旋和富含β‑折叠的构象异构体的混合物。α‑突触核蛋白的聚集和路易体的形成与β构象异构体比例的增加有关(kingwellk.(2017)natrevdrugdiscov；16(6):371‑373)。4.已经提出了α‑突触核蛋白病的几个起始点。最初的病理可能出现在脑干或边缘系统中，然后从中枢神经系统(cns)顺行性地增殖到外周神经系统(pns)。或者，该疾病可起源于外周神经系统的突触，随后侵入脑。从这个观点来看，嗅球通常在身体的第一区域中累积α‑突触核蛋白聚集体，表明它可以作为病原体的入口点或环境攻击的进入点，这可触发导致α‑突触核蛋白聚集的病理变化，然后α‑突触核蛋白聚集可以通过嗅觉途径扩散到整个脑中(reynletal.(2018)neurobiol.dis；109:226‑248)。这与以下事实相符：受损的嗅觉是帕金森氏病患者的常见症状，通常之前多年出现典型的运动缺陷。然而，还表明肠神经系统中形成的聚集的α‑突触核蛋白可通过迷走神经进入脑，参与或引起路易体的形成(holmqvistsetal.(2014)actaneuropathol；128(6):805‑820)。5.发现触发聚集体形成的α‑突触核蛋白的错误折叠机制之一可能与微小的肠壁缺陷有关，所述肠壁缺陷有时被称为肠通透性增加，包括肠壁的亚临床慢性炎症(低度炎症)(perez‑pardop.etal.(2017)currbehavneuroscirep；4(4):361‑368,perez‑pardop.etal.(2017)eurjpharmacol；817:86‑95)。这些发现还得到以下事实的支持：在疾病发作之前，一定比例的帕金森病患者遭受慢性便秘和胃轻瘫许多年，其是小的肠壁缺陷的典型表现‑肠通透性增加。然而，存在引起α‑突触核蛋白错误折叠的大量其他机制，包括例如编码α‑突触核蛋白的基因的突变或缺乏预防病理性错误折叠的伴侣蛋白。6.因此，最近的论文表明突触核蛋白病，例如帕金森病或路易体痴呆，实际上可能由具有不同病因学和发病位点的多种亚型组成，导致cns‑优先(cns‑first)和pns‑优先(pns‑first)的表型分开。在后一种情况下，α‑突触核蛋白聚集可以在肠神经系统或自主性pns中引发。7.帕金森病(最常见的突触核蛋白病)的当前治疗集中在多巴胺补充(多巴胺前体左旋多巴)、多巴胺激动剂和预防多巴胺代谢的mao‑b抑制剂。据估计全世界现存约1千万人患有帕金森氏病。为了延迟或预防疾病的发作，并且为了寻找相关患者群，提供用于治疗的进一步选择，或甚至更好地用于预防帕金森病和进一步的α‑突触核蛋白病是期望的。8.瑞巴派特，化学名是2‑[(4‑氯苯甲酰基)氨基]‑3‑(2‑氧代‑1h‑喹啉‑4‑基)丙酸，用于治疗胃炎和胃十二指肠溃疡。其作用机制涉及粘膜防御、清除自由基和暂时激活编码环氧合酶‑2的基因。最近，已经描述了在6‑ohda‑诱导的大鼠半帕金森病模型中减轻线粒体功能和具有α‑突触核蛋白病理的生物能学的损伤(mishraa,krishnamurthys.(2019)neurotoxres；35(3):542‑562)。技术实现要素：[0009]在本发明的框架中，本发明人已经发现瑞巴派特能够预防和/或降低突触核蛋白病的进展。本发明人已经在帕金森病的动物模型上观察到活性成分能够预防α‑突触核蛋白聚集，并因此预防突触核蛋白病的发展。推测作用机制可能是基于瑞巴派特在肠中诱导粘蛋白产生、抑制炎症和恢复上皮细胞紧密连接的功能的能力。这导致肠及其正常功能的恢复，引起肠壁通透性降低，这进而不允许不期望的外来物质正常通过身体，在身体中它们将触发导致α‑突触核蛋白错误折叠及其在肠神经系统中聚集的过程。由于这些聚集体通过迷走神经转移至脑导致路易体的出现和帕金森病的发作，通过使肠通透性正常化来防止它们的形成构成了一种在α‑突触核蛋白病治疗中有希望的策略，在开始时终止该病。