一种抗癌药物喜树碱用载体及其制备方法和应用

1.本发明属于药物载体技术领域，涉及一种抗癌药物喜树碱用载体及其制备方法和应用。


背景技术：

2.随着科技与经济的发展，环境恶化、食品安全和社会压力等问题促使了恶性肿瘤的高增长率。恶性肿瘤严重威胁人类的身心健康，目前临床治疗仍然以小分子药物化疗为主，然而许多抗癌药物存在难溶于水、稳定性差等缺陷，改善这些药物的水溶性，减小药物毒副作用是临床应用的关键。
3.喜树碱是从我国南方的特有植物喜树中提取分离得到的一个喹啉生物碱，对包括乳腺肿瘤在内的广谱恶性肿瘤具有抑制作用。喜树碱是拓扑异构酶ⅰ抑制剂，能够抑制dna的合成，导致肿瘤细胞凋亡。但是喜树碱的水溶性差，内酯环不稳定，具有严重的毒副作用，因此，在临床上的应用受到了限制。为此，人们开发研究了多种药物传递载体，如脂质体，胶束，纳米粒等，以增强药物水溶性，降低毒副作用，提高药物的生物利用率。
4.壳聚糖是甲壳素脱乙酰基产生的一种丰富的天然多糖，具有良好的生物降解性、生物相容性和无毒性。尽管壳聚糖具有很多优良性质，但由于其溶解性差和不可控的药物释放，限制了其应用。o
‑
羧甲基壳聚糖是一种常见的水溶性壳聚糖衍生物，许多研究证明，羧甲基壳聚糖与壳聚糖具有类似的性质，如无毒性，生物相容性和生物降解性，并且可以制成具有优异水溶性的载药纳米颗粒。
5.油酸是长链不饱和脂肪酸，主要来源于自然界，以甘油酯的形式存在于动植物油脂中。油酸有顺反异构体，天然油酸都是顺式结构(反式结构人体不能吸收)，对软化血管有一定效用，在人和动物的新陈代谢过程中起着重要作用。
6.聚乳酸是以乳酸为主要原料聚合得到的聚酯类聚合物，具有优异的生物相容性，可降解性和机械性能，被广泛应用于生物医学领域。但是，聚乳酸受限于其疏水性，所以，引入亲水部分是很必要的，可以调节所得共聚物的理化性质。
7.聚合物胶束是由两亲性嵌段共聚物或接枝共聚物在非共价键力的驱动下自组装形成的一种微观纳米结构，具有疏水性内核与亲水性外壳的特殊核壳结构。在非常低的浓度条件下，两亲性共聚物分子自由分散在水溶液中；随着浓度增加，疏水链段与环境中水分子之间排斥作用增强，达到临界胶束浓度(cmc)时，两亲性共聚物自组装得到胶束，疏水药物则依靠与胶束内核间的疏水相互作用而进入胶束内部。胶束具有良好的热力学和动力学稳定性，自组装形成的载药胶束能够使药物在体内循环过程中长时间保持较高浓度，减少药物损失，降低药物的毒副作用。
8.已知技术基本是只接枝或嵌段一种疏水链段，用来改性亲水聚合物，自组装形成两亲性聚合物胶束，作为疏水药物的载体，但是现有技术对于抗癌药物喜树碱的载药量最高只能达到10wt％，因为喜树碱有很强的疏水性，而且毒副作用大，所以改善喜树碱的水溶性，降低其毒副作用对于提高治疗效果，发挥喜树碱最大的抗癌作用具有很重要的意义。据
资料显示，很多研究人员都在尝试用不同的药物递送系统作为喜树碱的载体，但是载药量都达不到预期的效果。
9.因此，开发出一种可以显著提高喜树碱的载药量的载体具有十分重要的意义。


技术实现要素：

10.本发明的目的是解决现有技术中存在的问题，提供一种抗癌药物喜树碱用载体及其制备方法和应用。本发明基于已有的技术和抗癌药物的疏水性质，尝试接枝两种疏水链段，改性亲水羧甲基壳聚糖，从而合成两亲性接枝共聚物，自组装形成具有疏水性内核与亲水性外壳的特殊核壳结构的胶束，作为抗癌药物喜树碱的载体。疏水药物依靠与胶束内核间的疏水相互作用而进入胶束内部从而提高聚合物胶束的载药量，实验数据显示，本发明载药量最高达到了21.24％，从实验结果可以看出，接枝双疏水链段的两亲性聚合物胶束载药量明显得到了提高。
11.为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：
12.一种抗癌药物喜树碱用载体，为聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物，且结构式如下：
[0013][0014]
式中，m和n为聚合度，n的取值范围为184～368，m的取值范围为13～28。
[0015]
本发明的抗癌药物喜树碱用载体为两亲性接枝共聚物，该两亲性接枝共聚物同时具有亲水链段和疏水链段，在水溶液中达到临界胶束浓度时，自组装形成具有疏水性内核与亲水性外壳的特殊核壳结构的胶束。因为两亲性聚合物在分子链上具有亲水链段和疏水链段，对脂溶性药物有很好的增溶作用，本发明通过合成胶束提高了抗癌药物喜树碱的水溶性。
[0016]
作为优选的技术方案：
[0017]
如上所述的一种抗癌药物喜树碱用载体的制备方法，包括如下步骤：
[0018]
(1)将活化后的油酸溶液加入o
‑
羧甲基壳聚糖溶液中反应，制得o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物上o
‑
羧甲基壳聚糖上的氨基被油酸取代，取代度为10.24～13.56％(测试方法:核磁氢谱(1h
‑
nmr)；计算方法：根据核磁氢谱(1h
‑
nmr)的积分标准峰计算取代度)，取代度是根据物质的摩尔比例来的，最大比例1:1，与后期两亲性有关，后期的两亲性就是根据疏水链段和亲水链段来的；
