艾地苯醌与他汀类药物联用在防治动脉粥样硬化中的应用

本发明属于医药技术领域，具体涉及艾地苯醌与他汀类药物联用在防治动脉粥样硬化中的应用。

背景技术：

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

目前，动脉粥样硬化是一种慢性的炎症性疾病，是大多数心脑血管疾病的病理基础，它是造成现代社会人类寿命缩短的最主要的原因之一。根据世界卫生组织调查研究表明，每年因心脑血管疾病而导致的死亡人数约占全球死亡人数的30％，动脉粥样硬化性血管疾病死亡率的上升是心血管疾病死亡率上升的主要原因。动脉粥样硬化使动脉血管内膜厚度增加，而内膜的增厚是由于血管平滑肌细胞的大量增加，这些血管平滑肌细胞形成新的结缔组织，从而导致高血脂症个体细胞内和细胞外的脂质积累，目前主要的治疗动脉粥样硬化的药物为降脂类药物。

他汀类药物上市以来，全世界仅有600万人用过，它从2002年开始进入中国药品市场，目前有多种他汀类药物在中国医药市场上出售。国内外相关研究陆续报道他汀类药物在降脂的同时，也带来了肝功下降、肌肉疼痛等毒副作用。人们关注的仅仅是他汀类药物对人有利的一面，其副作用并没有引起国人的重视。

最近研究表明，血管内皮细胞可以通过多种途径和机制来调节线粒体功能以及稳态，包括蛋白质输入、蛋白质折叠和降解、抗氧化防御、线粒体代谢、线粒体生物合成、线粒体嵴重塑、线粒体的形态改变以及与核协同的转录反应。在某些因素作用下，线粒体形态结构破坏、线粒体dna突变、atp合成减少、钙稳态失衡、氧化应激产物积聚及代谢功能障碍，称之为线粒体损伤。近年来的研究表明，动脉粥样硬化的危险因素如高脂、高糖、炎症等都可以引发线粒体损伤，从而促进动脉粥样硬化的发生发展。此外，氧化低密度脂蛋白通过诱导线粒体ros(reactiveoxygenspecies)生成，从而促进线粒体的氧化应激和炎症反应，其在动脉粥样硬化的形成和进展中也具有关键作用。目前，一些线粒体保护药物和抗氧化剂也参与到了抗动脉粥样硬化的研究中。

技术实现要素：

针对现有技术存在的不足，本发明提供艾地苯醌与他汀类药物联用在防治动脉粥样硬化中的应用。本发明通过研究发现，艾地苯醌联合他汀较两者单用可以进一步减少斑块形成，增加斑块的稳定性，同时艾地苯醌还可以显著改善他汀类药物治疗动脉粥样硬化的过程中产生的肌肉毒性。基于上述研究，从而完成本发明。

具体的，本发明涉及以下技术方案：

本发明的第一个方面，提供艾地苯醌联合他汀类药物在制备预防和/或治疗动脉粥样硬化药物中的应用。

根据本发明，“预防和/或治疗”的概念表示任一适用于治疗动脉粥样硬化及相关疾病的措施，或者对于这种表现的疾病或所表现出来的症状进行预防性治疗，或者避免这种疾病的复发，例如在结束了治疗时间段之后的复发或对已经发作的疾病的症状进行治疗，或预先介入性的防止或抑制或减少该类疾病或症状的发生。

