护肤品及其制备方法、培养基与流程

1.本技术涉及护肤品领域，具体而言，涉及一种护肤品及其制备方法、培养基。


背景技术：

2.护肤一直是一个备受关注的话题，包括抗衰、抗皱、防晒、抗氧化等等。因此，护肤品致力于改善皮肤的上述至少一种问题。
3.本技术也提供一种改善皮肤状况的护肤品。


技术实现要素：

4.本技术实施例的目的在于提供一种护肤品及其制备方法、培养基，其旨在提供一种能够改善皮肤色泽的护肤品。
5.本技术第一方面提供一种护肤品，护肤品的原料主要包括按照质量百分数计的以下组分：
6.1，2-戊二醇3-7％、甘油2-6％、凝结芽孢杆菌发酵产物2-8％、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物0.4-1％、生育酚乙酸酯0.4-1％、16/18醇0.8-1.4％、异十六烷2-4％、环五聚二甲基硅氧2-4％、山嵛醇1-2.4％、霍霍巴籽油3-6.5％、碳酸二辛酯1-4.6％、鲨肝醇0.2-1％、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯1.8-4.3％以及甘油硬脂酸酯1-4％。
7.通过上述原料混合形成的护肤品具有抗皱和抗衰老的作用，能够减缓皮肤衰老，提高皮肤亮度。此外，使用本技术实施例提供的护肤品之后，还具有调节皮肤表面菌群的作用，主要表现在：降低皮肤痤疮杆菌的含量、降低葡萄球菌的含量；以及促进皮肤表面菌群中红球菌、贪噬菌以及伯克霍尔德氏菌的增加，调节皮肤表面微生物的丰度，从而使皮肤表面形成较稳定的屏障，避免外界环境对皮肤造成强烈的刺激。
8.本技术第二方面提供一种上述护肤品的制备方法，包括：
9.将凝结芽孢杆菌的菌种以2％～6％的接种量接种至培养基中，调节培养基的ph值为5.0～7.0，在37～45℃下发酵30～40h，收集发酵产物得到凝结芽孢杆菌发酵产物；
10.然后混合所述凝结芽孢杆菌发酵产物和所述护肤品的其余原料。
11.在本技术第二方面的一些实施例中，制备凝结芽孢杆菌发酵产物中使用的所述培养基主要包括以下组分：
12.18-22g/l的无水葡萄糖、0.6-1.3g/l的k2hpo4.3h2o、0.1-0.4g/l的mgso4.7h2o、0.01-0.04g/l的mnso4.h2o、以及15-19g/l的玉米粉。
13.在本技术第二方面的一些实施例中，所述凝结芽孢杆菌的菌种通过以下方法获得：
14.包括：将已经活化完成的凝结芽孢杆菌菌液加入培养基中，在37～45℃，150～180r/min的摇床中，培养16～24h得到一级菌种；
15.然后将一级菌种接种至培养基中，在37～45℃，150～180r/min的摇床中，培养16～24h得所述凝结芽孢杆菌的菌种。
16.在本技术第二方面的一些实施例中，在制备所述凝结芽孢杆菌发酵产物的过程中，收集凝结芽孢杆菌发酵产物具体包括：将二级菌种在培养基中发酵30～40h后的产物离心分离，然后用0.45μm的过滤器过滤离心后的上清液得到滤液，将滤液置于80～90℃下加热20～40min即得所述凝结芽孢杆菌发酵产物。
17.本技术第三方面提供一种培养基，培养基用于培养红球菌、贪噬菌以及伯克霍尔德氏菌中的至少一种；
18.所述培养基包括凝结芽孢杆菌发酵产物以及辅料。
19.在本技术第三方面的一些实施例中，培养基包括按照质量百分数计的以下组分：
20.1，2-戊二醇3-7％、甘油2-6％、凝结芽孢杆菌发酵产物2-8％、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物0.4-1％、生育酚乙酸酯0.4-1％、16/18醇0.8-1.4％、异十六烷2-4％、环五聚二甲基硅氧2-4％、山嵛醇1-2.4％、霍霍巴籽油3-6.5％、碳酸二辛酯1-4.6％、鲨肝醇0.2-1％、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯1.8-4.3％以及甘油硬脂酸酯1-4％。
21.在本技术第三方面的一些实施例中，所述凝结芽孢杆菌发酵产物通过以下步骤制得：
22.将凝结芽孢杆菌的菌种以2％～6％的接种量接种至培养基中，调节培养基的ph值为5.0～7.0，在37～45℃发酵时间30～40h，收集凝结芽孢杆菌发酵产物；
23.其中：18-22g/l的无水葡萄糖、0.6-1.3g/l的k2hpo4.3h2o、0.1-0.4g/l的mgso4.7h2o、0.01-0.04g/l的mnso4.h2o、以及15-19g/l的玉米粉浆。
24.本技术还提供一种凝结芽孢杆菌发酵产物在促进菌体增长中的应用；其中，所述菌体包括红球菌、贪噬菌以及伯克霍尔德氏菌中的至少一种；
