作为AHR拮抗剂的吡啶并嘧啶酮衍生物的制作方法

作为ahr拮抗剂的吡啶并嘧啶酮衍生物
1.本技术要求2019年11月22日提交的美国专利申请号62/939,377、2020年7月10日提交的美国专利申请号63/050,416和2020年10月13日提交的美国专利申请号63/091,192的优先权，这些美国专利申请特此通过援引以其全文并入。
2.本文披露了式(ia)的新型3，6,8-三取代吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮化合物及其药学上可接受的盐，制备所述化合物和盐的方法，用于制备所述化合物和盐的中间体化合物，包含所述化合物和盐的药物组合物，以及使用所述化合物和盐治疗或预防疾病特别是免疫应答失调的癌症或病症或者与异常ahr信号传导相关的其他障碍的方法。本文还披露了包含至少一种这样的化合物和/或其药学上可接受的盐和至少一种附加疗法的组合物以及治疗癌症的方法，这些方法包括施用至少一种这样的化合物和/或其药学上可接受的盐和至少一种附加疗法。
[0003][0004]
芳烃受体(ahr)是一种配体激活的转录因子，属于位于胞质溶胶中的碱性螺旋-环-螺旋/per-arnt-sim(bhlh/pas)家族。在配体结合后，ahr转位至核，在那里它与arnt(ahr核转位子)异二聚化，在arnt上它与ahr应答基因的dre(二噁英应答元件)相互作用以调节它们的转录。ahr最著名的是与环境毒素结合并诱导消除它们所需的代谢机制，诸如细胞色素p450酶(例如cyp1a1、cyp1a2和cyp1b1)(reyes等人，science[科学]，1992，256(5060)：1 193-5)。异生物质对ahr的激活已证明其在许多细胞过程诸如胚胎发生、肿瘤发生和炎症中的作用。
[0005]
ahr在免疫系统的许多细胞中表达，包括树突细胞(dc)、巨噬细胞、t细胞和nk细胞，并且在免疫调节中起重要作用(nguyen等人，front.immunol.[免疫学前沿]，2014，5：551)。例如，已知经典的外源性ahr配体tcdd和3-甲基胆蒽诱导深度的免疫抑制、促进癌发生和诱导肿瘤生长(gramatzki等人，oncogene[致癌基因]，2009，28(28)：2593-605；bui等人，oncogene[致癌基因]，2009，28(41)：3642-51；esser等人，trends immunol.[免疫学趋势]，2009，30：447-454)。在免疫抑制的情况下，ahr激活促造调节性t细胞生成，直接和间接抑割th1和th17分化，并降低dc的激活和成熟(wang等人，clin.exp.immunol.[临床与实验免疫学]，2014，177(2)：521-30；mezrieh等人，j.immunol.[免疫学杂志]，2010，185(6)：3190-8；wei等人，lab.invest.[实验室研究]，2014，94(5)：528-35；nguyen等人，pnas[美国国家科学院院刊]，2010，107(46)：19961-6)。ahr激活调节先天免疫应答，并且组成型ahr表达已显示负调节对病毒感染的1型干扰素应答(yamada等人，nat，immunol.[自然免疫学]，2016，17(6)：687-94)。此外，具有组成型活性ahr的小鼠自发地发展肿瘤(andersson等人，
pnas[美国国家科学院院刊]，2002，99(15)：9990-5)。
[0006]
除了异生物质之外，ahr还可结合色氨酸降解的代谢产物。色氨酸代谢物，诸如犬尿氨酸和犬尿喹啉酸，是在生理条件下激活ahr的内源性ahr配体(dinatale等人，toxicol.sci.[毒理科学]，2010，115(1)：89-97；mezrich等人，j.immunol.[免疫学杂志]，2010，185(6)：3190-8；opitz等人，nature[自然]，2011，478(7368)：197-203)。已知其他内源性配体结合ahr，尽管它们的生理作用目前尚不清楚(nguyen&bradfield，chem.res，toxicol.[毒物学领域的化学研究]，2008，21(1)：102-116)。
[0007]
犬尿氨酸和色氨酸降解的免疫抑制特性已被充分描述，并与癌症相关的免疫抑制有关。酶吲哚胺-2，3-双加氧酶1和2(ido1/ido2)以及色氨酸-2，3-双加氧酶2(tdo2)负责催化色氨酸代谢的第一限速步骤。ido1/2介导的肿瘤和肿瘤引流淋巴结中色氨酸的降解降低抗肿瘤免疫应答，并且ido的抑制可在动物模型中抑制肿瘤形成(uyttenhove等人，nat.med.[自然医学]，2003，9(10)：1269-74；liu等人，blood[血液]，2005，115(17)：3520-30；muller等人，nat.med.[自然医学]，11(3)：312-9；metz，cancer res.[癌症研究]，2007，67(15)：7082-7)。
[0008]
tdo2也在癌症中强表达，并可导致产生免疫抑制性犬尿氨酸。在神经胶质瘤中，在tdo介导的色氨酸降解的下游，犬尿氨酸对ahr的激活由于抑制抗肿瘤免疫应答以及直接促进肿瘤细胞存活和运动性而增强肿瘤生长(opita等人，nature[自然]，2011，478(7368)：197-203)。因此，由肿瘤细胞生成的ahr配体分别以自分泌和旁分泌方式作用于肿瘤细胞和淋巴细跑，以促进肿瘤生长。
[0009]
附加疗法与ahr组合对可能对治疗癌症有用。免疫检查点抑制剂(ici)已用于癌症治疗以增强宿主的免疫应答。ici靶标的非限制性实例包括程序性死亡1(pd-1)、pd-1配体(pd-l1)和细胞毒性t淋巴细胞抗原4(ctla-4)。
[0010]
pd-1由激活的t细胞、b细胞、树突细胞(dc)和自然杀伤细胞(nk)高度表达，而pd-l1可在几种类型的肿瘤细胞上表达。
[0011]
ici目前被美国食品和药物管理局(food and drug administration)批准用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、霍奇金淋巴瘤、尿路上皮癌、小细胞肺癌、食管鳞状细胞瘤、宫颈癌、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤、msi-h/dmmr结直肠癌、肝细胞癌、默克尔细胞癌、三阴性乳腺癌和皮肤鱗状细胞癌。
[0012]
本披露涉及式(i)或式(ia)的新型3，6，8-三取代吡啶并[3，4-d]嘧嚏-4(3h)-酮和/或其药学上可接受的盐。已令人惊讶地发现本披露的化合物有效抑制ahr并因此可用于治疗或预防癌症和/或其他病症，在这些病症中，外源性和内源性ahr配体诱导：失调的免疫应答，肿瘤细胞的不受控制的细胞生长、增殖和/或存活，癌症背景下的免疫抑制，不适当的细胞免疫应答，或伴随有以下方面的不适当的细胞炎性应答或疾病：肿瘤细胞的不受控制的细胞生长、增殖和/或存活，癌症背景下的免疫抑制，不适当的细胞免疫应答，或不适当的细胞炎性应答，特别是其中肿瘤细胞的不受控制的细胞生长、增殖和/或存活，癌症背景下的免疫抑制，不适当的细胞免疫应答，或不适当的细胞炎性应答是由ahr介导的，诸如例如液体和实体肿瘤和/或它们的转移，例如头颈部肿瘤(包括脑肿瘤和脑转移)、胸部肿瘤(包括非小细胞和小细胞肺肿瘤)、胃肠道肿瘤(包括结肠、结直肠和胰腺肿瘤)、肝肿瘤、内分泌肿瘤、乳腺和其他妇科肿瘤、泌尿系统肿瘤(包括肾、膀胱和前列腺肿瘤)、皮肤肿瘤和肉瘤，
以及它们的转移。
[0013]
本披露还涉及药物组合物，其包含至少一种选自式(i)或式(ia)的化合物及其药学上可接受的盐的实体。本披露还涉及治疗方法，其包括施用本披露的至少一种化合物、其药学上可接受的盐、和/或药物组合物。在一些实施例中，本披露提供了一种治疗由ahr信号传导介导的疾病或病症的方法。在一些实施例中，本披露提供了一种治疗与异常ahr信号传导相关的疾病或病症的方法。在一些实施例中，本披露提供了一种抑制由ahr信号传导介导的癌细胞增殖的方法。
附图说明
[0014]
图1示出了使用ct26 balb/c小鼠进行体内同基因模型研究的给药方案。
[0015]
图2示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与7号化合物的肿瘤生长曲线。
[0016]
图3示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与7号化合物的研究终止时的肿瘤重量。
[0017]
图4示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与30号化合物的肿瘤生长曲线。
[0018]
图5示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与30号化合物的研究终止时的肿瘤重量。
[0019]
图6示出了在对抗pd-l1疗法其有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与30号化合物的肿瘤生长曲线。
[0020]
图7示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与30号化合物的研究终止时的肿瘤重量。
[0021]
图8示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与9号化合物的肿瘤生长曲线。
[0022]
图9示出了在对抗pd-l1疗法具有抗挂的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与9号化合物的研究终止时的肿瘤重量。
[0023]
图10示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中煤介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与9号化合物的肿瘤生长曲线。
[0024]
图11示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与9号化合物的研究终止时的肿瘤重量。
[0025]
图12示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒个物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与46号化合物的肿瘤生长曲线。
[0026]
图13示出了在对抗pd-l1疗法具有抗性的同基因结肠癌小鼠模型中媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与46号化合物的研究终止时的肿瘤重量。
[0027]
图14示出了46号化合物在cd1小鼠中1mg/kg iv和10mg/kg po给药后随时间的平均血浆浓度图。
[0028]
图15示出了46号化合物在sd大鼠中1mg/kg iv和3mg/kg po给药后随时间的平均血浆浓度图。
[0029]
图16示出了9号化合物在cd1小鼠中1mg/kg iv和10mg/kg po给药后随时间的平均
血浆浓度图。
[0030]
图17示出了9号化合物在sd大鼠中1mg/kg iv和3mg/kg po给药后随时间的平均血浆浓度图。
[0031]
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指如本文所定义的药学上可接受的并且具有母体化合物的期望药理学活性的盐。药学上可接受的盐的非限割性实例包括衍生自无机酸的那些，无机酸的非限制性实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸和磷酸；以及衍生自有机酸的那些，有机酸的非限制性实例包括乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、硬脂酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、水杨酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸和乳酸。
[0032]
药学上可接受的盐的附加非限制性实例包括当母体化合物中的酸性质子被金属离子替换时形成的那些，金属离子的非限制性实例包括碱金属离子和碱土金属离子，以及当母体化合物中存在的酸性质子被铵离子、伯铵离子、仲铵离子、叔铵离子或季铵离子替换时形成的那些。碱金属和碱土金属的非限制性实例包括钠、钾、锂、钙、铝、镁、铜、锌、铁和锰。药学上可接受的盐的附加非限制性实例包括包含一种或多种抗衡离子和两性离子的那些。
[0033]
将本文提供的范围理解为该范围内的所有值的简略表达。例如，1至50的范围应被理解为包括来自下组的任何数字、数字组合或子范围，该组由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。即使在本披露中没有具体指出该范围内的值，相同的规则也适用于本文所述的任何其他范围。
[0034]
如本文所用，术语“检查点抑制剂”和“检查点抑制剂疗法”可互换使用，指抑制一种或多种抑制性途径从而允许更广泛的免疫活性的任何治疗剂，包括任何小分子化合物、抗体、核酸分子或多肽或其任何片段。在一些实施例中，捡查点抑制剂疗法包括向需要这种治疗的患者施用至少一种检查点抑制剂。
[0035]
除非另有说明，否则如本文所用的术语“化合物”是指具有与立体异构体集合相同的化学结构的分子集合(例如，外消旋物集合、顺式/反式立体异构体集合、或(e)和(z)立体异构体集合)。因此，本发明化合物和盐的几何和构象混合物在本披露的范围内。除非另有说明，否则本披露的化合物的所有互变异构形式均在本披露的范围内。
[0036]
如本文所用，“立体异构体”是指对映体和非对映体。
[0037]
如本文所用，术语“互变异构体”是指化合物的两种或更多种异构体中的一种，它们以平衡状态一起存在，并且容易通过原子或基团在分子内的迁移而互换。
[0038]
除非另外指明，否则用于描述如本文所用的化学基团或部分的命名法遵循惯例，其中从左到右阅读名称，与分子其余部分的附接点位于名称的右侧。例如，基团“(c
1-3
烷氧基)c
1-3
烷基”在烷基末端附接到分子的其余部分。进一步的实例包括甲氧基乙基，其中附接点在乙基末端，以及甲基氨基，其中附接点在胺末端。
[0039]
除非另外指明，否则当化学基团由其化学式或具有由
“‑”
指示的末端键合部分妁结构描述时，应当理解
“‑”
代表附接点。在一些实施例中，波浪线(即，)描绘附接点。
[0040]
如本文所用，“酰基”或“烷酰基”是具有式rco-的官能团，其中r通过单键与羰基官能团的碳原子结合，并且
“‑”
表示与分子的其余部分的附接点。酰基的非限割性实例包括甲
醚基(hc(o)-，也称为甲酰基(methanoyl))、乙醚基(ch3c(o)-，也称为乙酰基(ethanoyl))和苯甲酰基(phc(o)-)。
[0041]
如本文所用，术语“烷基”或“脂族基”是指完全饱和且与分子的其余部分具有单个附接点的直链(即，非支链)或支链、取代或未取代的烃链。除非另有说明，否则烷基是具有1至20个烷基碳原子的烃链。在一些实施例中，烷基基团包含一至十二个碳原子(c
1-c
12
)。在一些实施例中，烷基基团包含一至八个碳原子(c
1-c8)。在一些实施例中，烷基基团包含一至六个碳原子(c
1-c8)。在一些实施例中，烷基基团包含一至四个碳原子(c
1-c4)。在一些实施俐中，环状烷基基团包含三至六个碳原子(c
3-c6)。取代和未取代的直链、支链和环状烷基基团的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、环戊基、环己基、羟甲基、氯甲基、氟甲基、三氟甲基、氨基甲基、2-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、二甲基氨基甲基、2-二甲基氨基乙基、3-二甲基氨基丙基、4-二甲基氨基丁基、环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、三氟乙基和三氟丙基。
[0042]
如本文所用，“烷氧基”是指通过氧(“烷氧基”)原子附接到主碳链的如先前定义的烷基基团。
[0043]
如本文所用，“卤代”和“卤素”是可互换的并且是指卤素原子诸如氟(f)、氯(cl)、溴(br)和碘(i)。
[0044]“卤代烷基”是指被一个或多个卤原子(f、cl、br、i)取代的烷基基团。例如，“氟甲基”是指被一个或多个氟原子取代的甲基基团(例如，单氟甲基、二氟甲基或三氟甲基)。
[0045]“卤代烷氧基”是指被一个或多个卤原子(f、cl、br、i)取代的烷氧基基团。例如，“氟甲氧基”是指被一个或多个氟原子取代的甲氧基基团(例如，单氟甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基)。
[0046]“羟基烷基”是指被一个或多个羟基(-oh)取代的烷基基团。
[0047]
如本文可互换使用的术语“环烷基”和“环烷基基团”是指具有三至十二个碳原子的环状饱和单价烃基，其与分子的其余部分具有单个附接点。环烷基基团可以是未取代的或取代的。在一些实施例中，环烷基基团包含三至八个碳原子(c
3-c8)。在一些实施例中，环烷基基团包含三至六个碳原子(c
3-c6)。取代和未取代的环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丙基甲基、环丁基、环丁基甲基、环戊基、环戊基甲基、环己基、环庚基和环辛基。
[0048]
如本文可互换使用的术语“亚烷基”和“亚烷基基团”是指包含一至十二个碳原子(c
1-c
12
)的饱和二价(即，与分子的其余部分具有两个附接点)烃基。亚烷基基团可以是直链的、支链的或环状的。亚烷基基团可以是未取代的或取代的。在一些实施例中，亚烷基基团包含一至八个碳原子(c
1-c8)。在一些实施例中，亚烷基基团包含一至六个碳原子(c
1-c6)。在一些实施例中，亚烷基基团包含一至四个碳原子(c
1-c4)。亚烷基基团的非限制性实例包括亚甲基和亚乙基。
[0049]
如本文可互换使用的术语“烯基”和“烯基基团”是指包含二至八个碳原子(c
2-c8)且具有至少一个不饱和位点(即sp2碳-碳双键)的单倚(即，与分子的其余部分具有单个附接点)烃基。烯基基团可以是直链的、支链的或环状的。烯基基团可以是未取代的或取代的。在一些实施例中，烯基基团包含二至六个碳原子(c
2-c6)。在一些实施例中，烯基基团包含二至四个碳原子(c
2-c4)。烯基基团可具有e或z取向。烯基基团的非限制性实例包括乙烯基(也称为乙烯基(vinyl))、1-丙烯基、异丙烯基和2-氯乙烯基。
[0050]
如本文可互换使用的术语“亚烯基”和“亚烯基基团”是指具有至少一个不饱和位点(例如sp2碳-碳双键)的具有二至八个碳原子(c
2-c8)的二价(即，与分子的其余部分具有两个附接点)烃基。亚烯基基团可以是直链的、支链的或环状的。亚烯基基团可以是未取代的或取代的。在一些实施例中，亚烷基基团包含二至六个碳原子(c
2-c6)。在一些实施例中，亚烷基基团包含二至四个碳原子(c
2-c4)。亚烷基基团可具有e或z取向。烯基基团的非限制性实例是亚乙烯基(也称为亚乙烯基(vinylene))。
[0051]
如本文可互换使用的术语“炔基”和“炔基基团”是指具有至少一个不饱和位点(即sp碳-碳三键)的具有二至八个碳原子(c
2-c8)的单价(即，与分子的其余部分具有单个附接点)烃基。炔基基团可以是直链或支链的。炔基基团可以是未取代的或取代的。在一些实施例中，炔基基团包含二至六个碳原子(c
2-c6)。在一些实施例中，炔基基团包含二至四个碳原子(c
2-c4)。炔基基团的非限制性实例是乙炔基。
[0052]
如本文可互换使用的术语“亚炔基”和“亚炔基基团”是指具有至少一个不饱和位点(即sp碳-碳三键)的具有二至八个碳原子(c
2-c8)的二价(即，与分子的其余部分具有两个附接点)烃基。亚炔基基团可以是直链或支链的。亚炔基基团可以是未取代的或取代的。在一些实施例中，亚炔基基团包含二至六个碳原子(c
2-c6)。在一些实施例中，亚炔基基团包含二至四个碳原子(c
2-c4)。亚炔基基团的非限制性实例是亚乙炔基。
[0053]
如本文所用，“芳族基团”或“芳族环”是指含有具有由[4n+2]p轨道电子组成的离域π电子轨道的共轭平面环系的化学基团，其中n是范围从0至6的整数。芳基基团的非限制性实例包括芳基和杂芳基。
[0054]
如本文可互换使用的本语“芳基”和“芳基基团”是指6-20个碳原子(c
6-c
20
)的单价(即，与分子的其余部分具有单个附接点)芳族烃基。芳基基团可以是未取代的或取代的。未取代和取代的芳基基团的非限制性实例包括苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2，6-二氯苯基、3，4-二氟苯基、2-羟基苯基、3-羟基苯基、4-羟基苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2-苯氧基苯基、3-苯氧基苯基、4-苯氧基苯基、2-氰基苯基、3-氰基苯基、4-氰基苯基、2-二甲基氨基苯基、3-二甲基氨基苯基、4-二甲基氨基苯基、3-甲基磺酰基苯基、4-甲基磺酰基苯基、3-氨基苯基、3-甲基氨基苯基、3-(2-羟基乙氧基)苯基、2-三氟甲基苯基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲基苯基、2-异丙基苯基、3-异丙基苯基、4-异丙基苯基、1-萘基和2-萘基。
[0055]
如本文所用，术语“杂烷基”是指其中链中的至少一个碳原子被杂原子诸如氮、氧、磷和硫替换的烷基基团。杂烷基基团可以是未取代的或取代的。
[0056]
如本文可互换使用的术语“杂环烷基”、“杂环”、“杂环基”和“杂环基团”是指具有3至20个原子的饱和或部分不饱和环系，其中这些环原子中的至少一个环原子是杂原子，诸如氮、氧、磷和硫。杂环烷基基团可以是未取代的或取代的。在一些实施例中，杂环烷基基团包含3至10个原子。在一些实施例中，杂环烷基基团含有3至7个原子。在一些实施例中，杂环烷基基团是单环的。在一些实施例中，杂环烷基基团是双环的。在一些实施例中，杂环烷基基团包含稠环。未取代和取代的杂环烷基基团的非限制性实例包括吡咯烷基、n-甲基吡咯烷基、氮杂环丁烷基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、3-羟基吡咯烷基、3-甲氧基吡咯烷基和苯并二氧杂环戊烯基。
[0057]
如本文可互换使用的术语“杂芳基”和“杂芳基基团”是指具有3至20个原子的芳环
氯苯基、2，6-二氯苯基、3，4-二氟苯基、3-羟基苯基、4-氰基苯基、2-二甲基氨基苯基、3-甲基磺酰基苯基、4-三氟甲基苯基、3-异丙基苯基、1-萘基和2-萘基；
[0065]
取代和未取代的杂环基基团，其非限制性实例包括吡咯烷基、n-甲基吡咯烷基、氮杂环丁烷基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、3-羟基吡咯烷基和3-甲氧基吡咯烷基；
[0066]
取代和未取代的杂芳基基团，其非限制性实例包括吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、3-甲基-12，4-噁二唑基、3-苯基-1，2，4-噁二唑基、吲哚基、苯并噻唑基和1h-吡咯并[2，3-b]吡啶基；
[0067]-(crarb)zorc，其非限制性实例包括-oh、-och3、-och2oh和-och2ch3；
[0068]-(crarb)zn(rc)(rd)，其非限制性实例包括-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-ch2nh2、-ch2nhch3，
[0069]
卤原子，其非限制性实例包括氟原子(-f)和氯原子(-cl)；
[0070]-(crarb)zcn；
[0071]-(crarb)zno2；
[0072]-ch
x
xy，其中x为卤素原子并且x+y总和为3，其非限制性实例包括-ch2f、-chf2和-cf3；
[0073]-(crarb)zc(o)rc，其非限制性实例包括-coch3、-coch2ch3和-ch2coch3；
[0074]-(crarb)zc(o)orc，非限制性实例包括co2h、-co2ch3、-co2ch2ch3和-ch2co2ch3，
[0075]-(crarb)zc(o)n(rc)(rd)，其非限制性实例包括-conh2、-conhch3、-con(ch3)2、-ch2conh2、-ch2conhch3、-ch2con(ch3)2；
[0076]-(crarb)zso2rc；其非限制性实例包括-so2h、-so2ch3、-ch2so2h、-ch2so2ch3、-so2c6h5和-ch2so2c6h5；以及
[0077]-(crarb)zso3rc；其非限制性实例包括-so3h、-so3ch3、-ch2so3h、-ch2so3ch3、-so3c6h5和-ch2so3c6h5；
[0078]
其中ra和rb中的每一者独立地选自氢和取代或未取代的c
1-c6直链、支链或环状烷基，rc和rd中的每一者独立地选自氢、取代或未取代的c
1-c6直链、支链或环状烷基和芳基，或其中rc和rd一起形成包含3至7个原子的环系，并且z选自0、1、2、3和4。
[0079]
如本文所用，术语“药物组合物”是指这样的制剂，其形式允许活性成分的生物活性有效，并且不含有对将施用该组合物的受试者具有不可接受毒性的附加组分。在一些实施例中，此类组合物可以是无菌的。
[0080]
如本文在“药学上可接受的盐”和“药学上可接受的赋形剂”中所用的术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内适合于与人和其他哺乳动物的组织接触使用而没有过度毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的利益/风险比相称的组分。
[0081]
本文采用的短语“药学上可接受的赋形剂”是指选自溶剂、分散介质、稀释剂、分散体、悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、聚合物、肽、蛋白、细胞、透明质酸酶以及它们的混合物的药学上可接受的材料。在一些实施例中，溶剂是水性溶剂。
[0082]“治疗”是指逆转、减轻(例如，减轻一种或多种症状)本文所述的医学病症或障碍和/或延缓本文所述的医学病症或障碍的进展。
[0083]
术语“疾病”和“障碍”在本文中可互换使用，并且是指身体或某些器官状态的任何改变，中断或干扰功能的执行和/或引起不适、功能障碍、痛苦等症状，或甚至使受折磨的人
或与人接触的人死亡。疾病或障碍还可与瘟热、生病、小病、病痛、患病、疾病、抱怨、不适或情感有关。
[0084]
如本文所用，“受试者”意指动物受试者，诸如哺乳动物受试者，并且特别是人。
[0085]
如本文所用，术语“施用”是指通过导效化合物、其药学上可接受的盐和/或包含其的药物组合物至少部分地定位在期望部位或组织位置的方法或途径将该化合物、盐和/或组合物放置到哺乳动物组织或受试者中。
[0086]
如本文所用，术语“治疗有效量”是指产生其施用的期望效果(例如，改善由ahr信号传导介导的疾病或病症的症状，减轻这种疾病或病症或其症状的严重程度，和/或减少前述任一者的进展)的化合物或盐的量。有效剂量的确切量将取决于治疗的目的并且将能够由本领域技术人员使用已知技术确定(参见，例如，lloyd(1999)the art，science and technology of pharmaceutical compounding[药物混配的艺术、科学与技术])。
[0087]
本领域普通技术人员将认识到，当披露化合物的量时，该化合物的药学上可接受的盐形式的相关量是与该化合物的游离碱的量等价的量。本文所披露的化合物和药学上可接受的盐的量基于相关化合物的游离碱形式。例如，“10mg的至少一种选自式i或ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体”是指10mg的式i或ia的化合物或相当于10mg相关的式i或ia化合物的药学上可接受的盐的量。
[0088]
本披露的化合物或组合物的“有效性”可通过本领域普通技术人员已知的任何方法来评估，包括在本披露的实例中描述的那些。可在体外(培养细胞中的生物化学和/或生物学)和/或体内建立有效性。体外有效性可用于推断或预测在动物或人受试者体内的某种程度的有效性。可使用参考或标准或比较。在本披露和权利要求的上下文中，术语“有效”抑制受体(诸如ahr)和/或由酶介导的信号传导是指相对于基线活性，以可检测或可测量量降低/激活受体的活性和/或在下游分子的激活或已知生物学效应方面降低/激活信号传导途径的激活和传播。这可在体外或体内进行评估，并且在一些情况下，本领域普通技术人员可推断体内的活性或益处是什么。在一些实施例中，降低或激活是相对于在不暴露于本披露的化合物的情况下的活性，根据降低或激活的百分比来测量的，包括例如至少5％、至少10％、20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或约100％。活性也可落在例如5％-10％、10％-20％的范围内，以及1％与100％之间的任何其他范围间隔内。如果某个量对施用该化合物或盐的受试者产生任何益处，则该量在体内是“有效的”。
[0089]
本文披露了式(i)的化合物：
[0090][0091]
及其药学上可接受的盐，
[0092]
其中：
[0093]
r1和r2中的每一者独立地选自任选取代的烷基、任选取代的酯、任选取代的杂烷
基、任选取代的酰基、任选取代的酰胺、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基、任选取代的胺和任选取代的杂环烷基；以及
[0094]
r3选自氢、任选取代的烷基、任选取代的酰基、任选取代的酰胺、任选取代的芳基、任选取代的环烷基、任选取代的酯、任选取代的杂烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、任选取代的胺、氰基、卤代、羟基和-c(o)h。
[0095]
在一些实施例中，r2为二烷基胺。在一些实施例中，r2为二乙胺。
[0096]
本文还披露了式ia的化合物：
[0097][0098]
及其药学上可接受的盐，
[0099]
其中：
[0100]
环a选自任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基和任选取代的杂环烷基；
[0101]
环b选自任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基和任选取代的杂环烷基；以及
[0102]
r选自氢、任选取代的烷基、任选取代的酰基、任选取代的酰胺、任选取代的芳基、任选取代的环烷基、任选取代的酯、任选取代的杂烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、氨基、氰基、卤代、羟基和-c(o)h。
[0103]
在一些实施例中，环a选自6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基，其中每个6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基独立地任选被1至5个ra的实例取代。
[0104]
在一些实施例中，环b选自6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基，其中每个6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基独立地任选被1至5个rb的实例取代。
[0105]
在一些实施例中，r选自氢、c
1-c
10
烷基、6-10元芳基、-c(o)r’、-c(o)nr’r’、3-10元环烷基、-c(o)or’、c
1-c
10
杂烷基、5-10元杂芳基、3-10元杂环烷基、氨基、氰基、卤代、羟基和-c(o)h，其中每个c
1-c
10
烷基、6-10元芳基、3-10元环烷基、c
1-c
10
杂烷基、5-10元杂芳基和3-10元杂环烷基独立地任选被1至5个rc的实例取代。
[0106]
在一些实施例中，每个r’独立地选自氢、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
羟基烷基和c
1-c
10
杂烷基。
[0107]
在一些实施例中，每个ra独立地选自卤代、羟基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷氧基、c
1-c
10
羟基烷基和nr”r”。
[0108]
在一些实施例中，每个rb独立地选自卤代、羟基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷氧基、c
1-c
10
羟基烷基和nr”r”。
[0109]
在一些实施例中，每个rc独立地选自卤代、羟基、氰基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷基、3-10元环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基和5-10元杂芳基。
[0110]
在一些实施例中，每个r”独立地选自氢、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
羟基烷基和c
1-c
10
杂烷基。
[0111]
在一些实施例中，环a选自6-10元芳基、5-8元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基，其中每个6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基独立地任选被1至5个ra的实例取代；
[0112]
环b选自6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基，其中每个6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基独立地任选被1至5个rb的实例取代；
[0113]
r选自氢、c
1-c
10
烷基、6-10元芳基、-c(o)r’、-c(o)nr’r’、3-10元环烷基、-c(o)or’、c1-c10杂烷基、5-10元杂芳基、3-10元杂环烷基、氨基、氰基、卤代、羟基和-c(o)h，其中每个c
1-c
10
烷基、6-10元芳基、3-10元环烷基、c
1-c
10
杂烷基、5-10元杂芳基和3-10元杂环烷基独立地任选被1至5个rc的实例取代；
[0114]
每个r’独立地选自氢、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
羟基烷基和c
1-c
10
杂烷基；
[0115]
每个ra独立地选自卤代、羟基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷氧基、c
1-c
10
羟基烷基和nr”r”；
[0116]
