一种载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜及其制备方法

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1.本发明涉及医用材料技术领域，涉及一种载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜及其制备方法，以海藻酸凝胶为载体，载入那他霉素的治疗性眼用药膜。
技术背景：
2.真菌性角膜炎(fk)是一种严重的角膜疾病，常见致病性真菌包括曲霉菌属和镰刀菌属，在我国fk是导致失明的主要原因之一。该病治疗效果差，患病者多为一线工作的青壮年，对生活和生产造成极大的影响。
3.角膜作为一种无血管器官，具有独特的防御机制和解剖生理学屏障。大多数的局部抗真菌滴眼液在角膜渗透性差，且滴用后大部分通过泪液冲刷、瞬目和鼻泪管引流，局部吸收少，导致药物治疗非常困难。单纯药物治疗难以控制时，治疗性角膜移植术和药物治疗相结合是真菌性角膜炎治疗的常用方法，手术治疗存在角膜供体缺乏、费用昂贵、术后真菌感染复发、角膜植片排斥、继发性青光眼等问题。导致该病治疗效果差、视力恢复不理想。所以真菌性角膜炎的创新性治疗是目前需要解决的重点、难点，迫切需要一种能够保持药物浓度有效性、连续性的药物递送方法。
4.那他霉素是一种从链霉菌中提取的四烯类抗菌素。其作用机制是通过药物分子与真菌细胞膜的固醇部分结合，形成多烯固醇复合物，改变细胞膜的渗透性，使真菌细胞内的基本细胞成分流出，而至真菌死亡。临床上使用的那他霉素混悬液可用于治疗真菌性角膜炎，但那他霉素粒径较大，溶解性较差，并且受泪液分泌的影响，很难达到持续释放的效果。研究人员一直致力于对那他霉素的给药效果进行改进，例如中国专利cn200810140337.7公开的一种阳离子黏附型那他霉素纳米滴眼液，包括那他霉素，适量的渗透压调节剂和ph调节剂，还包括壳聚糖、普朗尼克f
‑
68和磷脂，其中磷脂在滴眼液中的质量百分比浓度0.01％
‑
2％、普朗尼克f
‑
68在滴眼液中的质量百分比浓度0.1％
‑
20％、壳聚糖在滴眼液中的质量百分比浓度0.01
‑
4％，壳聚糖分子量为5000～300000，脱乙酰度>85％；将那他霉素普通混悬剂制备成直径在10
‑
1000nm混悬剂粒，增大药物的溶解度，提高安全性和有效性，又将普通混悬剂的那他霉素药粒子通过磷脂和壳聚糖进行修饰，使其带正电荷，有助于提高药物的角膜吸收，增强药效并延长药物作用时间，且壳聚糖具有生物黏附作用，使药物粒子角膜黏附性增强；但其原料种类多，制备工艺复杂；中国申请专利cn201911030779.0公开了一种那他霉素聚合物胶束滴眼液，包括一定质量体积比的那他霉素聚合物胶束和磷酸盐缓冲液，其中那他霉素聚合物胶束中那他霉素所占质量百分含量为10～30％，余量为聚乙二醇
‑
聚甲基丙烯酸甘油酯嵌段共聚物；将聚乙二醇
‑
聚甲基丙烯酸甘油酯嵌段共聚物置于乙醇中自我组装成交联胶束，包载那他霉素后得到的那他霉素聚合物胶束滴眼液，能够延长那他霉素的释放时间，减少用药次数，但其治疗效果并未提高。
5.海藻酸钠是从褐藻类的海带或马尾藻中提取碘和甘露醇之后的副产物，其分子由β
‑
d
‑
甘露糖醛酸(β
‑
d
‑
mannuronic，m)和α
‑
l
‑
古洛糖醛酸(α
‑
l
‑
guluronic，g)按(1
→
4)键连接而成，是一种天然多糖，具有药物制剂辅料所需的稳定性、溶解性、粘性和安全性。海藻酸
钠已经在食品工业和医药领域得到了广泛应用。因此有必要开发一种以海藻酸凝胶为药物载体，用于治疗真菌性角膜炎的载有那他霉素的药膜，减少那他霉素的眼部刺激性和不适感，延缓药物释放，增强了那他霉素的作用时间。目前尚未有报道关于载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的报道。


技术实现要素：
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6.本发明针对现有技术存在的缺点，提供一种载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜及其制备方法，以海藻酸凝胶为载体，载入那他霉素的治疗性眼用药膜。
