1.本发明涉及一种水飞蓟素，特别是一种水飞蓟素纳米结构脂质载体及其制备方法。
背景技术：
2.水飞蓟素(silymarin)是水飞蓟果实中提取得到的标准提取物，由多种黄酮木脂素(水飞蓟宾、水飞蓟宁和水飞蓟亭)组成。水飞蓟宾是其中活性最高的成分，水飞蓟素的功效主要由水飞蓟宾提供。水飞蓟素具有多种生物活性和药理活性，主要包括抗氧化作用、抗纤维化作用、抗炎作用、免疫调节作用等。由于水飞蓟素在水相和油相中的溶解度较低，并且在中性ph值下其水解也不稳定，所以其口服和外用的生物利用度都很低。为了提高水飞蓟素在水相和油相中的溶解度和生物利用度，研究人员研发出水飞蓟素固体脂质纳米粒，其具有以下的优点：使用高压均质技术成本低、易于大规模生产，生物相容性好和生物降解性较好；但是也有以下缺陷：突释、负载能力有限，活性成分在储存过程中易泄露，稳定性较差等。因此，现有的技术存在着存储稳定性较差的问题。
技术实现要素：
3.本发明的目的在于，提供一种水飞蓟素纳米结构脂质载体及其制备方法。本发明具有能够有效提高存储稳定性的特点。
4.本发明的技术方案：一种水飞蓟素纳米结构脂质载体，包括以下重量份的组分：水飞蓟素，1
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5份；卵磷脂，0.1
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3份；月桂酰肌氨酸异丙酯，3
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10份；甘油山嵛酸酯，3
‑
10份；二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠，0.05
‑
0.5份；丁二醇，0.05
‑
0.5份；水，71
‑
92.8份。
5.前述的一种水飞蓟素纳米结构脂质载体中，包括以下重量份的组分：水飞蓟素，3份；卵磷脂，0.5份；月桂酰肌氨酸异丙酯，5份；甘油山嵛酸酯，5份；二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠，0.2份；丁二醇，0.2份；水，86.1份。
6.前述的一种水飞蓟素纳米结构脂质载体中，所述水飞蓟素中的水飞蓟宾的含量>30％。
7.一种水飞蓟素纳米结构脂质载体的制备方法，包括以下具体步骤：
8.a、将水飞蓟素和卵磷脂，加入月桂酰肌氨酸异丙酯，并在40
‑
85℃下搅拌溶解，得到混合液；
9.b、将甘油山嵛酸酯于65
‑
85℃下搅拌溶解，得到溶解液，将混合液加入溶解液中，搅拌均匀得到油相；
10.c、将二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠、丁二醇和水混合，于40
‑
85℃搅拌溶解，得到水相；
11.d、将油相缓慢加入至水相中，在40
‑
85℃下搅拌20
‑
60min，得到预乳液；然后使用高压均质机在500
‑
1500bar下，将预乳液均质循环3
‑
10次，随后冷却至室温，即得到水飞蓟素纳米结构脂质载体成品。
12.前述的一种水飞蓟素纳米结构脂质载体的制备方法中，包括以下具体步骤：
13.a、将水飞蓟素和卵磷脂，加入月桂酰肌氨酸异丙酯，并在70℃下搅拌溶解，得到混合液；
14.b、将甘油山嵛酸酯于70℃下搅拌溶解，得到溶解液，将溶解液加入混合液中，搅拌均匀得到油相；
15.c、将二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠、丁二醇和水混合，于70℃搅拌溶解，得到水相；
16.d、将水相缓慢加入至油相中，在70℃下搅拌30min，得到预乳液；然后使用高压均质机在800bar下，将预乳液均质循环7次，随后冷却至室温，即得到水飞蓟素纳米结构脂质载体成品。
