本发明属于生物医药
技术领域：
。更具体地，涉及一种抑菌妇科洗液及其制备方法。
背景技术：
：阴道炎主要是由于细菌、寄生虫的入侵感染或阴道内菌群失调所致，其主要分为滴虫性阴道炎、霉菌性阴道炎、细菌性阴道炎和淋菌性阴道炎等。目前，针对各种阴道炎的治疗常采用抗菌为主，比如采用抗生素或其他抗菌药达到杀灭微生物的目的，但是这种方式容易在杀灭有害菌的同时也杀灭了主导的有益菌，因此会出现用药有所缓解，但是停药阴道炎又卷土重来的现象，这种反复现象一方面使得各种病原体产生了耐药性，另一方面加剧了阴道内菌群的失衡。阴道微环境生态系统主要由生殖道解剖结构、微生境、阴道菌群及代谢产物部分构成，该系统的失衡与阴道炎的发生存在密切的关系。正常健康女性阴道内寄生着50多种微生物，其中，厌氧菌与需氧菌的比例为10:1，尤以乳杆菌的比例最高，其对维持阴道微生态平衡具有重要的作用。其主要作用机制为：①维持阴道酸性环境；②占位性保护作用；③直接阻滞作用；④产生多种抑菌物质；⑤营养竞争。在正常情况下，乳杆菌与其他微生物在阴道内处于微生态平衡状态，但是一旦受到各种因素的影响使乳杆菌失去优势，致病菌和条件致病菌增多，那么阴道的微生态平衡就会被打破，从而导致疾病的发生。因此，综上所述，理想的妇科洗液必须具备杀菌功能的同时，能够调节或改善阴道菌群平衡，维持阴道酸性环境，修复阴道微生态平衡。半乳甘露低聚糖(galacto-manan-oligosaccharids,gmos)是半乳甘露聚糖的不完全降解产物，其可通过瓜尔胶、田箐胶、槐豆胶等豆科植物的种子胶进行降解获得。有研究表明，其具有减少动物肠道病原菌、增强免疫、提高粘膜功能的特性，在临床上具有调节血糖的作用；总的来说，功能性的低聚糖具有以下各种生理功能：减少有害菌酶的产生；抑制病原菌和腹泻或便秘；保护肝脏功能；降低血清胆固醇和血压；增强机体免疫力等。虽然半乳甘露低聚糖似乎具有在肠道环境中调节菌群的作用，但是在阴道的酸性环境中，半乳甘露低聚糖不够稳定，其可能会发生一些降解，难以发挥在肠道环境中同等水平的作用；同时，目前未公开半乳甘露低聚糖在治疗阴道炎方面的用途。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是克服现有妇科洗液存在的缺陷和不足，提供一种种具备杀菌，能够调节或改善阴道菌群平衡，维持阴道酸性环境，修复阴道微生态平衡功能的妇科洗液。本发明的目的是提供一种抑菌妇科洗液，其包含以下质量份数的组分：表面活性剂2～6％、保湿剂2～5％、半乳甘露低聚糖5～15％、阴道修护剂1～3％、螯合剂0.01～0.02％和去离子水余量。进一步地，所述妇科洗液还包括ph调节剂，用以调节洗液的ph值为4.0～4.5。进一步地，所述半乳甘露低聚糖是以瓜尔胶为原料，经至少一种酶降解、纯化获得的活性产物。半乳甘露低聚糖是半乳甘露聚糖的不完全降解产物，半乳甘露聚糖分子链上1-4连接的β-d甘露聚糖主链的构象与纤维素相似，因此其本身是不溶于水，而当其经过酶解后，半乳甘露聚糖的分子量降低，变得易溶于水。对于原料的选择，除了瓜尔胶外，还可选择田箐胶、槐豆胶等豆科植物的种子胶进行降解获得，但是经试验证明，以瓜尔胶为原料经酶解获得的活性物在治疗阴道炎、修护阴道环境方面具有更高的生理活性。进一步地，所述酶为β-1,4-d-甘露聚糖酶和α-3,6-d-半乳糖苷酶，两者的质量比为1:2～3。更进一步地，两者的质量比可以是1:2.2、1:2、1:2.5、1:3，最佳的质量比为1:2.2。