用于消融M2巨噬细胞和髓源性抑制细胞的组合物和相关方法与流程

用于消融m2巨噬细胞和髓源性抑制细胞的组合物和相关方法
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2019年8月19日提交的题为“用于消融m2巨噬细胞和髓源性抑制细胞的组合物和相关方法(compositions and related methods for the ablation of m2macrophages and myeloid derived suppressor cells)”的美国临时申请第62/888,727号的优先权，所述美国临时申请根据35u.s.c.
§
119(e)特此通过引用整体并入。


背景技术：

3.在美国，癌症是导致死亡的第二大原因，癌症死亡病例几乎占所有死亡病例的四分之一。癌症的特征在于癌细胞的不受控制生长和细胞分裂。然而，癌症大大受益于对肿瘤的慢性适应不良性免疫应答，并且巨噬细胞是所述适应不良性应答的关键介质。通常，巨噬细胞通过改变其对许多基因，可能地数百种基因，的表达模式来对其局部微环境中的各种刺激作出应答。此类表型改变巨噬细胞被称为激活巨噬细胞。取决于巨噬细胞作出应答的刺激，可以获得各种各样的激活表型状态。巨噬细胞激活时差异表达的那些基因当中有细胞表面标志物(如巨噬细胞甘露糖受体，cd206)和各种细胞因子、导致活性氧(ros)产生的酶促途径以及如t淋巴细胞(t细胞)等可以调节免疫系统的其它组分的行为的其它信号传导分子。首次描述时，激活巨噬细胞被分为两种表型：经典激活型(被称为m1)，其具有高促炎性；以及替代激活型(被称为m2)，其具有免疫抑制性并且促进伤口愈合。现在认为，对激活巨噬细胞表型的严格对立分类过分简单并且不代表巨噬细胞对来自其微环境的刺激的应答的真实可塑性；然而，当描述巨噬细胞在各种病理状态下的作用时，激活巨噬细胞可以通过具有促炎性(m1样)或具有免疫抑制性(m2样)来影响局部免疫应答的概念依然有用。
4.肿瘤中富含肿瘤相关巨噬细胞(tam)，并且tam对与癌症相关的适应不良性免疫应答具有重大贡献。虽然m1样tam和m2样tam两者都是众所周知的，但存在于已确定的肿瘤中或附近的绝大多数tam是免疫抑制性m2样激活巨噬细胞。重要的是，这些m2样tam常常由于其对cd206的高表达(即，cd206+)而在对肿瘤的免疫组织化学评估中被鉴定出来。m2样tam通过表达il-10、tgf-β和pd-l1来抑制t细胞并且促进肿瘤血管生成和转移。
5.有助于与已确定的肿瘤相关的肿瘤促进性适应不良性免疫应答的另一组细胞是被统称为髓源性抑制细胞(mdsc)的异质类细胞。mdsc具有类似于粒细胞和/或单核细胞的形态学和表型特征，但是不同于这些细胞类型中的任一细胞类型。mdsc在健康个体中不常见，但是在如癌症等各种炎症性病状、某些传染性病状和自身免疫性疾病中大量存在。所有mdsc共有的一个特征是其诱导免疫系统的其它细胞组分采用较少激活促炎性表型或变得具有明显的免疫抑制性。已经对mdsc对免疫系统的其它组分施加其免疫抑制作用的方式进行了广泛研究。与按照定义局限于肿瘤微环境的tam不同，除了定位到肿瘤外，还在癌症患者的血液和脾脏中观察到mdsc。然而，像tam，尤其是m2样免疫抑制性tam一样，mdsc在肿瘤和/或全身中的存在的增加与患者总体生存期以及无进展生存期的下降相关并且与指示不良癌症患者结局的其它度量相关。本领域的当前缺陷是对足够充分地杀伤、消融m2样tam和mdsc或减少其数量以实现期望的免疫治疗应答和/或而不会产生严重的不良副作用的风险
的方式的需求尚未得到满足。


技术实现要素：

6.本文公开了一种用于消融cd206表达性巨噬细胞和/或cd206表达性髓源性抑制细胞(mdsc)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效剂量的化合物，所述化合物包括：葡聚糖主链以及与所述葡聚糖主链连接的一个或多个cd206靶向部分和一种或多种治疗剂。
7.在某些实施例中，所公开的化合物是式(i)的化合物：
[0008][0009]
其中每个x独立地为h、l1-a或l2-r；每个l1和l2独立地是连接子；每个a独立地包括治疗剂或h；每个r独立地包括甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分或h；并且n为大于零的整数；并且其中至少一个r包括选自由甘露糖、岩藻糖和n-乙酰氨基葡萄糖组成的组的甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分，并且至少一个a包括治疗剂。
[0010]
在某些方面，所述治疗剂包括螯合剂和至少一个cu(ii)离子。在另外的方面，所述螯合剂是dopta或dota。在仍另外的方面，所述至少一个cu(ii)离介于1个cu(ii)离子与数量与螯合剂部分的数量相等的cu(ii)离子之间。
[0011]
根据所公开的方法的另外的方面，所公开的组合物以足以诱导m2巨噬细胞复极化为m1巨噬细胞的剂量施用。在又另外的方面，所述组合物以足以诱导mdcs细胞死亡的剂量施用。
[0012]
在某些实施例中，所述受试者已被诊断为患有癌症。在某些方面，所述化合物与至少一种其它治疗或疗法共同施用。在示例性实施例中，所述至少一种其它治疗或疗法是化疗或放射疗法。在另外的示例性实施例中，所述至少一种治疗或疗法的有效剂量低于在不施用所述化合物的情况下所述至少一种治疗或疗法的有效剂量。
[0013]
根据另外的实施例，所述受试者已被诊断患有传染病。
[0014]
本文中进一步公开了一种用于将肿瘤相关巨噬细胞(tam)从m2复极化为m1的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的化合物，所述化合物包括式(i)的化合物：
[0015][0016]
其中每个x独立地为h、l1-a或l2-r；每个l1和l2独立地是连接子；每个a独立地包括治疗剂或h；每个r独立地包括甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分或h；并且n为大于零的整数；并且其中至少一个r包括选自由甘露糖、岩藻糖和n-乙酰氨基葡萄糖组成的组的甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分，并且至少一个a包括治疗剂。
[0017]
在某些方面，所述治疗剂包括螯合剂和至少一个cu(ii)离子。在另外的方面，所述治疗剂包括约4个cu(ii)离子。
[0018]
根据另外的方面，所述化合物与至少一种其它治疗或疗法共同施用。
[0019]
本文进一步公开了一种用于消融cd206表达性巨噬细胞和/或cd206表达性髓源性抑制细胞(mdsc)的化合物，所述化合物包括式(i)的化合物：
[0020][0021]
其中每个x独立地为h、l1-a或l2-r；每个l1和l2独立地是连接子；每个a独立地包括治疗剂或h；每个r独立地包括甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分或h；并且n为大于零的整数；并且其中至少一个r包括选自由甘露糖、岩藻糖和n-乙酰氨基葡萄糖组成的组的甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分，并且至少一个a包括治疗剂，其中所述治疗剂包括螯合剂和至少一个cu(ii)离子。