每个rb独立地选自卤代、羟基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷氧基、c
1-c
10
羟基烷基和nr”r”；
[0117]
每个rc独立地选自卤代、羟基、氰基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷基、3-10元环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基和5-10元杂芳基；以及
[0118]
每个r”独立地选自氢、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
100
羟基烷基和c
1-c
10
杂烷基。
[0119]
在一些实施例中，环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的3-10元环烷基。在一些实施例中，环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在一些实施例中，环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的6-8元芳基。在一些实施例中，环a为任选地被1至3个ra的实例取代的苯基。在一些实施例中，环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的5-8元杂芳基。
[0120]
在一些实施例中，环a选自吡咯基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、四唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基和嘧啶基，其中吡咯基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、四唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基和嘧啶基中的每一者独立地任选被1至3个ra的实例取代。
[0121]
在一些实施例中，环a为任选地被1至3个ra的实例取代的吡啶基。在一些实施例中，环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的5-8元杂环烷基。在一些实施例中，环a选自吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氨杂基、四氢吡喃基和四氢呋喃基，其中吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂基、四氢吡喃基和四氢呋喃基中的每一者独立地任选被1至3个ra的实例取代。在一些实施例中，环a为任选地被1至3个ra的实例取代
的哌啶基或吗啉基。
[0122]
在一些实施例中，每个ra独立地选自卤代、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷氧基和nr”r”。在一些实施例中，
[0123]
每个rb独立地选自卤代、c
1-c
10
烷基和c
1-c
10
卤代烷基。在一些实施例中，每个rc独立地选自卤代、羟基、氰基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基和6-8元芳基。在一些实施例中，每个r”独立地选自氢和c
1-c
10
烷基。
[0124]
在一些实施例中，每个ra独立地选自卤代、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷氧基和nr”r”；
[0125]
每个rb独立地选自卤代、c
1-c
10
烷基和c
1-c
10
卤代烷基；
[0126]
每个rc独立地选自卤代、羟基、氰基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基和6-8元芳基；以及
[0127]
每个r”独立地选自氢和c
1-c
10
烷基。
[0128]
在一些实施例中，环b选自任选地被1至5个rb的实例取代的6-8元芳基。在一些实施例中，环b为任选地被1至3个rb的实例取代的苯基。在一些实施例中，环b选自任选地被1至5个rb的实例取代的5-8元杂芳基。在一些实施例中，环b选自吡咯基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、四唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶酮基和嘧啶基，其中吡咯基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、四唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基和嘧啶基中的每一者独立地任选被1至3个rb的实例取代。在一些实施例中，环b选自吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基和噻吩基、其中吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基和噻吩基中的每一者独立地任选被1至3个rb的实例取代。
[0129]
在一些实施例中，环a选自
[0130]
在一些实施例中，环a选自
[0131]
在一些实施例中，环a选自在一些实施例中，环a选自
[0132]
在一些实施例中，环b选自
[0133]
在一些实施例中，环b选自在一些实施例中，环b选自在一些实施例中，环b选自
[0134]
在一些实施例中，环b选自在一些实施例中，环b选自
[0135]
在一些实施例中，r选自甲基、在一些实施例中，r选自甲基、
[0136]
在一些实施例中，r选自甲基、在一些实施例中，r选自甲基、
[0137]
本文还披露了式ib的化合物：
[0138][0139]
及其药学上可接受的盐，
[0140]
其中：
[0141]
环a选自任选取代的杂芳基和任选取代的杂环烷基；
[0142]
环b选自任选取代的杂芳基和任选取代的杂环烷基；以及
[0143]
r选自氢、任选取代的烷基、任选取代的酰基、任选取代的酰胺、任选取代的芳基、任选取代的环烷基、任选取代的酯、任选取代的杂烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、氨基、氰基、卤代、羟基和-c(o)h。
[0144]
在一些实施例中，本披露涉及表1中列举的一种或多种化合物。
[0145]
表1
[0146]
[0147]
[0148]
[0149]
[0150]
[0151]
[0152]
[0153]
[0154]
[0155]
[0156]
[0157]
[0158]
[0159]
[0160]
[0161]
[0162]
[0163]
[0164]
[0165]
[0166]
[0167]
[0168]
[0169]
[0170]
[0171]
[0172][0173]
在一些实施例中，本披露涉及一种或多种选自以下化合物及其药学上可接受的盐的化合物：
[0174]
(i)(s)-8-(5-氟吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0175]
(ii)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0176]
(iii)(s)-8-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-4-基)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0177]
(iv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0178]
(v)(s)-8-(5-氟吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0179]
(vi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6，8-二(吡啶-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0180]
(vii)(s)-6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0181]
(viii)(s)-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0182]
(ix)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0183]
(x)6，8-二(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0184]
(xi)(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0185]
(xii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0186]
(xiii)6-(4-氟苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0187]
(xiv)8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0188]
(xv)6-(4-氯苯基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0189]
(xvi)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0190]
(xvii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0191]
(xviii)6-(4-氯苯基)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0192]
(xix)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-6，8-双(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0193]
(xx)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6，8-二(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0194]
(xxi)6-(4-氯苯基)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0195]
(xxii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0196]
(xxiii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶并
[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0197]
(xxiv)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0198]
(xxv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0199]
(xxvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-苯基吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0200]
(xxvii)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0201]
(xxviii)3-甲基-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0202]
(xxix)外消旋-6-(4-氯苯基)-3-((反式)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0203]
(xxx)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0204]
(xxxi)(r)-6-(4-氯苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0205]
(xxxii)外消旋-6-(4-氯苯基)-3-((顺式)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0206]
(xxxiii)(r)-6-(4-氯苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0207]
(xxxiv)(s)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-6，8-二(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0208]
(xxxv)(s)-6，8-双(3，5-二氟苯基)-3-(1-羟基-3-甲基丁-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0209]
(xxxvi)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0210]
(xxxvii)(s)-8-(3，5-二氟苯基)-3-(1-羟基-3-甲基丁-2-基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0211]
(xxxviii)6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0212]
(xxxix)(r)-6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0213]
(xl)(s)-3-(1-(苄氧基)丙-2-基)-8-(3-氟苯基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0214]
(xli)(r)-6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0215]
(xlii)(s)-6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0236]
(lxiii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0237]
(lxiv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(4-甲基吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0238]
(lxv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-甲基噻唑-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0239]
(lxvi)(s)-6-(2-环丙基噻唑-5-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0240]
(lxvii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(2-异丙基噻唑-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0241]
(lxviii)(s)-3-1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0242]
(lxix)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6，8-双(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0243]
(lxx)6-(4-氯苯基)-3-((3s，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮。
[0244]
(lxxi)6-(4-氯苯基)-3-((3r，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0245]
(lxxii)3-(2-羟乙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0246]
(lxxiii)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0247]
(lxxiv)(s)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0248]
(lxxv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0249]
(lxxvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0250]
(lxxvii)(s)-6-(环己-1-烯-1-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0251]
(lxxviii)(s)-6，8-双(5-氟吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0252]
(lxxix)3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0253]
(lxxx)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0254]
(lxxxi)6-(6-环丙基吡啶-3-基)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0255]
(lxxxii)6-(6-环丙基吡啶-3-基)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0256]
(lxxxiii)(s)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0257]
(lxxxiv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0258]
(lxxxv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0259]
(lxxxvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0260]
(lxxxvii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0261]
(lxxxviii)3-((3s，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0262]
(lxxxix)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(2-甲基噻唑-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0263]
(xc)(s)-6-(4-氯苯基)-8-3-氟苯基)-3-(1-羟基-3-甲基丁-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0264]
(xci)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(哌啶-1-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0265]
(xcii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(异噻唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0266]
(xciii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(异噻唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0267]
(xciv)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0268]
(xcv)(s)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0269]
(xcvi)(3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0270]
(xcvii)3-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0271]
(xcviii)(r)-3-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0272]
(xcix)(r)-3-(2-羟丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0273]
(c)(s)-3-(2-羟丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0274]
(ci)(r)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(6-(三氟甲
基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0275]
(cii)(s)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0276]
(ciii)(r)-3-(2-羟丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0277]
(civ)(r)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0278]
(cv)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0279]
(cvi)3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0280]
(cvii)6-(4-氟苯基)-3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0281]
(cviii)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0282]
(cix)(s)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0283]
(cx)(r)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0284]
(cxi)(r)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0285]
(cxii)(r)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0286]
(cxiii)(s)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0287]
(cxiv)6-(4-氯苯基)-3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0288]
(cxv)3-((3s，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0289]
(oxvi)(s)-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酸甲酯
[0290]
(cxvii)6-(4-氯苯基)-3-(4-羟基-1-甲基吡咯烷-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0291]
(cxviii)6-(4-氯苯基)-3-((3r，4r)-4-羟基吡咯烷-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0292]
(cxix)(r)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-)3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0293]
(cxx)(s)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0294]
(cxxi)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0295]
(cxxii)3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0296]
(cxxiii)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0297]
(cxxiv)3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0298]
(cxxv)(r)-3-(2-羟丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0299]
(cxxvi)(s)-3-(2-羟丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0300]
(cxxvii)(s)-3-(2-羟丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3)-酮
[0301]
(cxxviii)(r)-3-(2-羟丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0302]
(cxxix)3-((3s，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0303]
(cxxx)(s)-3-(2-羟丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0304]
(cxxxi)(s)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0305]
(cxxxii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0306]
(cxxxiii)3-((3s，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0307]
(cxxxiv)6-(4-氯苯基)-3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0308]
(cxxxv)6-(4-氯苯基)-3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0309]
(cxxxvi)(r)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0310]
(cxxxvii)(s)-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酸
[0311]
(cxxxviii)(s)-n-甲基-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酰胺
[0312]
(cxxxix)(s)-n，n-二甲基-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙烯酰胺
[0313]
(cxl)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)
吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0314]
(cxli)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0315]
(cxlii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0316]
(cxliii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0317]
(cxliv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0318]
(cxlv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-1，2，4-三唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0319]
(cxlvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0320]
(cxlvii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0321]
(cxlviii)(s)-8-(二乙基氨基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0322]
(cxlix)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(哌啶-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0323]
(cl)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡咯烷-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0324]
(cli)(s)-6-(4-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(哌啶-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0325]
(clii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0326]
(cliii)(s)-6-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-8-)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0327]
(cliv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(吡啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0328]
(clv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(2-甲基噻唑-4-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0329]
(clvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(1-甲基-1h-1，2，3-三唑-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0330]
(clvii)(r)-6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0331]
(clviii)(s)-6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0332]
(clix)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1，2，5，6-四氢吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0353]
(clxxx)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0354]
(clxxxi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0355]
(clxxxii)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0356]
(clxxxiii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0357]
(clxxxiv)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0358]
(clxxxv)3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0359]
(clxxxvi)3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0360]
(clxxxvii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-吗啉基-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0361]
(clxxxviii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(哌啶-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0362]