7.为了实现上述目的，本发明提供一种载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜，其成分和含量为：每1ml体积的药膜含有0.01
‑
0.03g的海藻酸钠、0.0025
‑
0.0075g的聚氧化乙烯和0.005
‑
0.015g的那他霉素。
8.本发明还提供所述载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的制备方法，具体的制备过程如下：
9.(1)取0.256
‑
0.768g海藻酸钠粉末和0.065
‑
0.195g聚氧化乙烯粉末分别溶入20ml和5ml去离子水中，确保海藻酸钠和聚氧化乙烯没有附着在烧杯底部和侧壁，再将两种溶液混合后轻轻搅拌；
10.(2)将上述溶液放置于磁力搅拌器，室温下搅拌3～5小时得到均匀的凝胶，向均匀的凝胶中加入那他霉素，那他霉素与凝胶的质量体积比为0.005～0.015g：1ml，然后在避光环境、50℃下搅拌30分钟至均匀且无析出；
11.(3)取步骤(2)的含有那他霉素的水凝胶3～10g平铺于直径10cm培养皿中，避光静置消泡；
12.(4)用无水乙醇和去离子水配置乙醇溶液，其中无水乙醇与去离子水的体积比为0～2:1～2，然后加入二水氯化钙，二水氯化钙与乙醇溶液的质量体积比为0.662g:9ml，得到含有钙离子的乙醇水交联液，其中钙离子的质量体积比浓度为0.02g/ml，并用0.22μm滤过膜过滤1次；
13.(5)将9ml乙醇水交联液倒入铺有含那他霉素的水凝胶的培养皿中，使载药水凝胶与交联液均匀混合交联，静置1小时，然后用去离子水冲洗载药凝胶膜3遍；
14.(6)将载药凝胶膜置于烘干箱中50℃、避光条件下烘干，即为载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜。
15.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
16.1)以海藻酸凝胶为药物载体，海藻酸的性质类似于人体细胞外基质，组织相容性好，可降解为无毒且不参与代谢的多糖，减少了那他霉素的眼部刺激性和不适感。
17.2)聚氧化乙烯增加载药凝胶的粘度，延缓药物的释放，增强药膜的柔顺性和延展性，降低载药膜的脆性，加强其可塑性，使药膜能更好的贴附于角膜溃疡面。
18.3)使用钙离子交联方法，替换海藻酸钠中的钠离子，使材料的空间结构更加内聚，并且让载药凝胶成膜后更加稳固，降低药膜内部孔隙大小，延缓药物释放，增强了那他霉素的作用时间。
19.4)乙醇具有破坏粘结力和氢键的能力，提高海藻酸钠凝胶的润湿性，降低表面张力，使交联离子更容易进入凝胶深部。乙醇和水的体积比影响钙离子渗入量及其在海藻酸
盐中的扩散深度，乙醇含量越高，交联程度越深，孔隙越小，药物释放越缓慢。
20.综上，本发明以海藻酸凝胶为药物载体，载入那他霉素，用钙离子交联并用乙醇水比例调控交联强度，制备的凝胶药膜能更好的贴附于角膜溃疡面，药物作用时间长，效果好，无刺激性和不适感，患者接受度高；是一种新型眼用药膜，制备方法简单，成本低，市场前景广阔。
附图说明：
21.图1为本发明涉及的实施例5载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的弹性模量检测实验结果示意图。
22.图2为本发明涉及的实施例6载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的药物释放曲线示意图。
23.图3为本发明涉及的实施例7载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的细胞毒性实验结果示意图。
24.图4为本发明涉及的实施例8载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的抑菌效果实验结果示意图。
