皮肤斑贴试验在制备氨苯砜综合征诊断产品中的应用

1.本发明属于生物技术领域，尤其涉及皮肤斑贴试验在制备氨苯砜综合征诊断产品中的应用。


背景技术：

2.氨苯砜综合征是一种迟发型超敏反应，对患者存在致命威胁。氨苯砜综合征临床症状缺乏特异性，往往很难与疾病本身伴随的感染、炎症反应相鉴别，且患者往往会在同一时间段服用多种药物，这也导致致敏药物难以判定以及准确停用，以致临床漏诊、误诊现象严重。目前亟需一种能够明确诊断氨苯砜综合征的方法。
3.目前药物不良反应的实验诊断方法包括体内斑贴实验和体外酶联免疫斑点实验(enzyme-linked immunospot,elispot)以及淋巴细胞转化实验(lymphocyte transformation test,ltt)。elispot实验以及ltt实验灵敏度较低，有研究显示头孢菌素超敏患者的elispot实验灵敏度在40％，β-内酰胺超敏反应患者的ltt实验灵敏度仅在60
–
70％，从而限制了其临床应用。
4.皮肤斑贴试验作为测定机体变态反应的一种辅助诊断方法，迄今在皮肤科的应用已有120多年的历史。最早于1895年由德国学者josef jadassohn在德国皮肤科学会上所做的报告，使斑贴试验确立为研究接触性皮炎的可靠实验手段。目前该技术已成为皮肤科医师需具备的基本技能之一。


