用于治疗或预防多种炎性病症的药物组合物的制作方法

1.本公开文本提供了一种用于治疗、预防包括以下的各种慢性炎性病症组和/或减慢包括以下的各种慢性炎性病症组的进展的方法：(1)2型糖尿病组(代谢综合征(met)、肥胖症、高血糖症)；(2)ards(急性呼吸窘迫综合征)；(3)慢性自身免疫性炎性病症(类风湿性关节炎(ra)、狼疮和银屑病)；(4)炎性肠病(ibd)，如克罗恩病和溃疡性结肠炎；(5)代谢物组介导的疾病(动脉粥样硬化、高血压和充血性心力衰竭)；以及(6)饮食过多障碍，如普拉德-威利综合征和包括瘦素途径缺陷在内的其他单基因性和症状性肥胖症障碍，每种方法包括口服施用包含地那铵盐(denatonium salt)的药物组合物。本公开文本是基于如下一系列研究的结果，所述研究追踪生物标记物簇水平，以追踪响应于口服施用的地那铵盐的炎性病症的介质和肠道信号传导激素的介质。本公开文本还提供了一种用于治疗和预防可以通过促炎性生物标记物追踪的各种炎性状况的药物组合物，所述治疗和预防包括施用包含地那铵盐的药物组合物。优选地，用于每日口服施用的药物组合物包含地那铵盐，向成人bid递送从约20mg至约5000mg的每日总剂量。优选地，所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐和地那铵酒石酸盐。


背景技术：

2.在过去的40年中，全球肥胖症的水平增加了多于一倍。由于肥胖症易于引起代谢综合征，并且与冠心病、中风、2型糖尿病、某些形式的癌症、和对于冠状病毒大流行(这种日益渐增的流行病代表了当前最重要的全球健康挑战之一)甚至更大风险的严重疾患和更高风险的死亡有关。随着这一问题的出现，人们对将肥胖状态与疾病发生联系起来的病理机制的认识也在提高。这些机制的核心是由于肥胖症导致的全身性炎症的状态加剧，从而导致多种病理。因此，对于解决食欲和炎症信号问题的治疗和预防药物存在显著的需要。本公开文本解决了这种需要。
3.炎性疾病
4.目前各种炎性疾病是用抗肿瘤坏死因子(tnf)(和抗白细胞介素(il)-6)蛋白和抗体治疗的。此类治疗性蛋白质被批准用于类风湿性关节炎、儿童中的多关节幼年型特发性关节炎(jia)、银屑病关节炎、狼疮、强直性脊柱炎(as)、慢性斑块性银屑病(ps)、全葡萄膜炎、ibd(包括溃疡性结肠炎和克罗恩病)、和许多其他疾病。这些生物药物通过用抗体或融合蛋白(如依那西普)结合并清除循环tnfα(和il-6)来起作用。然而，这些抗tnfα药物和其他任意结合并清除炎性细胞因子的生物药物具有严重的副作用。副作用是由绝大多数tnf信号传导的抑制引起的。由于tnf具有免疫监视功能(所述功能也被这些生物药物抑制)，因此更易于发生感染和降低的免疫监视，包括在黑盒警告标签上列出的各种感染性疾病和包括白血病和淋巴瘤在内的恶性肿瘤的发生率增加。因此，本领域对于敲低(但不一定消除)循环tnf的更具成本效益的小分子治疗剂存在需要。由于基于蛋白质的治疗剂无法口服施用，因此本领域对于在通过防止作为促炎性细胞因子的tnf产生而不是任意清除现有且已产生的tnf来消除循环tnf方面更微妙或更具自我限制性的口服小分子药剂存在需
要。
5.例如，美国fda批准的标签上的阿达木单抗指示以下的副作用：严重感染(即，包括tb和由病毒、真菌或细菌引起的感染)、在病毒载体中的乙型肝炎感染的恶化、过敏反应以及各种白血病和淋巴瘤的风险增加。
6.代谢综合征
7.代谢综合征(mets)是增加2型糖尿病和心血管疾病的发生风险的多重因素。mets是以下五种医学状况中至少三种的聚类：(1)内脏性肥胖症；(2)血压升高；(3)血糖升高；(4)高血清甘油三酯；和(5)低血清高密度脂蛋白(hdl)。
8.根据国际糖尿病基金会(idf)，代谢综合征以向心性肥胖症和以下中的任两个呈现：(1)》150mg/dl(1.7mmol/l)的升高的甘油三酯(tg)或针对甘油三酯升高的特定治疗；(2)《40mg/dl(1.03mmol/l)的降低的hdl，在男性中《50mg/dl(在女性中1.29mmol/l)；(3)升高的血压(bp)，其中收缩压》130或舒张压》85mm hg或高血压治疗以及(4)升高的空腹血浆葡萄糖(fpg)》100mg/dl(5.6mmol/l)或2型糖尿病的先前诊断。
9.代谢综合征也可以定义为呈现高胰岛素血症和以下中的任两个：(1)腹型肥胖症(腰臀比》0.90或bmi 30kg/m2)，(2)血脂异常(tg》1.7或hdl《0.9mmol/l)和(3)高血压(bp》140/90mm hg或使用抗高血压药物治疗)。在一项临床研究中，将碳水化合物限制视为mets的一线饮食干预，所述研究在来自禁食参与者的一组生物标记物(包括炎性生物标记物tnfα、il-6和mcp-1)中寻找显著性(al-sarraj等人,j.nutrition 139(9):1667-1675,2009)。所述研究(n＝20)发现对于mpc-1、icam-1和tnfα的显著性，但是没有发现对于il-6的显著性。
10.mets影响了20％-25％的全球成年群体，包括35％的美国成年群体。mets存在于约60％的年龄》50的美国居民中。并且mets与较高频率的自身免疫性疾病相关。因此，本领域对于提供更安全且有效的mets治疗剂存在需要。
11.ards和病毒呼吸道感染
12.急性呼吸窘迫综合征(ards)是一种威胁生命的疾病，特征在于低氧和肺部浸润物的急性发作，并且由诸如脓毒症、肺炎、创伤、烧伤、胰腺炎和输血等状况引起。ards引起弥漫性肺部炎症，这导致肺血管渗透性增加、肺水肿和肺泡上皮损伤。根据以下标准进行ards的诊断：(1)急性发作；(2)胸部x射线或断层摄影(ct)扫描上非心脏起源的双侧肺浸润；以及(3)中度至重度氧合损害。严重的ards的死亡率为45％。ards的严重程度是由低氧血症的程度定义，低氧血症的程度被计算为动脉氧张力与吸入氧分数的比率(pao2/fio2)。如通过ards的柏林定义分类，ards可以是轻度、中度或重度的，其中轻度的pao2/fio2是200-300，中度是100-199，以及重度是《100。
13.通常，ards的发展可以分为两个阶段：起始阶段，然后是效应阶段。ards的起始阶段涉及炎症介质(即细胞因子；补体和凝结因子；以及花生四烯酸代谢物)的释放，这些炎症介质促进了全身性炎症，从而导致肺嗜中性粒细胞汇集。第二阶段是效应阶段，涉及嗜中性粒细胞的激活，以及随后释放有毒的氧自由基和蛋白水解酶(具体地为嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne))。ne具有损害肺部内皮细胞和降解包括肺部基底膜的细胞外基质产物(如弹性蛋白、胶原和纤连蛋白)的能力。
14.尽管这些不同形式的最终状态病理学是相同的，但是存在具有迥然不同的病因和
病程的许多不同形式的ards。可能导致不同形式的ards的临床事件的例子包括创伤、出血、弥漫性肺炎、病毒诱导的肺炎(包括但不限于covid-19和sars)、吸入毒性气体和脓毒症。在2020年covid-19大流行的情况下，它是一种可以在许多需要重症监护的患者中观察到驱动ards的病毒性肺炎。不论起始原因如何，ards具有以下共同点：肺内液体积累和渗出液导致弥漫性肺泡损伤和肺泡中气体交换受损。下游常见的(不论ards的起始原因如何)是由于炎症、液体释放、细胞迁移和增殖以及促炎性细胞因子的增加而恶化。
15.病毒呼吸道感染的特征通常在于潜伏期长度通常为2-7天，感染的个体通常展现出发高烧、有时伴有寒战、头痛、乏力和肌痛。肺部病毒感染在没有大流行的情况下占每年美国icu入院的大约10％-15％，并且在没有冠状病毒大流行的情况下占每年因流感而死亡的显著百分比。因covid-19的2020年的大流行说明了这种疾病进展历程。疾患随着无痰干咳或呼吸困难的发作而进展，伴有或发展为低氧血症。大量病例需要插管和机械通气。此外，在呼吸道疾患的高峰时，大约50％的感染个体会发生白细胞减少和血小板减少症(mmwr morb mortal wkly rep.2003年3月28日；52(12):255-6)。
16.病毒载量扩散的模式(如冠状病毒或流感病毒)表明病毒病原体为飞沫传播或接触传播(n.engl.j.med.2003年5月15日；348(20):1995-2005)。sars-1和-2在病因学上与病毒相关，与sars相关的冠状病毒(sars-cov)是在感染的动物宿主细胞的细胞质中复制的包膜病毒的冠状病毒家族的成员。冠状病毒通常被表征为具有大约30,000个核苷酸的基因组的单链rna病毒(science.2003年5月30日；300(5624):1394-9)。冠状病毒分为三个已知的组；前两组引起哺乳动物冠状病毒感染，以及第三组引起禽类冠状病毒感染(j.s.m.peiris,in medical microbiology(第十八版),2012,587-593)。认为冠状病毒是许多动物中几种严重疾病的致病原，例如传染性支气管炎病毒、猫类传染性腹膜炎病毒和传染性胃肠炎病毒，是重要的兽医学病原体(viruses.2019年1月；11(1):59)。
17.因此，对于被诊断为患有sars的患者、感染与sars相关的感染原的患者(如感染sars-cov的患者)或处于感染sars的迫切风险的患者(如暴露于或可能会在不久的将来暴露于与sars相关的感染原的个体)的有效治疗存在需要。
18.现有技术中针对ards的治疗是不充分的。因此，对于ards的有效治疗存在迫切需要。
