一种治疗白癜风的辛伐他汀软膏制备方法及其应用

1.本发明涉及化学医药领域，尤其涉及含有辛伐他汀的白癜风外用药及其制备方法与应用。


背景技术：

2.白癜风是表皮黑素细胞被选择性破坏所致的色素脱失性常见皮肤病，发病率呈逐渐上升趋势，全球发病率约0.5
‑
2.0％，临床表现为皮肤和粘膜处局部性或泛发性白班，皮肤组织病理主要特征为表皮黑素细胞缺失或减少，进展期皮损真皮浅层可见中等量淋巴细胞的浸润。通常皮肤表面的皮损表现为大小不等的乳白色，边界圆滑的白斑，其表面常无鳞屑，或覆有少量细碎鳞屑，皮损严重影响患者的身心健康。
3.自体黑素细胞体外培养移植是近年来探寻出的治疗白癜风新方法，黑素细胞移植治疗主要包括几种移植方法：表皮移植、微孔移植、皮片移植等。目前应用最广泛的移植方法为表皮移植，治疗过程为在患者正常皮肤(一般是腹部)使用表皮分离仪发出几个小水疱，水疱的壁就是皮肤的表皮层，含有黑素细胞，然后将发出的水疱壁剪下，贴在去除表皮的白斑区，黑素细胞将定植于移植处，使白斑复色。但是，表皮一块仅有一平方厘米大小，能够治疗的部位也仅有一平方厘米大小，如果白斑面积较大，则无法在正常皮肤处提供足够的表皮。而且表皮移植时皮片之间必须存有空隙才能保证细胞最大的成活率，因此恢复后很多会形成“鹅卵石”样外观，即为皮片之间会有白色的间隙，色素不均匀。辛伐他汀为羟甲基戊二酰辅酶a还原酶抑制剂，fda于1989年批准其为治疗高胆固醇血症的特效药物。我们研究发现，辛伐他汀作用黑素细胞的安全有效药物浓度范围为0.1
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1.0μmol/l，在此区间药物浓度处理黑素细胞后，由h2o2诱导的黑素细胞氧化应激损伤得到改善，cck
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8检测显示细胞活力显著升高，流式细胞术显示凋亡、胞内ros水平降低，胞内抗氧化酶cat、sod均显著升高，且上述现象均呈浓度依赖趋势。辛伐他汀口服给药后，生物利用度约为2.5％左右，fda批准辛伐他汀作用于人体内的安全有效剂量为40mg/d，然而实验发现在白癜风患者中若想得到更好的治疗效果，需要剂量远大于40mg/d，但若长期大剂量口服辛伐他汀会引起肌毒性和肝毒性等毒、副作用，因此需要探索辛伐他汀的其他用药形式，在能有效吸收药物的同时，疗效明显、副作用小，使用时直接作用于皮损部位，与黑素细胞移植治疗联合使用，使白斑逐渐趋于正常化，目前尚未有相关记载报道。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本发明提供了一种治疗白癜风的辛伐他汀软膏及其制备方法与应用，与黑素细胞移植治疗联合使用，提高白癜风治愈率。同时采用外用涂抹方式降低辛伐他汀使用剂量，保证人体用药安全，减少副作用，同时将有效成分辛伐他汀与缓释材料结合，达到持续给药、促进药物吸收的目的，进而有效治疗白癜风。该制备方法步骤简单，且制备得到的白癜风外用药可直接作用于白斑部位，易渗透、易吸收、起效快、无副作用，使用方便，不易变质。
5.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
6.本发明提供了一种治疗白癜风的辛伐他汀软膏，所述软膏包括辛伐他汀和药学上可接受的软膏辅料。
7.进一步，软膏包括以下原料：辛伐他汀、三乙醇胺、甘油、软皂、尼泊金乙酯、凡士林、羊毛脂、十八醇、硬脂酸、蒸馏水，其中软皂购买于南昌白云药业有限公司
8.作为优选，所述软膏中各组分的百分比如下：
9.辛伐他汀1