17.与现有技术相比，本发明的水飞蓟素纳米结构脂质载体由水飞蓟素、卵磷脂、月桂酰肌氨酸异丙酯、甘油山嵛酸酯、二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠、丁二醇和水构成，并采用特定的制备工艺得到，实现将水飞蓟素负载于纳米脂质上，最终成品粒径均匀，稳定性好，可以渗透到特定的皮肤层中发挥作用。同时，本发明通过加入月桂酰肌氨酸异丙酯，可以减少水飞蓟素纳米脂质载体的粒径，使得水飞蓟素更多的在表皮和真皮层中富集，提高其生物利用度。经测试，采用本发明的组分和制备工艺制得的水飞蓟素纳米结构脂质载体的粒径可以达到120nm、pdi为0.25，且粒径均匀；将其在4℃环境下放置30天后，粒径为180nm，pdi为0.32，表明稳定性良好。
18.综上所述，本发明不仅具有能够有效提高存储稳定性的特点，还能够进一步的提高水飞蓟素的渗透性能，提高水飞蓟素的生物利用度。
具体实施方式
19.下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
20.实施例1。一种水飞蓟素纳米结构脂质载体，包括以下重量份的组分：水飞蓟素，1
‑
5份；卵磷脂，0.1
‑
3份；月桂酰肌氨酸异丙酯，3
‑
10份；甘油山嵛酸酯，3
‑
10份；二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠，0.05
‑
0.5份；丁二醇，0.05
‑
0.5份；水，71
‑
92.8份。
21.所述水飞蓟素中的水飞蓟宾的含量>30％。
22.一种水飞蓟素纳米结构脂质载体的制备方法，包括以下具体步骤：
23.a、将水飞蓟素和卵磷脂，加入月桂酰肌氨酸异丙酯，并在40
‑
85℃下搅拌溶解，得到混合液；
24.b、将甘油山嵛酸酯于65
‑
85℃下搅拌溶解，得到溶解液，将混合液加入溶解液中，搅拌均匀得到油相；
25.c、将二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠、丁二醇和水混合，于40
‑
85℃搅拌溶解，得到水相；
26.d、将油相缓慢加入至水相中，在40
‑
85℃下搅拌20
‑
60min，得到预乳液；然后使用高压均质机在500
‑
1500bar下，将预乳液均质循环3
‑
10次，随后冷却至室温，即得到水飞蓟素纳米结构脂质载体成品。
27.实施例2。一种水飞蓟素纳米结构脂质载体，包括以下重量的组分：水飞蓟素，3g；卵磷脂，0.5g；月桂酰肌氨酸异丙酯，5g；甘油山嵛酸酯，5g；二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸
钠，0.2g；丁二醇，0.2g；水，86.1g。
28.所述水飞蓟素中的水飞蓟宾的含量>30％。
29.一种水飞蓟素纳米结构脂质载体的制备方法，包括以下具体步骤：
30.a、将水飞蓟素和卵磷脂，加入月桂酰肌氨酸异丙酯，并在70℃下搅拌溶解，得到混合液；
31.b、将甘油山嵛酸酯于70℃下搅拌溶解，得到溶解液，将混合液加入溶解液中，搅拌均匀得到油相；
32.c、将二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠、丁二醇和水混合，于70℃搅拌溶解，得到水相；
33.d、将油相缓慢加入至水相中，在70℃下搅拌30min，得到预乳液；然后使用高压均质机在800bar下，将预乳液均质循环7次，随后冷却至室温，即得到水飞蓟素纳米结构脂质载体成品。
34.对比例1：将空白的纳米结构脂质载体与水飞蓟素混合，搅拌30min，得到成品；对比例1中的各成分及配比与实施例2相同；
35.空白的纳米结构脂质载体制备方法为：
36.a、将卵磷脂加入月桂酰肌氨酸异丙酯，并在40
‑
85℃下搅拌溶解，得到混合液；
37.b、将甘油山嵛酸酯于65
‑
85℃下搅拌溶解，得到溶解液，将混合液加入溶解液中，搅拌均匀得到油相；
38.c、将二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠、丁二醇和水混合，于40
‑
85℃搅拌溶解，得到水相；
39.d、将油相缓慢加入至水相中，在40
