1.本发明属于中药领域，具体涉及一种具有抗焦虑、抗抑郁功效的百合地黄复合多糖和应用。
背景技术：
2.抑郁症是一种以快感缺失、情绪低落、睡眠紊乱、精神萎靡、自我评估能力低下、认知功能障碍等为核心症状的常见且易复发的慢性情感性精神障碍疾病。作为一种多病因异质性疾病，抑郁症的病因十分复杂，针对其发病机制存在多种假说，代表性学说包括单胺类递质分泌降低、下丘脑
‑
垂体
‑
肾上腺皮质轴功能失调、突触传递效能减弱、应激环境与遗传因素相互作用等。目前，临床上广泛使用针对单胺类递质失衡开发的选择性五羟色胺再摄取抑制剂的有效率仅为50％，且存在临床症状改善缓慢、副作用多、药价高、易复发等缺陷。因此，安全有效抗焦虑、抗抑郁药物的研究逐渐成为医学界研究热点，而多靶点起效的天然植物药物成为抗焦虑、抗抑郁药物筛选的重点。中药抗焦虑、抗抑郁复方多，成分复杂。经典名方百合地黄汤始载于张仲景的《金匮要略》，其治疗抑郁症临床用药历史悠久，安全性高。但由于中药复方的化学成分复杂性和功能主治多样性，百合地黄汤治疗抑郁症的药效物质基础仍难以明确。基于经典名方百合地黄汤的复合多糖提取物抗焦虑、抗抑郁效果显著，因此，对百合地黄复合多糖的提取方法进行创新以有效提高提取多糖中抗焦虑、抗抑郁活性成分类型质量及数量，亦不失为现阶段可行的一种提高抑郁症临床疗效的方法。
技术实现要素：
3.本发明的目的就是要解决现有技术的不足，提供一种具有抗焦虑、抗抑郁功效的百合地黄复合多糖和应用，本发明制得的百合地黄复合多糖具有优于百合地黄复方、百合多糖、地黄多糖的更好的抗抑郁疗效和抗焦虑疗效。
4.为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
5.本发明的一种具有抗抑郁功效的百合地黄复合多糖，制备方法包括以下步骤：
6.(1)提取：取百合和生地黄，加水进行第一次煎煮，所加水的重量份与百合和生地黄重量份之和的比为10:1，过滤得到药渣和第一次煎液，对药渣加水进行第二次煎煮，所加水的重量份与百合和生地黄重量份之和的比为8:1，过滤得到第二次煎液，将所述第一次煎液和第二次煎液合并后再次过滤得到滤液，浓缩，得到浓缩液；
7.(2)醇沉：向所述浓缩液中加入乙醇得到混合液，调整所述混合液中乙醇的质量浓度至70％，然后将所述混合液静置沉淀，然后再进行过滤，分离出沉淀物；
8.(3)干燥：将所述沉淀物冷冻干燥，获得百合地黄复合多糖。
9.优选的，所述百合和生地黄的重量比为1:1。
10.优选的，第一次煎煮的时间为1.5小时。
11.优选的，第二次煎煮的时间为1小时。
12.优选的，步骤(1)中的浓缩为，在60℃下对滤液进行浓缩以得到相对密度为1.28～
1.30的浓缩液。
13.优选的，步骤(2)中乙醇的体积为浓缩液体积的3
‑
4倍。
14.优选的，步骤(2)中混合液静置沉淀的时间为48
‑
72小时。
15.优选的，步骤(3)中沉淀物冷冻干燥的时间为48
‑
72小时。
16.本发明还提供一种具有抗抑郁功效的百合地黄复合多糖在制备治疗抑郁症和/或焦虑症的药物的应用。
17.本发明的有益效果为，本发明在水提的基础上，对浓缩液再次进行醇沉，有效的提高了有效成分的含量，制得的百合地黄复合多糖具有优于百合地黄复方、百合多糖、地黄多糖的作用，具有更好的抗抑郁疗效和抗焦虑疗效。
具体实施方式
18.实施例1
19.本发明的一种具有抗焦虑、抗抑郁功效的百合地黄复合多糖提取方法，包括以下步骤：
20.(1)提取：取等重量份的百合和生地黄，加水进行第一次煎煮，所加水的重量份与百合、生地黄重量份之和的比为10:1，第一次煎煮1.5小时，过滤得到药渣和第一次煎液，对药渣加水进行第二次煎煮，所加水的重量份与百合、生地黄重量份之和的比为8:1，第二次煎煮1小时，过滤得到第二次煎液，将第一次煎液和第二次煎液合并后再次过滤得到滤液，60℃下对滤液进行浓缩以得到相对密度为1.28～1.30的浓缩液；
21.(2)醇沉：向浓缩液中加入3倍体积的乙醇得到混合液,调整混合液中乙醇的质量浓度至70％，然后将混合液静置沉淀56h，然后再进行过滤，分离出沉淀物；
22.(3)干燥：将沉淀物冷冻干燥72小时，获得百合地黄复合多糖。
23.实施例2
24.本发明的一种具有抗抑郁功效的百合地黄复合多糖提取方法，包括以下步骤：
25.(1)提取：取等重量份的百合和生地黄，加水进行第一次煎煮，所加水的重量份与百合、生地黄重量份之和的比为10:1，第一次煎煮1.5小时，过滤得到药渣和第一次煎液，对药渣加水进行第二次煎煮，所加水的重量份与百合、生地黄重量份之和的比为8:1，第二次煎煮1小时，过滤得到第二次煎液，将第一次煎液和第二次煎液合并后再次过滤得到滤液，60℃下对滤液进行浓缩以得到相对密度为1.28～1.30的浓缩液；