25.图5位本发明涉及的实施例9载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜在小鼠真菌性角膜炎动物模型的治疗效果实验结果示意图。
具体实施方式：
26.本发明的具体实施方式如下：
27.实施例1：
28.本实施例涉及载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜，其成分和含量为：每1ml体积的药膜含有0.01
‑
0.03g的海藻酸钠、0.0025
‑
0.00755g的聚氧化乙烯和0.005
‑
0.015g的那他霉素；具体的制备过程如下：
29.(1)取0.256
‑
0.768g海藻酸钠粉末和0.065
‑
0.195g聚氧化乙烯粉末分别溶入20ml和5ml去离子水中，确保海藻酸钠和聚氧化乙烯没有附着在烧杯底部和侧壁，再将两种溶液混合后轻轻搅拌；
30.(2)将上述溶液放置于磁力搅拌器，室温下搅拌3～5小时得到均匀的凝胶，向均匀的凝胶中加入那他霉素，那他霉素与凝胶的质量体积比为0.005～0.015g：1ml，然后在避光环境、50℃下搅拌30分钟至均匀且无析出；
31.(3)取步骤(2)的含有那他霉素的水凝胶3～10g平铺于直径10cm培养皿中，避光静置消泡；
32.(4)用无水乙醇和去离子水配置乙醇溶液，其中无水乙醇与去离子水的体积比为0～2:1～2，然后加入二水氯化钙，二水氯化钙与乙醇溶液的质量体积比为0.662g:9ml，得到含有钙离子的乙醇水交联液，其中钙离子的质量体积比浓度为0.02g/ml，并用0.22μm滤过膜过滤1次；
33.(5)将9ml乙醇水交联液倒入铺有含那他霉素的水凝胶的培养皿中，使载药水凝胶与交联液均匀混合交联，静置1小时，然后用去离子水冲洗载药凝胶膜3遍；
34.(6)将载药凝胶膜置于烘干箱中50℃、避光条件下烘干，即为载有那他霉素的海藻
酸凝胶药膜。
35.实施例2：
36.本实施例涉及载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的制备过程，具体步骤如下：
37.(1)取0.512g海藻酸钠粉末和0.127g聚氧化乙烯粉末分别溶入20ml和5ml去离子水中，确保海藻酸钠和聚氧化乙烯没有附着在烧杯底部和侧壁，再将两种溶液混合后轻轻搅拌；
38.(2)将上述溶液放置于磁力搅拌器室温下搅拌3小时得到均匀的凝胶，向均匀的凝胶中加入那他霉素，那他霉素与凝胶的质量体积比为0.01g：1ml，在避光环境、50℃下搅拌30分钟至均匀且无析出；
39.(3)取含有那他霉素的水凝胶5g平铺于直径10cm培养皿中，避光静置消泡；
40.(4)取6ml无水乙醇与3ml去离子水混合后，制成乙醇溶液，然后加入0.662g二水氯化钙，得到含有钙离子的乙醇水交联液，其中钙离子的质量体积比浓度为0.02g/ml，并用0.22μm滤过膜过滤1次；
41.(5)将所得9ml交联液倒入铺有含那他霉素的水凝胶的培养皿中，使载药水凝胶与交联液均匀混合交联，静置1小时，然后用去离子水冲洗载药凝胶膜3遍；
42.(6)将载药凝胶置于烘干箱中50℃、避光条件下烘干，即为载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜。
43.实施例3：
44.本实施例涉及载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜，其具体的制备过程如下：
45.(1)取0.256g海藻酸钠粉末和0.065g聚氧化乙烯粉末分别溶入20ml和5ml去离子水中，确保海藻酸钠和聚氧化乙烯没有附着在烧杯底部和侧壁，再将两种溶液混合后轻轻搅拌；
46.(2)将上述溶液放置于磁力搅拌器，室温下搅拌5小时得到均匀的凝胶，向均匀的凝胶中加入那他霉素，那他霉素与凝胶的质量体积比为0.005g：1ml，然后在避光环境、50℃下搅拌30分钟至均匀且无析出；
47.(3)取步骤(2)的含有那他霉素的水凝胶3g平铺于直径10cm培养皿中，避光静置消泡；
48.(4)取去离子水9ml，然后加入二水氯化钙，二水氯化钙与去离子水的质量体积比为0.662g:9ml，得到含有钙离子的交联液，其中钙离子的质量体积比浓度为0.02g/ml，并用0.22μm滤过膜过滤1次；