19.代谢物组
20.肠道微生物群引起了很多关注，并且肠道微生物群系的失衡与若干疾病相关，取决于哪些细菌组增加或减少。动脉粥样硬化疾病，伴有诸如心肌梗塞和中风等表现，是患有代谢综合征的受试者中严重疾病和死亡的主要原因。所述疾病被认为是由胆固醇的积累和巨噬细胞募集到动脉壁引起的，并且因此可以被视为代谢性疾病和炎性疾病二者。自19世纪上半叶，人们认为由加强血管细胞中的促动脉粥样硬化变化引起或促进动脉粥样硬化。然而，对于早期减慢血管细胞和相关疾病的动脉粥样硬化变化的更好的方式仍存在需要。本发明提供了一种用于通过减少支持血管细胞中的动脉粥样硬化变化的肠道信号来减慢血管细胞中的动脉粥样硬化变化的方法。
21.饮食过多
22.食物行为的调节(包括对一些食物组成的食欲的控制和较少脂肪食物或较低热量含量的食物偏好二者)可以提供预防包括心血管疾病在内的代谢性障碍发生的机制
(langley-evans等人,matern child nutr.,1,142-148,2005)，特别是如在我们发达的社会中发生的，当广泛使用热量密度高或富含脂肪(特别是饱和脂肪)的食物时如此。
23.在维持能量平衡和体重方面起作用的更重要的信号之一是瘦素，即一种由主要在脂肪组织中表达的由ob基因编码的循环蛋白。瘦素在能量平衡的调节、抑制食物摄入量和增加能量损耗中起核心作用(zhang等人,nature,372,425-432,1994)。此蛋白质在血液中以与脂肪储库的大小成比例的浓度循环；它借助可饱和系统通过血脑屏障，并且通过蛋白质与位于下丘脑神经元和脑其他区域的受体的相互作用，对中心水平的能量平衡发挥大部分作用(tartaglia等人,cell.83,1263-1271,1995)。
24.瘦素信号传导轴缺陷的动物(因为它们无法产生功能蛋白质或因为它们表达瘦素受体的缺陷形式)的特征在于饮食过多和早期外观的严重肥胖症以及患有糖尿病、低体温和不孕症。在人体内，瘦素信号传导(缺乏瘦素或其受体)方面的先天缺陷也与早期外观的病态肥胖症相关(clement等人,nature,392,398-401,1998；montague等人,nature,387,903-908,1997；strobel等人,nat.genet.,18,213-215,1998)。从这个意义上讲，提出了瘦素在治疗或预防直接原因为肥胖症的糖尿病中的用途(wo 97/02004)。
25.尽管人们认为，瘦素的短期食欲抑制作用可能有助于控制肥胖者的肥胖症和相关障碍的问题，但是不幸的是，仅施用瘦素作为一种实际治疗是无效的，部分是由于耐受性以及补偿性上调了介导饥饿和饱腹感的其他途径。长期治疗结局仍然不令人满意。
26.随着年龄的增长，瘦素的循环水平增加(matheny等人,diabetes 1997,46,2035-9；iossa等人,j nutr.1999,129,1593-6)，并且对这种激素的敏感性受损(qian等人,proc.soc.exp.biol.med.1998,219,160-5；scarpace等人,neuropharmacology,2000,39,1872-9)。并且，高水平的循环瘦素可有利于发生对这种激素的食欲抑制作用的耐药性，从而导致保持了肥胖症和/或其并发症的发生和维持。事实上，有证据表明，在大鼠中，瘦素耐药性将是体重增加和与年龄相关的多脂症的主要决定因素[iossa等人,j.nutr.,1999,129,1593-6]。然而，尽管通常认为循环瘦素的浓度与体内脂肪量成比例，并且随着年龄的增长，这一量通常会增加，但是有证据表明高瘦素血症的增加和瘦素耐药性的发生随着年龄的增长而发生，至少部分地与多脂症的增加无关(gabriely等人,diabetes,2002,51,1016-21)。
[0027]
高瘦素循环水平在人中也与心血管疾病风险增加[ren,j.endocrinol.,2004,181,1-10]和胰岛素抵抗的发生[huang等人,int.j.obes.relat.metab.disord.,2004,28,470-5]相关，并且这甚至与体重指数/多脂症无关。


技术实现要素：

[0028]
本公开文本提供了一种用于治疗、预防包括以下的各种慢性炎性病症组和/或减慢包括以下的各种慢性炎性病症组的进展的方法：(1)2型糖尿病组(代谢综合征(met)、肥胖症、高血糖症)；(2)ards(急性呼吸窘迫综合征)；(3)慢性自身免疫性炎性病症(类风湿性关节炎(ra)、狼疮和银屑病)；(4)炎性肠病(ibd)，如克罗恩病和溃疡性结肠炎；(5)代谢物组介导的疾病(动脉粥样硬化、高血压和充血性心力衰竭)；以及(6)饮食过多障碍，如普拉德-威利综合征和包括瘦素途径缺陷在内的其他单基因性和症状性肥胖症障碍，每种方法包括口服施用包含地那铵盐的药物组合物。本公开文本是基于如下一系列研究的结果，所
述研究追踪生物标记物簇水平，以追踪响应于口服施用的地那铵盐的炎性病症的介质和肠道信号传导激素的介质。本公开文本还提供了一种用于治疗和预防可以通过促炎性生物标记物追踪的各种炎性状况的药物组合物，所述治疗和预防包括施用包含地那铵盐的药物组合物。优选地，用于每日口服施用的药物组合物包含地那铵盐，向成人bid递送从约20mg至约5000mg的每日总剂量。优选地，所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐和地那铵酒石酸盐。
[0029]
本公开文本提供了一种用于治疗、预防包括代谢综合征(met)、肥胖症和高血糖症在内的2型糖尿病和减慢包括代谢综合征(met)、肥胖症和高血糖症在内的2型糖尿病恶化的方法，所述方法包括口服施用包含地那铵盐的药物组合物，其中所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐(da)、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐、地那铵糖和地那铵酒石酸盐。优选地，所述药物组合物还包含约0.5g至约5g乙酸。更优选地，对于成人，乙酸的每天剂量是从约1.5g至约3g。优选地，对于成人，地那铵盐的每日剂量是每天从约20mg至约5000mg或从约5mg/kg至约150mg/kg体重。更优选地，对于成人，da的每日剂量是从约50mg至约1000mg。最优选地，对于成人，da的每日剂量是从约60mg至约500mg，或在胃肠道中达到从约10ppb至约50ppm的浓度。将所述地那铵盐的每日剂量按每天一次、每天两次或每天三次施用。
[0030]
本公开文本提供了一种用于治疗、预防包括ards的急性肺炎性病症和减慢包括ards的急性肺炎性病症恶化的方法，所述方法包括口服施用包含地那铵盐的药物组合物，其中所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐(da)、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐、地那铵糖和地那铵酒石酸盐。优选地，所述药物组合物还包含约0.5g至约5g乙酸。更优选地，对于成人，乙酸的每天剂量是从约1.5g至约3g。优选地，对于成人，地那铵盐的每日剂量是每天从约20mg至约5000mg或从约5mg/kg至约150mg/kg体重。更优选地，对于成人，da的每日剂量是从约50mg至约1000mg。最优选地，对于成人，da的每日剂量是从约60mg至约500mg，或在胃肠道中达到从约10ppb至约50ppm的浓度。将所述地那铵盐的每日剂量按每天一次、每天两次或每天三次施用。
[0031]
本公开文本提供了一种用于治疗、预防选自类风湿性关节炎(ra)、狼疮和银屑病的慢性自身免疫性炎性病症组的适应证和减慢所述适应证恶化的方法，所述方法包括口服施用包含地那铵盐的药物组合物，其中所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐(da)、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐、地那铵糖和地那铵酒石酸盐。优选地，所述药物组合物还包含约0.5g至约5g乙酸。更优选地，对于成人，乙酸的每天剂量是从约1.5g至约3g。优选地，对于成人，地那铵盐的每日剂量是每天从约20mg至约5000mg或从约5mg/kg至约150mg/kg体重。更优选地，对于成人，da的每日剂量是从约50mg至约1000mg。最优选地，对于成人，da的每日剂量是从约60mg至约500mg，或在胃肠道中达到从约10ppb至约50ppm的浓度。将所述地那铵盐的每日剂量按每天一次、每天两次或每天三次施用。
[0032]
本公开文本提供了一种用于治疗、预防选自克罗恩病和溃疡性结肠炎的慢性ibd组的适应证和减慢选自克罗恩病和溃疡性结肠炎的慢性ibd组的适应证恶化的方法，所述方法包括口服施用包含地那铵盐的药物组合物，其中所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐(da)、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐、地那铵糖和地那铵酒石酸盐。优选地，所述药物组合物还包含约0.5g至约5g乙酸。更优选地，对于成人，乙酸的每天剂量是从约1.5g至约3g。优选地，对于成人，地那铵盐的每日剂量是每天从约20mg至约5000mg或从约5mg/kg至约
