一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶及其制备方法和应用

1.本发明涉及日用护肤品技术领域，尤其涉及一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶及其制备方法和应用。


背景技术：

2.铁皮石斛(dendrobium officinale)来源于兰科石斛属的多种植物，是最大的兰科属之一，广泛分布于亚洲热带和亚热带地区。我国主产于四川、贵州、云南及长江流域等地。铁皮石斛是传统中药中的名贵药材，具有养胃生津、益肝明目、补肾润肺、强身健体的作用。研究表明，多糖是铁皮石斛中重要组成成分，石斛多糖具有提高免疫力、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等广泛的生物学活性。(郭冕等人.石斛多糖药理作用的研究概况[j].医学综述,2015,21(24):4525
‑
4528.)
[0003]
黄芪为豆科植物膜夹黄芪(astragalus membranaceus)的干燥根，始载于《神农本草经》，具有益气养阳、益肺健脾、保肝利尿等功效。黄芪含有多糖、蛋白质、生物碱、氨基酸、黄酮及微量元素等多种活性物质。黄芪多糖是黄芪主要的活性成分之一，可作为免疫增强剂，激活动物免疫系统，在抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、控制血糖、改善心血管功能等方面具有重要作用。(盛耀光,刘少静,马秀,路荣荣,王琳,杨敏敏.黄芪多糖的药理作用及剂型研究进展[j].广州化工,2019,47(15):28
‑
30.)
[0004]
今年来凝胶化妆品发展迅速，因为凝胶这种特殊的外用剂型具有诸多优点，其在医药领域越来越多的凝胶化妆品做成药物化妆品，也即“药妆”。我国中药资源丰富，品种众多，用途广泛，且目前开发天然植物化妆品已经成为世界潮流，将中药添加入化妆品以增加功效，是我国发展化妆品的最有前景的途径。凝胶技术的应用同时可以帮助使之质量可控，从而规范药用化妆品的发展。
[0005]
凝胶化妆品的优势：凝胶化妆品创造性地采用凝胶剂作为化妆品的使用剂型，吸收性能好，适用于皮肤。凝胶化妆品中一般均可选择性添加透皮吸收促进剂，促使护肤制剂吸收加快和完全，较快地发挥功效。这些年凝胶化妆品的制备工艺快速发展，所能容纳的化妆品类型较广，如化妆品的结晶或粉末、中药材细粉或提取物等。但是目前市场上并未发现一款良好疗效且副作用小的复合凝胶制剂。因此，本发明采用球磨方法辅助技术尽可能保留铁皮石斛有效成分，拓展铁皮石斛和黄芪的应用领域，充分发挥铁皮石斛和黄芪药效，并制备一种具有良好疗效的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合凝胶制剂。


技术实现要素：

[0006]
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的在于提供一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶及其制备方法和应用，本发明对铁皮石斛和黄芪提供球磨方法辅助提取，尽可能保留铁皮石斛和黄芪的更多有效成分，扩展其复合多糖的应用领域，充分发挥铁皮石斛和黄芪的药效价值。
[0007]
所述的一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，其特征在于其制剂处方以铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合多糖为主要药物；按照质量比例，其制剂的组成百分比为：主要药物1％
‑
2％、凝胶基质0.5％
‑
1.8％、促皮渗透剂5％
‑
15％、保湿剂5％
‑
10％、抗氧化剂1％
‑
2％、防腐剂0.1％
‑
0.2％、余量为水，用ph调节剂调节ph值为6。
[0008]
所述的一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，其特征在于所述凝胶基质选自阿拉伯胶、明胶、卡波姆980、海藻酸钠、cmc
‑
na、hpmc中的至少一种，优选为卡波姆980。
[0009]
所述的一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，其特征在于所述保湿剂选自1,2
‑
丙二醇、甘油中至少一种，优选为1,2
‑
丙二醇。
[0010]
所述的一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，其特征在于所述促皮渗透剂选自二乙二醇单乙醚。
[0011]