技术实现要素：

5.本发明一个目的是提供皮肤斑贴试验试剂盒的用途。
6.本发明提供的皮肤斑贴试验试剂盒在制备诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者产品中的应用。
7.所述皮肤斑贴试验试剂盒中斑贴物由氨苯砜和基质组成；
8.所述基质由聚乙二醇200和dmso组成。
9.上述应用中，所述斑贴物由氨苯砜、聚乙二醇200和dmso组成；其中，所述氨苯砜的质量百分含量为5％-25％。
10.上述应用中，所述氨苯砜的质量百分含量为5％、10％、15％、20％和25％。
11.上述应用中，所述斑贴物中dmso的质量百分含量为10％。
12.本发明另一个目的是提供一种诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者的产品。
13.本发明提供的产品为皮肤斑贴试验试剂盒；所述皮肤斑贴试验试剂盒中斑贴物由氨苯砜和基质组成；
14.所述基质由聚乙二醇200和dmso组成。
15.上述产品中，所述斑贴物由氨苯砜、聚乙二醇200和dmso组成；其中，所述氨苯砜的质量百分含量为5％-25％。
16.上述产品中，所述氨苯砜的质量百分含量为5％、10％、15％、20％和25％。
17.上述产品中，所述斑贴物中dmso的质量百分含量为10％。
18.上述聚乙二醇200和dmso在制备皮肤斑贴试验试剂盒中的应用也是本发明保护的范围。
19.上述氨苯砜、聚乙二醇200和dmso在制备诊断或辅助诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者产品中的应用也是本发明保护的范围。
20.上述受试者均为停用激素或未服用激素受试者，可以为疑似氨苯砜综合征患者也可以为健康人。
21.因此，本发明所要解决的技术问题是如何建立一种高灵敏度和特异度的皮肤斑贴试验以免疫确证氨苯砜综合征。
22.本发明选取10例明确诊断为氨苯砜综合征患者作为实验组，5例健康志愿者作为对照组。对两组人群进行皮肤斑贴试验。结果显示：10例氨苯砜综合征患者中，皮肤斑贴试验阳性6例，灵敏度60％；5例健康志愿者斑贴试验均为阴性，特异度100％。本研究成功建立了皮肤斑贴试验方法，为氨苯砜综合征的诊断提供了有效的技术手段。
附图说明
23.图1为不同基质皮肤斑贴试验结果图。
具体实施方式
24.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
25.下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
26.下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
27.下述实施例中的斑试器购自瑞典化学技术诊断有限公司，型号：iq-ultra。
28.下述实施例采用如下物质：
29.(1)氨苯砜斑试器基质选择
30.基质考察的目的为选择出无刺激性和免疫原性，性质稳定，和主药成分没有相互作用，且能较好的释放出药物，有良好的皮肤渗透作用。对实验结果无影响的赋形剂。因此本研究选择凡士林和聚乙二醇200两种基质。
31.(2)氨苯砜斑试器基质浓度选择
32.凡士林基质：氨苯砜浓度分别为0％、0.1％、1％、2.5％、5％、10％、15％、20％和25％；
33.聚乙二醇200+10％dmso：氨苯砜浓度分别为0％、0.1％、1％、2.5％、5％、10％、15％、20％和25％；
34.实施例1、检测受试者是否患有氨苯砜综合征的方法
35.一、实验对象
36.10例临床明确诊断为氨苯砜综合征的患者，5例健康志愿者。
37.二、皮肤斑贴试验
38.氨苯砜综合征患者症状消退并停用激素(抑制过敏反应的激素，具体为糖皮质激
素)后6-10周进行皮肤斑贴试验。
39.具体如下：
40.1、氨苯砜斑试器基质选择
41.基质考察的目的为选择出无刺激性和免疫原性，性质稳定，和主药成分没有相互作用，且能较好的释放出药物，有良好的皮肤渗透作用。对实验结果无影响的赋形剂。因此本研究选择凡士林和聚乙二醇200两种基质。
42.2、氨苯砜浓度选择
43.不同浓度氨苯砜的凡士林基质斑试物：由凡士林和氨苯砜组成，且氨苯砜的质量百分含量分别为0％、0.1％、1％、2.5％、5％、10％、15％、20％和25％(质量百分含量)，余量为凡士林；
44.不同浓度氨苯砜的聚乙二醇200+10％dmso基质斑试物：由聚乙二醇200、dmso和氨苯砜组成，其中，dmso的质量百分含量为10％，氨苯砜浓的质量百分含量分别为0％、0.1％、1％、2.5％、5％、10％、15％、20％和25％，余量为聚乙二醇200。
45.3、斑贴试验操作流程
46.1)试验部位：上背部两侧的正常皮肤。