(clxxxix)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-甲基吡啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0363]
(cxc)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-甲基嘧啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0364]
(cxci)(s)-8-(环己-1-烯-1-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0365]
(cxcii)(s)-8-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0366]
(cxciii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-n，n-二甲基-4-氧代-8-(吡啶-3-基)-3，4-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-6-甲酰胺
[0367]
(cxciv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0368]
(cxcv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(2-甲氧基乙基)-8(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0369]
(cxcvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(2-甲氧基乙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮。
[0370]
式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐可掺入药物组合物中。在一些实施例中，本披露涉及包含至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体的药物组合物。在一些实施例中，本披露涉及一种基本上由至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体组成的药物组合物。
[0371]
在一些实施例中，该至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体可与至少一种附加疗法组合施用。在一些实施例中，该至少一种附加疗法选自免疫检查点抑制剂(ici)。
[0372]
在一些实施例中，该至少一种附加疗法选自抗ctla-4化合物、抗pd-1化合物和抗pdl-1化合物。在一些实施例中，该至少一种附加疗法选自派姆单抗(pembrolizumab)(keytruda)；纳武单抗(nivolumab)(opdivo)；伊匹单抗(lpilimumab)(yervoy)；阿维鲁单抗(avelumab)(bavencio)；阿替利珠单抗(atezolizumab)(tecentriq)；德瓦鲁单抗(durvalumab)(imfinzi)；西米普利单抗(cemiplimab)(lbtayo)；信迪利单抗(sintilimab)(tyvyt)；特瑞普利单抗(toripalimab)(tuoyi)；卡瑞利珠单抗(camrclizumab)(airuika)；斯巴达珠单抗(spartalizumab)；和替雷利珠单抗(tislelizumab)。在一些实施例中，该至少一种附加疗法选自抗lag-3(淋巴细胞激活基因-3)化合物；抗tim-3(t细胞免疫球蛋白和含粘蛋白结构域-3)化合物；抗tigit(t细胞免疫球蛋白和itim结构域)化合物；抗vista(t细胞激活的v结构域lg抑制物)化合物；或它们的组合。抗lag-3化合物的非限制性实例包括imp321(依替拉莫德α(eftilagimod alpha))、瑞拉利单抗(relatlimab)(bms-986016)、lag525、mk-4280、regn3767、tsr-033、bi754111、sym022、fs118和mgd013。抗tim-3化合物的非限制性实例包括tsr-022、mbg453、sym023、incagn2390、ly3321367、bms-986258、shr-1702、ro7121661。抗tigit化合物的非限制性实例包括mk-7684、艾替利单抗(etigilimab)(omp-313)、替拉戈单抗(tiragolumab)(mtig7192a、rg-6058)、bms-986207、ab-154和asp-8374。抗vista化合物的非限制性实例包括jnj-61610588和ca-170。
[0373]
在一些实施例中，药物组合物包含至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体和至少一种药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂是本领域普通技术人员所熟知的，并且作为非限制性实例在以下文献中进行了描述：remington：the science and practice of pharmacy，22nd edition[雷明顿：药学的科学与实践，第22版]，lippincott williams&wilkins，philadelphia，pa.[利平科特
·
威廉姆斯和威尔盒斯出版社，宾夕法尼亚州费城](2013)和任何其他版本，该文献特此通过援引并入。在一些实施例中，药物组合物进一步包含至少一种至少一种附加疗法。
[0374]
本披露的化合物、其药学上可接受的盐和/或包含所述至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体，并且任选地进一步包含至少一种至少一种附加疗法的药物组合物，可用于治疗性治疗。
[0375]
这些化合物、药学上可接受的盐、附加疗法和/或药物组合物可以单位施用形式施用于哺乳动物受试者，包括人。单位施用形式的合适的非限制性实例包括口服施用形式和经由肠胃外/全身途径施用的形式，其非限制性实例包括吸入、皮下施用、肌内施用、静脉内施用、皮内施用和玻璃体内施用。
[0376]
在一些实施例中，适于口服施用的药物组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、硬明胶胶囊、软明胶胶囊和/或颗粒剂的形式。在此类药物组合物的一些实施例中，本披露的化合物和/或本披露的化合物的药学上可接受的盐与一种或多种惰性稀释剂混合，惰性稀释剂的非限制性实例包括淀粉、纤维素、蔗糖、乳糖和二氧化硅。在一些实施例中，此类药物组合物可进一步包含一种或多种除稀释剂之外的物质，诸如(作为非限制性实例)润滑剂、着色剂、包衣料或清漆。在一些实施例中，此类药物组合物可进一步包含至少一种至少一种附加疗
法。
[0377]
在一些实施例中，用于肠胃外施用的药物组合物可以是水溶液、非水溶液、悬浮液、乳液、滴剂或它们的任何组合的形式。在一些实施例中，此类药物组合物可包含水、药学上可接受的二醇、药学上可接受的油、药学上可接受的有机酯或其他药学上可接受的溶剂中的一种或多种。在一些实施例中，此类药物组合物可进一步包含至少一种至少一种附加疗法。
[0378]
在一些实施例中，本文披露了一种抑制ahr的方法，该方法包括向有需要的受试者施用至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体。在一些实施例中，本文披露了一种降低ahr活性的方法，该方法包括向有需要的受试者施用至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体。在一些实施例中，此类药物组合物可进一步包含至少一种至少一种附加疗法。
[0379]
在一些实施例中，本文披露了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体。在一些实施例中，癌症选自液体肿瘤和实体肿瘤。在一些实施例中，癌症选自乳腺癌、呼吸道癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、泌尿道癌、眼癌、肝癌、皮肤癌、头颈癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌和前述疾病中的任一种的转移。在一些实施例中，癌症选自乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌和结肠癌。在一些实施例中，癌症选自淋巴瘤、肉瘤和白血病。
[0380]
在一些实施例中，本文披露了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体和至少一种附加疗法。在一些实施例中，癌症选自非小细胞肺癌(nsclc)；小细胞肺癌；头颈部鳞状细胞癌；肾细胞癌；胃腺癌；鼻咽肿瘤；尿路上皮癌；结直肠癌；胸膜间皮瘤；三阴性乳腺癌(tnbc)；食管肿瘤；多发性骨髓瘤；胃癌和胃食管交界处癌；黑色素瘤；霍奇金淋巴瘤；肝细胞癌；肺癌；头颈癌；非霍奇金淋巴瘤；转移性透明细胞肾癌；鳞状细胞肺癌；间皮瘤；胃癌；胃食管交界处癌；转移性黑色素瘤；转移性非皮肤黑色素瘤；尿路上皮癌；弥漫性大b细胞淋巴瘤；肾细胞癌；卵巢癌、输卵管癌；腹膜肿瘤；广泛期小细胞肺癌；膀胱癌；移行细胞癌；前列腺肿瘤；复发性或转移性pd-l1阳性或阴性头颈部鳞状细胞癌(scchn)；复发性鳞状细胞肺癌；晚期实体恶性肿瘤；scchn；下咽鳞状细胞癌；喉鳞状细胞癌；不可切除或转移性黑色素瘤；胆道肿瘤；食管鳞状细胞癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、转移癌、前列腺癌、实体器官癌；胃癌；结肠癌；和肝癌。
[0381]
在一些实施例中，本文披露了一种治疗眼部障碍的方法，该方法包括向有需要的受试者施用至少一种选自式i或式ia的化合物及其药学上可接受的盐的实体和任选的至少一种附加疗法。
[0382]
关于本文所披露的方法、一种施用模式(或多种施用模式)、一种剂量(或多种剂量)和一种药物形式(或多种药物形式)可根据确立患者治疗期间通常考虑的标准来确定，诸如以非限制性实例的方式，化合物和/或化合物的药学上可接受的盐的效力、至少一种附加疗法(如果存在)、患者年龄、患者体重、患者的一种病症(或多种病症)的严重程度、患者对治疗的耐受性以及在治疗中观察到的继发效应。确定对于特定的施用模式和频率有效提供治疗益处的剂量在技术人员的能力范围内。
[0383]
在一些实施例中，式i或式ia的化合物和/或其药学上可接受的盐以5μg至2,000mg
范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以5μg至1,000mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以5μg至500mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以5μg至250mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以5μg至100mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以5μg至50mg范围内的量存在于药物组合物中。
[0384]
在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以1mg至5,000mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以1mg至3,000mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以1mg至2,000mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，苯披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以1mg至1,000mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以1mg至500mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以1mg至250mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以1mg至100mg范围内的量存在于药物组合物中。在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以1mg至50mg范围内的量存在于药物组合物中。
[0385]
在一些实施例中，本披露的化合物和/或其药学上可接受的盐以1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、60mg、70mg、80mg，90mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、1,000mg、1,100mg、1,200mg、1,300mg、1,400mg、1,500mg、1,600mg、1,700mg、1,800mg、1,900mg、2,000mg、2,100mg、2,200mg、2,300mg、2,400mg、2,500mg、2,600mg、2,700mg、2,800mg、2,900mg、3,000mg、3,100mg、3,200mg、3,300mg、3,400mg、3,500mg、3,600mg、3,700mg、3,800mg、3,900mg、4,000mg、4,100mg、4,200mg、4,300mg、4,400mg、4,500mg、4,600mg、4,700mg、4,800mg、4,900mg或5,000mg的量存在于药物组合物中。
[0386]
可最初从体外测定中估计有效量和剂量。例如，可配制用于动物的初始剂量，以实现如在体外测定中测量的等于或高于特定化合物的ic
50
的活性化合物的循环血液或血清浓度。考虑到该具体化合物的生物利用率，计算出实现这样的循环血液的或血清的浓度的剂量完全在技术人员的能力范围内。为了指导，读者可参考fingl&woodbury，“general principles[一般原理]”，goodman and gilman
′
s the pharmaceutical basis of therapeutics[古德曼和吉尔曼的治疗药学基础]，第1章，第1-46页，最新版本，pergamagon press[帕格玛贡出版社]，以及其中引用的参考文件，该方法通过援引以其全文并入本文。也可以从体内数据(诸如动物模型)估计初始剂量。用于测试化合物治疗或预防本披露中描述的各种疾病的功效的动物模型是本领域中熟知的。
[0387]
在一些实施例中，所施用的剂量范围为0.0001或0.001或0.01mg/kg/天至100mg/kg/天，但可更高或更低，除其他因素之外，这取决于化合物的活性、其生物利用度、施用模式和以上讨论的个种因素。可单独调节剂量和间隔以提供足以维持治疗或预防效果的化合物的血浆水平。例如，化合物可每周一次、每周若干次(例如，每隔一天)、每天一次或每天多
次施用，除其他因素之外，这取决于施用模式、正被治疗的具体适应症、以及处方医师的判断。在局部给予或选择性摄取(例如局部外用给予)的情况下，这种或这些活性化合物的有效局部浓度可以不与血浆浓度有关。无需过度的实验，技术人员能移最优化有效的局部剂量。
[0388]
本披露的非限制性实施例包括：
[0389]
1.一种式i的化合物：
[0390][0391]
及其药学上可接受的盐，
[0392]
其中：
[0393]
r1和r2中的每一者独立地选自任选取代的烷基、任选取代的酯、任选取代的杂烷基、任选取代的酰基、任选取代的酰胺、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基、任选取代的胺和任选取代的杂环烷基；以及
[0394]
r3选自氢、任选取代的烷基、任选取代的酰基、任选取代的酰胺、任选取代的芳基、任选取代的环烷基、任选取代的酯、任选取代的杂烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、任选取代的胺、氰基、卤代、羟基和-c(o)h。
[0395]
2.一种式ia的化合物
[0396][0397]
或其药学上可接受的盐，
[0398]
其中：
[0399]
环a选自任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基和任选取代的杂环烷基；
[0400]
环b选自任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的环烷基和任选取代的杂环烷基；以及
[0401]
r选自氢、任选取代的烷基、任选取代的酰基、任选耳代的酰胺、任选取代的芳基、任选取代的环烷基、任选取代的酯、任选取代的杂烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环烷基、氨基、氰基、卤代、羟基和-c(o)h。
[0402]
3.如实施例2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
[0403]
环a选自任选取代的6-10元芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元环
烷基和任选取代的3-10元杂环烷基；
[0404]
环b选自任选取代的6-10元芳基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元环烷基和任选取代的3-10元杂环烷基；
[0405]
r选自氢、任选取代的c
1-c
10
烷基、任选取代的6-10元芳基、-c(o)r’、-c(o)nr’r’、任选取代的3-10元环烷基、-c(o)or’、任选取代的c
1-c
10
杂烷基、任选取代的5-10元杂芳基、任选取代的3-10元杂环烷基、氨基、氰基、卤代、羟基和-c(o)h；以及
[0406]
每个r’独立地选自氢、任选取代的c
1-c
10
烷基和任选取代的c
1-c
10
杂烷基。
[0407]
4.如实施例2或3所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
[0408]
环a选自6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基，其中每个6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基独立地任选被1至5个ra的实例取代；
[0409]
环b选自6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基，其中每个6-10元芳基、5-10元杂芳基、3-10元环烷基和3-10元杂环烷基独立地任选被1至5个rb的实例取代；
[0410]
r选自氢、c
1-c
10
烷基、6-10元芳基、-c(o)r’、-c(o)nr’r’、3-10元环烷基、-c(o)or’、c
1-c
10
杂烷基、5-10元杂芳基、3-10元杂环烷基、氨基、氰基、卤代、羟基和-c(o)h，其中每个c
1-c
10
烷基、6-10元芳基、3-10元环烷基、c
1-c
10
杂烷基、5-10元杂芳基和3-10元杂环烷基独立地任选被1至5个rc的实例取代；
[0411]
每个r’独立地选自氢、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
羟基烷基和c
1-c
10
杂烷基；
[0412]
每个ra独立地选自卤代、羟基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷氧基、c
1-c
10
羟基烷基和nr”r”；
[0413]
每个rb独立地选自卤代、羟基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷氧基、c
1-c
10
羟基烷基和nr”r”；
[0414]
每个rc独立地选自卤代、羟基、氰基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷基、3-10元环烷基、3-10元杂环烷基、6-10元芳基和5-10元杂芳基；以及
[0415]
每个r”独立地选自氢、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
羟基烷基和c
1-c
10
杂烷基。
[0416]
5.如实施例4所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的3-10元环烷基。
[0417]
6.如实施例4或5所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基.
[0418]
7.如实施例4所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的6-8元芳基。
[0419]
8.如实施例4或7所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a为任选地被1至3个ra的实例取代的苯基。
[0420]
9.如实施例4所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的5-8元杂芳基。
[0421]
10.如实施例4或9所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自吡咯基、呋
喃基、呋咱基、噻吩基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、四唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基和嘧啶基，
[0422]
其中吡咯基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、四唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基和嘧啶基中的每一者独立地任选被1至3个ra的实例取代。
[0423]
11.如实施例4、9或10中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a为任选地被1至3个ra的实例取代的吡啶基。
[0424]
12.如实施例4所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自任选地被1至5个ra的实例取代的5-8元杂环烷基。
[0425]
13.如实施例4或12所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂基、四氢吡喃基和四氢呋喃基，
[0426]
其中吡咯烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂基、四氢吡喃基和四氢呋喃基中的每一者独立地任选被1至3个ra的实例取代。
[0427]
14.如实施例4、12或13中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a为任选地被1至3个ra的实例取代的哌啶基或吗啉基。
[0428]
15.如实施例4所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环b选自任选地被1至5个rb的实例取代的6-8元芳基。
[0429]
16.如实施例4或15所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环b为任选地被1至3个rb的实例取代的苯基。
[0430]
17.如实施例4所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环b选自任选地被1至5个rb的实例取代的苯并二氧杂环戊烯基和5-8元杂芳基。
[0431]
18.如实施例4或17所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环b选自苯并二氧杂环戊烯基、吡咯基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、四唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶酮基和嘧啶基，
[0432]
其中苯并二氧杂环戊烯基、吡咯基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、四唑基、噻唑基、三唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基和嘧啶基中的每一者独立地任选被1至3个rb的实例取代。
[0433]
19.如实施例4、17或18中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环b选自吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基和噻吩基，
[0434]
其中吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、吡啶基、嘧啶基和噻吩基中的每一者独立地任选被1至3个rb的实例取代。
[0435]
20.如实施例4至19中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
[0436]
每个ra独立地选自卤代、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
卤代烷基、c
1-c
10
烷氧基、c
1-c
10
卤代烷氧基和nr”r”；
[0437]
每个rb独立地选自卤代、c
1-c
10
烷基和c
1-c
10
卤代烷基；
[0438]
每个rc独立地选自卤代、羟基、氰基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、3-8元环烷基、3-8元杂环烷基和6-8元芳基；以及
[0439]
每个r”独立地选自氢和c
1-c
10
烷基。
[0440]
21、如实施例2至4和7至20中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自环a选自环a选自
[0441]
22.如实施例2至6和15至20中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自
[0442]
23.如实施例2至4和7至20中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环a选自环a选自
[0443]
24.如实施例2至4和7至20中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环b选自
[0444]
25.如实施例2至14和20中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环b选自
[0445]
26.如实施例2至4和7至20中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中环b选自环b选自
[0446]
27.如实施例2至26中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中r选自甲基、
[0447]
28.如实施例2至27中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中r选自甲基、基、
[0448]
29.至少一种选自以下化合物及其药学上可接受的盐的实体：
[0449]
(i)(s)-8-(5-氟吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0450]
(ii)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0451]
(iii)(s)-8-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-4-基)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0452]
(iv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0453]
(v)(s)-8-(5-氟吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0454]
(vi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6，8-二(吡啶-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0455]
(vii)(s)-6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0456]
(viii)(s)-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0457]
(ix)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0458]
(x)6，8-二(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0459]
(xi)(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0460]
(xii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0461]
(xiii)6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0462]
(xiv)8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0463]
(xv)6-(4-氯苯基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0464]
(xvi)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0465]
(xvii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0466]
(xviii)6-(4-氯苯基)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0467]
(xix)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-6，8-双(1-甲基-1h-吡唑4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0468]
(xx)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6，8-二(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0469]
(xxi)6-(4-氯苯基)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并
[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0470]
(xxii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0471]
(xxiii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0472]
(xxiv)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0473]
(xxv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0474]
(xxvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-苯基吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0475]
(xxvii)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0476]
(xxviii)3-甲基-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0477]
(xxix)外消旋-6-(4-氯苯基)-3-((反式)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0478]
(xxx)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0479]
(xxxi)(r)-6-(4-氯苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0480]
(xxxii)外消旋-6-(4-氯苯基)-3-((顺式)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0481]
(xxxiii)(r)-6-(4-氯苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0482]
(xxxiv)(s)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-6，8-二(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0483]
(xxxv)(s)-6，8-双(3，5-二氟苯基)-3-(1-羟基-3-甲基丁-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0484]
(xxxvi)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0485]
(xxxvii)(s)-8-(3，5-二氟苯基)-3-(1-羟基-3-甲基丁-2-基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0486]
