可促进排便的组合物及其用途的制作方法

1.本发明关于一种组合物，且特别涉及一种可促进排便的组合物及其用途。


背景技术：

2.便秘意指粪便干硬，排便困难，导致排便减少的一种症状，通常为大肠蠕动功能不足使粪便在大肠的通过或直肠的排出延迟。若粪便停留在直肠的时间过久，分解的食物在大肠内受细菌长时间发酵，容易产生毒素或有害气体等；若不能按时排出，则人体将再次吸收这些有害物质，进一步进入血液中，对人体造成危害，并导致许多慢性或代谢疾病。
3.大多数治疗便秘的非处方用药，如：泻药或粪便软化剂，但这些常见药剂服用后会产生副作用，长时间服用会有依赖性，且对于身体会有极大伤害。
4.根据the american journal of clinical nutrition于2014年报导的研究论文，显示乳酸菌可帮助维持肠道平衡，改善食物于肠道的运输时间，排便频率与粪便稠度，长时间服用可改善便秘情形。然而，乳酸菌定义为一种对人体有益的活菌，若乳酸菌黏附或定植在肠道的数量不足时，则维持肠道平衡及改善便秘情形将会大打折扣。
5.综上所述，开发一种安全且可长期服用并可促进排便效果的补充品有其迫切性。然而，乳酸菌发酵产物相对于多数治疗便秘的非处方用药为安全不伤害人体的，且可快速为人体吸收，故寻找具有促进排便效果且可制作成改善便秘的组合物的乳酸菌发酵产物为本发明所属技术领域目前亟需努力的目标之一。


技术实现要素：

6.本发明之目的在于提出一种可促进排便的乳酸菌发酵粉末，其可促进排便次数，并以食品组合物或医药组合物等不同形式存在来改善便秘。
7.于是，本发明提出一种可促进排便的组合物，其包括：乳酸菌发酵粉末，包含乳酸菌发酵物，乳酸菌发酵物为将至少乳酸菌菌株培养于包含牛奶、奶粉、酪蛋白、大豆、豆类制品、或乳清的培养基而取得的，乳酸菌菌株包含唾液乳酸杆菌(lactobacillus salivarius subsp.salicinius)ap
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32菌株、植物乳酸杆菌(lactobacillus plantarum)lpl28菌株、嗜酸乳酸杆菌(lactobacillus acidophilus)tyca06菌株、长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis)bli
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02菌株或其组合；以及生理上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体；其中唾液乳酸杆菌ap
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32菌株寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存编号为cctcc m2011127，植物乳酸杆菌(lactobacillus plantarum)lpl28菌株寄存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，寄存编号为cgmcc 17954，嗜酸乳酸杆菌(lactobacillus acidophilus)tyca06菌株寄存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，寄存编号为cgmcc 15210，长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis)bli
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02菌株寄存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，寄存编号为cgmcc 15212。
8.较佳地，乳酸菌菌株包含唾液乳酸杆菌(lactobacillus salivarius subsp.salicinius)ap
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32菌株、植物乳酸杆菌(lactobacillus plantarum)lpl28菌株、嗜
酸乳酸杆菌(lactobacillus acidophilus)tyca06菌株、以及长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis)bli
‑
02菌株。
9.较佳地，组合物为医药组合物或食品组合物，但不以此为限。