150mg/kg体重。更优选地，对于成人，da的每日剂量是从约50mg至约1000mg。最优选地，对于成人，da的每日剂量是从约60mg至约500mg，或在胃肠道中达到从约10ppb至约50ppm的浓度。将所述地那铵盐的每日剂量按每天一次、每天两次或每天三次施用。
[0033]
本公开文本提供了一种用于治疗、预防选自动脉粥样硬化、高血压和充血性心力衰竭(chf)的代谢物组介导的组的适应证和减慢所述适应证恶化的方法，所述方法包括口服施用包含地那铵盐的药物组合物，其中所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐(da)、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐、地那铵糖和地那铵酒石酸盐。优选地，所述药物组合物还包含约0.5g至约5g乙酸。更优选地，对于成人，乙酸的每天剂量是从约1.5g至约3g。优选地，对于成人，地那铵盐的每日剂量是每天从约20mg至约5000mg或从约5mg/kg至约150mg/kg体重。更优选地，对于成人，da的每日剂量是从约50mg至约1000mg。最优选地，对于成人，da的每日剂量是从约60mg至约500mg，或在胃肠道中达到从约10ppb至约50ppm的浓度。将所述地那铵盐的每日剂量按每天一次、每天两次或每天三次施用。
[0034]
本公开文本提供了一种用于治疗选自普拉德-威利综合征和瘦素途径缺陷的饮食过多组的适应证或减慢所述适应证恶化的方法，所述方法包括口服施用包含地那铵盐的药物组合物，其中所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐(da)、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐、地那铵糖和地那铵酒石酸盐。优选地，所述药物组合物还包含约0.5g至约5g乙酸。更优选地，对于成人，乙酸的每天剂量是从约1.5g至约3g。优选地，对于成人，地那铵盐的每日剂量是每天从约20mg至约5000mg或从约5mg/kg至约150mg/kg体重。更优选地，对于成人，da的每日剂量是从约50mg至约1000mg。最优选地，对于成人，da的每日剂量是从约60mg至约500mg，或在胃肠道中达到从约10ppb至约50ppm的浓度。将所述地那铵盐的每日剂量按每天一次、每天两次或每天三次施用。
附图说明
[0035]
图1示出了与媒介物对照相比，在施用da的情况下，体重随时间的变化。
[0036]
图2示出了与媒介物对照相比，在施用da的情况下，体重随时间的变化。
[0037]
图3示出了第28天的体重变化。在两个实验组之间第28天的体重变化没有统计学上显著的差异。
[0038]
图4示出了第28天的禁食血糖水平。在两个实验组之间第28天的禁食血糖水平没有统计学上显著的差异。
[0039]
图5示出了第28天的hba1c水平。在两个实验组之间第28天的血液hba1c水平没有统计学上显著的差异。
[0040]
图6示出了第28天的血液hdl水平。与媒介物处理的动物相比，用23.1mg/kg的da处理的动物示出了第28天的血液hdl水平的统计学上显著的降低。
[0041]
图7示出了第28天的血液ldl胆固醇水平。在两个实验组之间第28天的血液ldl水平没有统计学上显著的差异。
[0042]
图8示出了第28天的血液总胆固醇水平(ldl加hdl)。与媒介物处理的动物相比，用23.1mg/kg的da处理的动物示出了第28天的血液总胆固醇水平的几乎显著的降低。
[0043]
图9示出了第28天的血液胰岛素水平。在两个实验组之间第28天的血液胰岛素水平没有统计学上显著的差异。
[0044]
图10示出了第28天的血液胆汁酸水平。在两个实验组之间第28天的血液胆汁酸水平没有统计学上显著的差异。
[0045]
图11示出了在给药前和第28天的粒细胞数量和百分比，尽管没有统计学上显著的差异，但是与媒介物处理的对照相比，da处理的动物示出了粒细胞数量增加的变化趋势。
[0046]
图12示出了给药前和第28天的单核细胞数量和百分比。尽管没有统计学上显著的差异，但是与媒介物处理的对照相比，da处理的动物示出了单核细胞数量和百分比增加的变化趋势。
[0047]
图13示出了给药前和第28天的淋巴细胞和白细胞数量的变化。尽管没有统计学上显著的差异，但是与媒介物处理的对照相比，da处理的动物示出了淋巴细胞和白细胞数量和百分比增加的变化趋势。
[0048]
图14示出了28天内的累积食物消耗。在两个实验组之间28天内的食物消耗没有统计学上显著的差异。
[0049]
图15示出了第28天血液中各种细胞因子分析。kc：细胞因子诱导的嗜中性粒细胞趋化因子(cxcl1)；mcp-1：单核细胞趋化蛋白-1；mip-1：巨噬细胞炎症蛋白1；m-csf，巨噬细胞集落刺激因子；mip-2：巨噬细胞炎症蛋白2(cxcl2)；vegf：血管内皮生长因子。kc或cxcl1和m-csf示出了在施用da的情况下的显著降低。
[0050]
图16示出了第28天血液中各种细胞因子分析。ip-10：ifn-γ-诱导蛋白10(cxcl10)。il-10和il-12示出了在施用da的情况下的显著降低。
[0051]
图17示出了第28天血液中各种细胞因子分析。g-csf：粒细胞集落刺激因子；gm-csf：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；ifnγ：干扰素γ；il-1α、il-1β、il-2和il-5。gm-csf、ifnγ和il-5示出了在施用da的情况下的显著降低。
[0052]
图18示出了气囊渗出液中浸润细胞计数的图，其中用da预处理以剂量依赖性方式降低了在lps诱导后气囊渗出液中的浸润细胞计数。在结果之间，与用媒介物和较低剂量的da预处理的动物相比，用96.4mg/kg的da预处理的动物示出了显著更低的浸润细胞计数。
[0053]
图19示出了气囊渗出液中il-6水平的图，其中用da预处理以剂量依赖性方式降低了在lps诱导后气囊渗出液中的浸润细胞计数。在结果之间，与用媒介物和较低剂量的da预处理的动物相比，用96.4mg/kg的da预处理的动物示出了显著更低的il-6水平。
[0054]
图20-图27分别示出了g-csf、嗜酸性粒细胞趋化因子、gm-csf、ifnγ、il-1a、il-1b、il-2和il-3的细胞因子水平。在这组细胞因子中，il-1b示出了在较高剂量的da的情况下的显著降低。
[0055]
图28-图35分别示出了il-4、il-5、il-7、il-9、il-10、il-12p40、il-12p70和il-13的细胞因子水平。在这组细胞因子中，il-10示出了在较高剂量的da的情况下的显著降低。
[0056]
图36-图43分别示出了il-15、il-17、lif、lix、ip-10、kc、mcp-1和mcp-1a的细胞因子水平。在这组细胞因子中，il-17示出了在较高剂量的da的情况下的显著降低。
[0057]
图44-图50分别示出了mip-1b、mip-2、m-csf、mig、rantes、vegf和tnf-1a的细胞因子水平。在这组细胞因子中，tnf-1a示出了在较高剂量的da的情况下的显著降低。
[0058]
图51示出了关于较高剂量(橙色)和较低剂量(蓝色)的汇总，用星号表示显著性。
[0059]
图52示出了研究期期间的体重变化。用da处理示出了对体重的显著主要影响(p＝0.0052)。
[0060]
图53示出了第10天的体重。与媒介物相比，用69.3mg/kg da bid处理的动物对dss诱导的体重减轻显示出显著效果。
[0061]
图54示出了研究期期间的粪便隐血得分。用da处理示出了对便血状态的显著主要影响。
[0062]
图55示出了研究期期间的粪便一致性得分。用da处理示出了对粪便一致性的显著主要影响。
[0063]
图56示出了研究期期间的组合粪便得分。用da处理示出了对组合粪便状态的显著主要影响。
[0064]
图57和图58分别示出了第10天的结肠重量和长度。尽管未观察到显著差异，但是用高剂量的da处理可以抵消dss诱导的小鼠结肠重量和长度的减少。
[0065]
图59示出了第10天的脾重量。尽管未观察到显著的影响，但是用高剂量的da处理示出了抵消dss诱导的小鼠脾重量损失的趋势。
[0066]
图60示出了门水平的变化，其中第4周示出了以下的微生物群系在门水平上的》95％的置信变化：处理增加了变形细菌门(proteobacteria)*、疣微菌门(verrucomicrobia)*、蓝菌门(cyanobacteria)*。处理减少了拟杆菌门(bacteroidetes)、厚壁菌门(firmicutes)*、脱铁杆菌门(deferribacteres)和螺旋体门(spirochetes)*。(*相对于对照或时间0的显著差异)。
[0067]
图61示出了处理相比于对照在科水平上的显著差异。
[0068]
图62示出了主坐标分析图。
[0069]
图63示出了4周da处理后不饱和脂肪酸的生物合成途径的显著富集(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0070]
图64示出了4周da处理后花生四烯酸的代谢途径的显著富集(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0071]
