用于制备包含十六烷化脂肪酸的组合物的方法与流程

用于制备包含十六烷化脂肪酸的组合物的方法
1.本发明涉及包含下述混合物的组合物，所述混合物包含至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物和重量百分比降低的抗氧化剂(例如，lipocet
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)，或者由至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物和重量百分比降低的抗氧化剂(例如，lipocet
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)组成，所述组合物用于治疗关节炎和炎性关节和肌肉骨骼疼痛的方法中。此外，本发明涉及包含下述混合物的组合物，所述混合物包含至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物和任选的抗氧化剂，或者由至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物和任选的抗氧化剂组成，所述组合物用于保护胃粘膜和调节血糖水平的治疗方法中。最后，本发明涉及制备所述至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物的方法和制备包含所述十六烷化脂肪酸和所述抗氧化剂的组合物的方法。
2.包含十六烷化脂肪酸混合物的组合物及其在治疗关节炎和关节炎症中的用途在现有技术中是已知的。例如，专利文献wo 2004/084829 a2和wo 2017/029580 a1描述了一种组合物，其包含十六烷化脂肪酸和相对于组合物的总重量为1重量％至5重量％的任选的生育酚的混合物，例如抗氧化剂。
3.现有技术文献wo 2004/084829 a2没有公开制备至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物的方法。
4.另一方面，现有文献wo 2017/029580 a1示出了用于制备十六烷化脂肪酸的混合物的方法，以及用于进行所述方法的系统。然而，由现有文献wo 2017/029580 a1已知的方法没有提供如下文更详细讨论的步骤(ii)、步骤(iv)、步骤(v)、步骤(vi)、步骤(vii)和步骤(viii)。
5.现有技术文献us 4113881 a公开了一种减轻和抑制哺乳动物中炎性类风湿性关节炎症状的方法，该方法使用合成获得的鲸蜡基肉豆蔻烯酸酯，或更优选地如实施例1中所示的通过从浸渍的小鼠组织中提取获得的物质。因此，现有技术文献us4113881a没有说明其中使至少一种脂肪酸、鲸蜡醇和金属催化剂接触以获得反应混合物的方法。
6.现有技术文献wo 2010/079514 a1说明了制备鲸蜡基肉豆蔻烯酸酯的两种异构体(顺式-9-十四碳烯酸十六烷基酯和顺式-10-十四碳烯酸十六烷基酯)的方法，以及后者在治疗骨关节炎和其他炎性疾病中的治疗用途。现有技术文献wo 2010/079514a1中讨论的方法尤其包括在溶剂存在下在-70℃至-78℃的温度下的冷却步骤，臭氧分解步骤和酶促酯交换步骤。因此，这种方法并非没有溶剂的情况下进行，它不通过施加加热斜坡(heating ramp)来进行，并且需要与本文提出的方法本质上不同的步骤。
7.最后，文献nz 332959a描述了一种制备十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化棕榈酸的混合物的方法，该方法包括使肉豆蔻酸和棕榈酸与鲸蜡醇在高温、在至少一种酸催化剂和至少一种作为溶剂的芳烃存在下反应的步骤。文献nz 332959a解释了完全不存在溶剂导致不可能产生大量的酯，并且因此包含在不存在溶剂的情况下操作以不抑制酯形成的明显阻碍，这与本发明的方法主题相反。
8.本发明针对和解决的技术问题在于提供包含相对于已知组合物而言改进的十六烷化脂肪酸的组合物，其有效治疗关节炎和炎性关节以及肌肉骨骼病症，以及保护胃粘膜
和调节血糖水平，无不良影响，可良好耐受，在氧化剂的作用方面随时间稳定，并且此外在经济上有利于生产。
9.为了克服上述技术问题，本发明提供了组合物(药物组合物，医疗装置组合物，新型食品(食品或特殊医疗用途的食品(fsmp)或医疗食品)，膳食补充剂或化妆品组合物，简言之：本发明的组合物包含至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物和任选的至少一种抗氧化剂(例如lipocet
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)。
10.抗氧化剂的存在使得本发明的组合物随时间稳定，因为活性成分(十六烷化脂肪酸)的滴定度随时间几乎保持不变，保护十六烷化脂肪酸免受氧化剂的作用。因此，抗氧化剂的存在使得本发明的组合物在功效、运输、储存以及保存时间和从第一次打开包含本发明的组合物的包装的时刻起的模式方面是有利的。
11.此外，相对于现有技术的基于十六烷化脂肪酸的组合物，抗氧化剂以较少重量百分比存在，这使得本发明的组合物在经济上有利于大规模生产(即使用较低量的抗氧化剂)，且例如在施用给儿科受试者时可高度耐受。
12.本发明的所述组合物(例如lipocet
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)能够有效且快速地治疗关节和/或肌肉类型的症状或病症，例如本说明书下文(i)至(vi)中所列的疾病、症状或病症。
13.此外，本发明的所述组合物能够(i.i)保护胃粘膜，(i.ii)治疗糖尿病和(i.iii)治疗糖尿病以外的源于高血糖水平或与高血糖水平相关的疾病和/或病症。
14.最后，本发明提供了制备所述至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物的第一方法，和制备本发明的包含所述至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物(通过所述第一方法制备)和抗氧化剂(例如lipocet
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)的所述组合物的第二方法。
15.所述方法易于应用且经济上有利。
16.此外，所述第一方法，通过在用于形成酯的步骤的全部时间内组合施加惰性气体流并仅在用于形成所述酯的步骤的最后部分中在反应器的室中施加真空程序，而有利地能够实现酸的完全转化，并且在简单和经济的操作条件下能够实现酯生产的优异产率。
17.最后，所述第一方法确保了基本上不含痕量催化剂的十六烷化脂肪酸的生产，因此对于健康是安全的，并且被施用它们的受试者良好耐受。
18.这些和其它目的将从下面的详细描述中清楚地看出，这些和其它目的通过本发明的组合物、混合物和方法实现，这得益于所附权利要求中要求保护的技术特征。
具体实施方式
19.在深入研究后，本技术人已经开发了新型组合物，它们在治疗性和非治疗性治疗方法中的用途以及它们的制备方法，如在本说明书中详细报道的那样。
20.图1、2和3显示了用于实施制备(a)至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物的第一方法的设备。
21.图4a、4b和4c显示了实验部分3所述的组合物在细胞培养物中的il6测定。
22.图5a、5b和5c显示了实验部分3所述的组合物在细胞培养物中的ltc4测定。
23.图6a、6b和6c显示了实验部分3所述的组合物在细胞培养物中的pge2测定。
24.构成本发明的一个目的的是包含下述(i)和任选的(ii)的组合物(简言之，本发明的组合物)(例如，lipocet
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)，其中：
25.(i)包含以下成分或者由以下成分组成的混合物(简言之，本发明的混合物)：
26.(a)至少一种十六烷化脂肪酸(或十六烷化脂肪酸的混合物)，其中所述脂肪酸的碳数为c6至c21、优选c8至c18、更优选c14至c18，并且其可以是饱和的或不饱和的，以及，任选地，
27.(b)至少一种抗氧化剂，相对于所述组合物的总重量，其以重量％计的含量为0.001％至0.5％、或0.001％至0.4％、或0.001％至0.3％、或0.001％至0.2％、或0.001％至0.1％，优选为0.005％至0.1％，更优选为0.01％至0.08％；以及
28.(ii)至少一种食品或药物级添加剂和/或赋形剂。
29.本发明的组合物可以是药物组合物，医疗装置组合物，新型食品(食品或饮料或用于特殊医疗目的的食品/饮料(fsmp)或医疗食品)(例如lipocet
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)或膳食补充剂或用于新型食品或膳食补充剂的组合物或化妆品组合物。
30.在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含(i)混合物，所述(i)混合物包含以下成分，或者由以下成分组成：
31.所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸(或十六烷化脂肪酸的混合物)，其中所述脂肪酸是c6-c21、c8-c18或c14-c18并且其是饱和的或不饱和的，和
32.所述(b)至少一种抗氧化剂，其量相对于该组合物的总重量为0.001重量％至0.5重量％、或0.001重量％至0.4重量％、或0.001重量％至0.3重量％、或0.001重量％至0.2重量％、或0.001重量％至0.1重量％、或0.005重量％至0.1重量％、或0.01重量％至0.08重量％。
33.所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸(或十六烷化脂肪酸的混合物)是用十六烷醇(1-十六烷醇，ch3(ch2)
15
oh)酯化的脂肪酸或用十六烷醇酯化的脂肪酸的混合物。
34.优选地，(a)至少一种十六烷化脂肪酸的脂肪酸选自包含以下物质或者由以下物质组成的组：月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、花生酸及其混合物；更优选地，所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸是包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物的十六烷化脂肪酸的混合物，或者是由十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物组成的十六烷化脂肪酸的混合物；甚至更优选地，所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸是包含十六烷化肉豆蔻酸、十六烷化油酸、十六烷化亚油酸和十六烷化棕榈酸的十六烷化脂肪酸的混合物，或者是由十六烷化肉豆蔻酸、十六烷化油酸、十六烷化亚油酸和十六烷化棕榈酸组成的十六烷化脂肪酸的混合物。
35.根据包含(a)、(b)和(c)-lipocet
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(根据任何所述的实施方案)的本发明组合物的实施方案，脂肪酸谱包含以下成分，或者由以下成分组成：
[0036]-(a1)肉豆蔻酸：30％至55％，优选35％至50％，更优选约41％；
[0037]-(a2)油酸：35％至60％，优选40％至55％，更优选约46％；
[0038]-(a3)亚油酸：3％至12％，优选5％至10％，更优选约8％；
[0039]-(a4)棕榈酸：1％至8％，优选2％至6％，更优选约3％；
[0040]-(a5～a9)各种脂肪酸(非肉豆蔻脑酸)：1％至4％，优选1.5％至3％，更优选约1.8％；其中％为相对于(a1)至(a9)的脂肪酸的总重量的重量％。
[0041]
在一个实施方案中，所述(a)包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，条件是所述(a)不包含十六烷化肉豆蔻脑酸，特别是当本发明的组合物用于治疗关节炎和炎
性关节以及肌肉骨骼疼痛的方法中时。
[0042]
在另一实施方案中，所述(a)包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，其还可以包含十六烷化肉豆蔻脑酸，特别是当本发明的组合物用于保护胃粘膜和调节血糖水平的治疗方法中时。
[0043]
肉豆蔻酸是十四烷酸(ch3(ch2)
12
cooh)，是存在于乳衍生物(黄油、奶油和干酪)、椰子油、棕榈籽油和一些香辛料(肉豆蔻)中的具有14个碳原子的饱和脂肪酸。用于本发明的肉豆蔻酸可以例如选自具有以下百分比组成(glc)的cas544-63-8(einecs 208-875-2)为99％的那些：低于或等于1的月桂酸c12:0；高于或等于99％的肉豆蔻酸c14:0；低于或等于1的棕榈酸c16:0。
[0044]
油酸是顺式-9-十八碳烯酸(ch3(ch2)7chch(ch2)7cooh)，一种具有18个碳原子的单不饱和羧酸，并且是大多数植物油中最丰富的组分。
[0045]
本发明中使用的油酸可以例如选自具有以下组成百分比(％；glc)的油酸cas112-80-1(einecs 204-007-1)为至少78％的那些，例如：低于或等于0.5的[月桂酸+肉豆蔻酸]c12:0+c14:0；高于或等于78％的油酸c18:1；低于或等于15的亚油酸c18：2和低于或等于1的其他c18:3。
[0046]
用于本发明的鲸蜡醇(1-十六烷醇)可以例如选自具有cas 36653-82-4(einecs253-149-0)的那些。
[0047]
有利地，当所述(a)包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物或由十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物组成时，十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸之间的摩尔比为4:1至1:1，优选为3:1至1.5:1，更优选为(2.0
±
0.2):1.
