小分子局部黏着斑激酶(FAK)抑制剂的制作方法

小分子局部黏着斑激酶(fak)抑制剂
1.相关申请的交叉引用
2.根据35 u.s.c.
§
119(e)，本技术要求2019年5月10日提交的美国临时申请号：62/845,998和2020年4月9日提交的美国临时申请号：63/007,542的优先权益，这两项申请的全部内容通过引用并入本文。


背景技术：

3.局部黏着斑激酶(fak)是一种非受体酪氨酸激酶，其定位于细胞与细胞外基质(ecm)的粘附位点，并介导ecm参与整合素的下游信号事件(van nimwegen et al.,biochem.pharmacol.73:597
‑
609(2007))。fak表达是许多正常细胞功能所必需的(parsons et al.,clin.cancer res.14:627
‑
632(2008))。fak经常在许多癌症类型中上调，并控制对恶性表型重要的多种功能，如粘附、运动、侵袭、增殖和存活(symeonides et al.,j.immunother.cancer 5:17(2017))。
4.编码fak的基因ptk2通常在许多癌症中扩增，包括卵巢癌、乳腺癌和胰腺癌(sulzmaier et al.,nat.rev.cancer 14:598
‑
610(2014))。在全球癌症筛查工作中已被确定为遗传依赖性(tsherniak et al.,cell 170:564
‑
576(2017))，并且结合fak抑制剂和免疫疗法的方案在临床前癌症模型中也显示出显著的反应(jiang et al.,nat.med.22:851
‑
860(2016))。因此，靶向抑制fak可能是一种针对多种癌症的有吸引力的治疗策略。


技术实现要素：

5.本发明的第一方面涉及由式(i)的结构表示的化合物:
[0006][0007]
其中：
[0008]
r1是氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环基或任选取代的杂环基；
[0009]
r2是氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环基或任选取代的杂环基；
[0010]
r3是氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环基或任选取代的杂环基；
[0011]
r4是任选取代的吡唑基、任选取代的吡啶基、任选取代的苯并哌啶基、
[0012]
每个r5独立地是h、oh、cn、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、氨基、酰基或酰胺；
[0013]
n是0、1或2；
[0014]
是任选取代的酰胺或任选取代的杂环；
[0015]
如果是任选取代的酰胺，则为不存在，并且如果是任选取代的杂环，则为不存在、任选取代的哌啶基或任选取代的哌嗪基；
[0016]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0017]
本发明的第二方面涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的式i的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，以及药学上可接受的载体。
[0018]
本发明的另一方面涉及一种治疗由异常(例如，失调)fak活性介导的癌症的方法，包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体。在一些实施方案中，所述疾病是胰腺癌、卵巢癌或肺癌。
[0019]
本发明的其他方面涉及制备这些化合物的方法。
[0020]
与已知的fak抑制剂相比，本发明的化合物对fak有效，并且具有更少的脱靶。如工作实施例中所述，在403种激酶的组中，本发明的化合物3(fak ic
50
62nm)在10μm浓度下仅与4种其他激酶结合，抑制率大于65％。
附图说明
[0021]
图1是treespot图，显示本发明的化合物3在>400种激酶范围内的高度选择性。
[0022]
图2是treespot图，显示本发明的化合物5在>400种激酶范围内的高度选择性。
具体实施方式
[0023]
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本文主题所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。如在说明书和所附权利要求中所使用的，除非有相反的说明，否则下列术语具有所示的含义，以便于理解本发明。
[0024]
如在说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代物，除非上下文另有明确规定。因此，例如，“一种组合物”包括两种或多种这种组合物的混合物，“一种抑制剂”包括两种或多种这种抑制剂的混合物，等等。
[0025]
除非另有说明，术语“大约”是指由术语“约”修饰的特定值的10％以内(例如，在5％、2％或1％之内)。
[0026]
与“包括”、“包含”或“特征在于”同义的过渡术语“包括”是包含性的或开放式的，并且不排除另外的、未记载的元素或方法步骤。相比之下，过渡短语“由...组成”排除了权利要求中未指定的任何元素、步骤或成分。过渡短语“基本上由...组成”将权利要求的范围限制为特定的材料或步骤“以及那些实质上不影响所要求保护的发明的基本和新颖特征的材料或步骤”。
[0027]
关于本发明的化合物，在以下术语在本文用于进一步描述它们的程度上，适用以下定义。
[0028]
如本文所用，术语“烷基”是指饱和的直链或支链单价烃基。在一个实施方案中，烷基是c1‑
c
18
基团。在其他实施方案中，烷基是c0‑
c6、c0‑
c5、c0‑
c3、c1‑
c
12
、c1‑
c8、c1‑
c6、c1‑
c5、c1‑
c4或c1‑
c3基团(其中c0烷基是指键)。烷基的例子包括甲基、乙基、1
‑
丙基、2
‑
丙基、1
‑
丙基、1
‑
丁基、2
‑
甲基
‑1‑
丙基、2
‑
丁基、2
‑
甲基
‑2‑
丙基、1
‑
戊基、正戊基、2
‑
戊基、3
‑
戊基、2
‑
甲基
‑2‑
丁基、3
‑
甲基
‑2‑
丁基、3
‑
甲基
‑1‑
丁基、2
‑
甲基
‑1‑
丁基、1
‑
己基、2
‑
己基、3
‑
己基、2
‑
甲基
‑2‑
戊基、3
‑
甲基
‑2‑
戊基、4
‑
甲基
‑2‑
戊基、3
‑
甲基
‑3‑
戊基、2
‑
甲基
‑3‑
戊基、2,3
‑
二甲基
‑2‑
丁基、3,3
‑
二甲基
‑2‑
丁基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基和十二烷基。在一些实施方案中，烷基是c1‑
c3烷基。
[0029]
如本文所用，术语“亚烷基”是指将分子的其余部分连接到基团上的直链或支链二价烃链，所述基团仅由碳和氢组成，不含不饱和键并且具有1至12个碳原子，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基等。亚烷基链可以通过单键连接到分子的其余部分，并通过单键连接到基团。在一些实施方案中，亚烷基包含1至8个碳原子(c1‑
c8亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含1至5个碳原子(c1‑
c5亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含1至4个碳原子(c1‑
c4亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含1至3个碳原子(c1‑
c3亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含1至2个碳原子(c1‑
c2亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含一个碳原子(c1亚烷基)。
[0030]
如本文所用，术语“环状基团”广义上指单独使用或作为更大部分的一部分使用的任何基团，包含饱和、部分饱和或芳环体系，例如碳环(环烷基、环烯基)、杂环(杂环烷基、杂环烯基)、芳基和杂芳基。环状基团可具有一个或多个(例如稠合的)环体系。因此，例如，环状基团可以包含一个或多个碳环、杂环、芳基或杂芳基。
[0031]
如本文所用，术语“碳环”(也称为“碳环基”)是指单独使用或作为较大部分的一部分使用的基团，其包含具有3至20个碳原子的饱和、部分不饱和或芳环体系，其单独或作为较大部分(例如，烷基碳环基团)的一部分。术语碳环基包括单环、双环、三环、稠环、桥环和螺环体系及其组合。在一个实施方案中，碳环基包括3至15个碳原子(c3‑
c
15
)。在一个实施方案中，碳环基包括3至12个碳原子(c3‑
c
12
)。在另一个实施方案中，碳环基包括c3‑
c8、c3‑
c
10
或c5‑
c
10
。在另一个实施方案中，碳环基作为单环，包括c3‑
c8、c3‑
c6或c5‑
c6。在一些实施方案中，碳环基作为双环，包括c7‑
c
12
。在另一个实施方案中，碳环基作为螺环体系，包括c5‑
c
12
。单环碳环基的代表性例子包括环丙基、环丁基、环戊基、1
‑
环戊基
‑1‑
烯基、1
‑
环戊基
‑2‑
烯基、1
‑
环戊基
‑3‑
烯基、环己基、全氘代环己基、1
‑
环己基
‑1‑
烯基、1
‑
环己基
‑2‑
烯基、1
‑
环己基
‑3‑
烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、苯基和环十二烷基；具有7至12个环原子的双环碳环基包括[4,3]、[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]环体系，例如双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷、萘和双环[3.2.2]壬烷。螺环碳环基的代表性例子包括螺环[2.2]戊烷、螺环[2.3]己烷、螺环[2.4]庚烷、螺环[2.5]辛烷和螺环[4.5]癸烷。术语碳环基包括本文定义的芳基环体系。术语碳环基也包括环烷基环(例如，饱和或部分不饱和的单、双或螺碳环)。术语碳环基团还包括与一个或多个(例如1、2或3个)不同的环状基团(例如芳基或杂环)稠合的碳环，其中基团或连接点在碳环环上。
[0032]
因此，术语碳环也包括碳环基烷基基团，如本文所用，其是指式
–
r
c
–
碳环基的基团，其中r
c
是亚烷基链。术语碳环也包括碳环基烷氧基基团，如本文所用，其指通过式
–
o
–
r
c
–
碳环基的氧原子键合的基团，其中r
c
是亚烷基链。
[0033]
如本文所用，术语“杂环基”是指“碳环基”，其单独使用或作为更大部分的一部分使用，包含饱和、部分不饱和或芳环体系，其中一个或多个(例如,1、2、3或4个)碳原子已经被杂原子(例如，o、n、n(o)、s、s(o)或s(o)2)取代。术语杂环基包括单环、双环、三环、稠环、桥环和螺环体系及其组合。在一些实施方案中，杂环基是指3至15元杂环基环体系。在一些实施方案中，杂环基是指3至12元杂环基环体系。在一些实施方案中，杂环基是指饱和环体系，例如3至12元饱和杂环基环体系。在一些实施方案中，杂环基是指杂芳基环体系，例如5至14元杂芳基环体系。术语杂环基也包括c3‑
c8杂环烷基，它是含有3
‑
8个碳和一个或多个(1、2、3或4个)杂原子的饱和或部分不饱和的单、双或螺环体系。
[0034]
在一些实施方案中，杂环基包括3
‑
12个环原子，并且包括单环、双环、三环和螺环体系，其中环原子是碳，1
‑
5个环原子是杂原子，例如氮、硫或氧。在一些实施方案中，杂环基包括具有一个或多个选自氮、硫或氧的杂原子的3
‑
至7
‑
元单环。在一些实施方案中，杂环基包括具有一个或多个选自氮、硫或氧的杂原子的4
‑
至6
‑
元单环。在一些实施方案中，杂环基包括3元单环。在一些实施方案中，杂环基包括4元单环。在一些实施方案中，杂环基包括5
‑
6元单环。在一些实施方案中，杂环基包括0至3个双键。在任一前述实施方案中，杂环基包括1、2、3或4个杂原子。任何氮或硫杂原子可以任选被氧化(例如，no、so、so2)，并且任何氮杂原子可以任选被季铵化(例如，[nr4]
+
cl
‑
、[nr4]
+
oh
‑
)。杂环基的代表性例子包括环氧乙烷基、氮杂环丙烷基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1,2
‑
二硫杂环丁烷基、1,3
‑
二硫杂环丁烷基、吡咯烷基、二氢
‑
1h
‑
吡咯基、二氢呋喃基、四氢吡喃基、二氢噻吩基、四氢噻吩基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,1
‑
二氧代
‑
硫代吗啉基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、六氢噻喃基、六氢嘧啶基、噁嗪烷基(oxazinanyl)、噻嗪基(thiazinanyl)、噻吨基(thioxanyl)、高哌嗪基(homopiperazinyl)、高哌啶基(homopiperidinyl)、氮杂环庚烷基(azepanyl)、氧杂环庚烷基(oxepanyl)、硫杂环庚烷基(thiepanyl)、氧杂吖庚因基(oxazepinyl)、氧杂氮杂环庚烷基(oxazepanyl)、二氮杂环庚烷基(diazepanyl)、1,4
‑
二氮杂环庚烷基、二氮杂环庚三烯基(diazepinyl)、硫氮杂环庚三烯基(thiazepinyl)、硫氮杂环庚烷基(thiazepanyl)、四氢硫代吡喃基、噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、1,1
‑
二氧硫代噻唑烷酮基、噁唑烷烷酮基、咪唑烷酮基、4,5,6,7
‑
四氢[2h]吲唑基、四氢苯并咪唑基、4,5,6,7
‑
四氢苯并[d]咪唑基、1,6
‑
二氢咪唑基[4,5
‑
d]吡咯并[2,3
‑
b]吡啶基、噻嗪基、噻吩基、噁嗪基、噻二嗪基、噁二嗪基、二噻嗪基、二噁嗪基、噁噻嗪基、噻三嗪基、噁三嗪基、二噻二嗪基、咪唑啉基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、1
‑
吡咯基、2
‑
吡咯基、3
‑
吡咯基、吲哚基、噻吡喃基、2h
‑
吡喃基、4h
‑
吡喃基、二氧杂蒽基、1,3
‑
二氧杂戊环基、吡唑啉基、吡唑烷基、二噻烷基、二硫杂蒽基、嘧啶壬基、嘧啶二壬基、嘧啶
‑
2,4
‑
二酮基、哌嗪壬基、哌嗪二壬基、吡唑烷基咪唑基、3
‑
氮杂双环[3.1.0]己基、3,6
‑
二氮杂双环[3.1.1]庚基、6
‑
氮杂双环[3.1.1]庚基、3
‑
氮杂双环[4.1.0]庚基、氮杂双环[2.2.2]己基、2
‑
氮杂双环[3.2.1]辛基、8
‑
氮杂双环[3.2.1]辛基、2
‑
氮杂双环[2.2.2]辛基、8
‑
氮杂双环[2.2.2]辛基、7
‑
氧杂双环[2.2.1]庚烷、氮杂螺环[3.5]壬基、氮杂螺环[2.5]辛基、氮杂螺环[4.5]癸基、1
‑
氮杂螺[4.5]癸烷
‑2‑
基、氮杂螺[5.5]十一烷基、四氢吲哚基、八氢吲哚基、四氢异吲哚基、四氢吲唑基、1,1
‑
二氧六环氢化吡喃基。含有硫或氧原子和1
‑
3个氮原子的5元杂环的例子是噻唑基，包括噻唑
‑2‑
基和噻唑
‑2‑
基氮氧化物，噻二唑基，包括1,3,4
‑
噻二唑
‑5‑
基和1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基，噁唑基，例如噁唑
‑2‑
基，和噁二唑基，例如1,3,4
‑
噁二唑
‑
5
‑
基，和1,2,4
‑
噁二唑
‑5‑
基。含有2
‑
4个氮原子的5元环杂环的例子包括咪唑基，如咪唑
‑2‑
基；三唑基，例如1,3,4
‑
三唑
‑5‑
基；1,2,3
‑
三唑
‑5‑
基、1,2,4
‑
三唑
‑5‑
基和四唑基，例如1h
‑
四唑
‑5‑
基。苯并稠合5元杂环基的代表性例子是苯并噁唑
‑2‑
基、苯并噻唑
‑2‑
基和苯并咪唑
‑2‑
基。6
‑
元杂环基的例子包括1
‑
3个氮原子和任选的硫或氧原子，例如吡啶基，如吡啶
‑2‑
基、吡啶
‑3‑
基和吡啶
‑4‑
基；嘧啶基，例如嘧啶
‑2‑
基和嘧啶
‑4‑
基；三嗪基，例如1,3,4
‑
三嗪
‑2‑
基和1,3,5
‑
三嗪
‑4‑
基；哒嗪基，特别是哒嗪
‑3‑
基和吡嗪基。吡啶氮氧化物和哒嗪氮氧化物以及吡啶基、嘧啶
‑2‑
基、嘧啶
‑4‑
基、哒嗪基和1,3,4
‑
三嗪
‑2‑
基是杂环基的其他例子。在一些实施方案中，杂环基团包括与一个或多个(例如，1、2或3个)不同的环状基团(例如，碳环或杂环)稠合的杂环，其中基团或连接点在杂环上，并且在一些实施方案中，其中连接点是杂环中包含的杂原子。
[0035]
因此，术语杂环包括氮杂环基，如本文所用，其指含有至少一个氮的杂环基，其中杂环基与分子其余部分的连接点是通过杂环基中的氮原子。氮杂环基的代表性例子包括1
‑
吗啉基、1
‑
哌啶基、1
‑
哌嗪基、1
‑
吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑啉基和咪唑烷基。术语杂环也包括c
‑
杂环基，如本文所用，它指含有至少一个杂原子的杂环基，其中杂环基与分子其余部分的连接点是通过杂环基中的碳原子。碳杂环基的代表性例子包括2
‑
吗啉基、2
‑
或3
‑
或4
‑
哌啶基、2
‑
哌嗪基和2
‑
或3
‑
吡咯烷基。术语杂环也包括杂环基烷基基团，如上所述，它是指式
‑
r
c
‑
杂环基的基团，其中r
c
是亚烷基链。术语杂环还包括杂环基烷氧基，如本文所用，其是指通过式
‑
o
‑
r
c
‑
杂环基的氧原子键合的基团，其中r
c
是亚烷基链。
[0036]
如本文所用，术语“芳基”单独使用或作为更大部分的一部分使用(例如，“芳烷基”，其中烷基上的末端碳原子是连接点，例如，苄基)、“芳烷氧基”，其中氧原子是连接点，或“芳氧基烷基”，其中连接点在芳基上，是指包括单环、双环或三环碳环体系的基团，其包括稠环，其中该体系中至少一个环是芳族的。在一些实施方案中，芳烷氧基是苯氧基。术语“芳基”可以与术语“芳基环”互换使用。在一个实施方案中，芳基包括具有6
‑
18个碳原子的基团。在另一个实施方案中，芳基包括具有6
‑
10个碳原子的基团。芳基的例子包括苯基、萘基、蒽基、联苯基、菲基、并四苯基、1,2,3,4
‑
四氢萘基、1h
‑
茚基、2,3
‑
二氢
‑
1h
‑
茚基、萘啶基等，它们可以被一个或多个本文所述的取代基取代或独立取代。一种特殊的芳基是苯基。在一些实施方案中，芳基包括与一个或多个(例如，1、2或3个)不同的环状基团(例如，碳环或杂环)稠合的芳基环，其中基团或连接点在芳基环上。
[0037]
因此，术语芳基包括芳烷基基团(例如,苄基)，如上所述，它是指式
‑
r
c
‑
芳基的基团，其中r
c
是亚烷基链，例如亚甲基或亚乙基。在一些实施方案中，芳烷基基团是任选取代的苄基。术语芳基也包括芳烷氧基基团，本文使用的芳烷氧基是指通过式
–
o
–
r
c
–
芳基的氧原子键合的基团，其中r
c
是亚烷基链，例如亚甲基或亚乙基。
[0038]
如本文所用，术语“杂芳基”单独使用或作为更大部分的一部分使用(例如,“杂芳基烷基”(也称为“杂芳烷基”)或“杂芳基烷氧基”(也称为“杂芳烷氧基”),是指具有5至14个环原子的单环、双环或三环环体系，其中至少一个环是芳族的并含有至少一个杂原子。在一个实施方案中，杂芳基包括5
‑
6元单环芳族基团，其中一个或多个环原子是氮、硫或氧。杂芳基基团的代表性例子包括噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、噻三唑基、噁三唑基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、四嗪基、四唑基[1,5
‑
b]哒嗪基、嘌呤基、去氮杂嘌呤基、苯并噁唑基、
苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并咪唑基、吲哚基、1,3
‑
噻唑
‑2‑
基、1,3,4
‑
三唑
‑5‑
基、1,3
‑
唑
‑2‑
基、1,3,4
‑
噁二唑
‑5‑
基、1,2,4
‑
噁二唑
‑5‑
基、1,3,4
‑
噻二唑
‑5‑
基、1h
‑
四唑
‑5‑
基、1,2,3
‑
三唑
‑5‑
基和吡啶
‑2‑
基氮氧化物。术语“杂芳基”还包括其中杂芳基稠合至一个或多个环状(例如碳环基或杂环基)环的基团,其中基团或连接点在杂芳基环上。非限制性的例子包括吲哚基、吲哚嗪基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并硫代苯基、亚甲二氧基苯基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并二氧杂唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4h
‑
喹啉基、咔唑基、吖啶基、苯并嗪基、吩噻嗪基、苯并噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3
‑
b]
‑
1,4
‑
噁嗪
‑
3(4h)
‑
酮。杂芳基可以是单环、双环或三环的。在一些实施方案中，杂芳基包括与一个或多个(例如1、2或3个)不同的环状基团(例如碳环或杂环)稠合的杂芳基环，其中基团或连接点在杂芳基环上，并且在一些实施方案中，其中连接点是杂环中包含的杂原子。
[0039]
因此，术语杂芳基包括n
‑
杂芳基，如本文所用，其是指如上定义的含有至少一个氮的杂芳基基团，其中杂芳基基团与分子其余部分的连接点是通过杂芳基基团中的氮原子。术语杂芳基也包括c
‑
杂芳基基团，如本文所用，指如上定义的杂芳基基团，并且其中杂芳基与分子其余部分的连接点是通过杂芳基基团中的碳原子。术语杂芳基也包括杂芳基烷基基团，如上文所公开的，其是指式
‑
r
c
‑
杂芳基的基团，其中r
c
是如上所定义的亚烷基链。术语杂芳基也包括杂芳烷氧基(或杂芳基烷氧基)基团，如本文所用，其指通过式
‑
o
‑
r
c
‑
杂芳基的氧原子键合的基团，其中r
c
是如上定义的亚烷基。
[0040]
本文所述的任何基团可以是取代的或未取代的。如本文所用，术语“取代的”广义上指所有允许的取代基，隐含的条件是此类取代是根据取代原子和取代基的允许化合价确定的，并且该取代产生稳定的化合物，即一种不会自发发生转化(如重排、环化、消除等)的化合物。代表性的取代基包括卤素、羟基和任何其它含有任意数量碳原子(例如，1
‑
14个碳原子)的有机基团，并且其可以包括一个或多个(例如，1、2、3或4)杂原子(例如氧、硫和氮)，以线性、支化或环状结构形式分组。
[0041]
取代基的代表性例子因此可以包括烷基、取代的烷基(例如，c1‑
c6、c1‑
c5、c1‑
c4、c1‑
c3、c1‑
c2、c1)、烷氧基(例如，c1‑
c6、c1‑
c5、c1‑
c4、c1‑
c3、c1‑
c2、c1)、取代的烷氧基(例如，c1‑
c6、c1‑
c5、c1‑
c4、c1‑
c3、c1‑
c2、c1)、卤代烷基(例如，cf3)、烯基(例如，c2‑
c6、c2‑
c5、c2‑
c4、c2‑
c3、c2)、取代的烯基(例如，c2‑
c6、c2‑
c5、c2‑
c4、c2‑
c3、c2)、炔基(例如，c2‑
c6、c2‑
c5、c2‑
c4、c2‑
c3、c2)、取代的炔基(例如，c2‑
c6、c2‑
c5、c2‑
c4、c2‑
c3、c2)、环(例如，c3‑
c
12
、c5‑
c6)、取代的环(例如，c3‑
c
12
、c5‑
c6)、碳环(例如，c3‑
c
12
、c5‑
c6)、取代的碳环(例如，c3‑
c
12
、c5‑
c6)、杂环(例如，c3‑
c
12
、c5‑
c6)、取代的杂环(例如，c3‑
c
12
、c5‑
c6)、芳基(例如，苄基和苯基)、取代的芳基(例如，取代的苄基或苯基)、杂芳基(例如，吡啶基或嘧啶基)、取代的杂芳基(例如，取代的吡啶基或嘧啶基)、芳烷基(例如，苄基)、取代的芳烷基(例如，取代的苄基)、卤素、羟基、芳氧基(例如，c6‑
c
12
、c6)、取代的芳氧基(例如，c6‑
c
12
、c6)、烷硫基(例如，c1‑
c6)、取代的烷硫基(例如，c1‑
c6)、芳硫基(例如，c6‑
c
12
、c6)、取代的芳硫基(例如，c6‑
c
12
、c6)、氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰氨基、取代的酰氨基、硫代、取代的硫代、亚磺酰基、取代的亚磺酰基、磺酰基、取代的磺酰基、亚磺酰亚胺、取代的亚磺酰亚胺、磺酰胺、取代的磺酰胺、脲、取代的脲、氨基甲酸酯、取代的氨基甲酸酯、氨基酸和肽基。
[0042]
广义而言，本发明的化合物由式i的结构表示:
[0043][0044]
其中：
[0045]
r1是氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环基或任选取代的杂环基；
[0046]
r2是氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环基或任选取代的杂环基；
[0047]
r3是氢、任选取代的烷基、任选取代的碳环基或任选取代的杂环基；
[0048]
r4是任选取代的吡唑基、任选取代的吡啶基、任选取代的苯并哌啶基、
[0049]
每个r5独立地是h、oh、cn、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、氨基、酰基或酰胺；
[0050]
n是0、1或2；
[0051]
是任选取代的酰胺或任选取代的杂环；
[0052]
如果是任选取代的酰胺，则为不存在，并且如果是任选取代的杂环，则为不存在、任选取代的哌啶基或任选取代的哌嗪基；
[0053]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0054]
在一些实施方案中，r4是任选取代的吡唑基，并且本发明的化合物具有由式(ia)表示的结构:
[0055][0056]
其中
[0057]
r6是h、烷基或烷氧基，
[0058]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0059]
在一些实施方案中，r4是任选取代的吡啶基，并且本发明的化合物具有由式(ib)表示的结构:
[0060][0061]
其中
[0062]
每个r7独立地是烷基、烷氧基或任选取代的杂环基；并且
[0063]
p是0、1或2，
[0064]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0065]
在一些实施方案中，r4是任选取代的苯并哌啶基，并且本发明的化合物具有由式(ic)表示的结构:
[0066][0067]