图65示出了4周da处理后辅因子和维生素代谢的途径的显著富集(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0072]
图66示出了4周da处理后赖氨酸降解途径的显著富集(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0073]
图67示出了4周da处理后糖酵解和糖异生途径的显著富集(组数据)。
[0074]
图68示出了4周da处理后磷脂酰肌醇信号传导的显著富集(组数据)。
[0075]
图69示出了4周da处理后精氨酸和鸟氨酸代谢的信号传导显著降低(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0076]
图70a-图70c示出了按家族比较许多研究中的生物标记物的图，示出了下降的平均百分比。
[0077]
在图71中，应注意的是，多个生物标记物的簇预测了对于每种疾病适应证的有效性，并且分组如图71所示。
[0078]
图72和图72分别示出了来自实施例7和实施例8的数据的肺灌洗液中的细胞因子概况图。
[0079]
图74示出了与媒介物和cql相比，da处理显著降低了第57天dio小鼠的体重增加。
[0080]
图75a示出，在第14天，与媒介物相比，用da处理显著降低了dio小鼠的每日食物摄
入量，并且图75b示出，与媒介物相比，用da处理显著增加了第28天的每日水摄入量，而用cql处理显著降低了每日水摄入量，二者均来自实施例9。
[0081]
图76示出，用da和cql处理显著降低了第28天dio小鼠的血清hba1c水平，但是大幅提高了第56天的hba1c水平。
[0082]
图77示出，与媒介物对照相比，用da处理显著降低了第28天dio小鼠的血清胰岛素水平。
[0083]
在图78中，尽管没有观察到显著差异，但是与媒介物对照相比，用da处理导致第28天和第56天的血清ldl水平明显降低。
[0084]
图79示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了第7天和第56天dio小鼠的血清glp-1水平。
[0085]
图80示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了第56天dio小鼠的血清glp-2水平。
[0086]
图81示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了第56天dio小鼠的血清cck水平。
[0087]
图82示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了第56天dio小鼠的血清pyy水平。
[0088]
图83示出了用da处理显著降低了ob/ob小鼠的血清葡萄糖水平。
[0089]
图84示出，与媒介物对照相比，用da处理显著降低了ob/ob小鼠的血清甘油三酯水平。
[0090]
图85示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了ob/ob小鼠的血清胆汁酸水平。
[0091]
图86示出，与媒介物对照相比，用da处理显著降低了ob/ob小鼠的血清ldl水平。
具体实施方式
[0092]
本公开文本提供了一种用于治疗、预防包括以下的各种慢性炎性病症组和/或减慢包括以下的各种慢性炎性病症组的进展的方法：(1)2型糖尿病组(代谢综合征(met)、肥胖症、高血糖症)；(2)ards(急性呼吸窘迫综合征)；(3)慢性自身免疫性炎性病症(类风湿性关节炎(ra)、狼疮和银屑病)；(4)炎性肠病(ibd)，如克罗恩病和溃疡性结肠炎；(5)代谢物组介导的疾病(动脉粥样硬化、高血压和充血性心力衰竭)；以及(6)饮食过多障碍，如普拉德-威利综合征和包括瘦素途径缺陷在内的其他单基因性和症状性肥胖症障碍，每种方法包括口服施用包含地那铵盐的药物组合物。本公开文本是基于如下一系列研究的结果，所述研究追踪生物标记物簇水平，以追踪响应于口服施用的地那铵盐的炎性病症的介质和肠道信号传导激素的介质。本公开文本还提供了一种用于治疗和预防可以通过促炎性生物标记物追踪的各种炎性状况的药物组合物，所述治疗和预防包括施用包含地那铵盐的药物组合物。优选地，用于每日口服施用的药物组合物包含地那铵盐，向成人bid递送从约20mg至约5000mg的每日总剂量。优选地，所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐和地那铵酒石酸盐。
[0093]
本公开文本基于以下发现：(1)在用地那铵盐和安慰剂对照的预测性ob/ob肥胖症小鼠模型中，来自以体重减轻体内研究开始的一组出人意料的结果。来自各种体内模型中
的几项研究的数据表明，通过首先测量血液和其他液体(例如，气囊渗出液和肺灌洗液)中的炎性细胞因子作为生物标记物、然后测量肠道信号传导肽，得出口服施用具有有机酸阴离子的地那铵盐示出了治疗功效并且示出了显著的抗炎作用。口服施用(但不是静脉内施用)的治疗方法提供了这样的数据，其示出了治疗、预防适应证(包括代谢综合征(mets)、肥胖症(炎症介导的)、ards、类风湿性关节炎(ra)、狼疮和银屑病)和减慢这些适应证的疾病进展的方法的功效(实施例1和实施例2)；(2)葡聚糖硫酸钠(dss)诱导的小鼠结肠炎模型的体内研究，示出了在包括炎性肠病(ibd)(主要包含溃疡性结肠炎和克罗恩病)的适应证中的治疗和预防功效(实施例3)；以及(3)在饲喂高脂肪饮食的小鼠中的四周微生物群系研究，示出了对于动脉粥样硬化、高血压和充血性心力衰竭的治疗和预防功效(实施例4及以下)。测量的一组促炎指示细胞因子实现了施用药物的小鼠与对照小鼠之间的显著差异。体重减轻示出了在da施用的情况下体内功效的强趋势，但是并非类似地具有统计学显著性。
[0094]
根据微生物群系数据，在炎性肠病模型(实施例3)和炎性疾病的气囊模型中本文提供的细胞因子数据表明，研究药物da确实在以下三个方面展现出治疗活性：(1)治疗或预防mets，(2)治疗或预防包括自身免疫性疾病在内的普通炎性疾病；(3)治疗包括克罗恩病和溃疡性结肠炎在内的炎性肠病；以及(4)治疗诸如动脉粥样硬化、高血压和充血性心力衰竭等心血管疾病。因此，这些研究中获得的数据确实有情节可讲，并且这个情节是地那铵盐药物组合物示出了以下方面的安全性和功效：(1)治疗或预防mets；(2)治疗肥胖症和实现体重减轻；(3)治疗自身免疫性炎性状况类风湿性关节炎(ra)、狼疮和银屑病；(4)治疗克罗恩病和炎性肠病(ibd)；以及(5)治疗或减慢动脉粥样硬化、高血压和充血性心力衰竭的心血管疾病的疾病进展。优选地，所述地那铵盐选自地那铵乙酸盐、地那铵柠檬酸盐、地那铵马来酸盐和地那铵酒石酸盐。更优选地，向成人bid口服施用每天从约25mg至约500mg的用于治疗上述所列适应证的地那铵盐。
[0095]
此外，实施例2研究提供了在减少il-5产生方面具有统计学显著性的出人意料的结果，这指示本发明的包括da在内的地那铵盐的药物组合物在治疗ards方面的有效性。
[0096][0097]
本实施例描述了地那铵乙酸盐(da)的合成。
[0098]
步骤1：从利多卡因合成地那铵氢氧化物
[0099]
向回流设备中添加25g的利多卡因、60ml的水和17.5g的苄基氯，伴随在70℃-90℃下搅拌和加热。需要将溶液加热并且在给定值前搅拌24h，需要将溶液冷却至30℃。将未反应的试剂用3
×
10ml的甲苯去除。在搅拌下将65g的氢氧化钠溶解到65ml的冷水中，并且经3小时的历程在搅拌下将其添加到水溶液中。将混合物过滤，用一些水洗涤，并且在露天中干燥。在热氯仿或热乙醇中重结晶。
[0100][0101]
步骤2：从地那铵氢氧化物制备地那铵乙酸盐。
[0102]
向回流设备中添加10g的地那铵氢氧化物(mw：342.475g/mol，0.029mol)、20ml的丙酮和溶解于15ml丙酮中的2g冰乙酸(0.033mol)，将混合物搅拌并且加热至35℃保持3h。然后蒸发至干，并且在热丙酮中重结晶。
[0103][0104]
da片剂的配制
[0105]
这提供了作为游离碱的地那铵乙酸盐单水合物(da)的立即释放型50mg颗粒配制品，作为立即胃释放型口服药物配制品。
[0106]
表1示出了da的定性和定量的配制品组成。
[0107][0108]
iid，非活性成分数据库；api，活性药物成分；usp，美国药典；nf，美国国家处方集
[0109]
*将溶剂，如乙醇usp 190proof(190proof纯乙醇)和纯净水(usp)用于制备药物溶液和密封包衣分散体，但在制造过程期间去除。
[0110]
详细的制造步骤如下所述。
[0111]
1.药物分层过程-药物分层丸粒
[0112]
药物分层过程是在配备有转子插入物(转子造粒机)的流体床造粒机中进行的。通过在乙醇中溶解聚维酮k30(kollidon 30)和地那铵乙酸盐来制备药物溶液。将药物溶液切向喷到在转子造粒机中以圆周运动移动的糖球(35/45目)的床上。然后将最终的载药丸粒在转子造粒机中干燥十(10)分钟，并且通过#20目过筛。
[0113]
2.密封包衣过程-密封包衣丸粒
[0114]
