本发明涉及植物提取物技术领域，尤其是涉及一种具有修复、美白作用的白芨提取物的制备方法及白芨提取物。
背景技术：
白芨是中国传统名贵中药，具有消肿生肌，收敛止血的作用。现代研究表明，白芨具有抗肿瘤、调节免疫、促进伤口愈合等功效。
白芨中含有淀粉类，大分子蛋白以及多酚等成分，在溶液中容易造成沉淀或变色等问题，所以在加工过程中，需要进行脱除，以使能满足化妆品对产品稳定性的要求。
目前研究提取主要以多糖为目标，为了制备和纯化白芨多糖的工艺使用了乙醇，丙酮、乙醚、膜过滤等技术手段。使用了大量的有机溶剂，带来安全隐患，或具有生产成本高等缺点。而化妆品原料对稳定性、安全性和功能性都有很高的要求，现有技术中提取的白芨提取物无法应用于化妆品领域。
技术实现要素：
为解决现有技术中存在的上述问题，为了获得满足化妆品中使用的要求，本发明提供了一种不仅不使用有机溶剂、操作方便、收率高且成本低的具有修复、美白作用的白芨提取物的制备方法；
本发明还提供了一种具有修复、美白作用的白芨提取物。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种具有修复、美白作用的白芨提取物的制备方法，包括以下步骤：
a)提取：向白芨中加入白芨重量10-15倍的水，70-90℃提取处理1-3小时，提取完成后趁热过滤得到粗滤液；
b)酶解：向白芨粗滤液中加入0.05-5wt％的酸性蛋白酶，保温酶解1-6小时，酶解结束后，加入0.05-5wt％的高温淀粉酶，保温酶解1-6小时；酶解结束后，加入助滤剂，过滤得到精滤液；
c)树脂吸附：向精滤液中加入精滤液重量4-15wt％的离子交换树脂处理1-6小时，处理后过滤，并将滤液的ph值调整至5-7；
d)脱色：向步骤c)处理后的滤液中加入脱色剂进行脱色处理，制得白芨提取物。
作为优选，所述步骤b)中，酸性蛋白酶添加前，先将粗滤液温度调节至40-60℃，酸性蛋白酶酶解时温度为40-60℃；高温淀粉酶添加前，先将酸性蛋白酶酶解液温度调节至80-95℃，高温淀粉酶酶解时温度为80-95℃。
作为优选，所述步骤b)中，酸性蛋白酶添加前，先将粗滤液温度调节至50-60℃，酸性蛋白酶酶解时温度为50-60℃；高温淀粉酶添加前，先将酸性蛋白酶酶解液温度调节至85-95℃，高温淀粉酶酶解时温度为85-95℃。
作为优选，所述步骤b)中的助滤剂为硅藻土。
作为优选，所述步骤b)中，助滤剂的添加量为高温淀粉酶酶解后产物重量的4-15wt％。
作为优选，所述步骤b)中，助滤剂的添加量为高温淀粉酶酶解后产物重量的8-12wt％。
作为优选，所述步骤c)中，离子交换树脂的添加量为精滤液重量的8-12wt％，采用盐酸溶液调节ph值。
作为优选，所述步骤d)中，脱色处理温度为50-70℃。
作为优选，所述步骤d)中，脱色剂为活性炭，脱色剂的添加量为滤液重量的2-8wt％。
一种具有修复、美白作用的白芨提取物，由上述具有修复、美白作用的白芨提取物的制备方法制得。
因此，本发明具有以下有益效果：
1)本发明提供的一种制备白芨提取物的方法利用酶解、树脂吸附、脱色等技术，制备一种白芨提取物，不仅能够去除白芨中不稳定性成分，同时保留有效成分白芨多糖。
2)本发明所制备的白芨提取物不仅得到有效成分多糖，而且在制备过程中未大量使用95％乙醇、丙酮和乙醚等溶剂，收率较高。
3)本发明所制备的白芨提取物对皮肤安全、无刺激，而且也无眼刺激性，并具有美白和修复的作用，可适用于化妆品中。
4)本发明所制备的白芨提取物比较稳定，不会有沉淀析出。
具体实施方式
以下将通过实施例来详细说明本申请的实施方式，借此对本申请如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
本申请中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备，均来自市售产品。本申请中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
本申请还存在其它多种可实施的技术方案，在此不做一一列举，本申请权利要求中要求保护的技术方案都是可以实施的。
实施例
一种具有修复、美白作用的白芨提取物的制备方法，包括以下步骤：
a)提取：向白芨中加入白芨重量10-15倍的水，70-90℃提取处理1-3小时，提取完成后趁热过滤得到粗滤液；
优选地，加入水地重量为白芨重量的11-13倍；更优选的，加入水地重量为白芨重量的12倍，提取温度为80℃；
b)酶解：先将粗滤液温度调节至40-60℃，向白芨粗滤液中加入0.05-5wt％的酸性蛋白酶，温度为40-60℃保温酶解1-6小时，酶解结束后，先将温度调节至80-95℃，加入0.05-5wt％的高温淀粉酶，80-95℃保温酶解1-6小时；酶解结束后，加入酶解后产物重量的4-15wt％地助滤剂硅藻土，过滤得到精滤液；