其中
[0068]
r8是h、烷基或烷氧基；
[0069]
x1代表nh或ch2；并且
[0070]
x2代表c＝o或nme；
[0071]
条件是当x1代表nh时，x2代表c＝o，和当x1代表ch2时，x2代表nme；
[0072]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0073]
在一些实施方案中，r4是并且本发明的化合物具有由式(id)表示的结构:
[0074][0075]
在一些实施方案中，是酰胺并且不存在，并且本发明的化合物具有由式(id1)表示的结构:
[0076][0077]
其中
[0078]
r9是c1‑
c6‑
烷基，
[0079]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0080]
在一些实施方案中，是任选取代的杂环并且不存在，并且本发明的化合物具有由式(id2)表示的结构:
[0081][0082]
在一些实施方案中，是任选取代的哌啶基，并且本发明的化合物具有由式(id2a)表示的结构:
[0083][0084]
r
10
是h、oh、c1‑
c6烷基、c1‑
c6烷氧基或卤素；
[0085]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0086]
在一些实施方案中，是哌嗪基，并且本发明的化合物具有由式(id2b)表示的结构:
[0087][0088]
r
11
是h、so2me或任选取代的c1‑
c4烷基；并且
[0089]
r
12
是h或c1‑
c6‑
烷基；
[0090]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0091]
在一些实施方案中，是任选取代的哌啶基，并且本发明的化合物具有由式(id2c)表示的结构:
[0092][0093]
r
10
是h、oh、c1‑
c6烷基、c1‑
c6烷氧基或卤素；并且
[0094]
r
11
是h、so2me或任选取代的c1‑
c4烷基；
[0095]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0096]
在一些实施方案中，是任选取代的杂环并且是哌嗪基，并且本发明的化合物具有由式(id3)表示的结构:
[0097][0098]
r
11
是h、so2me或任选取代的c1‑
c4烷基；并且
[0099]
r
12
是h或c1‑
c6‑
烷基；
[0100]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0101]
在一些实施方案中，是哌啶基并且是哌嗪基，并且本发明的化合物具有由式(id3a)表示的结构:
[0102][0103]
r
10
是h、c1‑
c6烷基、c1‑
c6烷氧基或卤素；
[0104]
r
11
是h、so2me或任选取代的c1‑
c4烷基；并且
[0105]
r
12
是h或c1‑
c6‑
烷基；
[0106]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0107]
在一些实施方案中，是哌嗪基并且是哌啶基，并且本发明的化合物具有由式(id3b)表示的结构:
[0108][0109]
r
10
是h、c1‑
c6烷基、c1‑
c6烷氧基或卤素；
[0110]
r
11
是h、so2me或任选取代的c1‑
c4烷基；并且
[0111]
r
12
是h或c1‑
c6‑
烷基；
[0112]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0113]
在一些实施方案中，r4是并且本发明的化合物具有由式(ie)表示的结构:
[0114][0115]
在一些实施方案中，是哌啶基并且是哌嗪基，并且本发明的化合物具有
由式(ie1)表示的结构:
[0116][0117]
r
10
是h、c1‑
c6烷基、c1‑
c6烷氧基或卤素；
[0118]
r
11
是h、so2me或任选取代的c1‑
c4烷基；并且
[0119]
r
12
是h或c1‑
c6‑
烷基；
[0120]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0121]
在一些实施方案中，是任选取代的杂环，并且被0
‑
4个独立地选自me、oh、的取代基取代。
[0122]
在一些实施方案中，r5是oh、cn、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、氨基、酰基或酰胺。
[0123]
在某些实施方案中，r5是me、ome、oet、n
‑
pr、och2cf3、、
[0124]
在一些实施方案中，r3是h、甲基、乙基、i
‑
pr、n
‑
pr或ch2cf3。
[0125]
在一些实施方案中，r2是h、甲基、乙基、i
‑
pr、ch2cf3或ph。
[0126]
在一些实施方案中，r1是h、甲基、乙基、i
‑
pr、n
‑
pr或ch2cf3。
[0127]
在某些实施方案中，r2和r3是甲基。在某些实施方案中，r1和r3是甲基。在某些实施方案中，r2和r3是甲基，并且r1是h。在其他实施方案中，r1、r2和r3各自是甲基。
[0128]
在一些实施方案中，r6是h或me。
[0129]
在一些实施方案中，r7是ome或
[0130]
在一些实施方案中，r8是h或ome。
[0131]
在一些实施方案中，任意式(i)(例如(ia)
‑
(ie))中的任意上述基团的任选取代基可以独立地是me、et、i
‑
pr、n
‑
pr、oh、ph、ome、oet、cf3、ch2cf3、och2cf3、
[0132]
在一些实施方案中，本发明的化合物由以下任意结构表示:
[0133]
[0134]
[0135]
[0136]
[0137]
[0138]
[0139]
[0140]
[0141]
[0142]
[0143]
[0144]
[0145]
[0146]
[0147]
[0148]
[0149]
[0150]
[0151]
[0152]
[0153]
[0154]
[0155]
[0156]
[0157]
[0158]
[0159]
[0160]
[0161]
或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0162]
本发明的化合物可以是游离酸或游离碱或药学上可接受的盐的形式。如本文所用，术语“药学上可接受的”是指一种材料，例如载体或稀释剂，其不会消除化合物的生物活性或性质，并且相对无毒，即，所述材料可以施用于受试者，而不会引起不希望的生物学效应(如头晕或胃部不适)或以有害的方式与包含它的组合物的任何组分相互作用。术语“药学上可接受的盐”是指通过本发明的化合物与合适的酸或碱反应获得的产物。本发明化合物的药学上可接受的盐的例子包括那些衍生自合适的无机碱如锂、钠、钾、钙、镁、铁、铜、铝、锌和锰盐的盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的例子是与无机酸形成的氨基的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘化物、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡聚糖盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、4
‑
甲基苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐等。本发明的某些化合物可以与各种有机碱如赖氨酸、精氨酸、胍、二乙醇胺或二甲双胍形成药学上可接受的盐。
[0163]
在一些实施方案中，所述化合物是同位素衍生物，因为它具有至少一个原子的期望的同位素取代，其取代度高于同位素的自然丰度，即，被富集。在一个实施方案中，该化合物包括氘或多个氘原子。用较重的同位素(例如氘(即2h))替代，可提供由于更高的代谢稳定性而产生的某些治疗优势，例如体内半衰期增加或剂量需求减少，因此在某些情况下可能是有利的。
[0164]
本发明的化合物可以具有至少一个手性中心，并因此可以是立体异构体的形式，如本文所用，其包括单个化合物的所有异构体，这些异构体的不同之处仅在于其原子在空间中的取向不同。术语立体异构体包括镜像异构体(包括化合物的(r
‑
)或(s
‑
)构型的对映异构体)、化合物的镜像异构体的混合物(对映异构体的物理混合物和外消旋物或外消旋混合物)、化合物的几何(顺式/反式或e/z，r/s)异构体和具有一个以上手性中心但彼此不是镜像的化合物的异构体(非对映异构体)。化合物的手性中心可能在体内发生差向异构化；因此，对于这些化合物来说，以(r
‑
)形式施用的化合物被认为等同于以(s
‑
)形式施用的化合物。因此，本发明的化合物可以以单独异构体的形式制备和使用，并且基本上不含其他异构体，或者以各种异构体的混合物的形式，例如，立体异构体的外消旋混合物。
[0165]
合成方法
[0166]
另一方面，本发明涉及制备式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体的方法。广义而言，本发明的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体可以通过任何已知适用于制备化学相关化合物的方法来制备。结合在各种工作实施例中描述的合成方案，将更好地理解本发明的化合物，这些合成方案说明了可以制备本发明的化合物的非限制性方法。
[0167]
药物组合物
[0168]
本发明的另一方面涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体，以及药学上可接受的载体。如本领域已知的，术语“药学上可接受的载体”是指适于向哺乳动物施用本发明化合物的药学上可接受的材料、组合物或媒介物。合适的载体可以包括，例如，液体(水性和非水性的，及其组合)、固体、封装材料、气体及其组合(例如，半固体)、和气体，其功能是将化合物从一个器官或身体的一部分运送或输送到另一个器官或身体的另一部分。载体是“可接受的”，意思是对制剂的其它成分呈生理惰性并与之相容，且对受试者或患者无害。根据制剂的类型，组合物也可以包括一种或多种药学上可接受的赋形剂。
[0169]
广义而言，式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体可根据常规制药实践如常规混合、溶解、制粒、制糖衣丸、磨细、乳化、胶囊化、包埋和压缩方法(参见，例如，remington:the science and practice of pharmacy(20th ed.),ed.a.r.gennaro,lippincott williams&wilkins,2000and encyclopedia of pharmaceutical technology,eds.j.swarbrick and j.c.boylan,1988
‑
1999,marcel dekker,new york)配制成给定类型的组合物。制剂的类型取决于施用方式，所述施用方式可以包括肠内(例如，口服、含服、舌下和直肠)、肠胃外(例如，皮下(s.c.)、静脉注射(i.v.)、肌内注射(i.m.)、和胸骨内注射、或输注技术、眼内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、透皮、真皮内、阴道内、腹膜内、粘膜、鼻腔、气管内滴注、支气管滴注和吸入)和局部(例如透皮)。一般来说，最合适的施用途径取决于多种因素，包括例如药剂的性质(例如，其在胃肠道环境中的稳定性)和/或受试者的状况(例如，受试者是否能够耐受口服给药)。例如，肠胃外的(例如，静脉内)施用也是有利的，因为例如在单剂量治疗和/或急性病症的情况下，化合物可以相对快速地施用。
[0170]
在一些实施方案中，所述化合物被配制用于口服或静脉施用(例如，全身静脉注射)。
[0171]
因此，式(i)的化合物可以配制成固体组合物(例如，粉末、片剂、可分散颗粒、胶囊、扁囊剂和栓剂)、液体组合物(例如，化合物溶解于其中的溶液、化合物固体颗粒分散于其中的悬浮液、乳液和含有脂质体、胶束或纳米颗粒的溶液、糖浆和酏剂)；半固体组合物(例如，凝胶、悬浮液和乳膏)；和气体(例如，气溶胶组合物的推进剂)。化合物也可以配制成用于快速、中间或延长释放。
[0172]
口服固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，活性化合物与载体(如柠檬酸钠或磷酸二钙)和另外的载体或赋形剂如a)填充剂或增量剂(如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸)，b)粘合剂(如甲基纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶)，c)湿润剂(如甘油)，d)崩解剂(如交联聚合物(例如，交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、淀粉乙醇酸钠、琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸
钠)，e)溶液阻滞剂(如石蜡)，f)吸收促进剂(如季铵化合物)，g)润湿剂(如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯)，h)吸收剂(如高岭土和膨润土)，和i)润滑剂(如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠)及其混合物混合。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可以包括缓冲剂。类似类型的固体组合物也可用作软和硬填充明胶胶囊中的填充剂，使用诸如乳糖或乳糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和壳(如肠溶衣和其它包衣)来制备。它们可以进一步包含遮光剂。
[0173]
在一些实施方案中，式(i)的化合物可以配制在硬或软明胶胶囊中。可以使用的代表性赋形剂包括预胶化淀粉、硬脂酸镁、甘露醇、硬脂酰富马酸钠、无水乳糖、微晶纤维素和交联羧甲基纤维素钠。明胶壳可以包括明胶、二氧化钛、氧化铁和着色剂。
[0174]
口服液体剂型包括溶液剂、混悬剂、乳剂、微乳剂、糖浆剂和酏剂。除了化合物之外，液体剂型可以包含本领域常用的水性或非水性载体(取决于化合物的溶解度)，例如水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3
‑
丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。口服组合物还可包括赋形剂，如润湿剂、悬浮剂、着色剂、甜味剂、调味剂和加香剂。
[0175]
用于肠胃外施用的注射制剂可包括无菌水溶液或油质悬浮液。它们可以根据标准技术使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液、悬浮液或乳剂，例如在1,3
‑
丁二醇中的溶液。可接受的载体和溶剂包括水、林格氏溶液、u.s.p.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成甘油一酯或甘油二酯。此外，脂肪酸(如油酸)用于制备注射剂。可注射制剂可被灭菌，例如，通过细菌保留过滤器过滤，或通过以无菌固体组合物的形式掺入灭菌剂，其可在使用前溶解或分散在无菌水或其它无菌注射介质中。该化合物的效果可以通过减缓其吸收来延长，这可以通过使用水溶性差的液体悬浮液或结晶或无定形材料来实现。该化合物从肠胃外施用制剂中的延长吸收也可以通过将该化合物悬浮在油性载体中来实现。
[0176]
在某些实施方案中，式(i)的化合物可以以局部而非全身的方式施用，例如，通过将缀合物直接注射到器官中，通常以贮库制剂或持续释放制剂的形式。在具体实施方案中，长效制剂通过植入(例如皮下或肌内)或肌内注射施用。可注射贮库形式是通过在可生物降解的聚合物中形成该化合物的微胶囊基质来制备的，所述可生物降解的聚合物例如，聚交酯
‑
聚乙交酯、聚(原酸酯)和聚(酸酐)。化合物的释放速率可以通过改变化合物与聚合物的比例和所用特定聚合物的性质来控制。可注射贮库制剂也是通过将化合物包裹在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备的。此外，在其他实施方案中，化合物在靶向药物递送系统中递送，例如在涂有器官特异性抗体的脂质体中。在这样的实施方案中，脂质体靶向器官并被器官选择性吸收。
[0177]
所述成分可以配制成用于颊内或舌下施用，其例子包括片剂、锭剂和凝胶。
[0178]
式(i)的化合物可以配制成用于吸入施用。适于吸入施用的各种形式包括气溶胶、薄雾或粉末。药物组合物可以通过使用合适的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体)，以气雾剂形式，从加压包装或喷雾器中递送。在一些实施方案中，加压气雾剂的剂量单位可以通过提供阀门以递送经计量的量来确定。在
一些实施方案中，例如用于吸入器或吹入器的包含明胶的胶囊和药筒(cartridge)可以被配制成包含化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
[0179]
式(i)的化合物可配制成用于局部施用，如本文所用，其是指通过本发明的制剂对表皮进行皮内施用。这些类型的组合物通常是软膏、糊剂、乳膏、洗液、凝胶、溶液和喷雾剂的形式。
[0180]
用于配制局部应用的化合物的载体的代表性例子包括溶剂(例如，醇、多元醇、水)、乳膏、洗液、软膏、油、膏药、脂质体、粉末、乳液、微乳液和缓冲溶液(例如，低渗或缓冲盐水)。乳膏，例如，可以使用饱和或不饱和脂肪酸(如硬脂酸、棕榈酸、油酸、棕榈油酸、鲸蜡醇或油醇)来配制。乳膏也可以含有非离子表面活性剂，如聚氧乙烯(40)硬脂酸酯。
[0181]
在一些实施方案中，局部制剂还可以包括赋形剂，其一个例子是渗透增强剂。这些药剂能够将药理活性化合物输送通过角质层并进入表皮或真皮，优选地，具有很少或没有全身吸收。已经评价了多种化合物在提高药物渗透过皮肤的速率方面的效力。参见，例如，percutaneous penetration enhancers,maibach h.i.and smith h.e.(eds.),crc press,inc.,boca raton,fla.(1995)，其调查了各种皮肤渗透增强剂的使用和测试，以及buyuktimkin et al.,chemical means of transdermal drug permeation enhancement in transdermal and topical drug delivery systems,gosh t.k.,pfister w.r.,yum s.i.(eds.),interpharm press inc.,buffalo grove,ill.(1997)。渗透增强剂的代表性例子包括甘油三酯(例如，大豆油)、芦荟组合物(例如，芦荟凝胶)、乙醇、异丙醇、十八烷基苯基聚乙二醇、油酸、聚乙二醇400、丙二醇、n
‑
癸基甲基亚砜、脂肪酸酯(例如，肉豆蔻酸异丙酯、月桂酸甲酯、甘油单油酸酯和丙二醇单油酸酯)和n
‑
甲基吡咯烷酮。
[0182]
可以包含在局部制剂以及其他类型制剂中的其他赋形剂的代表性例子(在它们相容的程度上)包括防腐剂、抗氧化剂、保湿剂、润肤剂、缓冲剂、增溶剂、皮肤保护剂和表面活性剂。合适的防腐剂包括醇、季胺、有机酸、对羟基苯甲酸酯和酚类。合适的抗氧化剂包括抗坏血酸及其酯、亚硫酸氢钠、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基茴香醚、生育酚和螯合剂如乙二胺四乙酸和柠檬酸。合适的保湿剂包括甘油、山梨醇、聚乙二醇、尿素和丙二醇。合适的缓冲剂包括柠檬酸、盐酸和乳酸缓冲剂。合适的增溶剂包括季铵氯化物、环糊精、苯甲酸苄酯、卵磷脂和聚山梨醇酯。合适的皮肤保护剂包括维生素e油、尿囊素(allatoin)、二甲基硅油、甘油、凡士林和氧化锌。
[0183]
透皮制剂通常采用透皮施用装置和透皮施用贴片，其中化合物被配制成亲脂性乳液或缓冲水溶液，溶解和/或分散在聚合物或粘合剂中。贴片可以构造成用于连续、脉动式(pulsatile)或按需递送药剂。化合物的透皮递送可以通过离子电渗贴片来完成。透皮贴片可以提供化合物的受控递送，其中通过使用速率控制膜或通过将化合物捕获在聚合物基质或凝胶中来减缓吸收速率。吸收增强剂可用于增加吸收，其例子包括可吸收的药学上可接受的溶剂，其有助于通过皮肤。
[0184]
眼科制剂包括滴眼剂。
[0185]
用于直肠施用的制剂包括灌肠剂、直肠凝胶、直肠泡沫、直肠气雾剂和滞留灌肠剂，其可包含常规栓剂基质(如可可脂或其他甘油酯)，以及合成聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇)等。用于直肠或阴道施用的组合物也可以配制成栓剂，其可以通过将化合物与合适的非刺激性载体和赋形剂(如可可脂、脂肪酸甘油酯的混合物、聚乙二醇、栓剂蜡及
其组合)混合来制备，所有这些物质在环境温度下是固体，但在体温下是液体，因此在直肠或阴道腔中熔化并释放化合物。
[0186]
剂量
[0187]
如本文所用，术语“治疗有效量”是指式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体；或包含式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体的组合物的量，该量能有效地在患有由异常fak介导的疾病或病症的特定患者中产生所需的治疗反应。术语“治疗有效量”因此包括本发明化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体的量，当施用时，该量能诱导待治疗的疾病或病症的积极改变，或足以防止疾病或病症的发展或进展，或在某种程度上减轻受试者中正在治疗的疾病或病症的一种或多种症状，或仅杀死或抑制患病(例如癌症)细胞的生长，或减少患病细胞中fak的量。
[0188]
所述化合物的总日剂量及其用法可根据标准医学实践决定，例如，由主治医师运用合理的医学判断。任何特定受试者的具体的治疗有效剂量可取决于多种因素，包括所治疗的疾病或病症及其严重程度(例如，其现状)；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所用特定化合物的施用时间、施用途径和排泄速率；治疗的持续时间；与该化合物组合或同时使用的药物；以及医学领域众所周知的因素(参见，例如，goodman and gilman's,the pharmacological basis of therapeutics,10th edition,a.gilman,j.hardman and l.limbird,eds.,mcgraw
‑
hill press,155
‑
173,2001)。
[0189]
式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体可在宽剂量范围内有效。在一些实施方案中，总日剂量(例如，对于成年人来说)可以在约0.001至约1600mg、0.01至约1600mg、0.01至约500mg、约0.01至约100mg、约0.5至约100mg、1至约100
‑
400mg每天、约1至约50mg每天、约5至约40mg每天的范围内，或在其他实施方案中，为约10至约30mg每天。在一些实施例中，总日剂量可以在400mg至600mg的范围内。根据化合物每天施用的次数，可以将单个剂量配制成包含所需的剂量。举例来说，胶囊可以用约1至约200mg的化合物(例如1、2、2.5、3、4、5、10、15、20、25、50、100、150和200mg)配制。在一些实施方案中，根据化合物每天施用的次数，可以将单个剂量配制成包含所需的剂量。
[0190]
使用方法
[0191]
在一些方面，本发明涉及治疗涉及异常(例如，功能异常或失调)的fak活性的疾病或病症的方法，其需要向有此需要的受试者施用治疗有效量的式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或立体异构体。
[0192]
疾病或病症可以说是由异常fak活性(例如，相对于非病理状态的蛋白质水平升高或功能异常)表征或介导的。“疾病”通常被认为是受试者的健康状况，其中受试者不能保持体内平衡，并且其中如果疾病没有改善，则受试者的健康继续恶化。相比之下，受试者的“病症”是指受试者能够保持体内平衡，但受试者的健康状况不如没有病症时的健康状况好的健康状况。如果不治疗，病症不一定会导致受试者健康状况的进一步下降。在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗细胞增殖性疾病和病症(例如，癌症或良性肿瘤)。如本文所用，术语“细胞增殖性疾病或病症”是指以细胞生长失调或异常或两者兼有为特征的病况，包括非癌性疾病如肿瘤、癌前疾病、良性肿瘤和癌症。
[0193]
本文使用的术语“受试者”(或“患者”)包括动物王国中易患或患有所述疾病或病症的所有成员。在一些实施方案中，受试者是哺乳动物，例如，人类或非人类哺乳动物。这些
方法也适用于伴侣动物，如狗和猫，以及家畜，如牛、马、绵羊、山羊、猪和其他家养和野生动物。根据本发明“需要”治疗的受试者可能“患有或疑似患有”特定疾病或病症，受试者可能已被确诊或以其他方式呈现有足够数量的风险因素或足够数量或组合的体征或症状，使得医学专业人员可以诊断或怀疑该受试者患有该疾病或病症。因此，患有和疑似患有特定疾病或病症的受试者不一定是两个不同的群体。
[0194]
在一些实施方案中，该方法针对治疗患有癌症的受试者。概括地说，本发明的化合物可有效治疗癌(实体瘤，包括原发性和转移性肿瘤)、肉瘤、黑素瘤和血液学癌症(影响血液(包括淋巴细胞、骨髓和/或淋巴结)的癌症))，如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。包括成人肿瘤/癌症和儿童肿瘤/癌症。癌症可以是血管化的，或者还没有实质上血管化的，或者是非血管化的肿瘤。
[0195]
