α-环糊精在制备改善和保护胰岛功能方面的功能食品或保健品及药物中的应用的制作方法

1.本发明属于α-环糊精的应用技术领域，具体涉及α-环糊精在制备改善和保护胰岛功能方面的功能食品或保健品及药物中的应用。


背景技术：

2.胰岛是分散于胰腺内部的内分泌组织，主要由分泌胰岛素的β-细胞和分泌胰高糖素的α-细胞组成，在调节人体血糖稳态中发挥了关键作用。正常人的血糖可以在空腹和餐后维持在一个比较稳定的水平，就是因为体内升糖激素(胰高血糖素)以及降糖激素(胰岛素)共同调节的结果。胰岛素是体内最重要的降糖激素，它的分泌数量、分泌时间以及发挥功能的情况会直接决定血糖水平的高低，所以胰岛功能的改变对于糖尿病的发病、病情和严重程度有重要的决定作用。
3.α-环糊精(α-cd)是一种由6个葡萄糖单位组成的环状结构聚合物，极性羟基向外。环的核心是疏水的，容易与各种疏水化合物结合，包括游离脂肪酸。美国农业部基于广泛的临床实验数据从官方的角度认可了α-cd对人体的安全性。α-cd具有优良的理化特性，可被用于多个领域。目前相对比较成熟和被广泛接受的应用领域包括，将其作为可溶性膳食纤维或改善代谢综合征方面的素材用于功能性食品、药物辅料等领域。
4.目前，在所公开的文献中，尚未有关于α-环糊精在改善和保护胰岛功能方面的应用及研究。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的问题和提出的技术方案是对现有技术的改进，提供了一种α-环糊精在制备改善和保护胰岛功能方面的功能食品或保健品及药物中的应用。本发明利用高脂饲料饲喂c57bl/6小鼠18周，模拟人体肥胖及糖尿病发病进程，同时用α-环糊精干预18周，研究其对高脂饮食小鼠胰岛功能的影响。
6.本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
7.本发明提供了一种α-环糊精在制备改善和保护胰岛功能方面的功能食品或保健品中的应用。
8.优选地，所述功能食品或保健品为改善胰岛功能，降低血糖浓度的功能食品或保健品。
9.优选地，所述功能食品或保健品中α-环糊精的添加量为0.5～30％。
10.优选地，所述功能食品或保健品的剂型为混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、溶液剂中的任意一种。
11.本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
12.本发明提供了一种α-环糊精在制备改善和保护胰岛功能方面的药物中的应用。
13.优选地，所述药物为改善胰岛功能，降低血糖浓度的药物。
14.优选地，所述药物中α-环糊精的添加量为0.5～30％。
15.优选地，所述药物的剂型为口服制剂。
16.优选地，所述口服制剂为片剂、丸剂、颗粒剂、口服液或胶囊剂。
17.综上所述，本发明具有以下有益效果：本发明通过高脂饮食诱导小鼠的葡萄糖耐量严重受损，并通过α-环糊精干预后，在一定程度上改善严重受损的糖耐量。进一步研究发现，高脂饮食组的小鼠存在明显的胰岛功能受损的现象，而通过α-环糊精干预组小鼠的胰岛功能明显改善。本发明的研究发现，α-环糊精干预能通过保护及改善高脂饮食导致的肥胖及糖尿病小鼠的胰岛功能，从而达到改善受损的葡萄糖耐量的作用。
18.上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。
附图说明
19.下面结合附图对本发明进一步说明，其中：
20.图1为葡萄糖耐量实验：小鼠腹腔注射葡萄糖前后血糖变化曲线；
21.图2示出了不同喂养条件下小鼠胰岛细胞分泌胰岛素情况；
22.图3示出了不同喂养条件下小鼠胰岛细胞分泌胰岛素情况。
23.附图中，nf为正常饮食组；hf为高脂饮食组；hf+α-cd为高脂饮食+α-环糊精组。
具体实施方式
24.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。需要说明的是，附图仅为示例性说明，并未按照严格比例绘制，而且其中可能有为描述便利而进行局部放大、缩小，对于公知部分亦可能有一定缺省。
25.实施例1实验准备
26.在本实施利中所选取的实验小鼠为5周龄雄性c57bl/6小鼠，购自南京集萃药康生物科技有限公司，实验动物生产许可证号为scxk(苏)2018-0008。