[0019]
(2)活化o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物中o
‑
羧甲基壳聚糖上的羧基，得到聚合物溶
液；
[0020]
(3)将聚乳酸溶液加入聚合物溶液中反应，得到聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物中，o
‑
羧甲基壳聚糖上的羧基被聚乳酸取代，取代度为8.17～10.24％(测试方法:核磁氢谱(1h
‑
nmr)；计算方法：根据核磁氢谱(1h
‑
nmr)的积分标准峰计算取代度)，取代度是根据物质的摩尔比例来的，最大比例1:1，与后期两亲性有关，后期的两亲性就是根据疏水链段和亲水链段来的。
[0021]
本发明在o
‑
羧甲基壳聚糖上先接枝油酸，再接枝聚乳酸，因为油酸是小分子，聚乳酸是大分子聚合物，先接枝油酸对于后期接枝聚乳酸的空间位阻能小一些。
[0022]
如上所述的一种抗癌药物喜树碱用载体，活化后的油酸溶液是指：先按照质量体积比为50～350mg:40ml将油酸溶于无水乙醇中，然后加入相当于油酸1.2～1.5倍摩尔量的1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和相当于油酸1.2～1.5倍摩尔量的n
‑
羟基琥珀酰亚胺，搅拌1～2h使完全溶解，即得到活化后的油酸溶液；
[0023]
羧甲基壳聚糖溶液是指：称取o
‑
羧甲基壳聚糖溶于蒸馏水中，二者的质量体积比为25～50mg:3～6ml，搅拌使o
‑
羧甲基壳聚糖充分溶胀并溶解，然后回流冷凝至60～80℃，即得到o
‑
羧甲基壳聚糖溶液。
[0024]
如上所述的一种抗癌药物喜树碱用载体，步骤(1)的具体过程为：按照活化后的油酸与o
‑
羧甲基壳聚糖的质量比0.25～1:1(过小反应不完全，过大会使接枝率降低)，将活化后的油酸溶液在剧烈(560～840r/min)的搅拌下缓慢滴加(0.2ml
·
min
‑1的速率)入o
‑
羧甲基壳聚糖溶液中，在温度为60～80℃和搅拌转速为560～840r/min的条件下反应4～8h，然后冷却至室温，继续搅拌10～16h，用透析水透析2～3天，然后冷冻干燥，冷冻干燥的产物经无水乙醇洗涤得到o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物。
[0025]
如上所述的一种抗癌药物喜树碱用载体，o
‑
羧甲基壳聚糖的羧化度≥80％，脱乙酰度≥90％。
[0026]
如上所述的一种抗癌药物喜树碱用载体，步骤(2)的具体过程为：称取o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，二者的质量体积比为150～300mg:40ml，然后加入相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物0.1～0.2摩尔量的4
‑
二甲氨基吡啶和相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物1.0～1.2摩尔量的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺，搅拌使其完全溶解，活化o
‑
羧甲基壳聚糖的羧基，加入6mol/l的盐酸溶液，调节ph为酸性(ph为5
‑
6)，搅拌0.5～2h。
[0027]
如上所述的一种抗癌药物喜树碱用载体，步骤(3)的具体过程为：按照聚乳酸溶液和聚合物溶液为的体积比为1:1～4，将聚乳酸溶液在搅拌条件下以0.2ml
·
min
‑1的速率滴加入聚合物溶液中，室温下搅拌反应24～48h，然后冷冻干燥，得到聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；
[0028]
聚乳酸溶液的配制过程：按照质量体积比为50～150mg:10ml(过小反应不完全，过大会使接枝率降低)将聚乳酸溶于二甲基亚砜中，超声溶解。
[0029]
本发明还提供了如上所述的一种抗癌药物喜树碱用载体的应用，将聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在溶剂中(使聚合物分子链能够充分舒展)，并加入喜树碱，然后通过透析法得到载药聚合物胶束，随后冷冻干燥，得到抗肿瘤药物纳米制剂。
[0030]
作为优选的技术方案：
[0031]
如上所述的一种抗癌药物喜树碱用载体的应用，具体过程为：按照质量体积比为6
～10mg:2～4ml将聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜(二甲基亚砜对于喜树碱和聚合物的溶解性都很好)中，然后加入喜树碱，室温下搅拌6～12h，透析除去二甲基亚砜后将得到的混合物在9500～11000r/min离心12～15min，接着过0.45μm滤膜得到载喜树碱的纳米胶束，将载喜树碱的纳米胶束冷冻干燥，即得抗肿瘤药物纳米制剂；
[0032]