癌症的代表性例子包括肾上腺皮质癌、aids相关性癌症(例如，卡波西氏和aids相关的淋巴瘤)、阑尾癌、儿童癌(例如，儿童小脑星形细胞瘤、儿童脑星形细胞瘤)、基底细胞癌、皮肤癌(非黑色素瘤)、胆管癌、肝外胆管癌、肝内胆管癌、膀胱癌、尿膀胱癌、脑癌(例如，胶质瘤和胶质母细胞瘤(如脑干胶质瘤、妊娠滋养细胞肿瘤胶质瘤、小脑星形细胞瘤、脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始神经外胚瘤、视觉通路和下丘脑胶质瘤)、乳腺癌、支气管腺瘤/类癌、类癌瘤、神经系统癌(例如，中枢神经系统癌症、中枢神经系统淋巴瘤)、宫颈癌、慢性骨髓增生性疾病、结肠直肠癌(例如，结肠癌、直肠癌)、淋巴肿瘤、蕈样真菌病、sezary综合征、子宫内膜癌、食道癌、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞瘤、肝外胆管癌、眼癌、眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃肠癌(例如，胃癌、小肠癌、胃肠道类癌、胃肠道间质瘤(gist))、胆管癌、生殖细胞瘤、卵巢生殖细胞瘤、头颈癌、神经内分泌肿瘤、霍奇金淋巴瘤、ann arbor iii期和iv期儿童非霍奇金淋巴瘤、ros1阳性难治性非霍奇金淋巴瘤、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、眼癌、胰岛细胞瘤(内分泌胰腺)、肾癌(例如，肾母细胞瘤、肾细胞癌)、肝癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、细胞alk阳性间变性大淋巴瘤、alk阳性晚期恶性实体肿瘤、waldenstrom氏巨球蛋白瘤、黑色素瘤、眼内(眼)黑色素瘤、默克尔细胞癌、间皮瘤、伴隐匿性原发性转移性鳞状颈癌、多发性内分泌瘤(men)、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性疾病、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌(例如，口腔癌、唇癌、口腔癌、舌癌、口咽癌、喉癌、咽癌)、卵巢癌(例如，卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞瘤、卵巢低恶性潜能肿瘤)、胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、副鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、鼻咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体母细胞瘤、转移性未分化甲状腺癌、未分化甲状腺癌、甲状腺乳头状癌、垂体肿瘤、浆细胞瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、子宫癌(例如，子宫内膜癌、子宫肉瘤、子宫体癌)、鳞状细胞癌、睾丸癌、胸腺瘤、胸腺癌、甲状腺癌、青少年黄色肉芽肿、肾盂和输尿管及其他泌尿器官的移行细胞癌、尿道癌、妊娠滋养细胞肿瘤、阴道癌、外阴癌、肝母细胞瘤、横纹肌样瘤和肾母细胞瘤。
[0196]
可用本发明化合物治疗的肉瘤包括软组织癌和骨癌，其代表性例子包括骨肉瘤或成骨性肉瘤(骨)(例如，尤因氏肉瘤)、软骨肉瘤(软骨)、平滑肌肉瘤(平滑肌)、横纹肌肉瘤(骨骼肌)、间皮肉瘤或间皮瘤(体腔的膜性内层)、纤维肉瘤(纤维组织)、血管肉瘤或血管内皮瘤(血管)、脂肪肉瘤(脂肪组织)、神经胶质瘤或星形细胞瘤(发现于大脑中的神经源性结缔组织)、粘液肉瘤(原始胚胎结缔组织)、和间叶或混合中胚叶肿瘤(混合结缔组织类型)和
组织细胞肉瘤(免疫癌)。
[0197]
在一些实施方案中本发明的方法能够治疗患有血液系统、肝、脑、肺、结肠、胰腺、前列腺、皮肤、卵巢、乳房、皮肤和子宫内膜的细胞增殖性疾病或病症的受试者。
[0198]
如本文所用，“血液系统的细胞增殖性疾病或病症”包括淋巴瘤、白血病、髓样肿瘤、肥大细胞肿瘤、骨髓发育不良、良性单克隆丙种球蛋白病、淋巴瘤样丘疹病、真性红细胞增多症、慢性髓细胞白血病、特发性髓样化生、和原发性血小板增多症。因此，血液学癌症的代表性例子可以包括多发性骨髓瘤、淋巴瘤(包括t细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、滤泡性淋巴瘤(fl)、套细胞淋巴瘤(mcl)和alk+间变性大细胞淋巴瘤(例如，选自弥漫性大b细胞淋巴瘤的b细胞非霍奇金淋巴瘤(例如，生发中心b细胞样弥漫性大b细胞淋巴瘤或活化b细胞样弥漫性大b细胞淋巴瘤)、伯基特淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤/waldenstrom巨球蛋白血症、转移性胰腺癌、难治性b细胞非霍奇金淋巴瘤、和复发的b细胞非霍奇金淋巴瘤、儿童淋巴瘤以及淋巴细胞和皮肤来源的淋巴瘤，例如，小淋巴细胞淋巴瘤、白血病(包括儿童白血病)、毛细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞白血病、急性髓细胞白血病(例如，急性单核细胞白血病)、慢性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性髓细胞白血病和肥大细胞白血病、髓样肿瘤和肥大细胞肿瘤。
[0199]
如本文所用，“肝脏的细胞增殖性疾病或病症”包括影响肝脏的所有形式的细胞增殖性病症。肝脏的细胞增殖性病症可以包括肝癌(例如，肝细胞癌、肝内胆管细胞癌和肝母细胞瘤)、肝脏的癌前或癌前期病况、肝脏的良性生长或病变、肝脏的恶性生长或病变以及除肝脏以外的体内组织和器官的转移性病变。肝脏的细胞增殖性病症可能包括肝脏的增生、化生和发育不良。
[0200]
如本文所用，“脑的细胞增殖性疾病或病症”包括影响脑的所有形式的细胞增殖性病症。大脑的细胞增殖性病症可以包括脑癌(例如，胶质细胞瘤、胶质母细胞瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤和原始神经外胚层肿瘤(髓母细胞瘤))、脑的癌前或癌前期病况、脑的良性生长或病况、脑的恶性生长或病变以及除脑以外的身体组织和器官的转移性病变。大脑的细胞增殖性病症可能包括大脑的增生、化生和发育不良。
[0201]
如本文所用，“肺的细胞增殖性疾病或病症”包括影响肺细胞的所有形式的细胞增殖性病症。肺的细胞增殖性病症包括肺癌、肺的癌前和癌前期病况、肺的良性生长或病变、肺的增生、化生和发育不良以及除肺以外的身体组织和器官的转移性病变。肺癌包括所有形式的肺的癌症，例如，恶性肺肿瘤、原位癌、典型类癌瘤和非典型类癌瘤。肺癌包括小细胞肺癌(“slcl”)、非小细胞肺癌(“nsclc”)、腺癌、小细胞癌、大细胞癌、鳞状细胞癌和间皮瘤。肺癌可包括“疤痕癌”、细支气管癌、巨细胞癌、梭形细胞癌和大细胞神经内分泌癌。肺癌还包括具有组织学和超微结构异质性的肺肿瘤(例如，混合细胞类型)。在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗非转移性或转移性肺癌(例如，nsclc、alk阳性nsclc、含有ros1重排的nsclc、肺腺癌和鳞状细胞肺癌)。
[0202]
如本文所用，“结肠的细胞增殖性疾病或病症”包括影响结肠细胞的所有形式的细胞增殖性病症，包括结肠癌、结肠癌前或癌前期病况、结肠腺瘤性息肉和结肠异时病变。结肠癌包括散发性和遗传性结肠癌、恶性结肠瘤、原位癌、典型类癌瘤和非典型类癌瘤、腺癌、
鳞状细胞癌和鳞状细胞癌。结肠癌可能与遗传性综合征有关，如遗传性非息肉病性结肠直肠癌、常见的腺瘤性息肉病、myh相关的息肉病、gardner氏综合征、peutz
‑
jeghers综合征、turcot氏综合征和青少年息肉病。结肠的细胞增殖性病症也可以以结肠的增生、化生或发育不良为特征。
[0203]
如本文所用，“胰腺的细胞增殖性疾病或病症”包括影响胰腺细胞的所有形式的细胞增殖性病症。胰腺的细胞增殖性疾病可包括胰腺癌、胰腺的癌前或癌前期病症、胰腺的增生、胰腺的发育不良、胰腺的良性生长或病变、胰腺的恶性生长或病变以及除胰腺之外的身体组织和器官的转移性病变。胰腺癌包括所有形式的胰腺癌，包括导管腺癌、腺鳞癌、多形性巨细胞癌、粘液腺癌、破骨细胞样巨细胞癌、粘液性囊腺癌、腺泡癌、未分类的大细胞癌、小细胞癌、胰腺母细胞瘤、乳头状肿瘤、粘液性囊腺瘤、乳头状囊性肿瘤和浆液性囊腺瘤，以及具有组织学和超微结构异质性的胰腺肿瘤(例如，混合细胞)。
[0204]
如本文所用，“前列腺的细胞增殖性疾病或病症”包括影响前列腺的所有形式的细胞增殖性病症。前列腺的细胞增殖性病症可包括前列腺癌、前列腺的癌前或癌前期病况、前列腺的良性生长或病变、前列腺的恶性生长或病变，以及除前列腺之外的体内组织和器官的转移性病变。前列腺细胞增生性疾病可能包括前列腺增生、化生和发育不良。
[0205]
如本文所用，“卵巢的细胞增殖性疾病或病症”包括影响卵巢细胞的所有形式的细胞增殖性病症。卵巢的细胞增殖性病症可包括卵巢的癌前或癌前期病况、卵巢的良性生长或病变、卵巢癌以及除卵巢之外的体内组织和器官的转移性病变。卵巢的细胞增殖性病症可能包括卵巢增生、化生和发育不良。
[0206]
如本文所用，“乳腺的细胞增殖性疾病或病症”包括影响乳腺细胞的所有形式的细胞增殖性病症。乳腺的细胞增殖性病症可以包括乳腺癌、乳腺的癌前或癌前期病况、乳腺的良性生长或病变以及除乳腺之外的身体组织和器官中的转移性病变。乳腺的细胞增殖性病症可能包括乳腺增生、化生和发育不良。
[0207]
如本文所用，“皮肤的细胞增殖性疾病或病症”包括影响皮肤细胞的所有形式的细胞增殖性病症。皮肤的细胞增殖性病症可以包括皮肤的癌前或癌前期病况、皮肤的良性生长或病变、黑色素瘤、恶性黑色素瘤或皮肤的其他恶性生长或病变，以及除皮肤之外的身体组织和器官中的转移性病变。皮肤的细胞增殖性病症可能包括皮肤增生、化生和发育不良。
[0208]
如本文所用，“子宫内膜的细胞增殖性疾病或病症”包括影响子宫内膜细胞的所有形式的细胞增殖性病症。子宫内膜的细胞增殖性病症可包括子宫内膜的癌前或癌前期病况、子宫内膜的良性生长或病变、子宫内膜癌以及除子宫内膜之外的体内组织和器官的转移性病变。子宫内膜的细胞增殖性病症可能包括子宫内膜的增生、化生和发育不良。
[0209]
式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体可施用于患者，例如，癌症患者，作为单一疗法或通过联合疗法。治疗可以是“前/一线”，即，作为没有接受过先前抗癌治疗方案的患者的初始治疗，单独或与其他治疗组合；或“二线”，作为对已经经历过先前抗癌治疗方案的患者的治疗，单独或与其它治疗组合；或作为“三线”、“四线”等治疗，单独治疗或与其他治疗联合治疗。治疗也可以给予那些先前治疗不成功或部分成功但对特定治疗变得不耐受的患者。也可以作为辅助治疗来给予治疗，即，以在当前未检测到疾病的患者中或在手术切除肿瘤之后防止癌症的再次发生。因此，在一些实施方案中，所述化合物可以给予已经接受过先前治疗(例如化疗、放射免疫治疗、外科治疗、免疫治疗、放射治疗、靶向治疗
或其任意组合)的患者。
[0210]
本发明的方法可能需要以单剂量或多剂量(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、10、15、20或更多剂量)向患者施用式(i)的化合物或其药物组合物。例如，施用频率可以从每天一次到大约每八周一次。在一些实施方案中，施用的频率范围约为每天一次，持续1、2、3、4、5或6周，在其他实施方案中需要28天的周期，其包括3周(21天)的每天施用，然后是7天的休息期。在其他实施方案中，所述化合物可以在两天半的过程中每天给药两次(bid)(总共5次剂量)，或者在两天的过程中每天施用一次(qd)(总共2次剂量)。在其他实施方案中，所述化合物可以在5天内每天施用一次(qd)。
[0211]
组合疗法
[0212]
式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和立体异构体可以与至少一种其它活性剂(例如，抗癌剂)或疗法组合或同时使用，用于治疗疾病和病症。术语“组合”和“同时”在本文中是指药剂共同施用，其包括基本上同时施用，通过相同或单独的剂型，和通过相同或不同的施用模式，或顺序施用，例如，作为相同治疗方案的一部分，或者通过连续治疗方案。因此，如果连续施用，在开始施用第二种化合物时，在某些情况下，两种化合物中的第一种仍可以在治疗部位以有效浓度检测到。可以确定顺序和时间间隔，使得它们可以一起起作用(例如，协同作用)以提供比以其他方式施用时增加的益处。例如，可以同时施用或在不同的时间点以任何顺序依次施用治疗剂；然而，如果不同时施用，它们可以在足够接近的时间内施用，以提供期望的治疗效果，这可以是协同方式。因此，这些术语不限于在完全相同的时间施用活性剂。
[0213]
在一些实施方案中，治疗方案可包括将式(i)的化合物与一种或多种已知用于治疗疾病或病况(例如癌症)的其他治疗剂组合施用。另外的抗癌治疗剂的剂量可以与已知或推荐的剂量相同或甚至更低。参见，hardman et al.,eds.,goodman&gilman's the pharmacological basis of basis of therapeutics,10th ed.,mcgraw
‑
hill,new york,2001；physician's desk reference,60th ed.,2006。例如，适于与本发明化合物结合使用的抗癌剂是本领域已知的。参见，例如，美国专利9,101,622(其中第5.2节)和美国专利9,345,705b2(其中第12
‑
18栏)。另外的活性剂和治疗方案的代表性例子包括放射疗法、化学疗法(例如，有丝分裂抑制剂、血管生成抑制剂、抗激素、自噬抑制剂、烷化剂、嵌入抗生素(intercalating antibiotics)、生长因子抑制剂、抗雄激素、信号转导途径抑制剂、抗微管剂、铂配位络合物、hdac抑制剂、蛋白酶体抑制剂和拓扑异构酶抑制剂)、免疫调节剂、治疗性抗体(例如，单特异性和双特异性抗体)和car
‑
t疗法。
[0214]
在一些实施方案中，式(i)的化合物和另外的(例如抗癌)治疗剂可以间隔小于5分钟、间隔小于30分钟、间隔小于1小时、间隔约1小时、间隔约1至约2小时、间隔约2小时至约3小时、间隔约3小时至约4小时、间隔约4小时至约5小时，间隔约5小时至约6小时，间隔约6小时至约7小时，间隔约7小时至约8小时，间隔约8小时至约9小时，间隔约9小时至约10小时，间隔约10小时至约11小时，间隔约11小时至约12小时，间隔约12小时至18小时，间隔18小时至24小时，间隔24小时至36小时，间隔36小时至48小时，间隔48小时至52小时，间隔52小时至60小时，间隔60小时至72小时，间隔72小时至84小时，间隔84小时至96小时，或间隔96小时至120小时施用。两种或更多种(例如抗癌)治疗剂可以在同一次患者就诊中施用。
[0215]
当组合的活性成分不在同一药物组合物中施用时，应理解它们可以以任何顺序施
用于需要的受试者。例如，本发明的化合物可以在另外的抗癌治疗剂施用之前(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)、同时或之后(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)施用于有此需要的受试者。在各个方面，抗癌治疗剂间隔1分钟、间隔10分钟、间隔30分钟、间隔不到1小时、间隔1小时、间隔1小时至2小时、间隔2小时至3小时、间隔3小时至4小时、间隔4小时至5小时、间隔5小时至6小时、间隔6小时至7小时、间隔7小时至8小时、间隔8小时至9小时、间隔9小时至10小时，间隔10小时至11小时，间隔11小时至12小时，间隔不超过24小时或间隔不超过48小时施用。在一个例子中，所述(例如，抗癌)治疗剂是在同一次办公室访问中进行的。在另一个例子中，组合抗癌治疗剂可以间隔1分钟至24小时施用。
[0216]
在一些涉及癌症治疗的实施方案中，式(i)的化合物和另外的抗癌剂或治疗剂被循环施用。循环疗法包括施用一种抗癌治疗剂一段时间，随后施用第二种抗癌治疗剂一段时间，并重复这种顺序施用(即，该循环)，以便减少对一种或两种抗癌疗法的耐药性的发展，避免或减少一种或两种抗癌疗法的副作用，和/或提高疗法的疗效。在一个实施例中，循环疗法包括施用第一种抗癌治疗剂一段时间，随后施用第二种抗癌治疗剂一段时间，任选地，随后施用第三种抗癌治疗剂一段时间等，并重复这种顺序施用(即，该循环)，以便减少对所述抗癌剂之一的耐药性的发展，避免或减少所述抗癌剂之一的副作用，和/或提高所述抗癌剂的疗效。
[0217]
医药试剂盒
[0218]
本发明的化合物和/或包含它们的组合物可以组装成试剂盒或药物系统。根据本发明的这一方面的试剂盒或药物系统包括载体或包装，例如盒、纸箱、管等，在其中具有严密限制的一个或多个容器，例如小瓶、管、安瓿或瓶，其包含本发明式(i)的化合物或其药物组合物。本发明的试剂盒或药物系统还可以包括使用所述化合物和组合物的印刷说明书。
[0219]
本发明的这些和其他方面将在考虑以下实施例后得到进一步理解，这些实施例旨在说明本发明的某些特定实施方案，但不旨在限制由权利要求限定的本发明的范围。
[0220]
实施例
[0221]
本发明的这些和其他方面将在考虑以下实施例后得到进一步理解，这些实施例旨在说明本发明的某些特定实施方案，但不旨在限制由权利要求限定的本发明的范围。
[0222]
实施例1：化合物1
‑
4、7、10和11的三环核心的合成。
[0223][0224]
向2
‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸酯(2.417g，14mmol，1当量)在乙腈(50ml)中的溶液中加入
n
‑
溴代琥珀酰亚胺(6.265g，35mmol，2.5当量)。将混合物加热至40℃持续2天。然后用dcm(100ml)和水(200ml)稀释反应物。除去有机层，水层用dcm(3x75ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用mgso4干燥，过滤，然后浓缩，得到深色粘性油。isco快速色谱法(40g二氧化硅，20
‑
80％etoac/己烷，20分钟梯度)提供了浅黄色固体形式的5
‑
溴
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸酯(2.174g，61％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ4.44(q,j＝7.2hz,2h),2.71(s,3h),1.42(t,j＝7.2hz,3h).ms(esi)249.78,251.87(m+h)
+
。
[0225]5‑
溴
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(2.010g，8.0mmol，1当量)、pd2(dba)3(368mg，0.40mmol，0.05当量)、(
±
)
‑
binap(495mg，0.80mmol，0.10当量)和碳酸铯(3.685g，11.2mmol，1.4当量)和二苯甲酮亚胺(1.61ml，9.6mmol，1.2当量)在无水甲苯(35ml)中的混合物用n2鼓泡10分钟。将反应物加热至80℃持续20小时，然后冷却至室温，用etoac(100ml)稀释，并通过过滤。真空除去溶剂，得到深红色糖浆。中间体5
‑
((二苯基亚甲基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯直接进行水解。ms(esi)350.87(m+h)
+
。
[0226]
将粗5
‑
((二苯基亚甲基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯溶解在20ml thf和5ml 1m盐酸中。混合物在室温下搅拌4小时，此时超高效液相色谱
‑
质谱(uplc
‑
ms)分析显示亚胺完全水解。用50ml etoac稀释反应物，然后用1m盐酸(4x50ml)萃取。将合并的水层中和至ph>12，然后用dcm(5x50ml)萃取。用饱和nahco3水溶液洗涤合并的dcm层，用mgso4干燥，过滤并浓缩，得到浅黄色固体形式的5
‑
氨基
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(1.011g，2步产率68％)。该产品足够纯，不需要进一步纯化。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ5.87(s,2h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),2.53(s,3h),1.40(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)186.87(m+h)
+
。
[0227]
用热枪干燥250ml圆底烧瓶。加入氢化钠(331mg，7.8mmol，1.3当量，60％分散在矿物油中)并用己烷洗涤(2
×
8ml)。加入无水thf(40ml)，并将烧瓶在冰浴上冷却。在10分钟内向该悬浮液中加入5
‑
氨基
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(1.120g，6.0mmol，1.0当量)在30mlthf中的溶液。将反应搅拌1小时，然后滴加碘甲烷(0.56ml，9.0mmol，1.5当量)。将反应物搅拌20小时，缓慢升温至室温。用水(50ml)终止反应。水层用etoac(4x50ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。isco快速色谱法(20
‑
80％etoac/hex，18分钟，40g二氧化硅)提供了浅黄色固体形式的2
‑
甲基
‑5‑
(甲氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(502mg，41％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.21(s,1h),4.36(q,j＝7.1hz,2h),3.00(d,j＝5.2hz,3h),2.54(s,3h),1.38(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)200.87(m+h)
+
。
[0228]
用热枪干燥100ml圆底烧瓶。加入氢化钠(132mg，3.12mmol，1.3当量，60％分散在矿物油中)并用己烷洗涤(2
×
5ml)。加入无水thf(15ml)，并将烧瓶在冰浴上冷却。在10分钟内向该悬浮液中加入2
‑
甲基
‑5‑
(甲氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(480mg，2.4mmol，1.0当量)在13mlthf中的溶液。将反应在0℃搅拌1小时，然后加入2，4
‑
二氯
‑5‑
硝基嘧啶(746mg，3.85mmol，1.6当量)。将反应物搅拌5小时，缓慢升温至室温。uplc质谱分析显示原材料消耗殆尽。用水(50ml)终止反应。水层用etoac(3x30ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。isco快速色谱法(20
‑
80％etoac/hex，18分钟，40g二氧化硅)提供了黄色油状形式的5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯，静置时部分固化(508mg，59％分离产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.59(s,1h),4.26(q,j＝7.1hz,2h),3.63(s,3h),2.73(s,3h),1.25(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)357.77(m+h)
+
。
[0229]
将5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(499mg，
1.4mmol，1.0当量)和铁粉(784mg，14.0mmol，10当量)在冰醋酸(20ml)中的悬浮液加热至50℃持续16小时。将反应冷却至室温，用磁棒除去残留的铁。将粗反应混合物倒入装有150ml水的烧杯中，在室温下搅拌30分钟。通过抽滤收集所得沉淀，用约100ml水洗涤，真空干燥，得到米色固体形式的6
‑
氯
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(258mg，65％分离产率)。1h nmr(500mhz,meod)δ8.09(s,1h),3.46(s,3h),2.60(s,3h).ms(esi)282.07.(m+h)
+
。
[0230]
实施例2：常规钯(pd)偶联条件。
[0231]
将6
‑
氯
‑
2，4
‑
二甲基
‑
4，9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5，4
‑
b]噻唑并[5，4
‑
e][1，4]二氮杂
‑
10
‑
酮(1.0当量)、pd2(dba)3(0.10当量)、xphos(0.20当量)、k2co3(3.0当量)和所需的苯胺(1.30
‑
1.50当量)加入到带有搅拌棒的1
‑
dram小瓶中。加入叔丁醇(0.08m)，用衬有隔膜的盖子密封烧瓶，用氮气喷射悬浮液10分钟。将反应物加热至100℃过夜，然后用etoac(10ml)稀释，通过过滤，真空浓缩，并使用水(0.035％tfa)/甲醇(0.035％)或水(0.035％tfa)/乙腈(0.035％)梯度通过反相制备hplc纯化。
[0232]
实施例3：2,4
‑
二甲基
‑6‑
((4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(1)的合成。
[0233][0234]
使用4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯胺(14.0mg，0.075mmol，1.5当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/meoh，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了黄色粉末形式的标题化合物(8.1mg tfa盐)。1h
‑
nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.96(s,1h),9.53(s,1h),9.38(s,1h),7.98(s,1h),7.57(d,j＝8.8hz,2h),6.95(d,j＝8.8hz,2h),3.72(d,j＝13.2hz,2h),3.36(s,3h),3.16(m,2h),2.88(m,5h),2.53(s,3h).ms(esi)437.28(m+h)
+
。
[0235]
实施例4：6
‑
((4
‑
(4
‑
羟基哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(2)的合成。
[0236][0237]
使用1
‑
(4
‑
