地胆草内酯类化合物在制备具有抗呼吸道合胞病毒作用的药物中的应用

本发明涉及药物化学
技术领域：
，具体涉及地胆草内酯类化合物在制备具有抗呼吸道合胞病毒作用的药物中的应用。
背景技术：
：呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus，rsv)感染在世界范围内广泛存在，人群普遍易感，并可发生重复感染以及与多种呼吸道病毒的共感染。因此，rsv是一种常见的人类病原体，而且对全球的新生儿的健康都存在威胁。rsv的感染途径主要分为空气传播和接触传播，可通过眼、鼻、喉进入人体，所以近距离的接触携带rsv的人或物会有一定的感染风险，尤其是婴幼儿或者免疫力低下的人群。临床表现主要为，高热、胸闷、气促、喘息、咳嗽等上呼吸道感染症状，长期感染会导致病毒进入下呼吸道引起细支气管炎、肺炎等。婴幼儿是下呼吸道感染主要人群之一，其中肺炎和细支气管炎是引起婴幼儿住院治疗与死亡的主要原因之一。另外，老年人以及免疫力低下人群也是下呼吸道感染的主要病原体。据who报道，rsv每年约感染6.4千万人，其中死亡率约占0.25％。安全有效的rsv疫苗能防止高危人群因感染rsv而出现下呼吸道疾病，降低住院率与死亡率。20世纪研究的福尔马林灭火疫苗是第一个rsv疫苗，但是它最终以失败而告终。虽然后期也研制了不少种类的疫苗，如减毒活疫苗、载体疫苗和亚单位疫苗等，但是至今仍没有研制出安全有效的rsv疫苗用于临床。目前，临床上用于抗rsv感染的药物种类较少，主要为利巴韦林、帕利珠单抗(palivizumab)和一些广谱抗病毒的中成药。大量临床数据显示利巴韦林副作用极强，不适用于孕妇和儿童，多用于重症患者；而广谱抗病毒的中成药，例如，莲花清瘟颗粒/胶囊、清热消炎宁胶囊等对rsv感染的作用机理也尚不明确。因此，急需进一步开发具有抗呼吸道合胞病毒作用的药物，以便给不同年龄不同症状的患者提供更多的药物选择。地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯是本课题组在前期地胆草和白花地胆草研究过程中分离得到的已知化合物；如中国专利cn111116603a也公开了从地胆草中制备异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯的方法。虽然本发明课题组在前期的研究中有报道地胆草和白花地胆草具有抗病毒作用；但是本课题组前期的研究仅仅报道了地胆草中的咖啡酰奎宁酸类成分具有抗呼吸道合胞病毒作用；如本课题组前期的专利cn102219687a以及cn102219686a公开了一系列的咖啡酰奎宁酸类成分具有抗呼吸道合胞病毒作用；在本发明完成之前，本发明课题组并未发现地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯也具有抗呼吸道合胞病毒作用；也无法预料地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯具有抗呼吸道合胞病毒作用。在此之前，中国专利cn111848640a公开了地胆草内酯化合物在制备抗炎药物中的应用；中国专利cn111084773a公开了去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯在制备抗肺纤维化药物中的应用；文献1(xug,liangq,gongz,etal.antitumoractivitiesofthefoursesquiterpenelactonesfromelephantopusscaberl[j].exponcol,2006,28(2):106-9)对地胆草中提取分离得到的地胆草种内酯、异地胆草种内酯、去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯等化合物进行体外抗肿瘤细胞生长的活性检测。结果显示，地胆草中提取分离得到的地胆草种内酯、去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯具有明显的抗肿瘤活性；此外文献2(chanck,chang,awangk,etal.deoxyelephantopinfromelephantopusscaberinhibitshct116humancolorectalcarcinomacellgrowththroughapoptosisandcellcyclearrest[j].molecules,2016,21(3):385.)、文献3(mehmoodt,maryama,ghramhh,etal.deoxyelephantopinandisodeoxyelephantopinaspotentialanticanceragentswitheffectsonmultiplesignalingpathways[j].molecules,2017,22(6):1013.)以及文献4(vermass,raiv,awastheen,etal.isodeoxyelephantopin,asesquiterpenelactoneinducesrosgeneration,suppressesnf-kappabactivation,modulateslncrnaexpressionandexhibitactivitiesagainstbreastcancer[j].scirep,2019,9(1):17980)也公开了去氧地胆草内酯和异去氧地胆草内酯的抗肿瘤活性。综上所述，现有技术并未公开地胆草内酯化合物具有抗病毒作用，只是公开了其具有抗炎、抗肺纤维化以及抗肿瘤等作用。因此，本领域技术人员在上述现有技术的基础上，预料不到地胆草内酯化合物具有抗病毒作用，更预料不到地胆草内酯化合物具有抗rsv病毒作用，尤其是不能预料地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯具有抗rsv病毒作用。技术实现要素：为了克服现有技术中对抗rsv药物的开发不足，本发明提供地胆草内酯类化合物在制备具有抗呼吸道合胞病毒作用的药物中的应用。本发明的技术方案如下：本发明提供一种地胆草内酯类化合物在制备具有抗呼吸道合胞病毒作用的药物中的应用，所述的地胆草内酯类化合物选自地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯中的任意一种或一种以上的混合。优选地，所述的地胆草内酯类化合物选自异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯的混合；其中异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯的重量比为1～3:1。