喜树碱与聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物的质量比为5～30:100。
[0033]
如上所述的一种抗癌药物喜树碱用载体的应用，抗肿瘤药物纳米制剂上喜树碱的载药量为15.56～21.24％(测试方法：紫外可见分光光度计；计算方法：根据紫外可见分光光度计测出的胶束中喜树碱浓度，带入公式：中求算)。现有技术对于抗癌药物喜树碱的载药量最高只能达到10wt％，本发明相对于现有技术显著提高了喜树碱的载药量。
[0034]
本发明的原理是：
[0035]
本发明首先将o
‑
羧甲基壳聚糖(cmcs)的氨基与油酸(oa)的羧基通过酰胺化反应，合成了o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸共聚物，然后将羟基封端的聚乳酸(pla)通过酯化反应接枝到该聚合物上，合成了聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸两亲性共聚物。本发明选用的三种材料，都是简单易得，而且反应条件都很温和，操作易行。
[0036]
本发明利用疏水性抗癌药物喜树碱的性质，以水溶性o
‑
羧甲基壳聚糖作为构建聚合物胶束的材料，接枝油酸和聚乳酸两种疏水链段，使其同时具有亲水链段o
‑
羧甲基壳聚糖和疏水链段油酸、聚乳酸，该两亲性接枝共聚物在水溶液中达到临界胶束浓度时，自组装形成具有疏水内核和亲水外壳的两亲性聚合物胶束，疏水药物通过与疏水内核之间的疏水作用进入其中，接枝两种疏水链段，可以增大疏水性内核的空腔，增强喜树碱与聚合物胶束之间的疏水作用，更多药物可以进入疏水内核中，有助于提高疏水抗癌药物喜树碱的载药量。
[0037]
有益效果
[0038]
(1)本发明的聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸共聚物制备工艺简单，原料易得，条件温和，对于抗癌药物喜树碱的载药量有很明显的提高；
[0039]
(2)本发明在o
‑
羧甲基壳聚糖上接枝油酸和聚乳酸，对其进行疏水改性，使其作为疏水性药物的载体，改善疏水性药物的溶解度，控制药物的释放速率，提高治疗效果，降低毒副作用，提高药物的生物利用度。
附图说明
[0040]
图1为本发明的合成路线图；
[0041]
图2为实施例1中cmcs
‑
g
‑
oa和pla
‑
cmcs
‑
oa的红外光谱图；
[0042]
图3为实施例1中pla
‑
cmcs
‑
oa的1h
‑
nmr图；
[0043]
图4为实施例1中载喜树碱的纳米胶束的粒径分布图；
[0044]
图5为实施例1中载喜树碱的纳米胶束的透射电镜形态图；
[0045]
图6为本发明的载喜树碱的纳米胶束的荧光强度随浓度变化曲线图；
[0046]
图7为本发明载药胶束中喜树碱的浓度图。
具体实施方式
[0047]
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。
[0048]
图1为本发明的合成路线图，具体为o
‑
羧甲基壳聚糖(cmcs)的氨基与油酸(oa)的羧基通过酰胺化反应，合成了cmcs
‑
g
‑
oa，然后将聚乳酸通过酯化反应接枝到该聚合物上，合成了pla
‑
cmcs
‑
oa两亲性聚合物。
[0049]
取代度的测试方法:核磁氢谱(1h
‑
nmr)；计算方法：根据核磁氢谱(1h
‑
nmr)的积分标准峰计算取代度。
[0050]
载药量的测试方法：紫外可见分光光度计；计算方法：根据紫外可见分光光度计测出的胶束中喜树碱浓度，带入公式中求算。
[0051]
实施例1～7中聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物的结构式为：
[0052][0053]
式中，m和n为聚合度对应采用原料的聚合度。
[0054]
本发明中采用的聚乳酸的结构式为：式中，m为13～28；
[0055]
本发明中采用的o
‑
羧甲基壳聚糖的结构式为：式中，n为184～368。且o
‑
羧甲基壳聚糖(麦克林(macklin)，编号:c832672)的羧化度为≥80％，脱乙酰度为≥90％。
[0056]
实施例1
[0057]
一种抗癌药物喜树碱用载体的制备方法，具体步骤如下：
[0058]
(1)先按照质量体积比为276mg:40ml将油酸溶于无水乙醇中，然后加入相当于油
酸1.5倍摩尔量的1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和相当于油酸1.5倍摩尔量的n
‑
羟基琥珀酰亚胺，搅拌2h使完全溶解，即得到活化后的油酸溶液；
[0059]
(2)称取o
‑
羧甲基壳聚糖溶于蒸馏水中，二者的质量体积比为27.8mg:4ml，搅拌使o
‑
羧甲基壳聚糖充分溶胀并溶解，然后回流冷凝至80℃，即得到o
‑
羧甲基壳聚糖溶液；
[0060]
(3)将活化后的油酸溶液在剧烈(840r/min)的搅拌下缓慢滴加(0.2ml
·
min
‑1的速率)入o
‑