[0010]因此，本发明提供用于预防和/或治疗突触核蛋白病的方法中的瑞巴派特。在一个优选的实施方案中，本发明提供了用于预防突触核蛋白病的方法中的瑞巴派特。突触核蛋白病是由形成路易体的α‑突触核蛋白聚集体引起的疾病。特别地，突触核蛋白病包括帕金森病、路易体痴呆和多系统萎缩。在一个优选的实施方案中，突触核蛋白病是帕金森病。[0011]如本文使用的“瑞巴派特”应当包括该活性成分的所有形式，例如无水形式、水合或溶剂化形式(例如，半水合物形式)、结晶形式；及其可药用盐。[0012]“预防”或“预防性治疗”在本文中应当理解为预防或延迟疾病的发生。[0013]“治疗”本文中应当理解为能够减缓、停止或逆转疾病的治疗。其还包括疾病症状的减轻或缓解，例如认知功能的改善。“减慢”疾病指减缓其进展，尽管不能完全停止或逆转它，而“终止”疾病指能够完全停止其进展。由于瑞巴派特阻断了进一步的α‑突触核蛋白聚集，似乎合理的是身体能够处理在治疗开始之前形成的路易体，因此导致帕金森病的部分或完全治愈。[0014]在一个方面，本发明提供通过向需要这种治疗的受试者施用药学有效剂量的瑞巴派特来预防和/或治疗突触核蛋白病(例如帕金森病)的方法。受试者优选是人类受试者，特别是患有肠通透性增加的人或处于肠通透性增加风险中的人。此外，本发明还包括瑞巴派特在制备用于预防和/或治疗突触核蛋白病(例如帕金森病)的药物中的用途，特别是在患有肠通透性增加的人中或在处于肠通透性增加的风险中的人中。[0015]在一个方面，本发明提供用于预防和/或治疗患有增加的肠通透性的人或处于增加的肠通透性风险中的人的突触核蛋白病的方法中的瑞巴派特，所述增加的肠通透性为例如由于家族既往病史引起的或由于暴露于诱导增加的肠通透性的条件或物质引起的。特别优选的是，瑞巴派特用于在患有肠通透性增加的人中或用于处于肠通透性增加风险的人中预防突触核蛋白病的方法中，尤其是预防帕金森病的方法中。[0016]在本发明的一个方面，提供用于在处于突触核蛋白病的初始或早期阶段并且患有增加的肠通透性或处于增加的肠通透性风险中的人中，减少突触核蛋白病的进展的治疗方法中使用的瑞巴派特。减少进展的治疗应当理解为延迟、减少或终止突触核蛋白病的进展。[0017]“增加的肠通透性”在本文中用作指小的肠壁缺陷的术语，包括由肠壁的亚临床慢性炎症(轻度炎症)引起的那些。这些肠壁缺陷可表现为例如慢性便秘或胃轻瘫。增加的肠通透性可以使用特殊试验例如乳果糖‑甘露醇试验(lamatest；e.g.,sequeirai.r.etal.(2014)plosone；9(6):e99256),a‑1‑at试验或zonulin试验来诊断。通常，增加的肠通透性是肠壁对半径尺寸大于4埃的颗粒的通透性。[0018]诱导增加的肠通透性的物质包括非甾体抗炎药(nsaid)，例如乙酰水杨酸、布洛芬、萘普生、酮洛芬、非诺洛芬、氟比洛芬、双氯芬酸、酮咯酸、依托度酸、吲哚美辛、托美丁、吡罗昔康、美洛昔康和选择性cox‑2抑制剂例如塞来考昔和艾托考昔；醇；烟碱；食品添加剂；抗生素；和化疗剂。因此，同时或连续共同施用瑞巴派特与非甾体抗炎药、化疗药或抗生素可以预防或延迟由施用这些药物引起的突触核蛋白病的发作。预防性使用瑞巴派特还可以用于滥用酒精、尼古丁或其它药物的人。如本文使用的术语“滥用”指包括不是由于医学原因必须的并导致依赖性和/或健康损害(包括低度肠壁炎症)的任何消耗。[0019]诱导增加的肠通透性的条件与应激、不平衡膳食、细菌、病毒或寄生虫感染和各种医学治疗有关。这样的条件特别地包括应激诱导的胃炎，食物中毒，胆酸、胃hcl和胃蛋白酶分泌失衡，非感染性腹泻，放疗，化疗，git粘膜的感染性或感染后损伤，微生物障碍(例如由抗生素治疗诱发的)。[0020]患有增加的肠通透性的人通常患有至少一种选自低度肠壁炎症、慢性便秘或胃轻瘫的病症。