25.在一些实施例中，凝结芽孢杆菌发酵产物通过以下步骤制得：
26.将凝结芽孢杆菌的菌种以2％～6％的接种量接种至培养基中，调节培养基的ph值为5.0～7.0，在37～45℃发酵时间30～40h，收集凝结芽孢杆菌发酵产物；
27.其中：18-22g/l的无水葡萄糖、0.6-1.3g/l的k2hpo4.3h2o、0.1-0.4g/l的mgso4.7h2o、0.01-0.04g/l的mnso4.h2o、以及15-19g/l的玉米粉浆。
附图说明
28.为了更清楚地说明本技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
29.图1中上方和下方分别为试用者1使用前以及使用28天后的图片。
30.图2示出了试用者1使用前以及使用28天后framescan33的皱纹分析结果。
31.图3中左侧和右侧分别为试用者1使用前以及使用28天后的图片。
32.图4示出了试用者1使用前以及使用28天后framescan33的肤光亮度分析结果。
具体实施方式
33.为使本技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建
议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
34.下面对本技术实施例的护肤品及其制备方法、培养基进行具体说明。
35.本技术提供一种护肤品，该护肤品主要包括按照质量百分数计的以下组分：1，2-戊二醇3-7％、甘油2-6％、凝结芽孢杆菌发酵产物2-8％、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物0.4-1％、生育酚乙酸酯0.4-1％、16/18醇0.8-1.4％、异十六烷2-4％、环五聚二甲基硅氧2-4％、山嵛醇1-2.4％、霍霍巴籽油3-6.5％、碳酸二辛酯1-4.6％、鲨肝醇0.2-1％、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯1.8-4.3％以及甘油硬脂酸酯1-4％。
36.作为示例性地，1，2-戊二醇占护肤品原料总质量的3-7％，例如可以为3％、4％、5％、6％、7％等等。
37.甘油占护肤品原料总质量的2-6％，例如可以为2％、2.1％、2.5％、3％、3.6％、4％、4.2％、5％、5.2％、6％等等。
38.凝结芽孢杆菌发酵产物占护肤品原料总质量的2-8％，例如可以为2％、2.4％、3％、3.6％、4％、5％、6％、6.6％、7％、8％等等。
39.丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物占护肤品原料总质量的0.4-1％，例如可以为0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％等等。
40.生育酚乙酸酯占护肤品原料总质量的0.4-1％，例如可以为0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％等等。
41.16/18醇占护肤品原料总质量的0.8-1.4％，例如可以为0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％等等。
42.异十六烷占护肤品原料总质量的2-4％，例如可以为2％、2.2％、2.5％、2.6％、3％、3.5％、4％等等。
43.环五聚二甲基硅氧占护肤品原料总质量的2-4％，例如可以为2％、2.3％、2.6％、2.9％、3％、3.5％、3.7％、3.9％、4％等等。
44.山嵛醇占护肤品原料总质量的1-2.4％，例如可以为1％、1.2％、1.5％、2％、2.1％、2.3％、2.4％等等。
45.霍霍巴籽油占护肤品原料总质量的3-6.5％，例如可以为3％、3.1％、3.5％、3.8％、4％、5％、5.2％、6％、6.1％、6.5％等等。
46.碳酸二辛酯占护肤品原料总质量的1-4.6％，例如可以为1％、2％、2.5％、3％、3.6％、4％、4.2％、4.6％等等。
47.鲨肝醇占护肤品原料总质量的0.2-1％，例如可以为0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％等等。
48.肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯占护肤品原料总质量的1.8-4.3％，例如可以为1.8％、2.0％、2.6％、3％、3.3％、3.7％、4％、4.3％等等。