26.(2)醇沉：向浓缩液中加入4倍体积的乙醇得到混合液，调整混合液中乙醇的质量浓度至70％，然后将混合液静置沉淀72小时，然后再进行过滤，分离出沉淀物；
27.(3)干燥：将沉淀物冷冻干燥48小时，获得百合地黄复合多糖。
28.对比例1
29.百合多糖提取物的制备方法为，将百合替代实施例1中的百合和生地黄，进行提取、醇沉和干燥，得到百合提取物，其他步骤和实施例1相同。
30.对比例2
31.地黄多糖提取物的制备方法为，将地黄替代实施例1中的百合和生地黄，进行提取、醇沉和干燥，得到百合提取物，其他步骤和实施例1相同。
32.对比例3
33.百合地黄汤的制备方法为，直接将实施例1制备得到的浓缩液进行干燥，得到百合地黄汤的固体物质，其他步骤和实施例1相同。
34.为探讨本发明方法制得的百合地黄复合多糖的优点，本发明以实施例1的百合地黄复合多糖为目标，基于以下实验架构进行验证：采用旷场实验和高架十字迷宫实验评价小鼠焦虑样行为，同时，基于悬尾实验和强迫游泳实验这两种经典的抑郁症行为绝望模型来评价小鼠抑郁样行为，以探究本发明的百合地黄复合多糖的抗焦虑和抗抑郁疗效。
35.旷场实验是评价实验动物在新异环境中自主行为、探究行为与紧张度的一种方法，评分值越高，说明其行为活动越正常；高架十字迷宫是利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧形成矛盾冲突行为来考察动物的焦虑状态，其进入开放臂次数的比例(oe％)以及在开放臂停留时间的比例(ot％)与动物的焦虑情绪呈负相关，即进入开放臂次数及停留时间越少，焦虑行为越严重。悬尾实验和强迫游泳实验均是经典的抑郁症行为绝望模型，动物在一个无可回避的压迫环境中企图摆脱困境，在经过努力仍无法摆脱后，出现间断性不动，显示其行为绝望状态，不动时间的长短反映动物的抑郁程度。
36.具体的材料准备和实验方法如下：
37.1)准备spf级的icr小鼠100只，雌雄各半，体质量18
‑
20g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，质量合格证编号：no.430727211100469151；实验单位使用许可证号：syxk(湘)2019
‑
0009；动物生产许可证号：scxk(湘)2019
‑
0004；
38.2)随机将小鼠分为正常对照组、阳性对照组(19.5mg/kg)、百合多糖高剂量组(6.4g/kg)、百合多糖低剂量组(3.2g/kg)、地黄多糖高剂量组(6.4g/kg)、地黄多糖低剂量组(3.2g/kg)、百合地黄汤高剂量组(16g/kg)、百合地黄汤低剂量组(8g/kg)、百合地黄多糖高剂量组(6.4g/kg)、百合地黄多糖低剂量组(3.2g/kg)各10组，雌雄各半。
39.所述阳性对照组小鼠投喂的是盐酸文拉法辛片(购买自惠氏制药有限公司)，投喂量为19.5mg/kg。
40.百合多糖高剂量组和百合多糖低剂量组中的百合即为对比例1中的百合多糖提取物，地黄多糖高剂量组和地黄多糖低剂量组中的地黄即为对比例2中的地黄多糖提取物，百合地黄汤高剂量组和百合地黄汤低剂量组中的百合地黄汤即为对比例3中的百合地黄汤的固体物质。
41.百合地黄多糖高剂量组和百合地黄多糖低剂量组中的百合地黄多糖即为本发明实施例1制备的百合地黄复合多糖。
42.3)正常对照组给以生理盐水，其他组小鼠分别灌胃相应药物，每天上午8点定时灌胃给药，一天一次，给药7天后，于末次给药1h后，检测各组小鼠的行为，得到旷场实验和高架十字迷宫实验的小鼠行为数据，给药8天后，于末次给药1h后，计算小鼠悬尾实验中的5min中内的悬尾不动时间，给药9天后，于末次给药1h后，计算小鼠强迫游泳实验中的4min中内的小鼠强迫游泳不动时间，其中，计量实验数据以均数
±
标准差(s)表示，详见下列表1
‑
3。以p<0.05为差别有统计学意义，
※
表示与正常对照组对比，p<0.05。
43.表1旷场实验
44.组别剂量动物数/只自主活动评分正常对照组/10121.30
±
24.28
百合多糖高剂量组6.4g/kg10136.33
±
17.28百合多糖低剂量组3.2g/kg10130.70
±
24.62地黄多糖高剂量组6.4g/kg10131.90
±
31.44地黄多糖低剂量组3.2g/kg10125.00