所述的一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，其特征在于所述防腐剂选自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、苯甲酸钠中的至少一种，优选为尼泊金甲酯。
[0012]
所述的一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，其特征在于所述抗氧化剂由维生素c和维生素e组成，维生素c和维生素e的质量比为1:1。
[0013]
所述的一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，其特征在于所述ph调节剂选自氢氧化钠或柠檬酸，优选氢氧化钠。
[0014]
所述的一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的制备方法，其特征在于按组成配方，包括以下步骤：
[0015]
1)将铁皮石斛茎和黄芪根干燥至恒重，粉碎、过筛，然后按照1:1的质量比置于行星式球磨仪中，球磨转速为300rpm，球磨时间为5min，以加入的不锈钢球磨珠总体积与球磨罐容积的比值计算，行星式球磨仪的填充率为20.9％；最后获得球磨后的铁皮石斛/黄芪粉末；
[0016]
2)称取球磨后的铁皮石斛/黄芪粉末置于圆底烧瓶中，并向圆底烧瓶中加入提取溶剂水，于70℃加热条件下提取两次，每次提取时间2h，且每次提取时的固液比为1:40，固液比单位为g/ml；合并两次提取液，旋蒸至浸膏状，按照固液比1:40，固液比单位为g/ml，加入95％的乙醇，醇沉过夜，离心过滤，干燥，得到铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合多糖；
[0017]
3)称取凝胶基质溶于部分纯化水中，加入保湿剂搅拌均匀，溶胀24h，得到空白凝胶；
[0018]
4)称取步骤2)所得铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合多糖溶于部分纯化水中，并加入步骤3)所得空白凝胶，搅拌均匀；
[0019]
5)称取抗氧化剂、促皮渗透剂和防腐剂加入到步骤4)所得混合液中，用ph调节剂调节ph至6后，再补充剩余的纯化水，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶。
[0020]
所述的一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶制备在减轻皮肤炎症的药品制剂或美容用品制剂中的应用。
[0021]
本发明相对于现有技术具有以下优点：
[0022]
(1)本发明充分将铁皮石斛和黄芪充分利用，铁皮石斛中的多糖具有提高免疫力、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等广泛的生物学活性，黄芪多糖是黄芪主要的活性成分之一，可作为免疫增强剂能激活动物免疫系统，在抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、控制血糖、改善心血管功能等
方面具有重要作用。
[0023]
(2)本发明采用球磨辅助提取的方法，最大限度的保留铁皮石斛多糖，即降低了成本又节约了宝贵的资源。本发明的制剂产品中，维生素e和维生素c同时使用，这两种维生素可以产生协同增效，维生素c能恢复维生素e的活性，使其发挥清除自由基的作用。
[0024]
(3)本发明的原料天然，提取工艺不添加有机试剂，天然无刺激的凝胶剂型，有效成分的渗透更快，皮肤吸收更好，长期使用能有效地改善肤质。
附图说明
[0025]
图1为铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的经皮渗透量随时间的变化关系；
[0026]
图2为各组小鼠耳廓肿胀组织病理形态图；
[0027]
图3为铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶、铁皮石斛多糖水凝胶以及维生素c，三者的dpph自由基清除活性对比图。
具体实施方式
[0028]
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于此。
[0029]
1.本发明涉及到的各一起及药品规格如下：
[0030]
xs205 dualrange分析天平(mettler toledo，瑞士)；pm200行星式球磨仪(retsch，德国)；kh5200de超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；heidolph磁力搅拌水浴锅；barnstead tii超纯水系统(thermo scientific，美国)r
‑
215旋转蒸发仪(buchi，瑞士)。
[0031]