[0021]在本发明的一个方面，提供一种用于预防和/或治疗基本上没有突触核蛋白病的运动症状和/或脑脊液中基本上没有α‑突触核蛋白聚集体的人中的突触核蛋白病(例如帕金森病)的方法中使用的瑞巴派特。突触核蛋白病的运动症状是公知的，包括震颤、僵化、姿势不稳定和运动徐缓。术语“基本上没有α‑突触核蛋白聚集体”指在脑脊液样品中没有检测到α‑突触核蛋白聚集体，例如通过蛋白错误折叠循环扩增(pmca)方法，其是基于阳性样品接种重组α‑突触核蛋白聚集的能力。在另一个方面，待治疗的人是在肠神经系统(ens)中具有α‑突触核蛋白聚集体和/或患有至少一种选自低度肠壁炎症、慢性便秘或胃轻瘫的病症的人。ens中的α‑突触核蛋白聚集体可以通过各种方法检测，例如在胃肠活检样品上进行的免疫组织化学或pmca。[0022]在本发明所述的治疗适应症中，瑞巴派特可以优选地以口服药物形式使用，例如片剂、胶囊、锭剂、颗粒、微粒(小药囊)、口腔分散片或膜剂、舌下片、压碎片剂(crushedtablets)、口服溶液、口服混悬液、糖浆、漱口水、漱口液；或以直肠药物形式使用，例如栓剂和灌肠剂。优选地，口服药物形式如片剂、胶囊、锭剂和颗粒可以是具有肠释放的形式，例如肠缓释或肠控释形式。[0023]药物形式可以含有至少一种可药用赋形剂，选自填充剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、崩解剂/溶胀剂、增溶剂、肠释放剂、粘膜粘附组分、缓释剂、防腐剂、包衣和着色剂。这样的赋形剂是药物制剂领域中已知的，并且本领域技术人员能够选择用于相关药物形式的合适赋形剂。[0024]用于制备药物形式和组合物的合适方法包括活性成分与辅助物质和组分的湿法制粒或干法制粒，或活性成分与辅助物质和组分的直接均化的过程。[0025]填充剂优选地选自糖醇(例如，甘露醇、山梨醇、木糖醇)、乳糖、淀粉、预胶化淀粉、纤维素、硅化纤维素、磷酸氢钙、磷酸钙、蔗糖和硫酸钙。相对于组合物的总重量计，填充剂可以优选以5‑90wt％的量存在。[0026]粘合剂可以优选选自淀粉、预胶化淀粉、聚维酮、共聚维酮、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素、纤维素。相对于组合物的总重量计，粘合剂可以优选以1‑20重量％的量存在。[0027]润滑剂可以优选选自硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、聚乙二醇和硬脂酰富马酸钠。相对于组合物的总重量计，润滑剂可以优选以至多5wt％的量存在。助流剂可以优选选自二氧化硅、滑石和十二烷基硫酸钠。相对于组合物的总重量计，助流剂可以优选以0.5‑10wt％的量存在。溶胀剂和/或崩解剂可以优选选自交聚维酮、共聚维酮、聚维酮、交联羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、淀粉、预胶化淀粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠。相对于组合物的总重量计，溶胀剂/崩解剂可以优选以1‑50wt％的量存在。[0028]增溶剂可以优选选自泊洛沙姆、月桂基硫酸钠、聚山梨酯、聚氧乙烯化油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯和环糊精。相对于组合物的总重量计，增溶剂可以优选以至多30wt％的量存在。[0029]肠释放剂可以优选选自羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚(甲基丙烯酸‑共‑甲基丙烯酸甲酯)、邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚(乙酸乙烯邻苯二甲酸酯)、油桐酸酯。