10.较佳地，在组合物为医药组合物时，生理上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体为药用上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体，但不以此为限。
11.较佳地，医药组合物呈锭剂、胶囊、粉剂、乳膏、喷雾剂、凝胶、溶液剂、散剂、或霜剂形式，但不以此为限。
12.较佳地，于组合物为食品组合物时，生理上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体为食用上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体，但不以此为限。
13.较佳地，食品组合物为发酵乳、优格、奶酪、乳制饮品乳粉、茶、咖啡、机能性饮品、或其组合，但不以此为限。
14.较佳地，以组合物总重量为基础，乳酸菌发酵物占2至40重量％。
15.较佳地，乳酸菌发酵物为培养基的发酵上层液、培养基包含去活性菌株的发酵上层液、培养基去除菌体的发酵上层液、或其干燥粉末，但不以此为限。
16.较佳地，组合物更包括：益生元。
17.有鉴于上述组合物在人体或动物体内可促进排便的效果，本发明尚提出上述组合物的用途，其为用于制备改善便秘的组合物。
18.较佳地，便秘症状包含：粪便干硬、粪便量少、排便费力、排便不干净、或排便次数减少。
附图说明
19.图1为长条统计图，用于呈现不同组别的受试者的排便次数统计。
20.图2为长条统计图，用于呈现受试者服用不同种类或不同剂量的胶囊后的肠胃健康体感舒适感。
21.图3为长条统计图，用于呈现不同组别的受试者的菌丛改变程度。
具体实施方式
22.为让本发明上述及/或其他目的、功效、特征更明显易懂，下文特举较佳实施方式，作详细说明如下：
23.本发明所述的乳酸菌菌株的冷冻干燥培养物寄存于中国典型培养物保藏中心，地址为中国、武汉、武汉大学，或寄存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。寄存详细资料如下述表1所示：
24.表1、乳酸菌菌株的寄存资料
[0025][0026]
本发明人发现如上述表1所列的菌株的发酵物具有增加排便次数的功效。因此，利用此发酵物制作成粉末制作成组合物以改善便秘。
[0027]
本发明之一实施方式提出一种可促进排便的组合物，此组合物包括：乳酸菌发酵粉末，包含乳酸菌发酵物，乳酸菌发酵物为将至少乳酸菌菌株培养于包含牛奶、奶粉、酪蛋白、大豆、豆类制品、或乳清的培养基而取得的，乳酸菌菌株包含寄存于中国典型培养物保藏中心，寄存编号为cctcc m2011127的唾液乳酸杆菌(lactobacillus salivarius subsp.salicinius)ap
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32菌株、寄存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，寄存编号为cgmcc 17954的植物乳酸杆菌(lactobacillus plantarum)lpl28菌株、寄存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，寄存编号为cgmcc 15210的嗜酸乳酸杆菌(lactobacillus acidophilus)tyca06菌株、寄存于中国普通微生物菌种保藏管理中心，寄存编号为cgmcc 15212的长双歧杆菌婴儿亚种(bifidobacterium longum subsp.infantis)bli
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02菌株、或其组合；以及生理上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体。在一较佳例中，以组合物总重量为基础，乳酸菌发酵物占2至40重量％。在另一较佳例中，乳酸菌发酵物为培养基的发酵上层液、培养基包含去活性菌株的发酵上层液、培养基去除菌体的发酵上层液、或其干燥粉末。在又一较佳例中，乳酸菌菌株至少包含上述四种菌株。
[0028]
此外，为符合实际使用需求，本实施方式的组合物可呈医药组合物或食品组合物形式。而在呈医药组合物形式的条件下，生理上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体为药用上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体，而医药组合物呈锭剂、胶囊、粉剂、乳膏、喷雾剂、凝胶、溶液剂、散剂、或霜剂形式；在呈食品组合物形式的条件下，生理上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体为食用上可接受的赋形剂、稀释剂、或载体，而食品组合物为发酵乳、优格、奶酪、乳制饮品乳粉、茶、咖啡、或机能性饮品。另外，为协助肠胃道内的有益菌生长，本实施方式的组合物可进一步地包含益生元。而且，透过益生元的添加亦可提升肠胃道机能而增加本实施方式的组合物的排便效果。