优选地，酸性蛋白酶添加前，先将粗滤液温度调节至50-60℃，酸性蛋白酶酶解时温度为50-60℃，高温淀粉酶添加前，先将酸性蛋白酶酶解液温度调节至85-95℃，高温淀粉酶酶解时温度为85-95℃，助滤剂添加量为酶解后产物重量的8-12wt％；更优选的，酸性蛋白酶添加前，先将粗滤液温度调节至55℃，酸性蛋白酶酶解时温度为55℃，高温淀粉酶添加前，先将酸性蛋白酶酶解液温度调节至90℃，高温淀粉酶酶解时温度为90℃，助滤剂添加量为酶解后产物重量的10wt％；
c)树脂吸附：向精滤液中加入精滤液重量4-15wt％的离子交换树脂处理1-6小时，处理后过滤，并采用盐酸溶液将滤液的ph值调整至5-7；
优选地，离子交换树脂的添加量为精滤液重量的8-12wt％，ph值调节至6；更优选的，离子交换树脂的添加量为精滤液重量的10wt％，离子交换树脂为717树脂；
d)脱色：向步骤c)处理后的滤液中加入滤液重量的2-8wt％的脱色剂活性炭并在50-70℃进行脱色处理1-3小时，制得白芨提取物；
优选的，在55-65℃进行脱色处理，脱色剂的添加量为3-7wt％；更优选的，在55-65℃进行脱色处理，脱色剂的添加量为3-7wt％。
一种具有修复、美白作用的白芨提取物，由上述具有修复、美白作用的白芨提取物的制备方法制得。
实施例1
将片状白芨150g加入原料重量的10倍纯水，在70℃提取3小时，提取结束，趁热过滤除渣，得到白芨粗滤液，将粗滤液调节温度至60℃，加入5wt％的酸性蛋白酶，保温酶解1小时，酶解结束，升温至80℃，加入5wt％的高温淀粉酶，保温酶解1小时。酶解结束，向酶解液中，加入15wt％白色硅藻土助滤，得到精滤液，向精滤液中加入原料重量15wt％的离子交换树脂(优选为717树脂)搅拌吸附1小时，吸附结束后过滤，向过滤液中加入hcl，调节至ph值6。将调节ph后的过滤液，调节温度至70℃，向料液中加入原料重量8wt％活性炭，保温搅拌脱色3小时，得到白芨根提取物成品1180g，含固量3.39％，料液为白色至淡黄色。
实施例2
将片状白芨150g加入原料重量的15倍纯水，在90℃，提取1小时，提取结束，趁热过滤除渣，得到白芨粗滤液，将粗滤液调节温度至40℃，加入0.05wt％的酸性蛋白酶，保温酶解6小时，酶解结束，升温至80℃，加入0.05wt％的高温淀粉酶，保温酶解6小时。酶解结束，向酶解液中，加入4wt％白色硅藻土助滤，得到精滤液，向精滤液中加入原料重量4wt％的离子交换树脂(优选为717树脂)搅拌吸附6小时，吸附结束后过滤，向过滤液中加入hcl，调节过滤液至ph为6。将调节ph后的过滤液，调节温度至50℃，向料液中加入原料重量2wt％活性炭，保温搅拌脱色1小时，得到白芨根提取物成品1324g，含固量3.3％，料液为白色至淡黄色。
实施例3
将片状白芨150g加入原料重量的12倍纯水，在80℃，提取2小时，提取结束，趁热过滤除渣，得到白芨粗滤液，将粗滤液调节温度至50℃，加入2.5wt％的酸性蛋白酶，保温酶解3小时，酶解结束，升温至90℃，加入2.5wt％的高温淀粉酶，保温酶解3小时。酶解结束，向酶解液中，加入10wt％白色硅藻土助滤，得到精滤液，向精滤液中加入原料重量10wt％的离子交换树脂(优选为717树脂)搅拌吸附3小时，吸附结束后过滤，向过滤液中加入hcl，调节过滤液ph值6。将调节ph后的过滤液，调节温度至60℃，向料液中加入原料重量6wt％活性炭，保温搅拌脱色2小时，得到白芨根提取物成品1218g，含固量为3.1％，料液为白色至淡黄色。
实施例4
将片状白芨150g加入原料重量的13倍纯水，在90℃，提取2小时，提取结束，趁热过滤除渣，得到白芨粗滤液，将粗滤液调节温度至55℃，加入0.5wt％的酸性蛋白酶，保温酶解2小时，酶解结束，升温至95℃，加入0.5wt％的高温淀粉酶，保温酶解2小时。酶解结束，向酶解液中，加入8wt％白色硅藻土助滤，得到精滤液，向精滤液中加入原料重量5wt％的离子交换树脂(优选为717树脂)搅拌吸附2小时，吸附结束后过滤，向过滤液中加入hcl，调节过滤液ph值6。将调节ph后的过滤液，调节温度至60℃，向料液中加入原料重量6wt％活性炭，保温搅拌脱色1小时，得到白芨根提取物成品1250g，含固量3.2％，料液为白色至淡黄色。
实施例5