49.(5)将9ml交联液倒入铺有含那他霉素的水凝胶的培养皿中，使载药水凝胶与交联液均匀混合交联，静置1小时，然后用去离子水冲洗载药凝胶膜3遍；
50.(6)将载药凝胶膜置于烘干箱中50℃、避光条件下烘干，即为载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜。
51.实施例4：
52.本实施例涉及载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜，其具体的制备过程如下：
53.(1)取0.768g海藻酸钠粉末和0.195g聚氧化乙烯粉末分别溶入20ml和5ml去离子水中，确保海藻酸钠和聚氧化乙烯没有附着在烧杯底部和侧壁，再将两种溶液混合后轻轻搅拌；
54.(2)将上述溶液放置于磁力搅拌器，室温下搅拌5小时得到均匀的凝胶，向均匀的凝胶中加入那他霉素，那他霉素与凝胶的质量体积比为0.015g：1ml，然后在避光环境、50℃下搅拌30分钟至均匀且无析出；
55.(3)取步骤(2)的含有那他霉素的水凝胶8g平铺于直径10cm培养皿中，避光静置消泡；
56.(4)用无水乙醇和去离子水配置乙醇溶液，其中无水乙醇与去离子水的体积比为2：1，然后加入二水氯化钙，二水氯化钙与乙醇溶液的质量体积比为0.662g:9ml，得到含有钙离子的乙醇水交联液，其中钙离子的质量体积比浓度为0.02g/ml，并用0.22μm滤过膜过滤1次；
57.(5)将9ml乙醇水交联液倒入铺有含那他霉素的水凝胶的培养皿中，使载药水凝胶与交联液均匀混合交联，静置1小时，然后用去离子水冲洗载药凝胶膜3遍；
58.(6)将载药凝胶膜置于烘干箱中50℃、避光条件下烘干，即为载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜。
59.实施例5：
60.本实施例为实施例2制备的载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的弹性模量检测试验，具体步骤如下：
61.使用拉伸试验机对药膜的机械强度进行测试，以10mm/min速度拉伸，1％应变力条件下的应力
‑
应变曲线测试弹性模量，结果如图1所示。
62.从图1可以看出，在10mm/分钟的速度条件下测量中发现，载药膜所承受最大拉力为6.392n，强度为0.66mpa，弹性模量为0.57mpa，延展性达到100％，说明本发明载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜拥有较好的机械强度和延展性。
63.实施例6：
64.本实施例为实施例2制备的载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的体外药物缓释实验，具体步骤为：
65.1、建立那他霉素的吸光度
‑
浓度标准曲线，先配置不同梯度浓度的那他霉素标准溶液，然后分别测量各标准溶液在λmax＝304nm的吸光度，绘制出那他霉素的吸光度
‑
浓度标准曲线；
66.2、将载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜剪裁后置于pbs缓冲溶液中，在37℃避光条件下轻微搅拌，在不同的时间间隔(见表1)分别取出2ml样品，根据标准曲线在λmax＝304nm处测量已释放的那他霉素浓度和计算药物释放的百分率，结果如表1和图2所示。
67.从图2可以看出，整个药物释放阶段呈现出3段式，在最初的3小时内释放了总药量的10.9％；第二阶段的药物释放迅速，达到了总载药量86.5％，其中在第9小时共释放总载药量59.2％；第三阶段的药物释放缓慢，在第12小时后，由总载药量的86.5％释放至最大释放量95.4％(测试膜中那他霉素理论全部释放后的浓度为50μg/ml)。
68.表1载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的体外药物缓释实验结果
[0069][0070][0071]
实施例7：
[0072]