(xxxviii)6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0487]
(xxxix)(r)-6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(3-羟基-3-甲基丁-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0488]
(xl)(s)-3-(1-(苄氧基)丙-2-基)-8-(3-氟苯基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0489]
(xli)(r)-6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0490]
(xlii)(s)-6-(4-氯苯基)-8-(3-氟苯基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0491]
(xliii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-吗啉基-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0492]
(xliv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0493]
(xlv)(s)-3-(1-甲氧基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0494]
(xlvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0495]
(xlvii)(s)-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0496]
(xlviii)(s)-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0497]
(xlix)(8)-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0498]
(l)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0499]
(li)(s)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0500]
(lii)(s)-5-(3-(1-羟基丙-2-基)-4-氧代-8-(吡啶-3-基)-3，4-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-6-基)吡啶甲酸甲酯
[0501]
(liii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(异噻唑-4-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0502]
(liv)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(异噻唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0503]
(lv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(异噻唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0504]
(lvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6，8-二(异噻唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0505]
(lvii)(s)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0506]
(lviii)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(异噻唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0507]
(lix)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-6，8-二(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0508]
(lx)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡
啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0509]
(lxi)6-(4-氯-2-甲基苯基)-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0510]
(lxii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0511]
(lxiii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(2-甲基吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0512]
(lxiv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(4-甲基吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0513]
(lxv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-甲基噻唑-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0514]
(lxvi)(s)-6-(2-环丙基噻唑-5-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0515]
(lxvii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(2-异丙基噻唑-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0516]
(lxviii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0517]
(lxix)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6，8-双(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0518]
(lxx)6-(4-氯苯基)-3-((3s，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮。
[0519]
(lxxi)6-(4-氯苯基)-3-((3r，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0520]
(lxxii)3-(2-羟乙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0521]
(lxxiii)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0522]
(lxxiv)(s)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0523]
(lxxv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0524]
(lxxvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0525]
(lxxvii)(s)-6-(环己-1-烯-1-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0526]
(lxxviii)(s)-6，8-双(5-氟吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0527]
(lxxix)3-((3r，4s)4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0548]
(c)(s)-3-(2-羟丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0549]
(ci)(r)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0550]
(cii)(s)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0551]
(ciii)(r)-3-(2-羟丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0552]
(civ)(r)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0553]
(cv)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0554]
(cvi)3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0555]
(cvii)6-(4-氯苯基)-3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0556]
(cviii)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0557]
(cix)(s)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0558]
(cx)(r)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0559]
(cxi)(r)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(6-(三氯甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0560]
(cxii)(r)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0561]
(cxiii)(s)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0562]
(cxiv)6-(4-氯苯基)-3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0563]
(cxv)3-((3s，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0564]
(cxvi)(s)-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酸甲酯
[0565]
(cxvii)6-(4-氯苯基)-3-(4-羟基-1-甲基吡咯烷-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0566]
(cxviii)6-(4-氯苯基)-3-((3r，4r)-4-羟基吡咯烷-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酰胺
[0587]
(cxxxix)(s)-n，n-二甲基-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙烯酰胺
[0588]
(cxl)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0589]
(cxli)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-2-(1h-咪唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0590]
(cxlii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0591]
(cxliii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0592]
(cxliv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0593]
(cxlv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-1，2，4-三唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0594]
(cxlvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0595]
(cxlvii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h）-酮
[0596]
(cxlviii)(s)-8-(二乙基氨基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0597]
(cxlix)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(哌啶-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0598]
(cl)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡咯烷-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0599]
(cli)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(哌啶-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0600]
(clii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0601]
(cliii)(s)-6-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0602]
(cliv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(吡啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0603]
(clv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(2-甲基噻唑-4-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0604]
(clvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(1-甲基-1h-1，2，3-三唑-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮
[0605]
(clvii)(r)-6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0606]
(clviii)(s)-6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0607]
(clix)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1，2，5，6-四氢吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0608]
(clx)6-(4-氯苯基)-3-((3s，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0609]
(clxi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(2-甲基嘧啶-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0610]
(clxii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-(三氟甲基)-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0611]
(clxiii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0612]
(clxiv)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(吡啶-3-基)-6-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0613]
(clxv)(s)-5-(3-(1-羟基丙-2-基)-4-氧代-8-(吡啶-3-基)-3，4-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-6-基)吡啶甲酸；
[0614]
(clxvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(6-甲基吡啶-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0615]
(clxvii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0616]
(clxviii)3，8-二(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0617]
(clxix)8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0618]
(clxx)3-((3r，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0619]
(clxxi)3-((3r，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0620]
(clxxii)6-(4-氯苯基)-3-((3r，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0621]
(clxxiii)3-环戊基-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0622]
(clxxiv)3-苯基-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0623]
(clxxv)3-((3r，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0624]
(clxxvi)3-((3r，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0625]
(clxxvii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲
基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0626]
(clxxviii)(s)-n-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酰胺
[0627]
(clxxix)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0628]
(clxxx)(s)-6-(4-氯苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0629]
(clxxxi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0630]
(clxxxii)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0631]
(clxxxiii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0632]
(clxxxiv)3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0633]
(clxxxv)3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0634]
(clxxxvi)3-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0635]
(clxxxvii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-吗啉基-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0636]
(clxxxviii)3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(哌啶-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0637]
(clxxxix)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-甲基吡啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0638]
(cxc)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-甲基嘧啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0639]
(cxci)(s)-8-(环己-1-烯-1-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0640]
(cxcii)(s)-8-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并l3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0641]
(cxciii)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-n，n-二甲基-4-氧代-8-(吡啶-3-基)-3，4-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-6-甲酰胺；
[0642]
(cxciv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；
[0643]
(cxcv)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(2-甲氧基乙基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮；以及
[0644]
(cxcvi)(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(2-甲氧基乙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮。
[0645]
(cxcvii)
[0646]
30.一种药物组合物，其包含至少一种选自如实施例1至29中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐的实体，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
[0647]
31.一种在有需要的受试者中治疗由ahr信号传导介导的疾病或病症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的至少一种选自如实施例1至29中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐的实体、或至少一种如实施例30所述的药物组合物。
[0648]
32.一种在有需要的受试者中治疗与异常ahr信号传导相关的疾病或病症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的至少一种选自如实施例1至29中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐的实体、或至少一种如实施例30所述的药物组合物。
[0649]
33.如实施例31或32所述的方法，其中该疾病选自癌症。
[0650]
34.如实施例31或32所述的方法，其中该疾病选自液体肿瘤和实体肿瘤。
[0651]
35.如实施例31至34中任一项所述的方法，其中该疾病选自乳腺癌、呼吸道癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、泌尿道癌、眼癌、肝癌、皮肤癌、头颈癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌和前述疾病中的任一种的转移。
[0652]
36.如实施例31至35中任一项所述的方法，其中该疾病选自乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌和结肠癌。
[0653]
37.如实施例31至34中任一项所述的方法，其中该疾病选自淋巴瘤、肉瘤、黑色素瘤、胶质母细胞瘤和白血病。
[0654]
38.一种在有需要的受试者中抑制由ahr信号传导介导的癌细胞增殖的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的至少一种选自如实施例1至29中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐的实体、或至少一种如实施例30所述的药物组合物。
[0655]
39.一种在有需要的受试者中抑制由ahr信号传导介导的肿瘤细胞侵袭或转移的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的至少一种选自如实施例1至29中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐的实体、或至少一种如实施例30所述的药物组合物。
[0656]
40.一种在有需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包括向所述受试者施用治疗有效量的i)至少一种选自如实施例1至29中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐的实体或至少一种如实施例30所述的药物组合物，和ii)治疗有效量的至少一种附加疗法。
[0657]
41.如实施例40所述的方法，其中该至少一种附加疗法包括至少两种、至少三种、至少四种或至少五种附加疗法。
[0658]
42.如实施例40所述的方法，其中该至少一种选自如实施例1至29中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐的实体或至少一种如实施例30所述的药物组合物的施用在施用该至少一种附加疗法之前开始。
[0659]
43.如实施例40所述的方法，其中该至少一种选自如实施例1至29中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐的实体或至少一种如实施例30所述的药物组合物在施用该至少一种附加疗法之后施用。
[0660]
44.如实施例40所述的方法，其中该至少一种选自如实施例1至29中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐的实体或至少一种如实施例30所述的药物组合物与该至少一种附加疗法的施用同时施用。
[0661]
45.如实施例40至44中任一项所述的方法，其中该至少一种附加疗法选自检查点
抑制剂。
[0662]
46.如实施例45所述的方法，其中该受试者对单独施用时的该至少一种附加疗法不耐受、无响应和/或响应差。
[0663]
47.如实施例46所述的方法，其中该至少一种附加疗法选自靶向ctla-4、pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3、tigit和/或vista的检查点抑制剂。
[0664]
48.如实施例46所述的方法，其中该至少一种附加疗法选自靶向ctla-4、pd-1和/或pd-l1的检查点抑制剂。
[0665]
49.如实施例46所述的方法，其中该至少一种附加疗法选自细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4途径抑制剂。
[0666]
50.如实施例49所述的方法，其中该细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4途径抑制剂选自抗ctla-4抗体。
[0667]
51.如实施例50所述的方法，其中该抗ctla-4抗体是伊匹单抗。
[0668]
52.如实施例46所述的方法，其中该至少一种附加疗法选自程序性死亡-1途径抑制剂。
[0669]
53.如实施例52所述的方法，其中该程序性死亡-1途径抑制剂选自抗pd-1抗体。
[0670]
54.如实施例52所述的方法，其中该抗pd-1抗体是纳武单抗。
[0671]
55.如实施例52所述的方法，其中该抗pd-1抗体是派姆单抗。
[0672]
56.如实施例52所述的方法，其中该抗pd-1抗体是西米普利单抗
[0673]
57.如实施例52所述的方法，其中该抗pd-1抗体是卡瑞利珠单抗。
[0674]
58.如实施例52所述的方法，其中该抗pd-1抗体是信迪利单抗。
[0675]
59.如实施例52所述的方法，其中该抗pd-1抗体是斯巴达珠单抗。
[0676]
60.如实施例52所述的方法，其中该抗pd-1抗体是替雷利珠单抗。
[0677]
61.如实施例52所述的方法，其中该抗pd-1抗体是bcd-100。
[0678]
62.如实施例52所述的方法，其中该抗pd-1抗体是js001。
[0679]
63.如实施例52所述的方法，其中该程序性死亡-1途径抑制剂选自抗pd-l1抗体。
[0680]
64.如实施例63所述的方法，其中该抗pd-l1抗体是阿替利珠单抗。
[0681]
65.如实施例63所述的方法，其中该抗pd-l1抗体是阿维鲁单抗。
[0682]
66.如实施例63所述的方法，其中该抗pd-l1抗体是德瓦鲁单抗。
[0683]
67.如实施例63所述的方法，其中该抗pd-l1抗体是kn035。
[0684]
68.如实施例46所述的方法，其中该至少一种附加疗法选自淋巴细胞激活基因-3(lag-3)抑制剂。
[0685]
69.如实施例68所述的方法，其中该lag-3抑制剂选自抗lag-3抗体。
[0686]
70.如实施例46所述的方法，其中该至少一种附加疗法选自t细胞免疫球蛋白和含粘蛋白结构域-3(tim-3)抑制剂。
[0687]
71.如实施例70所述的方法，其中该tim-3抑制剂选自抗tim-3抗体。
[0688]
72.如实施例46所述的方法，其中该至少一种附加疗法选自t细胞免疫球蛋白和itim结构域(tigit)抑制剂。
[0689]
73.如实施例72所述的方法，其中该tigit抑制剂选自tigit抗体。
[0690]
74.如实施例46所述的方法，其中该至少一种附加疗法选自t细胞激活的v结构域
ig抑制物(vista)抑制剂。
[0691]
75.如实施例74所述的方法，其中该vista抑制剂选自抗vista抗体。
[0692]
76.如实施例40至75中任一项所述的方法，其中该癌症选自非小细胞肺癌(nsclc)；小细胞肺癌；头颈部鳞状细胞癌；肾细胞癌；胃腺癌；鼻咽肿瘤；尿路上皮癌；结直肠癌；胸膜间皮瘤；三阴性乳腺癌(tnbc)；食管肿瘤；多发性骨髓瘤；胃癌和胃食管交界处癌；黑色素瘤；霍奇金淋巴瘤；肝细胞癌；肺癌；头颈癌；非霍奇金淋巴瘤；转移性透明细胞肾癌；鳞状细胞肺癌；间皮瘤；胃癌；胃食管交界处癌；转移性黑色素瘤；转移性非皮肤黑色素瘤；尿路上皮癌；弥漫性大b细胞淋巴瘤；肾细胞癌；卵巢癌、输卵管癌；腹膜肿瘤；广泛期小细胞肺癌；膀胱癌；移行细胞癌；前列腺肿瘤；复发性或转移性pd-l1阳性或阴性头颈部鳞状细胞癌(scchn)；复发性鳞状细胞肺癌；晚期实体恶性肿瘤；scchn；下咽鳞状细胞癌；喉鳞状细胞癌；不可切除或转移性黑色素瘤；胆道肿瘤；食管鳞状细胞癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、转移癌、前列腺癌、实体器官癌；胃癌；结肠癌；和肝癌。
[0693]
实例
[0694]
以下非限制性实例和数据展示了与本披露的化合物和/或方法相关的各个方面和特征，包括各种化合物的制备，如通过本文所述的合成方法可获得的。与现有技术相比，在一些实施例中，本发明的化合物和/或方法提供了令人惊讶、出乎意料和与之相反的结果和数据。虽然通过使用若干化合物和可与其一起使用的部分/基团来展示本披露的实用性，但本领域技术人员将理解，与本披露的范围相称的各种其他化合物、部分和/或基团可获得相当的结果。
[0695]
实例1.吡啶并嘧啶酮化合物的合成
[0696]
本披露中涵盖的化合物可通过方案i中概述的和下文实例中描述的程序制备。
[0697][0698]
方案i
[0699]
n-[(1s)-2-苄氧基-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯的制备：
[0700][0701]