[0048]
在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含(i)混合物，所述(i)混合物包含以下成分，或由以下成分组成：
[0049]
(a)摩尔比优选为4:1至1:1或3:1至1.5:1、或优选为(2.0
±
0.2):1的十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，和
[0050]
(b)至少一种抗氧化剂，相对于该组合物的总重量，其为0.001％至0.5％、或0.001％至0.3％、或0.001％至0.2％、或0.001％至0.1％、或0.005％至0.1％、或优选0.01％至0.08％。
[0051]
在本说明书中出于报道的目的，与(a)以及任选地与(c)一起包含在本发明组合物中的抗氧化剂可以是本领域技术人员认为适用于药物组合物、医疗装置组合物、新型食品(食品)、补充剂或化妆品组合物的任何抗氧化剂。
[0052]
通常将抗氧化剂加入到主要含有脂肪的食品中，以延迟在氧存在下开始的酸败的发展。天然抗氧化剂包括类黄酮、多酚、抗坏血酸(维生素c)和生育酚(维生素e)。合成抗氧化剂包括丁基羟基苯甲醚(bha)、丁基羟基甲苯(bht)和乙氧基喹啉。
[0053]
优选地，所述(b)至少一种抗氧化剂选自包含以下物质、或者由以下物质组成的组：叔丁基氢醌(tbhq)、tla(如本发明所定义)、生育酚(例如乙酸生育酚)或生育酚的混合物、天然迷迭香萃取物、小麦胚芽油(triticum vulgare)，丁基化羟基甲苯及其混合物、小麦胚芽油(triticum vulgare)；更优选地，(b)是叔丁基氢醌(tbhq)。
[0054]
叔丁基氢醌(tbhq)在食品工业中用作不饱和植物油和许多食用动物脂肪的防腐剂。tbhq被授权作为欧盟的食品添加剂，其可接受的每日摄入量(adi)为0.7mg/kg体重，并
用代码e319标识。
[0055]
tla(注册商标)是例如在化妆品领域中使用的有效对抗脂肪酸败现象的抗氧化剂的商品名。tla是包含10％至15％生育酚((
±
)-α-生育酚)、》50％卵磷脂、8％至10％抗坏血酸棕榈酸酯(由抗坏血酸和棕榈酸形成的酯，产生维生素c的脂溶性形式)和《1％柠檬酸的混合物(inci名称：卵磷脂，生育酚((
±
)-α-生育酚)，抗坏血酸棕榈酸酯，柠檬酸；cas编号：8002-43-5，10191-41-0，137-66-6，77-92-9)。
[0056]
在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含(i)混合物，所述(i)混合物包含以下成分，或者由以下成分组成：
[0057]
所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸(或十六烷化脂肪酸的混合物)，其中所述脂肪酸是c6-c21、c8-c18或c14-c18并且是饱和的或不饱和的，和
[0058]
(b)叔丁基氢醌(tbhq)，相对于所述组合物的总重量，其按重量计为0.001％至0.5％、或0.001％至0.3％、或0.001％至0.2％、或0.001％至0.1％、或0.005％至0.1％、或0.01％至0.08％。
[0059]
在一个优选的实施方案中，本发明的组合物包含(i)混合物，所述(i)混合物包含以下成分，或由以下成分组成：
[0060]
(a)十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，二者优选摩尔比为4:1至1:1或3:1至1.5:1、或优选为(2.0
±
0.2):1，以及
[0061]
(b)叔丁基氢醌(tbhq)，相对于该组合物的总重量，其按重量计为0.001％至0.5％、或0.001％至0.3％、或0.001％至0.2％、或0.001％至0.1％、或0.005％至0.1％、或0.01％至0.08％。
[0062]
在一个更优选的实施方案中，本发明的组合物包含(i)混合物，所述(i)混合物包含以下成分，或者由以下成分组成：
[0063]
(a)十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸以3:1至1.5:1、或优选(2.0
±
0.2):1的摩尔比的混合物，以及
[0064]
(b)叔丁基氢醌(tbhq)，相对于所述组合物的总重量，其按重量计为0.01％至0.08％。
[0065]
在另一个实施方案中，除了(a)和任选的(b)之外，本发明的(i)混合物还包含(c)植物油。
[0066]
优选地，所述(c)植物油选自包含以下物质、或者由以下物质组成的组：具有高油酸含量的橄榄油、向日葵油、玉米油或其混合物，具有高油酸含量的任何植物油及其混合物。有利地，(c)是橄榄油。所述油中油酸和/或三油酸甘油酯的重量含量为55％至95％，优选为60％至90％，甚至更优选为65％至85％，例如70％至80％。
[0067]
在一个优选的实施方案中，本发明的(i)混合物包含以下成分，或者由以下成分组成：
[0068]
所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸(或十六烷化脂肪酸的混合物)，优选为十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，相对于组合物的总重量，其以重量％计的含量为50％至90％，优选为60％至85％，更优选70％至80％；
[0069]
所述(b)至少一种抗氧化剂，优选为叔丁基氢醌(tbhq)，相对于组合物的总重量，
其以重量％计的含量为0.001％至0.5％、或0.001％至0.3％、或从0.001％至0.2％、或从0.001％至0.1％、优选为0.005％至0.1％，更优选0.01％至0.08％；以及
[0070]
所述(c)植物油，优选为橄榄油，相对于组合物的总重量，其以重量％计的含量为9.5％至50％，优选为14.5％至40％，更优选为19.5％至30％。
[0071]
在一个优选的实施方案中，本发明的(i)混合物包含以下成分，或者由以下成分组成：
[0072]
(a)十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，二者摩尔比为4:1至1:1或3:1至1.5:1、或优选为(2.0
±
0.2):1；优选地，相对于组合物的总重量，其以重量％计的含量为60％至85％，优选为70％至80％；
[0073]
(b)叔丁基氢醌(tbhq)，相对于组合物的总重量，其以重量％计的含量为0.005％至0.1％，优选为0.01％至0.08％；以及
[0074]
(c)橄榄油，相对于组合物的总重量，其以重量％计的含量为14.5％至40％，优选为19.5％至30％。
[0075]
在更优选的实施方案中，本发明的(i)混合物包含以下成分，或者由以下成分组成：
[0076]
(a)摩尔比为(2.0
±
0.2):1的十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，并且以重量％计的含量为70％至80％；
[0077]
(b)叔丁基氢醌(tbhq)，相对于组合物的总重量，以重量％计的含量为0.01％至0.08％；以及
[0078]
(c)橄榄油，相对于组合物的总重量，以重量％计的含量为19.5％至30％。
[0079]
构成本发明的一个目的的是在本说明书中报道的本发明的组合物(例如，lipocet
tm
)，其包含：(i)本发明的混合物，其包含(a)和(b)和任选的(c)(如上所定义)，或由(a)和(b)和任选的(c)(如上所定义)组成；和任选的(ii)至少一种食品级或药物级添加剂和/或赋形剂，所述组合物在以治疗有效量施用于有需要的受试者时用作药物。
[0080]
构成本发明的一个目的的是本发明的组合物(例如，lipocet
tm
)，其包含(a)和(b)以及任选的(c)(根据本说明书中描述的所有实施方案)，当给予有需要的受试者时，其用于预防性和/或治疗性和/或对症治疗疾病、症状或病症，例如(i)炎性和非炎性来源的类风湿性关节炎，特别是骨关节炎；(ii)类风湿性关节炎以外的关节炎症；(iii)牛皮癣、狼疮、牙周病或心血管病或心脏病；(iv)创伤后骨关节和肌肉骨骼疾病，包括运动相关的创伤，例如耻骨痛或运动性耻骨痛(耻骨痛是指腹部和腹股沟的慢性疼痛)；(v)退行性关节疾病，优选骨关节炎、膝关节病、髋关节病，和/或(vi)肌腱和肌肉相关的炎性/创伤性病症。
[0081]
优选地，用于治疗如上定义的(i)至(vi)的疾病或病症的方法中的本发明的组合物包含(i)混合物，所述(i)混合物包含以下成分或由以下成分组成：
[0082]
(a)十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，二者的摩尔比为3:1至1.5:1、优选为(2.0
±
0.2):1，以及
[0083]
(b)叔丁基氢醌(tbhq)，相对于组合物的总重量，其占0.01重量％至0.08重量％。
[0084]
优选地，用于治疗如上定义的(i)至(vi)的疾病或病症的方法中的本发明的组合物包含(i)混合物，所述混合物包含以下成分或由以下成分组成：
[0085]
(a)摩尔比为(2.0
±
0.2):1的十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，以重