[0022]
在某些方面，至少一个l1包括-(ch2)ps(ch2)-nh-，其中p和q是从0到5的整数。在另外的方面，至少一个l2是任选地被至多三个选自由o、s和n组成的组的杂原子中断的c2-12烃链。在又另外的方面，至少一个l2包括-(ch2)ps(ch2)-nh-，其中p和q独立地为从0到5的整数。
[0023]
本文进一步公开了一种用于消融cd206表达性巨噬细胞和/或cd206表达性mdcs的化合物，所述化合物包括式(i)的化合物：
[0024][0025]
其中每个x独立地为h、l1-a或l2-r；每个l1和l2独立地是连接子；每个a独立地包括治疗剂或h；每个r独立地包括甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分或h；并且n为大于零的整数；并且其中至少一个r包括选自由甘露糖、岩藻糖和n-乙酰氨基葡萄糖组成的组的甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分，并且至少一个a包括治疗剂，其中所述治疗剂包括阿霉素(doxorubicin)。
附图说明
[0026]
图1示出了根据某些实施例的在暴露于cu(ii)-替马诺塞(tilmanocept)期间来自cd206表达性巨噬细胞的荧光随时间的变化的定量。
[0027]
图2示出了根据某些实施例的在用浓度逐渐增加的cu(ii)-替马诺塞处理的巨噬细胞上观察到的cd206表达相比未处理对照的比率。
[0028]
图3示出了根据某些实施例的m2巨噬细胞对cd80和cd86的表达响应于对cu(ii)-替马诺塞的暴露逐渐增加而产生的变化。
[0029]
图4示出了根据某些实施例的m2巨噬细胞对cd80和cd86的表达响应于cu(ii)-替马诺塞的浓度逐渐增加而产生的变化。
[0030]
图5示出了根据某些实施例的cd206+巨噬细胞在暴露于本文公开的化合物之后相对于无药物和替马诺塞-cy3对照的细胞死亡。
具体实施方式
[0031]
在本文中，范围可以表示为从“约”一个特定值和/或到“约”另一个特定值。当表示这种范围时，另外一个方面包含从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”来将值表示为近似值时，应当理解，所述特定值形成了另外一个方面。应进一步理解，所述范围中的每个范围的端点相对于另一端点以及独立于另一端点都是重要的。还应理解，本文公开了多个值，并且每个值在本文中还被公开为除了所述特定值本身之外，还包含“约”所述值。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“约10”。还应理解，还公开了两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，则还公开了11、12、13和14。
[0032]
在说明书和最后的权利要求书中所使用的化学物种的残基是指在特定反应方案或后续调配物或化学产品中作为化学物种的所得产物的部分，而无论所述部分实际上是否由所述化学物种获得。因此，聚酯中的乙二醇残基是指聚酯中的一个或多个-och2ch2o-单元，而无论乙二醇是否用于制备聚酯。类似地，聚酯中的癸二酸残基是指聚酯中的一个或多个-co(ch2)8co-部分，而无论所述残基是否是通过使癸二酸或其酯反应以获得聚酯来获得的。
[0033]
如本文所用，术语“取代的”被设想为包含有机化合物的所有可允许的取代基。在广泛的方面，可允许的取代基包含有机化合物的无环和环状、支链和无支链、碳环和杂环以及芳香族和非芳香族取代基。说明性取代基包含例如下文描述的取代基。对于适当的有机化合物，可允许的取代基可以有一个或多个并且可以相同或不同。出于本公开的目的，如氮等杂原子可以具有氢取代基和/或本文描述的有机化合物的满足杂原子的化合价的任何可允许的取代基。本公开不旨在以任何方式受限于有机化合物的可允许的取代基。并且，术语“取代”或“被...取代”包含以下隐含的前提条件：此类取代与被取代的原子和取代基的允许化合价一致，并且取代产生稳定的化合物，例如不会如通过重排、环化、消除等自发地进行转变的化合物。还设想的是，在某些方面，除非明确相反地指示，否则个别取代基可以被进一步任选取代(即，被进一步取代或不被取代)。
[0034]
在定义各种术语时，“a1”、“a2”、“a3”和“a4”在本文中用作表示各种特定取代基的通用符号。这些符号可以是不限于本文公开的取代基的任何取代基，并且当这些符号在一种情况下被定义为某些取代基时，其可以在另一种情况下被定义为一些其它取代基。
[0035]
如本文所使用的“r1”、“r2”、“r3”、“rn”(其中n是整数)可以独立地具有以上列出的基团中的一个或多个基团。例如，如果r1是直链烷基，则烷基的氢原子之一可以任选地被羟基、烷氧基、烷基、卤素等取代。取决于所选择的基团，第一基团可以并入第二基团内，或可替代地，第一基团可以与第二基团侧接(即，连接)。例如，对于短语“包括氨基的烷基”，氨基可以并入烷基的主链内。可替代地，氨基可以与烷基的主链连接。所选择的基团的性质将决定第一基团是嵌入第二基团还是与第二基团连接。
[0036]
如本文所描述的，本发明的化合物可以含有“任选取代的”部分。通常，术语“取代的”，无论前面是否有术语“任选”，都意味着指定部分的一个或多个氢被合适的取代基替代。除非另有说明，否则“任选取代的”基团可以在基团的每个可取代位置处具有适当的取代基，并且在任何给定结构中的多于一个位置可以被多于一个选自指定组的取代基取代时，在每个位置处，取代基可以相同或不同。本发明所设想的取代基组合优选地是使稳定或化学上可行的化合物形成的取代基组合。还设想的是，在某些方面，除非明确相反地指示，否则个别取代基可以被进一步任选取代(即，被进一步取代或不被取代)。
[0037]
本文所公开的某些材料、化合物、组合物和组分可以商购获得或可以使用本领域的技术人员众所周知的技术容易地合成。例如，在制备所公开的化合物和组合物时使用的起始材料和试剂可从商业供应商，如奥德里奇化学公司(aldrich chemical co.)(威斯康星州密尔沃基(milwaukee，wis.))、阿克洛斯有机物公司(acros organics)(新泽西州莫里斯普莱恩斯(morris plains，n.j.)、飞世尔科技公司(fisher scientific)(宾夕法尼亚州匹兹堡(pittsburgh，pa.))或西格玛公司(sigma)(密苏里州圣路易斯(st.louis，mo.))，获得，或是通过本领域的技术人员已知的方法根据以下参考文献中所阐述的程序制备的，所述参考文献如《费塞尔与菲泽有机合成试剂(fieser and fieser
′
s reagents for organic synthesis)》，第1-17卷(约翰
·
威利父子出版公司(john wiley and sons)，1991)；《罗德氏碳化合物化学(rodd
′
s chemistry of carbon compounds)》，第1-5卷和增刊(爱思唯尔科学出版社(elsevier science publishers)，1989)；《有机反应(organic reactions)》，第1-40卷(约翰