相对于组合物的总重量计，肠释放剂可以优选以2至40wt.％的量存在。[0030]粘膜粘附成分可优选选自藻酸丙二醇酯、藻酸钠、藻酸钙、藻酸钾、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸、聚环氧乙烷、聚维酮和共聚维酮。相对于组合物的总重量计，粘膜粘附组分可以优选以5至70wt.％的量存在。[0031]缓释释放剂可以优选选自纤维素和纤维素醚，例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、甲基纤维素、聚乙酸乙烯酯、海藻酸、藻酸丙二醇酯、藻酸钠、藻酸钙、藻酸钾、聚甲基丙烯酸酯、瓜尔胶、黄原胶、角叉菜胶、蓖麻油、蜂蜡、巴西棕榈蜡、棕榈酰硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、硬脂醇、聚丙烯酸。相对于组合物的总重量计，缓释释放剂可以优选以5至70wt.％的量存在。[0032]在一些实施方案中，口服药物组合物可以进一步包含在与胃液接触时能够形成二氧化碳的可药用组分，这样的组分可以优选选自碱金属和碱土金属的碳酸盐和碳酸氢盐；并且相对于组合物的总重量集，可以优选以1至50wt.％的量存在。[0033]瑞巴派特的典型日剂量可以是对于平均人(70kg体重)1‑5000mg，更优选50‑2500mg，甚至更优选100‑1000mg，最优选300‑500mg。当针对人的体重计算日剂量时，典型的剂量范围为15μg/kg/天至70mg/kg/天，更优选750μg/kg/天至35mg/kg/天，甚至更优选1.5mg/kg/天至15mg/kg/天，最优选4mg/kg/天至7mg/kg/天。当施用瑞巴派特的立即释放制剂时，日剂量通常分成分开施用的若干剂量。日剂量可以分成二至六个单独的剂量，每日两次或每日三次或每日四次或每日五次或每日六次服用。在一个优选的实施方案中，将日剂量分成每日三次施用的三个单独剂量，例如每日三次施用100mg剂量。或者，整个日剂量可以一次性服用，尤其是如果其为缓释制剂的形式，例如每日一次施用300mg剂量。[0034]实施本发明的实施例[0035]帕金森病(pd)是与脑中的基底神经节结构黑质(sn)中多巴胺能神经元的损失相关的神经变性病症。运动不能、震颤和僵化属于其典型但非特异性的症状。尽管存在各种诊断工具和方法，包括脑成像方法或功能试验，诊断证据是基于主要由“路易体”(lb)的死后发现所代表的特殊病征性微观解剖学变化(pathognomonicmicroanatomicalchanges)。lb是由α‑突触核蛋白组成的形成物，α‑突触核蛋白是一种被认为是pd发育中的关键元件之一的蛋白质。脑中改变的α‑突触核蛋白的积累和聚集与涉及线粒体功能障碍、氧化应激、营养因子的失调和多种神经炎性机制的进一步病理变化有关。因此，α‑突触核蛋白沉积物的发生可能伴随炎性标记物的增加，这在之前的动物研究中观察到。[0036]增加的肠通透性可能导致通常不能穿过肠壁的各种物质(例如细菌毒素和外源物)从肠渗漏到身体本身中，这可能触发肠壁中错误折叠的α‑突触核蛋白的合成及其经迷走神经(n.vagus)的向脑的转移。增加的肠通透性是由各种肠道炎症引起的上皮功能障碍的典型结果。因此，炎症过程的诱导可以用于疾病模型的设置。为了在动物中模拟这种情况，已经提出了β‑谷甾醇β‑d‑葡糖苷(bssg)模型，因为来源于苏铁科植物(cycad)种子的饮食神经毒素的消耗与人中的关岛型(guamanian)神经学疾病簇als‑帕金森痴呆复征(als‑pdc)有关。当喂食啮齿动物时，苏铁科植物粉末引发神经病学缺陷的进行性发展，其行为和细胞特征与在患者中观察到的非常接近。