±
21.20百合地黄汤高剂量组16g/kg10135.33
±
29.26百合地黄汤低剂量组8g/kg10126.44
±
23.05百合地黄多糖高剂量组6.4g/kg10146.20
±
30.19
※
百合地黄多糖低剂量组3.2g/kg10145.89
±
28.82
※
阳性对照组19.5mg/kg10120.70
±
29.25
45.表1的实验结果表明，百合多糖高剂量组，百合地黄汤高剂量组，百合地黄多糖高、低剂量组小鼠的自主活动评分均相较正常对照组有明显增加，尤其是百合地黄多糖高剂量组和百合地黄多糖低剂量组小鼠的自主活动评分，相较百合高剂量组和百合地黄汤高剂量组也有明显的增加，这说明本发明方法制得的百合地黄复合多糖相较百合多糖、地黄多糖和百合地黄汤的具有更好的抗焦虑疗效。
46.表2高架实验
47.组别剂量动物数/只oe％ot％正常对照组/100.55
±
0.060.31
±
0.06百合多糖高剂量组6.4g/kg100.59
±
0.030.35
±
0.03
※
百合多糖低剂量组3.2g/kg100.58
±
0.050.32
±
0.07地黄多糖高剂量组6.4g/kg100.59
±
0.050.32
±
0.08地黄多糖低剂量组3.2g/kg100.57
±
0.070.30
±
0.06百合地黄汤高剂量组16g/kg100.60
±
0.05
※
0.38
±
0.05
※
百合地黄汤低剂量组8g/kg100.59
±
0.080.34
±
0.16百合地黄多糖高剂量组6.4g/kg100.62
±
0.05
※
0.40
±
0.07
※
百合地黄多糖低剂量组3.2g/kg100.64
±
0.04
※
0.39
±
0.07
※
阳性对照组19.5mg/kg100.61
±
0.040.35
±
0.12
※
48.表2的实验结果表明，百合高剂量组、百合地黄汤高剂量组，百合地黄多糖高、低剂量组小鼠的oe％、ot％值均相较正常对照组有明显增加，尤其是百合地黄多糖高剂量组和百合地黄多糖低剂量组小鼠的oe％、ot％值，相较百合高剂量组和百合地黄汤高剂量组的值也有明显的增加，这表明本发明方法制得的百合地黄复合多糖相较百合多糖、地黄多糖和百合地黄汤的具有更显著的抗焦虑疗效。
49.表3小鼠悬尾实验、强迫游泳实验不动时间
50.组别剂量动物数/只强迫游泳不动时间/s悬尾不动时间/s正常对照组/10104.7
±
20.2283.70
±
19.88百合多糖高剂量组6.4g/kg1066.89
±
25.10
※
68.11
±
14.00
※
百合多糖低剂量组3.2g/kg1075.40
±
18.52
※
66.20
±
15.61
※
地黄多糖高剂量组6.4g/kg1057.20
±
15.55
※
61.00
±
13.56
※
地黄多糖低剂量组3.2g/kg1069.67
±
15.73
※
61.00
±
22.96
※
百合地黄汤高剂量组16g/kg1066.67
±
14.76
※
61.33
±
12.88
※
百合地黄汤低剂量组8g/kg1078.11
±
13.35
※
83.00
±
26.42百合地黄多糖高剂量组6.4g/kg1054.30
±
15.66
※
46.00
±
18.68
※
百合地黄多糖低剂量组3.2g/kg1065.00
±
18.59
※
64.22
±
14.99
※
阳性对照组19.5mg/kg1062.90
±
11.22
※
61.20
±
17.92
51.表3的实验结果表明，百合高、低剂量组，地黄高、低剂量组，百合地黄汤高剂量组，百合地黄多糖高、低剂量组均能显著降低小鼠的不动时间，且其中以百合地黄多糖高剂量组的不动时间最短，这表明百合地黄多糖的抗抑郁效果最佳。
52.所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本公开的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本技术中一个或多个实施例的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。
53.本技术中一个或多个实施例旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本技术中一个或多个实施例的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。