47.2)将斑试器的斑试胶带(瑞典化学技术诊断有限公司，型号：iq-ultra)隔离纸剥除，药室朝上置于试验台上。斑试物排列顺序为自上而下，自左向右并作标记。分别将不同浓度氨苯砜的凡士林基质斑试物和不同浓度氨苯砜的聚乙二醇200+10％dmso基质斑试物加入药室内，加入量略超过药室容积的一半(约0.02g)；
48.由于聚乙二醇200+10％dmso基质为液体，可将滤纸浸湿(约0.02ml)放入药室内。注意加氨苯砜受试物时尽量不要沾到斑试器边缘。
49.3)将加有斑试物的斑试胶带从下部开始纵向贴于脊柱两侧的正常皮肤上，同时逐个轻压药室以驱除空气，并使试验物均匀分布。
50.4)试验部位做好标记，以便观察。
51.5)斑贴试验时间：48小时。
52.6)观察结果时间：帖敷后48小时，首先去除斑试器，用湿的软纸或棉签清除残留的斑试物，72小时观察结果，并进行图像的采集。
53.若任一浓度药物受试皮肤处出现瘙痒、轻度红肿、红斑、红肿、丘疹、水疱甚至坏死，则斑贴试验为阳性，证明受试者为或候选为氨苯砜综合征患者；
54.若任何浓度药物受试皮肤处未出现瘙痒、轻度红肿、红斑、红肿、丘疹、水疱甚至坏死，斑贴试验为阴性，证明受试者出不为或候选不为氨苯砜综合征患者。
55.斑贴试验注意事项：
56.1)皮炎急性期不宜作斑贴试验。
57.2)试者在受试前2周及试验期间不得应用皮质类固醇激素，试验前3天及受试期间宜停用抗组织胺类药物。
58.3)斑试前应向受试者说明意义和可能出现的反应，以便取得完全合作。
59.4)必须嘱咐受试者，如发生强烈反应应立即去掉斑试物。
60.5)斑试期间不宜洗澡、饮酒及搔搓斑试部位，并避免激烈运动。
61.6)在反应程度判定中，要排除假阳性或假阴性结果。
62.7)应以赋形剂作对照。必要时尚需以正常人对照。
63.8)孕妇忌本实验。
64.编号为患者002的患者结果如图1所示，可以看出，聚乙二醇200+10％二甲基亚砜溶液基质效果强于凡士林基质，并且皮肤斑贴试验阳性反应呈现浓度依赖性，氨苯砜浓度高于5％开始出现阳性反应，并且在25％浓度时反应达到最大；因此，5％-25％浓度效果明显，并且聚乙二醇200+10％dmso效果优于凡士林基质。
65.采用含有5％-25％氨苯砜的聚乙二醇200+10％dmso基质斑试物检测10例氨苯砜综合征患者和5例健康志愿者，结果如表1所示，可以看出，10例氨苯砜综合征患者中有6例斑贴试验阳性，灵敏度为60％，5例健康志愿者均为阴性，特异度为100％。本研究成功建立了氨苯砜综合征免疫确证方法-皮肤斑贴试验，为氨苯砜综合征的诊断提供了有效的技术手段。
66.表1为氨苯砜综合征皮肤斑贴实验结果统计
[0067][0068][0069]
因此，可以通过皮肤斑贴实验检测或诊断受试者是否为氨苯砜综合征患者，具体方法如下：
[0070]
停用激素或未服用激素的受试者进行皮肤斑贴实验，皮肤斑贴实验采用的斑试物分别为含有氨苯砜的聚乙二醇200+10％dmso基质斑试物，且氨苯砜的质量百分含量分别为5％-25％，具体为5％、10％、15％、20％和25％；
[0071]
所述含有5％-25％氨苯砜的聚乙二醇200+10％dmso基质斑试物为由聚乙二醇200、dmso和氨苯砜组成，其中，dmso的质量百分含量为10％，氨苯砜浓的质量百分含量分别为5％-25％，余量为聚乙二醇200。
[0072]
若任一浓度药物受试皮肤处出现瘙痒、轻度红肿、红斑、红肿、丘疹、水疱甚至坏死，则斑贴试验为阳性，证明受试者为或候选为氨苯砜综合征患者；
[0073]
若任何浓度药物受试皮肤处未出现瘙痒、轻度红肿、红斑、红肿、丘疹、水疱甚至坏死，则斑贴试验为阴性，证明受试者出不为或候选不为氨苯砜综合征患者。
[0074]
实施例2、检测受试者是否患有氨苯砜综合征的方法的应用
[0075]
一、实验对象
[0076]
16例临床明确诊断为氨苯砜综合征的患者，12例健康志愿者。
[0077]
二、皮肤斑贴试验
[0078]
1、氨苯砜斑试器基质选择
[0079]
选择凡士林和聚乙二醇200两种基质。
[0080]
2、氨苯砜浓度选择
[0081]
含有氨苯砜的聚乙二醇200+10％dmso基质斑试物：由聚乙二醇200、dmso和氨苯砜组成，其中，dmso的质量百分含量为10％，氨苯砜浓的质量百分含量分别为5％、10％、15％、20％和25％，余量为聚乙二醇200。
[0082]
3、斑贴试验操作流程
[0083]
与实施例1相同。
[0084]
结果如表2所示：
[0085]
表2为氨苯砜综合征斑贴试验结果统计
[0086][0087]
可以看出，12例临床明确诊断为氨苯砜综合征的患者中有7人用本发明的方法确诊为氨苯砜综合征的患者，本发明方法对于氨苯砜综合征的患者的诊断灵敏度为58.33％；
[0088]
12例正常对照用本发明的方法确诊不为氨苯砜综合征的患者，本发明方法特异度高达100％。