·
威利父子出版公司，1991)；《玛奇高等有机化学(march
′
s advanced organic chemistry)》，(约翰
·
威利父子出版公司，第4版)；以及《拉罗克综合有
机转化(larock
′
s comprehensive organic transformations)》(vch出版公司(vch publishers inc.)，1989)。
[0038]
公开了用于制备本发明的组合物的组分以及要在本文公开的方法内使用的组合物本身。本文公开了这些和其它材料，并且应理解，当公开了这些材料的组合、子集、相互作用、组等时，虽然无法明确公开对这些化合物的每种各种单独和集体组合和排列的具体引用，但在本文中具体地设想和描述了每一种组合和排列。例如，如果公开并讨论了特定化合物，并且讨论了可以对包含所述化合物的多个分子进行的许多修饰，则除非具体地相反地指明，否则具体地设想了所述化合物的每种组合和排列以及可能的修饰。因此，如果公开一类分子a、b和c以及一类分子d、e和f，并公开了组合分子a-d的实例，则即使未单独叙述每种组合，也单独地且共同地设想了每种组合，从而意味着视为公开了组合a-e、a-f、b-d、b-e、b-f、c-d、c-e和c-f。同样，还公开了这些组合的任何子集或组合。因此，例如，认为公开了子组a-e、b-f和c-e。此概念适用于本技术的所有方面，包含但不限于制备和使用本发明的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可以执行的各种另外的步骤，则应理解，这些另外的步骤中的每个步骤可以与本发明的方法的任何具体实施例或实施例组合一起执行。
[0039]
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”或“载体”是指供使用前重构成无菌可注射溶液或分散体的无菌水性或非水性溶液、胶体、分散体、悬浮液或乳液和无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒剂的实例包含水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、羧甲基纤维素及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)和如油酸乙酯等可注射有机酯。可以例如通过使用如卵磷脂等包衣材料，在分散体的情况下通过维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。这些组合物还可以含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂以及分散剂。可以通过包含如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等各种抗细菌剂和抗真菌剂来确保防止微生物的作用。还可以令人期望的是包含如糖、氯化钠等等渗剂。可注射药物形式的延长吸收可以通过包含如单硬脂酸铝和明胶等延迟吸收的药剂来实现。可以通过在如聚丙交酯-聚乙交酯、聚(原酸酯)和聚(酸酐)等可生物降解的聚合物中形成药物的微胶囊基质来制备可注射储库型(depot)形式。根据药物与聚合物的比率以及所采用的特定聚合物的性质，可以对药物释放的速率进行控制。储库型可注射调配物还通过将药物截留在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。可注射调配物可以例如通过滤过细菌截留过滤器，或通过掺入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述无菌固体组合物可以在仅在使用前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射媒剂中。合适的惰性载体可以包含如乳糖等糖。令人期望地，活性成分颗粒的至少95重量％的颗粒的有效粒度在0.01微米到10微米的范围内。
[0040]
如本文所用，术语“癌症”是指具有自主生长能力的细胞。此类细胞的实例包含具有以使细胞生长迅速激增为特征的异常状态或状况的细胞。此术语意在包含：癌性生长，例如，肿瘤；致癌过程；转移性组织和恶性转化的细胞、组织或器官；而无论组织病理学类型或侵入性阶段如何。还包含如呼吸系统、心血管系统、肾脏系统、生殖系统、血液系统、神经系统、肝脏系统、胃肠道系统以及内分泌系统等各种器官系统的恶性肿瘤；以及腺瘤，所述腺瘤包含恶性肿瘤，如大多数结肠癌、肾细胞癌、前列腺癌和/或睾丸肿瘤、非小细胞肺癌、小肠癌和食道癌。“自然出现”的癌症包含不是通过将癌细胞移植到受试者体内来实验性诱导的任何癌症，并且包含例如自发出现的癌症、由于患者暴露于致癌物质所引起的癌症、由插
入转基因致癌基因或敲除肿瘤抑制基因而引起的癌症以及由于感染，例如病毒感染，所引起的癌症。术语“癌(carcinoma)”是本领域公认的并且是指上皮或内分泌组织的恶性肿瘤。在一些实施例中，本发明的方法可以用于治疗患有上皮癌的受试者，所述上皮癌例如上皮源性实体瘤，例如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肾癌、胰腺癌或结肠癌。
[0041]
如本文所用，术语“受试者”是指施用目标，例如，动物。因此，本文所公开的方法的受试者可以是脊椎动物，如哺乳动物、鱼、鸟、爬行动物或两栖动物。可替代地，本文所公开的方法的受试者可以是人、非人灵长类动物、马、猪、兔、狗、绵羊、山羊、牛、猫、豚鼠或啮齿动物。所述术语不指示具体年龄或性别。因此，旨在涵盖成人受试者和新生受试者以及胎儿，无论是男性还是女性。在一方面，受试者是哺乳动物。患者是指患有疾病或病症的受试者。术语“患者”包含人和兽医受试者。在公开的方法的一些方面，在施用步骤之前，已经诊断出受试者需要一种或多种癌症病症的治疗。
[0042]
如本文所用，术语“治疗”是指旨在治愈、改善、稳定或预防疾病、病理学病状或病症的对患者的医疗管理。此术语包含积极治疗，即特别针对疾病、病理学病状或病症的改善的治疗，并且还包含病因治疗，即针对相关疾病、病理学病状或病症的病因的去除的治疗。另外，此术语包含姑息治疗，即被设计成用于减轻症状而不是治愈疾病、病理学病状或病症的治疗；预防性治疗，即针对使相关疾病、病理学病状或病症的发展最小化或部分或完全抑制所述发展的治疗；以及支持性治疗，即用于对针对相关疾病、病理学病状或病症的改善的另一种特定疗法进行补充的治疗。在各个方面，所述术语涵盖对受试者，包含哺乳动物(例如，人)的任何治疗，并且包含：(i)防止疾病在易患所述疾病但尚未被诊断为患有所述疾病的受试者身上发生；(ii)抑制疾病，即阻止其发展；或(iii)缓解疾病，即使疾病消退。在一方面，受试者是哺乳动物，如灵长类动物，并且在另外一个方面，受试者是人。术语“受试者”还包含饲养动物(例如，猫、狗等)、家畜(例如，牛、马、猪、绵羊、山羊等)以及实验室动物(例如，小鼠、兔、大鼠、豚鼠、果蝇等)。
[0043]
如本文所使用的，术语“预防(prevent或preventing)”是指妨碍、防止、避免、预先阻止、停止或阻碍某些事情发生，尤其是通过提前动作。应当理解，在本文使用降低、抑制或预防的情况下，除非另外明确指明，否则还明确公开了其它两个词语的使用。