密封包衣分散体是通过将羟丙甲纤维素e5单独地溶解在乙醇和纯净水的混合物(1:1)中直到获得澄清溶液制备的。然后将剩余量的乙醇添加到上述溶液中，然后添加滑石粉。将分散体混合20分钟以允许滑石粉的均匀分散。将密封包衣分散体切向喷在载药丸粒上，以实现5％的重量增加。然后将密封包衣丸粒在转子造粒机中干燥五(5)分钟，取出并且在55℃下在托盘干燥机/烤箱中进一步干燥2小时。然后将密封包衣丸粒通过#20目过筛。
[0115]
3.最终共混-地那铵立即释放型(ir)丸粒
[0116]
将密封包衣丸粒与通过#60目过筛的滑石粉使用v-blender共混十(10)分钟并且取出。将共混的密封包衣珠即地那铵ir丸粒用于胶囊化。
[0117]
4.胶囊化-地那铵胶囊，50mg
[0118]
将50mg的地那铵ir丸粒使用自动胶囊填充机填充到1号大小的白色不透明硬明胶
胶囊中。然后，使胶囊通过在线胶囊抛光机和金属探测器。在胶囊化过程期间进行胶囊重量和外观的过程中控制。在胶囊化过程期间，通过对复合样品的质量保证(qa)进行接收质量限(aql)抽样。将完成的产物复合样品收集并且根据释放测试的规范进行分析。
[0119]
5.包装-胶囊，50mg-30个计数
[0120]
将50mg胶囊以30个计数包装到具有33mm白色crc盖的50/60cc白色hdpe圆形s-line瓶中。将瓶使用感应密封机进行扭转并且密封。
[0121]
生物标记物与疾病适应证的关系
[0122]
本文提供的许多例子显示出地那铵盐对各种疾病适应证的各种体内和体外模型的影响。此外，从测试(和对照)动物中采集了血液样品，并且测量并比较了各种生物标记物。图70a-图70c示出了比较许多研究中的生物标记物的图。表2将生物标记物按家族分组，示出了降低的平均百分比，并且示出了哪种疾病适应证由每种生物标记物影响和预测。应注意的是，多个生物标记物的簇预测了对于每种疾病适应证的有效性，并且分组如图71所示。
[0123]
表2
[0124]
[0125]
[0126][0127]
微生物群系
[0128]
在有或没有口服施用da的4周处理后在使用高脂肪饮食的小鼠模型中的微生物群系存在变化。高脂肪饮食本身引起了所有组的微生物群体的广泛变化。但是重要的是，在第4周，da处理组与对照组之间存在明显的差异。
[0129]
进行了在第4周在对照组和处理组中发生变化并且在细菌的主要和次要门组中观察到广泛变化以及在科和属水平上也发生变化的不同生物体的分类。例如，厚壁菌门在处理组中大幅度降低，而变形细菌门和疣微菌门则大幅度增加。由于饮食影响，在对照组和处理组二者的研究历程中，在4周时多样性下降。在4周时，与对照相比，处理组进一步显著降低了总体多样性，这表明特化群体的增加。
[0130]
由处理诱导的与预测的生理和代谢途径相关的变化的遗传潜力与观察到的用da处理的在减弱炎症和代谢综合征方面的益处一致。受影响的大多数途径与炎症的减少直接相关，并且已知对心血管健康和与人类代谢综合征相关的其他状况有益。观察结果包括：
[0131]
不饱和脂肪酸的代谢增加
[0132]
花生四烯酸的代谢增加
[0133]
辅因子和维生素的代谢增加
[0134]
赖氨酸降解增加
[0135]
糖酵解和糖异生增加
[0136]
磷脂酰肌醇信号传导增加
[0137]
精氨酸和鸟氨酸代谢降低
[0138]
下文从门、科、属水平上的变化
[0139]
遗传潜力1：不饱和脂肪酸的代谢增加。存在不饱和脂肪酸的生物合成途径的显著富集。积累的证据支持饮食中不饱和脂肪酸相对于饱和脂肪酸改善心血管健康的益处(front pharmacol.2018；9:1082；circulation.2017；136(3):e1-e23；ann.intern.med.2014；160(6):398-406)。
[0140]
遗传潜力2：花生四烯酸的代谢增加。花生四烯酸代谢物是炎症起始和消退的重要因素，并且与肥胖症、糖尿病、非酒精性脂肪肝病(nafld)/非酒精性脂肪性肝炎(nash)和心
血管疾病相关(int.j.mol.sci.2018；19(11):3285)。
[0141]
遗传潜力3：辅因子和维生素的代谢增加。辅因子和维生素的产生的增加具有交互作用。在人类临床研究中已经证明了包括l-肉碱、烟酰胺核苷(nr)、l-丝氨酸和n-乙酰-l-半胱氨酸(nac)的辅因子可以改善与不同人类疾病相关的改变的生物学功能(nutrients.2019；11(7):1578)。多种维生素及其衍生物具有预防和治疗包括糖尿病的代谢综合征疾病的治疗潜力(can.j.physiol.pharmacol.2015；93(5):355-62；endocr.metab.immune disord.drug targets.2015；15(1):54-63)。
[0142]
遗传潜力4：赖氨酸降解增加。赖氨酸降解的主要终产物是细菌丁酸酯(annu.rev.biochem.1981；50:23-40)，所述细菌丁酸酯已经显示可通过维持肠道屏障功能来预防动脉粥样硬化(nat.microbiol.2018；3(12):1332-1333)。另一个终产物乙酸盐也具有减少炎症的相似的作用(j.atheroscler.thromb.2017；24(7):660-672)。
[0143]
遗传潜力5：糖酵解和糖异生增加。细菌中的短链脂肪酸(scfa)的产生顺序为从葡萄糖糖酵解到丙酮酸，再到乙酰辅酶a(coa)，并且最终到乙酸、丙酸和丁酸(j.lipid res.2016；57(6):943-54)。这种调节与先前指出的包括赖氨酸降解的途径相配合。
[0144]
遗传潜力6：磷脂酰肌醇信号传导增加。存在显著的磷脂酰肌醇途径上调。据记载，磷脂酰肌醇途径(例如pi3k/akt、mapk和ampk途径)对于葡萄糖稳态至关重要。并且，这些途径的失调通常会导致肥胖症和糖尿病(expert rev.mol.med.2012；14:e1)。
[0145]
遗传潜力7：精氨酸和鸟氨酸代谢降低。我们观察到精氨酸和鸟氨酸代谢途径显著降低。一项随机研究表明，高精氨酸水平与较高的缺血性心脏病风险相关(am.heart j.2016；182:54-61)，并且鸟氨酸的积累也参与几种代谢性疾病的发病机制(biomed.pharmacother.2017；86:185-194)。
[0146]
图60示出了门水平的变化，其中第4周示出了以下的微生物群系在门水平上的》95％的置信变化：处理增加了变形细菌门(proteobacteria)*、疣微菌门(verrucomicrobia)*、蓝菌门(cyanobacteria)*。处理减少了拟杆菌门(bacteroidetes)、厚壁菌门(firmicutes)*、脱铁杆菌门(deferribacteres)和螺旋体门(spirochetes)*。
[0147]
*相对于对照或时间0的显著差异
[0148]
图61示出了处理相比于对照在科水平上的显著差异。
[0149]
在4周时的处理与基线和对照之间的属的显著差异。
[0150]
显著增加的
[0151]
副拟杆菌属(parabacteroides)
[0152]
埃希氏杆菌属(escherichia)
[0153]
丹毒梭菌属(erysipelatoclostridium)
[0154]
消化梭菌属(peptoclostridium-)
[0155]
萨特氏菌属(sutterella)
[0156]
志贺氏菌属(shigella)
[0157]
布赫纳菌属(brenneria)
[0158]
显著减少的
[0159]
lachnoclostridium
[0160]
巴恩斯菌属(barnesiella)
[0161]
梭菌属(clostridium)
[0162]
颤螺菌属(oscillospira)
[0163]
多尔菌属(dorea)
[0164]
candidatus soleaferrea
[0165]
低嗜盐细菌属(dehalobacterium)
[0166]
颤杆菌克属(oscillibacter)
[0167]
黄杆菌属(flavonifractor)
[0168]
图62示出了主坐标分析图。
[0169]
图63示出了4周da处理后不饱和脂肪酸的生物合成途径的显著富集(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0170]
图64示出了4周da处理后花生四烯酸的代谢途径的显著富集(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0171]
图65示出了4周da处理后辅因子和维生素代谢的途径的显著富集(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0172]
图66示出了4周da处理后赖氨酸降解途径的显著富集(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0173]
图67示出了4周da处理后糖酵解和糖异生途径的显著富集(组数据)。
[0174]
图68示出了4周da处理后磷脂酰肌醇信号传导的显著富集(组数据)。
[0175]
图69示出了4周da处理后精氨酸和鸟氨酸代谢的信号传导显著降低(上图：个体数据；下图：组数据)。
[0176]
实施例1
[0177]
本实施例描述了在瘦素缺陷型(ob/ob)小鼠中地那铵乙酸盐对体重的影响的体内研究。对成年瘦素缺陷型小鼠(纯合子，ob/ob小鼠)饲喂高脂肪饮食。存在媒介物对照组(15只小鼠)，通过每天强饲两次蒸馏水来处理。将da组(15只小鼠)用23.1mg/kg bid剂量的da溶液处理。
[0178]