除了神经毒性特性之外，bssg直接与上皮相互作用。其通过提高细胞内钙水平来放松粘膜中的紧密连接，从而提高上皮的渗透性。[0037]在10个月期间进行的研究中使用雄性斯普拉格‑道利(spraguedawley)大鼠。在第1至4个月内，动物被给予由bssg组成的基线饮食，3mg/天，口服，每周5次剂量。将它们分成三组：a组‑施用瑞巴派特30mg/kg/天，在暴露于bssg之前4周在标准饲料之内经口施用，并且在第1个月至第10个月内施用；b组‑施用200mg/kg/天的瑞巴派特，在暴露于bssg之前4周在标准饲料中经口施用，并且在第1个月至第10个月内施用；和c组‑安慰剂，在暴露于bssg之前4周在标准饲料内经口施用；并且在第1个月至第4个月内施用。[0038]表1：总体研究计划[0039][0040][0041]观察参数：[0042]1.黑质溶解产物中错误折叠的α‑突触核蛋白的定量分析[0043]2.肠溶解产物中错误折叠的α‑突触核蛋白的定量分析[0044]3.嗅球溶解产物中错误折叠的α‑突触核蛋白的定量分析[0045]4.功能性运动试验[0046]5.功能性行为试验[0047]6.胃肠粘膜渗透性试验[0048]7.黑质中的炎症标记物(tnf‑α、il‑6等的水平)[0049]8.血清中的炎症标记物(tnf‑α、il‑6等的水平)[0050]9.嗅觉功能障碍试验[0051]10.视网膜试验[0052]11.死亡率[0053]第4个月的中期分析1研究神经变性疾病的进展：在体内嗅觉功能障碍试验之后，处死每个实验组中的动物亚组。进行α‑突触核蛋白的死后分析、嗅球、肠切片样品和血液样品中的炎性标记物的组织学分析。另外，进行胃肠粘膜的渗透性试验。[0054]第7个月的中期分析2研究神经变性疾病的进展：在体内试验(运动、协调和嗅觉试验)后，处死每个实验组中的动物亚组。进行α‑突触核蛋白的死后分析、sn神经元、嗅球、肠切片样品、脑切片或血液样品中的炎性标志物的组织学分析。另外，进行胃肠粘膜的渗透性试验。[0055]在第10个月的最终分析研究神经变性疾病的进展：在体内试验(运动、协调和认知)后，处死每个实验组中的动物亚组。进行α‑突触核蛋白的死后分析，sn神经元、嗅球和/或肠的组织学分析。另外，还测定了脑切片样品和血清中的炎症标记物如tnf‑α、il6等。[0056]从研究中获得的初步结果表明安慰剂和瑞巴派特治疗组之间有显著性差异。安慰剂处理的动物逐渐发展为运动和认知缺陷。嗅觉功能障碍是最早的行为缺陷，其可以早在第4个月观察到，并且持续到研究结束，甚至在终止暴露于bssg之后也没有恢复迹象。在第6个月左右出现运动损伤，并在研究过程中继续恶化。组织学分析显示在第4个月已经出现α‑突触核蛋白聚集体，并在随后的几个月中继续扩散到各种组织中。[0057]瑞巴派特处理的动物在包括功能试验测试的参数方面显示出显著的改善。有趣的是，与安慰剂组相比，α‑突触核蛋白聚集体也减少。[0058]为了评价瑞巴派特在帕金森病中的总体功效，计算累积pd得分。在分析中考虑以下加权参数：黑质溶解产物中错误折叠的α‑突触核蛋白的定量分析、肠溶解产物中错误折叠的α‑突触核蛋白的定量分析、嗅球溶解产物中错误折叠的α‑突触核蛋白的定量分析、功能性运动试验、功能行为试验、胃肠粘膜渗透性试验、黑质中的炎性标记(tnf‑α、il‑6等的水平)、血清中的炎性标记物(tnf‑α、il‑6等的水平)、嗅觉功能障碍试验、视网膜试验和死亡率。因此，累积的pd得分代表疾病的状态，其改善表明有效。[0059]瑞巴派特处理组中累积pd得分的结果与安慰剂组相比大于20％以上，其表明疾病控制的显著改善。可以得出结论，瑞巴派特抑制bssg中毒，推测是由于降低胃肠粘膜的渗透性，并因此预防或至少延迟与作为突触核蛋白病代表的帕金森病相对应的症状和标志物的发作。当前第1页12当前第1页12