[0044]
如本文所使用的，术语“经诊断”意指已经经历由技术人员，例如医师，进行的身体检查，并且发现患有可以通过本文公开的化合物、组合物或方法诊断或治疗的病状。例如，“被诊断为患有癌症”意指已经经历由技术人员，例如医师，进行的身体检查，并且发现患有可以通过可以减小肿瘤大小或减缓肿瘤生长速度的化合物或组合物诊断或治疗的病状。患有癌症、肿瘤或具有至少一种癌细胞或肿瘤细胞的受试者可以使用本领域已知的方法来鉴定。例如，癌细胞或肿瘤的解剖位置、总体大小和/或细胞组成可以使用对比增强mri或ct来测定。用于鉴定癌细胞的另外的方法可以包含但不限于超声、骨扫描、外科手术活检和生物标志物(例如，血清蛋白水平和基因表达谱)。包括本发明的细胞致敏组合物的成像解决方案可以与mri或ct组合使用例如以鉴定癌细胞。
[0045]
如本文所用，术语“施用(administering或administration)”是指向受试者提供药物制剂的任何方法。此类方法对于本领域的技术人员而言是众所周知的并且包含但不限于：口服施用、经皮施用、吸入施用、经鼻施用、局部施用、阴道内施用、经眼施用、耳内施用、脑内施用、直肠施用、舌下施用、经颊施用和肠胃外施用，包含注射施用，如静脉内施用、动
脉内施用、通过侵入施用到特定器官、肌内施用、肿瘤内施用和皮下施用。施用可以是连续施用或间歇施用。在各个方面，可以治疗性地施用制剂；换言之，为了治疗现有疾病或病状而施用制剂。在另外的各个方面，可以预防性地施用制剂；换言之，为了预防疾病或病状而施用制剂。
[0046]
如本文所用，术语“有效量(effective amount或amount effective)”是指足以实现期望结果或对不期望病状起作用的量。例如，“治疗有效量”是指足以实现期望治疗结果或对不期望症状起作用但通常不足以引起不良副作用的量。任何特定患者的具体治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包含：所治疗的病症和病症的严重程度；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；施用时间；施用途径；所采用的具体化合物的排泄率；治疗的持续时间；与所采用的具体化合物组合或同时使用的药物以及医学领域熟知的类似因素。例如，以比实现期望治疗效果所需的剂量水平低的剂量水平开始使用化合物并且逐渐增加剂量直到期望效果得以实现完全处于本领域的技术范围内。如果需要，出于施用的目的，有效日剂量可以分成多个剂量。因此，单剂量组合物可以含有此类量或其约数以组成日剂量。如果发生任何禁忌症，则可以由个别医师调整剂量。剂量可以变化，并且可以以每天一次或多次剂量施用来进行施用，持续一天或数天。可以在文献中找到针对给定类别的药物产品的适当剂量的指导。在另外的各个方面，可以以“预防有效量”，换言之，用于预防疾病或病状的有效量，施用制剂。
[0047]
初始地，可以根据体外测定估计有效剂量。例如，可以调配供动物使用的初始剂量以实现活性化合物的等于或高于体外测定中测得的具体化合物的ic50的循环血液或血清浓度。在考虑具体活性剂的生物利用度的情况下计算实现此类循环血液或血清浓度的剂量完全处于熟练技术人员的能力范围内。对于指导，读者可以参考特此通过引用整体并入的《古德曼和吉尔曼的治疗学的药学基础(goodman and gilman
′
s the pharmaceutical basis oftherapeutics)》，第1章，第1-46页，最新版本，佩尔加马贡出版社(pergamagon press)中的芬格尔(fingl)和伍德伯里(woodbury)，“通则(general principles)”以及其中引用的参考文献。
[0048]
短语“抗癌组合物”可以包含例如通过细胞抑制或杀细胞作用直接对肿瘤细胞发挥，而不是通过如生物应答修改等机制间接对肿瘤细胞发挥抗赘生物、化疗、抗病毒、抗有丝分裂、抗肿瘤发生、抗血管生成、抗转移和/或免疫治疗作用，例如阻止赘生细胞的发育、成熟或扩散，的组合物。存在大量的可用于商业用途、临床评估和临床前开发的抗增殖剂，所述抗增殖剂可以通过组合药物化疗包含在本技术中。为便于讨论，抗增殖剂被分为以下类别、亚型和物种：ace抑制剂、烷化剂、血管生成抑制剂、血管抑素、蒽环类药物/dna嵌入剂、抗癌抗生素或抗生素型试剂、抗代谢物、抗转移化合物、天冬酰胺酶、双膦酸盐、cgmp磷酸二酯酶抑制剂、碳酸钙、环氧合酶-2抑制剂、dha衍生物、dna拓扑异构酶、内皮抑素、表鬼臼毒素、染料木素、激素抗癌剂、亲水性胆汁酸(urso)、免疫调节剂或免疫学药剂、整合素拮抗剂、干扰素拮抗剂或药剂、mmp抑制剂、其它抗赘生物药剂、单克隆抗体、亚硝基脲、nsaid、鸟氨酸脱羧酶抑制剂、pbatt、放射性/化疗致敏剂/保护剂、类视黄醇、选择性内皮细胞增殖和迁移抑制剂、硒、溶基质素抑制剂、紫杉烷、疫苗和长春花生物碱。
[0049]
一些抗增殖剂所属的主要类别包含抗代谢物药剂、烷化剂、抗生素型药剂、激素抗癌剂、免疫学药剂、干扰素型药剂和一类其它抗赘生物药剂。一些抗增殖剂通过多种或未知
机制起作用并且因此可以分类为多于一类。
[0050]“替马诺塞”是指参断剂的非放射性标记前体。替马诺塞是甘露糖基氨基葡聚糖。其具有葡聚糖主链，多个氨基封端的支链(1eash)(-o(ch2)3s(ch2)2nh2)与核心葡萄糖元件连接。另外，甘露糖部分与多个支链的氨基缀合，并且螯合剂二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)可以与不含甘露糖的其它支链的氨基缀合。通常，替马诺塞具有葡聚糖主链，其中多个葡萄糖残基包括氨基封端的支链：
[0051][0052]
甘露糖部分通过脒连接子与支链的氨基缀合：
[0053][0054]
螯合剂二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)通过酰胺连接子与支链的氨基缀合：
[0055][0056]
替马诺塞的化学名称为葡聚糖3-[(2-氨乙基)硫代]丙基17-羧基-10，13，16-三(羧甲基)-8-氧代-4-硫杂-7，10，13，16-四氮杂十七烷-1-基3-[[2-[[1-亚氨基-2-(d-吡喃甘露糖基硫代)乙基]氨基]乙基]硫代]丙基醚复合物，并且替马诺塞tc99m具有以下分子式：[c6h
10
o5]n.(c
19h28
n4o9s
99m
tc)b.(c
13h24
n2o5s2)c.(c5h
11
ns)a并且含有3-8个缀合的dtpa分子(b)；12-20个缀合的甘露糖分子(c)；以及保持游离的0-17个胺侧链(a)。替马诺塞具有以下一般结构：
[0057][0058]
某些葡萄糖部分可以没有所连接的氨基封端的支链。
[0059]
本公开描述了一种用于有效减少或消除m2样tam和mdsc(两者都表达cd206(即，cd206+))，而不会引起显著安全风险的方式。本公开进一步描述了一种药物递送媒剂和使用方法，所述药物递送媒剂能够将小分子和/或金属离子靶向地递送到tam和mdsc，以消融tam和/或mdsc。在本公开的上下文中，消融意指由于细胞毒性作用(即，细胞杀伤)和/或通过诱导程序性细胞死亡(例如，细胞凋亡)来减少细胞(例如，tam和/或mdsc)的数量。tam和mdsc靶向递送为tam和mdsc提供高质量剂量的小分子和离子，增加了消融效果，同时限制了对脱靶细胞和组织的潜在毒性暴露。使用本文公开的化合物和方法会有效消融m2样(免疫抑制性)激活巨噬细胞、尤其是tam和/或mdsc。