量％计为70％至80％；
[0086]
(b)叔丁基氢醌(tbhq)，相对于组合物的总重量，以重量％计为0.01％至0.08％；以及
[0087]
(c)橄榄油，相对于组合物的总重量，以重量％计为19.5％至30％重量％。
[0088]
用于治疗如上定义的(i)至(vi)的疾病、症状或病症的方法中的本发明的所述组合物优选通过局部或经皮途径施用至所述受试者，更优选通过局部途径施用至所述受试者。有利地，混合物(a)中包含的(a1)至(a7)的十六烷化脂肪酸的分子量为420da至510da。该分子量范围能够使得混合物(a)、并因此能够使得本发明的组合物有效地克服真皮屏障(皮肤)，促进其通过局部途径吸收。
[0089]
或者，用于治疗如上定义的(i)至(vi)的疾病、症状或病症的方法中的本发明的所述组合物优选通过口服途径施用至所述受试者。
[0090]
构成本发明的一个目的的是本发明的组合物(例如，lipocet
tm
)，其包含(a)和(b)以及任选的(c)(根据本说明书中描述的所有实施方案)，当施用于有需要的受试者时，其用于预防性和/或治疗性和/或对症治疗以下病症或症状的方法中：(i.i)源于胃粘膜损伤或与胃粘膜损伤相关的症状和/或病症(用于保护胃粘膜的治疗)，(i.ii)糖尿病和源于糖尿病或与糖尿病相关的病症或症状，(i.iii)除糖尿病以外的源于高血糖水平或与高血糖水平相关的疾病和/或病症。
[0091]
所述(i.i)来源于胃粘膜损伤或与胃粘膜损伤相关的症状或病症(胃粘膜保护)选自包含以下病症、或者由以下病症组成的组：胃溃疡、胃食管反流(gerd)、胃灼热。
[0092]
有利地，在大鼠体内观察到通过在大鼠中使用本发明的组合物发挥的对胃粘膜的有效且持久的保护。已知胃粘膜发挥屏障作用，它由覆盖胃部粘膜的约0.2mm的粘膜层组成。该屏障的目的是保护胃上皮免受由胃壁细胞产生的hcl的损伤作用。它来源于高分子量(因此非常粘)粘蛋白液滴的产生(通过胃表面细胞)和来源于碳酸氢盐的产生。
[0093]
因此，构成本发明的目的的是一种组合物(参见表2或样品2-6)，其用于(预防性和/或治愈性)治疗源于胃粘膜损伤或与胃粘膜损伤相关的病症或症状的方法中，所述病症或症状选自包含以下病症、或者由以下病症组成的组：胃溃疡、胃食管反流(gerd)、胃灼热。
[0094]
所述(i.iii)除糖尿病以外的源于高血糖水平或与高血糖水平相关的疾病和/或病症选自包含以下病症、或者由以下病症组成的组：高血糖、慢性肝病、肥胖症。
[0095]
有利地，发现通过以高剂量(例如高于1600mg/kg的剂量)向大鼠体内施用本发明的组合物(例如样品4的组合物)，经治疗的大鼠的血液中的葡萄糖水平在统计学上显著降低。
[0096]
因此，构成本发明的目的的是一种组合物(参见表2或样品2-6)，其用于治疗糖尿病或除糖尿病以外的源于高血糖水平或与高血糖水平相关的疾病和/或病症(例如高血糖、慢性肝病和肥胖症的情况)的方法中。
[0097]
用于治疗如上定义的(i.i)至(i.iii)的疾病、症状或病症的方法中的本发明的所述组合物优选通过口服途径施用至所述受试者。
[0098]
优选地，用于治疗如上定义的(i.i)至(i.iii)的疾病或病症的方法中的本发明的组合物包含(i)混合物，所述(i)混合物包含以下成分，或者由以下成分组成：
[0099]
(a)十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，二者摩尔比优选为4:1至1:1或
3:1至1.5:1、或优选为(2.0
±
0.2):1，以及
[0100]
(b)相对于组合物的总重量为0.01重量％至0.08重量％的叔丁基氢醌(tbhq)。
[0101]
本发明的组合物可以配制成液体形式，例如溶液、双相液体系统或乳液、悬浮液、糖浆、喷雾剂、软膏、油或饮料；或者配制成半固体形式，例如凝胶、软凝胶、乳膏、泡沫；或者配制成固体形式，例如粉末、喷雾粉末(喷雾干燥)、颗粒、微粒、薄片、聚集体、口腔可溶棒、片剂、泡腾片剂、胶囊、栓剂、条或食品，以及本领域技术人员已知的等效形式。
[0102]
例如，本发明的组合物可以配制成口服使用的胶囊，其包含(a)本发明的十六烷化脂肪酸的混合物，(b)本发明所述百分比的至少一种抗氧化剂，和赋形剂，例如明胶、甘油和/或防腐剂(例如lipocet
tm
)。在一个实施方案中，组合物为300mg牛明胶胶囊的形式。
[0103]
有利地，当本发明的组合物用于口服使用时，将其配制成固体或液体形式，更优选地配制成胶囊、或油、或粉末、或喷雾粉末(喷雾干燥)、或喷雾液体、或饮料或食品的形式。
[0104]
有利地，当本发明的组合物用于口服使用时，将其配制成固体或液体形式，更优选地配制成油、或粉末、或喷雾粉末(喷雾干燥)、或喷雾液体的形式。
[0105]
有利地，当本发明的组合物用于局部使用时，其以半固体形式配制，更优选以乳膏或凝胶形式配制。
[0106]
有利地，当本发明的组合物用于透皮使用时，将其配制成适于通过贴剂施用的形式。
[0107]
构成本发明的目的的是用于治疗以上(i)至(vi)的疾病、症状或病症的方法，该方法优选地通过对有需要的受试者经局部、或经皮途径施用有效量的在本说明书中描述的包含(a)、或(a)和(b)、或(a)和(b)和(c)的本发明的组合物之一来进行，或者是用于治疗以上(i.i)至(i.iii)的疾病、症状或病症的方法，该方法优选地通过对有需要的受试者口服施用有效量的在本说明书中描述的包含(a)、或(a)和(b)、或(a)和(b)和(c)的本发明的组合物之一来进行。
[0108]
本发明组合物的适当测定将取决于例如待治疗/预防的病症、病症的严重程度和病症的进程，取决于出于预防或治疗目的而施用组合物的事实、先前的疗法、患者的临床病史和对组合物的反应以及治疗医师的判断。
[0109]
当本发明的组合物通过局部途径施用时，施用的组合物的量为每天约1mg/kg至15mg/kg所述受试者的体重，优选为3mg/kg至10mg/kg，更优选为5mg/kg至8mg/kg。此外，本发明的组合物，例如乳膏或凝胶，通过局部途径施用在待治疗区域的直径为1cm至25cm的区域上，这取决于所讨论的解剖学区域(例如手指：3cm，背部：20cm)。
[0110]
当本发明的组合物通过口服途径施用时，施用的组合物的量为每天约100mg/kg至5000mg/kg所述受试者的体重，优选200mg/kg至4500mg/kg，更优选300mg/kg至4000mg/kg。
[0111]
本发明的组合物适合于一次全部或在几次治疗中施用至受试者。
[0112]
组合物可以作为单一治疗物施用或与其它组合物或疗法(即作为辅佐剂)组合施用，所述其它组合物或疗法可用于如本说明书中所述的(i)至(vi)中和/或(i.i)至(i.iii)中的疾病、症状和/或病症的预防性和/或治疗性和/或对症治疗。
[0113]
构成本发明的目的的是本发明的包含(a)、或(a)和(b)、或(a)和(b)和(c)的组合物用于保护胃粘膜的非治疗用途，其中所述组合物优选配制用于口服使用。
[0114]
本发明的组合物保护胃粘膜以防止其损伤，并因此防止与胃区域有关的疾病的发
作，例如胃溃疡、胃食管反流(gerd)、胃灼热。
[0115]
在本发明的上下文中，表述“受试者”用于表示人类受试者或动物受试者(例如宠物，如狗或猫或其他哺乳动物)。优选地，本发明的组合物用于人类受试者的治疗方法。
[0116]
在本发明的上下文中，表述“治疗方法”用于表示一种作用，其包括施用一种物质，或物质的混合物或其组合，目的是消除、降低/减少或预防病理或疾病及其症状或病症。
[0117]
在本发明的上下文中，表述“医疗装置”根据1997年2月24日的意大利立法法令第46号(或根据新医疗装置法规(ue)2017/745(mdr))所规定的含义使用，即，其表示由制造商指定的单独或组合使用的物质或另一种产品，其在人类中用于疾病的诊断、预防、防治、治疗或减轻，该产品不在人体中或人体上施展主要作用，其指定既不使用药理学或免疫学手段也不通过代谢过程，但其功能可通过此类手段协调。
[0118]
本发明的组合物任选地包含(ii)至少一种食品或药物级添加剂和/或赋形剂，例如适合于药物或食品用途的无治疗活性的物质，例如稀释剂、溶剂(例如水、甘油，乙醇)、增溶剂、增稠剂、甜味剂、抗结块剂、增味剂、着色剂、润滑剂、表面活性剂、抗微生物剂、抗氧化剂、防腐剂、ph稳定缓冲剂、酸化剂和本领域技术人员已知的所有辅助物质。
[0119]
除所述(a)、(b)和任选的(c)外，本发明的组合物还可包含其它活性组分，例如抗炎剂、益生菌、抗酸剂、用于治疗关节和/或肌肉相关病症的产品、b和e族维生素、无机盐、止痛剂、叶酸或叶酸盐、薄荷醇、葡糖胺、软骨素、甲基磺酰基甲烷(msm)、精油。
[0120]
除非另外指明，否则组合物“包含”一种或多种成分或物质的指示意指除具体指明的一种或多种成分或物质之外还可存在其它成分或物质。
[0121]
除非另外指明，否则表述组合物包含“x至y”的量的成分用于指示所述成分可以以存在于所述范围内的所有量存在于组合物中，即使未指定所述范围的极值。
[0122]
构成本发明的目的的是用于制备如本说明书中所定义的所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸(或十六烷化脂肪酸的混合物)的第一方法，其包括以下步骤(图1)：