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6％、三乙醇胺2
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2.5％、甘油3.5
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4.5％、软皂2
‑
2.5％、尼泊金乙酯0.2
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0.4％、凡士林20
‑
30％、羊毛脂3
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5％、十八醇20
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30％、硬脂酸3
‑
5％，余量为蒸馏水。
10.进一步，辛伐他汀软膏的制备方法如下：
11.将三乙醇胺、甘油、软皂、尼泊金乙酯、蒸馏水混合，加热至60
‑
80℃融化，融化后制成水相，将凡士林、羊毛脂、十八醇、硬脂酸、加热至60
‑
80℃，搅拌均匀后制成油相；
12.将水相加入油相，加热至40
‑
45℃，搅拌成乳后得到辛伐他汀软膏。
13.进一步改进辛伐他汀软膏，所述软膏中还包括明胶，将所述明胶制成缓释明胶微球，所述辛伐他汀负载于缓释明胶微球内部。
14.优选地，所述缓释明胶微球的质量为辛伐他汀软膏总质量的20
‑
40％。
15.进一步，辛伐他汀负载于缓释明胶微球内部的辛伐他汀软膏的制备方法如下：
16.将三乙醇胺、甘油、软皂、尼泊金乙酯、蒸馏水混合，加热至70℃融化，融化后制成水相，搅拌混匀后，滴入碳酸钠搅拌调节ph＝7.0；将凡士林、十八醇、硬脂酸、加热至70℃，搅拌均匀后制成油相；
17.随后将明胶与水相混合，制成明胶溶液，将辛伐他汀与羊毛脂混合，制成辛伐他汀脂质微乳，随后将明胶溶液、油相、辛伐他汀脂质微乳混合，制成负载有辛伐他汀的缓释明胶微球；
18.将余下的水相、油相混合加入真空均质乳化机的油相罐中，加热至40℃
‑
45℃保温1h，制成乳膏后加入负载有辛伐他汀的缓释明胶微球，超声波分散混匀得到辛伐他汀软膏。
19.进一步，所述辛伐他汀软膏制备过程中超声波分散的频率为15khz
‑
20khz，功率为150w
‑
200w,时间为15min。
20.进一步，所述辛伐他汀微球的具体制备方法如下：
21.明胶溶液制备：将明胶与水相混合，于65
‑
70℃的水浴中充分溶胀，搅拌均匀后制成明胶溶液；
22.辛伐他汀脂质微乳制备：将羊毛脂与辛伐他汀混合均匀得到混合物，随后将混合物按照质量比1:1的比例倒入水中，一并加入真空均质乳化机中，于30℃均质10
‑
20min后，得到o/w型辛伐他汀脂质微乳；
23.负载有辛伐他汀的缓释明胶微球制备：将油相加入明胶溶液中，以1200r/min的速率搅拌25min，形成o/w乳液，随后将o/w乳液进行冰浴，当o/w乳液温度降至15
‑
20℃时取出，缓慢加入辛伐他汀脂质微乳，搅拌均匀后进行超声搅拌，超声波频率为25khz，超声搅拌25
‑
45min后得到混合明胶溶液，将混合明胶溶液水浴加热至40℃，随后3
‑
5min内立即将混合明胶溶液降温至1
‑
2℃，缓慢搅拌得到明胶微球，随后静置分层，离心、过滤、自然干燥后得到负载有辛伐他汀的缓释明胶微球。
24.优选地，所述明胶与水相的质量比为0.2：1，所述明胶溶液与油相的质量比为1：
1.2。