[0060]
化合物
[0061]
在某些方面，本文公开的化合物采用载体构建体来递送一种或多种活性治疗剂，所述载体构建体包括聚合物(例如，碳水化合物)主链，所述主链具有与所述主链缀合的甘露糖结合性c-凝集素型受体靶向部分(例如，甘露糖)。此类构建体的实例包含甘露糖基氨基葡聚糖(mad)，其包括葡聚糖主链，所述葡聚糖主链具有与主链的葡萄糖残基缀合的甘露糖分子并且具有与主链的葡萄糖残基缀合的活性药物成分。替马诺塞是mad的具体实例。作为替马诺塞的没有dtpa与其缀合的替马诺塞衍生物是mad的另外一个实例。
[0062]
在某些实施方案中，本公开提供了一种化合物，所述化合物包括基于葡聚糖的部
分或主链，所述基于葡聚糖的部分或主链具有与其连接的一个或多个甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分和一种或多种治疗剂。基于葡聚糖的部分通常包括与美国专利第6,409,990号(
′
990专利)中描述的葡聚糖主链类似的葡聚糖主链，所述美国专利通过引用并入本文。因此，主链包括主要通过α-1，6糖苷键连接的多个葡萄糖部分(即，残基)。还可以存在如α-1，4和/或α-1，3键等其它键。在一些实施例中，并非每个主链部分都被取代。在一些实施例中，甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分连接在葡聚糖主链的约10％的葡萄糖残基与约50％的葡萄糖残基之间、或约20％的葡萄糖残基与45％的葡萄糖残基之间或约25％的葡萄糖残基与约40％的葡萄糖残基之间。在一些实施例中，基于葡聚糖的部分为约50-100kd。基于葡聚糖的部分可以为至少约50kd、至少约60kd、至少约70kd、至少约80kd或至少约90kd。基于葡聚糖的部分可以小于约100kd、小于约90kd、小于约80kd、小于约70kd或小于约60kd。可替代地，在一些实施例中，葡聚糖主链的mw介于约1kda与约50kda之间，而在其它实施例中，葡聚糖主链的mw介于约5kda与约25kda之间。在仍其它实施例中，葡聚糖主链的mw介于约8kda与约15kda之间，如为约10kda。而在其它实施例中，葡聚糖主链的mw介于约1kda与约5kda之间，如为约2kda。
[0063]
根据另外的方面，甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分选自但不限于甘露糖、岩藻糖和n-乙酰氨基葡萄糖。在一些实施例中，靶向部分连接在葡聚糖主链的约10％的葡萄糖残基与约50％的葡萄糖残基之间、或约20％的葡萄糖残基与45％的葡萄糖残基之间或约25％的葡萄糖残基与约40％的葡萄糖残基之间。本文所引用的mw以及与葡聚糖主链连接的受体底物、支链和诊断/治疗部分的数量和缀合度是指给定量的载体分子的平均量，因为合成技术将产生一定可变性。
[0064]
根据某些实施例，一个或多个甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分和一种或多种治疗剂通过连接子与基于葡聚糖的部分连接。连接子可以连接在主链部分的约50％到约100％或约70％到约90％处。连接子可以相同或不同。在一些实施例中，连接子是氨基封端的连接子。在一些实施例中，连接子可以包括-o(ch2)3s(ch2)2nh-。在一些实施例中，连接子可以是由1到20个选自碳、氧、硫、氮和磷的成员原子构成的链。连接子可以是直链连接子或支链连接子。连接子还可以被一个或多个取代基取代，所述一个或多个取代基包含但不限于卤基、全氟烷基、全氟烷氧基、如c1-4烷基等烷基、如c1-4烯基等烯基、如c1-4炔基等炔基、羟基、氧基、巯基、烷硫基、烷氧基、硝基、叠氮化物烷基、芳基或杂芳基、芳氧基或杂芳氧基、芳烷基或杂芳烷基、芳烷氧基或杂芳烷氧基、ho-(c＝o)-基、杂环基、环烷基、氨基、烷基和二烷基氨基、氨基甲酰基、烷基羰基、烷基羰基氧基、烷氧基羰基、烷基氨基羰基、二烷氨基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、
‑‑
nh
‑‑
nh2；＝n-h；＝n-烷基；-sh；-s-烷基；-nh-c(o)-；-nh-c(＝n)；等。对于本领域的技术人员来说，显而易见的是，其它合适的连接子是可能的。
[0065]
在一些实施例中，一种或多种治疗剂通过可生物降解的连接子连接。在一些实施例中，可生物降解的连接子包括如腙等ph敏感部分。在较低ph(酸性较强)下，腙连接子随着ph降低而以增加的速率自发水解。当甘露糖基化的葡聚糖与cd206结合时，所述甘露糖基化的葡聚糖被内化到核内体，所述核内体随时间推移变得越来越酸化，由此在细胞内释放治疗剂有效载荷。
[0066]
在某些实施例中，治疗剂能够在与本文公开的mad载体连接时消融tam和/或mdsc。
在另外的实施例中，治疗剂能够诱导m2 tam复极化为m1。在某些方面，治疗剂是金属离子。在示例性实施例中，金属离子是cu(ii)。在这些实施例的示例性方面，cu(ii)离子在一个或多个支链上与螯合剂结合(如下文进一步描述的)。在某些方面，治疗剂包含每分子化合物一个或多个cu(ii)离子。在另外的实施例中，治疗剂包含1个cu(ii)离子到数量与螯合剂部分的数量相等的cu(ii)离子。在又另外的实施例中，cu(ii)离子的数量为1到12个cu(ii)离子。在甚至另外的实施例中，cu(ii)离子的数量为3到8个cu(ii)离子。在仍另外的实施例中，治疗剂包含约4个cu(ii)离子。
[0067]
根据另外的实施例，治疗剂是选自以下的金属：铜[cu]、银[ag]、镍[ni]、钯[pd]、钴[co]、铑[rh]、铁[fe]、钌[ru]、锇[os]、镉[cd]、砷[as]、锑[sb]和/或钆[gd]。在仍另外的实施例中，治疗剂是前述金属中的两种或更多种金属的组合。
[0068]
根据另外的实施例，治疗剂是细胞毒性药剂(例如，阿霉素)。在又另外的实施例中，细胞毒性药剂选自安吖啶(amsacrine)、蓓萨罗丁(bexarotene)、硼替佐米(bortezomib)、卡铂(carboplatin)、西妥昔单抗(cetuximab)、顺铂(cisplatin)、克立他酶(crisantaspase)、达卡巴嗪(dacarbazine)、多西他赛(docetaxel)、羟基脲(hydroxycarbamide或hydroxyurea)、伊立替康(irinotecan)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、喷司他丁(pentostatin)、丙卡巴肼(procarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、拓扑替康(topotecan)、曲妥珠单抗(trastuzumab)和/或维甲酸(tretinoin)。在甚至另外的实施例中，治疗剂是前述细胞毒剂中的两种或更多种细胞毒性药剂的组合。
[0069]
在仍另外的实施例中，治疗剂是抗癌剂。
[0070]