进一步优选地，其中异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯的重量比为2:1。优选地，所述的药物含有治疗有效量的地胆草内酯类化合物和药学上可接受的载体。优选地，所述的药物制成散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、气雾剂或注射剂。优选地，所述的地胆草内酯类化合物从地胆草或白花地胆草中分离得到。本发明还提供一种抗呼吸道合胞病毒的药物，其有效成分包含地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯中的任意一种或一种以上的混合。优选地，其有效成分包含异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯；其中异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯的重量比为1～3:1。进一步优选地，其中异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯的重量比为2:1。优选地，所述药物的剂型为散剂、丸剂、片剂、胶囊剂、口服液、气雾剂或注射剂。有益效果：本发明在研究过程中惊奇的发现地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯具有抗呼吸道合胞病毒的作用；首次提出了地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯在制备具有抗呼吸道合胞病毒作用的药物的用途；发明人进一步研究表明，异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯组合后具有协同抗呼吸道合胞病毒作用，将异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯组合后取得更加优异的抗呼吸道合胞病毒作用。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。实施例1地胆草内酯类化合物抗rsv活性研究采用空斑减数实验法测试地胆草内酯类化合物抗rsv活性，具体方法如下：(1)取hep-2细胞接种于24孔细胞培养板中(每孔接种1ml，细胞密度为2×105cell/ml)，接着置于37℃，5％co2培养箱中培养至长成细胞单层；(2)每孔加入100pfu/ml呼吸道合胞病毒悬液100μl，不同浓度药物100μl，同时设置细胞对照组和病毒对照组；置于37℃，5％co2培养箱中培养2h。每15min十字交叉轻轻摇晃，使病毒均匀充分的吸附并穿入细胞；(3)待病毒吸附2h后，吸弃病毒液，用pbs洗涤2次，各孔加入0.5ml琼脂糖凝胶覆盖液，待覆盖液凝固后，加入0.5ml对应浓度的药物，细胞对照组和病毒对照组加入等体积的维持液；(4)将24孔板置于细胞培养箱中培养4～5d后，加入10％甲醛固定过夜，弃去琼脂糖凝胶后，1％结晶紫染色30min，自来水轻轻冲洗24孔培养板，晾干并统计空斑数。计算样品的空斑抑制率，进而计算出半数抑制浓度ic50；空斑抑制率＝[(病毒组的空斑数-药物组的空斑数)/病毒组的空数]×100％。采用上述方法，测试如下实验组药物的抗呼吸道合胞病毒活性；测试结果见表1。实验组1：地胆草种内酯；实验组2：异地胆草种内酯；实验组3：异去氧地胆草内酯；实验组4：去氧地胆草内酯；实验组5：地胆草种内酯和异地胆草种内酯按质量比为1:1的组合；实验组6：地胆草种内酯和异去氧地胆草内酯按质量比为1:1的组合；实验组7：异地胆草种内酯和异去氧地胆草内酯按质量比为1:1的组合；实验组8：异地胆草种内酯和去氧地胆草内酯按质量比为1:1的组合；实验组9：异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯按质量比为1:1的组合；实验组10：异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯按质量比为2:1的组合；实验组11：异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯按质量比为3:1的组合。表1.地胆草内酯类化合物抗rsv活性测试结果实验组成分ic50(μg/ml)实验组1地胆草种内酯25.45实验组2异地胆草种内酯30.29实验组3异去氧地胆草内酯3.17实验组4去氧地胆草内酯10.25实验组5地胆草种内酯:异地胆草种内酯＝1:127.39实验组6地胆草种内酯:异去氧地胆草内酯＝1:115.39实验组7异地胆草种内酯:异去氧地胆草内酯＝1:117.22实验组8异地胆草种内酯:去氧地胆草内酯＝1:118.40实验组9异去氧地胆草内酯:去氧地胆草内酯＝1:11.62实验组10异去氧地胆草内酯:去氧地胆草内酯＝2:10.95实验组11异去氧地胆草内酯:去氧地胆草内酯＝3:11.37从表1实验组1～4的抗rsv活性测试结果中可以看出，地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯均具有一定的抗呼吸道合胞病毒作用；其中异去氧地胆草内酯显示了最佳的抗呼吸道合胞病毒作用，其对呼吸道合胞病毒的抑制作用要远远优于地胆草种内酯、异地胆草种内酯以及去氧地胆草内酯。从实验组5～11的抗rsv活性测试结果中可以看出：只有异去氧地胆草内酯和去氧地胆草内酯进行组合后才具备协同抗呼吸道合胞病毒作用；地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯之间的其它二者的组合并未显示出协同抗呼吸道合胞病毒作用。实施例2片剂的制备取地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯各1g，分别与微晶纤维素27g及硬脂酸镁2g混合，混合后用单冲压片机制成重量300mg/片的片剂。实施例3片剂的制备取异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯各0.5g，与微晶纤维素27g及硬脂酸镁2g混合，混合后用单冲压片机制成重量300mg/片的片剂。实施例4胶囊剂的制备取地胆草种内酯、异地胆草种内酯、异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯各1g，分别与乳糖27g及硬脂酸镁2g混合，以每300mg填充胶囊制成胶囊剂。实施例5胶囊剂的制备取异去氧地胆草内酯以及去氧地胆草内酯各0.5g，与乳糖27g及硬脂酸镁2g混合，以每300mg填充胶囊制成胶囊剂。当前第1页12