(一)
技术领域：
本发明涉及一种杂环硫醇类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。(二)
背景技术：
：恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病及都发病之一，因此开发新颖的抗肿瘤药物具有重要的现实意义。杂环是药物及天然产物的基本母核，大量文献报道该类化合物具有较好生物活性，进一步研究杂环硫醇类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用具有一定的社会意义。(三)技术实现要素：为了获得一种新型抗肿瘤药物的活性成分，本发明采用如下技术方案：一种如式(i)、(ii)或(iii)所示的杂环硫醇类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用：式(i)中，r1、r2各自独立为c1～c10烷基或者r1和r2连接成环并与两者之间的n组合形成含n或含n、o的c4～c8杂环；r3、r4各自独立为c1～c10烷基或者r3和r4连接成环并与两者之间的n组合形成含n或含n、o的c4～c8杂环；优选r1、r2各自独立为甲基或者r1和r2连接成环并与两者之间的n组合形成哌啶环、四氢吡咯或吗啉环；r3、r4各自独立为甲基或者r3和r4连接成环并与两者之间的n组合形成哌啶环、四氢吡咯或吗啉环；式(ii)中，r5为c1～c10烷基或两个r5连接成环并与两者之间的n组合形成含n的c4～c8杂环；优选r5为甲基或者两个r5连接成环并与两者之间的n组合形成哌啶环；式(iii)中，r6为c6～c8芳基，优选为苯基。进一步，所述的杂环硫醇类化合物具体优选为下列化合物之一：进一步，所述的肿瘤细胞为人肝癌细胞(hepg2)、人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞(a549)。再进一步，所述的肿瘤为人肝癌细胞(hepg2)时，所述的化合物(i-1)或(ii-2)有较好的抗肿瘤活性；所述的肿瘤为人乳腺癌细胞(t47d)时，化合物(ii-1)、(ii-2)或(iii-1)有较好的抗肿瘤活性；所述的肿瘤为人非小细胞肺癌细胞(a549)时，化合物(i-6)、(ii-1)或(iii-1)有较好的抗肿瘤活性。本发明涉及的式(i)所示的杂环硫醇类化合物制备方法主要通过三聚氰氯与二级胺(二甲胺、哌啶、四氢吡咯或吗啉)在三乙胺作用下，室温条件下制得式(iv)所示的2-氯-1,3,5-三嗪中间体，之后与硫脲在110℃下反应，再用氢氧化钠处理制得式(i)所示的氮杂环硫醇类化合物。其中，三聚氰氯与二级胺的物质的量之比为1：1～2：1；式(iv)所示的2-氯-1,3,5-三嗪中间体、硫脲与氢氧化钠的物质的量之比为1：2：1。式(iv)中r1、r2、r3、r4分别与式(i)中r1、r2、r3、r4相同。本发明涉及的式(ii)所示的杂环硫醇化合物制备方法主要通过二氰胺钠和胺在盐酸存在下，90℃反应，得到式(v)所示的氰基胍；然后在盐酸作用下与硫代硫酸钠室温反应，得到式(vi)所示的脒基硫脲；最后，在甲醇钠作用下与甲酸甲酯缩合制得式(ii)所示的杂环硫醇化合物。其中，胺与二氰胺钠和盐酸的物质的量比为1：1：1；苯胺、盐酸与硫代硫酸钠的物质的量比为1：1.8：0.9；脒基硫脲、钠和甲酸乙酯的物质的量比为1：3：4式(v)、(vi)中r5与式(ii)中r5相同。本发明涉及的式(iii)所示的杂环硫醇化合物制备方法主要通过式(vii)所示的芳甲酰异硫氰酸酯与式(viii)所示的芳甲脒在氢氧化钠作用下，室温下反应制得式(iii)所示的杂环硫醇化合物。其中，芳甲酰异硫氰酸酯与芳甲脒和氢氧化钠的物质的量比为1：1：4；式(vii)、(viii)中r6与式(iii)中r6相同。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：本发明所提供的杂环硫醇化合物显示较好的抗肝癌细胞、人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞活性，为新药筛选及开发奠定了基础，具有较好的实用价值。具体实施方式下面将通过实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围不限于此。实施例1：化合物(i-1)的制备将三聚氰氯(5.00g,27.11mmol)加入丙酮(50ml)中，在冰浴条件下加入吗啉(4.7ml,53.94mmol)和三乙胺(11.2ml,80.54mmol)，室温下反应2h，反应结束后，加入适量冰水过滤，干燥得化合物(iv-1)(6.90g)。将上述化合物(iv-1)(6.90g,理论物质的量为24.18mmol)和硫脲(3.78g,49.65mmol)加入二氧六环(50ml)中，110℃下反应13h，将反应液冷却至室温，过滤，滤饼溶解在乙酸乙酯(60ml)中，再加入氢氧化钠(1.0g,25mmol)，室温下反应3h。