[0123]
(i)将至少一种脂肪酸、鲸蜡醇和催化剂(优选金属催化剂)在不存在溶剂的情况下在反应器2的室3中接触，以获得反应混合物15；然后
[0124]
(ii)用惰性气体饱和容器3，使容器3达到约1个大气压的压力p1，施加通过所述室3的所述惰性气体流，优选为5m3/h至0.05m3/h，更优选为0.5m3/h的流量；然后
[0125]
(iii)在约1个大气压的压力p1下和在惰性气体流的存在下，对所述反应混合物15施加第一加热斜坡(heating ramp)直至达到120℃至200℃、优选145℃至175℃、更优选160℃的温度t1，以引发酯化反应，初始形成所述十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物和酯化水；然后
[0126]
(iv)将所述反应混合物15在所述温度t1和压力p1下保持搅拌10分钟至2小时、优选30分钟至1.5小时、更优选1小时的时间；然后
[0127]
(v)在约1个大气压的压力p1下和在惰性气体流的存在下，对所述反应混合物15施加第二加热斜坡直至达到201℃至260℃、优选210℃至240℃、更优选220℃的温度t2，以继续酯化反应，进一步形成所述十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物和酯化水；然后
[0128]
(vi)将所述反应混合物15在所述温度t2和压力p1下并且在惰性气体流的存在下保持搅拌4小时至12小时、优选6小时至10小时、更优选8小时的时间；优选直至使用aocs官方方法cd 3d-63测量的反应混合物15的酸度值随时间稳定且为5mgkoh/g至8mgkoh/g；然后
[0129]
(vii)在室3中应用真空程序，降低反应压力直至达到100毫巴至10毫巴、优选80毫巴至30毫巴、更优选50毫巴的减压p2；然后
[0130]
(viii)将所述反应混合物15在所述减压p2下和在惰性气体流的存在下保持搅拌30分钟至4小时，优选1小时至2小时，更优选2小时；优选直至使用aocs官方方法cd 3d-63测量的反应混合物15的酸度值为4.5mgkoh/g至3.5mgkoh/g，优选4mgkoh/g，以完全形成所述至少一种未精制的十六烷化脂肪酸或未精制的十六烷化脂肪酸的混合物(mi)。
[0131]
通过将用于形成酯的步骤的部分或全部时间的惰性气体流和仅在用于形成所述酯的步骤的最后部分中的反应器室中的真空程序组合应用，所述第一方法有利地能够实现以优异的产率移除酯化水和将脂肪酸完全转化成酯。所述第一方法应用简单且经济上有利，因为不必在酯化反应的全部时间内应用真空程序。
[0132]
在所述第一方法的实施方案(fr1)中，所述至少一种脂肪酸选自包含以下物质或者由以下物质组成的组：月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、花生酸以及其混合物；优选选自肉豆蔻酸、油酸以及肉豆蔻酸和油酸的混合物；更优选肉豆蔻酸和油酸的混合物，甚至更优选肉豆蔻酸和油酸的混合物，条件是所述混合物中包包含肉豆蔻脑酸。
[0133]
在所述第一方法的实施方案(fr2)中，使用位于反应混合物15上方的室3容积部分中的吹送装置7施加所述惰性气体流(图1)。
[0134]
在所述第一方法的实施方案(fr3)中，在酯化反应期间通过施加上述惰性气体流和真空程序，从室3抽出的酯化水在水平冷凝器11中冷凝并在流过垂直冷凝器16之后收集在容器13中(图2和3)。
[0135]
在所述第一方法的实施方式(fr4)中，所述水平冷凝器11保持在10℃至40℃的温度下，并且通过竖直冷凝器16连接至所述容器3，所述竖直冷凝器16保持在70℃至90℃的温度下(图3)。
[0136]
在所述第一方法的实施方案(fr5)中，除了步骤(i)-(viii)之外，所述第一方法还包括步骤(ix)：在压滤机23(图3)中经漂白土和/或过滤土过滤从步骤(viii)获得的所述至少一种未精制的十六烷化脂肪酸或未精制的十六烷化脂肪酸的混合物(mi)，以获得至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸或经过滤的十六烷化脂肪酸的混合物(mf)，其中金属催化剂基本上不存在，或相对于所述经过滤的十六烷化脂肪酸或经过滤的十六烷化脂肪酸的混合物(mf)的重量，以小于或等于2重量％的量存在，优选以0.01重量％至1.5重量％的量、甚至更优选0.05重量％至1重量％的量、例如0.5重量％的量存在。
[0137]
金属催化剂(零氧化态金属)、优选金属锌，优选以粉末形式使用，优选为粉末金属锌。相对于反应试剂(即脂肪酸或脂肪酸混合物+鲸蜡醇)的总重量，催化剂的添加量为0.01重量％至0.5重量％，优选为0.05重量％至0.25重量％，甚至更优选为0.1重量％。
[0138]
在所述第一方法的实施方案(fr6)中，除了步骤(i)-(ix)之外，所述第一方法还包括步骤(x)(除臭步骤)：在反应器27(图3)中，在150℃至200℃、优选165℃至180℃、更优选180℃的温度t3和1毫巴至20毫巴、优选3毫巴至5毫巴的减压p3下，在水蒸气流的存在下对所述至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸或经过滤的十六烷化脂肪酸的混合物(mf)处理1小时至5小时、优选2小时至3小时的时间，以获得至少一种精制的十六烷化脂肪酸或精制的十六烷化脂肪酸的混合物(mf)。
[0139]
构成本发明的目的的是用于制备本发明的组合物的第二方法，所述组合物包含如本说明书中所定义的所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸(或十六烷化脂肪酸的混合物)，其中所述第二方法包含步骤(xi)：将根据实施方案fr5与实施方案fr1至fr4中的任一个组合可获得的所述至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(mf)，或者根据实施方案fr6与实施方案fr1至fr5中的任一个组合可获得的所述至少一种精制的十六烷化脂肪酸(mf)，与(b)至少一种抗氧化剂(如本发明中所定义)混合，其中所述(b)至少一种抗氧化剂以相对于组合物(本发明的组合物)的总重量以重量％计为0.001％至0.5％、或0.001％至0.4％、或0.001％至0.3％、或0.001％至0.2％、或0.001％至0.1％的量混合，其量优选为0.005％至0.1％，更优选为0.01％至0.08％。
[0140]
在优选的实施方案中，制备本发明组合物的所述第二方法包括以下步骤：混合所述至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(mf)或至少一种精制的十六烷化脂肪酸(mf)，其包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，或者由十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物组成，二者优选摩尔比为4:1至1:1或3:1至1.5:1、或优选为(2.0
±
0.2):1或约1:1，并且其中所述(b)至少一种抗氧化剂是叔丁基氢醌(tbhq)，相对于组合物的总重量，其以重量％计为0.001％至0.5％、或0.001％至0.4％、或0.001％至0.3％、或0.001％至0.2％、或0.001％至0.1％，优选为0.005％至0.1％，更优选为0.01％至0.08％。
[0141]
在一个实施方案中，在进行除臭步骤(x)之前，将所述至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(或十六烷化脂肪酸的混合物)(mf)、优选为经过滤的十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，与所述(c)植物油(如本发明所定义)、优选为橄榄油或玉米油一起加入。
[0142]
在一个实施方案中，在除臭步骤(x)之前，使所述至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(mf)、优选为经过滤的十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物经历将所述(mf)与所述(c)植物油、优选为橄榄油或玉米油一起加入的步骤(xii)，以形成包含(mf)和(c)的混合物，其随后经历除臭步骤(x)。
[0143]
在优选的实施方案中，在同一反应器中进行第一方法的除臭步骤(x)以获得至少一种精制的十六烷化脂肪酸(mf)，优选为精制的十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，和第二方法的将所述至少一种精制的十六烷化脂肪酸(mf)与至少一种抗氧化剂、优选tbhq混合的步骤(xi)，以及任选的加入至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(mf)和(c)植物油的步骤(xii)。
[0144]
基本上，本发明的方法可以示意性地概括为以下实施方案：
[0145]
1)mi(步骤i～viii)
→
mf(步骤ix)
→