羧甲基壳聚糖溶液中，在温度为80℃和搅拌转速为840r/min的条件下反应5h，然后冷却至25℃，继续搅拌12h，用透析水透析2天，然后冷冻干燥，冷冻干燥的产物经无水乙醇洗涤得到o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，活化后的油酸和o
‑
羧甲基壳聚糖溶液的质量比为1:1；o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物上o
‑
羧甲基壳聚糖上的氨基被油酸取代，取代度为13.56％；
[0061]
(4)称取o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，二者的质量体积比为250mg:40ml，然后加入相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物0.2摩尔量的4
‑
二甲氨基吡啶和相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物1.2摩尔量的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺，搅拌使其完全溶解，活化o
‑
羧甲基壳聚糖的羧基，加入6mol/l的盐酸溶液，调节ph为酸性(ph为5)，搅拌1h，得到聚合物溶液；如图2所示，在2900cm
‑1左右和2800cm
‑1左右是
‑
ch2‑
和
‑
ch
‑
的伸缩振动峰，1700cm
‑1左右为仲酰胺的c＝o伸缩振动峰和羧酸的c＝o伸缩振动峰，1400cm
‑1左右为仲酰胺的c
‑
n伸缩振动峰，证明cmcs
‑
g
‑
oa的合成；
[0062]
(5)按照质量体积比为75mg:10ml将聚乳酸溶于二甲基亚砜中，超声溶解，制得聚乳酸溶液，再将聚乳酸溶液在搅拌条件下以0.2ml
·
min
‑1的速率滴加入聚合物溶液中，25℃下搅拌反应48h，然后冷冻干燥，得到聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，聚乳酸溶液与聚合物溶液的质量比为1:4；如图2所示，在1650cm
‑1左右为c＝o伸缩振动峰，1200cm
‑1左右为c
‑
o
‑
c伸缩振动峰，证明pla
‑
cmcs
‑
oa的合成；如图3所示，聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物中，o
‑
羧甲基壳聚糖上的羧基被聚乳酸取代，取代度为10.24％；
[0063]
应用：按照质量体积比为10mg:3ml将聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，然后加入喜树碱，喜树碱与聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物的质量比为1:10，25℃下搅拌6h，透析除去二甲基亚砜后将得到的混合物在9500r/min离心15min，接着过0.45μm滤膜得到载喜树碱的纳米胶束，如图4所示，胶束的粒径为255
±
4.65nm；如图5所示，胶束主要呈球形，且分散均匀；将载喜树碱的纳米胶束冷冻干燥，即得抗肿瘤药物纳米制剂；图6为实施例1中载喜树碱的纳米胶束的荧光强度随溶液浓度变化曲线图，交点处为临界胶束浓度(cmc)，当pla
‑
cmcs
‑
oa浓度小于临界胶束浓度时，i1/i3的值几乎不变化。但当浓度达到临界胶束浓度时，i1/i3的值突然下降，在此拐点处聚合物开始形成胶束。pla
‑
cmcs
‑
oa的临界胶束浓度为0.0589mg/ml；图7为实施例1载药胶束中喜树碱的浓度图，喜树碱的最高浓度为1.6990mg/l。
[0064]
制得的抗肿瘤药物纳米制剂上喜树碱的载药量为21.24％。
[0065]
实施例2
[0066]
一种抗癌药物喜树碱用载体的制备方法，具体步骤如下：
[0067]
(1)先按照质量体积比为50mg:40ml将油酸溶于无水乙醇中，然后加入相当于油酸1.2倍摩尔量的1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和相当于油酸1.2倍摩尔量的n
‑
羟基琥珀酰亚胺，搅拌1h使完全溶解，即得到活化后的油酸溶液；
[0068]
(2)称取o
‑
羧甲基壳聚糖溶于蒸馏水中，二者的质量体积比为25mg:3ml，搅拌使o
‑
羧甲基壳聚糖充分溶胀并溶解，然后回流冷凝至60℃，即得到o
‑
羧甲基壳聚糖溶液；
[0069]
(3)将活化后的油酸溶液在剧烈(560r/min)的搅拌下缓慢滴加(0.2ml
·
min
‑1的速率)入o
‑
羧甲基壳聚糖溶液中，在温度为60℃和搅拌转速为560r/min的条件下反应4h，然后冷却至24℃，继续搅拌10h，用透析水透析3天，然后冷冻干燥，冷冻干燥的产物经无水乙醇洗涤得到o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，活化后的油酸和o
‑