反应结束后过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，用甲醇重结晶得化合物(i-1)(3.51g,yield:51％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.42(m,1h),3.81-3.65(m,8h),3.62-3.59(m,8h)。实施例2：化合物(i-2)的制备操作同实施例1，只是将吗啉改为哌啶(1.8ml,18.18mmol)，三聚氰氯的量改为(1.78g,9.65mmol)，三乙胺的量改为(4.7ml,33.81mmol)，化合物(iv-1)改为化合物(iv-2)(1.73g,6.14mmol)，硫脲的量改为(1.03g,13.53mmol)，得化合物(i-2)(0.57g,yield:33％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.42(m,1h),3.81-3.65(m,8h),3.62-3.59(m,8h)。实施例3：化合物(i-3)的制备操作同实施例1，只是将吗啉改为二甲胺水溶液(10ml,60.20mmol)，三聚氰氯的量改为(5.56g,30.15mmol)，三乙胺的量改为(13ml,93.92mmol)，化合物(iv-1)改为化合物(iv-3)(5.21g,25.91mmol)，硫脲的量改为(3.95g,51.86mmol)，得化合物(i-3)(3.62g,yield:70％)实施例4：化合物(i-4)的制备操作同实施例1，只是将吗啉的量改为(1.4ml,16.26mmol)，三聚氰氯的量改为(2.98g,16.26mmol)，三乙胺的量改为(7.0ml,50.26mmol)，制得化合物(vii-1)(2.36g)；再操作同实施例1，只是将吗啉改为四氢吡咯(0.8ml,10.00mmol)，三聚氰氯改为化合物(vii-1)(2.36g,10mmol)，三乙胺的量改为(4.2ml,30.00mmol)，化合物(iv-1)改为化合物(iv-4)(1.01g,3.74mmol)，硫脲的量改为(0.58g,7.62mmol)，得化合物(i-4)(0.39g,yield:39％)；1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.27(s,1h),3.79-3.67(m,4h),3.63-3.58(m,4h),3.51-3.44(m,4h)。实施例5：化合物(i-5)的制备操作同实施例4，只是将吗啉改为哌啶(3.0ml,30.30mmol)，三聚氰氯的量改为(6.00g,32.54mmol)，三乙胺的量改为(15.0ml,107.92mmol)，制得化合物(vii-2)(3.38g)；再操作同实施例1，只是将吗啉的量改为(1.3ml,14.92mmol)，三聚氰氯改为化合物(vii-2)(3.38g,14.50mmol)，三乙胺的量改为(6.1ml,43.86mmol)，化合物(iv-4)改为化合物(iv-5)(3.20g,11.28mmol)，硫脲的量改为(1.77g,23.25mmol)，得化合物(i-5)(1.49g,yield:47％)；1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.14(s,1h),3.84–3.60(m,4h),3.52–3.40(m,4h),1.96–1.76(m,4h),1.65–1.56(m,2h),1.52–1.42(m,4h)。实施例6：化合物(i-6)的制备操作同实施例5，只是将化合物(vii-2)的量改为(2.81g,12.05mmol)，吗啉改为四氢吡咯(1.0ml,12.05mmol)，三乙胺的量改为(5.4ml,38.85mmol)，化合物(iv-5)改为化合物(iv-6)(1.99g,7.40mmol)，硫脲的量改为(1.13g,14.80mmol)，得化合物(i-6)(1.43g,yield:73％)；1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.15(s,1h),3.76–3.66(m,4h),3.51–3.42(m,4h),1.95–1.79(m,4h),1.65–1.58(m,2h),1.53–1.44(m,4h)实施例7：化合物(ii-1)的制备将二甲胺盐酸盐(10.00g,122.64mmol)加入水(60ml)中，加入双氰胺钠(12.00g,134.90mmol)，加热至90℃反应34h。反应液冷却至室温，过滤，滤饼使用水洗涤，干燥得化合物(v-1)。将上述化合物(v-1)加入丙酮(75ml)中，分别加入浓盐酸12ml,144mmol)和五水硫代硫酸钠(16.00g,82.35mmol)，室温反应2h，反应结束后加氨水调节ph＝9，浓缩，经柱层析(洗脱液为二氯甲烷：甲醇＝40:1，体积比)分离，得化合物(vi-1)(7.65g)。