因此，本发明的第二个方面，提供上述艾地苯醌联合他汀类药物在制备减少动脉粥样硬化斑块形成和/或提高斑块稳定性药物中的应用。

本发明的第三个方面，提供上述艾地苯醌联合他汀类药物在制备改善在预防和/或治疗动脉粥样硬化中他汀类药物产生毒副作用的药物中的应用。

本发明的第四个方面，提供一种药物组合物，其活性成分包含艾地苯醌和他汀类药物。

所述药物组合物具有预防和/或治疗动脉粥样硬化的作用，具体表现为：

1)减少动脉粥样硬化斑块形成，提高斑块稳定性；

2)改善在预防和/或治疗动脉粥样硬化中他汀类药物产生的毒副作用。

本发明的第五个方面，提供一种药物制剂，所述药物制剂由上述药物组合物和一种或多种药学上或食品学上可接受的辅料组成。

以上一个或多个技术方案的有益技术效果：

上述技术方案首次报道了将艾地苯醌与他汀类药物进行联用用于治疗动脉粥样硬化，经试验验证，二者联用不仅能够有效延缓动脉粥样硬化的发生发展，减少动脉粥样硬化斑块形成，提高斑块稳定性；同时艾地苯醌可以有效改善他汀类药物治疗动脉粥样硬化的过程中产生的肌肉毒性(包括肌痛及肌肉损伤)，因此二者联用产生了良好的协同作用，成为干预动脉粥样硬化潜在的治疗方案，具有良好的实际推广应用之价值。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1为本发明实施例中各组大体油红o染色显示斑块负荷情况；

图2为本发明实施例中he染色显示各组小鼠主动脉根部斑块大小；

图3为本发明实施例中油红o染色显示斑块内脂质含量；

图4为本发明实施例中天狼星红染色显示斑块内胶原含量；

图5为本发明实施例中α-sma染色显示斑块内平滑肌含量；

图6为本发明实施例中cd68染色显示斑块内炎症因子含量；

图7为本发明实施例中各组小鼠前臂拉力统计图；

图8为本发明实施例中各组小鼠悬挂时间统计图；

图9为本发明实施例中各组小鼠血清肌酸激酶水平统计图；

图10为本发明实施例中he染色显示各组小鼠肌纤维平均横截面积图；

图11为本发明实施例中mgt染色显示各组小鼠肌纤维内破碎红(rrf)水平图；

图12为本发明实施例中sdh染色显示各组小鼠肌纤维sdh酶活性图；

图13为本发明实施例cox染色显示各组小鼠肌纤维cox酶活性图；

图14为本发明实施例中pas染色显示各组小鼠肌纤维糖原含量图。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

本发明的一个具体实施方式中，提供艾地苯醌联合他汀类药物在制备预防和/或治疗动脉粥样硬化药物中的应用。

根据本发明，“预防和/或治疗”的概念表示任一适用于治疗动脉粥样硬化及相关疾病的措施，或者对于这种表现的疾病或所表现出来的症状进行预防性治疗，或者避免这种疾病的复发，例如在结束了治疗时间段之后的复发或对已经发作的疾病的症状进行治疗，或预先介入性的防止或抑制或减少该类疾病或症状的发生。

本发明的又一具体实施方式中，所述他汀类药物包括但不限于辛伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀和瑞舒伐他汀，优选为瑞舒伐他汀。

本发明的又一具体实施方式中，艾地苯醌与他汀类药物的质量比为40：0.5～5，优选为40：1～2，如40：1或40：2。

本发明的又一具体实施方式中，所述预防和/或治疗动脉粥样硬化具体表现在：

1)减少动脉粥样硬化斑块形成，提高斑块稳定性；

2)改善在预防和/或治疗动脉粥样硬化中他汀类药物产生的毒副作用。

本发明的又一具体实施方式中，所述毒副作用包括肝毒性(如导致受试者肝功下降)和肌肉毒性(如导致受试者肌肉疼痛、肌肉损伤)。

本发明的又一具体实施方式中，提供上述艾地苯醌联合他汀类药物在制备减少动脉粥样硬化斑块形成和/或提高斑块稳定性药物中的应用。

本发明的又一具体实施方式中，提供上述艾地苯醌联合他汀类药物在制备改善在预防和/或治疗动脉粥样硬化中他汀类药物产生毒副作用的药物中的应用。

本发明的又一具体实施方式中，提供一种药物组合物，其活性成分包含艾地苯醌和他汀类药物。

所述药物组合物具有预防和/或治疗动脉粥样硬化的作用，具体表现为：

1)减少动脉粥样硬化斑块形成，提高斑块稳定性；

2)改善在预防和/或治疗动脉粥样硬化中他汀类药物产生的毒副作用。

其中，艾地苯醌与他汀类药物的质量比为40：0.5～5，优选为40：1～2，如40：1或40：2。

本发明的又一具体实施方式中，提供一种药物制剂，所述药物制剂由上述药物组合物和一种或多种药学上或食品学上可接受的辅料组成。

本发明的又一具体实施方式中，所用辅料可为固态或液态。固态形式的制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒、胶囊、药丸及栓剂。适当的固体辅料可以是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖或者乳糖。片剂、粉剂、药丸及胶囊为适于口服用的固态剂型。液态形式的制剂包括溶液、悬浮液及乳液，其实施例为非经肠注射用水溶液或水-丙二醇溶液，或添加甜味剂及造影剂的口服溶液。此外，还可制成注射用小水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。