49.甘油硬脂酸酯占护肤品原料总质量的1-4％，例如可以为1％、1.2％、1.4％、1.6％、2％、2.6％、2.9％、3.2％、3.8％、4％等等。
50.通过上述原料混合形成的护肤品具有抗皱和抗衰老的作用，能够减缓皮肤衰老，提高皮肤亮度。此外，使用本技术实施例提供的护肤品之后，还具有调节皮肤表面菌群的作用，主要表现在：降低皮肤痤疮杆菌的含量、降低葡萄球菌的含量；以及促进皮肤表面菌群
中红球菌、贪噬菌以及伯克霍尔德氏菌的增加，调节皮肤表面微生物的丰度，从而使皮肤表面形成较稳定的屏障，避免外界环境对皮肤造成强烈的刺激。
51.本技术提供一种上述护肤品的制备方法，主要包括制备凝结芽孢杆菌发酵产物以及混合原料。
52.在本技术的一些实施例中，制备凝结芽孢杆菌发酵产物包括：将已经活化完成的凝结芽孢杆菌菌液加入培养基中，在37～45℃(例如可以为37℃、38℃、39℃、40℃、42℃、45℃)，150～180r/min(例如可以为150r/min、155r/min、160r/min、170r/min、174r/min、180r/min)的摇床中，培养16～24h(例如可以为16h、18h、19h、20h、21h、22h、24h)得到一级菌种；
53.然后将一级菌种接种至培养基中，在37～45℃(例如可以为37℃、39℃、40℃、41℃、42℃、45℃)，150～180r/min(例如可以为150r/min、155r/min、160r/min、167r/min、175r/min、180r/min)的摇床中，培养16～24h(例如可以为16h、17h、19h、20h、22h、23h、24h)得二级菌种；
54.然后取二级菌种以2％～6％(例如可以为2％、3％、4％、6％)的接种量接种至培养基中，调节培养基的ph值为5.0～7.0(例如可以为5.0、5.5、6、7)，在37～45℃(例如可以为37℃、38℃、40℃、41℃、42℃、45℃)下发酵30～40h(例如可以为30h、32h、34h、36h、39h、40h)，收集凝结芽孢杆菌发酵产物。
55.收集凝结芽孢杆菌发酵产物包括以下步骤：
56.在37～45℃下发酵30～40h之后的产物离心分离，然后用0.45μm的过滤器过滤离心后的上清液得到滤液，将滤液置于80～90℃(例如可以为80℃、82℃、85℃、88℃、90℃)下加热20～40min(例如可以为20min、25min、28min或者40min)即得所述凝结芽孢杆菌发酵产物。
57.发酵完成后过滤上清液，使基质与发酵产物分离，然后加热进一步纯化产物得到凝结芽孢杆菌发酵产物。
58.在本技术的一些实施例中，上述培养基主要包括以下组分：
59.18-22g/l的无水葡萄糖、0.6-1.3g/l的k2hpo4.3h2o、0.1-0.4g/l的mgso4.7h2o、0.01-0.04g/l的mnso4.h2o、以及15-19g/l的玉米粉。
60.例如，培养基中，无水葡萄糖的浓度可以为18g/l、19g/l、20g/l、21g/l、22g/l。k2hpo4.3h2o的浓度可以为0.6g/l、0.8g/l、1g/l、1.2g/l、1.3g/l。mgso4.7h2o的浓度可以为0.1g/l、0.2g/l、0.22g/l、0.3g/l、0.4g/l。mnso4.h2o的浓度可以为0.01g/l、0.02g/l、0.03g/l、0.04g/l。玉米粉的浓度可以为15g/l、16g/l、17g/l、18g/l、19g/l。
61.通过上述发酵过程得到的护肤品更有利于皮肤抗皱，其提亮皮肤光泽度的效果较佳。
62.可以理解的是，在本技术的其他实施例中，凝结芽孢杆菌的培养基也不仅限于上述原料，例如可以根据凝结芽孢杆菌的生长习性选择培养基。
63.此外，需要说明的是，在本技术的其他实施例中，凝结芽孢杆菌发酵产物的制备过程可以不限于上述的发酵过程，可以根据凝结芽孢杆菌的生长习性设置发酵过程中的工艺参数。
64.制备完成凝结芽孢杆菌发酵产物之后，混合凝结芽孢杆菌发酵产物和护肤品的其
余原料制备得到护肤品。
65.本技术实施例提供的制备方法制备得到的护肤品，使用后可以提高皮肤表面微生物的丰度，降低菌群中痤疮杆菌和葡萄球菌的含量，增加其他对皮肤有益或者无害的菌种，丰富菌群，为皮肤建立一个稳定的屏障，有利于提高皮肤的亮度以及淡化皱纹。
66.发明人发现，凝结芽孢杆菌发酵产物还具有促进红球菌、贪噬菌以及伯克霍尔德氏菌增长的能力。
67.居于此，本技术还提供一种培养基，所述培养基用于培养红球菌、贪噬菌以及伯克霍尔德氏菌中的至少一种；培养基包括凝结芽孢杆菌发酵产物以及辅料。