在0℃下向n-[(1s)-2-羟基-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(8，10g，57mmol，1当量)于thf(300ml)中的溶液中添加nah(2.51g，62.78mmol，60％纯度，1.1当量)并将混合物在0℃下搅拌30min。在0℃下将bnbr(11.71g，68.48mmol，8.13ml，1.2当量)和四丁基碘化铵(210.80mg，570.69umol，0.01当量)添加到混合物中，然后将混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物通过在0℃下添加meoh(50ml)淬灭，然后过滤，并将滤液减压浓缩，得到残余物。
将残余物通过柱色谱法(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)纯化，得到标题化合物(12g，45.22mmol，79％产率)1h nmr(400mhz，cdcl3)，δppm 1.20(d，j＝6.8hz，3h)，1.45(s，9h)，3.35-3.48(m，2h)，3.80-3.94(m，1h)，4.48(q，j＝12.0，17.6hz，2h)，4.67-4.80(m，1h)，7.27-7.38(m，5h)。
[0702]
(2s)-1-苄氧基丙-2-胺三氟乙酸的制备：
[0703][0704]
向n-[(1s)-2-苄氧基-1-甲基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(9，12g，45.22mmol，1当量)于dcm(100ml)中的溶液中滴加tfa(30.80g，270.12mmol，20ml，5.97当量)。将混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物减压浓缩，得到标题化合物(10，10g，35.81mmol，79.18％产率，tfa)，将其直接使用。
[0705]
(s)-8-(5-氟吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(1)的制备
[0706]
步骤1.(s)-3-氨基-2，6-二氯-n-(1-羟基丙-2-基)异烟酰胺(中间体a1)的制备：
[0707][0708]
将3-氨基-2，6-二氯异烟酸(2.0g，9.66mmol)和(s)-2-氨基丙-1-醇(反应物1，0.80g，10.63mmol)的混合物溶解在dmf(32.2ml)中并将反应混合物冷却至0℃。添加二异丙基乙胺(3.37ml，19.3mmol)和hatu(4.41g，11.59mmol)并将反应在0℃下搅拌1小时。将反应用水淬灭并在乙酸乙酯和水之间分配。将有机相分离，用饱和氯化铵水溶液洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。将残余物通过硅胶色谱法用乙酸乙酯/己烷纯化，得到标题化合物(1.82g，6.89mmol，71％产率)。1h nmr(ch3oh-d4，400mhz)δ1.21(3h，d，j＝6.8hz)，3.58-3.56(2h，m)，4.17-4.12(1h，m)，7.49(1h，s)；ms(m/z)：265.1[m+h]
+
。
[0709]
表2列出了经由类似于以上步骤1中描述的程序制备的中间体。
[0710]
[0711]
[0712]
[0713][0714]
3-氨基-2，6-二氯-n-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)异烟酰胺(a16)的制备。
[0715][0716]
将丙基膦酸酐(t3p，64.6g，101mmol，60.3ml，50％纯度，1.05当量)一次性添加到3-氨基-2，6-二氯异烟酸(试剂1，20g，96.6mmol，1当量)、(3s，4r)-4-氨基四氢呋喃-3-醇(10.5g，101mmol，1.05当量)和三乙胺(29.3g，290mmol，40.3ml，3当量)于etoac(150ml)中的溶液中。将所得溶液在25℃下搅拌1h。将反应倾倒入水(100ml)中。将有机相收集并将水
相用etoac(30ml
×
2)萃取。将合并的有机相用盐水(100ml)洗涤并真空浓缩，得到标题化合物3-氨基-2，6-二氯-n-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)异烟酰胺(a16，25g，85.6mmol，88.6％产率)，为灰白色固体。将粗产物不经纯化即用于下一步骤。1h-nmr(400mhz，cd3od)：δ
h ppm7.49(s，1h)，4.28-4.34(m，2h)，4.10-4.17(m，1h)，4.02(dd，j＝10.0hz，j＝4.4hz，1h)，3.73-3.78(m，1h)，3.65-3.70(m，1h)；ms(m/z)：290.0[m+h]
+
。
[0717]
步骤2.(s)-6，8-二氯-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体b1)的制备：
[0718][0719]
向烧瓶中的(s)-3-氨基-2，6-二氯-n-(1-羟基丙-2-基)异烟酰胺(a1，2.54g，9.66mmol)中添加原甲酸三乙酯(20ml)。在室温下缓慢滴加浓盐酸(0.8ml，9.7mmol)并将所得混合物搅拌2小时。将混合物浓缩并将固体通过真空过滤收集，用水洗涤并在高真空下干燥，得到标题化合物(b1，1.82g，6.64mmol，69％产率)。1h nmr(ch3oh-d4，400mhz)δ1.51(3h，d，j＝7.1hz)，3.80(1h，dd，j＝11.9，4.2hz)，3.92(1h，dd，j＝11.9，6.9hz)，4.93-4.88(1h，m)，8.05(1h，s)，8.45(1h，s)；ms(m/z)：274.0[m+h]+。
[0720]
3-[(1s)-2-苄氧基-1-甲基-乙基]-6，8-二氯-吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(中间体b11)的制备
[0721][0722]
在0℃下将甲酸(18.94g，411.41mmol，15.52ml，1.5当量)滴加到乙酰乙酸酯(28g，274.27mmol，25.69ml，1当量)中并在n2气氛下在60℃下搅拌2小时。得到溶液，为无色液体(41ml，6.65m)，并且不经进一步纯化即用于下一步骤。在25℃下向3-氨基-n-[(1s)-2-苄氧基-1-甲基-乙基]-2，6-二氯-吡啶-4-甲酰胺(a11，4.5g，12.70mmol，1当量)于thf(50ml)中的溶液中添加乙酸甲酰酯溶液(6.65m，41ml，21.47当量)并在60℃下搅拌30min。然后将混合物在100℃下搅拌9.5小时。lcms显示检测到期望的化合物。将反应混合物减压浓缩，得到残余物。将残余物用etoac(50ml)稀释并依次用饱和nahco3(200ml)、水(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过柱色谱法(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至1/1)纯化，得到标题化合物(b11，2.4g，6.59mmol，51.88％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δppm 1.56(d，j＝7.2hz，3h)，3.65-3.79(m，2h)，4.50(q，j＝12.4，18.8hz，2h)，5.08-5.20(m，1h)，7.20-7.31(m，5h)，8.02(s，1h)，8.41(s，1h)；ms：m+h
+
，364.0。
[0723]
表3列出了经由类似于以上针对合成中间体b1所述的程序制备的中间体。
[0724]
[0725]
[0726]
[0727][0728]
(s)-6，8-二氯-3-(1-羟基-3-甲基丁-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(b10)的制备。
[0729][0730]
将4-甲基苯磺酸(141.46mg，821.46mmol)添加到(s)-3-氨基-2，6-二氯-n-(1-羟基-3-甲基丁-2-基)异烟酰胺(1.2g，4.11mmol)于原甲酸三甲酯(10ml)中的混合物中并用氮气脱气和吹扫3次。将混合物在氮气氛下在120℃下搅拌8小时。tlc表明起始反应物保留并形成了两个新的斑点。蒸发溶剂并将残余物吸收在乙酸乙酯(20ml)中，用盐水(10ml)洗
涤三次，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发。将残余物通过制备型hplc纯化，得到标题化合物(s)-6，8-二氯-3-(1-羟基-3-甲基丁-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(600mg，1.99mmol，48％产率)。1h-nmr(400mhz，dmso-d6)：δ
h ppm 8.60(s，1h)，8.05(s，1h)，5.02(d，1＝3.2hz，1h)，4.19-4.56(m，1h)，3.85-3.97(m，1h)，3.74(q，j＝11.8hz，j＝3.4hz，1h)，2.23-2.38(m，1h)，1.04(d，j＝6.6hz，3h)，0.75(d，j＝6.6hz，3h)；ms(m/z)：302.0[m+h]
+
；90％纯度。
[0731]
步骤3.(s)-6-氯-8-(5-氟吡啶-3-基)-3-（1
‑‑
2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体c1)的制备：
[0732][0733]
将(s)-6，8-二氯-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(b1，0.10g，0.37mmol)、(5-氟吡啶-3-基)硼酸(反应物2，0.057g，0.401mmol)、碳酸钠(0.16g，1.46mmol)和四(三苯基膦)钯(0.042g，0.036mmol)的混合物在密封管中用氩气吹扫。添加甲苯(3.0ml)和乙醇(1.5ml)并将所得混合物在75℃下搅拌15小时。将混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤并将硅藻土垫用乙酸乙酯洗涤并将滤液浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱法用甲醇/二氯甲烷纯化，得到标题化合物(c1，0.078g，0.19mmol，53％产率)。1h nmr(dmso-d6，300mhz)：δ1.41(3h，d，j＝7.0hz)，3.69-3.62(1h，m)，3.82-3.74(1h，m)，4.89-4.83(1h，m)，5.06(1h，t，j＝5.6hz)，8.12(1h，s)，8.38(1h，ddd，j＝10.2，2.8，1.7hz)，8.60(1h，s)，8.73(1h，d，j＝2.8hz)，9.14(1h，s)。；ms(m/z)：335.1[m+h]+。
[0734]
表4列出了经由类似于以上步骤3中描述的程序制备的中间体。
[0735]
[0736]
[0737]
[0738]
[0739]
[0740]
[0741]
[0742]
[0743]
[0744]
[0745]
[0746][0747]
步骤4.(s)-8-(5-氟吡啶3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(1)的制备：
[0748][0749]
将(s)-6-氯-8-(5-氟吡啶-3-基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(c1，0.023g，0.069mmol)、(4-(三氟甲氧基)苯基)硼酸(反应物3，0.016g，0.076mmol)、碳酸钠(0.029g，0.275mmol)和四(三苯基膦)钯(0.008g，0.007mmol)的混合物
在密封管中用氩气吹扫。添加甲苯(1.0ml)和乙醇(0.5ml)并将所得混合物在75℃下搅拌15小时。将混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤并将硅藻土垫用乙酸乙酯洗涤并蒸发滤液。将残余物通过硅胶色谱法用甲醇/二氯甲烷纯化，得到标题化合物(0.022g，0.047mmol，68％产率)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ1.44(3h，d，j＝7.0hz)，3.72-3.66(1h，m)，3.84-3.78(1h，m)，4.91(1h，s)，5.08(1h，t，j＝5.6hz)，7.53(2h，d，j＝8.4hz)，8.43(2h，d，j＝8.6hz)，8.53(1h，ddd，j＝10.3，2.9，1.7hz)，8.60(2h，d，j＝3.7hz)，8.73(1h，d，j＝2.8hz)，9.29(1h，s)；ms(m/z)：461.1[m+h]+；＞99％纯度。
[0750]
表5列出了经由类似于针对1所述的程序将反应物1、2和3替换为指定的基团制备的化合物。
[0751]
[0752]
[0753]
[0754]
[0755]
[0756]
[0757]
[0758]
[0759]
[0760]
[0761]
[0762]
[0763]
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[0765]
[0766]
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[0770]
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[0793]
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[0797]
[0798]
[0799]
[0800]
[0801]
[0802]
[0803]
[0804]
[0805]
[0806]
[0807]
[0808]
[0809]
[0810]
[0811]
[0812]
[0813]
[0814]
[0815]
[0816]
[0817]
[0818]
[0819]
[0820]
[0821][0822]
3-((s)-1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基哌啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮的制备
[0823][0824]
在n2下向(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1，2，5，6-四氢吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(60mg，0.135mmol)于etoh(1ml)中的溶液中添加pto2(15mg，0.088mmol)。将烧瓶脱气并在气球中经受h2气体。过夜后，将反应混
合物通过过滤，用甲醇充分洗涤，浓缩并通过反相色谱法纯化，用h2o和乙腈中的0.1％甲酸洗脱，得到期望的产物，为非对映体混合物(4mg，7％)。1h nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ
h 1.29(1h，s)，1.54(4h，d，j＝7.1hz)，1.94(2h，s)，2.13(1h，s)，2.50(3h，s)，3.13(2h，s)，3.85(1h，s)，3.95(2h，s)，4.28(1h，s)，4.62(2h，s)，4.99(2h，m)，7.96(1h，d，j＝8.2hz)，8.47(1h，s)，8.60(1h，s)，8.80(1h，d，j＝8.2hz)，9.51(1h，s)。ms(m/z)：448.2[m+h]
+
；＞90％纯度。
[0825]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-吗啉基-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(43)的制备
[0826][0827]
在密封管中向(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(11，0.060g，0.19mmol)、碳酸钾(0.011g，0.76mmol)中添加二甲基甲酰胺(2.0ml)，随后添加吗啉(0.038g，0.38mmol)。将所得混合物在120℃下搅拌。24小时后，添加另一份吗啉(38.1mg，0.38mmol)并在120℃下再继续搅拌24小时。使反应混合物冷却至室温，然后在水和乙酸乙酯之间分配。将有机层分离，经硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法用甲醇/二氯甲烷纯化，得到标题化合物(0.026g，0.071mmol，37％产率)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ1.38(3h，d，j＝7.04hz)，3.58-3.65(5h，m)，3.76(5h，t，j＝4.80hz)，4.82-4.87(1h，m)，7.30(1h，s)；5.03(1h，s)，7.52(1h，dd，j＝7.96；4.81hz)，8.23(1h，s)，8.46(1h，dt，j＝7.97；1.97hz)，8.63(1h，dd，j＝4.79；1.75hz)，9.26(1h，d，j＝2.11hz)；ms(m/z)：368.2[m+h]+；93.6％纯度。
[0828]
下表6中列出的化合物是根据类似于上述43的方法制备的：
[0829][0830]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(4-(三氟甲氧基)-苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(44)的制备：
[0831]
步骤1.(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(c23)的制备：
[0832]
[0833]
向可重新密封的schlenk管(螺旋盖试管)中添加cui(4mg，0.02mmol)、咪唑(25mg，0.37mmol)、碳酸铯(250mg，0.77mmol)和搅拌棒。将管脱气，然后在氩气流下添加(s)-6，8-二氯-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(100mg，0.37mmol)、1，10-菲啰啉(7mg，0.04mmol)和无水二噁烷(2ml)。将反应管脱气并用氩气回填，然后在90℃下搅拌24h。允许该反应混合物冷却至室温。将溶液用乙酸乙酯(2-3ml)稀释，通过硅藻土塞过滤，并用另外的乙酸乙酯(10-20ml)洗脱。将滤液用水、盐水洗涤，经na2so4干燥并浓缩。将所得残余物通过硅胶柱色谱法(ch2cl2/meoh)纯化，得到标题化合物(c23，20mg，0.06mmol，18％产率)。1h nmr(chcl
3-d3与10％ch3oh-d4，400mhz)：δh 1.46(3h，dd，j＝16.4，7.1hz)，3.81(2h，s)，4.94(1h，s)，5.24(1h，s)，7.94(1h，s)，8.31(1h，s)；ms(m/z)：306.1[m+h]+。可能由于与铜络合而未观察到咪唑质子。
[0834]
步骤2.(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(44)的制备：
[0835][0836]
将(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(c23，30mg，0.1mmol)和(4-(三氟甲氧基)苯基)硼酸(30mg，0.15mmol)溶解在1ml甲苯-etoh(2∶1)中，并添加碳酸钠(42mg，0.4mmol)。将悬浮液脱气并用氩气重新填充(3个循环)。添加四(三苯基膦)钯(12mg，0.01mmol)，并将悬浮液脱气并用氩气重新填充(3个循环)。将反应混合物在氩气下在85℃下搅拌过夜。使反应混合物冷却至室温并用乙酸乙酯稀释。将溶液用水、盐水洗涤，经na2so4干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(ch2cl2/meoh)随后通过c18柱纯化，得到(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(4-(三氟甲氧基)苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮的tfa盐，将其用饱和na2co3洗涤，得到标题化合物44的游离碱(11mg，0.026mmol，26％产率)。1h nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ1.56(3h，d，j＝7.1hz)，3.86(1h，dd，j＝11.9，4.3hz)，3.97(1h，dd，j＝11.9，6.9hz)，5.02-4.97(1h，m)，7.16(1h，s)，7.42(2h，d，j＝8.4hz)，8.28(2h，d，j＝8.7hz)，8.36(1h，s)，8.50(2h，s)，9.14(1h，s)；ms(m/z)：432.2[m+h]
+
；纯度98％。
[0837]
(s)-3-(1-甲氧基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(45)的制备
[0838][0839]
将(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(17，20mg，0.05mmol)溶解在无水thf中并将所得溶液用冰水浴冷却。然后添加t-buok(6mg，0.05mmol)，随后添加ch3i(8mg，0.05mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。将反应通过添加甲醇淬灭并用etoac稀释。将该溶液用水、盐水洗涤，经na2so4干燥，浓缩并通过hplc纯化，得到(s)-3-(1-甲氧基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮的tfa盐，将其用饱和na2co3水溶液洗涤，得到标题化合物的游离碱45。(2mg，0.005mmol，10％产率)。1h nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ1.55(3h，d，j＝7.1hz)，2.41(3h，s)，3.36(3h，s)，3.68(1h，dd，j＝10.5，4.2hz)，3.85(1h，dd，j＝10.4，7.2hz)，5.14(1h，d，j＝7.3hz)，7.33(2h，d，j＝7.9hz)，7.59(1h，dd，j＝8.0，4.9hz)，8.09(2h，d，j＝8.0hz)，8.39(1h，s)，8.50(1h，s)，8.61(1h，s)，8.70(1h，d，j＝8.0hz)，9.39(1h，s)；ms(m/z)：387.1[m+h]+；纯度97％。
[0840]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(46)的制备
[0841][0842]
将(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(11，50mg，0.15mmol)溶解在甲苯中。将溶液脱气，然后添加pd(dppf)cl2·
ch2cl2(13mg，0.016mmol)、licl(26mg，4当量)、cui(6mg，0.032mmol)和2-(三丁基锡基)-5-(三氟甲基)吡啶(83mg，0.19mmol)。将溶液再次脱气并在80℃下搅拌过夜。反应混合物的lcms监测显示不完全转化为预期产物，因此添加30mg cui并使反应在80℃下再进行6小时。使反应混合物冷却至室温并将其用etoac稀释。将该溶液用水、盐水洗涤并经na2so4干燥。减压去除溶剂并将残余物通过硅胶柱色谱法(ch2cl2/meoh)随后通过c18柱色谱法纯化，得到(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮的tfa盐，将其用饱和na2co3水溶液洗涤，得到标题化合物的游离碱(8mg，0.019mmol，12％产率)1h nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ1.56(3h，d，j＝7.1hz)，3.85(1h，dd，j＝11.9，4.3hz)，3.96(1h，dd，j＝11.9，6.9hz)，5.01-4.96(1h，m)，7.60(1h，dd，j＝8.0，4.9hz)，8.24(1h，d，j＝8.5hz)，8.46(1h，s)，8.63(1h，d，j＝4.9hz)，8.74-8.70(2h，m)，8.99(1h，s)，9.13(1h，8)，9.41(1h，s)；ms(m/z)：428.1[m+h]+；纯度99％。
[0843]
(s)-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(47)的制备：
[0844][0845]
将(s)-6-氯-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(c1，50mg，0.15mmol)溶解在甲苯中并脱气，然后添加pd(dppf)cl2·
ch2cl2(24mg，0.18mg)、licl(26mg，0.6mmol)、cui(29mg，0.15mmol)和2-(三丁基锡基)-5-(三氟甲基)吡啶(79mg，0.18mmol)。将溶液再次脱气并在80℃下搅拌过夜。将反应混合物用etoac稀释，用水、盐水洗涤并经na2so4干燥。真空去除溶剂并将残余物通过硅胶柱色谱法(ch2cl2/meoh)随后通过c18柱纯化，得到(s)-8-(3-氟苯基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮的tfa盐，将其用饱和na2co3洗涤，得到标题化合物的游离碱(19mg，0.04mmol，25％产率)。1h nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δh 1.56(3h，d，j＝7.1hz)，3.85(1h，dd，j＝11.9，4.3hz)，3.96(1h，dd，j＝11.9，6.9hz)，5.01-4.96(1h，m)，7.60(1h，dd，j＝8.0，4.9hz)，8.24(1h，d，j＝8.5hz)，8.46(1h，s)，8.63(1h，d，j＝4.9hz)，8.74-8.70(2h，m)，8.99(1h，s)，9.13(1h，s)，9.41(1h，s)；ms(m/z)：445.1[m+h]+；纯度99％。
[0846]
以类似于47的方式制备的化合物列于下表7中：
[0847]
[0848]
[0849][0850]
8-(3-氟苯基)-3-[(1s)-2-羟基-1-甲基-乙基]-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(48)的制备
[0851][0852]
将3-[(1s)-2-苄氧基-1-甲基-乙基]-8-(3-氟苯基)-6-(对甲苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(40，160mg，333.65umol，1当量)和pd/c(80mg，333.65umol，10％纯度，1.00当量)于meoh(25ml)和etoac(25ml)中的混合物脱气并用h2(15psi)吹扫3次，然后将混合物在
h2气氛下在80℃下搅拌15小时。lcms显示检测到期望的化合物。将反应混合物过滤并将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物道过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)纯化，得到标题化合物(47mg，120.69umol，36.17％产率)1h nmr(400mhz，dmso-d6)δppm 1.43(d，j＝6.8hz，3h)，2.39(s，3h)，3.62-3.71(m，1h)，3.76-3.84(m，1h)，4.84-4.96(m，1h)，5.07(t，j＝5.6hz，1h)，7.33-7.37(m，3h)，7.59(q，j＝7.6，14.0hz，1h)，8.03-8.09(m，2h)，8.16(d，j＝8.4hz，2h)，8.46(s，1h)，8.53(s，1h)；ms：m+h+，390.1；98％纯度。
[0853]
8-(3-氟苯基)-3-[(1s)-2-羟基-1-甲基-乙基]-6-[4-(三氟甲氧基)苯基]吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(49)的制备
[0854]
步骤1. 3-[(1s)-2-苄氧基-1-甲基-乙基]-8-(3-氟苯基)-6-[4-(三氟甲氧基)苯基]吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(前体1)的制备
[0855][0856]
向3-[(1s)-2-苄氧基-1-甲基-乙基]-6-氯-8-(3-氟苯基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(c21，460mg，1.09mmol，1当量)和[4-(三氟甲氧基)苯基]硼酸(268.18mg，1.30mmol，1.2当量)于甲苯(8ml)和etoh(4ml)中的溶液中添加na2co3(460.10mg，4.34mmol，4当量)和pd(pph3)4(125.41mg，108.52umol，0.1当量)。将混合物吸收到微波管中。将密封管在微波下在100℃下加热1h。lcms显示检测到期望的化合物。将反应混合物过滤并将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过柱色谱法(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0至0/1)纯化，得到标题化合物(400mg，727.92umol，67.07％产率)。ms：m+h+，550.1。
[0857]
步骤2. 8-(3-氟苯基)-3-[(1s)-2-羟基-1-甲基-乙基]-6-[4-(三氟甲氧基)苯基]吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(49)的制备
[0858][0859]
向3-[(1s)-2-苄氧基-1-甲基-乙基]-8-(3-氟苯基)-6-[4-(三氟甲氧基)苯基]吡啶并[3，4-d]嘧啶-4-酮(前体1，290mg，527.74umol，1当量)于etoac(20ml)和meoh(20ml)中的溶液中添加pd(oh)2/c(130mg，527.74umol，10％纯度，1.00当量)。将混合物在h2(15psi)下在25℃下搅拌6小时。lcms显示检测到期望的质量。将反应混合物过滤并将滤液减压浓缩，得到残余物。将残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)纯化，得到标题化合物49(22mg，47.41umol，8.98％产率)，1h nmr(400mhz，cdcl3)δppm 1.61(d，j＝7.1hz，3h)，1.94-2.05(m，1h)，3.95-4.04(m，2h)，5.04-5.15(m，1h)，7.17-7.25(m，1h)，7.36(d，j＝8.4hz，2h)，7.46-7.54(m，1h)，7.94-8.07(m，2h)，8.26(d，j＝8.4hz，2h)，8.32(s，1h)
.8.53(s，1h)。ms：m+h+，460.1；99％纯度。
[0860]
本披露中涵盖的化合物可通过方案ii中概述的和下文实例中描述的程序制备：
[0861][0862]
方案ii
[0863]
3-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(106)的制备
[0864]
步骤1. 3-氨基-6-氯-[2，3
′‑
联吡啶]-4-甲酸甲酯(前体2)的制备：
[0865][0866]
前体2根据针对合成1的步骤3报告的程序制备。1h nmr(chcl
3-d，400mhz)：δ
h 3.95(3h，s)，5.91(2h，s)，7.44(1h，dd，j＝7.9，4.9hz)，7.74(1h，s)，7.97(1h，d，j＝7.9hz)，8.69(1h，dd，j＝4.9，1.7hz)，8.91(1h，s)；ms(m/z)：264.0[m+h]
+
。
[0867]
表8列出了经由类似于以上步骤1中描述的程序制备的中间体。
[0868][0869]
步骤2. 3
′‑
氨基-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酸甲酯(前体3)的制备：
[0870][0871]
前体3根据针对合成1的步骤3报告的程序制备。1h nmr(chcl
3-d，400mhz)：δ
h 4.01
(3h，s)，6.20(2h，s)，7.49(1h，t，j＝6.4hz)，7.73(1h，d，j＝8.2hz)，8.06(1h，d，j＝7.9hz)，8.25(1h，s)，8.46(1h，d，j＝8.3hz)，8.74(1h，d，j＝4.9hz)，9.00(1h，s)，9.27(1h，s)；ms(m/z)：375.0[m+h]
+
。
[0872]
表9列出了经由类似于上述的程序制备的中间体。
[0873]
[0874]
[0875][0876]
步骤3. 3
′‑
氨基-n-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酰胺(前体4)的制备
[0877][0878]
将3
′‑
氨基-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酸甲酯(前体3，3.5g，8.32mmol)于thf∶水(42ml∶14ml)中的溶液冷却至0℃；添加lioh(1.05g，24.96mmol)。将反应在0℃下搅拌1小时并在室温下搅拌过夜。将反应混合物用amberlite ir120酸化至ph 4，
随后添加乙酸乙酯和meoh。将溶液过滤以去除树脂并蒸发溶剂，得到3
′‑
氢基-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酸(3.0g，7.91mmol，95％产率，＞95％纯度)。ms(m/z)：361.1[m+h]
+
。酸中间体直接进行下一步骤。
[0879]
将3
′‑