mf(步骤x)+(b)(步骤(xi))+(c)(步骤(xii))；
[0146]
2)mi(步骤i～viii)
→
mf(步骤ix)+(c)(步骤xii)
→
mf(步骤x)+(b)(步骤(xi))，
[0147]
3)mi(步骤i～viii)
→
mf(步骤ix)+(b)(步骤xi)
→
mf(步骤x)+(c)(步骤(xii))；
[0148]
所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸(或十六烷化脂肪酸的混合物)是用鲸蜡醇(1-十六烷醇，ch3(ch2)
15
oh)酯化的脂肪酸。
[0149]
优选地，所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸的脂肪酸选自包含以下物质或者由以下物质组成的组：(a1)肉豆蔻酸，(a2)油酸，(a3)亚油酸，(a4)棕榈酸，(a5)月桂酸，(a6)棕榈油酸，(a7)硬脂酸，(a8)花生酸，(a9)二十碳烯酸及其混合物；更优选地，所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸是包括以下物质或者由以下物质组成的十六烷化脂肪酸的混合物：十六
烷化肉豆蔻酸、十六烷化油酸、十六烷化亚油酸和十六烷化棕榈酸组成的；甚至更优选地，所述(a)包括十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，或者由十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物组成。
[0150]
根据包含(a)、(b)(至少一种抗氧化剂)和(c)(例如，lipocet
tm
)(根据任何所描述的实施方式)的本发明的组合物的实施例，脂肪酸谱包含以下物质，或者由以下物质组成：
[0151]-(a1)肉豆蔻酸：30％至55％，优选35％至50％，更优选40％至45％；例如41％、或42％、或43％、44％；
[0152]-(a2)油酸：35％至60％，优选40％至55％，更优选45％至50％；例如46％、或47％、或48％、或49％；
[0153]-(a3)亚油酸：3％至12％，优选5％至10％，更优选6％至9％；例如7％、或8％、或8.5％；
[0154]-(a4)棕榈酸：1％至8％，优选2％至6％，更优选3％至5％；例如3.5％、或4％、或4.5％。
[0155]
此外，所述(a)+(b)+(c)可以与一个或多个所述(a1)至(a4)一起包括：
[0156]-(a5)0.1％至0.3％的月桂酸，例如0.2％；
[0157]-(a6)0.3％至0.5％的棕榈油酸，例如0.4％；
[0158]-(a7)0.7％至0.9％的硬脂酸，例如0.8％；
[0159]-(a8)0.05％至0.15％的花生酸，例如0.1％；
[0160]-(a9)0.2％至0.4％的二十碳烯酸，例如0.3％。
[0161]
所述(a5)至(a9)的总量优选地为1％至4％，优选地为1.5％至3％；甚至更优选为2％至2.5％，例如1.8重量％。
[0162]
所述混合物(a)+(b)+(c)的色谱分离可获得60％至80％、优选65％至75％的(a1)至(a9)的蜡级分(按重量％计)；剩余部分是甘油酯级分。所述蜡级分中的链长分布为如下类型：30个碳原子，60％至70％；32个碳原子，1％至3％；以及34个碳原子，25％至35％。在所述蜡级分中，肉豆蔻酸的量为60重量％至70重量％，而油酸的量为25重量％至35重量％。
[0163]
混合物(a)+(b)+(c)的实施方案如下报道：
[0164]
样品2：根据本发明的组合物，其包含：
[0165]-以下物质的混合物：十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸，肉豆蔻酸：油酸摩尔比为约2.1:1(相对于样品的总重量为约75重量％)；
[0166]-橄榄油或玉米油(相对于样品的总重量为约25重量％)；
[0167]-叔丁基氢醌(tbhq)(相对于样品的总重量为0.02重量％)和任选的赋形剂和/或添加剂。
[0168]
样品3：根据本发明的组合物，其包含：
[0169]-主要包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，肉豆蔻酸：油酸摩尔比为约2.1:1(相对于样品的总重量为约75重量％)；
[0170]-橄榄油或玉米油(相对于样品的总重量为约25重量％)，
[0171]-tla(相对于样品的总重量为0.05重量％)，和任选地，
[0172]-赋形剂和/或添加剂。
[0173]
样品4：一种组合物，其包含：
[0174]-主要包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，肉豆蔻酸：油酸摩尔比为约2.1:1(相对于样品的总重量为约75重量％)，
[0175]-橄榄油或玉米油(相对于样品的总重量为约25重量％)，
[0176]-生育酚的混合物或乙酸生育酚(0.001％至0.3％)，和任选地，
[0177]-赋形剂和/或添加剂。
[0178]
样品5：根据本发明的组合物：
[0179]-(a1)+(a2)+(a3)的混合物，(a1)：(a2)：(a3)的摩尔比＝4:4:1(相对于样品的总重量为约80重量％)；
[0180]-橄榄油或玉米油(相对于样品的总重量为约20重量％)；
[0181]-乙酸生育酚和小麦胚芽油(tritucum vulgare)以1:25的重量比的混合物；和任选地，
[0182]-赋形剂和/或添加剂。
[0183]
样品6：根据本发明的组合物：
[0184]-(a1)+(a2)+(a3)+(a4)的混合物，(a1)：(a2)：(a3)：(a4)的摩尔比＝4:4:1:0.5(相对于样品的总重量为约85重量％)；
[0185]-橄榄油或玉米油(相对于样品的总重量为约15重量％)；
[0186]-乙酸生育酚和小麦胚芽油(tritucum vulgare)以1:25的重量比的混合物；和任选地，
[0187]-赋形剂和/或添加剂。
[0188]
本发明的第一目的的实施方案(an)报道如下：
[0189]
an1.一种组合物，其包含(i)和任选的(ii)，其中：
[0190]
(i)包含以下成分或者由以下成分组成的混合物：
[0191]
(a)至少一种十六烷化脂肪酸，其中所述脂肪酸是碳数为c6至c21的饱和或不饱和脂肪酸，和
[0192]
(b)至少一种抗氧化剂，相对于组合物的总重量，其以重量％计为0.001％至0.5％；以及
[0193]
(ii)至少一种食品或药物级添加剂和/或赋形剂。
[0194]
an2.根据an1所述的组合物，其中，(a)至少一种十六烷化脂肪酸的所述脂肪酸选自包含以下物质或者由以下物质组成的组：肉豆蔻酸、油酸及其混合物；
[0195]
优选地，(a)包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，或者由十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物组成。
[0196]
an3.根据an1或an2所述的组合物，其中，所述(b)至少一种抗氧化剂选自包含以下物质或者由以下物质组成的组：叔丁基氢醌(tbhq)，包含生育酚、卵磷脂、抗坏血酸棕榈酸酯和柠檬酸的混合物(tla)，生育酚的混合物和天然迷迭香提取物；优选地，(b)是叔丁基氢醌(tbhq)。
[0197]
an4.根据an1至an3中任一项所述的组合物，其中，相对于组合物的总重量，所述(b)至少一种抗氧化剂按重量％计以0.005％至0.1％、优选0.01％至0.08％存在。
[0198]
an5.根据an1至an4中任一项所述的组合物，其中，
[0199]-所述(a)包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，或者由十六烷化肉豆
蔻酸和十六烷化油酸的混合物组成，其中所述十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸之间的摩尔比为4:1至1:1，优选为3:1至1.5:1、更优选为(2.0
±
0.2):1；以及
[0200]-所述(b)是叔丁基-氢醌(tbhq)，并且其以相对于组合物的总重量按重量％计以0.001％至0.5％、优选0.005％至0.1％、更优选0.01％至0.08％存在。
[0201]
an6.根据an1至an5中任一项所述的组合物，其中，除(a)和(b)之外，所述组合物还包含(c)植物油；优选地，所述植物油选自包含具有高油酸含量的橄榄油和向日葵油或者由具有高油酸含量的橄榄油和向日葵油组成的组。
[0202]
an7.根据an1至an6中任一项所述的组合物，其中，所述组合物包含：
[0203]-所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸，优选为十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，相对于组合物的总重量，其以重量％计为50％至90％，优选为60％至85％，更优选为70％至80％；
[0204]-所述(b)抗氧化剂，优选为叔丁基氢醌(tbhq)，相对于组合物的总重量，其以重量％计为0.001％至0.5％，优选为0.005％至0.1％，更优选为0.01％至0.08％；以及