25.本发明的均质机辛伐他汀在水中的溶解度极低，所以为了避免辛伐他汀在制备成软膏后长时间放置出现药、水分离现象，将辛伐他汀与羊毛脂一起制备成o/w型辛伐他汀脂质微乳，易与油相、明胶溶液制成的o/w乳液混合均匀，且双o/w体系可以增加辛伐他汀与明胶溶液的亲和性，在超声过程中提高药物分散性。又因白癜风属于皮肤病，其皮肤敏感性更强，不应在软膏的制备过程中加入交联剂，且辛伐他汀为保持药效，瞬时耐热温度不应超过60℃，所以采用双乳液体系，提高明胶在体系中的稳定性，也促使制备成缓释明胶微球具有稳定性。
26.辛伐他汀极难溶于水，但药物溶出是皮肤吸收药物的限速过程，所以需要提高辛伐他汀的溶解度，促进药物体外吸收，显著提高药效，因此采用形成水包油(o/w)体系制成辛伐他汀脂质微乳，辛伐他汀与油脂类混合形成微乳，被明胶包裹后存储于缓释明胶微粒内部，释放出来时易于渗透进皮肤，促进皮肤吸收药物。当制备完成的软膏涂抹于皮肤上时，负载有辛伐他汀的缓释明胶微球直接与皮肤接触，软膏中的水分渗透皮肤，明胶具有一定的粘性，粘附于皮肤后辛伐他汀从缓释明胶微粒缓慢释放出来，延长药效。
27.本发明制备的辛伐他汀软膏在治疗白癜风皮肤病中有较好的疗效，通常与黑素细胞移植联合治疗白癜风。除此之外，本发明制备的辛伐他汀软膏对其他自身免疫性皮肤病也有一定效果，如银屑病、特应性皮炎等其他皮肤病。
28.有益效果：
29.1、采用外用涂抹方式降低辛伐他汀使用剂量，保证人体用药安全，降低辛伐他汀对减少肌肉和肝的毒副作用。
30.2、将辛伐他汀负载于缓释明胶微球内部，软膏涂抹后从缓释明胶微球内部缓慢释放，达到持续给药的目的，延长药效。
31.3、制备的辛伐他汀软膏易于皮肤吸收，能有效治疗白癜风。
附图说明
32.图1：表皮移植术后未使用辛伐他汀软膏的患者恢复图，左侧为治疗前，右侧为治疗后；
33.图2：表皮移植术后联合使用辛伐他汀软膏的患者恢复图，左侧为治疗前，右侧为治疗后。
具体实施方式
34.以下将结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明：
35.实施例1：制备辛伐他汀软膏一
36.制备辛伐他汀软膏2000g，先按照以下重量称取原料：
37.辛伐他汀120g、三乙醇胺40g、甘油70g、软皂50g、尼泊金乙酯4g、凡士林600g、羊毛脂100g、十八醇400g、硬脂酸100g、蒸馏水516g。
38.原料称取后，按照以下方法制备辛伐他汀软膏：
39.将三乙醇胺、甘油、软皂、尼泊金乙酯、蒸馏水混合，加热至70℃融化，融化后制成水相；
40.将凡士林、羊毛脂、十八醇、硬脂酸、加热至70℃，搅拌均匀后制成油相；
41.将水相加入油相混合后转入至真空均质乳化机的油相罐中，进行均质，均质压力为40mpa，加热至45℃，保温1h得到乳剂型搽剂，即辛伐他汀软膏，装入消毒后的玻璃瓶中密封保存。
42.实施例2：制备辛伐他汀软膏二
43.实施例2公开了缓释型的辛伐他汀软膏的制备，制备1000g缓释型辛伐他汀软膏，先按照以下重量称取原料：
44.辛伐他汀20g、三乙醇胺25g、甘油45g、软皂25g、尼泊金乙酯4g、凡士林200g、羊毛脂50g、十八醇300g、硬脂酸50g、蒸馏水281g、明胶20g。
45.先将三乙醇胺、甘油、软皂、尼泊金乙酯、蒸馏水混合搅拌均匀，加热至70℃，搅拌融化，融化后制成水相，再滴入碳酸钠搅拌调节ph＝7.0；
46.再将凡士林、十八醇、硬脂酸混合，加热至70℃，搅拌均匀后，70℃保温制成油相；
47.明胶溶液制备：将20g明胶与100g水相混合，于65℃的水浴中充分溶胀，搅拌均匀后制成明胶溶液；
