新木姜子碱在制备防治糖尿病并发症的药物中的应用

1.本发明属于生物医药领域，具体涉及新木姜子碱在制备防治糖尿病并发症的药物中的应用。


背景技术：

2.2型糖尿病是以高血糖为表征的代谢紊乱性疾病，常伴随胰岛功能相对不足或胰岛素抵抗。随着我国经济不断发展，人们的物质生活水平大幅提高，社会及生活环境的改变等复杂因素促使我国2型糖尿病患者数量逐年增加，已经严重影响着人们的健康和生活质量。2型糖尿病如果不能及时控制病情，常导致多种脏器组织出现严重的并发症，其中糖尿病肾病和肝损伤便是主要的并发症。
3.目前，临床上常用的二甲双胍，噻唑烷二酮类，磺酰脲类，dpp4抑制类等降糖药物能够很好的控制血糖，但无一例外，均无法改变糖尿病肾病的结局，无法改善糖尿病肾病患者的肾功能。与此同时，糖尿病引起的肝组织损伤(脂肪肝)也是糖尿病的主要并发症之一，临床上同样没有有效的治疗药物。临床上，糖尿病肾病以及糖尿病引起的脂肪肝均无有效治疗药物，开发研究新型的防治糖尿病肾病和糖尿病引起的脂肪肝并发症药物具有重要意义。
4.新木姜子碱(c
18h19
no4，(s)-5,6,6a,7-四氢-1,10-二甲氧基-4h-二苯并[de,g]喹啉-2,9-二醇，laurolitsine)，为阿朴菲类生物碱，分子结构如下：
[0005][0006]
新木姜子碱是由本团队从海南潺槁木树叶中分离鉴定得到的生物碱类化合物，并首次通过ob/ob肥胖小鼠动物模型发现了其具有一定的体内降糖效果，但对于其对糖尿病引起的并发症是否有效，并未见相关报道和研究。本发明首次采用db/db糖尿病小鼠动物模型进一步确证了新木姜子碱的抗糖尿病作用，并首次发现了新木姜子碱对糖尿病并发症的防治效果。