在第1、3、7、10、14、21、24和28天确定体重和体重变化。第3、7、10、14、17、21、14和28天确定食物摄入量。在第28天，采集血液样品用于分析细胞因子、hba1c、hdl、ldl、胰岛素和胆汁酸。通过两因素重复测量方差分析、然后通过图基多重比较事后检验进行统计学。
[0179]
表3和图1示出了第1-28天的体重测量值。
[0180][0181]
示出了药物处理对ob/ob小鼠的体重没有显著的主要影响[f(1,28)＝2.076，p＝0.163]。
[0182]
表3和图2示出了第1-28天的体重变化。
[0183][0184]
示出了药物处理对ob/ob小鼠的体重变化没有显著的主要影响[f(1,28)＝3.849，p＝0.105]。
[0185]
图3示出了第28天的体重变化。在两个实验组之间第28天的体重变化没有统计学上显著的差异。
[0186]
图4示出了第28天的禁食血糖水平。在两个实验组之间第28天的禁食血糖水平没有统计学上显著的差异。
[0187]
图5示出了第28天的hba1c水平。在两个实验组之间第28天的血液hba1c水平没有统计学上显著的差异。
[0188]
图6示出了第28天的血液hdl水平。与媒介物处理的动物相比，用23.1mg/kg的da处理的动物示出了第28天的血液hdl水平的统计学上显著的降低。
[0189]
图7示出了第28天的血液ldl胆固醇水平。在两个实验组之间第28天的血液ldl水平没有统计学上显著的差异。
[0190]
图8示出了第28天的血液总胆固醇水平(ldl加hdl)。与媒介物处理的动物相比，用23.1mg/kg的da处理的动物示出了第28天的血液总胆固醇水平的几乎显著的降低。
[0191]
图9示出了第28天的血液胰岛素水平。在两个实验组之间第28天的血液胰岛素水平没有统计学上显著的差异。
[0192]
图10示出了第28天的血液胆汁酸水平。在两个实验组之间第28天的血液胆汁酸水平没有统计学上显著的差异。
[0193]
图11示出了在给药前和第28天的粒细胞数量和百分比，尽管没有统计学上显著的差异，但是与媒介物处理的对照相比，da处理的动物示出了粒细胞数量增加的变化趋势。
[0194]
图12示出了给药前和第28天的单核细胞数量和百分比。尽管没有统计学上显著的差异，但是与媒介物处理的对照相比，da处理的动物示出了单核细胞数量和百分比增加的变化趋势。
[0195]
图13示出了给药前和第28天的淋巴细胞和白细胞数量的变化。尽管没有统计学上显著的差异，但是与媒介物处理的对照相比，da处理的动物示出了淋巴细胞和白细胞数量和百分比增加的变化趋势。
[0196]
图14示出了28天内的累积食物消耗。在两个实验组之间28天内的食物消耗没有统计学上显著的差异。
[0197]
图15示出了第28天血液中各种细胞因子分析。kc：细胞因子诱导的嗜中性粒细胞趋化因子(cxcl1)；mcp-1：单核细胞趋化蛋白-1；mip-1：巨噬细胞炎症蛋白1；m-csf，巨噬细胞集落刺激因子；mip-2：巨噬细胞炎症蛋白2(cxcl2)；vegf：血管内皮生长因子。kc/cxcl1和m-csf示出了在施用da的情况下的显著降低。
[0198]
图16示出了第28天血液中各种细胞因子分析。ip-10：ifn-γ-诱导蛋白10
(cxcl10)。il-10和il-12示出了在施用da的情况下的显著降低。
[0199]
图17示出了第28天血液中各种细胞因子分析。g-csf：粒细胞集落刺激因子；gm-csf：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；ifnγ：干扰素γ；il-1α、il-1β、il-2和il-5。gm-csf、ifnγ和il-5示出了在施用da的情况下的显著降低。
[0200]
在慢性炎症与代谢综合征和其他代谢性障碍的发生之间存在直接联系(mclaughlin等人j.clin.invest.2017；127(1):5-13)。脂肪组织被认为是这些医学状况的代谢性风险因素，并且含有多种免疫细胞，包括巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、先天性淋巴样细胞(ilc)、t细胞和b细胞。这种免疫细胞积累诱导慢性低度炎症，从而影响脂肪组织的代谢、促进全身性炎症、并且损害胰岛素作用以引起系统性有害作用(wisse,j.am.soc.nephrol.2004:15(11):2792-800)。已经证实通过这种免疫细胞积累造成的促炎因子的过量产生在这种发病机制背景下起作用(saltiel和olefsky,j.clin.invest.2017；127(1):1-4)。包括细胞因子和趋化因子在内的广泛促炎因子在患有代谢综合征、肥胖症、糖尿病或其他代谢性障碍的个体中示出升高的循环水平(tchernof和despr
é
s,physiol.rev.2013；93(1):359-404)。已经发现一些促炎因子(像tnf-α或il-6)会损害胰岛素作用或影响脂质代谢，从而有助于胰岛素抵抗或脂肪储存的功能紊乱(mclaughlin等人j.clin.invest.2017；127(1):5-13)。
[0201]
苦味受体(tas2r)是g蛋白偶联受体(gpcr)家族的成员，并且不仅存在于舌头上，而且在整个机体上(lu等人j.gen.physiol.2017；149(2):181-197)。在本研究中，我们确实观察到用da处理28天的ob/ob小鼠示出了与媒介物处理的对照相比明显的体重降低；而这两组动物之间平均每日平均个体食物摄入量没有差异。然而，在施用da的情况下，在da处理的小鼠中，包括gm-csf、ifnγ、il-5、il-10、il-12、kc和m-csf的一组套细胞因子示出显著降低。因此，da处理组的体重降低可能至少部分归因于以下事实：da诱导的对免疫细胞上tas2r的激动作用抑制了这些细胞因子的产生，随后改善了脂肪组织中的炎症状态并且减轻了脂质代谢的功能异常。
[0202]
实施例2
[0203]
本实施例提供了研究在炎症的鼠气囊模型中da调节免疫应答的结果。将八只c57bl/6小鼠分配到强饲处理(bid)对照(蒸馏水)、23.1mg/kg bid的剂量的da(低剂量da)和96.4mg/kg bid的剂量的da(高剂量da)的组中。测量的是气囊渗出液的浸润细胞计数、气囊渗出液中的il-6水平(通过elisa测定(r&d systems目录号m6000b))和多种细胞因子分析(mouse 32plex kit milliporesigma目录号mcytmag70pmx32bk)。统计分析是通过以下进行的：单因素方差分析，然后是图基多重比较事后检验(用于具有正态分布的数据)；克鲁斯卡尔-沃利斯检验，然后是邓恩多重比较事后检验(用于具有偏态分布的数据)；和rout方法(用于鉴定异常值)。
[0204]
duarte等人,current protocols in pharmacology,5.6.1-5.6.8 2012年3月描述了“皮下气囊是一种这样的体内模型，其可用于研究急性和慢性炎症、炎症反应的消退和氧化应激反应。将刺激物注射到大鼠或小鼠的气囊中会诱导炎症反应，所述炎症反应可以通过产生的渗出液的体积、细胞的浸润和炎症介质的释放来量化。此单元中呈现的模型已经被广泛用于鉴定潜在的抗炎药物。”它可以用于研究没有全身影响的局部炎症。但是在这种情况下，将药物通过每天强饲两次来口服施用。在对此模型的更早研究中，romano等人
(1997)表明，通过强饲地塞米松(具有严重副作用的强力抗炎类固醇)降低了tnf水平。
[0205]
测试施用为5ml/kg体重，间隔8小时bid给药。在每只测试bl6小鼠中通过sc注射1.5ml/只小鼠的无菌空气(在第0天)和1.5ml/只小鼠的无菌空气(在第3天)来创建气囊。在第-2天bid施用化合物(或对照蒸馏水)。在第0小时或用测试化合物给药后一小时施用lps(在1ml无内毒素pbs中的0.75mg/只动物)。在终止时收集所有组的血浆样品和气囊渗出液。在动物设施处进行细胞计数分析和il-6测定，并且将血浆和渗出液样品送出用于细胞因子分析。蒸馏水对照、23.1mg/kg da和92.4mg/kg da的每一组各自具有8只小鼠。
[0206]
图18示出了气囊渗出液中浸润细胞计数的图，其中用da预处理以剂量依赖性方式降低了在lps诱导后气囊渗出液中的浸润细胞计数。在结果之间，与用媒介物和较低剂量的da预处理的动物相比，用96.4mg/kg的da预处理的动物示出了显著更低的浸润细胞计数。
[0207]
图19示出了气囊渗出液中il-6水平的图，其中用da预处理以剂量依赖性方式降低了在lps诱导后气囊渗出液中的浸润细胞计数。在结果之间，与用媒介物和较低剂量的da预处理的动物相比，用96.4mg/kg的da预处理的动物示出了显著更低的il-6水平。
[0208]
图20-图27分别示出了g-csf、嗜酸性粒细胞趋化因子、gm-csf、ifng、il-1a、il-1β、il-2和il-3的细胞因子水平。在这组细胞因子中，il-1β示出了在较高剂量的da的情况下的显著降低。
[0209]
图28-图35分别示出了il-4、il-5、il-7、il-9、il-10、il-12p40、il-12p70和il-13的细胞因子水平。在这组细胞因子中，il-10示出了在较高剂量的da的情况下的显著降低。
[0210]