[0029]
基于上述实施方式的组合物的机能，本发明的另一实施方式提出一种上述组合物的用途，其为用于制备改善便秘的组合物，而便秘症状至少包含粪便干硬、粪便量少、排便费力、排便不干净、或排便次数减少。
[0030]
＜实施例1：乳酸菌菌株的形态学与一般性质＞
[0031]
采用16s rrna序列分析法与api细菌鉴定系统来确认菌株于分类学上的特征，本
实施例的菌株在形态学及一般性质的特征如表2所示：
[0032]
表2、乳酸菌菌株的形态学与一般性质特征
[0033]
[0034][0035]
＜实施例2：制作乳酸菌发酵粉末＞
[0036]
本实施例的乳酸菌发酵粉末的制作为先以包含牛奶、奶粉、酪蛋白、大豆、豆类制品、或乳清的培养基培养上述经分离之唾液乳酸杆菌ap
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32菌株、植物乳酸杆菌lpl28菌株、嗜酸乳酸杆菌tyca06菌株、及长双歧杆菌婴儿亚种bli
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02菌株的组合以进行发酵。接着，对培养基离心取发酵液后，以热灭菌方式去除发酵液的菌株活性、去除发酵液的菌体、或使其干燥形成干燥粉末。此外，干燥粉末可作为本实施例的乳酸菌发酵粉末；而去菌株活性的发
酵液或去除菌体的发酵液再经处理以形成本实施例的乳酸菌发酵粉末。
[0037]
＜实施例3：乳酸菌发酵粉末的排便测试＞
[0038]
本实施例测试上述实施例的乳酸菌发酵粉末在人体内的促进排便效果。首先，取200mg乳酸菌发酵粉末与麦芽糊精混合成胶囊，使胶囊内含物达500mg；另取500mg麦芽糊精制作成胶囊作为对照组。接着，将45位受试者分成三组，每组15位，并记录每位受试者受试前的每周排便次数。之后，其中一组每日服用仅麦芽糊精的对照组胶囊，另组每日服用一颗含200mg乳酸菌发酵粉末的胶囊，另组每日服用三颗含200mg乳酸菌发酵粉末的胶囊，为期一个月，并记录每位受试者服用最后一周的排便次数。
[0039]
如图1所示，服用对照组胶囊组别的受试者的排便次数并无增加，表示麦芽糊精无法促进排便；每日服用200mg乳酸菌发酵粉末组别的受试者的排便次数些微增加但不显著；每日服用600mg乳酸菌发酵粉末组别的受试者的排便次数明显增加。综上，本实施例证实乳酸菌发酵粉末可提升排便频率。
[0040]
＜实施例4：乳酸菌发酵粉末的肠胃健康体感测试＞
[0041]
本实施例测试上述实施例的乳酸菌发酵粉末在人体内的肠胃健康体感舒适感。首先，取200mg乳酸菌发酵粉末与麦芽糊精混合成胶囊，使胶囊内含物达500mg；另取500mg麦芽糊精制作成胶囊作为对照组。接着，将15位受试者分成三组，每组5位。之后，每组依随机顺序服用对照组胶囊、一颗含200mg乳酸菌发酵粉末的胶囊、及三颗含200mg乳酸菌发酵粉末的胶囊各一段期间，服用前一类胶囊迄至服用后一种类胶囊起的间隔为一周，并于服用每一种类胶囊期间纪录便秘改善、胀气改善，腹泻改善、上腹痛改善、及下腹痛改善等体感评分。
[0042]
如图2所示，服用对照组胶囊组别后，受试者未感觉到肠胃舒适感提升；每日服用200mg乳酸菌发酵粉末后，受试者稍感觉到肠胃舒适感提升但不显著；每日服用600mg乳酸菌发酵粉末后，受试者明显感觉到肠胃舒适感提升。综上，本实施例证实乳酸菌发酵粉末可提升肠胃健康体感舒适感。
[0043]
＜实施例5：乳酸菌发酵粉末的肠胃道菌相测试＞
[0044]
本实施例测试上述实施例的乳酸菌发酵粉末在人体肠胃道菌相的影响。首先，取200mg乳酸菌发酵粉末与麦芽糊精混合成胶囊，使胶囊内含物达500mg；另取500mg麦芽糊精制作成胶囊作为对照组。接着，将45位受试者分成三组，每组15位，并取每位受试者受试前的粪便样本。之后，其中一组每日服用仅麦芽糊精的对照组胶囊，另组每日服用一颗含200mg乳酸菌发酵粉末的胶囊，另组每日服用三颗含200mg乳酸菌发酵粉末的胶囊，为期一个月，并取每位受试者受试后的粪便样本。最后，利用次世代定序方法(next generation sequencing，ngs)检测粪便样本的菌相。
[0045]