以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例

一、实验设计

1.将apoe-/-小鼠随机分成四组，分别给予不同的饲料喂养：(1)高脂饮食组；(2)高脂饮食+艾地苯醌(400mg/kg/d)组；(3)高脂饮食+瑞舒伐他汀(10mg/kg/d)组；(4)高脂饮食+艾地苯醌(400mg/kg/d)+瑞舒伐他汀(10mg/kg/d)组。饲养于山东大学动物实验中心，小鼠的饲养环境为湿度控制在24℃左右，12小时光照周期模拟正常的昼夜生理规律，饮食和饮水不限。不同药物组干预16周后，所有小鼠行安乐死，留取各组小鼠血液及组织标本。本动物实验的实验设计及动物处理过程均严格遵循山东大学动物实验伦理委员会的规章制度。

2.将高脂饮食喂养的apoe-/-小鼠随机分成四组：(1)静止组；(2)运动组；(3)运动+辛伐他汀(20mg/kg/d)组；(4)运动+艾地苯醌(400mg/kg/d)组；(5)运动+辛伐他汀(20mg/kg/d)+艾地苯醌(400mg/kg/d)组。饲养于山东大学动物实验中心，小鼠的饲养环境为湿度控制在24℃左右，12小时光照周期模拟正常的昼夜生理规律，饮食和饮水不限。运动模式为每天以13米/min的速度在跑步机上跑30min，每周训练5天。不同干预组在干预8周后行运动耐量及前臂抓力测验。所有小鼠行安乐死，留取各组小鼠血液及组织标本。本动物实验的实验设计及动物处理过程均严格遵循山东大学动物实验伦理委员会的规章制度。

二、试验结果

1.艾地苯醌联合他汀抗动脉粥样硬化的疗效分析

(1)大体油红o染色检测各实验组小鼠的主动脉斑块负荷，与高脂饮食组相比，艾地苯醌干预组、瑞舒伐他汀干预组和艾地苯醌联合瑞舒伐他汀组均可以明显降低斑块负荷，具有统计学意义。而两者联用组相较于单用组有进一步降低斑块负荷的趋势(图1)。

(2)主动脉根部病理切片组织病理及免疫组织化学染色分析斑块大小及斑块成分，he染色显示与高脂饮食组相比，单用艾地苯醌、单用瑞舒伐他汀或者两者联用都能明显减小斑块面积(图2)。油红o染色、天狼星红染色、α-sma染色、cd68染色可以分别显示斑块内部脂质、胶原、平滑肌以及炎症因子的含量，斑块内的不同成分会影响斑块的稳定性。研究结果显示单用艾地苯醌、单用瑞舒伐他汀或者两者联用都能明显减少主动脉根部斑块内的脂质含量(图3)。联用艾地苯醌和瑞舒伐他汀可以明显增加斑块内的胶原和平滑肌的含量(图4、图5)。单用艾地苯醌、单用瑞舒伐他汀或者两者联用均可以明显减少斑块内的炎症因子，而且联用组与单用瑞舒伐他汀组之间的差异也有统计学意义(图6)，说明在减轻炎症、稳定斑块方面，联用艾地苯醌和瑞舒伐他汀更具有优势。

综合以上结果可以得出结论艾地苯醌联合瑞舒伐他汀相较于单用组可以明显减少动脉粥样硬化斑块生成，同时改善斑块成分，增加斑块稳定性，减少心脑血管不良事件的发生。

2.艾地苯醌减轻他汀相关肌肉毒性

(1)运动能力：8周造模结束后，首先用小鼠抓力仪测量各组小鼠的前臂抓力，经过统计分析发现，相较于运动组，运动+辛伐他汀组小鼠的前臂抓力明显减弱，而加用艾地苯醌组相较于辛伐他汀组抓力明显恢复(图7)。然后用悬挂实验检测各组小鼠的悬挂时间作为运动耐量的指标，统计结果显示相较于运动组，运动+辛伐他汀组的悬挂时间显著缩短，而使用了艾地苯醌(400mg/kg/d)后，小鼠的悬挂时间延长了(图8)。