羧甲基壳聚糖溶液的质量比为0.25:1；o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物上o
‑
羧甲基壳聚糖上的氨基被油酸取代，取代度为10.24％；
[0070]
(4)称取o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，二者的质量体积比为150mg:40ml，然后加入相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物0.1摩尔量的4
‑
二甲氨基吡啶和相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物1摩尔量的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺，搅拌使其完全溶解，活化o
‑
羧甲基壳聚糖的羧基，加入6mol/l的盐酸溶液，调节ph为酸性(ph为5)，搅拌1.5h，得到聚合物溶液；
[0071]
(5)按照质量体积比为50mg:10ml将聚乳酸溶于二甲基亚砜中，超声溶解，制得聚乳酸溶液，再将聚乳酸溶液在搅拌条件下以0.2ml
·
min
‑1的速率滴加入聚合物溶液中，25℃下搅拌反应44h，然后冷冻干燥，得到聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，聚乳酸溶液与聚合物溶液的质量比为1:1；聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物中，o
‑
羧甲基壳聚糖上的羧基被聚乳酸取代，取代度为8.17％；
[0072]
应用：按照质量体积比为6mg:2ml将聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，然后加入喜树碱，喜树碱与聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物的质量比为1:20，24℃下搅拌7h，透析除去二甲基亚砜后将得到的混合物在10000r/min离心14min，接着过0.45μm滤膜得到载喜树碱的纳米胶束，将载喜树碱的纳米胶束冷冻干燥，即得抗肿瘤药物纳米制剂。
[0073]
制得的抗肿瘤药物纳米制剂上喜树碱的载药量为15.56％。
[0074]
实施例3
[0075]
一种抗癌药物喜树碱用载体的制备方法，具体步骤如下：
[0076]
(1)先按照质量体积比为69.5mg:40ml将油酸溶于无水乙醇中，然后加入相当于油酸1.25倍摩尔量的1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和相当于油酸1.25倍摩尔量的n
‑
羟基琥珀酰亚胺，搅拌1h使完全溶解，即得到活化后的油酸溶液；
[0077]
(2)称取o
‑
羧甲基壳聚糖溶于蒸馏水中，二者的质量体积比为34mg:3ml，搅拌使o
‑
羧甲基壳聚糖充分溶胀并溶解，然后回流冷凝至65℃，即得到o
‑
羧甲基壳聚糖溶液；
[0078]
(3)将活化后的油酸溶液在剧烈(670r/min)的搅拌下缓慢滴加(0.2ml
·
min
‑1的速率)入o
‑
羧甲基壳聚糖溶液中，在温度为65℃和搅拌转速为670r/min的条件下反应5h，然后冷却至25℃，继续搅拌11h，用透析水透析2天，然后冷冻干燥，冷冻干燥的产物经无水乙醇洗涤得到o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，活化后的油酸和o
‑
羧甲基壳聚糖溶液的质量比为0.5:1；o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物上o
‑
羧甲基壳聚糖上的氨基被油酸取代，取代度为10.96％；
[0079]
(4)称取o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，二者的质量体积比为200mg:40ml，然后加入相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物0.1摩尔量的4
‑
二甲氨基吡啶和
相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物1摩尔量的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺，搅拌使其完全溶解，活化o
‑
羧甲基壳聚糖的羧基，加入6mol/l的盐酸溶液，调节ph为酸性(ph为5)，搅拌2h，得到聚合物溶液；
[0080]
(5)按照质量体积比为100mg:10ml将聚乳酸溶于二甲基亚砜中，超声溶解，制得聚乳酸溶液，再将聚乳酸溶液在搅拌条件下以0.2ml
·
min
‑1的速率滴加入聚合物溶液中，25℃下搅拌反应40h，然后冷冻干燥，得到聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，聚乳酸溶液与聚合物溶液的质量比为1:1；聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物中，o