图36-图43分别示出了il-15、il-17、lif、lix、ip-10、kc、mcp-1和mcp-1α的细胞因子水平。在这组细胞因子中，il-17示出了在较高剂量的da的情况下的显著降低。
[0211]
图44-图50分别示出了mip-1β、mip-2、m-csf、mig、rantes、vegf和tnf-1α的细胞因子水平。在这组细胞因子中，tnf-1α示出了在较高剂量的da的情况下的显著降低。
[0212]
总之，图51示出了关于较高剂量(橙色)和较低剂量(蓝色)的汇总，当用星号表示时表明显著性。并且，促炎性生物标记物tnfα、il-1β、il-10和il-17示出在较高剂量da施用时的显著的剂量反应降低。
[0213]
实施例3
[0214]
本实施例提供了在小鼠模型中葡聚糖硫酸钠(dss)诱导的结肠炎的体内研究的结果。炎性肠病(ibd)，主要包括溃疡性结肠炎和克罗恩病，是具有未知病因的复杂且多因素的疾病。为了机械地研究人类ibd，已经开发了许多鼠结肠炎模型。这些模型是破译ibd发病机制的潜在机制以及评价潜在治疗剂的工具。在各种化学诱导的结肠炎模型中，葡聚糖硫酸钠(dss)诱导的结肠炎模型由于其与人溃疡性结肠炎的许多相似性而被广泛使用。并且，在此模型中已经研究了许多现有的批准的ibd药物，以允许与批准的ibd适应证的现有药物相比，比较新的潜在药物化合物。
[0215]
将c5bl/6小鼠分为3-10只小鼠的5个组，并且任意提供标准的小鼠饲料，每个笼子圈养至多5个。将地塞米松21-磷酸二钠盐(dms；alfa aesar目录号j64083-1g，批号r02f035)用作阳性对照。hemoccult试剂盒获自beckman(hemoccult sensa试剂盒)。在某些组的水中补充葡聚糖硫酸钠(dss)试剂级(mpi目录号160110，批号6046h，mw 36,000-50,000，cas 9011-18-1)以诱导ibd样症状。在dss递送之前，开始第-3天的处理。在第1天，将所有小鼠预先称重，并且每天在水中给予新鲜的4％-5％dss，持续5天，然后在剩余的研究中
给予水以引发疾病。在研究持续时间(10天)内向另外的对照组给予水(无dss)。每天测量体重，每周3x测量便血状态(hemoccult)，每周3x测量粪便一致性，并且每天确定总体健康状况。在第10天处死小鼠，并且将获得的血清用于细胞因子分析，并且确定结肠长度和重量。存在两个对照组，只有水以及没有药物处理的dss。存在两个处理组，为69.3mg/kg(n＝10)bid和23.1mg/kg bid(n＝10)。
[0216]
图52示出了研究期期间的体重变化。用da处理示出了对体重的显著主要影响(p＝0.0052)。
[0217]
图53示出了第10天的体重。与媒介物相比，用69.3mg/kg da bid处理的动物对dss诱导的体重减轻显示出显著效果。
[0218]
图54示出了研究期期间的粪便隐血得分。用da处理示出了对便血状态的显著主要影响。
[0219]
图55示出了研究期期间的粪便一致性得分。用da处理示出了对粪便一致性的显著主要影响。
[0220]
图56示出了研究期期间的组合粪便得分。用da处理示出了对组合粪便状态的显著主要影响。
[0221]
图57和图58分别示出了第10天的结肠重量和长度。尽管未观察到显著差异，但是用高剂量的da处理可以抵消dss诱导的小鼠结肠重量和长度的减少。
[0222]
图59示出了第10天的脾重量。尽管未观察到显著的影响，但是用高剂量的da处理示出了抵消dss诱导的小鼠脾重量损失的趋势。
[0223]
实施例4
[0224]
在微生物群系研究中，低水平的副拟杆菌属(保护性共生细菌)与动脉粥样硬化相关，较高的埃希氏杆菌属导致冠心病(chd)，在患有acvd(动脉粥样硬化心血管疾病)的患者中瘤胃球菌科(ruminococcacea)通常增加，并且微生物产生的短链脂肪酸(scfa)导致降低的动脉粥样硬化、炎症和中度高血压。
[0225]
在非酒精性脂肪性肝炎(nash)小鼠模型中，研究了小分子口服tas2r激动剂(da)对微生物群体的影响。将两组4周龄雄性c57bl/6小鼠(20只/组)饲喂胰岛淀粉素肝nash(amln)饮食，并且经由胃内强饲接受每日剂量的ard-101(在水中的30mg/ml)或媒介物(水)。从第0周和第4周收集的粪便样品中分离dna，并且使用btefap(编码细菌标签的flx扩增子焦磷酸测序)评价微生物生态学。针对精选ncbi数据库使用blast对操作分类单位进行分类。用qiime 2分析特定生态系统和微生物群落结构内的多样性。通过使用图基检验进行重复测量方差分析和事后成对比较来确定差异。用双层级系统树图评价分类学上的分类数据。
[0226]
amln饮食导致在第4周两组中的微生物群体变化。在第4周，在da组中相比于在媒介物组中，观察到在门、科和属水平上的显著增加/减少。例如，在门水平上，在变形细菌门、疣微菌门和蓝菌门中存在显著增加并且在厚壁菌门、脱铁杆菌门和螺旋体门中存在显著降低。在两个处理组中在第4周相比于第0周以及在第4周的da相比于媒介物组，生态系统和微生物群落内的多样性显著较少(对于所有比较，p《0.05)。遗传分析表明，da导致不饱和脂肪酸和花生四烯酸的代谢增加、辅因子和维生素的产生增加；赖氨酸降解、糖酵解、糖异生和磷脂酰肌醇信号传导增加；以及精氨酸和鸟氨酸产生减少。da处理诱导了生理和代谢途径
的显著变化，并且减轻了粪便中饮食诱导的scfa的减少。总体发现与表明da减弱了炎症和代谢综合征的数据一致。
[0227]
实施例5
[0228]
本实施例提供了一项体内研究，以确定da对小鼠腹膜巨噬细胞的影响。在腹膜内注射4ml无菌4％硫乙醇酸盐肉汤后4天，通过灌洗从balb/c雌性小鼠获得腹膜渗出液。在用rpmi 1640培养基洗涤后，将细胞悬浮液在4℃下在800g下离心5min。通过ack缓冲液消除红细胞，并且将细胞洗涤并且重悬于补充有10％灭活的fbs、10mm hepes、2mm谷氨酰胺和100u/ml青霉素-100mg/ml链霉素的rpmi 1640中。在5％co2加湿气氛中在37℃下，将腹膜巨噬细胞在24孔组织培养板(2x 105个细胞/ml/孔)中铺板。将巨噬细胞在无血清rpmi 1640培养基中预培养24h，以减少促有丝分裂作用。在lps处理之前，将巨噬细胞用各种浓度的da预处理1h，并且用lps(100ng/ml)刺激24h。处理组是：表4
[0229]
组孔的数量处理16媒介物26lps36lps+sb203580(阳性对照)46lps+ard_101(1μm)56lps+ard_101(10μm)66lps+ard_101(100μm))
[0230]
在12和24h的刺激时间点，将约200ul的上清液去除并且储存(-80℃)用于细胞因子分析(13plex)。分析的细胞因子是-gm-csf、ifnγ、il-1α、il-1β、il-2、il-4、il-5、il-6、il-7、il-10、il-12(p70)、il-13、il-17a、kc/cxcl1、lix、mcp-1、mip-2、tnf-α。
[0231]
表5报告了每种细胞因子的平均值
±
sd：
[0232]
细胞因子da浓度(μm)lps孵育12小时的显著性lps孵育24小时的显著性gm-csf1/10/100p＝0.029/不显著/不显著不显著/不显著/不显著ifnγ1/10/100p＝0.031/0.037/不显著不显著/不显著/不显著il-1α1/10/100p＝0.021/0.036/不显著不显著/不显著/不显著il-1β1/10/100p＝0.023/0.023/不显著不显著/不显著/不显著il-21/10/100p＝0.005/0.004/不显著不显著/不显著/不显著il-41/10/100p＝0.009/0.009/不显著不显著/不显著/不显著il-61/10/100p＝0.096/0.029/不显著不显著/不显著/不显著il-71/10/100p＝0.024/0.010/010不显著/不显著/不显著il-101/10/100p＝0.045/0.026/0.015不显著/不显著/不显著il-12(p70)1/10/100p＝0.017/0.007/0.008不显著/不显著/不显著il-131/10/100p＝0.038/0.019/0.021不显著/不显著/不显著il-17a1/10/100p＝0.044/0.024/0.042不显著/不显著/不显著kc/cxcl11/10/100不显著/不显著/p＝0.022不显著/不显著/不显著lix1/10/100不显著/不显著/不显著不显著/不显著/不显著mcp-11/10/100不显著/不显著/不显著不显著/不显著/不显著mip-21/10/100p＝0.081/0.021/0.033不显著/不显著/不显著
tnf-α1/10/100p＝0.059/0.024/0.033不显著/不显著/不显著
[0233]
总而言之，与lps的24小时孵育不会引起与12小时lps孵育的显著差异。
[0234]
实施例6
[0235]
本实施例提供了用以评价地那铵乙酸盐对健康小鼠的影响(如通过细胞因子概况和da的施用途径测量的)的研究的结果。所述研究组是：(1)媒介物组，n＝12，用蒸馏水处理，强饲，bid；(2)da口服低剂量组，n＝12，用23.1mg/kg(盐重量)剂量的da处理，强饲，bid；(3)da口服高剂量组，n＝12，用92.4mg/kg(盐重量)剂量的da处理，强饲，bid；(4)da iv低剂量组，n＝12，用1mg/kg(盐重量)剂量的da处理，iv推注，qd；(5)da iv高剂量组，n＝12，用3mg/kg(盐重量)剂量的ard-101处理，iv推注，qd。