水为超纯水(实验室自制)，完美芦荟胶购于完美有限公司，其余试剂均为分析级，实验所用的样品铁皮石斛药材购自云南腾冲，黄芪药材购自陕西西安。
[0032]
2.以下实施例中，铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合多糖的制备方法，均包括以下步骤过程：
[0033]
1)将铁皮石斛茎和黄芪根置于60℃的烘箱中干燥至恒重，粉碎、过三号筛，然后按照1:1的质量比置于行星式球磨仪中，球磨转速为300rpm，球磨时间为5min，以加入的不锈钢球磨珠总体积与球磨罐容积的比值计算，行星式球磨仪的填充率为20.9％；最后获得球磨后的铁皮石斛/黄芪粉末；
[0034]
2)称取球磨后的铁皮石斛/黄芪粉末置于圆底烧瓶中，并向圆底烧瓶中加入提取溶剂水，于70℃加热条件下提取两次，每次提取时间2h，且每次提取时的固液比为1:40，固液比单位为g/ml；合并两次提取液，旋蒸至浸膏状，按照固液比1:40，固液比单位为g/ml，加入95％的乙醇，醇沉过夜，离心过滤，干燥，得到铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合多糖。
[0035]
3.以下实施例中，铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的制备方法，均包括以下步骤：
[0036]
1)称取凝胶基质溶于部分纯化水中，加入保湿剂搅拌均匀，溶胀24h，得到空白凝胶；
[0037]
2)称取铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合多糖溶于部分纯化水中，并加入步骤1)所得空白凝胶，搅拌均匀；
[0038]
3)称取抗氧化剂、促皮渗透剂和防腐剂加入到步骤2)所得混合液中，用ph调节剂
调节ph至6后，再补充剩余的纯化水，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶。
[0039]
实施例1：
[0040]
一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0041]
1)称取0.5g卡波姆980，2.5g 1,2
‑
丙二醇，加入部分纯化水，搅拌均匀溶胀24h，得空白凝胶基质；
[0042]
2)称取0.5g球磨后的铁皮石斛多糖和黄芪多糖复合粉末溶于纯化水中，搅拌均匀加入步骤1)所得空白凝胶基质中，搅拌均匀；
[0043]
3)称取2.5g二乙二醇单乙醚、50mg尼泊金甲酯、0.5g维生素c和0.5g维生素e，加入到步骤2)所得混合液中，然后用1％的氢氧化钠溶液调节ph约为5.0，再补充剩余的纯化水至总重为50g，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，备用。
[0044]
实施例2：
[0045]
一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0046]
1)称取0.5g卡波姆980，2.5g 1,2
‑
丙二醇，加入部分纯化水，搅拌均匀溶胀24h，得空白凝胶基质；
[0047]
2)称取0.5g球磨后铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合粉末溶于纯化水中，搅拌均匀加入步骤1)所得空白凝胶基质中，搅拌均匀；
[0048]
3)称取5g二乙二醇单乙醚、75mg尼泊金甲酯、0.5g维生素c和0.5g维生素e，加入到步骤2)所得混合液中，然后再用1％的氢氧化钠溶液调节ph为5.5，再补充剩余的纯化水至总重为50g，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，备用。
[0049]
实施例3：
[0050]
一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0051]
1)称取0.5g卡波姆980，2.6g 1,2
‑
丙二醇，加入部分纯化水，搅拌均匀溶胀24h，得空白凝胶基质；
[0052]
2)称取0.5g球磨后铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合粉末溶于纯化水中，搅拌均匀加入步骤1)所得空白凝胶基质中，搅拌均匀；
[0053]
3)称取7.5g二乙二醇单乙醚、50mg尼泊金甲酯、0.5g维生素c和0.5g维生素e，加入到步骤2)所得混合液中，然后再用1％氢氧化钠调节ph为6，再补充剩余的纯化水至总重为50g，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，备用。
[0054]
对比实施例1
‑
3可知，当凝胶ph达到6时，凝胶具有更好的均匀细腻、黏稠度适中、肤感舒适、且涂展性良好。
[0055]
实施例4：
[0056]