‑
羧甲基壳聚糖上的羧基被聚乳酸取代，取代度为8.96％；
[0081]
应用：按照质量体积比为7mg:3ml将聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，然后加入喜树碱，喜树碱与聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物的质量比为3:20，25℃下搅拌8h，透析除去二甲基亚砜后将得到的混合物在10500r/min离心13min，接着过0.45μm滤膜得到载喜树碱的纳米胶束，将载喜树碱的纳米胶束冷冻干燥，即得抗肿瘤药物纳米制剂。
[0082]
制得的抗肿瘤药物纳米制剂上喜树碱的载药量为16.32％。
[0083]
实施例4
[0084]
一种抗癌药物喜树碱用载体的制备方法，具体步骤如下：
[0085]
(1)先按照质量体积比为139mg:40ml将油酸溶于无水乙醇中，然后加入相当于油酸1.3倍摩尔量的1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和相当于油酸1.3倍摩尔量的n
‑
羟基琥珀酰亚胺，搅拌1h使完全溶解，即得到活化后的油酸溶液；
[0086]
(2)称取o
‑
羧甲基壳聚糖溶于蒸馏水中，二者的质量体积比为40mg:4ml，搅拌使o
‑
羧甲基壳聚糖充分溶胀并溶解，然后回流冷凝至70℃，即得到o
‑
羧甲基壳聚糖溶液；
[0087]
(3)将活化后的油酸溶液在剧烈(720r/min)的搅拌下缓慢滴加(0.2ml
·
min
‑1的速率)入o
‑
羧甲基壳聚糖溶液中，在温度为70℃和搅拌转速为720r/min的条件下反应6h，然后冷却至26℃，继续搅拌13h，用透析水透析3天，然后冷冻干燥，冷冻干燥的产物经无水乙醇洗涤得到o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，活化后的油酸和o
‑
羧甲基壳聚糖溶液的质量比为0.75:1；o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物上o
‑
羧甲基壳聚糖上的氨基被油酸取代，取代度为11.34％；
[0088]
(4)称取o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，二者的质量体积比为250mg:40ml，然后加入相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物0.15摩尔量的4
‑
二甲氨基吡啶和相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物1.15摩尔量的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺，搅拌使其完全溶解，活化o
‑
羧甲基壳聚糖的羧基，加入6mol/l的盐酸溶液，调节ph为酸性(ph为5)，搅拌1.2h，得到聚合物溶液；
[0089]
(5)按照质量体积比为120mg:10ml将聚乳酸溶于二甲基亚砜中，超声溶解，制得聚乳酸溶液，再将聚乳酸溶液在搅拌条件下以0.2ml
·
min
‑1的速率滴加入聚合物溶液中，25℃下搅拌反应36h，然后冷冻干燥，得到聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，聚乳酸溶液与聚合物溶液的质量比为1:2；聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物中，o
‑
羧甲基壳聚糖上的羧基被聚乳酸取代，取代度为9.34％；
[0090]
应用：按照质量体积比为8mg:4ml将聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，然后加入喜树碱，喜树碱与聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物的质量比
为1:5，26℃下搅拌9h，透析除去二甲基亚砜后将得到的混合物在11000r/min离心12min，接着过0.45μm滤膜得到载喜树碱的纳米胶束，将载喜树碱的纳米胶束冷冻干燥，即得抗肿瘤药物纳米制剂。
[0091]
制得的抗肿瘤药物纳米制剂上喜树碱的载药量为17.73％。
[0092]
实施例5
[0093]
一种抗癌药物喜树碱用载体的制备方法，具体步骤如下：
[0094]
(1)先按照质量体积比为208.5mg:40ml将油酸溶于无水乙醇中，然后加入相当于油酸1.35倍摩尔量的1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和相当于油酸1.35倍摩尔量的n
‑
羟基琥珀酰亚胺，搅拌2h使完全溶解，即得到活化后的油酸溶液；
[0095]
(2)称取o
‑
羧甲基壳聚糖溶于蒸馏水中，二者的质量体积比为43mg:5ml，搅拌使o