27.实验所用模型饲料代码tp23400，由南通特洛菲饲料科技有限公司提供。其中，高脂饲料供能比：脂肪60％，碳水化合物25.9％，蛋白质14.1％；普通饲料供能比：脂肪10％，碳水化合物75.9％，蛋白质14.1％。
28.具体方法为：将小鼠按每笼3～4只分笼饲养，动物房内通风条件良好，灯光正常昼夜变化(8:00am～8:00pm)，相对湿度保持为40％～70％，室温在23
±
2℃，适应性喂养1周后，随机分为如下3组：(1)正常饮食组(普通饲料，nf，n＝12)；(2)高脂饮食组(高脂饲料，hf，n＝12)；(3)高脂饮食+α-环糊精组(高脂饲料，饮水添加5％α-环糊精，hf+α-cd，n＝12)。实验连续进行18周。所有小鼠在实验期间自由饮食饮水。
29.实施例2葡萄糖耐量实验
30.三组小鼠饲养到第18周时，过夜禁食12小时，按照剂量(2g/kg体重)及每克体重给11.1ul的剂量将葡萄糖行腹腔注射给药，注射完成后分别在0、30min、60min、90min、120min和150min取尾尖血检测血糖。结果见附图1。
31.实施例3胰岛灌流实验
32.一、胰岛分离、纯化及培养：
33.小鼠用盐酸替来他明麻醉后取血，之后处死，小鼠固定于平板上，打开腹腔，暴露胰腺，用止血钳封闭胰腺导管汇入十二指肠入口处，之后在胰腺导管内注射2mg/ml胶原酶(v型)，胶原酶溶解于hanks缓冲液中。之后剥离胰腺，置于50ml离心管内，再加入5ml胶原酶(2mg/ml)，在37℃水浴内手动震荡5分钟。之后加40ml hanks缓冲液，离心，弃上清，沉淀重新悬浮后置于平皿内，在解剖显微镜下手动挑捡胰岛，之后培养于rpmi1640培养液(10mm葡萄糖，10％fbs，2mm谷氨酰胺，抗菌素1％，ph 7.4)，过夜培养。小鼠胰岛每只单独分离纯化。
34.二、胰岛灌流实验：
35.葡萄糖刺激胰岛素分泌(葡萄糖浓度从0到25mm，浓度梯度爬坡，每分钟增加0.5mm)，缓冲液为krebs-ringer bicabonate buffer(krbb)(115mmol/l nacl,24mmol/lnahco3,5mmol/l kcl,1mmol/l mgcl2,2.5mmol/l cacl2,10mm hepes,ph7.4)加0.25％bsa，灌流流量1ml/min。手动捡120个胰岛，置于灌流器内，用waters 600hplc泵驱动灌流，同时用分样收集器每分钟收集一个样品，最后胰岛接受30mm kcl刺激。样品的胰岛素测定采用cisbio公司的胰岛素检测试剂盒。结果见附图2和3。
36.实施例4结果及分析
37.1.α-环糊精干预能改善高脂饮食小鼠的葡萄糖耐量：
38.首先，过夜空腹小鼠的基础血糖值显示，高脂饮食小鼠空腹血糖(15mmol/l)明显高于正常饮食小鼠血糖(7.8mmol/l)，α-环糊精干预对空腹血糖没有明显的影响。在给过夜空腹小鼠腹腔注射葡萄糖30min后，hf组小鼠血糖迅速上升，并且明显高于同时段的nf组(p《0.01)。之后，nf组小鼠血糖逐渐下降，而hf组小鼠的血糖在30到90min之间一直维持在高水平，120min和150min才缓慢下降，提示高脂饮食造成小鼠的葡萄糖耐量严重受损。α-环糊精干预组(hf+α-cd)小鼠表现为90min时的血糖即开始下降，并在120min和150min显著低于hf对照(见图1)。实验证明，长期高脂饮食能模拟人体糖尿病的进展情况，小鼠出现明显的糖耐量异常，α-环糊精干预能在一定程度上改善严重受损的糖耐量。
39.2.α-环糊精干预能明显改善胰岛功能：
40.在18周实验结束后，通过分离了小鼠的胰岛，过夜培养后，通过胰岛灌流实验评估了葡萄糖刺激的胰岛素分泌，结果显示，高脂饮食糖尿病小鼠的胰岛细胞在葡萄糖刺激后，胰岛素的分泌量大约只有nf组小鼠的一半(见图2)，提示高脂饮食小鼠存在明显的胰岛功能受损的现象。α-环糊精干预组小鼠的胰岛功能明显改善(见图3)，与活体实验的葡萄糖耐量的改善基本吻合，显示高脂饮食小鼠糖耐量异常与胰岛分泌胰岛素的功能受损有关，而长时间的α-环糊精干预能改善胰岛功能，改善糖耐量。
41.总之，α-环糊精干预能通过保护及改善高脂饮食导致的肥胖及糖尿病小鼠的胰岛功能，从而达到改善受损的葡萄糖耐量的作用。
42.以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为发明的具体实施方式而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化与修饰，均属于发明技术方案的范围内。