一般采用两种不同酶联合进行降解可以快速实现高粘度底物的降解，除了上述两种酶，发明人另外还考察了β-1,4-d-甘露聚糖酶+β-甘露糖苷酶、β-1,4-d-甘露聚糖酶+β-葡萄糖苷酶、α-3,6-d-半乳糖苷酶+β-甘露糖苷酶及α-3,6-d-半乳糖苷酶+β-葡萄糖苷酶的酶组合对半乳甘露聚糖胶的降解效果。结果发现，上述酶组合均能快速有效降低半乳甘露聚糖胶的黏度，使其变得更加易溶；但更令人惊奇的是，β-1,4-d-甘露聚糖酶+α-3,6-d-半乳糖苷酶组合获得的活性物在高酸性环境下表现的更稳定，显示其更适合被应用于阴道的酸性环境中。进一步地，所述活性产物的分子量范围为3000～7500da。分子量也是决定酶解产物功能性的主要影响因子，当分子量范围为3000～7500da是比较适合作为妇科洗液功效成分的，其表现出较好的抑菌活性，同时稳定性良好。进一步地，所述活性产物的分子量范围为3000～5500da。进一步地，所述半乳甘露低聚糖由以下步骤制备而成：s1、取质量浓度为0.1～0.5％的瓜尔胶溶液，按酶料质量比为1：20～40往上述溶液中加入酶，在ph为5.0～7.0，反应温度为30～65℃下反应，当黏度降至3～5mpa.s时，灭酶，冷却，得酶解液，离心，取上清液；s2、对上述上清液进行超滤，筛选出分子量为3000～7500da的降解产物，经活性炭脱色、离子交换树脂脱盐处理，浓缩，干燥，混合后即得。进一步地，所述表面活性剂为椰油酰胺丙基甜菜碱和/或月桂基甜菜碱；所述保湿剂为甘油和/或山梨醇；所述阴道修护剂选自水溶性ve、芦荟提取液、维生素b2、维生素b5、尿囊素中的一种或几种；所述螯合剂为edta-2na；所述ph调节剂选自柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾中的一种或几种。进一步地，所述阴道修护剂为水溶性ve和芦荟提取液；所述ph调节剂为柠檬酸。本发明另一目的在于提供一种制备述抑菌妇科洗液的方法，包括以下步骤：取去离子水加入到搅拌锅中，依次加入保湿剂、半乳甘露低聚糖、水溶性水溶性ve，搅拌均匀后，加入表面活性剂，搅拌均匀后加入芦荟提取液和螯合剂，最后加入柠檬酸调节ph值为4.0～4.5，即得。本发明具有以下有益效果：本发明所述妇科洗液可以用于改善各种阴道炎，其作用机制为：在阴道微环境系统被破坏的前提下，本发明获得的酶解产物仍然可以促进阴道环境内有益菌乳杆菌的生长，使其重新成长为优势菌群，乳杆菌的主导通过维持阴道酸性环境，产生抑菌物质，营养占位竞争等途径使阴道微环境系统重新恢复平衡；同时本发明获得的酶解产物还具有一定的抑菌活性，并且能够适应阴道的酸性环境，稳定发挥作用。上述特性，使得当将其应用到妇科洗液中，就可以制备得到具备杀菌，能够调节或改善阴道菌群平衡，维持阴道酸性环境，修复阴道微生态平衡功能的妇科洗液。与现有产品相比，其更注重于重建阴道正常微生态环境来达到抑制阴道致病菌生长的作用，因此，各种阴道炎的复发率较低。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本
技术领域：
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。