‑
羧甲基壳聚糖充分溶胀并溶解，然后回流冷凝至75℃，即得到o
‑
羧甲基壳聚糖溶液；
[0096]
(3)将活化后的油酸溶液在剧烈(750r/min)的搅拌下缓慢滴加(0.2ml
·
min
‑1的速率)入o
‑
羧甲基壳聚糖溶液中，在温度为73℃和搅拌转速为750r/min的条件下反应7h，然后冷却至27℃，继续搅拌14h，用透析水透析2天，然后冷冻干燥，冷冻干燥的产物经无水乙醇洗涤得到o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，活化后的油酸和o
‑
羧甲基壳聚糖溶液的质量比为0.25:1；o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物上o
‑
羧甲基壳聚糖上的氨基被油酸取代，取代度为11.87％；
[0097]
(4)称取o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，二者的质量体积比为220mg:40ml，然后加入相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物0.15摩尔量的4
‑
二甲氨基吡啶和相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物1.15摩尔量的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺，搅拌使其完全溶解，活化o
‑
羧甲基壳聚糖的羧基，加入6mol/l的盐酸溶液，调节ph为酸性(ph为5)，搅拌1.7h，得到聚合物溶液；
[0098]
(5)按照质量体积比为150mg:10ml将聚乳酸溶于二甲基亚砜中，超声溶解，制得聚乳酸溶液，再将聚乳酸溶液在搅拌条件下以0.2ml
·
min
‑1的速率滴加入聚合物溶液中，25℃下搅拌反应32h，然后冷冻干燥，得到聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，聚乳酸溶液与聚合物溶液的质量比为1:2；聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物中，o
‑
羧甲基壳聚糖上的羧基被聚乳酸取代，取代度为9.98％；
[0099]
应用：按照质量体积比为9mg:3ml将聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，然后加入喜树碱，喜树碱与聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物的质量比为1:4，27℃下搅拌10h，透析除去二甲基亚砜后将得到的混合物在9700r/min离心14.7min，接着过0.45μm滤膜得到载喜树碱的纳米胶束，将载喜树碱的纳米胶束冷冻干燥，即得抗肿瘤药物纳米制剂。
[0100]
制得的抗肿瘤药物纳米制剂上喜树碱的载药量为18.69％。
[0101]
实施例6
[0102]
一种抗癌药物喜树碱用载体的制备方法，具体步骤如下：
[0103]
(1)先按照质量体积比为240mg:40ml将油酸溶于无水乙醇中，然后加入相当于油酸1.4倍摩尔量的1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和相当于油酸1.4倍摩尔量的n
‑
羟基琥珀酰亚胺，搅拌2h使完全溶解，即得到活化后的油酸溶液；
[0104]
(2)称取o
‑
羧甲基壳聚糖溶于蒸馏水中，二者的质量体积比为46mg:5ml，搅拌使o
‑
羧甲基壳聚糖充分溶胀并溶解，然后回流冷凝至80℃，即得到o
‑
羧甲基壳聚糖溶液；
[0105]
(3)将活化后的油酸溶液在剧烈(780r/min)的搅拌下缓慢滴加(0.2ml
·
min
‑1的速率)入o
‑
羧甲基壳聚糖溶液中，在温度为76℃和搅拌转速为780r/min的条件下反应8h，然后冷却至24℃，继续搅拌16h，用透析水透析3天，然后冷冻干燥，冷冻干燥的产物经无水乙醇洗涤得到o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，活化后的油酸和o
‑
羧甲基壳聚糖溶液的质量比为0.5:1；o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物上o
‑
羧甲基壳聚糖上的氨基被油酸取代，取代度为12.36％；
[0106]
(4)称取o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，二者的质量体积比为300mg:40ml，然后加入相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物0.2摩尔量的4
‑
二甲氨基吡啶和相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物1.2摩尔量的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺，搅拌使其完全溶解，活化o