68.作为示例性地，上述培养基用于培养红球菌，或者用于培养贪噬菌，或者用于培养伯克霍尔德氏菌，或者，用于培养上述两种或三种菌。
69.该培养基包括凝结芽孢杆菌发酵产物以及辅料。辅料包括营养物质，例如包括葡萄糖、蛋白胨、土豆、mgso4、kh2po4、nano3等等。
70.进一步地，在本技术的一些实施例中，培养基还包括按照质量百分数计的以下组分：
71.1，2-戊二醇3-7％、甘油2-6％、凝结芽孢杆菌发酵产物2-8％、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物0.4-1％、生育酚乙酸酯0.4-1％、16/18醇0.8-1.4％、异十六烷2-4％、环五聚二甲基硅氧2-4％、山嵛醇1-2.4％、霍霍巴籽油3-6.5％、碳酸二辛酯1-4.6％、鲨肝醇0.2-1％、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯1.8-4.3％以及甘油硬脂酸酯1-4％。
72.相应地，培养基中的凝结芽孢杆菌发酵产物可以通过上述的制备方法得到。或者，凝结芽孢杆菌发酵产物可以为市购产物等。
73.居于发明人发现凝结芽孢杆菌发酵产物具有促进红球菌、贪噬菌以及伯克霍尔德氏菌增长的能力。
74.本技术还提供一种应用，凝结芽孢杆菌发酵产物在促进菌体增长中的应用；其中，所述菌体包括红球菌、贪噬菌以及伯克霍尔德氏菌中的至少一种。进一步地，利用该应用，可以制备促进菌体增长制剂，促进上述菌体的增长，从而实现红球菌、贪噬菌或者伯克霍尔德氏菌的增长。
75.相应地，该凝结芽孢杆菌发酵产物通过上述制备方法制得。
76.以下结合实施例对本技术的特征和性能作进一步的详细描述。
77.实施例1
78.本实施例提供一种护肤品，该护肤品主要通过以下方法制得：
79.(1)将从广东省微生物菌种保藏中心购买得到的gdm编号为1.645的凝结芽孢杆菌菌种进行活化。
80.(2)取步骤(1)获得的活化好的凝结芽孢杆菌菌液1ml接种至装有150ml培养基的三角瓶中。再将三角瓶置于40℃，150r/min的摇床中，培养20h，得到的菌液即为一级种子。
81.(3)取步骤(2)获得的一级种子2ml接种至装有300ml培养基的三角瓶中，再将三角瓶置于40℃，150r/min的摇床中，培养24h，得到的菌液即为二级种子。
82.(4)取步骤(3)获得的二级种子120ml，以4％的接种量接种至装有3l培养基的发酵罐中，设置发酵液的ph值为6.0，在40℃下发酵时间36h。
83.(5)发酵完成后，将发酵液以10000r/min，离心15min取上清液，然后用0.45μm的过
滤器将上清液进行过滤，然后将滤液置于90
°
的水浴锅中水浴240min即可得到我们需要的凝结芽孢杆菌发酵液。
84.(6)按照以下质量百分数取各个原料：1，2-戊二醇5％；甘油5％；凝结芽孢杆菌发酵产物4％；丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物0.7％；生育酚乙酸酯0.5％；16/18醇1％；异十六烷3％；环五聚二甲基硅氧烷3％；山嵛醇1.5％；霍霍巴籽油5％；碳酸二辛酯3％；鲨肝醇0.5％；肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯3％；甘油硬脂酸酯2％；余量为水。
85.(7)混合步骤(6)中的各个原料得到护肤品。
86.试验例1
87.选取5名年龄为25～45岁，脸部无痤疮，采样前7天未使用过抗生素或者萜类物质的试用者，进行实施例1提供的护肤品的皮肤微生物多样性的采样，同时运用visia-cr面部拍照仪对受试者面部进行拍照再应用framescan33进行皱纹分析，分别可以得到使用前以及使用28后皱纹占比和亮泽度值得数据结果。
88.图1中上方和下方分别为试用者1使用前以及使用28天后的图片。图2示出了试用者1使用前以及使用28天后framescan33的皱纹分析结果。
89.从图1和图2可以看出：试用者1使用实施例1提供的护肤品28天后受试者眼周皱纹面积占比均较使用前减小，说明使用实施例1提供的护肤品28天能减少受试者的眼周皱纹占比，有淡化眼周皱纹的功效，且具有显著性。
90.图3中左侧和右侧分别为试用者1使用前以及使用28天后的图片。图4示出了试用者1使用前以及使用28天后framescan33的肤光亮度分析结果。
91.从图3和图4可以看出：试用者1使用实施例1提供的护肤品28天后，其皮肤的光亮度有显著的改善。