氨基-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酸(0.6g，1.67mmol)和3-氨基四氢噻吩1，1-二氧化物盐酸盐(0.314g，1.83mmol)的混合物溶解在dmf(8.0ml)中并将反应混合物冷却至0℃。添甲二异丙基乙胺(0.87ml，4.5mmol)和hatu(0.633g，1.67mmol)。将反应在0℃下搅拌1小时并在室温下搅拌过夜。将反应用水淬灭并在乙酸乙酯和水之间分配。将有机相分离，用饱和氯化铵水溶液洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机相经无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到标题化合物3
′‑
氨基-n-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酰胺(前体4，0.58g，66％产率，＞90％纯度)。ms(m/z)：478.1[m+h]
+
。将粗产物不经纯化进行下一步骤。
[0880]
表10列出了经由类似于以上步骤中描述的程序制备的中间体。
[0881]
[0882]
[0883]
[0884]
[0885]
[0886]
[0887]
[0888]
[0889]
[0890]
[0891]
[0892]
[0893][0894]3′‑
氨基-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酰胺(f30)的制备
[0895][0896]
向小瓶中的3
′‑
氨基-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′3″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酸甲酯(300mg，0.801mmol)中添加氨于meoh中的7m溶液，密封并在65℃下加热过夜。蒸发溶剂并得到化合物f30，为白色固体，并且不经进一步纯化即使用(270mg，89％)。ms(m/z)：488.0[m+
h]
+
；95％纯度
[0897]
步骤4-3-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(106)的制备。
[0898][0899]
在密封管中将原甲酸三乙酯(10ml)添加到3
′‑
氨基-n-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酰胺(前体4，0.3g，0.618mmol)中。在室温下添加乙酸(1ml，10％v/v)，并将所得混合物在95℃下加热过夜。将混合物浓缩，随后添加饱和nahco3，并将固体通过真空过滤收集，用水洗涤并干燥。将残余物通过正相色谱法纯化，得到标题化合物3-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(106，0.13g，43％产率)。1h nmr(dmso-d6，300mhz)：δ
h 2.70-2.67(2h，m)，3.37-3.30(1h，m)，3.70-3.57(2h，m)，5.42(1h，t，j＝8.3hz)，7.62(1h，dd，j＝7.9，4.8hz)，8.07(1h，d，j＝8.3hz)，8.58(1h，d，j＝8.1hz)，8.64(1h，s)，8.72(1h，d，j＝4.7hz)，8.80(1h，s)，8.96(1h，d，j＝8.4hz)，9.37(1h，s)，9.66(1h，s)；ms(m/z)：488.0[m+h]
+
；＞98％纯度。
[0900]
(r)-3-1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(107)的制备。
[0901][0902]
在烧瓶中将二噁烷(7ml)和原甲酸三乙酯(1.2ml，7.02mmol)添加到中间体(r)-3
′‑
氨基-n-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-6
″‑
(三氟甲基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酰胺(f1，0.67g，1.4mmol)中。在室温下添加对甲苯磺酸(0.267mg，1.4mmol)并将所得混合物搅拌过夜。将混合物浓缩，随后添加饱和nahco3，并将所形成的固体通过真空过滤收集，用水冼涤并干燥。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到标题化合物(r)-3-(1，1-二氧化四氢噻吩-3-基)-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(98，1.82g，69％产率)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h 3.25-3.18(2h，m)，3.90-3.87(1h，m)，4.25-4.12(3h，m)，5.96(1h，t，h＝8.5hz)，8.16(1h，d，j＝6.7hz)，8.62(1h，d，j＝8.3hz)，9.11(1h，d，j＝8.0hz)，9.18(1h，s)，9.27(1h，s)，9.35(1h，s)，9.50(1h，s)，9.90(1h，s)，10.20(1h，s)：ms(m/z)：488.1[m+h]
+
；99％纯度
[0903]
表11列出了经由类似于针对98所述的程序将反应物4、5和6替换为指定的基团制备的化合物。
[0904]
[0905]
[0906]
[0907]
[0908][0909]
(s)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮作为白色固体(120)的制备
[0910][0911]
将原甲酸三乙酯(1.69ml，10.2mmol)和对甲苯磺酸(117mg，0.679mmol)添加到(s)-3
′‑
氨基-6
″‑
环丙基-n-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-[3，2
′
：6
′
，3
″‑
三联吡啶]-4
′‑
甲酰胺(301mg，0.679mmol)于二噁烷(3.4ml)中的溶液中。1h后添加dmf(0.5ml)并将反应混合物加热至40℃并搅拌48h。将反应混合物用碳酸氢钠(ph＞11)淬灭。添加水并将混合物用乙酸乙
酯萃取。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化，得到标题化合物(s)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮，为白色固体(120，115mg，37％)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ1.02(4h，d，j＝8.2hz)，2.23-2.17(1h，m)，4.08(1h，dd，j＝14.1，9.9hz)，4.45(2h，d，j＝12.5hz)，6.78(1h，d，j＝6.4hz)，7.47(1h，d，j＝8.2hz)，7.59(1h，dd，j＝7.9，4.8hz)，8.49-8.47(2h，m)，8.54(2h，d，j＝11.8hz)，8.70(1h，d，j＝4.8hz)，9.26(1h，s)，9.32(1h，s)；ms(m/z)：454.2[m+h]
+
；＞99％纯度。
[0912]
表12列出了经由类似于针对120所述的程序将反应物4、5和6替换为指定的基团制备的化合物。
[0913][0914]
(r)-3-(2-羟丙基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(108)的制备
[0915][0916]
108根据针对合成1(合成中间体b1)的步骤2报告的程序制备。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h 1.17(3h，d，j＝6.2hz)，3.76(1h，dd，j＝13.3，8.6hz)，3.97(3h，s)，4.16(1h，dd，j＝13.3，3.2hz)，5.08(1h，d，j＝5.0hz)，8.03(1h，d，j＝8.3hz)，8.46(1h，s)，8.49(1h，s)，8.53(1h，s)，8.86(1h，s)，8.93(1h，d，j＝8.3hz)，9.65(1h，s)；ms(m/z)：431.1[m+h]
+
；＞99％纯度。
[0917]
表13列出了经由类似于针对108所述的程序将反应物4、5和6替换为指定的基团制备的化合物。
[0918]
[0919]
[0920]
[0921]
[0922]
[0923]
[0924]
[0925]
[0926]
8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)-4-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(前体5)和6-(4-氯苯基)-3-((3r，4r)-4-羟基吡咯烷-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(134)的混合物
[0932]
步骤2. 6-(4-氯苯基)-3-((3r，4r)-4-羟基吡咯烷-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶4(3h)-酮(134)。
[0933][0934]
将前体5和134的混合物(218mg，0.43mmol)溶解在3.0ml 4m hcl的二噁烷溶液中并在室温下搅拌1小时。添加乙醚(2.0ml)，并将固体离心、倾析、用乙醚研制并干燥。将固体通过反相柱色谱法纯化，得到标题化合物6-(4-氯苯基)-3-((3r，4r)-4-羟基吡咯烷-3-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(134，120mg，0.29，67％产率)，为白色固体。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h 2.70(1h，dd，j＝11.5，4.7hz)，3.00(1h，dd，j＝11.8，5.3hz)，3.23(1h，dd，j＝11.6，6.1hz)，3.27(1h，s)，3.34-3.31(1h，m)，4.43-4.41(1h，m)，4.83-4.80(1h，m)，5.31(1h，d，j＝4.6hz)，7.60-7.55(3h，m)，8.31(2h，d，j＝8.4hz)，8.54-8.51(3h，m)，8.68(1h，dd，j＝4.8，1.7hz)，9.32(1h，d，j＝2.1hz)。ms(m/z)：420.1[m+h]
+
；99％纯度。
[0935]
(r)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(135)的制备：
[0936][0937]
将原甲酸三乙酯(1.74ml，10.5mmol)和12.1n hcl(115μl，1.39mmol)添加到(r)-5-氨基-6
′‑
环丙基-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-n-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)-[2，3
′‑
联吡啶]-4-甲酰胺(f19，311mg，0.697mmol)于二噁烷(3.5ml)中的溶液中。1h后添加dmf(0.5ml)，并将反应混合物在室温下搅拌24h。将反应混合物用碳酸氢钠(ph＞11)淬灭。添加水并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化，得到标题化合物(r)-6-(6-环丙基吡啶-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(135，152mg，48％)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ1.03-1.00(4h，m)，2.23-2.18(1h，m)，3.98(3h，s)，4.10-4.03(1h，m)，4.49-4.40(2h，m)，6.79(1h，t，j＝6.1hz)，7.46(1h，dd，j＝8.1，4.9hz)，8.31-8.30(1h，m)，8.50-8.47(3h，m)，8.84-8.82(1h，m)，9.29-9.28(1h，m)；ms(m/z)：457.1[m+h]
+
；＞99％纯度。
[0938]
表14列出了经由类似于针对139所述的程序将反应物4、5和6替换为指定的基团制备的化合物。
[0939][0940]
本披露中涵盖的化合物可通过方案iii中概述的和下文实例中描述的程序制备。
[0941]
[0942]
方案iii
[0943]
3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(137)的制备。
[0944]
步骤1. 3-氨基-6-氯-n-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-2-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)异烟酰胺(中间体g1)的制备。
[0945][0946]
中间体g1根据用于合成114的步骤3制备。ms(m/z)：338.0[m+h]
+
。
[0947]
表15示出了根据以上示出的步骤制备的中间体。
[0948]
[0949]
[0950]
[0951]
[0952]
[0953][0954]
步骤2. 6-氯-3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体h1)的制备
[0955][0956]
中间体h1根据用于合成98的最后一步合成。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h 3.62-3.55(1h，m)，3.92(3h，s)，4.11-4.06(2h，m)，4.16(1h，dd，j＝10.0，5.6hz)，4.52(1h，s)，4.92(1h，s)，5.71(1h，d，j＝4.1hz)，7.79-7.76(1h，m)，8.32(1h，s)，8.33(1h，s)，8.73(1h，
s)；ms(m/z)：348.0[m+h]
+
；＞90％纯度。
[0957]
表16中的中间体根据上述步骤合成。
[0958]
[0959]
[0960]
[0961]
[0962]
[0963][0964]
步骤3.方法a：3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(137)的制备：
[0965][0966]
在空气下将6-氯-3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(h1，200mg，0.575mmol)、氯(2-二环己基膦基-2
′
，4
′
，6
′‑
三异丙基-1，1
′‑
联苯)[3-(2-氨基乙基)苯基)]钯(ii)[xphos pd g1](22.24mg，0.029mmol)和5-三氟甲基-2-吡啶硼酸mida酯(260mg，0.863mmol)添加到配备有搅拌棒的火焰干燥的10ml压力小瓶中。将小瓶用氩气回填，然后添加1-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(4ml)，随后添加二乙醇胺(0.055ml，0.575mmol)、k3po4(610mg，2.87mmol)和cu(oac)2(52.2mg，0.288mmol)并将小瓶用盖子密封。将反应混合物加热至100℃并搅拌18小时。然后将小瓶冷却。向反应混合物中添加8ml 2n hcl并将所得溶液搅拌10min，然后添加1n naoh(12ml)并将所得溶液搅拌20min。将所形成的沉淀过滤，收集并干燥。将沉淀物通过硅胶柱色谱法纯化，得到标题化合物3-((3s，4r)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(137，151mg，57％产率)。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h 3.64(1h，d，j＝9.3hz)，3.98(4h，s)，4.15(3h，s)，4.20(1h，d，j＝8.1hz)，4.57(2h，s)，5.01(2h，s)，5.75(2h，s)，8.39(3h，d，j＝11.3hz)，8.55(1h，s)，8.87-8.81(4h，m)，9.14(1h，s)；ms(m/z)：459.1[m+h]
+
：＞99％纯度。
[0967]
表18列出了经由类似于针对137所述的程序将反应物6和7替换为指定的基团制备的化合物。
[0968]
[0969]
[0970]
[0971]
[0972]
[0973][0974][0975]
方案iv
[0976]
表19列出了根据用于合成137的最后一步的程序合成的化合物
d]嘧啶-4(3h)-酮18(152)的制备：
[0982][0983]
152根据用于合成1的步骤4合成。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ3.63(1h，dd，j＝9.6，3.3hz)，4.07(1h，dd，j＝10.0，4.0hz)，4.22-4.13(2h，m)，4.58(1h，s)，5.00(1h，s)，5.70(1h，d，j＝4.4hz)，7.60(3h，m)，8.32(2h，d，j＝8.4hz)，8.37(1h，s)，8.54(1h，s)，8.56(1h，s)，8.70(1h，s)，9.34(1h，s)；ms(m/z)：421，1[m+h]
+
；＞98％纯度。
[0984]
表20列出了经由类似于针对152所述的程序将反应物6、7和8替换为指定的基团制备的化合物。
[0985]
[0986]
(s)-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酸(155)的制备
[0987][0988]
将(s)-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酸甲酯(127，70mg，0.15mmol)溶解在0.5thf中并滴加0.5ml 1m lioh。将反应混合物在室温下保持搅拌。完成后，将溶液用amberlite-1r120[h]酸化，过滤，浓缩并将残余物通过反相色谱法纯化，得到标题化合物(s)-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酸(155，32mg，0.073mmol，47％产率)。1h-nmr(ch3oh-d4，400mhz)；δ
h 1.76(3h，d，j＝7.5hz)，5.42(1h，d，j＝7.5hz)，7.62(1h，dd，j＝8.0，5.0hz)，7.98(1h，d，j＝8.3hz)，8.46(1h，s)，8.64(1h，d，j＝4.8hz)，8.77-8.75(2h，m)，8.86(1h，d，j＝8.3hz)，9，43(1h，s)，9.56(1h，s)。ms(m/z)：442.1[m+h]。纯度：99％。
[0989]
(s)-n-甲基-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酰胺(156)的制备
[0990][0991]
将(s)-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酸(155，150mg，0.34mmol)和甲胺盐酸盐(35mg，0.51mmol)溶解在1.1ml无水nmp中。添加n，n-二异丙基乙胺(0.18ml，1.02mmol)。将溶液在冰水浴中冷却并添加hatu(155mg，0.408mmol)。使反应混合物升温至室温并在室温下保持搅拌。完成后，将反应用水淬灭并用etoac稀释。将有机相用饱和nahco3、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过正相色谱法纯化，得到标题化合物(s)-n-甲基-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙酰胺(156，94mg，0.21mmol，61％产率)。1h-nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ
h 1.78(3h，d，j＝7.3hz)，2.79(3h，s)，5.48(1h，d，j＝7.3hz)，7.62(1h，dd，j＝7.9，5.0hz)，7.97(1h，d，j＝8.3hz)，8.52(1h，s)，8.65(1h，d，j＝4.8hz)，8.74-8.73(2h，m)，8.85(1h，d，j＝8.4hz)，9.43(1h，s)，9.55(1h，s)。ms(m/z)：455.1[m+h]。纯度：99％。
[0992]
(s)-n，n-二甲基-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙烯酰胺(157)的制备
[0993][0994]
157根据针对156报告的程序合成。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h 1.66(3h，d，j＝7.3hz)，2.87(3h，s)，3.19(3h，s)，5.88(1h，d，j＝7.5hz)，7.59(1h，dd，j＝7.9，4.7hz)，8.06(1h，d，j＝8.3hz)，8.59-8.57(1h，m)，8.64(1h，s)，8.70-8.69(1h，m)，8.74(1h，s)，8.92(1h，d，j＝8.4hz)，9.37(1h，s)，9.62(1h，s)。ms(m/z)：469.1[m+h]。纯度：99％。
[0995]
(s)-n-((3r，4s)-4-羟基四氢呋喃-3-基)-2-(4-氧代-8-(吡啶-3-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-3(4h)-基)丙烯酰胺(158)的制备
[0996][0997]
158根据针对138报告的程序合成。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)：δ1.68(3h，d，j＝7.3hz)，3.53(2h，dd，j＝17.9，9.2hz)，3.83(1h，dd，j＝9.3，4.4hz)，3.91(1h，t，j＝7.3hz)，3.99(1h，t，j＝5.6hz)，4.06(1h，s)，5.29(1h，d，j＝3.9hz)，5.46-5.40(1h，m)，7.61(1h，dd，j＝7.9，4.9hz)，8.07(1h，d，j＝8.3hz)，8.58(2h，t，j＝7.8hz)，8.64(1h，s)，8.72(1h，d，j＝4.8hz)，8.76(1h，s)，8.95(1h，d，j＝8.4hz)，9.38(1h，s)，9.65(1h，s)。ms(m/z)：527.1[m+h]。纯度：＞99％
[0998]
3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(159)的制备
[0999]
步骤1. 6-氯-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(前体6)的制备
[1000][1001]
将6-氯-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(c23，140mg，0.44mmol)悬浮在无水thf(4.4ml)中并将混合物通过冰水浴冷却。添加nah(在油中的60％分散体，26mg，1.10mmol)并将混合物搅拌10min，然后添加semcl(0.19ml，1.10mmol)。完成后，将反应用饱和nh4cl水溶液(25ml)和水(10ml)淬灭。将水层分离并用dcm萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过
正相色谱法纯化，得到标题化合物6-氯-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(6，170mg，0.38mmol，86％产率)。1h-nmr(chcl
3-d，400mhz)：δ
h-0.02(9h，s)，0.94(2h，t，j＝8.2hz)，1.21(1h，d，j＝6.1hz)，1.33(6h，s)，3.63(2h，t，j＝8.3hz)，4.10(2h，s)，5.50(2h，s)，7.92(1h，s)，8.26(1h，s)，8.54(1h，s)，8.79(1h，s)。ms(m/z)：450.2[m+h]
+
。
[1002]
步骤2. 3-(2-羟基-2-甲基丙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-8-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(前体7)的制备
[1003][1004]
前体7根据以上报告的程序制备。1h-nmr(chcl
3-d，400mhz)：δ
h-0.001(9h，s)，0.96(2h，t，j＝8.3hz)，1.35-1.32(6h，m)，2.12(1h，s)，3.67(2h，t，j＝8.3hz)，4.15(2h，s)，5.55(2h，s)，8.10-8.08(1h，m)，8.32(1h，s)，8.62(1h，s)，8.70(1h，d，j＝8.3hz)，8.89(1h，s)，8.97(1h，s)，9.09(1h，s)。ms(m/z)：561.2[m+h]
+
。
[1005]
步骤3. 3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(159)的制备
[1006][1007]
将3-(2-羟基-2-甲基丙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-8-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(前体7，90mg，0.16mmol)溶解在1.6ml无水dcm中，并将溶液用冰水浴冷却。添加三氟乙酸(0.61ml，8.0mmol)。将反应混合物在0℃下保持搅拌30min，并升温至室温。完成后，减压去除挥发物。将残余物吸收在etoac中，用饱和nahco3、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过正相色谱法纯化，随后在meoh中重结晶，得到标题化合物3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(159，35mg，51％产率)。1h-nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ
h 1.27(6h，s)，4.13(2h，s)，8.27-8.25(1h，m)，8.43(1h，s)，8.67(1h，s)，8.81-8.79(1h，m)，8.90(1h，s)，8.99-8.97(2h，m)。ms(m/z)：431.1[m+h]
+
。纯度：98％。
[1008]
3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(160)的制备
[1009]
步骤1. 6-氯-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-咪唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4
(3h)-酮(前体8)的制备
[1010][1011]
在烘干的螺旋盖试管中装入cui(53mg，0.28mmol)、4，7-二甲氧基-1，10-菲啰啉(134mg，0.56mmol)、咪唑(95mg，1.4mmol)、6，8-二氯-3-(2-羟基-2-甲基丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(b2，400mg，1.4mmol)、聚乙二醇(233mg，0.07mmol)、cs2co3(908mg，2.8mmol)和磁力搅拌棒。然后添加无水nmp(7ml)并且反应容器装有橡胶隔膜。将容器抽空并用氩气重新填充3个循环。将反应混合物在108℃下加热2-3小时。完成后，将反应混合物冷却至室温，用二氯甲烷稀释，通过硅藻土塞过滤，并用另外的二氯甲烷洗脱。将滤液用饱和nahco3、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，浓缩并将所得残余物通过正相色谱法纯化，得到标题化合物6-氯-3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-咪唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(前体8，200mg，45％产率)。1h-nmr(ch3oh-d4，300mhz)：δ
h 1.24-1.21(6h，m)，3.65(1h，s)，4.13(1h，s)，7.18(1h，s)，8.08(1h，s)，8.26(1h，s)，8.44(1h，s)，9.11(1h，s)。ms(m/z)：319.9[m+h]
+
。
[1012]
步骤2. 3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(160)的制备
[1013][1014]
化合物160根据针对121报告的程序制备。1h-nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ
h 1.27(6h，s)，4.08(2h，s)，7.11(1h，s)，8.14(1h，d，j＝8.1hz)，8.27(1h，s)，8，37(1h，s)，8.44(1h，d，j＝8.3hz)，8.87(2h，d，j＝16.9hz).9.06(1h，s)。ms(m/z)：430.9[m+h]。纯度：99％。
[1015]
3-(2-羟基-2-甲基丙基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(161)的制备
[1016][1017]
161根据用于合成1的步骤4合成。1h-nmr(ch3oh-d4，300mhz)：δ
h 1.30(6h，s)，4.16
(2h，s)，7.20(1h，s)，7.98(1h，d，j＝8.3hz)，8，40(1h，s)，8.48(1h，s)，8.68(1h，s)，8.82(1h，d，j＝8.3hz)，9.18(1h，s)，9.51(1h，s)。ms(m/z)：430.9[m+h]。纯度：98％。
[1018]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(162)的制备。
[1019]
步骤1.(s)-3-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-2-基)-6，8-二氯吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(前体9)的制备。
[1020][1021]
将咪唑(99mg，1.5mmol)添加到(s)-6，8-二氯-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(b1，200mg，0.73mmol)于无水dmf中的溶液中。将溶液用冰水浴冷却并添加tbdmscl(132mg，0.88mmol)。使反应混合物升温至室温并保持搅拌2小时。完成后，将反应用甲醇淬灭。将反应混合物用etoac稀释，依次用饱和nahco3和水洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到标题化合物(s)-3-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-2-基)-6，8-二氯吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(前体9，280mg，99％产率)。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h-0.07(6h，d，j＝10.7hz)，0.73(9h，s)，1.41(3h，d，j＝7.0hz)，3.93-3.81(2h，m)，4.87(1h，s)，8.05(1h，s)，8.61(1h，s)。ms(m/z)：387.9[m+h]
+
。
[1022]
步骤2.(s)-3-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-2-基)-6-氯-8-(1h-咪唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(p1)的制备。
[1023][1024]
中间体p1根据针对合成160的步骤1报告的程序合成。ms(m/z)：420.0[m+h]。
[1025]
表21示出了根据上述步骤合成的中间体。
[1026][1027]
步骤3.(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(q1)的制备。
[1028][1029]
将(s)-3-(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-2-基)-6-氯-8-(1h-咪唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体p1，460mg，1.1mmol)溶解在无水thf(11ml)中并用冰
水浴冷却。滴加四丁基氟化铵(1.0m的thf溶液，1.3ml，1.3mmol)并将溶液搅拌10min。完成后，将反应混合物用饱和nh4cl淬灭，并用etoac萃取。将有机相收集，用水、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物置于meoh中，收集沉淀物并干燥，得到标题化合物，其不经进一步纯化即用于下一步骤(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体q1，340mg，1.1mmol，量子产率)。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)：δ
h 1.45-1.39(3h，m)，3.84-3.62(2h，m)，4.93-4.78(1h，1m)，5.06-5.11(1h，m)，7.17-7.14(1h，m)，8.03-8.00(1h，m).8.12-8.09(1h，m)，8.66-8.62(1h，m)，8.85-8.83(1h，m)。ms(m/z)：305.9[m+h]
+
。
[1030]
表22列出了根据上述步骤合成的中间体。
[1031][1032]