[0205]-所述(c)植物油，优选为橄榄油，相对于组合物的总重量，其以重量％计为9.5％至50％，优选为14.5％至40％，更优选为19.5％至30％。
[0206]
an8.根据an1至an7中任一项所述的组合物，其中，所述组合物用作药物。
[0207]
an9.根据an8所述应用的组合物，其中，所述组合物通过向有需要的受试者施用的方式用于预防性和/或治疗性和/或对症治疗以下病症的方法：(i)炎性和非炎性来源的类风湿性关节炎，特别是骨关节炎；(ii)类风湿性关节炎以外的关节炎症；(iii)牛皮癣、狼疮、牙周病、或心血管疾病或心脏病；(iv)创伤后骨关节和肌肉骨骼疾病，包括运动相关的创伤；(v)退行性关节疾病，优选关节病、膝关节病、髋关节病，和/或(vi)肌腱和肌肉相关的炎性/创伤性病症。
[0208]
an10.根据an8或an9所述应用的组合物，其中，所述组合物被配制用于局部或经皮应用；优选用于局部应用。
[0209]
根据本发明的第二目的的实施方案(bn)报道如下：
[0210]
bn1.一种组合物，其包含：
[0211]
(i)包含(a)至少一种十六烷化脂肪酸、或者由(a)至少一种十六烷化脂肪酸组成的混合物，以及，可选地，
[0212]
(ii)至少一种药学或食品级添加剂和/或赋形剂，
[0213]
其中，所述组合物通过施用至有需要的受试者而用于预防性和/或治疗性治疗以下疾病的方法中：
[0214]
(i.i)源于胃粘膜损伤和/或与胃粘膜损伤相关的病症或症状，所述病症或症状选自包含以下疾病或者由以下疾病组成的组：胃溃疡、胃食管反流(gerd)、胃灼热；
[0215]
(i.ii)糖尿病；
[0216]
(i.iii)除糖尿病以外的源于高血糖水平或与高血糖水平相关的疾病和/或病症，其选自包含以下疾病或者由以下疾病组成的组：高血糖、慢性肝病、肥胖症。
[0217]
bn2.根据bn1所述应用的组合物，其中，(a)至少一种十六烷化脂肪酸的所述脂肪酸选自包含以下物质或者由以下物质组成的组：月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、花生酸及其混合物；
[0218]
优选为肉豆蔻酸、油酸或十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸。
[0219]
bn3.根据bn2所述应用的组合物，其中，在十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的所述混合物中，十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的摩尔比为4:1至1:1，优选为3:1至1.5:1、更优选为(2.0
±
0.2):1。
[0220]
bn4.根据bn1至bn3中任一项所述应用的组合物，其中，包含所述(a)的所述(i)混合物进一步包含(b)至少一种抗氧化剂。
[0221]
bn5.根据bn4所述应用的组合物，其中，所述(b)至少一种抗氧剂选自包含以下物质或者由以下物质组成的组：叔丁基氢醌(tbhq)，包含生育酚、卵磷脂、抗坏血酸棕榈酸酯和柠檬酸的混合物(tla)，生育酚的混合物和天然迷迭香提取物；优选地，(b)是叔丁基氢醌(tbhq)。
[0222]
bn6.根据bn4或bn5所述应用的组合物，其中，相对于组合物的总重量，所述(b)至少一种抗氧化剂按重量％计以0.001％至0.5％、优选0.005％至0.1％、更优选0.01％至0.08％存在。
[0223]
bn7.根据bn1至bn6中任一项所述应用的组合物，其中，所述(i)混合物包含以下成分，或者由以下成分组成：
[0224]-十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的所述混合物；
[0225]
优选地，其中十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的摩尔比为4:1至1:1，优选为3:1至1.5:1、更优选为(2.0
±
0.2):1；以及
[0226]-所述(b)叔丁基氢醌(tbhq)；
[0227]
优选地，相对于组合物的总重量，所述(b)按重量％计以0.001％至0.5％、优选0.005％至0.1％、更优选0.01％至0.08％存在。
[0228]
bn8.根据bn1至bn7中任一项所述的组合物，其中，除(a)和(b)之外，所述组合物还包含(c)植物油；优选地，所述植物油选自包含以下物质或者由以下物质组成的组：具有高油酸含量的橄榄油、向日葵油及其混合物。
[0229]
bn9.根据bn1至bn8中任一项所述应用的组合物，其中，所述组合物被配制用于口服应用。
[0230]
bn10.根据bn1至bn9中任一项所述应用的组合物，其中，所述组合物用作一种或多种用于(i.i)、(i.ii)或(i.iii)的预防性和/或治疗性治疗的其他组合物的佐剂。
[0231]
根据本发明的第三目的的实施方案(cn)报道如下：
[0232]
cn1.一种用于制备(a)至少一种十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0233]
(i)使至少一种脂肪酸、鲸蜡醇和金属催化剂在不存在溶剂的情况下在反应器(2)的室(3)中接触放置，以获得反应混合物(15)；然后
[0234]
(ii)使用惰性气体使容器(3)饱和，使容器(3)达到约1个大气压的压力p1，施加所述惰性气体流通过所述室(3)；然后
[0235]
(iii)在约1个大气压的压力p1下和在惰性气体流的存在下，对所述反应混合物(15)施加第一加热斜坡直至达到120℃至200℃的温度t1，以引发酯化反应，初始形成所述十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物和酯化水；然后
[0236]
(iv)将所述反应混合物(15)在所述温度t1和压力p1下保持搅拌10分钟至2小时的
时间；然后
[0237]
(v)在约1个大气压的压力p1下和在惰性气体流的存在下，对所述反应混合物(15)施加第二加热斜坡直至达到201℃至260℃的温度t2，以继续酯化反应，进一步形成所述十六烷化脂肪酸或十六烷化脂肪酸的混合物和酯化水；然后
[0238]
(vi)将所述反应混合物(15)在所述温度t2和压力p1下并且在惰性气体流的存在下保持搅拌4小时至12小时的时间；
[0239]
(vii)在所述室(3)中应用真空程序，所述真空程序将反应压力降低至达到100毫巴至10毫巴的减压p2；
[0240]
(viii)将所述反应混合物(15)在所述减压p2下和在惰性气体流的存在下保持搅拌30分钟至4小时的时间，以完全形成所述至少一种未精制的十六烷化脂肪酸或未精制的十六烷化脂肪酸的混合物(mi)。
[0241]
cn2.根据cn1所述的方法，其中：
[0242]
将所述反应混合物(15)在所述温度t2和压力p1下并且在惰性气体流的存在下保持搅拌6小时至12小时的时间的所述步骤(vi)进行直至使用aocs官方方法cd 3d-63测量的反应混合物(15)的酸度值随时间稳定并且为5mgkoh/g至8mgkoh/g；以及
[0243]
将所述反应混合物(15)在所述减压p2下和在惰性气体流的存在下保持搅拌30分钟至4小时的时间的所述步骤(viii)进行直至使用aocs官方方法cd 3d-63测量的反应混合物(15)的酸度值为4.5mgkoh/g至3.5mgkoh/g，以完全形成所述至少一种未精制的十六烷化脂肪酸或未精制的十六烷化脂肪酸的混合物(mi)。
[0244]
cn3.根据cn1或cn2的方法，其中，所述至少一种脂肪酸选自包括以下物质或者由以下物质组成的组：月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、花生酸及其混合物；
[0245]
优选选自肉豆蔻酸、油酸以及肉豆蔻酸和油酸的混合物。
[0246]
cn4.根据cn1至cn3中任一项所述的方法，其中，通过位于反应混合物(15)上方的室(3)的体积部分中的吹扫装置(7)施加所述惰性气体流。
[0247]
cn5.根据cn1至cn4中任一项所述的方法，其中，在所述酯化反应期间通过施加惰性气体流和真空程序，从所述室(3)抽出的酯化水在水平冷凝器(11)中冷凝并在流过垂直冷凝器(16)之后收集在容器(13)中。
[0248]
cn6.根据cn1至cn5中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括步骤(ix)(过滤步骤)：在压滤机(23)中经漂白土和/或过滤土过滤从步骤(viii)获得的所述至少一种未精制的十六烷化脂肪酸(mi)，以获得至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(mf)，其中金属催化剂基本上不存在，或相对于所述经过滤的十六烷化脂肪酸或经过滤的十六烷化脂肪酸的混合物(mf)的重量，以小于2重量％的量存在。
[0249]
cn7.根据cn1至cn6中任一项所述的方法，其中，所述方法在步骤(ix)之后还包括步骤(x)(脱臭步骤)：在反应器(27)中，在150℃至200℃的温度t3和1毫巴至20毫巴的减压p3下，在水蒸气流的存在下对所述至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(mf)处理1小时至5小时的时间，以获得至少一种精制的十六烷化脂肪酸(mf)。