[0236]
首先，用iv da剂量没有观察到生物标记物(细胞因子)作用。可以肯定地得出结论为，da需要口服施用才能显示效果。并且，只有iv施用存在毒性副作用。第3组是较低剂量的口服da组，并且第4组是较高剂量的口服da组，较低剂量da使得在g-csf(p＝0.003)、il-1α(p＝0.04)、il-13(p＝0.03)、mcp-1(p＝0.005)、mip-2(p＝0.015)和vegf(p＝0.001)的细胞因子方面观察到显著的降低(相比于对照)。较高剂量的da使得在gm-csf(p＝0.03)、il-9(p＝0.003)、kc(p＝0.05)和vegf(p＝0.001)的细胞因子方面观察到显著的降低(相比于对照)。本研究证实了在正常小鼠中的生物标记物作用，并且证实了应使用口服给药而不是iv。
[0237]
实施例7
[0238]
本实施例提供了用以评价在小鼠急性肺损伤加体温过高模型中地那铵乙酸盐的作用的研究的结果。程序是向三组cd-1小鼠给予以下：(1)通过强饲以便bid口服施用的盐水、(2)以92.4mg/kg bid的剂量口服施用的da、和(3)以3mg/kg iv推注qd iv施用的da。测量肺灌洗液并且进行细胞因子分析。统计学是：单因素方差分析，然后是图基多重比较事后检验(用于具有正态分布的数据)；克鲁斯卡尔-沃利斯检验，然后是邓恩多重比较事后检验(用于具有偏态分布的数据)；和rout方法(用于鉴定异常值)。施用对照或药物持续3天，然后用penn century针头在气管内递送50μl的1mg/ml的lps，此时核心温度为39c，在lps后24小时，然后处死以测量肺灌洗液蛋白质浓度和血清细胞因子水平。
[0239]
da示出了对于口服和iv给药二者，肺灌洗液中蛋白质浓度的剧烈但不显著的降低。肺灌洗液中的细胞因子概况示于图72中，其中da＝ard-101。
[0240]
实施例8
[0241]
本实施例提供了用以评价地那铵乙酸盐作用的第二个修饰的急性肺损伤加体温过高研究的结果。使用与实施例7中相同的程序。从诱导肺损伤前三天开始，将六只cd-1小鼠的组各自用媒介物或92.4mg/kg地那铵乙酸盐(da)(通过每天两次(bid)口服强饲(po)施用)或用3mg/kg da(通过每天一次(qd)腹膜内(ip)注射施用)进行预防性处理。在第0天，通过气管内灌注50μl的1mg/ml细菌脂多糖(lps)诱导肺损伤，并且通过将动物放置在39℃培养箱中诱导体温过高。在第1天(即诱导后24小时)，对动物进行安乐死，并且收集支气管肺泡灌洗液(balf)。评估balf样本的细胞因子浓度(使用基于多重珠的测定)和蛋白质水平和嗜中性粒细胞计数(通过荧光激活细胞分选法(facs))。此外，将肺收集，固定，用masson三色液染色，并且进行组织学评估。在雌性cd-1小鼠中，重复用92.4mg/kg da(bid)po给药或用3mg/kg da(qd)ip给药的三天是被良好耐受的。尽管发现两只小鼠[一只给予媒介物，一
只给予da(92.4mg/kg)]在第1天死亡，但是这些死亡的时机(在lps灌注后24小时内)表明死亡反映了灌注过程、体温过高或相关的炎症(而不是测试品)。这种推论与如下观察结果一致：用媒介物和测试品给药二者均观察到死亡。在测试品施用的3天期间，没有注意到其他不良临床观察结果。用92.4mg/kg da口服给药导致在32种测试的细胞因子中的7种(包括il-2、il-3、il-10、il-13、mip-1β、mcsf和mig)的balf浓度的显著降低(与媒介物相比)。用3mg/kg da的ip给药导致在32种测试的细胞因子中的10种(包括g-csf、嗜酸性粒细胞趋化因子、il2、il-3、il-4、il-13、ip-10、mcp-1、m-csf和mig)的balf浓度的显著降低(与媒介物相比)(参见图73)。用指示水平的da进行口服和ip给药与balf蛋白浓度的名义上(但不显著)的变化；balf嗜中性粒细胞计数(通过facs测定)的名义上的下降；以及肺病理严重程度的名义上的下降(通过组织学评分)相关。因此，用92.4mg/kg da的bid po处理或用3mg/kg da的qd ip注射提供了在这种急性肺损伤的小鼠模型的肺中多个细胞因子的积累的显著减弱以及在这些动物中在抵消嗜中性粒细胞浸润和肺损害方面的名义上的活性。
[0242]
实施例9
[0243]
本实施例提供了da加另一种化合物(cql)对饮食诱导(dio)小鼠的体重的影响的研究结果。将成年c57bl/6ntac小鼠用高脂肪饮食(60％)饲喂。将媒介物组(n＝15)通过每天强饲两次蒸馏水来处理，将cql(n＝15)通过每天强饲两次以50mg/kg处理，并且将da(n＝15)通过每天强饲两次以92.4mg/kg剂量处理。研究期是56天+随后2-3天测试期。每周3x测量体重变化，在第0、12、28、42和56天测量食物和水消耗量。在第28天和第56天测量代谢性生物标记物。在第28和第56天进行细胞因子分析。第1天和第56天给药后1h、第7天给药后2h(给药(给药前》6h禁食，直到血液收集后)的glp-1、glp-2和cck的血清水平；和第56天的ppy的血清水平。
[0244]
图74示出了与媒介物和cql相比，da处理显著降低了第57天dio小鼠的体重增加。图75a示出，在第14天，与媒介物相比，用da处理显著降低了dio小鼠的每日食物摄入量，并且图75b示出，与媒介物相比，用da处理显著增加了第28天的每日水摄入量，而用cql处理显著降低了每日水摄入量。用da处理没有示出对dio小鼠的血清葡萄糖水平的显著影响。图76示出，用da和cql处理显著降低了第28天dio小鼠的血清hba1c水平，但是大幅提高了第56天的hba1c水平。图77示出，与媒介物对照相比，用da处理显著降低了第28天dio小鼠的血清胰岛素水平。在图78中，尽管没有观察到显著差异，但是与媒介物对照相比，用da处理导致第28天和第56天的血清ldl水平明显降低。图79示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了第7天和第56天dio小鼠的血清glp-1水平。图80示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了第56天dio小鼠的血清glp-2水平。图81示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了第56天dio小鼠的血清cck水平。图82示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了第56天dio小鼠的血清pyy水平。
[0245]
在第28天和第56天(28/56)时，测量血清细胞因子并且示出了g-csr(p＝0.063/0.039)的显著增加、嗜酸性粒细胞趋化因子(p＝0.031/不显著)、il-6(p＝0.041/不显著)、ip-10(p＝0.013/不显著)和mig(p＝不显著/0.028)。许多小鼠不允许获得足够的血液来产生统计学显著性。
[0246]
实施例10
[0247]
瘦素缺陷型ob/ob小鼠展现出饮食过多和肥胖症，以及高血糖症和高甘油三酯血
症，这些也在患有饮食过多障碍(如普拉德-威利综合征和其他单基因性和症状性肥胖症障碍)的患者中发现(diabetes.2006年12月；55(12):3335-43；clin genet.2005年3月；67(3):230-9；biochim biophys acta.2012年5月；1821(5):819-25)。因此，ob/ob小鼠是针对这些适应证的预测性体内模型。本实施例提供了da加另一种化合物(cql)对瘦素缺陷型(ob/ob)小鼠的体重的影响的研究结果。将媒介物组(n＝14)通过每天强饲两次蒸馏水来处理，并且将da(n＝14)通过每天强饲两次以50mg/kg剂量处理。研究期是56天+随后2-3天测试期。每周3x测量体重变化，每周测量两次食物摄入量，在研究开始和结束时测量代谢性生物标记物(血糖、血液胰岛素、血液hba1c、hdl、ldl、甘油三酯和胆汁酸)。在第56天结束时进行细胞因子分析。
[0248]
用da处理没有显示出对ob/ob小鼠的体重的显著影响。用da处理没有显示出对ob/ob小鼠的每日食物消耗量的显著影响。图83示出了用da处理显著降低了ob/ob小鼠的血清葡萄糖水平。用da处理没有显示出对ob/ob小鼠的血清hba1c水平或胰岛素水平的显著影响。图84示出，与媒介物对照相比，用da处理显著降低了ob/ob小鼠的血清甘油三酯水平。图85示出，与媒介物对照相比，用da处理显著增加了ob/ob小鼠的血清胆汁酸水平。图86示出，与媒介物对照相比，用da处理显著降低了ob/ob小鼠的血清ldl水平。然而，对血清hdl水平没有显著影响。
[0249]
da组使得在第56天在嗜酸性粒细胞趋化因子(p＝0.047)和mig(p＝0.026)细胞因子(相比于对照组)中观察到显著降低。此外，尽管没有观察到显著差异，但是与媒介物组相比，da组示出在第56天的以下细胞因子的水平降低：rantes(降低1.7％)、il-1β(降低19.1％)、il-6(降低61.4％)和mcp-1(降低20.9％)。