‑
羧甲基壳聚糖的羧基，加入6mol/l的盐酸溶液，调节ph为酸性(ph为5)，搅拌0.8h，得到聚合物溶液；
[0107]
(5)按照质量体积比为130mg:10ml将聚乳酸溶于二甲基亚砜中，超声溶解，制得聚乳酸溶液，再将聚乳酸溶液在搅拌条件下以0.2ml
·
min
‑1的速率滴加入聚合物溶液中，25℃下搅拌反应28h，然后冷冻干燥，得到聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，聚乳酸溶液与聚合物溶液的质量比为1:3；聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物中，o
‑
羧甲基壳聚糖上的羧基被聚乳酸取代，取代度为10.12％；
[0108]
应用：按照质量体积比为10mg:4ml将聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，然后加入喜树碱，喜树碱与聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物的质量比为3:10，24℃下搅拌12h，透析除去二甲基亚砜后将得到的混合物在10200r/min离心13.5min，接着过0.45μm滤膜得到载喜树碱的纳米胶束，将载喜树碱的纳米胶束冷冻干燥，即得抗肿瘤药物纳米制剂。
[0109]
制得的抗肿瘤药物纳米制剂上喜树碱的载药量为19.78％。
[0110]
实施例7
[0111]
一种抗癌药物喜树碱用载体的制备方法，具体步骤如下：
[0112]
(1)先按照质量体积比为350mg:40ml将油酸溶于无水乙醇中，然后加入相当于油酸1.45倍摩尔量的1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和相当于油酸1.45倍摩尔量的n
‑
羟基琥珀酰亚胺，搅拌2h使完全溶解，即得到活化后的油酸溶液；
[0113]
(2)称取o
‑
羧甲基壳聚糖溶于蒸馏水中，二者的质量体积比为50mg:6ml，搅拌使o
‑
羧甲基壳聚糖充分溶胀并溶解，然后回流冷凝至75℃，即得到o
‑
羧甲基壳聚糖溶液；
[0114]
(3)将活化后的油酸溶液在剧烈(800r/min)的搅拌下缓慢滴加(0.2ml
·
min
‑1的速率)入o
‑
羧甲基壳聚糖溶液中，在温度为78℃和搅拌转速为800r/min的条件下反应8h，然后冷却至25℃，继续搅拌15h，用透析水透析2天，然后冷冻干燥，冷冻干燥的产物经无水乙醇洗涤得到o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，活化后的油酸和o
‑
羧甲基壳聚糖溶液的质量比为0.75:1；o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物上o
‑
羧甲基壳聚糖上的氨基被油酸取代，取代度为12.58％；
[0115]
(4)称取o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，二者的质量体积比为270mg:40ml，然后加入相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物0.2摩尔量的4
‑
二甲氨基吡啶和相当于o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物1.2摩尔量的n,n
’‑
二环己基碳二亚胺，搅拌使其完全
溶解，活化o
‑
羧甲基壳聚糖的羧基，加入6mol/l的盐酸溶液，调节ph为酸性(ph为5)，搅拌0.5h，得到聚合物溶液；
[0116]
(5)按照质量体积比为110mg:10ml将聚乳酸溶于二甲基亚砜中，超声溶解，制得聚乳酸溶液，再将聚乳酸溶液在搅拌条件下以0.2ml
·
min
‑1的速率滴加入聚合物溶液中，25℃下搅拌反应24h，然后冷冻干燥，得到聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物；其中，聚乳酸溶液与聚合物溶液的质量比为1:4；聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物中，o
‑
羧甲基壳聚糖上的羧基被聚乳酸取代，取代度为9.36％；
[0117]
应用：按照质量体积比为6mg:3ml将聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物溶解在二甲基亚砜中，然后加入喜树碱，喜树碱与聚乳酸
‑
o
‑
羧甲基壳聚糖
‑
油酸聚合物的质量比为3:10，25℃下搅拌6h，透析除去二甲基亚砜后将得到的混合物在10700r/min离心12.5min，接着过0.45μm滤膜得到载喜树碱的纳米胶束，将载喜树碱的纳米胶束冷冻干燥，即得抗肿瘤药物纳米制剂。
[0118]
制得的抗肿瘤药物纳米制剂上喜树碱的载药量为20.36％。