bifidobacterium、akkermansia、lactococcus、以及lactobacillus归类为益生菌，而enterococcus和streptococcus则归类为致病菌。如图3所示，服用对照组胶囊组别的受试者的致病菌丛有些微增加的趋势，而益生菌丛有些微减少的趋势；每日服用200mg乳酸菌发酵粉末组别的受试者的致病菌丛与益生菌丛均有些微增加的趋势；每日服用600mg乳酸菌发酵粉末组别的受试者的致病菌丛有明显减少的趋势，而益生菌丛有明显增加的趋势。
[0046]
＜实施例6：乳酸菌发酵粉末的粪便含水量测试＞
[0047]
本实施例测试上述实施例的乳酸菌发酵粉末于便秘小鼠粪便含水量的影响。首先，利用喂食或注射七至八周大的balb/c老鼠止泻药洛哌丁胺(loperamide hydrochloride)来建立便秘小鼠的动物模型。接着，将小鼠分组成：对照组、唾液乳酸杆菌ap
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32菌株发酵物组、植物乳酸杆菌lpl28菌株发酵物组、嗜酸乳酸杆菌tyca06菌株发酵物组、长双歧杆菌婴儿亚种bli
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02菌株发酵物组、四联菌株发酵物组、及四联菌株活菌组，其中，「四联菌株」用语意指上述唾液乳酸杆菌ap
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32菌株、植物乳酸杆菌lpl28菌株、嗜酸乳酸杆菌tyca06菌株、及长双歧杆菌婴儿亚种bli
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02菌株的组合。然后，进行喂灌，灌喂时以0.25ml生理食盐水作为溶剂，且每日灌喂2次，共灌喂8天；其中「对照组」每次仅灌喂生理食盐水；「唾液乳酸杆菌ap
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32菌株发酵物组」、「植物乳酸杆菌lpl28菌株发酵物组」、「嗜酸乳酸杆菌tyca06菌株发酵物组」、及「长双歧杆菌婴儿亚种bli
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02菌株发酵物组」每次灌喂600mg对应的单种乳酸菌菌株发酵物；「四联菌株发酵物组」每次灌喂600mg四联菌株发酵物(单种乳酸菌菌株发酵物150mg)；「四联菌株活菌组」每次灌喂2x10
10
cfu四联菌株活菌(单种乳酸菌菌株活菌5x109cfu)。之后，收集小鼠粪便并计算含水量，粪便含水量公式如下：
[0048]
粪便含水量(％)＝(粪便湿重
‑
粪便干重)/粪便湿重
×
100％
[0049]
粪便含水量分析结果如表3所示：
[0050]
表3、粪便含水量分析结果
[0051][0052]
由上表可知，四联菌株发酵物组增加的粪便含水量(0.3％)远高于唾液乳酸杆菌ap
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32菌株发酵物组、植物乳酸杆菌lpl28菌株发酵物组、嗜酸乳酸杆菌tyca06菌株发酵物组、及长双歧杆菌婴儿亚种bli
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02菌株发酵物组增加之粪便含水量的平均值(0.2％)。这表示四联菌株发酵物组对粪便含水量的增加产生协同效应。综上，本实施例证实实施例1取得的乳酸菌发酵粉末可不可预料地提升粪便含水量。
[0053]
须注意的是，乳酸菌发酵粉末为乳酸菌代谢产物的混合物，对人体健康的功能归咎于组成养分的特异性，而非仅乳酸菌活菌本身，此种对人体健康有特殊功效的代谢产物泛称为“后生元(postbiotics)”(请参照trends in food science&technology.2018
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05,
75:105
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114)。另外，人体对后生元的反应性取决于菌种、完善的培养、加工过程、与完整的临床报告。举例而言，根据2019年发表于international journal of molecular sciences vol.20no.19的论文，其数据指出目前已知的后生元加工方式，包括：热封存处理、物理性处理、高静水压处理、冷冻干燥、或超音波震荡等，绝非随意加工处理即能达到促进健康的功效。
[0054]
惟以上所述者，仅为本发明的较佳实施例，但不能以此限定本发明的保护范围；故，凡依本发明申请专利保护范围及发明说明书内容所作的简单的等效改变与修饰，皆仍落入本发明专利保护范围内。