在某些方面，可以将螯合剂与所公开的化合物连接或掺入到所公开的化合物中，并且用于螯合如cu(ii)等治疗剂。示例性螯合剂包含但不限于喷替酸或二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)(如mx-dtpa)、十二烷四乙酸(dota)、三亚乙基四胺(teta)、neta、联肼尼可酰胺(hydrazinonicotinamide，hynic)和/或三氮杂环壬烷三乙酸(nota)。根据某些示例性实施方案，螯合剂为dota。
[0071]
在某些方面，所公开的化合物以药学上可接受的载体的形式存在。
[0072]
根据某些实施例，所公开的化合物是式(i)的化合物：
[0073][0074]
其中每个x独立地为h、l1-a或l2-r；
[0075]
每个l1和l2独立地是连接子；
[0076]
每个a独立地包括治疗剂或h；
[0077]
每个r独立地包括甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分或h；
[0078]
并且n为大于零的整数；并且
[0079]
其中至少一个r包括选自由甘露糖、岩藻糖和n-乙酰氨基葡萄糖组成的组的甘露糖结合性c型凝集素受体靶向部分，并且至少一个a包括治疗剂。
[0080]
在某些实施例中，至少一个l1包括-(ch2)ps(ch2)-nh-，其中p和q是从0到5的整数。
[0081]
根据另外的实施例，至少一个l2是任选地被至多三个选自由o、s和n组成的组的杂原子中断的c2-12烃链。
[0082]
在仍另外的实施例中，至少一个l2包括-(ch2)ps(ch2)-nh-，其中p和q独立地是从0到5的整数。
[0083]
在另外的实施例中，所公开的组合物具有式(ii)
[0084][0085]
其中*指示治疗剂连接的点。在某些实施例中，治疗剂通过连接子连接。
[0086]
根据某些实施例，所公开的化合物可以包含本文所公开的药学上可接受的载体和化合物或所述化合物的药学上可接受的盐。所公开的化合物或其药学上可接受的盐还可以与一种或多种其它治疗活性化合物组合包含在药物组合物中。
[0087]
所采用的药物载体可以是例如固体、液体或气体。固体载体的实例包含乳糖、白土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁和硬脂酸。液体载体的实例是糖浆、花生油、橄榄油和水。气态载体的实例包含二氧化碳和氮气。
[0088]
在将组合物制备成口服剂型时，可以采用任何方便的药物媒剂。例如，可以使用水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等来形成如悬浮液、酏剂和溶液等口服液体制剂；同时可以使用如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等载体来形成如粉末剂、胶囊剂和片剂等口服固体制剂。因为片剂和胶囊剂易于施用，所以片剂和胶囊剂是优选的口服剂量单位，由此采用固体药物载体。任选地，可以通过标准的水性或非水性技术来对片剂进行包衣。
[0089]
本文进一步公开了使用所公开的化合物的方法。在某些实施例中，公开了一种消融cd206表达性巨噬细胞和/或cd206表达性髓源性抑制细胞(mdsc)的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效剂量的化合物，所述化合物包括葡聚糖主链以及与所述葡聚糖主链连接的一个或多个cd206靶向部分和一种或多种治疗剂。本文中进一步公开了一种用
于将肿瘤相关巨噬细胞(tam)从m2复极化为m1的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文公开的化合物。
[0090]
在某些实施例中，所述化合物以治疗有效量施用。所述化合物以预防有效量施用。
[0091]
在又另外的方面，所述方法进一步包括静脉内、腹腔内、肌内、口服、皮下、眼内、肿瘤内注射或经皮施用所述化合物或通过侵入性技术将所述化合物直接递送到肿瘤器官。
[0092]
在仍另外的方面，所述方法进一步包括将所述组合物与至少一种其它治疗或疗法共同施用。在甚至另外的方面，其它治疗或疗法包括共施用抗癌剂。在另外的方面，其它治疗或疗法是化疗。在某些方面，所述化合物单独施用或与其它化学治疗剂或与放射疗法或热疗法或物理疗法或饮食疗法组合施用。
[0093]
根据某些实施例，与单独施用其它疗法或治疗相比，将本文公开的化合物与另一疗法或治疗共同施用与毒性降低有关。在另外的实施例中，本文公开的化合物与其它疗法或治疗的共同施用会产生协同效应。在又另外的实施例中，共同施用本文公开的化合物并会提供较低有效剂量的其它疗法或治疗。
[0094]
本文所提供的方法可以在辅助治疗(adjuvant setting)中实践。在一些实施例中，所述方法在新辅助治疗中实践，即所述方法可以在主要/决定性疗法之前进行。在一些实施例中，所述方法用于治疗之前已接受治疗的个体。本文提供的治疗方法中的任何治疗方法可以用于治疗之前未接受过治疗的个体。在一些实施例中，所述方法用作一线疗法。在一些实施例中，所述方法用作二线疗法。
[0095]
根据某些方面，受试者已被诊断为黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌或宫颈癌、胶质母细胞瘤、或结直肠癌、脑脊髓瘤、头颈癌、胸腺瘤、间皮瘤、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、胆管癌、膀胱癌、睾丸癌、生殖细胞瘤、脑癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、淋巴瘤、急性白血病、慢性白血病、多发性骨髓瘤、肉瘤或其任何组合。
[0096]
在某些方面，所述方法进一步包括以团注形式和/或以定期间隔施用所述组合物。在某些方面，所公开的方法进一步包括静脉内、腹腔内、肌内、口服、皮下、肿瘤内或经皮施用组合物。
[0097]
根据某些另外的实施例，所述方法进一步包括诊断受试者患有癌症。在另外的方面，受试者在施用组合物之前被诊断患有癌症。根据仍另外的方面，所述方法进一步包括评估组合物的功效。在又另外的方面，评估组合物的功效包括在施用组合物之前测量肿瘤大小以及在施用化合物后测量肿瘤大小。在甚至另外的方面，评估组合物的功效定期发生。根据某些方面，所公开的方法进一步包括任选地调整所述方法的至少一个方面。在又另外的方面，调整所述方法的至少一个方面包括改变组合物的剂量、组合物的施用频率或化合物的施用途径。
[0098]
根据某些替代性实施例，受试者已被诊断患有与cd206+巨噬细胞和/或mdsc水平升高相关的疾病。此类疾病或病状包含但不限于：获得性免疫缺陷综合征(aids)、急性播散性脑脊髓炎(adem)、爱迪生氏病(addison
′
s disease)、无丙种球蛋白血症、过敏性疾病、斑秃、阿尔茨海默氏病(alzheimer
′
s disease)、肌萎缩性侧索硬化症、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、抗合成酶综合征、动脉斑块病症、哮喘、动脉粥样硬化、特应性过敏、特应性皮炎、自身免疫性再生障碍性贫血、自身免疫性心肌病、自身免疫性肠病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性贫血肝炎、自身免疫性甲状腺功能减退症、自身免疫性内耳疾病、自身免疫性淋