一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0057]
1)称取0.5g卡波姆980，5.6g 1,2
‑
丙二醇，加入部分纯化水，搅拌均匀溶胀24h，得空白凝胶基质；
[0058]
2)称取0.5g球磨后铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合粉末溶于纯化水中，搅拌均匀加入步骤1)所得空白凝胶基质中，搅拌均匀；
[0059]
3)称取7.5g二乙二醇单乙醚、75mg尼泊金甲酯、0.5g维生素c和0.5g维生素e，加入到步骤2)所得混合液中，然后再用1％的氢氧化钠调节ph为6，再补充剩余的纯化水至总重
为50g，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，备用。
[0060]
实施例5(含低剂量的复合多糖):
[0061]
一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0062]
1)称取1.0g卡波姆980，5.6g 1,2
‑
丙二醇，加入部分纯化水，搅拌均匀溶胀24h，得空白凝胶基质；
[0063]
2)称取1.0g球磨后铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合粉末溶于纯化水中，搅拌均匀加入步骤1)所得空白凝胶基质中，搅拌均匀；
[0064]
3)称取10.0g二乙二醇单乙醚、193.3mg尼泊金甲酯、0.5g维生素c和0.5g维生素e，加入到步骤2)所得混合液中，然后再用1％的氢氧化钠调节ph为6，再补充剩余的纯化水至总重为100g，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，备用。
[0065]
实施例6(含中剂量的复合多糖):
[0066]
一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0067]
1)称取1.0g卡波姆980，5.2g 1,2
‑
丙二醇，加入部分纯化水，搅拌均匀溶胀24h，得空白凝胶基质；
[0068]
2)称取2.0g球磨后铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合粉末溶于纯化水中，搅拌均匀加入步骤1)所得空白凝胶基质中，搅拌均匀；
[0069]
3)称取7.6g二乙二醇单乙醚、193.3mg尼泊金甲酯、1g维生素c和1g维生素e，加入到步骤2)所得混合液中，然后再用1％的氢氧化钠调节ph为6，再补充剩余的纯化水至总重为100g，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶。
[0070]
实施例7(含高剂量的复合多糖)：
[0071]
一种铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0072]
1)称取1.0g卡波姆980，5.7g 1,2
‑
丙二醇，加入部分纯化水，搅拌均匀溶胀24h，得空白凝胶基质；
[0073]
2)称取4.0g球磨后铁皮石斛多糖和黄芪多糖的复合粉末溶于纯化水中，搅拌均匀加入步骤1)所得空白凝胶基质中，搅拌均匀；
[0074]
3)称取10g二乙二醇单乙醚、222.2mg尼泊金甲酯、0.5g维生素c和0.6g维生素e，加入到步骤2)所得混合液中，然后再用1％的氢氧化钠调节ph为6，再补充剩余的纯化水至总重为100g，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，备用。
[0075]
对比实施例5
‑
7可知，当铁皮石斛多糖/黄芪多糖含量提高，凝胶剂外观呈棕黑色，且静置一段时间后，将出现分层现象。当含药量在1％
‑
2％之间时，凝胶呈现良好的外观形状，且稳定性良好。
[0076]
实施例8(空白凝胶):
[0077]
一种空白凝胶基质水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0078]
1)称取1.0g卡波姆980，4.9g 1,2
‑
丙二醇，加入部分纯化水，搅拌均匀溶胀24h，得空白凝胶基质；
[0079]
2)称取9.9g二乙二醇单乙醚、200mg尼泊金甲酯、0.6g维生素c和0.6g维生素e，加入到步骤1)所得空白凝胶基质中，然后再用1％的氢氧化钠调节ph为6，再补充剩余的纯化水至总重为100g，混匀，即得到所述的空白凝胶基质水凝胶，备用。
[0080]
实施例9(不含黄芪多糖):
[0081]
一种铁皮石斛多糖水凝胶的制备方法，包括以下步骤：
[0082]
1)称取0.5g卡波姆980，2.5g 1,2
‑
丙二醇，加入部分纯化水，搅拌均匀溶胀24h，得空白凝胶基质；