[0250]
cn8.一种用于制备包含所述(a)至少一种十六烷化脂肪酸的组合物的方法，所述方法包括将根据实施方案cn1至cn6中的任一个可获得的所述至少一种经过滤的十六烷化
脂肪酸(mf)、或者根据实施方案cn1至cn7中的任一个可获得的所述至少一种精制的十六烷化脂肪酸(mf)与至少一种抗氧化剂混合的步骤，其中，所述至少一种抗氧化剂以相对于组合物的总重量以重量％计为0.001％至0.5％、优选0.005％至0.1％、更优选0.01％至0.08％的量混合。
[0251]
cn9.根据cn8所述的制备组合物的方法，其中，所述至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(mf)或至少一种精制的十六烷化脂肪酸(mf)包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，或者由十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物组成，并且其中，所述至少一种抗氧化剂是叔丁基氢醌(tbhq)。
[0252]
cn10.根据cn8或cn9所述的制备组合物的方法，其中在步骤(x)之前，使从步骤(ix)获得的所述至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(mf)、优选为经过滤的十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物经历步骤(xii)：将所述至少一种经过滤的十六烷化脂肪酸(mf)与植物油、优选橄榄油一起加入，以形成包含(mf)和植物油的混合物，其随后经历步骤(x)。
[0253]
实验部分1
[0254]
在实验部分1中，分析了包含或不包含抗氧化剂的本发明组合物的稳定性。使用下文所述的相同方法测试表2和样品1、2和3中报告的所有组合物。特别地，对样品2和3(根据本发明)和样品1(比较用样品)进行的测试以非限制性实例的方式报告。这是因为用表2中报道的组合物获得的稳定性结果与样品2和3的稳定性结果相互可比较，这是由于在测试的组合物中存在至少一种抗氧化剂。
[0255]
材料
[0256]
前提：样品1、2和3的重量％是指样品的总重量。
[0257]
样品1：(比较用组合物)组合物，其包括：
[0258]-主要包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，肉豆蔻酸：油酸摩尔比为约2.1:1(相对于样品的总重量约75重量％)，
[0259]-橄榄油或玉米油(相对于样品总重量约25重量％)。
[0260]
样品1不包含抗氧化剂。
[0261]
样品2：本发明的组合物，其包含：
[0262]-主要包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，肉豆蔻酸：油酸摩尔比为约2.1:1(相对于样品的总重量约75重量％)；
[0263]-橄榄油或玉米油(相对于样品的总重量约25重量％)；
[0264]-叔丁基氢醌(tbhq)(相对于样品的总重量0.02重量％)，以及，任选地，
[0265]-赋形剂和/或添加剂。
[0266]
样品3：本发明的组合物，其包含：
[0267]-主要包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，肉豆蔻酸：油酸摩尔比为约2.1:1(相对于样品的总重量约75重量％)；
[0268]-橄榄油或玉米油(相对于样品的总重量约25重量％)，
[0269]-tla(相对于样品的总重量0.05重量％)，以及
[0270]-赋形剂和/或添加剂。
[0271]
方法
[0272]
在时间t0之后，将样品1、2和3储存在18℃的受控温度下。大约每40～45天(即，在时间t1、t2、t3和t4)，从每个样品中取样，并测定过氧化值(pv)和kreiss测试。
[0273]
过氧化值
[0274]
过氧化值(pv)以标准方式根据iso3960方法(第四版2007-07-15，修正版2009-05-15，由技术委员会iso/tc 34/sc制订)测定，如本领域技术人员已知的那样。
[0275]
所述测试是用于测定食用油酸败程度的经典分析化学方法。该测试定量测定过氧化值(pv)，其为脂肪酸的主要自氧化产物的量的指标。
[0276]
该方法提供了(简要)：将油样品溶于异辛烷和冰醋酸(冰醋酸：异辛烷＝6:4v/v)，并加入碘化钾。用淀粉指示剂和硫代硫酸钠标准溶液(na2s2o
3 0.01n)通过碘量法(目视)测定从过氧化物释放的碘。滴定终点通过碘量法(目视)测定。
[0277]
pv表示为meq氧/kg油。
[0278]
鉴于过氧化值(pv)的测定是高度经验性的程序，iso3960:2007将样品的质量对于pv大于1设定为5g并且对于pv小于或等于1设定为10g，并且将该方法的适用性限制于过氧化值为每千克0meq至30meq活性氧的动物和植物脂肪和油。
[0279]-kreiss测试
[0280]
如本领域技术人员已知的那样，以标准方式进行kreiss测试。
[0281]
kreiss测试是定性测定食用油酸败程度的化学试验。该测试用于检测脂肪酸自氧化的次级产物。
[0282]
事实上，腐臭和腐臭化脂肪的感官特性与氧和不饱和脂肪酸之间相互作用形成的羰基产物的存在显著相关。
[0283]
间苯三酚(1,3,5-三酚或对称三酚)是式c6h6o3的三酚基团的化合物，其作为二水合物(c6h6o3·
2h2o)从其水溶液中结晶。
[0284]
kreiss测试基于羰基化合物(由脂肪酸败产生)与间苯三酚在hcl存在下的缩合反应，其产生红色化合物。这是一种定性方法，当下层的着色比0.0012％kmno4溶液更强烈时，结果被认为是阳性的，当出现相反的情况时，结果被认为是阴性的。
[0285]
kreiss测试方法
[0286]
1.将10ml油和10ml浓hcl搅拌30秒。
[0287]
2.加入10ml试剂：0.1％间苯三酚的乙醚溶液并在搅拌下再保持30秒。
[0288]
分层后，检查下层酸层的着色：
[0289]
阴性反应呈褐色或淡色；
[0290]
阳性反应粉红色或红色着色(酸败油)。
[0291]
结果
[0292]
如表1中所报告，样品2和3(包含抗氧化剂的本发明的组合物)在时间t3(即在约150天之后)和t4(即在约210天之后)显示出显著低于样品1(不存在抗氧化剂的组合物)的过氧化值(pv)。
[0293]
此外，样品2和3在时间t3和t4的kreiss测试呈阴性，而样品1呈阳性。
[0294]
表1
[0295][0296]
实验部分2
[0297]
本发明的化合物(样品4)的体内毒性研究在实验部分2中进行。
[0298]
体内研究：本发明化合物在crl cd sprague dawley(sd)大鼠中的14天口服毒性研究。
[0299]
化合物研究主体：
[0300]
样品4.一种组合物，其包含：
[0301]-主要包含十六烷化肉豆蔻酸和十六烷化油酸的混合物，肉豆蔻酸：油酸摩尔比为约2.1:1(相对于样品的总重量约75重量％)，
[0302]-橄榄油或玉米油(相对于样品的总重量约25重量％)，
[0303]-至少一种抗氧化剂，其重量百分比为0.001％至0.3％(相对于样品的总重量)，例如生育酚的混合物或乙酸生育酚。
[0304]
试验系统：60只sprague dawley大鼠(30只雄性和30只雌性)，开始治疗时7周龄。
[0305]
组容：5只雄性和5只雌性大鼠/组。
[0306]
测定水平：0-1600-1900-2200-2600-4500mg/kg体重。
[0307]
施用体积：10ml/kg体重。
[0308]
治疗混合物：每周制备并保持在4℃。
[0309]
治疗计划：每天，连续14天。
[0310]
治疗程序：将每日施用体积分成两个相等的次级级分，以60分钟间隔给予每只禁食大鼠。
[0311]
观察结果：死亡率(每日)；临床体征(每日)；体重(每周两次)；食物消耗(每周两次)；血液学(牺牲)；临床化学(牺牲)；尿分析(牺牲)；大体病理学；组织学(如有必要)。
[0312]
统计：使用anova分析数据，然后使用jmp统计检测软件进行post hoc dunnett检
验。
[0313]
结果：
[0314]-在高剂量测试组中记录到与葡萄糖水平相关的统计学上显著的剂量依赖性差异，其相对于对照组显著更低(p《0.05)(施用的本发明化合物剂量与葡萄糖水平之间的反向关系)。令人惊讶的是，发现通过以最高剂量给大鼠施用例如样品4的组合物，经治疗的大鼠的血液中的血糖水平在统计学上显著降低。由于该结果，发现本发明的组合物在用于治疗患有糖尿病或患有除糖尿病以外的源于高血糖水平或与高血糖水平相关的疾病和/或障碍的受试者的方法中的有效应用/用途，如在高血糖、慢性肝病和肥胖症的情况下。
[0315]-完全血液学显示两组之间无治疗相关差异，在14天治疗期内未发现临床体征。
[0316]-在实验组之间的白细胞分类计数和尿分析中没有记录到异常。
[0317]-在所有组中体重增加和食物摄取是相当的，并且在整个大鼠治疗期间没有观察到行为异常。