48.辛伐他汀脂质微乳制备：将50g羊毛脂与20g辛伐他汀混合均匀得到混合物，随后将混合按照质量比1:1的比例倒入纯水中，一并加入真空均质乳化机中，于30℃均质20min，均质压力为40mpa，得到o/w型辛伐他汀脂质微乳；
49.负载有辛伐他汀的缓释明胶微球制备：将144g油相加入明胶溶液中，以1200r/min的速率搅拌25min，形成o/w乳液，随后将o/w乳液进行冰浴，当o/w乳液温度降至15℃时取出，缓慢加入辛伐他汀脂质微乳，搅拌均匀后进行超声搅拌，超声波频率为25khz，功率200w的条件下超声搅拌25min后得到混合明胶溶液，将混合明胶溶液水浴加热至40℃，随后5min内立即将混合明胶溶液降温至2℃，缓慢搅拌得到明胶微球，随后静置分层，离心、过滤、自然干燥后得到298.96g负载有辛伐他汀的缓释明胶微球；
50.软膏制备：将280g水相、406g油相混合加入真空均质乳化机的油相罐中，加热至45℃保温1h，均质压力为40mpa，制成乳膏后加入负载有辛伐他汀的缓释明胶微球，超声波分散的频率为20khz，功率为200w，时间为15min，得到乳剂型搽剂，即辛伐他汀软膏，装入消毒后的玻璃瓶中密封保存，负载有辛伐他汀的缓释明胶微球为辛伐他汀软膏总质量的30.3％。
51.实施例3：制备辛伐他汀软膏三
52.实施例3公开了缓释型的辛伐他汀软膏的制备，制备1000g缓释型辛伐他汀软膏，先按照以下重量称取原料：
53.辛伐他汀10g、三乙醇胺22g、甘油40g、软皂20g、尼泊金乙酯3g、凡士林250g、羊毛脂30g、十八醇250g、硬脂酸30g、蒸馏水345g、明胶15g。
54.先将三乙醇胺、甘油、软皂、尼泊金乙酯、蒸馏水混合搅拌均匀，加热至70℃，搅拌融化，融化后制成水相，再滴入碳酸钠搅拌调节ph＝7.0；
55.再将凡士林、十八醇、硬脂酸混合，加热至70℃，搅拌均匀后，70℃保温制成油相；
56.明胶溶液制备：将15g明胶与75g水相混合，于70℃的水浴中充分溶胀，搅拌均匀后制成明胶溶液；
57.辛伐他汀脂质微乳制备：将30g羊毛脂与10g辛伐他汀混合均匀得到混合物，随后
将混合按照质量比1:1的比例倒入纯水中，一并加入真空均质乳化机中，于30℃均质10min，均质压力为40mpa，得到o/w型辛伐他汀脂质微乳；
58.负载有辛伐他汀的缓释明胶微球制备：将108g油相加入明胶溶液中，以1200r/min的速率搅拌25min，形成o/w乳液，随后将o/w乳液进行冰浴，当o/w乳液温度降至20℃时取出，缓慢加入辛伐他汀脂质微乳，搅拌均匀后进行超声搅拌，超声波频率为25khz，功率200w的条件下超声搅拌45min后得到混合明胶溶液，将混合明胶溶液水浴加热至40℃，随后3min内立即将混合明胶溶液降温至1℃，缓慢搅拌得到明胶微球，随后静置分层，离心、过滤、自然干燥后得到205.72g负载有辛伐他汀的缓释明胶微球；
59.软膏制备：将355g水相、422g油相混合加入真空均质乳化机的油相罐中，加热至40℃保温1h，均质压力为40mpa，制成乳膏后加入负载有辛伐他汀的缓释明胶微球，超声波分散的频率为15khz，功率为150w，时间为15min，得到乳剂型搽剂，即辛伐他汀软膏，装入消毒后的玻璃瓶中密封保存，负载有辛伐他汀的缓释明胶微球为辛伐他汀软膏总质量的20.9％。
60.实施例4：验证实施例1
‑
3制备的辛伐他汀软膏对白癜风患者的治疗作用
61.1、共招募180例，年龄为15
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45岁的皮肤移植的白癜风患者进行了临床实验，观察表皮移植时联用辛伐他汀的效果。以60人为一组，共计3组，组1采用实施例1制备的软膏，组2采用实施例2制备的软膏，组3采用实施例3制备的软膏，分别进行为期60天的用药和观察。