将片状白芨150g加入原料重量的15倍纯水，在80℃，提取3小时，提取结束，趁热过滤除渣，得到白芨粗滤液，将粗滤液调节温度至50℃，加入3wt％的酸性蛋白酶，保温酶解3小时，酶解结束，升温至95℃，加入3wt％的高温淀粉酶，保温酶解3小时。酶解结束，向酶解液中，加入10wt％白色硅藻土助滤，得到精滤液，向精滤液中加入原料重量10wt％的离子交换树脂(优选为717树脂)搅拌吸附3小时，吸附结束后过滤，向过滤液中加入hcl，调节过滤液ph值6。将调节ph后的过滤液，调节温度至70℃，向料液中加入原料重量6wt％活性炭，保温搅拌脱色2小时，得到白芨根提取物成品1350g，含固量为3.6％，料液为白色至淡黄色。
对比例1
对比例1中制备方法，除不进行离子交换树脂吸附外，其他条件同实施例2中的制备方法。
对比例2
对比例2中制备方法，除不进行离子交换树脂吸附和脱色处理外，其他条件同实施例2中的制备方法。
对比例3
对比例3中制备方法，除交换酸性蛋白酶与高温淀粉酶的处理顺序外，其他条件同实施例2中的制备方法。
对比例4
对比例4中制备方法，除提取温度为100℃外，其他条件同实施例2中的制备方法。
对比例5
对比例5中制备方法，除提取温度为60℃外，其他条件同实施例2中的制备方法。
稳定试验方法：将样品置于60℃和80℃恒温干燥箱内，观察样品是否有沉淀析出，与初始样品进行对比。试验共10天，第5天及第10天分别对产品进行观察。结果如表1所示。
表1.不同方法获得的白芨根提取物测试结果
白芨根提取物对角质细胞hacat的免疫调节作用
细胞收集：角质细胞铺板率达到60％～75％时，弃掉培养瓶中的培养液，用pbs清洗两次，加入1ml浓度为0.25％胰酶消化细胞，37℃消化3-5min，倒置显微镜下观察80％左右细胞处于悬浮状态时，加入5ml含血清的dmem培养液终止消化，并收集培养瓶中的细胞于离心管中，1000rpm/min离心3min。
细胞计数：离心结束后，弃去上清，加入5mlpbs，弯头吸管吹打混匀细胞，细胞计数仪进行计数。
细胞接种：1000rpm离心3min，弃掉pbs，然后将细胞悬液，接种至12孔板中，每孔液量为1ml。接种结束后，放置于培养箱(37℃、5％co2、95％rh)中培养24h±2h。
实验分组：实验需设定空白对照组(无lps诱导)、阴性对照组(lps诱导)、样品组(lps诱导)和阳性对照组(lps诱导+地塞米松100μg/ml)，每组均设立3个复孔。
样品配制：再用细胞培养液稀释至相应的浓度(0.5％，0.1％)。
给药：根据实验分组，开展给药操作，样品组加入含有样品的培养液，空白对照组及阴性对照组加入细胞培养液，阳性对照组需要加入含有100μg/ml地塞米松的细胞培养液，每孔2ml。给药完毕后将6孔板放置在培养箱中(37℃、5％co2、95％rh)培养2h±15min。
lps诱导：孵育培养结束后，空白对照组更换新鲜细胞培养液，剩余各组更换含有1μg/ml的lps培养液，阴性对照组加入含有lps的细胞培养液，样品组加入含有样品及lps的培养液，阳性对照组需要加入含有100μg/ml地塞米松及lps的细胞培养液，每孔2ml。给药完毕后将6孔板放在培养箱中(37℃、5％co2、95％rh)培养22h±1h。
收集细胞上清：孵育培养结束后，收集细胞培养上清液于1.5ml离心管中，置于-80℃超低温冰箱冷冻保存。
il-1β，il-6，il-8，tnf-α含量检测：根据检测试剂盒的操作说明书进行检测。
通过对白芨根提取物对lps诱导的角质细胞炎症因子il-1β，il-6，il-8，tnf-α分泌抑制情况后发现，白芨根提取物可以降低细胞的炎症反应，从而提高皮肤的免疫功能，使得皮肤有更好的抵抗环境对皮肤的作用。具体结果如表2所示。
表2
类似地，按照实施1中的方法2、方法3、方法4和方法5获得的白芨根提取物也具有修复功效。
本申请说明书中未作详细描述的内容属于本领域技术人员的公知常识。
如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。“大致”是指在可接收的误差范围内，本领域技术人员能够在一定误差范围内解决所述技术问题，基本达到所述技术效果。
还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的商品或者系统不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种商品或者系统所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的商品或者系统中还存在另外的相同要素。
上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例，但如前所述，应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围，则都应在本申请所附权利要求的保护范围。