[0318]-在尸检水平上未记录到异常：各种系统的所有器官和组织显示出正常的外观，大小，颜色和位置。
[0319]
因此，样品4(本发明的化合物)在所有测试剂量下被良好耐受，并且血糖水平在高剂量大鼠组中在统计学上显著较低(反向的剂量-效应关系)。
[0320]
令人惊奇的是，通过对大鼠的体内研究，可以观察到有效和持久的胃粘膜保护。已知胃粘膜发挥屏障作用，它由覆盖胃部粘膜的约0.2mm的粘膜层组成。该屏障的目的是保护胃上皮免受由胃壁细胞产生的hcl的损伤作用。它来源于高分子量(因此非常粘)粘蛋白液滴的产生(通过胃表面细胞)和来源于碳酸氢盐的产生。因此，本发明的组合物(参见表2)、例如样品2～6在用于(预防性和/或治疗性)治疗源于胃粘膜损伤或与胃粘膜损伤相关的病症或症状的方法中找到有效的应用/用途，所述病症或症状选自包含以下疾病或者由以下疾病组成的组：胃溃疡、胃食管反流(gerd)、胃灼热。
[0321]
在90天时重复上述体内毒性研究。结果与14天时获得的结果相当。特别地，在4500mg/kg试验大鼠体重的剂量(不产生毒性作用的最大剂量)下，令人惊讶地观察到试验大鼠维持并保持良好的甲状腺功能而不改变食物和社会行为。
[0322]
实验部分3
[0323]
体外功效研究：本发明的产品和比较用产品对细胞培养物的抗炎活性的体外评价。
[0324]
1.研究设计
[0325]
实验部分3中描述的研究目的是在体外系统中评价受试产品调节人肌腱细胞培养物中诱导的炎症机制的能力(zen bio ten-f，批号tenm012214f)。抗炎活性的研究通过使用elisa方法测定某些炎症标记物进行，特别是促炎细胞因子il6、前列腺素e2(pge2)和白三烯c4(ltc4)，后者分别是环加氧酶和脂氧合酶(参与花生四烯酸的炎症级联反应的主要酶)活性的产物。
[0326]
2.受试产品
[0327]-乳膏产品cn(本发明的组合物，根据表2，c1～c6)：浓度0.050％、0.025％和0.010％。
[0328]-山金车5.5％乳膏：浓度0.070％、0.035％和0.014％。
[0329]
氨基葡萄糖5.5％乳膏：浓度0.070％、0.035％和0.014％。
[0330]
测试的产品都是基于甘油和/或单硬脂酸甘油酯的乳膏。
[0331]
在所述体外抗炎活性评价研究中测试的本发明的产品(乳膏cn产品)具有表2中报道的以下组成(c1至c6)。本发明的所有c1～c6产物给出了类似的实验结果。因此，在下文中将仅报告代表产品c2～c6的乳膏产品c1的数据。
[0332]
表2
[0333]
[0334][0335]
(*)植物油(橄榄油或玉米油或向日葵油)中的十六烷化脂肪酸的混合物包含以下十六烷化脂肪酸，或者由以下十六烷化脂肪酸组成：
[0336]-(a1)肉豆蔻酸：30％至55％，优选35％至50％，更优选约41％；
[0337]-(a2)油酸：35％至60％，优选40％至55％，更优选地约46％；
[0338]-(a3)亚油酸：3％至12％，优选5％至10％，更优选约8％；
[0339]-(a4)棕榈酸：1％至8％，优选2％至6％，更优选约3％；
[0340]-(a5～a9)各种脂肪酸(非肉豆蔻脑酸)：1％至4％，优选1.5％至3％，更优选约1.8％；其中％为相对于所述十六烷化脂肪酸的混合物的总重量的重量％；其中所述重量比(a):(c)＝4:1，3:1，2:1或1:1。
[0341]
在进行功效测试之前，从以下比例开始在培养基中制备样品：用培养基在1ml中稀释0.05g。随后在培养基中稀释。
[0342]
对产品进行初步细胞毒性测试，目的是选择最适合最终测试的浓度。在评价细胞毒性试验的结果后，选择上述报道的浓度进行抗炎活性研究。
[0343]
3.方法
[0344]
对于该测试，将人肌腱细胞培养物(zen bio ten-f，批号tenm012214f)用肌腱病炎性病症涉及的试剂白介素-1β(il-1β，10ng/ml，根据范围确定测试选择的剂量)处理48小时，并同时用3种浓度的受试产品处理，所述3种浓度的受试产品选自初步细胞毒性测试后的非细胞毒性产品。在监测的实验期结束时，使用elisa测量培养基中感兴趣的炎性标记物的水平。将结果与阴性对照培养物(未处理的，ctr-)和阳性对照培养物(用il-1β处理的，ctr+)进行比较。
[0345]
总之，实验方案提供了三种促炎标记物(il6、ltc4和pge2)的测定：
[0346]-未处理的细胞培养物(阴性对照，ctr-)；
[0347]-实验诱导炎症事件的细胞培养物(阳性对照，ctr+)；
[0348]-炎症事件是实验诱导的并且同时用进行测试的产品处理的细胞培养物。
[0349]
4.炎症标志物(il6、pge2和ltc4)的测定
[0350]
对照的培养基和用进行测试的产品处理的细胞培养基(第2段)用于使用elisa方法测定炎性标记物il6、pge2和ltc4。
[0351]
商业上可获得的试剂盒用于此目的，该试剂盒利用抗原(在这种情况下是感兴趣的细胞因子)与其第一抗体的竞争性结合。免疫复合物(抗原-抗体)又被与过氧化物酶偶联的第二抗体识别。过氧化物酶底物的加入产生比色反应，其强度与存在的免疫复合物的量成比例，因此与结合的细胞因子的量成比例。定量测定利用用已知和递增浓度的标准细胞因子构建的校准曲线。
[0352]
5.结果
[0353]
下面的表和图表显示了本研究中获得的结果。
[0354]
结果报告为实验期间培养基中释放的细胞因子的量(平均值
±
标准偏差)和与对照物相比的平均变化％。
[0355]
il6测定的结果
[0356]
用测试产品处理细胞培养物(第2段)显示在实验性诱导炎症后细胞释放的il6水平降低(表3～5和图4a、4b和4c)。测试样品或多或少显著地调节和抑制炎症期间监测的促炎细胞因子的释放。所有图表(图4a、4b和4c)显示或多或少明显的剂量依赖性趋势，其中测试的最高浓度具有低于il6的测定。
[0357]
5.1在ctr-，ctr+细胞培养物中测定il6，并用本发明的乳膏产品c1处理(表2)。结果表示为平均含量
±
标准偏差(以ng/l表示)和与对照物相比的平均变化％(表3和图4a)。
[0358]
表3
[0359][0360]
5.2在ctr-、ctr+和用山金车乳膏5.5％处理的细胞培养物中测定il6。结果表示为平均含量
±
标准偏差(以ng/l表示)和与对照物相比的平均变化％(表4和图4b)。
[0361]
表4
[0362][0363]
5.3在ctr-、ctr+和用氨基葡萄糖乳膏5.5％处理的细胞培养物中测定il6。结果表示为平均含量
±
标准偏差(以ng/l表示)和与对照物相比的平均变化％(表5和图4c)。
[0364]
表5
[0365][0366]
ltc4测定的结果
[0367]
用测试产品处理细胞培养物(第2段)显示在实验性诱导炎症后细胞释放的ltc4水平降低(表6～8和图5a、5b和5c)。测试样品或多或少显著地调节和抑制炎症期间监测的促炎标记物的释放。所有图表(图5a、5b和5c)显示或多或少明显的剂量依赖性趋势，其中测试的最高浓度具有低于ltc4的测定。
[0368]
5.4在ctr-、ctr+和用本发明的乳膏产品c1处理的细胞培养物中测定ltc4(表2)。结果表示为平均含量
±
标准偏差(以ng/l表示)和与对照物相比的平均变化％(表6和图5a)。
[0369]
表6
[0370][0371]
5.5在ctr-、ctr+和用山金车乳膏5.5％处理的细胞培养物中测定ltc4。结果表示为平均含量
±
标准偏差(以ng/l表示)和与对照物相比的平均变化％(表7和图5b)。
[0372]
表7
[0373][0374]
5.6在ctr-、ctr+和用氨基葡萄糖乳膏5.5％处理的细胞培养物中测定ltc4。结果表示为平均含量
±
标准偏差(以ng/l表示)和与对照物相比的平均变化％(表8和图5c)。
[0375]
表8
[0376][0377]
pge2测定的结果
[0378]
用测试产品处理细胞培养物(第2段)显示在实验性诱导炎症后细胞释放的pge2水平降低(表9～11和图6a、6b和6c)。测试样品或多或少显著地调节和抑制炎症期间监测的促炎标记物的释放。所有图表(图6a、6b和6c)显示或多或少明显的剂量依赖性趋势，其中测试的最高浓度具有低于pge2的测定。
[0379]
5.7在ctr-、ctr+和用本发明的乳膏产品c1处理的细胞培养物中测定pge2(表2)。结果表示为平均含量
±
标准偏差(以ng/l表示)和与对照物相比的平均变化％(表9和图6a)。
[0380]
表9
[0381][0382]
5.8在ctr-、ctr+和用山金车乳膏5.5％处理的细胞培养物中测定pge2。结果表示为平均含量
±
标准偏差(以ng/l表示)和与对照物相比的平均变化％(表10和图6b)。
[0383]
表10
[0384][0385]
5.9在ctr-、ctr+和用氨基葡萄糖乳膏5.5％处理的细胞培养物中测定pge2。结果表示为平均含量
±
标准偏差(以ng/l表示)和与对照物相比的平均变化％(表11和图6c)。
[0386]
表11
[0387][0388]
6.结论
[0389]
考虑到本报告中获得和报道的结果并参考所应用的实验模型，所有测试的产品均调节细胞培养物中诱导的炎症机制，降低监测的促炎标记物的水平并因此显示抗炎活性。
特别地，本发明的乳膏产品c1以及乳膏产品c2～c6降低了il-6、pge2和ltc4的水平，因此证明能够调节不同的扩增机制。