62.2、疗效评价标准：
63.无效：白斑无色素再生或范围扩大；
64.好转：白斑部分消退或缩小；
65.显效：白斑部分消退或缩小，恢复正常肤色的面积占皮损面积≥50％；
66.治愈：白斑全部消退，恢复正常肤色。
67.3、使用方法：表皮移植术后每天早晚各一次外用辛伐他汀软膏，外用时轻轻涂抹一层，连续使用60天。
68.4、使用本发明制备的软膏后，治疗效果如下：
69.组1：无效5人，好转6人，显效28人，治愈21人，有效率91.7％；
70.组2：无效1人，好转4人，显效24人，治愈31人，有效率98.3％；
71.组3：无效2人，好转4人，显效26人，治愈28人，有效率96.7％；
72.合计：无效8人，好转14人，显效78人，治愈80人，有效率95.6％。
73.5、典型案例：
74.(1)患者一，性别:女，年龄：32岁，症状：躯干，颈部散在白斑3年余，经光疗和外用激素等治疗后躯干白斑明显好转，但颈部白斑未见明显消退，采用表皮移植术后未使用辛伐他汀软膏。
75.图1为该患者表皮移植术后60天拍摄，可见该患者移植部位炎症反应较重，且色素恢复较差。
76.(2)患者二，性别：女，年龄：27岁，症状：颈部白斑1年余，发病来未经规范治疗，疗效差，采用表皮移植术后联合辛伐他汀软膏治疗。
77.图2为该患者表皮移植术后联合辛伐他汀软膏使用后60天拍摄，该患者移植部位炎症反应轻，且色素恢复效果佳。
78.分析可知：
79.1、辛伐他汀软膏与黑素细胞移植治疗联合使用，治疗效果达到95％以上，有助于新生色素的生长和扩展，提高了白癜风的治愈率。
80.2、采用外用涂抹方式降低辛伐他汀使用剂量，保证人体用药安全，减少副作用。
81.3、将有效成分辛伐他汀制成缓释药剂，达到持续给药、促进药物吸收的目的，进而有效治疗白癜风，治疗效果达到96％以上。
82.4、该制备方法步骤简单，且制备得到的白癜风外用药可直接作用于白斑部位，易渗透、易吸收、起效快、无副作用，使用方便，不易变质。
83.实施例5：辛伐他汀软膏制备
84.与实施例2称取相同重量的原料，采用以下步骤进行制备：
85.(1)先将三乙醇胺、甘油、软皂、尼泊金乙酯、蒸馏水混合搅拌均匀，加热至70℃，搅拌融化，融化后制成水相，再滴入碳酸钠搅拌调节ph＝7.0；
86.(2)再将凡士林、十八醇、硬脂酸混合，加热至70℃，搅拌均匀后，70℃保温制成油相；将20g明胶与100g水相混合，于65℃的水浴中充分溶胀，搅拌均匀后制成明胶溶液；
87.(3)将50g羊毛脂与20g辛伐他汀混合均匀得到混合物，随后将混合按照质量比1:1的比例倒入纯水中，搅拌均匀；
88.(4)将108g油相与明胶溶液混合，以1200r/min的速率搅拌10min后加入辛伐他汀混合物，搅拌均匀后进行超声搅拌，超声波频率为25khz，功率200w的条件下超声搅拌10min后得到混合明胶溶液；
89.(5)将280g水相、406g油相、混合明胶溶液混合加入真空均质乳化机的油相罐中，加热至45℃保温1h，均质压力为40mpa，得到乳剂型搽剂，即辛伐他汀软膏。
90.实施例5为对比例，制成的软膏与实施例2相比，4℃静置48小时左右，出现了水油分离现象，析出的水中检测出有辛伐他汀成分，常温静置30小时左右，出现了水油分离现象，析出的水中仍检测出有辛伐他汀成分。实施例2制备的软膏，4℃与常温静置120小时以上均未发现水油分离，说明本发明的制备方法明显能提高辛伐他汀在软膏中的稳定性，且延长保质期。
91.以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。