本实施例为实施例2制备的载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的细胞毒性实验，具体为cck8细胞增殖
‑
毒性检测，步骤如下：
[0073]
在96孔板中接种永生化人角膜上皮细胞悬液，将培养板放在培养箱中预培养24小时。实验分为三组，分别为不载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜组(2：1n
‑
nata)、载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜组(2：1nata)和对照组，对照组为单纯培养液组；将前两组的凝胶药膜剪裁至相同大小后加入到150μl培养液中，在37℃、避光条件下静置24小时；然后向96孔板培养液中分别加入两组含有凝胶药膜成分的培养液150μl，对照组加入等体积培养液，每组32孔；将培养板在培养箱孵育24小时，更换培养液后再向每孔加入10微升的cck8溶液；将培养板置于培养箱内孵育4小时；用酶标仪测定在450nm处的吸光度，结果如图3所示。
[0074]
从图3可以看出，载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜成分的培养基对人角膜上皮细胞无明显的毒性作用。
[0075]
本实施例涉及的不载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜采用实施例2方法制备，不同的是未加入那他霉素。
[0076]
实施例8：
[0077]
本实施例为实施例2制备的载有那他霉素的海藻酸药膜的体外抑菌效果实验。
[0078]
在沙氏培养基中加入真菌孢子浓度为1
×
106cfu/ml孢子，将载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜(sa
‑
peo
‑
nata)、不含那他霉素的海藻酸凝胶药膜(sa
‑
peo)、含有相同那他霉素量的药敏纸片和不含那他霉素的药敏纸片分别剪裁成抑菌环实验的标准大小，置于培养基中，培养箱培育48小时后，记录抑制真菌的区域大小，结果如图4所示。
[0079]
结果显示培养48小时后，含有相同那他霉素量的药敏纸片的抑菌区域平均直径为10
±
0.4mm(图4a白色)，载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜的抑菌区域平均直径为12
±
0.3mm(图4b白色)，而两组没有那他霉素的药膜和纸片在培育48小时后均未见明显抑菌环(黑色)。
[0080]
本实施例涉及的含有相同那他霉素量的药敏纸片中的那他霉素含量与实施例2制备的载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜中的那他霉素含量相同。
[0081]
实施例9：
[0082]
本实施例为实施例2制备的载有那他霉素的海藻酸药膜在治疗小鼠真菌性角膜炎的应用实验。
[0083]
取8周龄c57bl/6健康雌鼠30只，随机分为五组，一组为空白对照组(normal)，不做任何处理，另外四组建立小鼠烟曲霉菌性角膜炎动物模型，均以右眼为实验眼。模型建立成功后，其中一组为真菌感染组(af)，不给予任何处理；一组为不载有那他霉素的海藻酸药膜组(af+sa
‑
peo)，在建模后的眼中植入不含有那他霉素的海藻酸钠药膜，药膜每24小时更换1次；一组为载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜组(af+sa
‑
peo
‑
nata)，在建模后的眼中植入载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜，药膜每24小时更换1次；一组为那他霉素治疗组(af+natamycin)，给与那他霉素每天滴眼6次。根据o’day标准行角膜炎严重程度评分标准，裂隙灯下观察并记录小鼠角膜溃疡的评分情况，实验结果如图5所示。
[0084]
从图5可以看出：空白对照组的角膜透明无病变；模型建立3天后，真菌感染组和不载有那他霉素的海藻酸药膜组的小鼠角膜的混浊面积达70％
‑