步骤4.(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(162)的制备。
[1033][1034]
162根据针对137报告的程序制备。1h-nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ
h 1.57(3h，d，j＝7.1hz)，3.87(1h，dd，j＝11.9，4.3hz)，3.97(1h，dd，j＝11.9，6.9hz)，5.01(1h，td，j＝7.1，4.4hz)，7.19(1h，s)，8.28(1h，dd，j＝8.3，2.2hz)，8.43(1h，s)，8.57(1h，s)，8.70(1h，d，j＝8.4hz)，9.03(1h，s)，9.15(1h，s)，9.19(1h，s)。ms(m/z)：416.9[m+h]。纯度：98％。
[1035]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(163)的制备
[1036][1037]
将(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体q1，85mg，0.28mmol)和2-三氟甲基-吡啶-5-硼酸(80mg，0.42mmol)溶解在2ml甲苯-etoh(2∶1)中，并添加碳酸钠(118mg，1.1mmol)。将悬浮液脱气并用氩气重新填充(3个循环)。添加四(三苯基膦)钯(32mg，0.028mmol)，并将悬浮液脱气并用氩气重新填充(3个循环)。在氩气下将反应混合物加热至85℃并保持搅拌过夜。完成后，将反应混合物冷却，在etoac中稀释，用水和盐水洗涤。将有机相经无水硫酸钠干燥。将溶液浓缩并通过正相柱色谱法纯化，随后在meoh中结晶，得到标题化合物(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-咪唑-1-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(163，52mg，45％产率)。1h-nmr(ch3oh-d4，300mhz)：δ
h 0.08(3h，d，j＝7.1hz)，2.47-2.38(2h，m)，3.53(1h，s)，5.69(1h，s)，6.48(1h，d，j＝8.3hz)，6.91(1h，s)，7.08(1h，s)，7.20(1h，s)，7.34(1h，d，j＝8.4hz)，7.70(1h，s)，8.03(1h，s)。ms(m/z)：416.9[m+h]，纯度：99％。
[1038]
表23列出了根据针对163报告的合成程序替换步骤2中的反应物合成的化合物。
[1039]
[1040][1041]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(168)的制备。
[1042][1043]
将(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡啶并[3，4-d]嘧
啶-4(3h)-酮(c10，100mg，0.313mmol)和5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-2-(三氟甲基)噻唑(96.0mg，0.344mmol)溶解在二噁烷中。将pd(oac)2(7.02mg，0.031mmol)、三苯基膦(16.4mg，0.063mmol)和k3po4(266mg，1.25mmol)添加到溶液中。将悬浮液脱气并用氩气重新填充(3个循环)。将反应混合物加热至90℃并搅拌16小时。将反应混合物用乙酸乙酯萃取并用水和盐水洗涤。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化，得到(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-6-(2-(三氟甲基)噻唑-5-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(168，28mg，20％产率)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ1.45(3h，d，j＝7.0hz)，3.71-3.66(1h，m)，3.82-3.77(1h，m)，3.97(3h，s)，4.92-4.87(1h，m)，5.10(1h，t，j＝5.4hz)，8.45(1h，s)，8.51(1h，s)，8.58(1h，s)，8.77(1h，s)，9.03(1h，s)。ms(m/z)：437.1[m+h]
+
；98％纯度。
[1044]
表24列出了根据合成方案v合成的化合物，其中步骤根据针对168报告的程序进行。
[1045]
[1046]
[1047][1048]
本披露中涵盖的化合物可通过方案v中概述的和下文实例中描述的程序制备。
[1049][1050]
方案v
[1051]
(s)-8-(二乙基氨基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(174)的制备
[1052]
步骤1.(s)-6-氯-8-(二乙基氨基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体s1)的制备
[1053][1054]
在密封管中将二甲基甲酰胺(2.0ml)添加到(s)-6，8-二氯-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(b1，0.200g，0.73mmol)和碳酸钾(0.403g，2.92mmol)中。添加二乙胺(0.0586g，0.803mmol)并将反应混合物在120℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，添加水并将混合物用乙酸乙酯分配。将有机层分离，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，得到标题化合物(s)-6-氯-8-(二乙基氨基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体s1，0.062g，27％产率)。1h-nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h 1.21(6h，t，j＝6.9hz)，1.37(3h，d，j＝7.1hz)，3.64-3.60(1h，m)，3.83-3.75(5h，m)，4.82-4.76(1h，m)，5.04(1h，t，j＝5.5hz)，7.03(1h，s)，8.32(1h，s)；ms(m/z)：311.1[m+h]
+
。
[1055]
表25列出了根据上述步骤合成的中间体。
[1056]
表25
[1057][1058]
步骤2.(s)-8-(二乙基氨基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(174)的制备
[1059][1060]
以上制备174的步骤根据针对最后一步1报告的程序进行。
[1061]
表26列出了根据针对174报告的合成程序替换步骤1和步骤2的反应物合成的化合物。
[1062]
[1063]
[1064][1065]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(180)的制备
[1066]
步骤1.(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(前体10)的制备
[1067][1068]
将(s)-6，8-二氯-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体b1，
200mg，0.73mmol)溶解在甲苯中并脱气，然后添加pdcl2(2.62mg，0.015mmol)、csf(0.222g，1.46mmol)、cui(0.056g，0.292mmol)、三叔丁基膦(0.292μl，0.292mmol，1.0m的thf溶液)和2-(三丁基锡基)吡啶(0.348mg，0.803mmol)。将溶液再次脱气并在50℃下搅拌过夜。将反应混合物用etoac稀释，用水、盐水洗涤，然后经无水硫酸钠干燥。真空去除溶剂并将残余物通过硅胶柱色谱法(ch2cl2/meoh)纯化，得到(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(前体10，55.6mg，24％产率)。1h-nmr(chcl
3-d，400mhz)：δ
h 1.34(3h，m)，3.92(2h，t，j＝4.4hz)，5.07-5.00(1h，m)，7.41(1h，dd，j＝73，1.9hz)，7.89-7.82(1h，m)，8.03-7.98(1h，m)，8.19-8.19(1h，m)，8.34(1h，t，j＝1.6hz)，8.90-8.83(1h，m)；ms(m/z)：316.9[m+h]
+
。
[1069]
步骤2.(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-2-基)-6-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(180)的制备
[1070][1071]
以上制备180的步骤根据针对1的最后一步报告的程序进行。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)：δ
h 1.44-1.40(3h，m)，3.79-3.64(2h，m)，4.91(1h，s)，5.09-5.04(1h，m)，7.55-7.50(1h，m)，7.92-7.89(1h，m)，7.99-7.95(1h，m)，8.07-8.02(1h，m)，8.51(1h，t，j＝0.9hz)，8.77-8.74(1h，m)，8.81(1h，t，j＝0.8hz)，8.89-8.85(1h，m)，9.60-9.58(1h，m)；ms(m/z)：427.9[m+h]
+
；99％纯度。
[1072]
(s)6-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(181)的制备
[1073][1074]
将(s)6-(环己-1-烯-1-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(77，76.2mg，0.210mmol)和pto2(4.77mg，0.021mmol)溶解在etoh(3ml)中。将悬浮液脱气并用氩气重新填充并用氢气吹扫。将反应混合物在氢气气氛下在室温下搅拌3天。将反应混合物通过硅藻土过滤并将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化，得到(s)-6-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(181，46.0mg，60％产率)。1h-nmr(chcl
3-d，300mhz)：δ1.81-1.29(9h，m)，1.93-1.87(2h，m)，2.06(2h，d，j＝12.5hz)，2.95-2.85(1h，m)，3.98(2h，d，j＝4.6hz)，5.06-4.97(1h，m)，7.38(1h，dd，j＝7.8，4.7hz)，7.91(1h，s)，8.22(1h，s)，8.41(1h，d，j＝8.0hz)，8.61(1h，s)，9.34(1h，s)；ms
(m/z)：365.0[m+h]
+
；99％纯度。
[1075]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(吡啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(182)的制备
[1076][1077]
以上步骤根据针对合成180的步骤1报告的程序进行，得到(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(吡啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(182)。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)：δ
h 1.43(3h，d，j＝7.0hz)，3.84-3.64(2h，m)，4.91(1h，m)，5.07(1h，t，j＝5.6hz)，7.50(1h，ddd，j＝7.4，4.8，1.2hz)，7.59(1h，dd，j＝7.9，4.8hz)，8.00(1h，td，j＝7.8，1.7hz)，8.60-8.54(3h，m)，8.69(1h，dd，j＝4.8，1.7hz)，8.77-8.75(1h，m)，9.02(1h，s)，9.36(1h，s)；ms(m/z)：360.0[m+h]
+
；99％纯度。
[1078]
表27列出了根据针对180报告的合成程序合成的化合物。
[1079][1080]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(1-甲基-1h-1，2，3-三唑-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(184)的制备
[1081][1082]
以上步骤根据针对合称47报告的程序进行，得到(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(1-甲基-1h-1，2，3-三唑-5-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(184，40mg，18％)。1h-nmr(dmso-d6，300mhz)：δ1.44(3h，d，j＝7.0hz)，3.84-3.66(2h，m)，4.42(3h，s)，4.90(1h，td，j＝7.1，4.9hz)，5.09-5.06(1h，m)，7.59(1h，dd，j＝8.0，4.8hz)，8.54-8.50(2h，m)，8.56(1h，s)，8.60(1h，s)，8.70(1h，dd，j＝4.8，1.6hz)，9.31(1h，d，j＝2.1hz)。ms(m/z)：364.0[m+h]
+
；98％纯度。
[1083]
(r)-6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(185对映体1)和(s)-6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(185对映体2)的制备
[1084][1085]
将外消旋6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(h)-酮(外消旋-185，20mg，0.045mmol)通过sfc纯化得到标题化合物。(r)-6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氟-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(6.9mg，35％产率)。1h-nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ
h 3.98(1h，dd，j＝13.7，9.6hz)，4.45-4.41(1h，m)，4.62(1h，dd，j＝13.8，3.0hz)，7.53(2h，d，j＝8.4hz)，7.60(1h，dd，j＝7.9，4.9hz)，8.23(2h，d，j＝8.4hz)，8.33(1h，s)，8.58(1h，s)，8.64-8.62(1h，m)，8.70(1h，d，j＝8.0hz)，9.38(1h，t，j＝2.6hz)。ms(m/z)：446.9[m+h]。纯度：99％。(s)-6-(4-氯苯基)-8-(吡啶-3-基)-3-(3，3，3-三氯-2-羟丙基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(6.4mg，32％产率)。1h-nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δ
h 3.99(1h，dd，j＝13.7，9.7hz)，4.46-4.41(1h，m)，4.62(1h，dd，j＝13.6，2.8hz)，7.54(2h，d，j＝8.4hz)，7.61(1h，dd，j＝8.0，4.9hz)，8.24(2h，d，j＝8.4hz)，8.33(1h，s)，8.60(1h，s)，8.64-8.62(1h，m)，8.72-8.70(1h，m)，9.39(1h，d，j＝2.5hz)。ms(m/z)：446.9[m+h]。纯度：99％。
[1086]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-甲基吡啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(186)的制备
[1087][1088]
将(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(100mg，1当量)和5-甲基-2-(三丁基锡基)吡啶(145mg，0.131ml，1.2当量)溶解在甲苯(3ml)中。将悬浮液脱气并用氩气重新填充(3个循环)。添加四(三苯基瞵)钯(73mg，0.2当量)并将悬浮液脱气并再次用氩气重新填充(3个循环)。在氩气下将反应混合物加热至100℃并通过lc-ms监测。反应24小时后，添加kf和水/meoh并搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤并将滤液浓缩并通过combi-fash使用dcm/meoh在25min内从0％至10％meoh纯化。将得到的产物(100mg，84％产率)通过反相色谱法进一步纯化，得到(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-甲基吡啶-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(186)，为白色固体。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h 1.42(3h，d，j＝7.0hz)，2.38(3h，s)，3.67-3.64(1h，m)，3.77(1h，t，j＝7.5hz)，4.90(1h，d，j＝7.9hz)，5.07(1h，t，j＝5.6hz)，7.58(1h，dd，j＝7.9，4.9hz)，7.81(1h，d，j＝8.1hz)，8.44(1h，d，j＝8.1hz)，8.55(2h，t，j＝3.9hz)，8.59(1h，s)，8.68(1h，d，j＝4.7hz)，8.97(1h，s)，9.34(1h，s)。ms(m/z)：374.1[m+h]。纯度：＞99％。
[1089]
表28列出了根据针对186报告的合成程序合成的化合物。
[1090][1091]
(s)-8-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(189)的制备
[1092][1093]
步骤1.(s)-6-氯-8-(环己-1-烯-1-基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮的制备
[1094][1095]
将(s)-6，8-二氯-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(中间体b1，200mg，0.73mmol)和环己-1-烯-1-基硼酸(101mg，0.80mmol)溶解在甲苯-etoh(3∶1，7ml)中，并添加碳酸钠(309mg，2.9mmol)。将悬浮液脱气并用氩气重新填充(3个循环)。添加四(三苯基膦)钯(84mg，0.07mmol)，并将悬浮液脱气并再次用氩气重新填充(3个循环)。在氩气下将反应混合物加热至75℃并通过lc-ms监测。反应过夜后，将反应混合物冷却，用etoac稀释，通过硅藻土过滤，并将滤液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥。将残余物通过硅胶柱纯化，得到标题化合物。(130mg，56％产率)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δh 1.37(3h，d，j＝7.0hz)，1.68(4h，d，j＝30.1hz)，2.25(2h，s)，3.76-3.60(2h，m)，4.80(1h，d，j＝7.9hz)，5.03(1h，t，j＝5.5hz)，6.74(1h，s)，7.82(1h，d，j＝4.1hz)，8.46(1h，s)。ms(m/z)：320.1[m+h]+。
[1096]
步骤2.(s)-8-(环己-1-烯-1-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(-三氟甲基)吡啶2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(188)的制备
[1097][1098]
在空气下向配备有搅拌棒的火焰干燥压力小瓶中添加(s)-6-氯-8-(环己-1-烯-1-基)-3-(1-羟基丙-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(120mg，0.38mmol)、磷酸钾(399mg，1.88mmol)、(2-二环己基膦基-2
′
，4
′
，6
′‑
三导丙基-1，1
′‑
联苯)[2-(2-氨基乙基)苯基)]氯化钯(ii)[xphos pd g1](28mg，0.38mmol)和5-三氯甲基-2-吡啶硼酸mida酯(170mg，0.56mmol)、二乙醇胺(79mg，0.75mmol)。添加2ml nmp并将小瓶脱气，然后添加cu(oac)2(68mg，0.38mmol)。将小瓶加热至108℃，同时搅拌15h。然后将反应混合物冷却，用etoac稀释并通过硅藻土垫过滤。将滤液用饱和nahco3、水洗涤，浓缩并通过正相加反相
combi-flash纯化，得到标题化合物。(100mg，62％产率)。1h nmr(ch3oh-d4，400mhz)：δh 1.56(3h，d，j＝7.1hz)，1.78(2h，d，j＝7.1hz)，1.86(2h，d，j＝7.1hz)，2.34(2h，s)，2.72(2h，s)，3.84(1h，dd，j＝11.9，4.1hz)，3.96(1h，dd，j＝11.8，6.7hz)，4.96(1h，d，j＝7.8hz)，6.73(1h，s)，8.19(1h，d，j＝8.4hz)，8.38(1h，s)，8.60(1h，d，j＝8.4hz)，8.92(1h，s)，8.95(1h，s)。ms(m/z)：431.2[m+h]+。98％纯度。
[1099]
步骤3.(s)-8-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(189)的制备
[1100][1101]
将(s)-8-(环己-1-烯-1-基)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(76mg，0.18mmol)和pto2(4mg，0.018mmol)溶解在17ml etoh中。将悬浮液脱气并用h2气体(在气球中)重新填充3个循环。将反应混合物在h2气体下(在气球中)在室温下搅拌并通过lc-ms监测。24h后停止反应并通过硅藻土过滤。将滤液浓缩并通过正相和反相combi-flash纯化得到标题化合物：(s)-8-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(189)(18mg，24％产率)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δh 1.34(1h，s)，1.41(3h，d，j＝7.0hz)，1.47(2h，d，j＝13.5hz)，1.76(3h，t，j＝12.2hz)，1.89(4h，t，j＝14.9hz)，3.66-3.63(1h，m)，3，76(1h，s)，3.84(1h，s)，4.88(1h，s)，5.05(1h，d，j＝5.8hz)，8.39(1h，d，j＝8.4hz)，8.57(1h，s)，8.66(1h，d，j＝8.4hz)，8.87(1h，s)，9.11(1h，s)。ms(m/z)：433-2[m+h]+；96％纯度；(s)-8-环己基-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2，3-二氢吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(1h)-酮(22mg，29％产率)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δh 1.14(3h，d，j＝6.9hz)，1.27(1h，d，j＝15.6hz)，1.44(2h，d，j＝14.2hz)，1.61(2h，t，j＝12.4hz)，1.73(1h，br s)，1.82(4h，br s)，2.90(1h，，s)，3.49(2h，d，j＝6.8hz)，4.54(jh，d，j＝8.2hz)，4.62(2h，s)，4.85(1h，d，j＝5.8hz)，7.11(1h，s)，8.24(1h，d，j＝8.5hz)，8.43(1h，d，j＝8.5hz)，8.52(1h，s)，8.96(1h，s)。ms(m/z)：435.2[m+h]+；99％纯度。
[1102]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-n，n-二甲基-4-氧代-8-(吡啶-3-基)-3，4-二氢吡啶并3，4-d]嘧啶-6-甲酰胺(190)的制备
[1103][1104]
向(s)-6-氯-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(200mg，1当量)、二甲胺盐酸盐(77mg，1.5当量)、六羰基钼(166mg，1当量)和xphos(60mg，0.2当量)的混合物中添加二噁烷(6ml)。将悬浮液脱气并用氮气重新填充(3个循环)。添加
乙酸钯(ii)(15mg，0.1当量)和k3po4并将悬浮液脱气并再次用氮气重新填充(3个循环)。将反应混合物加热至100℃并通过lc-ms监测。过夜后，反应混合物通过硅藻土过滤，用etoac、meoh洗涤并将滤液浓缩。将粗产物(190)首先通过硅胶柱色谱法纯化，用dcm/meoh在25min内从0％至10％meoh洗脱，随后使用水/乙腈进行反相，得到期望的产物(90mg，40％)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δ
h 1.40(3h，d，j＝7.0hz)，3.05(7h，s)，3.66(1h，s)，3.76(1h，s)，4.88-4.83(1h，m)，5.05(1h，t，j＝5.3hz)，7.55(1h，t，j＝6.3hz)，8.16(1h，s)，8.41(1h，d，j＝8.0hz)，8.58(1h，s)，8.66(1h，d，j＝4.8hz)，9.21(1h，s)。ms(m/z)：488.0[m+h]
+
；＞99％纯度。
[1105]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(1h-吡唑-4-基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(191)的制备：
[1106]
化合物191根据与以上通用方案iv相同的程序和以下保护策略制备。
[1107][1108]
方案vi
[1109]
表29描述了经由通用方案vi合成的中间体。
[1110]
表29
[1111][1112]
表30列出了根据以上合成方案vi合成的化合物。
[1113][1114]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-6-(2-甲氧基乙基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(192)的制备
[1115][1116]
在烘干的微波小瓶中引入双(二叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯钯(ii)(5.6mg，0.05mmol)、三氟(2-甲氧基乙基)-λ4-硼烷钾盐(40mg，0.24mmol)、cs2co3(154mg，
0.47mmol)和(s)-6-氟-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(吡啶-3-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(50mg，0.16mmol)。将小瓶密封、脱气并用n2重新填充。通过注射器添加脱气的二噁烷-h2o(4∶1，1ml)。然后将反应混合物置于预热至100℃的油浴中并在该温度下搅拌24h。完成后，将反应混合物冷却至室温，用etoac稀释，通过硅藻土垫过滤。将滤液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并通过正相色谱法纯化，得到标题化合物(192)。1h nmr(dmso-d6，400mhz)：δh 1.39(3h，d，j＝7.0hz)，3.17(2h，t，j＝6.4hz)，3.24(3h，s)，3.64-3.61(1h，m)，3.77(3h，t，j＝6.7hz)，4.85(1h，s)，5.03(1h，t，j＝5.5hz)，7.53(1h，t，j＝6.2hz)，7.93(1h，s)，8.40(1h，d，j＝7.9hz)，8.47(1h，s)，8.64(1h，d，j＝4.6hz)，9.20(1h，s)。ms(m/z)：341.1[m+h]+；96％纯度。
[1117]
(s)-3-(1-羟基丙-2-基)-8-(2-甲氧基乙基)-6-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-4(3h)-酮(193)的制备
[1118]
化合物193根据与以上通用方案iv相同的程序并在根据化合物192的程序的烷基-芳基偶联步骤之后制备。
[1119][1120]
方案vii
[1121]
表31描述了经由通用方案vii合成的中间体。
[1122]
表31
[1123][1124]
表32列出了根据以上合成方案vii合成的化合物。
[1125][1126]
实例2：dre-荧光素酶报告基因测定
[1127]
ahr结合到其激活的基因上游的二噁英应答元件(dre)上。ahr活性的一种量度是一个或多个dre元件下游的报告基因诸如荧光素酶的激活。荧光素酶活性将反映在表达其报告基因的细胞中ahr的激活和抑制。将20000个人hepg2肝癌-ahr-lucia报告细胞或人ht29结肠腺癌-ahr报告细胞或其他稳定转染dre-荧光素酶报告基因的细胞系铺板在eagle氏最低必需培养基、10％热灭活fbs、1x非必需氨基酸pen-strep(10,000u/ml)和normocin(100ug/ml)的板(96孔、384孔或其他板)中并在co2培养箱中在37℃下孵育过夜，并用和不用ahr拮抗剂以100um开始的对数稀释度处理。
[1128]
在细胞铺板1小时后，将ahr激活配体诸如tcdd、犬尿氨酸、ite(2-(1h-吲哚-3-基羰基)-4-噻唑甲酸甲酯)、vaf347、bnf(β-萘黄酮)、ficz(6-甲酰基吲哚(3，2-b)咔唑)或其他ahr配体以它们特定的ec
50
浓度添加到具有或不具有ahr拮抗剂的细胞中。
[1129]
将细胞孵育24或48小时或另一时间点，然后分析上清液以确定荧光素酶活性，作为ahr激活或抑制的读数。按照制造商的说明，使用来自体内基因公司(invivogen)的商业试剂盒quanti-luc
tm
测定溶液试剂盒测量荧光素酶。
[1130]
仅添加激动剂配体时荧光素酶的水平是最大信号，而没有拮抗剂时荧光素酶是最小信号。ic
50
值被确定为抑制一半荧光素酶活性的浓度。本披露的化合物的荧光素酶的ic
50
水平报告在表33中。“a”指示ic
50
值小于100nm，“b”指示ic
50
介于100与500nm之间，“c”指示ic
50
高于500nm，并且“d”指示ic50值无法从数据生成。
[1131]
[1132]
[1133]
[1134][1135]
实例3：cyp1a1基因表达测定
[1136]
将美国典型培养物保藏中心(atcc)的人和小鼠结直肠癌(crc)细胞系，分别为ht29和ht26，以8.0
×
105个细胞/孔铺板在无菌组织培养物处理的96孔板(赛默飞世尔公司(thermofisher))中，并在37℃、5％co2下在dmem完全培养基(吉布科公司(gibco))中生长过夜以实现汇合。从细胞单层中吸出孵育培养基后，然后用200μl温热的pbs溶液洗涤组织，随后向每个孔中添v190μl预温的生长培养基。将感兴趣的ahr拮抗剂在含有2％dmso的生长培养基中以20x浓度稀释，并将10μl的化合物溶液一式三份地添加到相应孔中。1小时后，在具有或不具有ahr拮抗剂的情况下添加ahr激活配体诸如tcdd、犬尿氨酸、ite(2-(1h-吲哚-3-基羰基)-4-噻唑甲酸甲酯)、vaf347、bnf(β-萘黄酮)、ficz(6-甲酰基吲哚(3，2-b)咔唑)或其他ahr配体24小时，之后将去除培养基并储存在-80℃下用于以后的细胞因子分析。在孵育结束时，将培养基从crc细胞中吸出，并用100μl冷pbs溶液洗涤细胞。根据制造商的方案，通过taqman
tm
基因表达cells-to-ct
tm
试剂盒(赛默飞世尔公司)提取rna。quantstudio 6 flex(应用生物科学公司(applied biosciences))用于分析cyp1a1的mrna水平，使用gapdh作为内源性对照。两种基因的taqman
tm
探针组均购自赛默飞世尔公司。样品一式三份地运行，使用quantstudio软件分析数据并报告为线性和log2(δδct)值。使v双尾t检验进行统计分析，将在存在每种单独化合物的情况下的cyp1a1水平与媒介物阴性对照进行比较。考虑进一步评价ic
50
在纳摩尔浓度范围内的化合物。该测定可用于在使用体内模型进行测试之前确认化合物的抑制作用。
[1137]
实例4：人pbmc(cd8+)测定
[1138]
将人供体血液(8ml)收集在柠檬酸钠cpt管中，并在室温下以1,600
×
g离心20分钟。在室温下收集含有pbmc的血沉棕黄层并将其转移到含有30ml rpmi-1640培养基(补充有青霉素-链霉素)的50ml锥形管中。将pbmc样品在10℃下以400
×
g离心10分钟。将沉淀的pbmc在10ml rpmi-1640培养基(补充有青霉素-链霉素)中洗涤两次，然后重悬于rpmi-1640培养基(补充有青霉素-链霉素、胎牛血清和l-谷氨酰胺：rpmi-1640完全培养基)中。将pbmc通过70微米的筛网过滤以去除任何细胞碎片。调节体积以达到1.66