92.皮肤微生物采样部位为眼部，试用者在涂抹样品前以及使用样品28天后使用无菌的植绒拭子(拭子头在无菌生理盐水中浸湿)，在眼尾部擦拭30s，擦拭面积4cm2，每人每次需取3-4支皮肤拭子。
93.收集皮肤拭子，送至上海某医药科技有限公司进行16s rdna基因测序，通过16s rdna测序的方法，比较涂抹前和涂抹28天后，皮肤上的微生物菌群的种类和丰度，发现凝结芽孢杆菌发酵液能调节皮肤上的微生物。涂抹前和涂抹28天后皮肤拭子中皮肤上的微生物菌群的检测结果如表1和表2所示。
94.表1
95.皮肤上微生物1d01d282d02d283d03d28皮肤痤疮杆菌84.900％36.230％75.600％50.160％69.000％35.130％葡萄球菌7.200％2.200％5.610％1.360％20.160％6.540％红球菌0.760％18.560％2.160％10.560％4.000％14.790％贪噬菌0.000％16.450％0.160％13.260％0.000％15.260％根瘤菌0.000％13.160％6.360％3.180％0.000％10.030％伯克霍尔德氏菌0.004％5.400％0.000％8.790％0.000％6.497％棒杆菌0.310％1.620％0.000％0.169％0.370％0.265％链球菌0.640％0.360％5.950％0.438％1.260％0.156％乳杆菌0.490％0.760％0.000％1.250％1.294％1.034％
不动杆菌0.940％0.340％1.260％3.160％0.160％0.751％放线菌0.790％0.016％0.015％0.028％0.164％3.124％沙雷氏菌0.190％0.226％0.000％0.290％1.236％1.642％劳森氏菌0.060％1.250％0.066％1.340％0.027％2.794％韦荣氏球菌属0.620％1.590％0.045％0.257％0.964％0.039％双歧杆菌3.0957％1.8380％2.7740％5.7580％1.3650％1.9480％
96.表2
97.皮肤上微生物4d04d285d05d28皮肤痤疮杆菌69.461％56.000％77.000％64.130％葡萄球菌16.240％5.162％17.190％8.461％红球菌4.167％6.134％3.162％16.230％贪噬菌0.000％6.154％0.026％1.023％根瘤菌0.000％2.613％0.964％0.226％伯克霍尔德氏菌0.000％7.164％0.623％0.756％棒杆菌3.157％5.461％0.170％0.146％链球菌1.954％0.015％0.000％1.365％乳杆菌0.015％3.157％0.230％1.096％不动杆菌0.136％0.349％0.000％1.800％放线菌0.016％3.124％0.013％1.345％沙雷氏菌0.012％0.330％0.000％0.180％劳森氏菌1.324％0.400％0.002％0.123％韦荣氏球菌属0.019％0.007％0.002％0.678％双歧杆菌3.4989％3.9301％0.6184％2.4414％
98.表1中：1d0、1d28分别代表试用者1在使用前和使用实施例1提供的护肤品28天后皮肤拭子的检测结果；相应地，2d0、2d28分别代表试用者2在使用前和使用实施例1提供的护肤品28天后皮肤拭子的检测结果；3d0、3d28分别代表试用者3在使用前和使用实施例1提供的护肤品28天后皮肤拭子的检测结果。
99.表2中：4d0、4d28分别代表试用者4在使用前和使用实施例1提供的护肤品28天后皮肤拭子的检测结果；5d0、5d28分别代表试用者4在使用前和使用实施例1提供的护肤品28天后皮肤拭子的检测结果。
100.从表1和表2的结果可以看出：
101.试用者在使用实施例1提供的护肤品28天后，5名受试者皮肤上的痤疮丙酸杆菌和葡萄球菌均呈现不同程度的下降趋势。
102.此外，试用者在使用实施例1提供的护肤品28天后，红球菌、贪噬菌、伯克霍尔德氏菌在整个微生物菌群中的含量均增加。说明使用实施例1提供的护肤品后，降低痤疮丙酸杆菌和葡萄球菌的含量，增加了红球菌、贪噬菌、伯克霍尔德氏菌的含量，使菌体种类变得更加丰富，为皮肤形成一个较佳的屏障，结合图1-图4可以看出，本技术实施例1提供的护肤品正向调节皮肤微生态的功效。
103.以上所述仅为本技术的优选实施例而已，并不用于限制本技术，对于本领域的技
术人员来说，本技术可以有各种更改和变化。凡在本技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本技术的保护范围之内。