‑
85℃下搅拌20
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60min，得到预乳液；然后使用高压均质机在500
‑
1500bar下，将预乳液均质循环3
‑
10次，随后冷却至室温，即得到空白的纳米结构脂质载体。
40.对比例2：水飞蓟素固体脂质纳米粒(不添加月桂酰肌氨酸异丙酯，其余各成分及比例与实施例2相同)；
41.水飞蓟素固体脂质纳米粒制备方法为：
42.a、将水飞蓟素、卵磷脂、甘油山嵛酸酯于65
‑
85℃下搅拌均匀得到油相；
43.b、将二(月桂酰胺谷氨酰胺)赖氨酸钠、丁二醇和水混合，于40
‑
85℃搅拌溶解，得到水相；
44.c、将水相缓慢加入至油相中，在40
‑
85℃下搅拌20
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60min，得到预乳液；然后使用高压均质机在500
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1500bar下，将预乳液均质循环3
‑
10次，随后冷却至室温，即得到水飞蓟素固体脂质纳米粒。
45.用激光粒度仪测定实施例2制备得到的水飞蓟素纳米结构脂质载体和对比例2制得的水飞蓟素固体脂质纳米粒的粒径分布和pdi。
46.实施例2制得的水飞蓟素纳米结构脂质载体的粒径为120nm，pdi为0.25，粒径均匀；
47.对比例2制得的水飞蓟素固体脂质纳米粒的粒径为280nm，pdi为0.26；
48.将实施例2制得的水飞蓟素纳米结构脂质载体4℃下放置30天后，其粒径为180nm，pdi为0.32，
49.将对比例2制得的水飞蓟素固体脂质纳米粒在4℃下放置30天后，粒径为410，pdi为0.43。
50.由此可知，实施例2制备所得水飞蓟素纳米结构脂质载体具有良好的存放稳定性，粒径也更小、更均匀，有利于提高渗透性能。
51.将实施例2、对比例1和对比例2制得的产品进行水皮蓟素表皮含量测定和真皮含量测定。
52.实验步骤包括以下：
53.1、体外透皮实验：取一块新鲜、完整无损伤的小鼠皮肤，用剃毛器去除皮肤上的毛，并用少量清水冲洗；用锋利的刀将皮下脂肪去除，并用pbs溶液洗净；最后把处理好的皮肤用锡纸包裹好，平放在盒子中，在
‑
20℃下贮藏待用。将小鼠皮肤固定在franz扩散池上，有效渗透面积为1.766cm2，接收池中注入15ml pbs缓冲液，水浴温度37℃。分别取实施例2的产品、对比例1的产品和对比例2的产品0.5ml置于扩散池，密封。开启磁力搅拌器时计时，分别于不同时间点取样0.5ml。取样后，及时补充等体积的恒温pbs液。反应24h结束后，小心移去装置，将加于两室之间的皮肤取出，用清水冲洗，并用乙醇擦拭，去除掉表面的样品，最后用滤纸吸附掉表面的水待用。
54.2、表皮中水飞蓟素含量的测定：将皮肤平铺于玻璃皿中，用胶带粘去皮肤21层，其中，为避免皮肤表面仍残留样品，去除第一层，将剩余20层合并，置于10ml离心管中，加入2ml甲醇中，涡旋3min，2000r/min离心5min，取清液，过220nm有机膜，使用hplc测水飞蓟素的含量。
55.3、真皮中水飞蓟素含量的测定：用剪刀将已经粘去21层的皮肤剪碎，置于10ml离心管中，加入1ml甲醇，涡旋3min，在2000r/min的条件下离心5min，取上层清液，重复两次，最后合并清液，过220nm有机膜，使用hplc测水飞蓟素的含量。
56.未能在接受液中检测到水飞蓟素的存在，说明样品没有穿透皮肤参与体内循环，而是渗透至皮肤中。
57.结果如下：
58.实施例2：水飞蓟素表皮含量3.2mg/cm2，真皮含量4.0mg/cm2；
59.对比例1：水飞蓟素表皮含量1.6mg/cm2，真皮含量1.5mg/cm2；
60.对比例2：水飞蓟素表皮含量2.8mg/cm2，真皮含量2.6mg/cm2。
61.结论：实施例2制得的水飞蓟素纳米结构脂质载体在表皮和真皮中的含量增加，可以有效的提高水飞蓟素的经皮渗透量。