×
106个细胞/ml，从中将180μl(300,000个pbmc)添加到96孔板(无菌、组织培养处理、圆底)的每个孔中。将96孔板中的pbmc在37℃、5％co2培养箱中静置30分钟，然后用10μl指定化合物处理。对于cd8+(杀伤t细胞)分化测定，将pmbc(1-10
×
104个细胞)在rpmi-1640完全培养基中培样2、4和6天，并在具有或不具有ahr拮抗剂化合物的清况下用5ul/ml immunoculttm人cd3/cd28/cd2t细胞激活剂(干细胞公司(stemcell)#10990)刺激。使用1∶500稀释度的活力染料(ebioscience可固定活力染料efluor 780：thermofisher 65-0865-14)测定细胞活力。针对cd8+对细胞进行门控，定义为活的、cd11c-、cd14-、cd19-、cd8+、cd4-、cd3+。百分比(％)cd8+计算为cd8+细胞占总活t细胞的百分比。利用graphpadprism软件使用单向anova进行统计分析。
[1139]
实例5：人pbmc细胞因子测定
[1140]
将人供体血液(8ml)收集在柠檬酸钠cpt管中，并在室温下以1,600
×
g离心20分钟。在室温下收集合有pbmc的血沉棕黄层并将其转移到合有30ml rpmi-1640培养基(补充有青霉素-链霉素)的50ml锥形管中。将pbmc样品在10℃下以400
×
g离心10分钟。将沉淀的pbmc在10ml rpmi-1640培养基(补充有青霉素-链霉素)中洗涤两次，然后重悬于rpmi-1640培养基(补充有青霉素-链霉素、胎牛血清和l-谷氨酰胺：rpmi-1640完全培养基)中。将pbmc通过70微米的筛网过滤以去除任何细胞碎片。调节体积以达到1.66
×
106个细胞/ml，从中将180μl(300,000个pbmc)添加到96孔板(无菌、组织培养处理、圆底)的每个孔中。将96孔板中的pbmc在37℃、5％co2培养箱中静置30分钟，然后用10μl指定化合物处理。对于细胞因子分泌测定，将pmbc(1-10
×
104个细胞)在rpmi-1640完全培养基中培养2、4和6天，并在具有或不具有ahr拮抗剂化合物的情况下用5ul/ml immunoculttm人cd3/cd28/cd2 t细胞激活剂(干细胞公司#10990)刺激。在37℃、5％co2下孵育2、4和6天后，收集100μl细胞上清液并转移到96孔板(未经组织处理，平底)中。将板在室温下以350
×
g离心5分钟，然后将澄清的上清液转移到新的96孔板(未经组织处理，平底)。使用celltiter-发光法细胞活力测定(普洛麦格公司(promega))测试剩余细胞的活力。使用luminex免疫测定技术(magpix系统)分析上清液中的il22和ifg。将经pbmc处理的dmso对照样品的细胞因子水平设定为100％，并且相对于该值表示经化合物处理的样品。
[1141]
实例6：溶解度确定测定
[1142]
在dmso中以10mm的浓度制备测试化合物和对照化合物黄体酮的储备溶液。将每种样品的15μl储备溶液(10mm)按顺序置于它们适当的96孔架中。将485μl的ph为1.6和ph为7.4的pbs添加到无盖溶解度样品板的每个小瓶中。该测定以单重态进行。将一根搅拌棒添加到每个小瓶中，然后使用模制的ptfe/硅胶塞密封小瓶。然后将溶解度样品板转移到eppendorf thermomixer舒适型板振荡器中，并在25℃下以1100rpm振荡2小时。2小时完成后，去除塞子并使用大磁铁取出搅拌棒。将来自溶解度样品板的样品转移到过滤板中。使用
真空歧管过滤所有样品。从滤液中取出5μl等分试样，随后添加495μl含有内标的h2o和乙腈的混合物(1∶1)。根据峰形使用一定比例的超纯水稀释稀释剂。稀释因子根据溶解度值和lc-ms信号响应而变化。
[1143]
从10mm dmso std板中，将6μl转移到剩余的空板中，然后将194μl dmso添加到该板中，以使std浓度为300μm。从300μm dmso std板中，将5μl转移到剩余的空板中，然后将495μl含有内标的h2o和乙腈的混合物(1∶1)添加到该板中，以使最终std浓度为3μm。根据峰形使用一定比例的超纯水稀释稀释剂。标准样品的浓度根据lc-ms信号响应而变化。
[1144]
将板置于孔板自动进样器中。通过lc-ms/ms分析评价样品。
[1145]
使用microsoft excel进行所有的计算。
[1146]
使用lc与质谱峰识别和定量相结合，针对已知浓度的标准物对滤液进行分析和定量。测试化合物和对照化合物的溶解度值如下计算：
[1147][1148]
拒绝不在规定限度内任何化合物的值，并且重复试验。
[1149]
本披露的化合物在ph 1.6和7.4缓冲液中的溶解度报告在表34中。“+++”指示溶解度值等于或大于1μm，“++”指示溶解度值介于0.1与1μm之间，并且“+”指示溶解度值小于0.1μm。
[1150]
表34
[1151]
[1152]
[1153][1154]
bld：低于检测限。
[1155]
实例7：肝细胞稳定性测定
[1156]
工作溶液的制备：在dmso中制备10mm测试化合物和阳性对照的储备溶液。在单独的锥形管中，通过混合198μl的50％乙腈/50％水和2μl的10mm储液，将10mm测试化合物溶液和阳性对照稀释至100μm。
[1157]
肝细胞的制备：将孵育培养基(补充有glutamax的威廉姆氏e培养基)和肝细胞解冻培养基置于37℃水浴中，并在使用前温热至少15分钟。将一小瓶冷冻保存的肝细胞从储存中转移，确保小瓶保持在低温直到随后发生解冻过程。通过将小瓶置于37℃水浴中并轻轻摇晃小瓶2分钟来解冻细胞。解冻完成后，用70％乙醇喷洒小瓶并转移到生物安全柜中。使用宽口径移液器吸头将肝细胞转移到含有解冻培养基的50ml锥形管中。将50ml锥形管置于离心机中并以100g离心10分钟。离心完成后，吸出解冻培养基并将肝细胞重悬于足够的v育培养基中，v到约1.5
×
106个细胞/ml。使用ao/pi染色，对细胞进行计数v确定活细胞密度。活力差(＜75％活力)的细胞被确定为不能使用。用孵育培养基将细胞稀释至0.5
×
106个活细胞/ml的工作细胞密度。
[1158]
稳定性测定程序：将198μl肝细胞移液到96孔未包被板的每个孔中。将板置于培养箱中以使肝细胞升温10分钟。将2μl的100μm测试化合物或阳性对照溶液移液到96孔未包被板的相应孔中以开始反应。在设计的时间点将板放回培养箱中。在0、15、30、60、90和120分钟的时间点以25μl等分试样转移孔内容物。然后将等分试样与6体积(150μl)含有内标is
(100nm阿普唑仑、200nm咖啡因和100nm甲苯磺丁脲)的乙腈混合以终止反应。将混合物涡旋5分钟。将样品以3,220g离心45分钟。用100μl超纯水稀释100μl上清液的等分试样，并将混合物用于lc/ms/ms分析。所有孵育一式两份地进行。
[1159]
数据分析：使用microsoft excel进行所有的计算。从提取的离子色谱图确定峰面积。母体化合物的体外半衰期(t
1/2
)通过母体消失百分比相对于时间曲线的回归分析来确定。
[1160]
体外半衰期(体外t
1/2
)由斜率值确定：
[1161]
体外t
1/2
＝0.693/k
[1162]
使用以下等式(重复测定的平均值)将体外t
1/2
(单位为min)转换为体外内在清除率(体外cl
int
，单位为μl/min/1
×
106个细胞)：
[1163]
体外cl
int
＝kv/n
[1164]
v＝孵育体积(0.2ml)；
[1165]
n＝每孔的肝细胞数(0.1
×
106个细胞)。
[1166]
数据处理规则：数据处理规则如表35所示。
[1167]
表35
[1168][1169]
本披露的化合物的人和大鼠肝细胞清除率报告在表36中。“+++”指示cl
int
值小于20ml/min/kg，“++”指示cl
int
介于20与50ml/min/kg之间，并且“+”指示cl
int
高于50ml/min/kg。
[1170]
表36
[1171]
[1172]
[1173][1174]
实例8：肝微粒体稳定性测定
[1175]
根据表37制备主溶液。
[1176]
表37
[1177]
试剂储液浓度体积最终浓度磷酸盐缓冲液100mm210μl100mm微粒体20mg/ml6.25μl0.5mg/ml
[1178]
如下进行了两个单独的实验。
[1179]
利用辅因子(nadph)：将25μl的10mm nadph添加到培养物中。微粒体和nadph的最终浓度分别为0.5mg/ml和1mm。微粒体的最终浓度为0.5mg/ml。将混合物在37℃下预热10分钟。添加2.5μl的100μm对照化合物或测试化合物溶液开始反应。在本研究中使用维拉帕米作为阳性对照。测试化合物或对照化合物的最终浓度为1μm。将孵育溶液在37℃下分批在水中孵育。在0.5、5、15、30和60分钟时从反应溶液中取出25μl的等分试样。通过添加5体积的含有is(200nm咖啡因和100nm甲苯磺丁脲)的冷乙腈终止反应。将样品以3,220g离心40分钟。将100μl上清液的等分试样与100μl超纯h2o混合，然后用于lc-ms/ms分析。
[1180]
数据分析：使用microsoft excel进行所有的计算。从提取的离子色谱图确定峰面积。科率值k通过母体药物相对于孵育时间曲线的剩余百分比的自然对数的线性回归确定。
[1181]
体外半衰期(体外t
1/2
)由斜率值确定：
[1182]
体外t
1/2
＝-(0.693/k)
[1183]
使用以下等式(重复测定的平均值)将体外t
1/2
(min)转换为体外内在清除率(体外cl
int
，单位为μl/min/mg蛋白)：
[1184][1185]
放大cl
int
(ml/min/kg)、预测clh(ml/min/kg)和eh的计算使用以下等式进行：
[1186]
放大cl
int
＝(0.693/t
1/2
)
×
(1/(微粒体蛋白浓度(0.5mg/ml)))
×
比例因子：
[1187]
预测clh＝(qh
×
放大cl
int
×fub
)/(qh+放大cl
int
×fub
)；
[1188]
eh＝预测clh/qh
[1189]
其中qh是肝血流量(ml/min/kg) (表32)，
[1190]fub
是血浆中未结合药物的分数，其被假定为1。
[1191]
人和小鼠微粒体中内在清除率预测的比例因子报告在表38中。
[1192]
表38
[1193][1194]
*比例因子＝(每克肝脏的微粒体蛋白)
×
(每公斤体重的肝脏重量)
[1195]
数据处理规则：数据处理规则如表39所示。
[1196]
表39
[1197][1198]
本披露的化合物的人和大鼠肝微粒体清除率报告在表40中。“+++”指示cl
int
值小于10ml/min/kg，“++”指示cl
int
介于10与20ml/min/kg之间，并且“+”指示cl
int
高于20ml/min/kg。
[1199]
表40
[1200][1201]
实例9：caco-2渗透性测定
[1202]
caco-2细胞的制备：分别向transwell插入物和储器的每个孔中添加50μl和25ml细胞培养基。在细胞接种前，将hts transwell板在37℃、5％co2下孵育1小时。用培养基将caco-2细胞稀释至6.86
×
105个细胞/ml，并将50μl细胞悬浮液分配到96孔hts transwell板的滤孔中。将细胞在37℃、5％co2、95％相对湿度的细胞培养箱中培养14-18天。每隔一天更换一次细胞培养基，在初始铺板后不迟于24小时开始。
[1203]
细胞单层完整性评估：从储器和每个transwell插入物中去除培养基，并用预热的新鲜培养基替换。使用millicell上皮伏特-欧姆测量系统(美国密理博公司(millipore，usa))测量跨单层的跨上皮电阻(teer)。一旦完成测量，就将板放回培养箱中。teer值根据
以下等式计算：
[1204]
teer测量值(ohm)
×
膜面积(cm2)＝teer值(ohm
·
cm2)
[1205]
teer值应大于230ohm
·
cm2，这表明caco-2单层质量良好。
[1206]
溶液的制备：制备2mm对照化合物在dmso中的储备溶液，并用hbss(10mm hepes，ph 7.4)稀释，得到10μm工作溶液。制备0.2mm测试化合物在dmso中的储备溶液，并用hbss(10mm hepes，ph 7.4，含0.5％bsa)稀释，得到1μm工作溶液。美托洛尔、红霉素和西咪替丁用作对照化合物。
[1207]
进行药物转运测定：将caco-2板从培养箱中取出。用预热的hbss(10mm hepes，ph 7.4)将单层洗涤两次。将板在37℃下孵育30分钟。为了确定从顶端到基底外侧方向的药物转运速率，将125μl工作溶液添加到transwell插入物(顶端隔窒)中。立即将50μl样品从顶端隔室转移到新的96孔板中的200μl含有is(100nm阿普唑仑、200nm咖啡因和100nm甲苯磺丁脲)的乙腈中，作为初始供体样品(a-b)，并将其以1000rpm涡旋10分钟。用235μl转运缓冲液填充接收板(基底外侧隔窒)中的孔。为了确定从基底外侧到顶端方向的药物转运速率，将285μl工作溶液添加到接收板孔(基底外侧隔室)中。立即将50μl样品从基底外侧隔窒转移到新的96孔板中的200μl含有is(100nm阿普唑仑、200nm咖啡因和100nm甲苯磺丁脲)的乙腈中，作为初始供体样品(b-a)，并将其以1000rpm涡旋10分钟。用75μl转运缓冲液填充transwell插入物(顶端隔室)。顶端到基底外侧方向和基底外侧到顶端方向需要同时进行。将板在37℃下孵育2小时。在孵育结束时，将来自供体侧(对于ap
→
b1通量的顶端隔室和对于b1
→
ap的基底外侧隔窒)和接收侧(对于ap
→
b1通量的基底外侧隔室和对于b1
→
ap的顶端隔室)的50μl样品转移到新的96孔板的孔中，然后添加4体积含有is(100nm阿普唑仑、200nm咖啡因和100nm甲苯磺丁脲)的乙腈。将样品涡旋10分钟，将50μl样品转移到新的96孔板的孔中，随后添加50μl hepes和200μl is。将所有样品涡旋10分钟，然后以3,220g离心40分钟。在lc-ms/ms分析之前，将150μl上清液的等分试样与适当体积的超纯水混合。
[1208]
数据分析：使用microsoft excel进行所有的计算。从提取的离子色谱图确定峰面积。单层的荧光黄泄漏可使用以下等式计算：
[1209][1210]
其中i
受体
是受体孔(0.3ml)中的荧光强度，并且
[1211]i供体
是供体孔(0.1ml)中的荧光强度，并表示为泄漏％。
[1212]
荧光黄百分比量转运值应小于1.5％。然而，如果特定transwell的荧光黄百分比量转运值高于1.5，但该transwell中测定的地高辛p
app
与重复trawell中测定的定性相似，则基于负责科学家的科学判断，认为该单层是可接受的。
[1213]
可使用以下等式计算药物转运测定的表观渗透性(papp)：
[1214]
其中p
app
是表观渗透性(cm/s
×
10-6
)；
[1215]
dq/dt是药物转运速率(pmol/s)；
[1216]
a是膜的表面积(cm2)；
[1217]
d0是初始供体浓度(nm；pmol/cm3)。
[1218]
可使用以下等式确定外排率：
[1219][1220]
其中p
app(b-a)
指示从基底外侧到顶端方向的表观渗透性系数，
[1221]
p
app(a-b)
指示从顶端到基底外侧方向的表观渗透性系数。
[1222]
本披露的化合物的表观渗透率报告在表41中。“a”指示p
app
值大于10*10-6
cm/s，“b”指示p
app
介于2与10*10-6
cm/s之间，并且“c”指示p
app
低于2*10-6
cm/s。
[1223]
表41
[1224][1225][1226]
实例10：利用超速离心法确定血浆蛋白结合
[1227]
将冷冻血浆(储存在-80℃)在37℃水浴中解冻，随后以3,220g离心10分钟以去除凝块。将上清液作为离心血浆移入新管中。将离心血浆在37℃水浴中预热10分钟。将测试化合物的储备溶液在dmso中稀释至200μm，然后加标到血浆中。制备一式两份样品。化合物的最终浓度为1.0μm。有机溶剂的最终浓度为0.5％。华法林在测定中用作阳性对照。将1.0ml加标血浆转移到新的平衡超速离心管中。将样品在37℃、5％co2下孵育30分钟。孵育后，将平衡超速离心管在37℃下以600,000g离心5.5小时。离心后，从超速离心管中心取出50μl溶液作为超速离心后样品，随后添加50μl空白血浆和400μl淬灭溶液(含内标(is，100nm阿普
唑仑、500nm拉贝洛尔和2μm酮洛芬)的乙腈)以沉淀蛋白并释放化合物。将样品涡旋2分钟，随后在室温下以20,000g离心15分钟。将上清液用超纯水稀释，然后用于lc-ms/ms分析。通过将50μl加标血浆转移到0.6ml管中并在37℃、5％co2下孵育0.5和6小时来制备稳定性样品。孵育后，向稳定性样品中添加50μl pbs(100mm，ph 7.4)和400μl淬灭溶液。然后以与超速离心后样品相同的方式处理稳定性样品。将上清液用超纯水稀释，然后用于lc-ms/ms分析。0.5小时时间点样品也用作非离心对照。通过将50μl加标血浆转移到含有50μl pbs的0.6ml管中，随后添加400μl的淬灭溶液以沉淀蛋白并释放化合物，制备时间0的样品。然后以与超离心后样品相同的方式处理这些样品。将上清液用超纯水稀释，然后用于lc-ms/ms分析。
[1228]
数据分析：使用microsoft excel进行所有的计算。从峰面积确定血浆样品和超速离心后血浆中测试化合物的浓度。测试化合物结合的百分比如下计算：
[1229]
未结合的％＝(超速离心后的峰面积/非离心对照的峰面积)
×
100％
[1230]
结合％＝100％-未结合％
[1231]
0.5小时时的剩余％＝0.5小时面积比/0小时面积比
×
100％
[1232]
6小时时的剩余％＝6小时面积比/0小时面积比
×
100％
[1233][1234]
本披露的化合物与人、大鼠和小鼠血浆蛋白的结合水平报告在表42中。“+++”指示结合％值小于50，“++”指示结合％值介于50与75之间，并且“+”指示结合％值高于75。
[1235]
表42
[1236]
[1237][1238]
实例11：cyp抑制测定
[1239]
在dmso中以10mm的浓度制备测试化合物的储备溶液。用乙腈将储备溶液稀释至2mm。测试化合物的最终浓度为10μm。阳性抑制剂的浓度列于表43中。对于储备溶液制备，如果阳性对照不能很好地溶解在最高浓度的dmso和乙腈(1∶4)的混合物中，则将使用乙腈和dmso的另一种混合物即乙腈和h2o或dmso的混合物来溶解该化合物。
[1240]
表43
[1241][1242]
这些底物的制备细节在表44中给出。将底物溶液储存在-20℃冰箱中，并在使用前升温至室温。
[1243]
表44
[1244][1245]
磷酸盐缓冲液(100mmol/l，ph 7.4)的制备：为了制备溶液a，称取7.098g磷酸氢二钠并添加到500ml纯水中，然后超声溶解内容物。为了制备溶液b，称取3,400g磷酸二氢钾并添加到250ml纯水中，然后超声溶解内容物。将溶液a置于搅拌器上，并将溶液b缓慢添加到溶液a中，直至ph达到7.4。10mmol/l nadph溶液的制备：将nadph以8.334mg/ml溶解在磷酸盐缓冲液中；该溶液在使用前新鲜制备。
[1246]
根据表45制备主溶液。在96深孔板中进行孵育。将以下体积分配到孵育板的每个孔中：179μl在磷酸盐缓冲液中的底物和hlm混合物、1μl的化合物工作溶液、或媒介物(dmso
和乙腈(1∶4)的混合物)。将孵育板置于水浴中并在37℃下预热15分钟，然后通过添加20μl在磷酸盐缓冲液中的10mmol/l nadph溶液开始反应。添加nadph后，将孵育板在37℃下孵育对应的时间。该测定一式两份地进行。
[1247]
表45
[1248][1249]
通过添加1.5体积(300μl)含有3％甲酸和内标(200nm拉贝洛尔、200nm阿普唑仑和200nm甲苯磺丁脲)的冷乙腈来淬灭反应。将板以3,220g离心40分钟。将100μl上清液转移到新板上。将上清液用100μl纯水稀释。将样品充分混合并使用uplc/ms/ms进行分析。
[1250]
数据分析：检查所有样品的自动峰积分面积。将分析物峰面积和内标峰面积导出到excel电子表格中。人肝微粒体中每种p450酶的抑制被测量为与未抑制的对照(＝100％活性)相比标记代谢物形成的活性的百分比降低。
[1251]
剩余活性的百分比如下计算：
[1252]
面积比＝分析物峰面积/内标峰面积
[1253]
剩余活性(％)＝测试化合物面积比/媒介物面积比*100％
[1254]
抑制％＝100-剩余活性(％)
[1255]
本披露的化合物对cyp2d6和cyp3a4的抑制％报告在表46中。
[1256]
表46
[1257][1258]
na＝不适用
[1259]
实例12：herg抑制测定
[1260]
稳定表达herg的hek 293细胞系(目录号k1236)购自英杰公司(invitrogen)。将细胞在85％dmem、10％透析fbs、0.1mm neaa、25mm hepes、100u/ml青霉素-链霉素和5μg/ml杀
稻瘟菌素和400μg/ml遗传霉素中培养。每周使用tryple
tm express分离细胞约三次，并保持在约40％至约80％之间的汇合度。在测定前，将细胞以5
×
105个细胞/6cm细胞培养皿置于盖玻片上，并用1μg/ml的强力霉素诱导48小时。
[1261]
外部溶液(mm)；132 nacl、4 kcl、3 cacl2、0.5 mgcl2、11.1葡萄糖和10hepes(用naoh将ph值调节至7.35)。内部溶液(mm)：140 kcl、2 mgcl2、10 egta、10 hepes和5 mgatp(用koh将ph调节至7.35)。测试化合物的工作溶液制备：首先在dmso中制备最终浓度为10mm的测试化合物作为储备溶液。将每种化合物的储备溶液用dmso按1∶3的比例连续稀释，以制备另外3种中间溶液，包括3.33、1.11和0.37mm。
[1262]
在进行herg测定之前，通过使用细胞外溶液将10、3.33、1.11和0.37mm中间溶液稀释1000倍来制备工作溶液，而通过将10mm dmso储液稀释333.333倍来制备30μm工作溶液。使工作溶液的最终浓度为30、10、3.33、1.11和0.37μm。工作溶液中的最终dmso浓度保持在1.1％-0.3％(v/v)的范围内。
[1263]
实验程序：将盖玻片从细胞培养皿中取出，并将其放置在浴池中的显徽镜载物台上。使用
×
10物镜定位期望的细胞。通过聚焦在细胞平面上方，使用
×
10物镜将电极的尖端定位在显微镜下。一旦尖端处于焦点上，使用操纵器的粗略控制将电极向下朝细胞推进，同时移动物镜以保持尖端处于焦点上。当直接在细胞上方时，通过使用
×
40物镜，使用操纵器的精细控制以小步长接近细胞表面。通过电极支架的侧端口施加温和的抽吸以形成千兆欧姆密封。
[1264]
cfast用于去除与电压阶跃一致的电容电流。通过重复、短暂、强烈的抽吸直至膜贴片破裂，获得全细胞构型。此时将膜电位设定为-60mv，以确保herg通道不打开。然后使用放大器上的cslow消除电容电流的尖峰。
[1265]
保持电位设定为-90mv，持续500ms；在20khz下记录电流并在10khz下过滤。在-80mv下测试泄漏电流500ms。
[1266]
通过在+30mv下去极化4.8秒来引发herg电流，然后将电压恢复到50mv持续5.2秒以消除失活并观察去激活尾电流。尾电流大小的最大量用于确定herg电流幅度。记录电流120秒以评估电流稳定性。只有记录参数高于阈值的稳定细胞才进行进一步的药物施用。将媒介物对照应用于细胞以建立基线。一旦发现herg电流稳定5分钟，就应用工作溶液。在测试化合物存在下记录herg电流约5分钟以达到稳定状态，然后捕获5次扫描。对于剂量响应测试，将5个剂量的测试化合物从低浓度到高浓度累积地应用于细胞。为了确保培养细胞和操作的良好性能，还使用5个剂量的阳性对照多非利特来测试相同批次的细胞。
[1267]
使用以下标准来确定数据可接受性：初始密封电阻＞1gω；在任何时候泄漏电流＜对照峰值尾电流的50％；峰值尾幅度＞300pa；膜电阻rm＞500mω；接入电阻(ra)＜15mω；峰值电流明显下降，每分钟＜2.5％。
[1268]
按照以下步骤进一步分析满足上述herg电流质量标准的数据。使用以下等式计算电流抑制百分比：(注：使用patchmaster或clampfit软件从原始数据中提取峰值电流)。
[1269][1270]
使用graphpad prism 6.0，将测试化合物的剂量响应曲线与相对于测试化合物浓
度的抑制％作图，并将数据拟合成具有可变斜率的s形剂量响应曲线。
[1271]
本披露的化合物的ic
50
报告在表47中。
[1272]
表47
[1273][1274][1275]
实例13：体内大鼠pk研究
[1276]
这些研究在雄性sprague dawley大鼠中进行，每组三只大鼠，或在雄性cd1小鼠中进行，每组三只小鼠。将化合物以1.0mg/kg静脉注射(媒介物乙醇：在去离子水中％peg400，比例适于给药澄清溶液)和3.0mg/kg或10mg/kg口服(媒介物：1％甲基纤维素：1,500cp，在di水(w/v)中)给药。所有动物都可自由获取食物和水。大鼠静脉注射pk时间点：血浆：0.083、0.25、0.5、1、2、4、8和24h；大鼠口服pk时间点：血浆：0.25、0.5、1、2、4、8和24h。小鼠静脉注射pk时间点：血浆：0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、24和48h；小鼠口服pk时间点：血浆：0.25、0.5、1、2、4、8、24和48h。使用lc-ms/ms方法分析血浆样品中化合物的浓度。winnonlin(phoenixtm，6.1版)或其他类似软件用于药代动力学计算。
[1277]
来自小鼠和大鼠pk研究的数据药代动力学数据示于下表48至表51中。iv给药1mg/ml的本披露的化合物的小鼠中的pk数据报告在表48中。po给药10mg/ml的本披露的化合物的小鼠中的pk数据报告在表49中。iv给药1mg/ml的本披露的化合物的大鼠中的pk数据报告在表50中。po给药3或10mg/ml的本披露的化合物的大鼠中的pk数据报告在表51中。
[1278]
[1279]
[1280]
[1281][1282]
体内模型
[1283]
ahr拮抗剂和检查点抑制剂抗pd-1在balb/c小鼠中的小鼠结直肠癌模型ct26中的功效研究
[1284]
六至八周龄的雌性小鼠获自查尔斯河实验室公司(charles river laboratory)(c57bl/6ncrl)。小鼠肿瘤细胞系wt-ct26获自美国典型培养物保藏中心，在查尔斯河研究动物诊断服务处测试支原体和其他病原体，并根据其指南进行培养。所有研究均按照cradl
关于实验动物的护理、福利和治疗的政策进行。从接种肿瘤之日起，研究人员或兽医人员每周至少对小鼠进行三次监测，以了解可能需要安乐死的临床异常情况。这些包括导致中度至重度脱水的慢性和/或重度腹泻、不易治疗的感染证据、伴有乏力或持续时间大于三天的其他临床症状的驼背、无法/不愿行走以获取食物或水、或由经验丰富的技术人员判断为指示发病或处于垂死状况的其他临床体征。与基线体重测量相比显示净体重减轻＞20％的小鼠被安乐死。
[1285]
ct26是从atcc获得的鼠结肠癌细胞系。将ct26细胞在补充有10％fbs的rpmi中培养。将低传代ct26细胞以5
×
105个细胞/ml重悬于100μl pbs中，皮下植入6-8周龄balb/c小鼠剃毛的右下侧。皮下肿瘤细胞植入的日期被定义为第0天。
[1286]
一旦达到入组标准，将动物分配到治疗组中，使得每组的平均肿瘤负荷在总体平均值的10％以内。小鼠在治疗当天按体重单独给药。
[1287]
接种1周后，将平均肿瘤大小为约60mm3的小鼠随机分配并开始治疗。(图1)ahr拮抗剂以1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg每天(qd)口服给药14天。从第14天开始，每三天以100μg/kg腹膜内给药抗pd-1(bioxcell rmp1-14)或抗pd-l1三次。
[1288]
通过垂直肿瘤直径测量来监测肿瘤，并使用公式(mm3)＝0.52
×
(长度)
×
(宽度)2计算，每天通过卡尺测量，每周测量体重三次。在结束时，回收肿瘤并通过流式细胞术和或ihc分析浸润的肿瘤免疫细胞。
[1289]
ahr依赖性基因在肿瘤、脾和肝脏中的表达
[1290]
将在组织样品诸如肿瘤或肝脏中测量ahr依赖性基因表达。将经由rna分离试剂盒(诸如qiagen)从组织中提取rna。rna提取是从总细胞或对特定细胞群进行分选后的细胞中进行的，该特定细胞群诸如肿瘤细胞、肿瘤相关t细胞、肿瘤相关髓样细胞、肿瘤相关巨噬细胞或其他细胞。基因表达将通过定量rt-pcr使用针对包括用于标准化的管家基因(诸如gapdh)的特定基因的探针来确定。将被检查的ahr依赖性基因包括但不限于：cyp1a1、cyp1b1、ahrr、ido1、ido2、il22、il6、vegfa、stat3、cdc2、mmp13、mmp-9。
[1291]
实例14：9和46号化合物的药物代谢和药代动力学特性
[1292]
9和46号化合物具有以下体外dmpk特性。
[1293]
表52
[1294][1295]
9和46号化合物具有以下体内dmpk特性。
[1296]
表53
[1297][1298][1299]
46号化合物在cd1小鼠中1mg/kg iv和10mg/kg po给药后随时间的平均血浆浓度图示于图14中。46号化合物在sd大鼠中1mg/kg iv和3mg/kg po给药后随时间的平均血浆浓度图示于图15中。
[1300]
9号化合物在cd1小鼠中1mg/kgiv和10mg/kg po给药后随时间的平均血浆浓度图示于图16中。9号化合物在sd大鼠中1mg/kg iv和3mg/kg po给药后随时间的平均血浆浓度图示于图17中。
[1301]
实例15：与免疫检查点抑制剂(ici)的组合疗法
[1302]
进行研究以鉴定芳烃受体的有效选择性低剂量调节剂，该调节剂可单独或与检查点抑制剂(ici)组合拮抗多种癌症的色氨酸代谢物活性。
[1303]
7号化合物在ct26同基因模型中的抗肿瘤功效。将ct26细胞皮下植入balb/c小鼠，然后将其随机化并用单独的pd-l1抗体或用pd-l1抗体与7号化合物组合进行治疗。在给药的14天内，po给药7号化合物，每天一次口服3mg/kg，与每3天以10mg/kg ip给药的抗pd-l1
抗体组合。媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与7号化合物的肿瘤生长曲线示于图2中。7号化合物与pd-l1抗体的共同施用显示肿瘤体积减小p＝0.0039(mann-whitney，非参数检验)。此外，媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或pd-l1抗体与7号化合物的研究终止时的肿瘤重量示于图3中。7号化合物与pd-l1抗体的共同施用显示肿瘤重量减少p＝0.041(mann-whitney，非参数检验)。
[1304]
30号化合物在ct26同基因模型中的抗肿瘤功效。将ct26细胞皮下植入balb/c小鼠，然后将其随机化并用单独的30号化合物、单独的pd-l1抗体或与30号化合物组合的pd-l1抗体进行治疗。在给药的14天内，po给药30号化合物，每天一次口服10mg/kg，与每3天以10mg/kg ip给药的抗pd-l1抗体组合。媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或单独的30号化合物或pd-l1抗体与30号化合物的肿瘤生长曲线示于图4和图6中。30号化合物与pd-l1抗体的共同施用显示肿瘤体积减小p＝0.039(图4，mann-whitney，非参数检验)和p＝0.350(图6，kruskal wallis检验，随后是非参数dunn氏多重比较检验)。此外，媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或单独的30号化合物、或pd-l1抗体与30号化合物的研究终止时的肿瘤重量示于图5和图7中。30号化合物与pd-l1抗体的共同施用显示肿瘤重量减少p＝0.067(图5，mann-whitney，非参数检验)和p＝0.0004(图7，kruskal wallis检验，随后是非参数dunn氏多重比较检验)。
[1305]
9号化合物在ct26同基因模型中的抗肿瘤功效。将ct26细胞皮下植入balb/c小鼠，然后将其随机化并用单独的9号化合物、单独的pd-l1抗体或与9号化合物组合的pd-l1抗体进行治疗。在给药的14天内，po给药9号化合物，每天一次口服10mg/kg(图8)或1mg/kg(图10)，与每3天以10mg/kg ip给药的抗pd-l1抗体组合。媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或单独的9号化合物或pd-l1抗体与9号化合物的肿瘤生长曲线示于图8和图10中。9号化合物与pd-l1抗体的共同施用显示肿瘤体积减小p＝0.0070(图8，mann-whitney，非参数检验)和p＝0.0039(图10，kruskal wallis检验，随后是非参数dunn氏多重比较检验)。此外，媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或单独的9号化合物、或pd-l1抗体与9号化合物的研定终止时的肿瘤重量示于图9和图11中。9号化合物与pd-l1抗体的共同施用显示肿瘤重量减少p＝0.0114(图9，mann-whitney，非参数检验)和p＝0.0029(图11，kruskal wallis检验，随后是非参数dunn氏多重比较检验)。总之，与单独的pd-l1相比，9号化合物与pd-l1组合降低了肿瘤体积和重量。
[1306]
46号化合物在ct26同基因模型中的抗肿瘤功效。将ct26细胞皮下植入balb/c小鼠，然后将其随机化并用单独的46号化合物、单独的pd-l1抗体或与46号化合物组合的pd-l1抗体进行治疗。在给药的14天内，po给药46号化合物，每天一次口服10mg/kg，与每3天以10mg/kg ip给药的抗pd-l1抗体组合。媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或单独的46号化合物或pd-l1抗体与46号化合物的肿瘤生长曲线示于图12中。46号化合物与pd-l1抗体的共同施用显示肿瘤体积减小。此外，媒介物相对于单一药剂pd-l1抗体或单独的46号化合物、或pd-l1抗体与46号化合物的研究终止时的肿瘤重量示于图13中。46号化合物与pd-l1抗体的共同施用显示肿瘤重量减少。
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表54-ct26模型的体内药理学数据
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