90％，混浊程度不均匀，有不规则水肿以及部分表现龛样溃疡或溃疡面积较大；那他霉素治疗组的小鼠角膜混浊面积50％，混浊程度减轻，有不规则水肿；载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜组的小鼠角膜混浊面积26％
‑
40％，混浊程度较轻，有不规则溃疡和轻度的角膜水肿。临床评分显示，那他霉素治疗组(af+natamycin)的评分低于不载药凝胶药膜组(af+sa
‑
peo)和真菌感染组(af)，高于载药凝胶药膜组(af+sa
‑
peo
‑
nata)。载药凝胶药膜组(af+sa
‑
peo
‑
nata)的评分低于不载药凝胶药膜组(af+sa
‑
peo)和那他霉素治疗组(af+natamycin)。
[0085]
实施例10：
[0086]
本实施例为载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜在治疗真菌性角膜炎患者中的应用案例。
[0087]
收集2017年12月至2020年12月于青岛大学附属医院接受治疗的真菌性角膜炎患者40例，其中男性20例，女性20例，年龄为21～75岁，平均(48.95
±
5.93)岁。随机分为药膜组和对照组，每组20例，其中药膜组男性11例，女性9例，年龄为22～73岁，平均(47.96
±
5.25)岁；对照组男性9例，女性11例，年龄为21～75岁，平均(49.82
±
4.39)岁。两组性别及年龄差异无统计学意义。
[0088]
药膜组接受载有那他霉素的海藻酸凝胶药膜治疗，1次/天，对照组接受那他霉素滴眼液治疗，6次/天，连续治疗21天。
[0089]
按照相关标准对患者治疗后临床效果进行评价，治愈：经过治疗后，患者角膜浸润及水肿情况消退，结膜充血情况消失，真菌培养呈现为阴性，角膜溃疡愈合，经过荧光素钠染色检查后呈现为阴性；显效：经过治疗后，患者相关检查结果呈现阴性，各项指标均得到明显改善，仅存在结膜充血情况；有效：经过治疗后，患者相关检查结果呈现阴性，各项指标
中仅1～2项得到改善；无效：治疗前后各项指标均无变化，或者存在加重情况。治疗总有效率＝(治愈+显效+有效)/总例数
×
100％。按照相关标准对患者各项症状进行评价，每一项症状评分最高为5分，评分越高则代表该症状程度越严重。
[0090]
经过统计后，药膜组20例患者接受治疗后，19例患者治疗效果显著，其中治愈4例，显效13例，有效2例，无效1例，治疗有效率为95.0％(19/20)；对照组20例患者接受治疗后，13例患者治疗效果显著，其中治愈2例，显效10例，有效2例，无效6例，治疗有效率为65.0％(13/20)。药膜组的治疗前后效果参数如表2所示。
[0091]
表2药膜组的治疗前后效果参数比较
[0092][0093]
临床病例应用
[0094]
病例1：王
××
，女，37岁，半月前被树枝划伤右眼，出现眼红眼、流泪、异物感，未予处理，期间多次揉眼，伴视物模糊加重，于当地医院就诊，诊断为“角膜炎(右)”，给予可乐必妥滴眼液治疗，后就诊于我院，眼科检查：右眼视力0.3，眼压20mmhg，结膜混合性充血，角膜5点钟近角膜缘见2mm
×
3mm溃疡，牙膏样，深度达深基质层，周围见伪足及卫星灶，周围角膜水肿，房水细胞(+)。诊断为“真菌性角膜炎(右)”，给予角膜清创联合那他霉素滴眼液点右眼q2h治疗。患者自述应用眼药水依从性差，滴用后眼部不适明显，治疗效果欠佳，遂改用载有那他霉素的海藻酸药膜每天1次治疗，7天后眼科检查：右眼视力0.5，眼压18mmhg，角膜混浊面积缩小，溃疡深度变浅。
[0095]
病例2：刘
×
，男，27岁，1周前因“醉酒”与人争执被“烧烤摊竹签”划伤左眼，立即出现左眼眼痛、畏光、流泪，未予特殊处理，1周后仍然眼红眼疼，并出现视力下降，来我院就诊，眼科检查：左眼视力0.1，眼压15mmhg，角膜中央见4mm
×
4mm不规则溃疡，周边水肿，边界不规整，可见卫星灶。房水细胞(+)，瞳孔圆，对光反应好，晶状体透明。诊断为“真菌性角膜炎(左)”，给予角膜清创联合载有那他霉素的海藻酸钠药膜每日一次。4天后复诊左眼视力0.3，眼压12mmhg，角膜轻度水肿，混浊面积较前减轻，溃疡变浅。