(2)血清肌酸激酶水平：血清肌酸激酶水平是临床常用的反映肌肉损伤的指标。在造模结束后，抽取各组小鼠的心尖血，检测肌酸激酶水平，发现运动+辛伐他汀组小鼠的肌酸激酶水平较运动组小鼠明显上升，而加用艾地苯醌后，小鼠的肌酸激酶水平有所下降(图9)。验证了艾地苯醌对他汀相关肌肉毒性的保护作用。

(3)肌肉病理染色：随机选取每只小鼠腓肠肌肌肉切片he染色的5个视野，计算出肌纤维的平均横截面积进行比较，相较于运动组，运动+辛伐他汀组的小鼠肌纤维平均横截面积显著减小，而运动+辛伐他汀+艾地苯醌(400mg/kg/d)组小鼠的肌纤维平均横截面积较运动+辛伐他汀组显著增大(图10)，说明了辛伐他汀的使用可以造成肌纤维萎缩，而使用艾地苯醌则可以改善他汀带来的损伤。mgt染色中破碎红(rrf)水平可以反映线粒体损伤水平，随机选取每张切片中的5个视野计算rrf比例，相较于运动组，运动+辛伐他汀组的rrf比例明显增加，而运动+辛伐他汀+艾地苯醌(400mg/kg/d)组的rrf比例相较于运动+辛伐他汀组明显下降(图11)，提示艾地苯醌对线粒体有明确的保护作用。琥珀酸脱氢酶(sdh)和环氧化酶(cox)在线粒体氧化呼吸链中起着重要的作用，通过sdh和cox染色可以显示肌纤维线粒体内这两种酶的活性。结果显示运动+辛伐他汀组的sdh活性较运动组明显下降，而运动+辛伐他汀+艾地苯醌(400mg/kg/d)组的sdh活性较运动+辛伐他汀组明显增强(图12)，提示艾地苯醌可以显著提高线粒体sdh活性。运动+辛伐他汀组的cox活性较运动组明显下降，而运动+辛伐他汀+艾地苯醌(400mg/kg/d)组的cox活性较运动+辛伐他汀组有增强趋势(图13)，提示艾地苯醌可以提高线粒体cox活性。pas染色可以显示肌纤维内的糖原水平，颜色越深，提示肌纤维内的糖原含量越高。运动+辛伐他汀组的糖原含量较运动组明显减少，而运动+辛伐他汀+艾地苯醌(400mg/kg/d)组的糖原含量较运动+辛伐他汀组明显增加(图14)，提示艾地苯醌有可能会影响糖代谢水平。

综合以上结果可以说明他汀能够造成肌肉损伤，而艾地苯醌可以通过保护线粒体功能改善他汀造成的肌肉损伤。

结合上面两部分的结果，我们可以得出结论：一方面，艾地苯醌联合他汀能够达到更好的抗动脉粥样硬化疗效；另一方面，艾地苯醌联合他汀能够减轻他汀抗动脉粥样硬化带来的肌肉毒性。因此相较于单组用药，两者联合有可能成为动脉粥样硬化的潜在治疗方案。

综上可知：

1、大剂量的艾地苯醌(400mg/kg/d)在apoe-/-动脉粥样硬化模型小鼠中有很好的耐受性和安全性；

2、本发明首次证明了艾地苯醌和瑞舒伐他汀联合用药可以有效地延缓主动脉斑块的形成，增强斑块的稳定性，对改善动脉粥样硬化的发生发展起到了关键性作用。

3、本发明首次证明了艾地苯醌通过改善线粒体功能改善他汀相关肌肉损伤的作用。

4、艾地苯醌与瑞舒伐他汀联合用药成为干预动脉粥样硬化潜在的治疗方案。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。