[0083]
2)称取2.0g球磨后铁皮石斛多糖溶于纯化水中，搅拌均匀加入步骤1)所得空白凝胶基质中，搅拌均匀；
[0084]
3)称取5.1g二乙二醇单乙醚、109.3mg尼泊金甲酯、0.25g维生素c和0.25g维生素e，加入到步骤2)所得混合液中，然后再用1％的氢氧化钠调节ph为6，再补充剩余的纯化水至总重为50g，混匀，即得到所述的铁皮石斛多糖水凝胶，备用。
[0085]
上述步骤2)加入的球磨后铁皮石斛多糖，其制备方法包括以下步骤：
[0086]
s1：将铁皮石斛茎置于60℃的烘箱中干燥至恒重，粉碎、过三号筛，然后置于行星式球磨仪中，球磨转速为300rpm，球磨时间为5min，以加入的不锈钢球磨珠总体积与球磨罐容积的比值计算，行星式球磨仪的填充率为20.9％；最后获得球磨后的铁皮石斛粉末；
[0087]
s2：称取球磨后的铁皮石斛粉末置于圆底烧瓶中，并向圆底烧瓶中加入提取溶剂水，于70℃加热条件下提取两次，每次提取时间2h，且每次提取时的固液比为1:40，固液比单位为g/ml；合并两次提取液，旋蒸至浸膏状，按照固液比1:40，固液比单位为g/ml，加入95％的乙醇，醇沉过夜，离心过滤，干燥，即得到所述的球磨后铁皮石斛多糖。
[0088]
实验一：铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的经皮渗透试验：
[0089]
实验步骤：
[0090]
(1)将实施例4的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶至于4℃冰箱中保存。
[0091]
(2)取大鼠腹部皮肤用生理盐水浸润，滤纸吸干，绷于valian
‑
chien双室渗透的两室(即接受室和空白室)之间，真皮层面向接受室，表皮层(面积为4cm2)涂上2g凝胶(即实施例4的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶)，表皮层面向空白室。并用弹簧夹把双室的双口固定，接受室中加入12ml生理盐水，使用前超声，循环水浴温度(32
±
0.5)℃，接受室放置搅拌子1粒，搅拌转速200r/min。分别于0.5、1、2、4、6、8h从接受室中吸取渗透液2ml，同时补加生理盐水2ml。将取得的待测液用0.22μm水相微孔滤膜过滤，采用苯酚硫酸显色法测定多糖浓度。
[0092]
(3)根据公式计算单位面积内药物累计渗透量q，以q为纵坐标，t为横坐标作图，经皮渗透实验结果如图1所示，得药物累计渗透q
‑
t曲线。根据图1中q
‑
t曲线结果，对t＝2～6h范围内的q
‑
t曲线进行线性回归，线性回归所得直线的斜率即为药物得渗透速率j，线性回归所得直线与横坐标得交点为迟滞时间t
tag
。
[0093]
其中，单位面积内药物渗透量q的计算公式为：
[0094][0095]
q：药物单位面积透过量(mg/cm2)；c
n
为第n次取样测得的接收液中多糖浓度(mg/ml)，c
i
为第i次取样测得的接收液中多糖浓度(mg/ml)；v：接收液体积(ml)；v
i
：第i次取样体积(ml)；a：有效透过面积(cm2)。
[0096]
实验结果为：铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合凝胶的药物经皮渗透量如图1所示，经
皮渗透速率为0.69mg
·
cm
‑2·
h
‑1，迟滞时间为1.36h。表明该凝胶的经皮渗透性良好。
[0097]
试验二：铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶耳廓肿胀试验及病理形态影响：
[0098]
试验步骤：
[0099]
(1)将实施例5、实施例6和实施例7的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，以及实施例8的空白凝胶基质水凝胶，分别置于4℃冰箱中保存。
[0100]
(2)30只小鼠适应性喂养1w后。将30只小鼠随机分为5组，每组6只，分别为：空白对照组、阳性对照给药组、高剂量复合多糖给药组、中剂量复合多糖给药组和低剂量复合多糖给药组。其中，空白对照组的小鼠给药空白凝胶基质水凝胶(实施例8)，阳性对照给药组的小鼠给药芦荟凝胶。高剂量复合多糖给药组、中剂量复合多糖给药组和低剂量复合多糖给药组的小鼠，分别给药实施例7、实施例6和实施例5的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶。
[0101]
将空白对照组小鼠右耳涂抹0.2g空白凝胶，将阳性对照给药组小鼠的右耳涂抹0.2g芦荟凝胶，其余组在小鼠的右耳朵上涂抹0.2g铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶。待给药处理第7天时，于小鼠右耳涂抹50μl二甲苯致炎40min后颈椎处死，以左耳作为自身对照，沿小鼠耳廓线剪下耳朵，用6mm打孔器于双耳对称部位打孔，计算重量，通过称重获得小鼠右耳耳肿平均胀度的重量。