氨基苯基)哌啶
‑4‑
醇(14.4mg，0.075mmol，1.5当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/meoh，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了黄色粉末形式的标题化合物(6.3mg tfa盐)。ms(esi)438.28(m+h)
+
。
[0238]
实施例5：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(3)的合成。
[0239][0240]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(21.1mg，0.070mmol，1.4当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/meoh，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了米色粉末形式的标题化合物(8.8mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.51(s,1h),7.95(s,1h),7.93(s,1h),7.72(d,j＝8.7hz,1h),6.70(s,1h),6.56(d,j＝8.6hz,1h),3.81(s,3h),3.79
–
3.65(m,8h),3.31(s,3h),2.76(s,3h),2.53(s,3h),2.04
–
1.92(m,2h),1.71
–
1.59(m,2h).ms(esi)550.39(m+h)
+
。
[0241]
实施例6：6
‑
((3
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(4)的合成。
[0242][0243]
使用3
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯胺(16.5mg，0.075mmol，1.5当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(90
‑
40％h2o/meoh，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了黄色粉末形式的标题化合物(16.0mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.62(s,1h),9.55(s,1h),9.45(s,1h),8.00(s,1h),7.46(d,j＝2.3hz,1h),7.21(dd,j＝8.6,2.4hz,1h),6.87(d,j＝8.6hz,1h),3.79(s,3h),3.48(d,j＝11.8hz,2h),3.40(s,5h),3.19(q,j＝11.0hz,2h),2.91
–
2.80(m,5h),2.54(s,3h).ms(esi)467.38(m+h)
+
。
[0244]
实施例7：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(7)的合成。
[0245][0246]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯胺(27.2mg，0.120mmol，1.5当量)在0.08mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
30％h2o/mecn，20ml/min,28min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了浅棕色粉末形式的标题化合物(3.9mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.87(s,1h),9.51(s,1h),7.96(s,1h),7.93(s,1h),7.74(d,j＝8.8hz,1h),6.70(d,j＝2.6hz,1h),6.54(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.82(s,3h),3.53(d,j＝12.4hz,2h),3.31(s,3h),3.24
–
3.11(m,2h),2.93(t,j＝12.5hz,2h),2.87(s,3h),2.53(s,3h).ms(esi)467.18(m+h)
+
。
[0247]
实施例8：4
‑
((2,4
‑
二甲基
‑
10
‑
氧代
‑
9,10
‑
二氢
‑
4h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑6‑
基)氨基)
‑
n
‑
甲基苯甲酰胺(10)的合成。
[0248][0249]
使用4
‑
氨基
‑
n
‑
甲基苯甲酰胺(18.3mg，0.12mmol，1.5当量)在0.08mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/mecn,20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了浅黄色粉末形式的标题化合物(12.9mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.82(s,1h),9.60(s,1h),8.23(q,j＝4.4hz,1h),8.05(s,1h),7.76(s,4h),3.41(s,3h),2.76(d,j＝4.5hz,3h),2.54(s,3h).ms(esi)396.27(m+h)
+
。
[0250]
实施例9：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(甲基磺酰基)哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(11)的合成。
[0251][0252]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(甲磺酰基)哌嗪
‑1‑
基)苯胺(36.2mg，0.12mmol，1.5当量)在0.08mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了浅棕色粉末形式的标题化合物(2.5mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.53(s,1h),8.15(br s,1h),7.91(s,1h),7.69(d,j＝8.7hz,1h),6.69(d,j＝2.5hz,1h),6.54(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.81(s,3h),3.33(s,3h),3.28
–
3.21(m,8h),2.93(s,3h),2.53(s,3h).ms(esi)531.28(m+h)
+
。
[0253]
实施例10：化合物5和12
‑
14的三环核心的合成。
[0254][0255]
在0℃，向6
‑
氯
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(267mg，0.95mmol，1.0当量)和碘甲烷(0.130ml，2.0mmol，2.1当量)在无水dmf(12ml)中的悬浮液中一次性加入nah(97.3mg，2.4mmol，2.5当量，60％矿物油分散液)。将反应搅拌2小时，此时uplc
‑
ms分析显示原料完全消耗。然后用水(20ml)淬灭反应，并用
etoac(4
×
40ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。isco快速色谱法(24g二氧化硅，0
‑
10％meoh/dcm，14分钟梯度)提供了浅黄色固体形式的6
‑
氯
‑
2，4，9
‑
三甲基
‑
4，9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5，4
‑
b]噻唑并[5，4
‑
e][1，4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(219.7mg，74％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.23(s,1h),3.45(s,3h),3.43(s,3h),2.62(s,3h).ms(esi)295.77(m+h)
+
。
[0256]
实施例11：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(5)的合成。
[0257][0258]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(21.6mg，0.07mmol，1.4当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了白色粉末形式的标题化合物(4.2mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.30(s,1h),8.06(s,1h),7.64(d,j＝8.7hz,1h),6.61(d,j＝2.6hz,1h),6.48(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.79(s,3h),3.68(d,j＝12.2hz,2h),3.28(s,3h),3.26(s,3h),2.63(td,j＝12.1,2.3hz,3h),2.53(s,4h),2.38(m,4h),2.22(s,3h),1.84(d,j＝12.3hz,2h),1.58
–
1.44(m,2h).ms(esi)564.49(m+h)
+
。
[0259]
实施例12：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(12)的合成。
[0260][0261]
使用4
‑
(4
‑
氨基
‑3‑
甲氧基苯基)哌嗪
‑1‑
羧酸叔丁酯在0.13mmol规模上进行常规钯偶联。isco快速色谱法(12g二氧化硅，0
‑
10％meoh/dcm，12min梯度)提供了黄色固体形式
的4
‑
(3
‑
甲氧基
‑4‑
((2,4,9
‑
三甲基
‑
10
‑
氧代
‑
9,10
‑
二氢
‑
4h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑6‑
基)氨基)苯基)哌嗪
‑1‑
羧酸叔丁酯(29.4mg，40％产率)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.31(s,1h),8.09(s,1h),7.68(d,j＝8.7hz,1h),6.66(d,j＝2.6hz,1h),6.51(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.80(s,3h),3.46(t,j＝5.1hz,4h),3.29(s,3h),3.26(s,3h),3.07(t,j＝5.2hz,4h),2.53(s,3h),1.42(s,9h).ms(esi)567.39(m+h)
+
。
[0262]
将受boc保护的中间体(29.4mg，0.052mmol，1.0当量)溶解在dcm(0.8ml)和tfa(0.2ml)中。混合物在室温下搅拌3小时；uplc
‑
ms分析显示完全脱保护。真空除去挥发物；从h2o/mecn的冷冻干燥提供了黄色粉末形式的标题化合物(44.4mg，2xtfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.78(s,2h),8.31(s,1h),8.14(s,1h),7.72(d,j＝8.7hz,1h),6.69(d,j＝2.6hz,1h),6.54(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.81(s,3h),3.35
–
3.31(m,4h),3.30(s,3h),3.27(s,3h),3.26
–
3.20(m,4h),2.53(s,3h).ms(esi)466.88(m+h)
+
。
[0263]
实施例13：6
‑
((4
‑
(4
‑
丙烯酰哌嗪
‑1‑
基)
‑2‑
甲氧基苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(13)的合成。
[0264][0265]
在室温下，向12(26.1mg，0.045mmol，1.0当量)的dcm(1.0ml)悬浮液中加入三乙胺(30.00μl，0.215mmol，4.8当量)，然后加入丙烯酰氯(6.00μl，0.074mmol，1.6当量)。将反应搅拌2小时，此时uplc
‑
ms分析显示12的完全转化。混合物用水(5ml)淬灭，用dcm(5x5ml)萃取。用饱和nahco3水溶液洗涤合并的有机层，然后用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。反相制备hplc纯化(100
‑
25％h2o/mecn，20ml/min，45min)，并从h2o/mecn冷冻干燥得到标题化合物，为黄色油状物(2.8mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.31(s,1h),8.11(s,1h),7.69(d,j＝8.7hz,1h),6.86(dd,j＝16.7,10.5hz,1h),6.68(d,j＝2.6hz,1h),6.52(dd,j＝8.7,2.6hz,1h),6.14(dd,j＝16.7,2.5hz,1h),5.71(dd,j＝10.5,2.3hz,1h),3.81(s,3h),3.74
–
3.64(m,4h),3.29(s,3h),3.26(s,3h),3.16
–
3.08(m,4h),2.53(s,3h).ms(esi)520.88(m+h)
+
。
[0266]
实施例14：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(14)的合成。
[0267][0268]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯胺(21.7mg，0.098mmol，1.8当量)在0.055mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/dcm)进一步纯化该物质。从h2o/mecn冷冻干燥提供了浅黄色粉末形式的标题化合物(10.1mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.77(s,1h),8.31(s,1h),8.12(s,1h),7.72(d,j＝8.7hz,1h),6.69(d,j＝2.6hz,1h),6.54(dd,j＝8.7,2.6hz,1h),3.81(s,3h),3.32(br s,8h),3.29(s,3h),3.27(s,3h),2.79(s,3h),2.53(s,3h).ms(esi)480.88(m+h)
+
。
[0269]
实施例15：化合物6的三环核心的合成。
[0270][0271]
向5
‑
溴噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(1.191g，5.0mmol，1.0当量)在无水乙腈(12ml)中的溶液中加入甲胺(thf 2.0ml，3.6ml，7.2mmol，1.44当量)和dbu(1.120ml，7.5mmol，1.5当量)。将混合物加热至80℃持续4小时，然后冷却至室温。用etoac和水各50ml稀释反应物。除去有机层，用etoac(3x40ml)萃取水溶液。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。isco快速色谱法(24g二氧化硅，25
‑
80％etoac/己烷梯度，18min)提供白色固体形式的5
‑
(甲氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(412mg，44％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.85(d,j＝1.0hz,1h),7.31(s,1h),4.37(q,j＝7.1hz,2h),3.05(d,j＝5.1hz,3h),1.41(t,j＝7.0hz,3h).ms(esi)187.19(m+h)
+
。
[0272]
将5
‑
(甲氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(377mg，2.0mmol，1.0当量)、2，4
‑
二氯
‑5‑
硝基嘧啶(696mg，3.6mmol，1.8当量)和dipea(0.65ml，3.6mmol，1.8当量)在二噁烷(8ml)中的混合物加热至80℃持续2天。用50ml etoac和100ml水稀释反应物。除去有机层，用etoac(5x40ml)萃取水溶液。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤两次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。isco快速色谱法(40g二氧化硅，20
‑
80％etoac/己烷梯度，18min)提供了深红色固
体形式的5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(311mg，45％分离产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.76(s,1h),8.62(s,1h),4.28(q,j＝7.1hz,2h),3.67(s,3h),1.29(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)344.07(m+h)
+
。
[0273]
将5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(311mg，0.90mmol，1.0当量)和铁粉(488mg，9.0mmol，10当量)在冰醋酸(12ml)中的悬浮液加热至50℃持续16小时。将反应冷却至室温，用磁棒除去残留的铁。将粗反应混合物倒入装有40ml水的烧杯中，在室温下搅拌30分钟。通过抽滤收集所得沉淀，用约100ml水洗涤，真空干燥，得到浅棕褐色固体形式的6
‑
氯
‑4‑
甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(127.4mg，52％分离产率)。ms(esi)268.07(m+h)
+
。
[0274]
实施例16：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑4‑
甲基
‑
4，9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5，4
‑
b]噻唑并[5，4
‑
e][1，4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(6)的合成。
[0275][0276]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(34.6mg，0.11mmol，1.4当量)在0.08mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
30％h2o/mecn，20ml/min，28min)。通过制备tlc(10％meoh/dcm)进一步纯化该物质。从h2o/mecn冷冻干燥提供了深灰色粉末形式的标题化合物(3.4mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.62(s,1h),8.67(s,1h),8.02(s,1h),7.95(s,1h),7.75(d,j＝8.7hz,1h),6.75(s,1h),6.61(s,1h),3.82(s,3h),3.80
–
3.74(m,3h),3.66
–
3.44(m,5h),3.36(s,3h),2.81(br s,7h),2.08
–
2.00(m,3h),1.75
–
1.64(m,3h).ms(esi)536.38(m+h)
+
。
[0277]
实施例17：化合物8的三环核心的合成。
[0278]
[0279]
在5min内向氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯(8.590g，60mmol，1.0当量)在180ml饱和nahco3水溶液中的搅拌溶液中分批加入亚硫酸氢钠(34.3g，168mmol，2.8当量)。将反应物加热至35℃持续1小时，然后冷却至室温，并用dcm(5x100ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到澄清的橙色油状物(1.790g，23％产率)。粗乙基氰甘氨酸不经纯化进一步反应。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ4.43(s,1h),4.34(q,j＝7.2hz,2h),1.95(s,2h),1.35(t,j＝7.1hz,3h)。
[0280]
向乙基氰甘氨酸(512mg，4.0mmol，1.0当量)在dcm(8ml)中的溶液中滴加丙酰氯(0.49ml，5.6mmol，1.4当量)，然后加入三乙胺(0.89ml，6.4mmol，1.6当量)。将反应物在室温下搅拌过夜，然后用dcm和饱和碳酸氢钠水溶液(各25ml)稀释。除去有机层，水层用dcm(2x20ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。isco快速色谱法(40g二氧化硅，50
‑
80％etoac/己烷梯度)提供了2
‑
氰基
‑2‑
丙酰胺基乙酸乙酯，为灰白色固体(577mg，78％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ6.30(s,1h),5.54(d,j＝7.7hz,1h),4.36(q,j＝7.1hz,2h),2.35(q,j＝7.6hz,2h),1.37(t,j＝7.1hz,3h),1.20(t,j＝7.6hz,3h)。
[0281]
向50ml圆底烧瓶中加入2
‑
氰基
‑2‑
丙酰胺基乙酸乙酯(554mg，3.0mmol，1.0当量)、无水甲苯(16ml)、劳森试剂(739mg，1.8mmol，0.6当量)和分子筛(粉末，130mg)。用氮气冲洗悬浮液，密封并加热过夜。然后将反应物冷却至室温，过滤并用50ml etoac洗涤。通过酸性萃取分离标题产物(萃取的粗物质4x25ml1m盐酸，中和的含水组分，萃取4x50ml etoac)并浓缩，得到浅棕色固体形式的5
‑
氨基
‑2‑
乙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(202mg，33％产率)。ms(esi)200.26(m+h)
+
。这种材料未经进一步提纯就进行下一步。
[0282]5‑
氨基
‑2‑
乙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(199mg，1.0mmol，1.0当量)经受实施例1中所述的氮甲基化条件。修改:将反应加热至50℃持续15小时。isco快速色谱法(12g二氧化硅，25
‑
80％etoac/己烷，16min梯度)提供了2
‑
乙基
‑5‑
(甲氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯，为澄清的黄色油状物(70.1mg，33％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.24(s,1h),4.37(q,j＝7.1hz,2h),3.02(d,j＝5.1hz,3h),2.89(q,j＝7.6hz,2h),1.39(t,j＝7.1hz,3h),1.31(t,j＝7.6hz,3h).ms(esi)215.28(m+h)
+
。
[0283]
如实施例15所述，用2，4
‑
二氯
‑5‑
硝基嘧啶(135.8mg，0.70mmol，2.1当量)对2
‑
乙基
‑5‑
(甲氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(70.1mg，0.33mmol，1.0当量)进行s
n
ar条件。修改:反应在80℃下进行22小时。isco快速色谱法(12g二氧化硅，20
‑
80％etoac/己烷，15min梯度)提供5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
乙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(66.0mg，53％产率)，为澄清的黄橙色油状物。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.58(s,1h),4.26(q,j＝7.1hz,2h),3.63(s,3h),3.04(q,j＝7.6hz,2h),1.40(t,j＝7.6hz,3h),1.25(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)372.07(m+h)
+
。
[0284]5‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
乙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(66.0mg，0.177mmol，1.0当量)如实施例1所述进行还原内酰胺化。修改的分离:沉淀在沉淀后，通过倾析除去上清液。用水(2x3ml，倾析)洗涤沉淀物，并在n2流下于45℃干燥，得到黄色固体形式的6
‑
氯
‑2‑
乙基
‑4‑
甲基
‑
4，9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5，4
‑
b]噻唑并[5，4
‑
e][1，4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(21.3mg，45％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ9.15(s,1h),8.17(s,1h),3.45(s,3h),2.93(s,2h),1.33(s,3h)(由于残余铁的顺磁性，信号变宽).ms(esi)296.07(m+h)