技术实现要素：

[0007]
本发明第一个方面是提供新木姜子碱在制备防治2型糖尿病并发症药物中的应用。
[0008]
进一步，所述的并发症为2型糖尿病引起的糖尿病肾病。
[0009]
进一步，所述的糖尿病肾病为肾小球细胞排列紊乱。
[0010]
进一步，所述的糖尿病肾病为肾小球体积增大。
[0011]
进一步，所述的糖尿病肾病为肾小球基底膜变厚及系膜区变宽。
[0012]
进一步，所述的并发症为2型糖尿病导致的胰岛素抵抗和糖耐量受损的药物中的应用。
[0013]
进一步，所述的并发症为2型糖尿病引起的肝组织病变。
[0014]
进一步，所述的肝组织病变为肝组织脂肪堆积。
[0015]
进一步，所述的肝组织病变为肝组织脂肪变性。
[0016]
本发明的有益效果：
[0017]
本发明基于2型糖尿病小鼠模型试验，发现新木姜子碱具有显著降低空腹血糖和改善胰岛素抵抗和糖耐量受损，改善由2型糖尿病引起的肾脏病变和肝脏病变，对糖尿病肾病及肝组织病变具有显著的预防和治疗具作用。
[0018]
新木姜子对于2型糖尿病并发症的疗效具体包括：
[0019]
(1)新木姜子碱能够显著的降低2型糖尿病模型小鼠的空腹血糖。
[0020]
(2)新木姜子碱能够改善2型糖尿病小鼠引起的胰岛素抵抗和糖耐量受损，改善糖尿病对肾脏和肝组织的破坏，改善或缓解并发症的进展。
[0021]
(3)新木姜子碱对2型糖尿病小鼠引起的肝脏脂肪变性，改善组织组内脂肪积蓄，保护肝功能。
[0022]
(4)新木姜子碱能够改善2型糖尿病小鼠肾脏的病理变化，肾小球细胞排列明显整齐，肾小球相对于模型组明显减小，基底膜也变薄，系膜区变窄，显示出明显的肾保护作用，提示新木姜子碱可用于糖尿病肾病的防治。
附图说明
[0023]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0024]
图1为新木姜子碱改善糖尿病db/db小鼠的胰岛素抵抗和糖耐量实验结果。(a)口服糖耐量实验结果(ogtt)；(b)胰岛素抵抗实验结果(itt)；(c)ogtt曲线的曲线下面积(auc)统计结果；(d)itt曲线的曲线下面积(auc)统计结果。
[0025]
图2为肝组织he染色病理结果；
[0026]
图3为肝组织脂肪变性病理评分结果(***p＜0.001与正常对照组相比较；#p＜0.05与模型组相比较)；
[0027]
图4为肾组织he染色病理结果。
具体实施方式
[0028]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0029]
实施例1
[0030]
新木姜子碱的提取
[0031]
本实施例中以潺槁树(litsea glutinosa(lour.)c.b.rob.)的树皮为原材料制备新木姜子碱。具体步骤如下。
[0032]
将潺槁树的树皮晒干、切碎，以95％乙醇为溶剂，采用回流加热装置提取原料成分，重复提取3次，每次2小时；使用旋转蒸发仪减压回收溶剂，直至蒸干乙醇味消失。加适量水溶解，选用石油醚萃取3次，除去其脂溶性成分，继续选用正丁醇萃取3次，旋转蒸发仪减压浓缩后得到潺槁树皮正丁醇萃取物浸膏；称取50g潺槁树浸膏于烧杯中，用150ml二氯甲烷溶解均匀；上样至高100cm，直径8cm的硅胶柱内，以二氯甲烷：甲醇(4:1)为溶剂进行洗脱。收集洗脱液，经过高效液相色谱检测，确定含有新木姜子碱的流份；再通过sephadex lh-20凝胶柱分离，甲醇洗脱。将经检测确定含有新木姜子碱的流份进一步通过半制备高效液相色谱法分离，色谱柱为安捷伦半制备色谱柱(5μm，2.5mm
×
25.0cm)，流动相为甲醇-水(52:48)进行分离，并经hplc及nmr检测鉴定纯度。
[0033]
经纯度检测，采用上述方法，从潺槁树皮中分离得到的新木姜子碱纯度达到99.5％。将上述制得的新木姜子碱用于治疗效果的检测。
[0034]
实施例2
[0035]
新木姜子碱对实验性2型糖尿病db/db小鼠的治疗效果。
[0036]
(1)案例实施方法：
[0037]
新木姜子碱采用实施例1中制得的新木姜子碱。
[0038]
以高脂饲料诱导的db/db小鼠构建2型糖尿病动物模型。通过高脂饲料诱导db/db小鼠发生2型糖尿病，选择空腹血糖高于11.1mm的小鼠用于后续的新木姜子碱干预治疗研究。
[0039]
将造模成功的db/db小鼠分为模型组(饲喂高脂料)，给药组(给予新木姜子碱)(低剂量组50mg/kg/d，中剂量组100mg/kg/d，高剂量组200mg/kg/d)(饲喂高脂料)，阳性药二甲双胍组(剂量为200mg/kg)(饲喂高脂料)，并以c57bl/ksj为正常对照组(基础饲料)，每组10只。新木姜子碱和二甲双胍溶于0.1％羧甲基纤维素钠溶液灌胃给药，模型组和正常对照组灌胃等体积的羧甲基纤维素钠溶液，自由采食，自由饮水。持续造模并给药4周，测定空腹血糖，ogtt和itt试验，并取血浆(分离血清)和肝组织分别用于后续检测。
[0040]
(2)血液理化指标检查：包括空腹血糖(fbg)，谷丙转氨酶(alt)，谷草转氨酶(ast)，甘油三脂(tg)含量；
[0041]
(3)病理检查：取各组肝脏和肾脏，用4％甲醛固定，分别修块，经梯度酒精脱水，石蜡包埋，切片(厚度5μm)，he染色，光镜观察并进行评分。
[0042]
(4)统计分析：所有计量资料均以x
±
s表示，组间比较采用t检验。
[0043]
(5)试验结果：
[0044]
1.正常对照组：空腹血糖为6.52
±
1.13mm(表1)，胰岛素敏感性及糖耐量正常(图1)，肝组织及肾组织he染色病理检测结果显示结果清晰正常(图2，3)；
[0045]
2.模型组：与正常组对照组相比，空腹血糖显著升高，达到31.85
±
1.54mm(表1)；模型组小鼠表现出显著的胰岛素抵抗和糖耐量受损(图1)；肝组织病理结果显示，模型组肝脏出现了严重的脂肪积蓄，血清中tg含量也显著高于正常对照组(表1)，肝组织病理切片he染色能观察到显著的大泡样脂肪变性和小泡样脂肪变性(图2)，表明2型糖尿病小鼠高血糖
状态已对肝组织细胞造成一定的损伤，并引起血液alt，ast指标显著升高(表1)，显示模型组小鼠肝功能受损。于此同时，肾组织he染色病理观察到明显的肾小球肥大，基底膜增厚，系膜区增宽的异常病理改变(图4)。
[0046]
3.给药组(50mg/kg/d，100mg/kg/d，200mg/kg/d)：经高(200mg/kg/d)、中(100mg/kg/d)和低(20mg/kg/d)剂量组的新木姜子碱治疗后，给药组空腹血糖的水平，尤其高剂量组，显著低于模型组，降至27.60
±
3.84mm(表1)，且呈现剂量依赖性的降低(表1)。同时，ogtt和itt实验结果显示，新木姜子碱还能够显著改善糖尿病小鼠的胰岛素抵抗和糖耐量受损(图1)，改善肝组织的脂肪积蓄和变性(图1)，保护肝功能(表1)；而肾组织he染色结果表明，新木姜子碱治疗组肾组织病理改变相对于模型组明显好转，表现为肾小球细胞排列明显整齐，肾小球相对于模型组明显减小，基底膜也变薄，系膜区变窄，表现出明显的改善肾组织病理情况(图4)。
[0047]
以上结果表明，新木姜子碱具有显著的降糖，改善胰岛素抵抗和糖耐量及保护肝功能和肾功能的作用，具有潜在开发为抗糖尿病并发症，特别是糖尿病肾病及肝组织病变药物潜力。
[0048]
表1.新木姜子碱体内降糖效果
[0049][0050]
注：数值为mean
±
sem，每组n＝10，***p《0.001与正常对照组比较；#p《0.05,##p《0.01与模型组比较。
[0051]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。