[0102]
小鼠耳廓肿胀抑制率计算公式：耳廓肿胀抑制率％＝(空白组组平均肿胀度－给药组平均肿胀度)/空白组平均肿胀度*100％。
[0103]
5组小鼠分别给药后，药物对小鼠耳廓肿胀抑制率的实验结果如表1所示。
[0104]
表1：小鼠耳廓肿胀抑制率
[0105][0106]
从表1中可以看出：铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，具有较好的抗炎效果。
[0107]
(3)将试验二中小鼠耳肿胀获得的耳片投入多聚甲醛溶液中固定，备用。固定后的耳片进行常规石蜡切片，分别进行he染色(20x)，用光学显微镜观察，并拍照。
[0108]
实验结果：铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的病理形态的影响如图2所示，正常组即为未施加任何凝胶制剂的正常小鼠的实验结果，可以看出小鼠耳廓表皮、真皮及皮
下组织形态结构正常，组织结构致密、未见疏松和炎症细胞浸润。模型组即为上述给药空白凝胶基质水凝胶(实施例8)的空白对照组的小鼠的实验结果，模型组中小鼠耳廓显著增厚，皮下组织疏松，并可见炎细胞浸润。阳性对照组即为上述给药芦荟凝胶的小鼠的实验结果。高剂量组、中剂量组、低剂量组，分别为给药实施例7、实施例6和实施例5的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶的小鼠的实验结果。
[0109]
从图2中可以看出，各给药组小鼠耳廓肿胀、炎细胞浸润情况有不同程度的改善。
[0110]
试验三：铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶清除dpph自由基的能力试验步骤：
[0111]
(1)将实施例6的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，以及实施例9的铁皮石斛多糖水凝胶，分别置于4℃冰箱中保存。
[0112]
(2)将实施例6的铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶，用蒸馏水稀释，配制铁皮石斛多糖/黄芪多糖的复合多糖浓度分别为0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml的一系列凝胶水溶液。将实施例9的铁皮石斛多糖水凝胶，用蒸馏水稀释，配制铁皮石斛多糖浓度分别为0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml的一系列凝胶水溶液。同时采用维生素c作为阳性对照，将维生素c用蒸馏水稀释，配制维生素c浓度分别为0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml的一系列凝胶水溶液。
[0113]
在进行测试dpph自由基清除活性时：
[0114]
样品溶液的配制过程为：准确吸取上述配制的100μl凝胶水溶液于96孔板中，再加入100μl 0.2mmol/ml的dpph
‑
乙醇溶液。
[0115]
对照溶液的配制过程为：准确吸取100μl凝胶水溶液于96孔板中，再加入100μl乙醇。
[0116]
空白溶液的配制过程为：准确吸取100μl蒸馏水于96孔板中，再加入100μl0.2 mmol/ml的dpph
‑
乙醇溶液。
[0117]
上述配制的样品溶液、对照溶液和空白溶液分别摇匀后，避光反应20min，517nm处测定吸光度a，同时进行三组平行试验，结果取平均值。用以下公式计算多糖的清除率。采用维生素c作为阳性对照。
[0118]
dpph自由基清除活性(％)＝1
‑
(a
样品
‑
a
对照
)*100％/a
空白
[0119]
上述公式中：a
样品
：dpph
‑
乙醇溶液和样品溶液的吸光度；a
对照
：样品溶液和无水乙醇的吸光度；a
空白
：dpph
‑
乙醇溶液和蒸馏水的吸光度。
[0120]
试验结果：铁皮石斛多糖/黄芪多糖对dpph自由基清除活性如图3所示，且呈现显著的剂量依赖性关系。当铁皮石斛多糖和黄芪多糖联合使用时，要比单独使用铁皮石斛多糖凝胶的dpph自由基清除活性好。
[0121]
综上所述，本发明以球磨法辅助提取铁皮石斛多糖和黄芪多糖，获得铁皮石斛多糖/黄芪多糖复合水凝胶具有保湿、抗氧化，抗炎的功效，且病理检测也证实凝胶显著改善耳廓肿胀、炎细胞的浸润，改善急性炎症的作用。由于活性组分为植萃成份，所以制成的凝胶对皮肤无刺激，性质温和。
[0122]
本说明书所述的内容仅仅是对发明构思实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式。