+
。
[0285]
实施例18：2
‑
乙基
‑6‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨
基)
‑4‑
甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(8)的合成。
[0286][0287]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(31.3mg，0.104mmol，1.3当量)在0.08mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
30％h2o/mecn，20ml/min，28min)。通过制备tlc(10％meoh/dcm)进一步纯化该物质。从h2o/mecn冷冻干燥提供了浅黄色粉末形式的标题化合物(15.6mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.51(s,1h),7.92(s,1h),7.87(s,1h),7.66(d,j＝8.7hz,1h),6.61(d,j＝2.6hz,1h),6.48(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.79(s,3h),3.69(d,j＝12.0hz,2h),2.86(q,j＝7.5hz,2h),2.34(s,3h),1.86(d,j＝12.2hz,2h),1.52(dt,j＝12.6,11.2hz,2h),1.24(t,j＝7.5hz,3h).ms(esi)564.39(m+h)
+
。
[0288]
实施例19：化合物9的三环核心的合成。
[0289][0290]
将5
‑
氨基
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(191.5mg，1.03mmol，1.0当量)进行实施例1中所述的氮烷基化条件。修改:反应使用碘乙烷(0.120ml，1.5mmol，1.5当量)，并加热至50℃持续15小时。isco快速色谱法(12g二氧化硅，25
‑
80％etoac/己烷，16min梯度)提供了红橙色油状的5
‑
(乙胺基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(52.9mg，24％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.24(s,1h),4.37(q,j＝7.1hz,2h),3.24(qd,j＝7.2,5.6hz,2h),2.55(s,3h),1.39(t,j＝7.1hz,3h),1.31(t,j＝7.2hz,3h).ms(esi)215.18(m+h)
+
。
[0291]
如实施例15所述，用2，4
‑
二氯
‑5‑
硝基嘧啶(104.6mg，0.54mmol，2.1当量)对5
‑
(乙
氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(52.9mg，0.25mmol，1.0当量)进行s
n
ar条件。修改:反应在80℃下进行22小时。isco快速色谱法(12g二氧化硅，20
‑
80％etoac/己烷，15min梯度)提供了黄橙色蜡状固体形式的5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(乙基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(38.0mg，40％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),4.31
–
4.05(m,4h),2.72(s,3h),1.29(t,j＝7.1hz,3h),1.23(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)372.07(m+h)
+
。
[0292]5‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(乙基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(38.0mg，0.10mmol，1.0当量)如实施例1所述进行还原内酰胺化。修改的分离:用5ml水稀释反应，用磁铁去除残留的铁，然后用dcm(4x8 ml)萃取含水组分。合并的dcm层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到浅黄色固体形式的6
‑
氯
‑4‑
乙基
‑2‑
甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(24.5mg，82％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ9.21(s,1h),8.13(s,1h),4.00(q,j＝7.1hz,2h),2.61(s,3h),1.43(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)296.07(m+h)
+
。
[0293]
实施例20：4
‑
乙基
‑6‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑2‑
甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(9)的合成。
[0294][0295]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(33.0mg，0.108mmol，1.35当量)在0.08mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
30％h2o/mecn，20ml/min，28min)。通过制备tlc(10％meoh/dcm)进一步纯化该物质。从h2o/mecn冷冻干燥提供了黄色粉末形式的标题化合物(4.7mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.50(s,1h),7.92(s,1h),7.91(s,1h),7.56(d,j＝8.7hz,1h),6.60(d,j＝2.6hz,1h),6.47(dd,j＝8.7,2.6hz,1h),3.83(q,j＝7.1hz,2h),3.78(s,3h),3.68(d,j＝12.1hz,2h),2.63(t,j＝11.0hz,2h),2.52(s,3h),2.23(s,3h),1.84(d,j＝12.3hz,2h),1.59
–
1.45(m,2h),1.29(t,j＝7.0hz,3h).ms(esi)564.39(m+h)
+
。
[0296]
实施例21：6
‑
((2
‑
乙氧基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(16)的合成。
[0297][0298]
使用2
‑
乙氧基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯胺(18.3mg，0.08mmol，1.6当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了黄色粉末形式的标题化合物(5.5mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.31(s,1h),8.00(s,1h),7.70(d,j＝8.8hz,1h),6.61(d,j＝2.6hz,1h),6.48(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),4.07(q,j＝7.0hz,2h),3.29(s,3h),3.27(s,3h),3.10(t,j＝5.0hz,4h),2.53(s,3h),2.45(t,j＝5.0hz,4h),2.22(s,3h),1.29(t,j＝7.0hz,3h).ms(esi)494.98(m+h)
+
。
[0299]
实施例22：6
‑
((2
‑
(2
‑
羟基乙氧基)
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(17)的合成。
[0300][0301]
使用2
‑
(2
‑
氨基
‑5‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯氧基)乙基
‑1‑
醇(20.2mg，0.08mmol，1.6当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。从h2o/mecn冻干得到浅粉色粉末形式的标题化合物(7.0mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.64(s,1h),8.42(s,1h),8.35(s,1h),7.91(d,j＝8.8hz,1h),6.70(d,j＝2.6hz,1h),6.57(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.11(s,1h),4.03(q,j＝4.5hz,2h),3.81(d,j＝12.9hz,2h),3.71(t,j＝4.7hz,2h),3.51(s,3h),3.28(s,3h),3.21
–
3.09(m,3h),2.95
–
2.88(m,2h),2.87(s,3h),2.54(s,3h).ms(esi)510.68(m+h)
+
。
[0302]
实施例23：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑5‑
甲基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(18)的合成。
[0303][0304]
使用2
‑
甲氧基
‑5‑
甲基
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯胺(16.4mg，0.07mmol，1.4当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
45％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了浅黄色粉末形式的标题化合物(15.2mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.34(s,1h),8.07(s,1h),7.74(s,1h),6.71(s,1h),3.80(s,3h),3.27(s,3h),2.86(t,j＝4.8hz,4h),2.53(s,3h),2.28(s,3h),2.18(s,3h).ms(esi)494.88(m+h)
+
。
[0305]
实施例24：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(19)的合成。
[0306][0307]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)苯胺(18.3mg，0.083mmol，1.4当量)在0.06mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了白色粉末形式的标题化合物(8.7mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.47(s,1h),8.35(s,1h),8.16(s,1h),7.96(d,j＝8.2hz,1h),6.90(d,j＝1.9hz,1h),6.81(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),3.84(s,3h),3.33(s,3h),3.27(s,3h),3.12
–
3.00(m,2h),2.81(s,3h),2.53(s,3h),2.03(d,j＝13.9hz,2h),1.89
–
1.77(m,2h).ms(esi)479.98(m+h)
+
。
[0308]
实施例25：6
‑
((4
‑
(4
‑
(2
‑
羟乙基)哌嗪
‑1‑
基)
‑2‑
甲氧基苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(20)的合成。
[0309][0310]
使用2
‑
(4
‑
(4
‑
氨基
‑3‑
甲氧基苯基)哌嗪
‑1‑
基)乙基
‑1‑
醇(20.6mg，0.082mmol，1.4当量)在0.06mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/mecn，20ml/min，45min)。从h2o/mecn的冻干法提供了棕色粉末形式的标题化合物(15.6mgtfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.68(s,1h),8.31(s,1h),8.13(s,1h),7.72(d,j＝8.7hz,1h),6.70(d,j＝2.6hz,1h),6.55(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),5.42(s,1h),3.82(s,3h),3.78(t,j＝5.4hz,2h),3.66
–
3.52(m,2h),3.30(s,3h),3.27(s,3h),3.21(s,2h),3.05(d,j＝13.3hz,2h),2.53(s,3h).ms(esi)510.88(m+h)
+
。
[0311]
实施例26：3
‑
甲氧基
‑
n
‑
甲基
‑4‑
((2,4,9
‑
三甲基
‑
10
‑
氧代
‑
9,10
‑
二氢
‑
4h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑6‑
基)氨基)苯甲酰胺(21)的合成。
[0312][0313]
使用4
‑
氨基
‑3‑
甲氧基
‑
n
‑
甲基苯甲酰胺(12.8mg，0.07mmol，1.4当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冷冻干燥，得到呈黄褐色粉末的标题化合物(5.4mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.44(s,1h),8.36(q,j＝4.5hz,1h),8.28
–
8.21(m,2h),7.52
–
7.47(m,2h),3.92(s,3h),3.37(s,3h),3.29(s,3h),2.78(d,j＝4.4hz,3h),2.54(s,3h).ms(esi)439.98(m+h)
+
。
[0314]
实施例27：6
‑
((6
‑
甲氧基
‑2‑
甲基
‑
1,2,3,4
‑
四氢异喹啉
‑7‑
基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(22)的合成。
[0315][0316]
使用6
‑
甲氧基
‑2‑
甲基
‑
1，2，3，4
‑
四氢异喹啉
‑7‑
胺(12.7mg，0.065mmol，1.3当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
45％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了黄色粉末形式的标题化合物(11.3mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.37(s,1h),8.08(s,1h),7.74(s,1h),6.77(s,1h),3.80(s,3h),3.49(s,2h),3.28(s,3h),2.80(t,j＝6.0hz,2h),2.69
–
2.60(m,2h),2.54(s,3h),2.38(s,3h).ms(esi)451.88(m+h)
+
。
[0317]
实施例28：2,4,9
‑
三甲基
‑6‑
((2
‑
氧代
‑
1,2,3,4
‑
四氢喹啉
‑6‑
基)氨基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(23)的合成。
[0318][0319]
将6
‑
氯
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(17.6mg，0.060mmol，1.0当量)和6
‑
氨基
‑
3,4
‑
二氢喹啉
‑
2(1h)
‑
酮(34.5mg，0.210mmol，3.5当量)在4m hcl/二噁烷(0.60ml)中的溶液在100℃搅拌3天。用dcm稀释反应混合物，并通过过滤，用10ml meoh洗涤，然后用反相制备hplc(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)纯化。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冻干，得到米色粉末形式的标题化合物(1.6mg游离碱)。ms(esi)421.87(m+h)
+
。
[0320]
实施例29：2,4,9
‑
三甲基
‑6‑
((5
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)吡啶
‑2‑
基)氨基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(24)的合成。
[0321]
[0322]
使用5
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)吡啶
‑2‑
胺(21.6mg，0.11mmol，1.4当量)在0.08mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。从h2o/mecn的冷冻干燥提供了白色粉末形式的标题化合物(xxmgtfa盐)。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冻干，得到米色粉末形式的标题化合物(1.7mg游离碱)。ms(esi)451.88(m+h)
+
。
[0323]
实施例30：2,4,9
‑
三甲基
‑6‑
((1
‑
甲基
‑
1h
‑
吡唑
‑4‑
基)氨基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(26)的合成。
[0324][0325]
使用1
‑
甲基
‑
1h
‑
吡唑
‑4‑
胺(12.6mg，0.13mmol，2.15当量)在0.06mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了白色粉末形式的标题化合物(5.3mgtfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.58(s,1h),8.35(s,1h),7.82(s,1h),7.48(s,1h),3.81(s,3h),3.27(s,3h),3.17(s,3h),2.54(s,3h).ms(esi)356.97(m+h)
+
。
[0326]
实施例31：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
羰基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(28)的合成。
[0327][0328]
使用(4
‑
氨基
‑3‑
甲氧基苯基)
‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)甲酮(38.1mg，0.115mmol，1.9当量)在0.06mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了白色粉末形式的标题化合物(6.4mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.42(s,1h),8.26(s,1h),8.18(d,j＝8.2hz,1h),7.01(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),3.89(s,3h),3.36(s,3h),3.29(s,3h),2.75(s,3h),2.54(s,3h),1.96
–
1.78(m,2h),1.54
–
1.38(m,2h)(piperazine resonances obscured under water peak).ms(esi)591.89(m+h)
+
。
[0329]
实施例32：化合物132的三环核心的合成。
[0330][0331]
在0℃，向6
‑
氯
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,
‑
2,4
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(29.5mg，0.10mmol，1.0当量)和碘乙烷(20.0μl，0.25mmol，2.5当量)在无水dmf(1.5ml)中的悬浮液中一次性加入nah(10.1mg，0.22mmol，2.2当量，60％矿物油分散液)。将反应搅拌过夜，并且uplc
‑
ms分析显示原料完全消耗。然后用水(10ml)淬灭反应，并用etoac(4
×
10ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。isco快速色谱法(12g二氧化硅，0
‑
10％meoh/dcm，10分钟梯度)提供了琥珀油形式的6
‑
氯
‑9‑
乙基
‑
2，4
‑
二甲基
‑
4，9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5，4
‑
b]噻唑并[5，4
‑
e][1，4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(35.0mg，定量产率)。ms(esi)309.77(m+h)
+
。
[0332]
实施例33：9
‑
乙基
‑6‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(132)的合成。
[0333][0334]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(23.1mg，0.076mmol，1.5当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冷冻干燥，得到白色粉末形式的标题化合物(1.0mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.33(s,1h),8.12(s,1h),7.65(d,j＝8.7hz,1h),6.64(s,1h),6.51(d,j＝8.8hz,1h),3.83(q,j＝7.0hz,2h),3.80(s,3h),3.74(br s,2h),2.67(t,j＝12.1hz,2h),2.53(s,3h),2.02
–
1.81(m,2h),1.57(br s,2h),1.08(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)577.99(m+h)
+
。
[0335]
实施例34：化合物159的三环核心的合成。
[0336][0337]
在0℃，向6
‑
氯
‑4‑
乙基
‑2‑
甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(38.4mg，0.13mmol，1.0当量)和碘甲烷(20.0μl，0.32mmol，2.5当量)在无水dmf(1.6ml)中的悬浮液中一次性加入nah(12.0mg，0.30mmol，2.3当量，60％矿物油分散液)。将反应搅拌1小时，并且uplc
‑
ms分析显示原料完全消耗。然后用水(5ml)淬灭反应，并用etoac(4
×
10ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。isco快速色谱法(12g二氧化硅，0
‑
10％meoh/dcm，12分钟梯度)提供了黄色油状的6
‑
氯
‑4‑
乙基
‑
2,9
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(31.0mg，77％产率)。ms(esi)309.77(m+h)
+
。
[0338]
实施例35：4
‑
乙基
‑6‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,9
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(159)的合成。
[0339][0340]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(34.5mg，0.11mmol，1.4当量)在0.08mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冷冻干燥，得到白色粉末形式的标题化合物(4.0mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.30(s,1h),8.11(s,1h),7.56(d,j＝8.7hz,1h),6.61(d,j＝2.6hz,1h),6.49(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.82
–
3.75(m,5h),3.72(d,j＝12.0hz,2h),3.27(s,3h),3.09(q,j＝7.3hz,1h),2.65(t,j＝12.2hz,2h),2.53(s,3h),1.96
–
1.80(m,2h),1.61
–
1.48(m,2h),1.30(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)578.09(m+h)
+
。
[0341]
实施例36：化合物177的三环核心的合成。
[0342][0343]