巴组织增生性综合征、自身免疫性周围神经病变、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性多内分泌腺体综合征、自身免疫性孕酮性皮炎、自身免疫性血小板减少性紫癜、自身免疫性荨麻疹、自身免疫性葡萄膜炎、巴洛病(balo disease)/巴洛同心圆性硬化(balo concentric sclerosis)、白塞氏病(behcet
′
s disease)、伯格氏病(berger
′
s disease)、比克斯塔夫氏脑炎(bickerstaffs encephalitis)、布劳综合征(blausyndrome)、大疱性类天疱疮、卡斯尔曼氏病(castleman
′
s disease)、乳糜泻、查加斯病(chagas disease)、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、慢性复发性多灶性骨髓炎、慢性阻塞性肺病、慢性静脉淤血性溃疡、查格-施特劳斯综合征(churg-strauss syndrome)、瘢痕性类天疱疮、科干综合征(cogan syndrome)、冷凝集素病、补体成分2缺乏症、接触性皮炎、颅动脉炎、crest综合征、克罗恩病(crohn
′
s disease)、库兴氏综合征(cushing
′
s syndrome)、皮肤白细胞破碎性血管炎、德戈斯氏病(dego
′
s disease)、德尔肯氏病(dercum
′
s disease)、疱疹样皮炎、皮肌炎、i型糖尿病、ii型糖尿病、弥漫性皮肤系统性硬化症、德勒综合征(dressler
′
s syndrome)、药物诱导性狼疮、盘状红斑狼疮、湿疹、肺气肿、子宫内膜异位症、附着点炎症相关关节炎、嗜酸性粒细胞性筋膜炎、嗜酸性粒细胞性胃肠炎、嗜酸性粒细胞性肺炎、获得性大疱性表皮松解症、结节性红斑、胎儿成红细胞增多症、原发性混合型冷球蛋白血症、伊文氏综合征(evan
′
s syndrome)、进行性骨化性纤维发育不良、纤维化肺泡炎(或特发性肺纤维化)、胃炎、胃肠道类天疱疮、戈谢氏病(gaucher
′
s disease)、肾小球肾炎、古德帕斯彻氏综合征(goodpasture
′
ssyndrome)、格雷夫斯氏病(graves
′
disease)、格林-巴利综合征(guillain-barre syndrome，gbs)、桥本氏脑病(hashimoto
′
s encephalopathy)、桥本氏甲状腺炎(hashimoto
′
sthyroiditis)、心脏病、亨诺-许兰紫癜(henoch-schonlein purpura)、妊娠疱疹(又名妊娠期类天疱疮)、化脓性汗腺炎、hiv感染、休-斯二氏综合征(hughes-stovin syndrome)、低丙种球蛋白血症、传染病(包含细菌性传染病)、特发性炎症性脱髓鞘疾病、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜、iga肾病、包涵体肌炎、炎症性关节炎、炎症性肠病、炎症性痴呆、间质性膀胱炎、间质性肺炎、幼年特发性关节炎(又名幼年类风湿性关节炎)、川崎氏病(kawasaki
′
s disease)、兰伯-伊顿肌无力综合症(lambert-eaton myasthenic syndrome)、白细胞破碎性血管炎、扁平苔藓、硬化性苔藓、线状iga病(lad)、狼疮样肝炎(又名自身免疫性肝炎)、红斑狼疮、淋巴瘤样肉芽肿病、马吉德综合征(majeed syndrome)、恶性肿瘤，包含癌症(例如，肉瘤、卡波西肉瘤(kaposi
′
s sarcoma)、淋巴瘤、白血病、癌和黑色素瘤)、美尼尔病(meniere
′
s disease)、显微镜下多血管炎、米勒-费舍尔综合征(miller-fisher syndrome)、混合性结缔组织病、硬斑病、穆-哈二氏病(mucha-habermann disease)(又名急性痘疮样苔藓样糠疹(pityriasis lichenoides et varioliformis acuta))、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、嗜睡症、视神经脊髓炎(又名德维克氏病(devic
′
s disease))、神经肌强直、眼瘢痕性类天疱疮、眼阵挛-肌阵挛综合征、奥德氏甲状腺炎(ord
′
s thyroiditis)、回纹型风湿症、pandas(与链球菌属相关的小儿自身免疫性神经精神病症)、副肿瘤性小脑变性、帕金森病症(parkinsonian disorder)、阵发性夜间血红蛋白尿(pnh)、帕-罗二氏综合征(parry romberg syndrome)、帕森那-特纳综合征(parsonage-turner syndrome)、睫状体扁平部炎、寻常天疱疮、周围动脉疾病、恶性贫血、静脉周围脑脊髓炎、poems综合征、结节性多动脉炎、风湿性多肌痛、多肌炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、进行性炎症性神经病、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、坏疽性脓皮
病、纯红细胞再生障碍性贫血、拉斯穆森脑炎(rasmussen
′
s encephalitis)、雷诺现象(raynaud phenomenon)、复发性多软骨炎、莱特尔氏综合征(reiter
′
s syndrome)、再狭窄、不宁腿综合征、腹膜后纤维化、类风湿性关节炎、风湿热、结节病、精神分裂症、施密特综合征(schmidt syndrome)、施尼茨勒综合征(schnitzler syndrome)、巩膜炎、硬皮病、败血症、血清病、干燥综合征(syndrome)、脊柱关节病、斯蒂尔氏病(still
′
s disease)(成人发病)、僵人综合征、中风、亚急性细菌性心内膜炎(sbe)、苏萨克氏综合征(susac
′
s syndrome)、斯威特氏综合征(sweet
′
s syndrome)、西德纳姆舞蹈病(sydenham chorea)、交感性眼炎、系统性红斑狼疮、高安氏动脉炎(takayasu
′
s arteritis)、颞动脉炎(又名“巨细胞动脉炎”)、血小板减少症、托洛萨-安综合征(tolosa-hunt syndrome)、移植物(例如、心脏/肺移植物)排斥反应、横贯性脊髓炎、结核病、溃疡性结肠炎、未分化结缔组织病、未分化脊柱关节病、荨麻疹性血管炎、血管炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿病(wegener
′
s granulomatosis)。
[0099]
实例
[0100]
提出以下实例以便为本领域的普通技术人员提供对如何制备和评估本文要求保护的化合物、组合物、制品、装置和/或方法的某些实例的完整公开和描述，并且以下实例旨在纯粹例示本发明而不旨在限制诸位发明人视为其发明的内容的范围。然而，本领域的技术人员应根据本公开理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对所公开的具体实施例进行许多改变并且所述改变仍然获得相同或相似的结果。