实施例1、半乳甘露低聚糖的制备s1、取质量浓度为0.3％的瓜尔胶溶液，按酶料质量比为1：35往上述溶液中加入混合酶，在ph为6.0，反应温度为55℃下反应，当黏度降至4mpa.s时，灭酶，冷却，得酶解液，3000r/min离心20min，取上清液；其中混合酶由β-1,4-d-甘露聚糖酶和α-3,6-d-半乳糖苷酶按质量比为1:2.2组成；s2、超滤：对上述上清液进行超滤，筛选出分子量为3000～5500da的降解产物，其中，进料压力为0.1～0.2mpa，进料温度为15～20℃；s3、脱色：往上述降解产物中加入其1％质量的粉末活性炭，混匀，在50℃下脱色2h；s4、脱盐：将脱色后的降解产物分别经001×7强碱性阴离子交换树脂、201×7强酸型阳离子交换树脂进行脱盐处理；真空浓缩，喷雾干燥，即得；s5、对得到的产物采用高效液相色谱检测，检测结果显示单糖含量为6.48％。实施例2、半乳甘露低聚糖的制备s1、取质量浓度为0.5％的瓜尔胶溶液，按酶料质量比为1：20往上述溶液中加入混合酶，在ph为6.0，反应温度为50℃下反应，当黏度降至5mpa.s时，灭酶，冷却，得酶解液，3000r/min离心20min，取上清液；其中混合酶由β-1,4-d-甘露聚糖酶和α-3,6-d-半乳糖苷酶按质量比为1:2组成；s2、超滤：对上述上清液进行超滤，筛选出分子量为5500～7500da的降解产物，其中，进料压力为0.1～0.2mpa，进料温度为15～20℃；s3、脱色：往上述降解产物中加入其0.5％质量的粉末活性炭，混匀，在50℃下脱色2h；s4、脱盐：将脱色后的降解产物分别经001×7强碱性阴离子交换树脂、201×7强酸型阳离子交换树脂进行脱盐处理；真空浓缩，喷雾干燥，即得；s5、对得到的产物采用高效液相色谱检测，检测结果单糖含量为5.73％。实施例3、半乳甘露低聚糖的制备s1、取质量浓度为0.1％的瓜尔胶溶液，按酶料质量比为1：40往上述溶液中加入混合酶，在ph为6.0，反应温度为50℃下反应，当黏度降至3mpa.s时，灭酶，冷却，得酶解液，3000r/min离心20min，取上清液；其中混合酶由β-1,4-d-甘露聚糖酶和α-3,6-d-半乳糖苷酶按质量比为1:3组成；s2、超滤：对上述上清液进行超滤，筛选出分子量为6000～7500da的降解产物，其中，进料压力为0.1～0.2mpa，进料温度为15～20℃；s3、脱色：往上述降解产物中加入其0.4％质量的粉末活性炭，混匀，在50℃下脱色2h；s4、脱盐：将脱色后的降解产物分别经001×7强碱性阴离子交换树脂、201×7强酸型阳离子交换树脂进行脱盐处理；真空浓缩，喷雾干燥，即得；s5、对得到的产物采用高效液相色谱检测，检测结果显示单糖含量为8.34％。实施例4～6、一种妇科洗液组份实施例4实施例5实施例6椰油酰胺丙基甜菜碱1.5％1％2％月桂基甜菜碱1％2％1.5％甘油1.5％1％2％山梨醇1％1％1％水溶性ve0.15％0.1％0.2％半乳甘露低聚糖8％5％12％芦荟提取液1％1.5％2％柠檬酸调节ph为4.2调节ph为4.5调节ph为4.0edta-2na0.01％0.01％0.01％去离子水余量余量余量制备方法：将去离子水加入搅拌锅中，依次加入甘油、山梨醇、半乳甘露低聚糖和水溶性ve，搅拌均匀后，加入椰油酰胺丙基甜菜碱和月桂基甜菜碱，搅拌均匀后加入芦荟提取液和edta-2na，最后加入柠檬酸调节ph值为4.0～4.5，即得。对比例1、与实施例4相比，步骤s2中选择分子量范围为7500～8000da半乳甘露低聚糖替代实施例4中分子量范围为3000～5500da的半乳甘露低聚糖，其余参数与实施例4相同。对比例2、与实施例4相比，在制备半乳甘露低聚糖过程中，步骤s1中仅加入β-1,4-d-甘露聚糖酶进行酶解，其余参数与实施例4相同。对比例3、与实施例4相比，在制备半乳甘露低聚糖过程中，步骤s1中仅加入α-3,6-d-半乳糖苷酶进行酶解，其余参数与实施例4相同。