将钠(1.06g,43.48mmol)加入甲醇(25ml)中，钠完全溶解后加入上述化合物(vi-1)(2.52g,17.24mmol)，室温下反应3h后加入甲酸乙酯(4.5ml,75.69mmol)，室温下反应21h，反应结束后，浓缩反应溶液，加水，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液，经柱层析(洗脱液为二氯甲烷：甲醇＝40:1，体积比)分离，得到化合物(ii-1)(1.41g,53％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ12.90(s,1h),8.07(s,1h),3.16(s,3h),3.13(s,3h)。实施例8：化合物(ii-2)的制备操作同实施例8，只是将二甲胺盐酸盐改为哌啶(10.00g,117.43mmol)和稀盐酸(117.43ml,117.43mmol)，双氰氨钠的量改为(10.5g,117.94mmol)，得化合物(v-2)。浓盐酸的量改为(5ml,60mmol)，五水硫代硫酸钠的量改为(5.50g,28.31mmol)，得化合物(vi-2)(3.75g)钠的量改为(0.50g,21.73mmol)，化合物(vi-1)改为化合物(vi-2)(1.50g,8.05mmol)，甲酸甲酯的量改为(2.0ml,32.20mmol)，得到化合物(ii-2)(1.38g,87％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ12.85(s,1h),8.06(s,1h),3.80–3.76(m,4h),1.66–1.61(m,2h),1.56–1.51(m,4h)实施例9：化合物(iii-1)的制备将氢氧化钠(0.49g,12.25mmol)的水(3ml)溶液加入到苯甲脒盐酸盐(0.48g,3.06mmol)的甲苯(4ml)和水(8ml)的溶液中，再加入苯甲酰异硫氰酸酯(0.4ml,3.06mmol)，室温下反应30分钟，使用盐酸调节反应液ph至6，加水，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经柱层析(洗脱液为二氯甲烷:甲醇＝40:1，体积比)，得化合物(iii-1)(0.41g，51％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ14.40(s,1h),8.45–8.41(m,4h),7.75–7.71(m,2h),7.65–7.60(m,4h)实施例10：抗人肝癌细胞(hepg2)、人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞(a549)生物活性测试体外抗人肝癌细胞(hepg2)、人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞(a549)活性测试方法：mtt法实验步骤：1)样品的准备：对于可溶样品，每1mg用20μldmso溶解，取2ul用1000μl培养液稀释，使浓度为100μg/ml，再用培养液连续稀释至使用浓度。2)细胞的培养2.1)培养基的配制:每1000ml培养基中含80万单位青霉素，1.0g链霉素，10％灭活胎牛血清。2.2)细胞的培养：将肿瘤细胞接种于培养基中，置37℃，5％co2培养箱中培养，3～5d传代。3)测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用将细胞用edta-胰酶消化液消化，并用培养基稀释成1×105/ml，加到96孔细胞培养板中，每孔100ul，置37℃，5％co2培养箱中培养。接种24h后，加入用培养基稀释的样品，每孔100μl，每个浓度加3孔，置37℃，5％co2培养箱中培养，72h后在细胞培养孔中加入5mg/ml的mtt，每孔10μl，置37℃孵育4h，加入dmso，每孔150μl，用振荡器振荡，使甲臢完全溶解，用酶标仪在570nm波长下比色。以同样条件用不含样品，含同样浓度dmso的培养基培养的细胞作为对照，计算样品对肿瘤细胞抑制率，结果如表1所示。以人肝癌细胞(hepg2)、人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞(a549)为模型，测定了化合物(i-1)～(i-6)、(ii-1)～(ii-2)和(iii-1)9个样品体外对肝癌细胞、人乳腺癌细胞或非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用(结果详见表1)。表1.60μmol/l各化合物对人肝癌细胞(hepg2)、人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞(a549)的抑制率(％)化合物hepg2t47da549(i-1)71.1729.01<10(i-2)<1024.6131.73(i-3)<1069.8019.06(i-4)11.9334.6065.06(i-5)<1019.3536.85(i-6)24.3620.2621.57(ii-1)11.3030.4550.24(ii-2)60.6679.7325.77(iii-1)<1060.7385.68当前第1页12