将三氟乙酰胺(2.267g，20.0mmol，1.0当量)和劳森试剂(4.835g，12.0mmol，0.6当量)在无水thf(40ml)中的悬浮液加热至70℃持续2天。将反应烧瓶移出热源，冷却至室温，加入溴丙酮酸乙酯(2.60ml，20.0mmol，1.0当量)，然后将反应恢复至70℃持续18小时。然后将反应混合物冷却至室温，用水(100ml)淬灭，并用etoac(3x75ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(80g二氧化硅，10
‑
60％etoac/hex，28min梯度)，得到2
‑
(三氟甲基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯，为黄橙色固体(1.936g，43％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.38(s,1h),4.46(q,j＝7.1hz,2h),1.42(t,j＝7.1hz,3h).
19
f nmr(471mhz,cdcl3)δ
‑
61.02.ms(esi)225.88(m+h)
+
。
[0344]
用热枪在真空下干燥250ml圆底烧瓶。在n2气氛下，将无水thf(40ml)和lda(2ml在thf，4.70ml，9.40mmol，1.25当量)的溶液冷却至
‑
78℃。在12min内滴加2
‑
(三氟甲基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(1.688g，7.5mmol，1.0当量)在thf(20ml)中的溶液，然后在
‑
78℃搅拌30min。在7min内滴加1，2
‑
二溴四氯乙烷(3.663g，11.25mmol，1.5当量)在thf(15ml)中的溶液。将反应在
‑
78℃下搅拌1小时，然后在室温下搅拌1小时。用饱和nh4cl水溶液(25ml)猝灭反应，用水(100ml)稀释，然后用etoac(3x75ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(40g二氧化硅，0
‑
40％etoac/hex，18min梯度)，得到5
‑
溴
‑2‑
(三氟甲基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯，为黄橙色半固体(636mg，28％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ4.47(q,j＝7.1hz,2h),1.43(t,j＝7.2hz,3h).19f nmr(471mhz,cdcl3)δ
‑
61.16.ms(esi)303.67,305.67(m+h,m+2+h)
+
。
[0345]
向5
‑
溴
‑2‑
(三氟甲基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(632mg，2.1mmol，1.0当量)在无水乙腈(10.5ml)中的溶液中加入甲胺(thf 2.0ml，1.30ml，2.6mmol，1.24当量)和dbu(0.40ml，2.8mmol，1.3当量)。将混合物加热至80℃持续2小时，然后冷却至室温。用1∶1etoac∶水(100ml)稀释反应物。除去有机层，用etoac(3x50ml)萃取水溶液。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。uplcms分析显示5
‑
(甲氨基)
‑2‑
(三氟甲基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯在约30％的收率，粗混合物不经纯化进行下一步。ms(esi)254.87(m+h)
+
。
[0346]
将无水thf(12ml)中的全部粗甲基氨基混合物冷却至0℃。单份加入nah(78.5mg，1.95mmol，1.3当量)，并将反应搅拌30min。在3min内滴加2，4
‑
二氯
‑5‑
硝基嘧啶(449.3mg，
2.30mmol，1.6当量)在thf(3ml)中的溶液。搅拌反应物，升温至室温过夜，然后用50ml氯化铵水溶液淬灭。水层用etoac萃取(4x25ml)。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(24g二氧化硅，0
‑
40％etoac/己烷梯度，20min)得到5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
(三氟甲基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯，为澄清的黄色油状物(143.7mg，2步产率16％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.71(s,1h),4.29(q,j＝7.1hz,2h),3.71(s,3h),1.28(t,j＝7.2hz,3h).
19
f nmr(471mhz,cdcl3)δ
‑
61.82.ms(esi)411.87(m+h)
+
。
[0347]
将5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
(三氟甲基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(136.2mg，0.33mmol，1.0当量)和铁粉(182mg，3.30mmol，10当量)在冰醋酸(4.5ml)中的悬浮液加热至50℃持续16小时。用水(5ml)稀释反应物，并用dcm(5x5 ml)萃取。合并的有机层用饱和nahco3水溶液(3x15 ml)洗涤，然后用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到黄色固体形式的6
‑
氯
‑4‑
甲基
‑2‑
(三氟甲基)
‑
4，9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5，4
‑
b]噻唑并[5，4
‑
e][1，4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(97.1mg，88％产率)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ10.30(s,1h),8.20(s,1h),3.47(s,3h).
19
fnmr(471mhz,dmso)δ
‑
60.55.ms(esi)335.77(m+h)
+
。
[0348]
在0℃，向6
‑
氯
‑4‑
甲基
‑2‑
(三氟甲基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(81.3mg，0.24mmol，1.0当量)和碘甲烷(30.0μl,0.48mmol,2.0当量)在无水dmf(3.0ml)中的悬浮液中一次性加入nah(21.0mg，0.53mmol，2.2当量，60％矿物油分散液)。将反应搅拌2小时，并且uplc
‑
ms分析显示原料完全消耗。然后用水(5ml)淬灭反应，并用dcm(5x5 ml)萃取。用水洗涤合并的有机层三次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(12g二氧化硅，0
‑
5％meoh/dcm，12min梯度)得到黄色固体形式的6
‑
氯
‑
4,9
‑
二甲基
‑2‑
(三氟甲基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(32.6mg，39％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.33(s,1h),3.54(s,3h),3.47(s,3h).
19
f nmr(471mhz,cdcl3)δ
‑
61.28.ms(esi)349.77(m+h)
+
。
[0349]
实施例37：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
4,9
‑
二甲基
‑2‑
(三氟甲基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(177)的合成。
[0350][0351]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(23.1mg，0.076mmol，1.5当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从
h2o/mecn冷冻干燥，得到黄色固体形式的标题化合物(11.1mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.38(s,1h),8.26(s,1h),7.60(d,j＝8.7hz,1h),6.64(d,j＝2.6hz,1h),6.52(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.80(s,3h),3.75(d,j＝12.3hz,2h),3.32(s,3h),2.74
–
2.62(m,5h),1.91(s,2h),1.67
–
1.52(m,2h).
19
f nmr(471mhz,dmso)δ
‑
64.35.ms(esi)617.89(m+h)
+
。
[0352]
实施例38：化合物184和186的三环核心的合成。
[0353][0354]5‑
溴
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(2.015g，6.5mmol，1.0当量)、pd2(dba)3(298mg，0.33mmol，0.05当量)、(
±
)
‑
binap(405mg，0.65mmol，0.10当量)和碳酸铯(2.965g，9.1mmol，1.4当量)和二苯甲酮亚胺(1.31ml，7.8mmol，1.2当量)在无水甲苯(25ml)中的混合物用n2鼓泡10分钟。将反应物加热至80℃持续19小时，然后冷却至室温，用etoac(100ml)稀释，并通过过滤。真空除去溶剂，得到深红色糖浆。中间体5
‑
((二苯基亚甲基)氨基)
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯直接进行水解。ms(esi)412.87(m+h)
+
。
[0355]
将粗5
‑
((二苯基亚甲基)氨基)
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯溶解在thf(25ml)和1m盐酸(8ml)中。混合物在室温下搅拌5小时，此时uplc
‑
ms分析显示亚胺完全水解。用etoac(100ml)稀释反应物，中和至ph～10，用水洗涤两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(40g二氧化硅，25
‑
80％etoac/hex，20min梯度)得到黄色固体形式的5
‑
氨基
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(1.273g，2步产率79％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.82
–
7.76(m,2h),7.43
–
7.33(m,3h),5.89(br s,2h),4.43(q,j＝7.1hz,2h),1.44(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)248.88(m+h)
+
。
[0356]
用热枪干燥100ml圆底烧瓶。加入氢化钠(192mg，4.8mmol，1.2当量，60％矿物油分散体)在无水thf(30ml)中的悬浮液，烧瓶在冰浴上冷却。在5min内向该悬浮液中加入5
‑
氨基
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(1.018g，4.0mmol，1.0当量)在thf(10ml)中的溶液。搅拌反应30min，然后滴加碘甲烷(0.37ml，6.0mmol，1.5当量)。将反应物搅拌3小时，缓慢升温至室
温。用水(50ml)终止反应。水层用etoac(4x50ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法(25
‑
80％etoac/hex，19min，40g二氧化硅)纯化，得到黄色粘稠油状的5
‑
(甲氨基)
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(620mg，57％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.87
–
7.75(m,2h),7.43
–
7.34(m,3h),6.08(s,1h),4.41(t,j＝7.1hz,2h),3.11(s,3h),1.43(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)262.87(m+h)
+
。
[0357]
用热枪干燥100ml圆底烧瓶。加入氢化钠(112mg，2.76mmol，1.2当量，60％矿物油分散体)在无水thf(12ml)中的悬浮液，烧瓶在冰浴上冷却。在4min内向该悬浮液中加入5
‑
(甲氨基)
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(620mg，2.3mmol，1.0当量)在thf(5ml)中的溶液。将反应物在0℃搅拌20min，然后加入2，4
‑
二氯
‑5‑
硝基嘧啶(796mg，4.14mmol，1.8当量)。将反应物搅拌过夜，缓慢升温至室温。用氯化铵水溶液(40ml)猝灭反应，水层用etoac(4
×
30ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(20
‑
70％etoac/hex，18min，24g二氧化硅)得到黄橙色泡沫状的5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(655mg，67％分离产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.62(s,1h),7.97
–
7.90(m,2h),7.52
–
7.44(m,3h),4.28(q,j＝7.1hz,2h),3.69(s,3h),1.28(t,j＝7.1hz,3h).ms(esi)419.77(m+h)
+
。
[0358]
将5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(655mg，1.50mmol，1.0当量)和铁粉(824mg，15.0mmol，10当量)在冰醋酸(22ml)中的悬浮液加热至50℃持续16小时。将反应冷却至室温，用磁棒除去残留的铁。将粗反应混合物倒入装有水(50ml)的烧杯中，并在室温下搅拌45min。通过抽滤收集所得沉淀，用水(50ml)洗涤，真空干燥，得到黄色固体形式的6
‑
氯
‑4‑
甲基
‑2‑
苯基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(321mg，60％产率)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ10.09(s,1h),8.16(s,1h),7.89
–
7.77(m,2h),7.64
–
7.35(m,3h),3.46(s,3h).ms(esi)343.77(m+h)
+
。
[0359]
在0℃，向6
‑
氯
‑4‑
甲基
‑2‑
苯基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(246mg，0.70mmol，1.0当量)和碘甲烷(0.090ml,1.40mmol,2.0当量)在无水dmf(10ml)中的悬浮液中一次性加入nah(63.5mg，1.54mmol，2.2当量，60％矿物油分散液)。将反应搅拌2小时，并且uplc
‑
ms分析显示原料完全消耗。然后用水(5ml)淬灭反应，并用dcm(5x10 ml)萃取。用水洗涤合并的有机层三次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(12g二氧化硅，0
‑
10％meoh/dcm，12min梯度)得到红橙色固体形式的6
‑
氯
‑
4,9
‑
二甲基
‑2‑
苯基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(156.4mg，62％产率)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.63(s,1h),7.88
–
7.81(m,2h),7.53
–
7.44(m,3h),3.47(s,3h),3.35(s,3h).ms(esi)357.77(m+h)
+
。
[0360]
实施例39：4,9
‑
二甲基
‑6‑
((4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑2‑
苯基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(184)的合成。
[0361][0362]
使用4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)苯胺(20.2mg，0.105mmol，1.5当量)在0.070mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了白色粉末形式的标题化合物(12.9mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.74(s,1h),9.58(s,1h),8.41(s,1h),7.90
–
7.79(m,2h),7.63
–
7.58(m,2h),7.54
–
7.46(m,3h),7.00
–
6.95(m,2h),3.74(d,j＝13.2hz,2h),3.46(s,3h),3.33(s,3h),3.23
–
3.11(m,2h),2.95
–
2.83(m,5h).ms(esi)512.88(m+h)
+
。
[0363]
实施例40：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
4,9
‑
二甲基
‑2‑
苯基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(186)的合成。
[0364][0365]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(27.8mg，0.091mmol，1.4当量)在0.065mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冷冻干燥，得到黄色固体形式的标题化合物(8.1mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.34(s,1h),8.14(d,j＝1.4hz,1h),7.87
–
7.80(m,2h),7.64(d,j＝8.7hz,1h),7.54
–
7.44(m,3h),6.63(s,1h),6.54
–
6.46(m,1h),3.80(s,3h),3.72(s,2h),3.39(s,3h),3.31(s,3h),2.80
–
2.59(m,5h),2.07
–
1.80(m,2h),1.63
–
1.39(m,2h).ms(esi)625.99(m+h)
+
。
[0366]
实施例41：化合物193的三环核心的合成。
[0367][0368]
在0℃，向6
‑
氯
‑2‑
乙基
‑4‑
甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(63.0mg，0.20mmol，1.0当量)和碘甲烷(25.0μl,0.40mmol,2.0当量)在无水dmf(2.5ml)中的悬浮液中一次性加入nah(18.4mg，0.44mmol，2.2当量，60％矿物油分散液)。将反应搅拌3小时，此时uplc
‑
ms分析显示原料完全消耗。然后用水(5ml)淬灭反应，并用etoac(4x5 ml)萃取。用水洗涤合并的有机层三次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(12g二氧化硅，0
‑
5％meoh/dcm，12min梯度)得到浅黄色固体形式的6
‑
氯
‑2‑
乙基
‑
4,9
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(49.8mg，80％产率)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.58(s,1h),3.37(s,3h),3.31(s,3h),2.88(q,j＝7.5hz,2h),1.24(t,j＝7.5hz,3h).ms(esi)309.87(m+h)
+
。
[0369]
实施例42：4
‑
乙基
‑6‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
4,9
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(193)的合成。
[0370][0371]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(
‑4‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(70.9mg，0.23mmol，1.5当量)在0.16mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(85
‑
15％h2o/mecn，40ml/min，60min)。通过制备tlc(10％meoh/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冻干，得到浅黄色粉末形式的标题化合物(19.2mgtfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.31(s,1h),8.14(s,1h),7.70(d,j＝8.7hz,1h),6.71(s,1h),6.58(d,j＝8.6hz,1h),3.84
–
3.74(m,9h),3.31(s,3h),3.27(s,3h),2.86(q,j＝7.5hz,2h),2.78(br s,5h),2.06
–
1.96(m,2h),1.65(d,j＝12.3hz,2h),1.23(t,j＝7.5hz,3h).ms(esi)577.98(m+h)
+
。
[0372]
实施例43：6
‑
((3
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(194)的合成。
[0373][0374]
使用3
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(41.4mg，0.136mmol，1.7当量)在0.08mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
40％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了浅黄色粉末形式的标题化合物(30.7mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.58(s,2h),8.02(s,1h),7.57(s,1h),7.24(d,j＝6.8hz,1h),3.85(s,3h),3.54
‑
3.44(m,3h),3.41(s,3h),3.19
‑
2.88(m,4h),2.80(s,3h),2.54(s,3h),2.10
‑
1.98(m,2h),1.82(s,2h).ms(esi)550.27(m+h)
+
。
[0375]
实施例44：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(195)的合成。
[0376][0377]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(1
‑
甲基哌啶
‑4‑
基)哌嗪
‑1‑
基)苯胺(29.5mg，0.105mmol，1.5当量)以0.07mmol规模进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冻干，得到白色粉末形式的标题化合物(13.7mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.31(s,1h),8.11(s,1h),7.70(d,j＝6.6hz,1h),6.68(s,1h),6.53(d,j＝8.6hz,1h),3.81(s,3h),3.62
‑
3.48(m,2h),3.29(s,3h),3.27(s,3h),3.02
‑
2.90(m,2h),2.77(s,3h),2.53(s,3h).ms(esi)563.99(m+h)
+
。
[0378]
实施例45：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
甲基
‑2‑
氧代哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲
基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(196)的合成。
[0379][0380]
使用1
‑
(4
‑
氨基
‑3‑
甲氧基苯基)
‑4‑
甲基哌嗪
‑2‑
酮(16.0mg，0.065mmol，1.3当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了白色粉末形式的标题化合物(4.8mgtfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.39(s,1h),8.22(s,1h),8.02(d,j＝8.6hz,1h),7.01(d,j＝2.2hz,1h),6.88(dd,j＝8.6,2.2hz,1h),3.83(s,3h),3.65(dd,j＝6.3,4.6hz,2h),3.34(s,2h),3.28(s,3h),3.10(s,2h),2.75
–
2.70(m,2h),2.54(s,3h),2.29(s,3h).ms(esi)494.88(m+h)
+
。
[0381]
实施例46：n
‑
甲基
‑4‑
((2,4,9
‑
三甲基
‑