[0101]
实例1：铜(ii)[cu(ii)]替马诺塞将m2样巨噬细胞复极化为m1样表型
[0102]
cd206在大多数m2样巨噬细胞，包含m2样tam，上的表达水平高于其在m1样巨噬细胞上的表达水平。因此，替马诺塞将定位到m2样tam。在第一实验中，使替马诺塞通过与替马诺塞的dtpa部分的螯合，以每替马诺塞分子约3.9个铜离子的速率负载cu[ii]离子。通过将来自三名人类志愿者的人外周血单核细胞置于用胎牛血清补充到10％加2.0g/l葡萄糖、0.3g/l l-谷氨酰胺、2.0g/lnahco3和1ml丙酮酸钠(11g/l)的最终浓度的rpmi-1640培养基中来诱导所述人外周血单核细胞采用m2样表型。向该培养基中加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)，到50ng/ml的浓度。将含有该培养基中的单核细胞的烧瓶温育三天以诱导分化为具有m2表型的cd206表达性巨噬细胞。这些细胞还表达骨髓细胞表面标志物cd14。
[0103]
然后，将cd14+cd206+m2样巨噬细胞在同一培养基中与不同浓度的cu(ii)-替马诺塞：0、1、2、4、8、16(ug/ml)，一起温育。cu(ii)-替马诺塞的这些浓度等于大约0、50、100、200、400、800nm。将培养物温育23或48小时，之后通过流式细胞术评估培养物对cd206和具有m1样表型的巨噬细胞的细胞表面标志物：cd80和cd86的表达。
[0104]
虽然源自三个志愿者供体的巨噬细胞相对于未处理的对照巨噬细胞中的cd206+巨噬细胞的几何平均荧光存在差异，但cu(ii)-替马诺塞暴露使cd206免疫荧光的量降低了大约40％到60％以上，从而表明这些巨噬细胞从m2样表型转变为更像m1的表型(图1)。注意到，cd206表达的观察到的绝大多数变化在cu(ii)-替马诺塞浓度为1.0μg/ml或2.0μg/ml(50nm或100nm)时发生，并且大部分变化在23小时内发生，如图2所示。
[0105]
cd80和cd86是可以由各种免疫细胞表达的细胞表面标志物。m1样激活巨噬细胞对cd80和cd86的表达水平比m2样巨噬细胞对cd80和cd86的表达水平高。cd80和cd86形成受体复合物，所述受体复合物与t细胞上表达的cd28结合，从而引起t细胞激活。如图3所示，对
cd80和cd86两者的表达都因暴露于cu(ii)-替马诺塞而增加，特别是在暴露48小时后。
[0106]
m2样巨噬细胞向m1样巨噬细胞的复极化表现为m2标志物表达的减少和m1标志物表达的增加。因此，通过cu(ii)-替马诺塞实现的复极化的效率的度量可以通过cu(ii)-替马诺塞处理的巨噬细胞相对于未处理的对照上的cd80和cd86表达的相对于类似处理的巨噬细胞上的cd206表达(图2)归一化的变化(图3)来表示。图4示出了此分析的结果。这些cd206表达归一化分析的结果表明，cu(ii)-替马诺塞使m2样巨噬细胞以浓度和时间依赖性的方式复极化为更像m1的巨噬细胞表型。
[0107]
本实例中描述的实验提供了概念证明证据：cu(ii)-替马诺塞正将m2样巨噬细胞复极化为更像m1的激活表型。预计这种效应将通过两种相关机制显著改变肿瘤的炎症性微环境。首先，通过远离促肿瘤的免疫抑制性表型并朝更抗肿瘤的促炎性表型改变tam的表型。其次，预计促炎性tam会通过减少其对如il-10和tgfβ等免疫抑制性细胞因子的产生以及通过增加其对如cd80和cd86等促炎性信号传导分子的产生来促进包含t细胞的其它免疫细胞的抗肿瘤和促炎激活。预计tam的复极化本身具有临床上显著的治疗效果；然而，tam复极化为m1样表型的最大临床效用可以通过将tam复极化与其它抗癌疗法组合来实现，借此去除或减少m2样tam的促肿瘤作用会使其它抗癌疗法更有效，或许在协同方面更有效。预计tam复极化提高其它抗癌剂的有效性的能力不会局限于任何特定类别的抗癌疗法。tam复极化可以提高细胞毒性药剂、放射疗法和生物疗法，如针对检查点抑制剂的那些，的功效。最后，预计复极化巨噬细胞的cu(ii)-替马诺塞浓度会诱导mdsc的细胞凋亡。虽然很难在体外研究mdsc，但cu(ii)改变tam表型的能力可以用作体内诱导mdsc的能力的替代品。此外，预计通过mdsc的细胞凋亡去除mdsc的免疫抑制性活性会大大提高淋巴细胞的抗肿瘤免疫应答的稳健性。
[0108]
实例2：携带阿霉素有效载荷的甘露糖基化葡聚糖选择性地杀伤cd206+巨噬细胞
[0109]
从10kda葡聚糖主链开始合成甘露糖基化的葡聚糖构建体。将胺封端的支链(≈35)添加到每个葡聚糖主链分子中，之后将平均16个甘露糖部分与支链缀合。然后，将腙连接子添加到未占用的胺封端的支链中。向腙连接子添加细胞毒性药剂阿霉素。最终合成产物每葡聚糖主链含有平均2.0个阿霉素部分。选择腙连接子用于阿霉素有效载荷的缀合是因为腙连接子具有可水解性和ph敏感性。在较低ph(酸性较强)下，腙连接子随着ph降低而以增加的速率自发水解。当甘露糖基化的葡聚糖与cd206结合时，所述甘露糖基化的葡聚糖被内化到核内体，所述核内体随时间推移变得越来越酸化，由此在细胞内释放其阿霉素有效载荷。作为对照构建体，通过添加平均1.5个部分的荧光染料cy3来修饰替马诺塞。
[0110]
在一项实验中，将源自外周血单核细胞的cd206+人巨噬细胞的培养物暴露于各种浓度的阿霉素携带性构建体，其在图5中被称为mt1001.1。将所培养的巨噬细胞暴露于mt1001.1，持续24小时，之后用不含mt1001.1的新鲜培养基替换培养基。然后，将培养物再温育24小时并且然后通过流式细胞术分析死细胞的存在。将对照培养物暴露于没有任何药物构建体的培养基或具有cy3-替马诺塞构建体的培养基。图5示出了将巨噬细胞暴露于浓度为8.62μm的mt1001.1的实验的结果。用多边形概括了显示死细胞的存在的区域。
[0111]
图5显示，用无药物培养基或cy3-替马诺塞对照处理的绝大多数cd206+巨噬细胞存活到实验结束时，而几乎所有暴露于阿霉素构建体的细胞都被这种处理杀伤。其它实验(未示出)表明，mt1001.1对不表达cd206的淋巴细胞的毒性有限。预计mdsc对mt1001.1的细
胞凋亡诱导活性比cd206+巨噬细胞敏感得多。
[0112]
传染病：
[0113]
除癌症外，cd206+m2样巨噬细胞是许多传染病的病理学的重要贡献者。实例可以包含由载体传播黄病毒引起的登革热(dengue fever)、作为细菌感染的结核病和作为原生动物感染的利什曼病。所有这些病原体都在巨噬细胞中复制并且通过与cd206的相互作用进入这些细胞。人类免疫缺陷病毒(hiv)引起获得性免疫缺陷综合症(aids)。在当前实践中，hiv病毒血症和aids的许多症状可以通过组合抗逆转录病毒疗法(cart)来控制。然而，在用cart治疗的患者中存在持续的cart抗性细胞仓库(reservoir)，从而阻止了用cart进行的治愈性治疗。重要的cart抗性仓库包含cd206+巨噬细胞。最后，cd206+巨噬细胞贡献了几种寄生虫的病理学。
[0114]
尽管已经参考优选实施例对本发明进行了描述，但是本领域的技术人员将认识到，可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下作出形式和细节方面的改变。