试验例一、抑菌试验参考qb/t2738-2012《日化产品抗菌效果的评价方法》对实施例4～6以及对比例1～3所述制备得到的妇科洗液的抑菌性能进行检测，检测结果如下表1所示。表1各组妇科洗液抑菌率统计组别金黄色葡萄球菌白色念珠菌大肠杆菌淋球菌空白组----实施例4＞99％＞99％＞99％＞90％实施例5＞99％＞99％＞99％＞90％实施例6＞99％＞99％＞99％＞90％对比例185.3％80.6％89.5％82.0％对比例273.9％68.5％75.4％58.6％对比例369.3％61.0％62.4％52.4％由上表1可看出，本发明实施例4～6妇科洗液对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌及淋球菌均具有良好的杀灭作用。试验例二、采用不同的酶进行酶解对半乳甘露低聚糖稳定性的影响试验比较采用不同酶组合(下表2)制备的半乳甘露低聚糖在低酸性环境下(不同ph柠檬酸-磷酸缓冲液)中的稳定性，具体方法为：将不同酶组合制备得到的半乳甘露低聚糖样品溶解于ph分别为3.8、4.2(阴道环境ph正常值为3.8～4.4)的0.1m的柠檬酸-磷酸缓冲液中，浓度为1mg/ml，在不同的时间点检测各组样品中单糖含量，检测结果如下表3～4所示。表2各种酶组合注：各组酶解方法参考实施例1，不同仅在于加入的酶不同，且上述组合中两种酶的质量比均为1：2.2。表3在ph为3.8的环境下各组样品单糖含量变化情况表4在ph为4.2的环境下各组样品单糖含量变化情况由上表3～4可知，由于半乳甘露低聚糖在低酸性环境下会分解，单糖含量增加，从上述结果可看出，采用β-1,4-d-甘露聚糖酶+α-3,6-d-半乳糖苷酶酶解获得的半乳甘露低聚糖产物(①)在低酸性环境下相比其他酶组合具备更高的稳定性，单糖含量上升趋势整体较平缓，而其余各组(②～⑦均呈现出较为明显的上升趋势)。这显示本发明获得的半乳甘露低聚糖更适合应用于阴道低酸性的环境，具有更高的稳定性。试验例三、临床试验3.1临床资料：选取患有各类型阴道炎自愿患者270例，其中霉菌性阴道炎95例，细菌性阴道炎105例，滴虫性阴道炎70例，患者平均年龄35.2岁。3.2分组与治疗：随机将上述270名患者随机分为实施例4～6以及对照组②～⑦组(与实施例4不同在于，对照组②～⑦组采用的分别是试验例二表2中②～⑦半乳甘露低聚糖样品)，每组30人，各组别分别接受实施例4～6以及对照组②～⑦组妇科洗液盥洗外阴5min，每天1次，14d为一疗程。分别在治疗前后检查患者临床症状、体征及阴道分泌物变化，观察指标包括：外阴不适，白带量，气味及行政，外阴/阴道充血、水肿，阴道清洁度，ph值，阴道病原学检查，并随访治愈例数和显效例数，记录复发率，结果如表5～6所示。3.3治疗结果根据观察指标奉为四级标准：(1)治愈：临床症状和体症完全消失，阴道分泌物病原学检查为阴性；(2)显效：临床症状明显减轻，体症明显好转，但未完全消失，阴道分泌物病原学检查为阴性；(3)有效：临床症状和体症有所改善，阴道分泌物病原学检查为阴性或阳性；(4)无效：临床症状和体症无改善甚至加重，阴道分泌物病原学检查为阳性，以治愈+显效患者例数计算总有效率。4.结果表5表6可见，本发明提供的妇科洗液对各种阴道炎的总有效率达到90％以上，且复发率较低。而其余各组对照组中，以对照组⑥和对照组⑦治疗效果最差，且复发率最高，对照组⑥15例名治愈+显效者中，9名存在复发的迹象；对照组⑦14名治愈+显效者中，10名存在复发的迹象。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12