10
‑
氧代
‑
9,10
‑
二氢
‑
4h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑6‑
基)氨基)苯甲酰胺(197)的合成。
[0382][0383]
使用4
‑
氨基
‑
n
‑
甲基苯甲酰胺(13.0mg，0.086mmol，1.7当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冷冻干燥，得到呈白色粉末的标题化合物(6.6mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.97(s,1h),8.46(s,1h),8.24(q,j＝4.2hz,1h),7.78(s,4h),3.40(s,3h),3.30(s,3h),2.76(d,j＝4.4hz,3h),2.54(s,3h).ms(esi)409.87(m+h)
+
。
[0384]
实施例47：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(甲基磺酰基)哌嗪
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(198)的合成。
[0385][0386]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(甲磺酰基)哌嗪
‑1‑
基)苯胺(21.8mg，0.065mmol，1.3当量)在0.05mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冷冻干燥，得到白色粉末形式的标题化合物(5.1mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.31(s,1h),8.10(s,1h),7.71(d,j＝8.8hz,1h),6.68(d,j＝2.6hz,1h),6.53(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.81(s,3h),3.30(s,3h),3.27(s,3h),3.25
–
3.20(m,8h),2.93(s,3h),2.53(s,3h).ms(esi)544.79(m+h)
+
。
[0387]
实施例48：6
‑
((4
‑
(4
‑
乙酰哌嗪
‑1‑
基)
‑2‑
甲氧基苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(199)的合成。
[0388][0389]
使用1
‑
(4
‑
(4
‑
氨基
‑3‑
甲氧基苯基)哌嗪
‑1‑
基)乙基
‑1‑
酮(23.2mg，0.093mmol，1.5当量)在0.06mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc(100
‑
50％h2o/mecn,20ml/min,45min)纯化。从h2o/mecn冷冻干燥提供了白色粉末形式的标题化合物(10.7mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.31(s,1h),8.15(s,1h),7.69(d,j＝8.7hz,1h),6.69(d,j＝2.6hz,1h),6.53(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.81(s,3h),3.29(s,3h),3.26(s,3h),3.15(t,j＝5.2hz,2h),3.09(t,j＝5.3hz,2h),2.54(s,4h),2.53(s,3h),2.05(s,3h).ms(esi)509.16(m+h)
+
。
[0390]
实施例49：6
‑
((4
‑
(4
‑
(2
‑
(二甲氨基)乙基)哌嗪
‑1‑
基)
‑2‑
甲氧基苯基)氨基)
‑
2,4,9
‑
三甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(200)的合成。
[0391][0392]
使用4
‑
(4
‑
(2
‑
(二甲氨基)乙基)哌嗪
‑1‑
基)
‑2‑
甲氧基苯胺(25.4mg，0.091mmol，1.5当量)在0.06mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/2％net3/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冷冻干燥，得到白色粉末形式的标题化合物(14.7mg游离碱)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.10(s,1h),8.30(s,1h),8.12(s,1h),7.69(d,j＝8.7hz,1h),6.67(d,j＝2.5hz,1h),6.53(dd,j＝8.8,2.5hz,1h),3.81(s,3h),3.29(s,3h),3.27(s,3h),2.83(s,6h),2.53(s,3h).ms(esi)538.23(m+h)
+
。
[0393]
实施例50：2,4,9
‑
三甲基
‑6‑
((4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)
‑2‑
(2,2,2
‑
三氟乙氧基)苯基)氨基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(201)的合成。
[0394][0395]
使用4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)
‑2‑
(2,2,2
‑
三氟乙氧基)苯胺(20mg，0.069mmol，1.4当量)以0.05mmol规模进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冻干，得到白色粉末形式的标题化合物(2.6mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.28(s,1h),8.22(s,1h),7.50(d,j＝8.8hz,1h),6.74(d,j＝2.6hz,1h),6.58(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),4.73(q,j＝8.9hz,2h),3.25(s,6h),3.13(t,j＝5.0hz,4h),2.53(s,3h),2.45(t,j＝5.1hz,4h),2.22(s,3h).
19
f nmr(471mhz,dmso
‑
d6)δ
‑
72.62(t,j＝8.9hz).ms(esi)548.89(m+h)
+
。
[0396]
实施例51：2,4,9
‑
三甲基
‑6‑
((4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)
‑2‑
丙氧基苯基)氨基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(202)的合成。
[0397][0398]
使用4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)
‑2‑
丙氧基苯胺(17mg，0.068mmol，1.3当量)以0.05mmol规模进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冻干，得到白色粉末形式的标题化合物(6.8mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.24(s,1h),7.96(s,1h),7.57(d,j＝8.8hz,1h),6.55(d,j＝2.6hz,1h),6.41(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),3.88(t,j＝6.5hz,2h),3.21(s,3h),3.19(s,3h),3.05(s,4h),2.46(s,3h),2.20(br s,2h),1.67
–
1.56(m,2h),0.82(t,j＝7.4hz,3h).ms(esi)508.98(m+h)
+
。
[0399]
实施例52：化合物203的三环核心的合成。
[0400][0401]
将异丁酰胺(2.62g，30.0mmol，1.0当量)和劳森试剂(7.23g，18.0mmol，0.6当量)在无水thf(40ml)中的悬浮液加热至70℃持续24小时。将反应烧瓶移出热源，冷却至室温，加入溴丙酮酸乙酯(3.75ml，30.0mmol，1.0当量)，然后将反应恢复至70℃持续2天。然后将反应混合物冷却至室温，用水(100ml)淬灭，并用etoac(3x75ml)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(80g二氧化硅，10
‑
60％etoac/hex，28min梯度)，得到黄色油状的2
‑
异丙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(7.3g，定量产率，约50％纯度)1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.06(s,1h),4.42(q,j＝7.1hz,2h),3.54
–
3.47(m,1h),1.45
–
1.38(m,9h).ms(esi)200.08(m+h)
+
。
[0402]
向2
‑
异丙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(7.3g，18.3mmol，1当量)在乙腈(37ml)中的溶液中加入n
‑
溴代琥珀酰亚胺(8.14g，45.8mmol，2.5当量)。将混合物加热至40℃持续24小时。然后用dcm(100ml)和水(200ml)稀释反应物。除去有机层，水层用dcm(3x75ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用mgso4干燥，过滤，然后浓缩，得到深色粘性油。用isco快速色谱法(40g二氧化硅，15
‑
80％etoac/己烷，20分钟梯度)纯化，得到浅黄色固体形式的5
‑
溴
‑2‑
异丙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(3.35g，2步产率40％)。ms(esi)277.77(m+h)
+
,279.77(m+2+h)
+
。
[0403]5‑
溴
‑2‑
异丙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(1.6g，5.75mmol，1.0当量)、pd2(dba)3(262mg，0.29mmol，0.05当量)、(
±
)
‑
binap(358mg，0.58mmol，0.10当量)、碳酸铯(2.61g，8.0mmol，1.4当量)和二苯甲酮亚胺(1.16ml，6.9mmol，1.2当量)在无水甲苯(23ml)中的混合物用n2鼓泡5分钟。将反应物加热至80℃过夜，然后冷却至室温，用etoac(100ml)稀释，并通过过滤。真空除去溶剂，得到深红色糖浆。中间体5
‑
((二苯基亚甲基)氨基)
‑2‑
异丙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯直接进行水解。ms(esi)378.97(m+h)
+
。
[0404]
将粗5
‑
((二苯基亚甲基)氨基)
‑2‑
异丙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯溶解在thf(20ml)和1m盐酸(4ml)中。混合物在室温下搅拌过夜，此时uplc
‑
ms分析显示亚胺完全水解。用etoac(100ml)稀释反应物，中和至ph～10，用水洗涤两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(24g二氧化硅，25
‑
80％etoac/hex，20min梯度)得到5
‑
氨基
‑2‑
异丙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯，为黄橙色固体(660mg，50％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ5.87(s,2h),4.39(q,j＝7.1hz,2h),3.25(h,j＝7.0hz,1h),1.40(t,j＝7.1hz,3h),1.32(d,j＝6.9hz,6h).ms(esi)215.08(m+h)
+
。
[0405]
用热枪干燥100ml圆底烧瓶。加入氢化钠(107mg，4.42mmol，1.3当量)在无水thf(22ml)中的悬浮液，烧瓶在冰浴上冷却。在5min内向该悬浮液中加入5
‑
氨基
‑2‑
苯基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(728mg，3.4mmol，1.0当量)在thf(10ml)中的溶液。搅拌反应30min，然后滴加碘甲烷(0.31ml，5.1mmol，1.5当量)。将反应物搅拌过夜，缓慢升温至室温。用水(50ml)终止反应。水层用etoac(4x50ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法(20
‑
80％etoac/hex，10min，12g二氧化硅)纯化，得到黄色固体形式的2
‑
异丙基
‑5‑
(甲氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(205mg，26％产率)。ms(esi)229.08(m+h)
+
。
[0406]
用热枪干燥100ml圆底烧瓶。加入氢化钠(38mg，1.56mmol，1.3当量)在无水thf(9ml)中的悬浮液，烧瓶在冰浴上冷却。在4min内向该悬浮液中加入2
‑
异丙基
‑5‑
(甲氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(256mg，1.2mmol，1.0当量)在thf(3ml)中的溶液。将反应物在0℃搅拌20min，然后加入2，4
‑
二氯
‑5‑
硝基嘧啶(350mg，1.8mmol，1.5当量)。将反应物搅拌过夜，缓慢升温至室温。用氯化铵水溶液(40ml)猝灭反应，水层用etoac(4
×
30ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(20
‑
80％etoac/hex，15min，40g二氧化硅)，得到红橙色油状的5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
异丙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(350mg，75％分离产率)。ms(esi)385.87(m+h)
+
。
[0407]
将5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(甲基)氨基)
‑2‑
异丙基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(350mg，0.9mmol，1.0当量)和铁粉(502mg，9.0mmol，10当量)在冰醋酸(13ml)中的悬浮液加热至50
℃持续17小时。将反应冷却至室温，用磁棒除去残留的铁。将粗反应混合物倒入水(100ml)中，搅拌30min。通过抽滤收集沉淀，用水(50ml)洗涤，得到黄色固体形式的6
‑
氯
‑2‑
异丙基
‑4‑
甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(110mg，39％产率)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ9.95(s,1h),8.11(s,1h),3.37(s,3h),3.16(p,j＝6.9hz,1h),1.28(d,j＝6.9hz,6h).ms(esi)309.77(m+h)
+
。
[0408]
在0℃，向6
‑
氯
‑2‑
异丙基
‑4‑
甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(110mg，0.36mmol，1.0当量)和碘甲烷(50.0μl，0.80mmol，2.2当量)在无水dmf(3.5ml)中的悬浮液中一次性加入nah(18.8mg，0.78mmol，2.1当量)。将反应搅拌过夜，然后用水(20ml)淬灭反应，并用etoac(5x10 ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状的6
‑
氯
‑2‑
异丙基
‑
4,9
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(110mg，95％产率)。通过nmr分析，该材料足够纯，并且没有进一步纯化。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.57(s,1h),3.38(s,3h),3.31(s,3h),3.17(p,j＝6.9hz,1h),1.27(d,j＝6.9hz,6h).ms(esi)323.87(m+h)
+
。
[0409]
实施例53：2
‑
异丙基
‑6‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
4,9
‑
二甲基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(203)的合成。
[0410][0411]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(31.6mg，0.104mmol，1.3当量)以0.08mmol规模进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min，45min)。通过制备tlc(10％meoh/dcm)进一步纯化，并从h2o/mecn冻干，得到白色粉末形式的标题化合物(8.5mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.29(s,1h),8.08(s,1h),7.64(d,j＝8.7hz,1h),6.62(s,1h),6.50(d,j＝8.8hz,1h),3.80(s,3h),3.70(s,2h),3.30(s,3h),3.27(s,3h),3.16(p,j＝6.9hz,1h),3.10
‑
2.89(m,4h),2.82
–
2.71(m,2h),2.66(t,j＝12.0hz,2h),1.95
–
1.74(m,2h),1.60
‑
1.44(m,2h),1.27(d,j＝6.9hz,6h).ms(esi)591.99(m+h)
+
。
[0412]
实施例54：化合物204的三环核心的合成。
[0413][0414]
向5
‑
氨基
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(701mg，3.5mmol，1.0当量)和对甲苯磺酸一水合物(52.5mg，0.28mmol，0.08当量)在甲醇(9ml)中的悬浮液中加入三氟乙醛甲基半缩醛(1.34ml，14.0mmol，4.0当量)，并将混合物加热至70℃持续3小时。然后冷却反应，用etoac(30ml)稀释，并倒入饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)中。分离有机层，含水组分用etoac(2x30ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(15
‑
70％etoac/hex，20min，40g二氧化硅)得到2
‑
甲基
‑5‑
((2，2，2
‑
三氟
‑1‑
羟乙基)氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯，为粘稠黄色油状物(644mg，64％分离产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.88(d,j＝8.7hz,1h),5.08(dq,j＝8.7,4.3hz,1h),4.75(d,j＝3.7hz,1h),4.39(q,j＝7.1hz,2h),2.56(s,3h),1.39(t,j＝7.1hz,3h).
19
fnmr(471mhz,cdcl3)δ
‑
82.02(d,j＝4.5hz).ms(esi)284.77(m+h)
+
。
[0415]
在室温下，向2
‑
甲基
‑5‑
((2，2，2
‑
三氟
‑1‑
羟乙基)氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(810mg，2.8mmol，1.0当量)和k2co3(781mg，5.6mmol，2.0当量)在无水thf(15ml)中的悬浮液中加入氯磷酸二乙酯(0.42ml，2.8mmol，1.0当量)，反应进行14小时。然后用无水thf(8ml)稀释混合物，加入nabh4(346mg，9.1mmol，3.3当量)。将反应搅拌6小时，然后用稀nh4cl水溶液淬灭。含水组分用etoac(3x25ml)萃取。用水和盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法(15
‑
70％etoac/hex，20min，24g二氧化硅)纯化，得到2
‑
甲基
‑5‑
((2，2，2
‑
三氟乙基)氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯，为灰白色固体(189.8mg，25％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.66(t,j＝6.1hz,1h),4.40(q,j＝7.1hz,2h),3.80(qd,j＝8.5,7.0hz,2h),2.58(s,3h),1.41(t,j＝7.1hz,3h).
19
f nmr(471mhz,cdcl3)δ
‑
72.46(t,j＝8.5hz).ms(esi)268.87(m+h)
+
。
[0416]
用热枪干燥25ml圆底烧瓶。将氢化钠(42.0mg，1.05mmol，1.5当量，60％矿物油分散体)加入到2
‑
甲基
‑5‑
((2，2，2
‑
三氟乙基)氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(186.2mg，0.70mmol，1.0当量)在无水thf(5.0ml)中的冰冷溶液中。将反应物在0℃搅拌10min，然后加入2，4
‑
二氯
‑5‑
硝基嘧啶(245mg，1.26mmol，1.8当量)。反应在30min内升温至室温，然后加热至60℃
过夜。用稀nh4cl水溶液(40ml)猝灭反应，水层用etoac(4
×
25ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(15
‑
60％etoac/hex，16min，12g二氧化硅)得到黄色油状的5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(2，2，2
‑
三氟乙基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(199.9mg，67％分离产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.63(s,1h),4.77(s,2h),4.27(q,j＝7.1hz,2h),2.74(s,3h),1.26(t,j＝7.1hz,3h).
19
f nmr(471mhz,cdcl3)δ
‑
68.21(t,j＝8.4hz).ms(esi)426.29(m+h)
+
。
[0417]
将5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(2,2,2
‑
三氟乙基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(195.9mg,0.48mmol,1.0当量)和铁粉(253mg,4.5mmol,9.4当量)在冰醋酸(6.0ml)中的悬浮液加热至50℃持续18小时。将反应冷却至室温，用磁棒除去残留的铁。将粗反应混合物倒入水(50ml)中，用dcm(4x10ml)萃取。用饱和nahco3水溶液洗涤合并的有机层两次，然后用盐水再洗涤两次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到黄色泡沫状的6
‑
氯
‑2‑
甲基
‑4‑
(2,2,2
‑
三氟乙基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(154.0mg)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ10.27(s,1h),8.34(s,1h),4.96(q,j＝8.8hz,2h),2.57(s,3h).
19
f nmr(471mhz,dmso
‑
d6)δ
‑
69.58(t,j＝8.9hz).ms(esi)349.77(m+h)
+
。
[0418]
在0℃，向6
‑
氯
‑2‑
甲基
‑4‑
(2,2,2
‑
三氟乙基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(122.8mg，0.35mmol，1.0当量)和碘甲烷(50.0μl,0.80mmol,2.3当量)在无水dmf(4.5ml)中的悬浮液中一次性加入nah(29.6mg，0.74mmol，2.1当量，60％矿物油分散液)。将反应搅拌2小时，并且uplc
‑
ms分析显示原料完全消耗。然后用水(5ml)淬灭反应，并用dcm(4x10ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(12g二氧化硅，0
‑
10％meoh/dcm，12min梯度)得到黄色油状的6
‑
氯
‑
2,9
‑
二甲基
‑4‑
(2,2,2
‑
三氟乙基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(91.1mg，2步产率52％)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.39(s,1h),4.69(q,j＝8.1hz,2h),3.47(s,3h),2.62(s,3h).
19
f nmr(471mhz,cdcl3)δ
‑
70.87(t,j＝8.1hz).ms(esi)363.77(m+h)
+
。
[0419]
实施例55：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2,9
‑
二甲基
‑4‑
(2,2,2
‑
三氟乙基)
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(204)的合成。
[0420]
[0421]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(32.6mg，0.107mmol，1.5当量)在0.07mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了米色粉末形式的标题化合物(2.5mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.52(s,1h),8.44(s,1h),7.50(d,j＝8.6hz,1h),6.72(s,1h),6.58(d,j＝8.5hz,1h),4.88(br s,2h),3.80(d,j＝7.2hz,3h),3.33(s,3h),2.85
–
2.72(m,7h),2.56(s,3h),2.08
–
1.98(m,2h),1.75
–
1.59(m,2h).
19
f nmr(471mhz,dmso
‑
d6)δ
‑
73.58(t,j＝9.3hz).ms(esi)632.00(m+h)
+
。
[0422]
实施例56：化合物205的三环核心的合成。
[0423][0424]
在室温下，在3min内向5
‑
氨基
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(702mg，3.5mmol，1.0当量)和丙醛(0.80ml，10.5mmol，3.0当量)在dce(18ml)中的溶液中分批加入nabh(oac)3(2.260g，10.5mmol，3.0当量)。将反应搅拌4小时，然后用饱和nahco3(100ml)淬灭。含水组分用dcm(3x30ml)提取。用水和盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(24g二氧化硅，20
‑
70％etoac/hex，15min)得到黄色油状的2
‑
甲基
‑5‑
(丙基氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(349mg，43％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ7.33(s,1h),4.37(q,j＝7.1hz,2h),3.17(td,j＝7.0,5.8hz,2h),2.54(s,3h),1.70(h,j＝7.4hz,2h),1.39(t,j＝7.1hz,3h),0.99(t,j＝7.4hz,3h).ms(esi)229.08(m+h)
+
。
[0425]
用热枪干燥50ml圆底烧瓶。加入氢化钠(78.9mg，1.95mmol，1.3当量，60％矿物油分散体)在无水thf(5.0ml)中的悬浮液，烧瓶在冰浴上冷却。在4min内向该悬浮液中加入2
‑
甲基
‑5‑
(丙基氨基)噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(349mg，1.5mmol，1.0当量)在thf(5ml)中的溶液。将反应物在0℃搅拌30min，然后加入2，4
‑
二氯
‑5‑
硝基嘧啶(551mg，2.8mmol，1.8当量)。在1小时内将反应升温至室温，然后加热至68℃持续6小时。用稀nh4cl水溶液(40ml)猝灭反应，水层用etoac(3
×
20ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(20
‑
70％etoac/hex，17min，24g二氧化硅)，得到红色油状的5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(丙基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(327mg，56％分离产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),4.23(q,j＝7.2hz,2h),4.10
–
3.91(m,2h),2.72(s,3h),1.79
–
1.65(m,2h),1.23(t,j＝7.1hz,3h),0.97(t,j＝7.4hz,3h).ms(esi)385.87(m+h)
+
。
[0426]
将5
‑
((2
‑
氯
‑5‑
硝基嘧啶
‑4‑
基)(丙基)氨基)
‑2‑
甲基噻唑
‑4‑
羧酸乙酯(327mg，0.84mmol，1.0当量)和铁粉(469mg，8.4mmol，10当量)在冰醋酸(12ml)中的悬浮液加热至50℃持续18小时。将反应冷却至室温，并用磁棒除去残留的铁。将粗反应混合物倒入水
(100ml)中，用dcm(5x20ml)萃取。用饱和nahco3水溶液洗涤合并的有机层两次，然后再用盐水洗涤两次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到黄色油状的6
‑
氯
‑2‑
甲基
‑4‑
丙基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(245mg，94％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.09(s,1h),3.93(t,j＝7.2hz,2h),2.62(s,3h),1.84(h,j＝7.4hz,2h),1.00(t,j＝7.4hz,3h).ms(esi)309.87(m+h)
+
。
[0427]
在0℃，向6
‑
氯
‑2‑
甲基
‑4‑
丙基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(245mg，0.80mmol，1.0当量)和碘甲烷(0.10ml,1.60mmol,2.0当量)在无水dmf(10ml)中的悬浮液中一次性加入nah(70mg，1.76mmol，2.2当量，60％矿物油分散液)。将反应搅拌1.5小时。然后用水(20ml)淬灭反应，并用dcm(5x8ml)萃取。用水洗涤合并的有机层两次，用盐水洗涤一次，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。用isco快速色谱法纯化(12g二氧化硅，0
‑
10％meoh/dcm，12min梯度)得到黄色半固体形式的6
‑
氯
‑
2,9
‑
二甲基
‑4‑
丙基
‑
4,9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5,4
‑
b]噻唑并[5,4
‑
e][1,4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(64.9mg，25％产率)。1h nmr(500mhz,cdcl3)δ8.09(s,1h),3.93(t,j＝7.2hz,2h),2.62(s,3h),1.84(h,j＝7.4hz,2h),1.00(t,j＝7.4hz,3h).ms(esi)323.77(m+h)
+
。
[0428]
实施例57：6
‑
((2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯基)氨基)
‑
2，9
‑
二甲基
‑4‑
丙基
‑
4，9
‑
二氢
‑
10h
‑
嘧啶并[5，4
‑
b]噻唑并[5，4
‑
e][1，4]二氮杂卓
‑
10
‑
酮(205)的合成。
[0429][0430]
使用2
‑
甲氧基
‑4‑
(4
‑
(4
‑
甲基哌嗪
‑1‑
基)哌啶
‑1‑
基)苯胺(30.1mg，0.105mmol，1.5当量)在0.07mmol规模上进行常规钯偶联。反应混合物通过反相制备hplc纯化(100
‑
50％h2o/mecn，20ml/min,45min)。从h2o/mecn冷冻干燥提供了白色粉末形式的标题化合物(8.0mg tfa盐)。1h nmr(500mhz,dmso
‑
d6)δ8.32(s,1h),8.22(s,1h),7.60(d,j＝8.4hz,1h),6.73(s,1h),6.59(d,j＝8.8hz,1h),3.83
‑
3.77(m,5h),3.73(t,j＝7.2hz,2h),3.28(s,3h),2.81(s,3h),2.53(s,3h),2.04(d,j＝11.9hz,2h),1.77
–
1.61(m,4h),0.89(t,j＝7.3hz,3h).ms(esi)592.09(m+h)
+
。
[0431]
实施例58：fak的ic
50
。
[0432]
酶的ic
50
数据通过thermofisher scientific selectscreen
tm
生化激酶谱分析服务获得，使用z
’‑
lyte
tm
激酶特异性分析，如下所述。测定产生的结果如下表1所示。
[0433]
z
′‑
lyte分析条件
[0434]
测试化合物
[0435]
在孔中的1％二甲基亚砜(dmso)(最终)中筛选测试化合物。对于10点滴定，从起始浓度开始进行3倍系列稀释。
[0436]
肽/激酶混合物
[0437]
所有肽/激酶混合物在合适的激酶缓冲液中稀释至2x工作浓度(完整说明见激酶特异性分析条件部分)。
[0438]
atp溶液
[0439]
所有atp溶液在激酶缓冲液(50mm 4
‑
(2
‑
羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙烷磺酸(hepes)ph 7.5，0.01％brij
tm
‑
35,10mm mgcl2,1mm乙二醇
‑
双(β
‑
氨基乙基醚)
‑
n,n,n
′
,n
′‑
四乙酸(egta))中稀释至4x工作浓度。atp km表观值先前是使用z
′‑
lyte分析法确定的。
[0440]
显影剂溶液
[0441]
显影剂在显影缓冲液中稀释(完整说明见激酶特异性分析条件
‑
直接和级联章节)。
[0442]
10x新型pkc脂质混合物
[0443]
2mg/ml磷脂酰丝氨酸，0.2mg/ml二酰甘油(dag)，溶于20mm hepes，ph 7.4，0.3％3
‑
((3
‑
胆酰胺丙基)二甲基氨基)
‑1‑
丙磺酸酯(chaps)
[0444]
对于5ml 10x新型pkc脂质混合物:
[0445]
将10mg磷脂酰丝氨酸(avanti polar lipids part#8400032c或840039c)和1mg dag(avanti polar lipids part#800811c)加入玻璃管中。通过蒸发从脂质混合物中除去氯仿，得到透明的薄膜。以一定角度连续旋转试管以确保脂质溶液的最大表面积，从而促进形成最薄的薄膜。然后将5ml的重悬缓冲液、20mm hepes和0.3％chaps ph7.4加入到干燥的脂质混合物中，然后将其温和加热至50
‑
60℃持续1
‑
2min。瞬时涡旋，直到脂质溶解，得到清澈或稍显混浊的溶液。脂质通常在2
‑
3次加热/涡旋循环后溶解。然后将溶液冷却至室温，分装成单次使用的体积，并储存在
‑
20℃。
[0446]
分析方案
[0447]
使用带条形码的corning，低容量nbs，黑色384孔板(corning cat.#4514)，加入在100％dmso中的100nl的100x测试化合物。然后是2.4μl激酶缓冲液、5μl 2x肽/激酶混合物和2.5μl
–
4x atp溶液。然后摇动平板30秒，并在室温下保持60min的激酶反应孵育期。此时加入5μl显色剂溶液，并将平板摇动30秒。将平板再次在室温下保持60min的显色反应孵育期，然后在荧光平板读取器上读取并分析。
[0448]
z
′‑
lyte分析对照
[0449]
对每个单独的激酶进行以下对照，并与所述激酶位于同一平板上:
[0450]
0％磷酸化对照(100％抑制对照)
[0451]
最大发射率由0％磷酸化对照(100％抑制对照)确定，其不含atp，并且因此不显示激酶活性。该对照在显色反应中产生100％切割的肽。
[0452]
100％磷酸化对照
[0453]
100％磷酸化对照由与肽底物序列相同的合成磷酸化肽组成，其设计允许计算磷酸化百分比。这种对照在显色反应中产生非常低百分比的裂解肽。
[0454]
0％磷酸化和100％磷酸化对照允许计算特定反应孔中达到的磷酸化百分比。对照孔不包括任何激酶抑制剂。
[0455]
0％抑制对照
[0456]
通过含有活性激酶的0％抑制对照来确定筛选中的最小发射率。该对照被设计成在激酶反应中产生10
‑
50％
*
磷酸化肽。
[0457]
*
级联分析可产生高达70％的磷酸化肽。
[0458]
已知抑制剂
[0459]
在与所述激酶相同的平板上，对每个单独的激酶进行已知的抑制剂对照标准曲线10点滴定，以确保激酶在先前测定的预期ic
50
范围内受到抑制。
[0460]
为每种浓度的测试化合物制备了下列对照:
[0461]
显色反应干扰
[0462]
通过比较不含atp的测试化合物对照孔和0％磷酸化对照孔(不含测试化合物)来建立显色反应干扰。无干扰化合物的期望值应为100％。超出90％到110％的任何值都会被标记。
[0463]
测试化合物荧光干扰
[0464]
通过比较不含激酶/肽混合物的测试化合物对照孔(零肽对照)和0％抑制对照孔来确定测试化合物荧光干扰。非荧光化合物的期望值应为0％。任何大于20％的值都会被标记。
[0465]
激酶特异性分析条件
‑
直接格式
[0466]
2x ptk2(fak)/tyr 07混合物在50mm hepes ph7.5、0.01％brij
‑
35、10mm mgcl2、1mm egta中制备。最终的10μl激酶反应由12.5
‑
100ng ptk2(fak)和2μm tyr 07在50mm hepes ph 7.5、0.01％brij
‑
35、10mm mgcl2、1mm egta中组成。在1小时激酶反应孵育期后，加入5μl 1:16稀释的显色试剂b。
[0467]
绘图软件
[0468]
selectscreen kinase profiling service使用来自id business solutions(idbs)的xlfit。剂量反应曲线与205号模型(乙状结肠剂量反应模型)曲线拟合。如果曲线底部不在
‑
20％&20％抑制之间，则将其设置为0％抑制。如果曲线的顶部不在70％和130％抑制之间，则将其设置为100％抑制。对仲酰胺的初步评估表明，苯胺尾部的邻甲氧基取代基提高了fak ic
50
(表1；1、2、4vs 3)。对苯胺组分(7，10，11，194)的其他修饰是可以接受的，其中磺酰胺取代的11是最有效的。噻唑2
‑
甲基(6)的去除导致效价相对于3损失8倍。相对于3，二氮杂卓酮酰胺(5)的n
‑
甲基化将效价提高了3倍。选择n
‑
烷基化系列进行进一步开发，因为叔酰胺通常比仲酰胺具有更好的pk曲线。结合氢键受体或供体，或寻求降低分子量的各种修饰导致了生化ic50s在30
‑
80nm范围(12
‑
14，16，18
‑
22，28，195，196，198
‑
201)的抑制剂，但没有提高铅化合物5的效价。值得注意的是，其他氨基杂环取代基如二氢喹啉酮23、吡啶24或吡唑26显示出显著降低的效价。同样，对三环核心的修饰通常会导致效价下降。在噻唑2
‑
位的烷基取代增加是可以接受的，具有很小的效力损失，最高可达异丙基(8，193，203)，而苯基取代基则丧失了活性(184，186)。缺电子的噻唑177显示出比5低近10倍的效价。最后，尽管在二氮杂卓酮(132，159)的任一个氮原子上可以耐受乙基，但其他取代基(204，205)的效价稍弱。
[0469]
表1:酶的ic
50
数据
[0470]
[0471][0472]
实施例59：化合物3的
[0473]
如下所述，用对激酶组中的化合物3进行选择性分析。筛选平台采用活性位点导向竞争结合分析来定量测量测试化合物(如化合物3)与450多种激酶和疾病相关突变变体之间的相互作用。
[0474]
化合物3的筛选由eurofins discoverx在10μm的浓度下进行。活性被测量为化合物3相对于阴性对照(即dmso)从固体支持物置换激酶的能力。输出是％对照。相对于对照，不与激酶结合的化合物被报道为100％信号，而完全与激酶结合并将其从支持物上置换的化合物被报道为相对于对照为0％信号。因此，较低的数字表示化合物3的更有效的激酶结合。
[0475]
如图1所示，对于化合物3，403种非突变激酶中的5种非突变激酶显示出<35％相对于对照。具体来说，化合物3成功地与fak、细胞周期蛋白g相关激酶(gak)、abelson(abl)激酶、酪氨酸激酶非受体2(tnk2)和丝裂原活化蛋白激酶5(mek5)结合。表2中的原始数据显示了在中检查的每种激酶的具体参与水平。具体地，如表2所示，fak、gak、
abl、tnk2和mek5分别显示0.55％、4.2％、17％、20％和22％相对于对照。
[0476]
选择性分数(s
‑
score)是指显示低于特定数值的％对照的非突变激酶的数量除以被检测的非突变激酶的数量。如图1所示，化合物3的s评分(35)为0.02，这说明了化合物3在所有被检测的激酶中对fak的选择性。
[0477]
表2:在中化合物3的参与水平。
[0478]
[0479]
表2:(续)
[0480][0481]
表2:(续)
[0482][0483]
表2:(续)
[0484][0485]
表2:(续)
[0486][0487]
表2:(续)
[0488][0489]
表2:(续)
[0490][0491]
表2:(续)
[0492][0493]
表2:(续)
[0494][0495]
表2:(续)
[0496][0497]
实施例60：化合物5的
[0498]
如下所述，用对激酶组中的化合物5进行选择性分析。筛选平台采用活性位点导向竞争结合分析来定量测量测试化合物(如化合物5)与450多种激酶和疾病相关突变变体之间的相互作用。
[0499]
化合物5的筛选由eurofins discoverx在10μm的浓度下进行。活性被测量为化合
物5相对于阴性对照(即dmso)从固体支持物置换激酶的能力。输出是％对照。相对于对照，不与激酶结合的化合物被报道为100％信号，而完全与激酶结合并将其从支持物上置换的化合物被报道为相对于对照为0％信号。因此，较低的数字表示化合物5的更有效的激酶结合。
[0500]
如图2所示，对于化合物5，403种非突变激酶中的16种非突变激酶显示出<35％相对于对照。具体而言，化合物5成功地与fak、细胞周期蛋白g相关激酶(gak)、dcamkl1(dclk1)、dcamkl2(dclk2)、erk5、insrr、lrrk2、mtor、plk1、plk3、plk4、prkd3、rps6ka4(激酶结构域2
–
c端)、rsk3(激酶结构域2
–
c端)、stk33、tnk1和ttk结合。表3中的原始数据显示了在中检验的每种激酶的具体参与水平。具体来说，如表3所示，fak、dcamkl1(dclk1)、dcamkl2(dclk2)、erk5、gak、insrr、lrrk2、mtor、plk1、plk3、plk4、prkd3、rps6ka4(激酶结构域2
–
c端)、rsk3(激酶结构域2
–
c端)、stk33、tnk1和ttk相对于对照分别显示为0.1％、7.9％、3％、30％、31％、22％、32％、31％、0.7％、20％、19％、34％、30％、31％、10％、10％和6.9％。表4列出了生化ic
50
值(invitrogen
tm
)，这些值是针对显示≤10％相对于对照的脱靶率获得的。
[0501]
选择性分数(s
‑
score)是指显示低于特定数值的％对照的非突变激酶的数量除以被检测的非突变激酶的数量。如图2所示，化合物5的s评分(35)为0.042，s(10)为0.012，s(1)为0.005，这说明了化合物5在所有被检测的激酶中对fak的选择性。
[0502]
表3:在中化合物5的参与水平。
[0503]
[0504]
[0505][0506]
表3:(续)
[0507]
[0508]
[0509][0510]
表3:(续)
[0511]
[0512]
[0513][0514]
表3:(续)
[0515]
[0516]
[0517][0518]
表3:(续)
[0519]
[0520]
[0521][0522]
表3:(续)
[0523]
[0524]
[0525][0526]
表3:(续)
[0527]
[0528]
[0529][0530]
表3:(续)
[0531]
[0532]
[0533][0534]
表3:(续)
[0535]
[0536]
[0537][0538]
表3:(续)
[0539]
[0540]
[0541]
[0542][0543]
表3:(续)
[0544]
[0545]
[0546][0547]
表3:(续)
[0548][0549]
表4.在中显示≤10％对照的化合物5的脱靶的生化ic
50
值。
[0550][0551]
实施例61：本发明化合物的抗增殖作用
[0552]
对于2d
‑
粘附单层实验，mda
‑
mb
‑
231细胞以384孔格式铺板，并允许粘附过夜。使用工作站针工具用来自化合物储备板的指示分子处理细胞120小时。为了测量细胞活力，在室温下将cell加入孔中15min，并在envision
tm 2104multilabel plate reader上测量发光。
[0553]
对于超低粘附的3d球体悬浮液，将mda
‑
mb
‑
231细胞以384孔格式铺在含有10％的培养基中，并允许过夜形成球体。使用工作站针工具用来自化合物储备板的指示分子处理细胞120小时。为了测量细胞活力，在室温下将3d cell加入孔中15min，并在envision
tm 2104multilabel plate reader上测量发光。
[0554]
本发明的化合物处理(0.00063
‑
20μm)导致作为2d粘附单层或作为超低粘附3d球体悬浮液培养的mda
‑
mb
‑
231细胞的抗增殖作用(表5)。这些数据表明，fak抑制在2d和3d培养物中导致抗增殖作用。
[0555]
表5.用本发明化合物治疗时的抗增殖作用。
[0556][0557]
所有专利出版物和非专利出版物都表明了本发明所属领域技术人员的技能水平。所有这些出版物都通过引用并入本文，如同每个单独的出版物都被具体地和单独地指出通过引用并入本文。
[0558]
尽管本文已经参照特定实施方案描述了本发明，但是应当理解，这些实施方案仅仅是本发明的原理和应用的说明。因此，应当理解，在不脱离由所附权利要求限定的本发明
的精神和范围的情况下，可以对说明性实施方案进行许多修改，并且可以设计出其他配置。