银杏酸C15:1在药物制备中的应用

银杏酸c15:1在药物制备中的应用
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体而言涉及一种银杏酸c15:1在在药物制备中的应用。


背景技术：

2.银杏(学名：ginkgo biloba l.)是银杏科、银杏属植物，有“活裸子植物化石”之称，3.45亿年前就出现在地球上。其种子可供食用(多食易中毒)及药用，叶可作药用和制杀虫剂，亦可作肥料。种子的肉质外种皮含白果酸、白果醇及白果酚。可以作为多种治疗药物
3.以银杏果和银杏叶作为原材料，可以提取多种活性成分，例如黄酮类成分、银杏内酯类成分和银杏酸等。其中，银杏酸(ginkgolic acid，ga)是提取物中最主要的物质，是六烷基或六烯基水杨酸的衍生物，是银杏叶中除内酯、原花青素和黄酮以外具有重要生物活性的成分之一，具有抗肿瘤、抗hiv、抗菌、神经毒性、促凋亡、促自噬等作用。
4.公开号为cn 11168609 a的中国专利申请公开了一种银杏酸c15:1在制备抗衰老药中的应用，结果表明银杏酸c15:1可以具有明显的抗衰老效果，不过并没有公开银杏酸c15:1对大脑神经元的影响。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种银杏酸c15:1的新用途。
6.本发明的技术方案如下：
7.一种银杏酸c15:1在药物制备中的应用，所述的药物由有效成分和药用辅料组成；
8.所述有效成分包含银杏酸c15:1；
9.所述的药物用于改善认知损伤和修复神经元损伤。
10.经试验证明，银杏酸c15:1在3
×
tg转基因小鼠原代细胞中可以显著改善大鼠认知障碍，同时修复神经元损伤。
11.在本文中，改善具有其常规含义，尤其指的是将症状往症状消失的方向修正或调整，包括症状的严重程度降低。在本发明的具体实施方式中，所述的认知损伤为aβ1‑
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诱导的认知损伤。
12.作为优选，所述的神经元损伤是海马神经元损伤。
13.作为优选，所述的神经元损伤是由aβ沉淀引起的。
14.作为优选，所述的银杏酸c15:1单独作为有效成分。
15.作为优选，所述的药物为脑输注制剂。
16.作为优选，所述银杏酸c15:1的日用量为7.5～30μg/kg。
17.作为优选，所述银杏酸c15:1的浓度为2.5～10μm。
18.同现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
19.本发明人通过实验研究发现，从银杏提取物中分离的一种化合物银杏酸(c15:1)，其不仅能改善认知损伤，而且对神经元有修护作用。另外，该化合物合来源于天然植物银
杏，来源广，方便推广应用。
附图说明
20.图1显示了aβ诱发的大鼠认知功能改变，其中，
*
表示与假手术组(control)相比，p<0.05；
##
表示与神经元损伤组相比，p<0.01；
#
表示与神经元损伤组相比，p<0.05；
21.图2显示了3
×
tg转基因神经元损伤小鼠原代神经元的蛋白免疫印迹实验结果。
具体实施方式
22.以下通过具体实验进一步说明本发明的内容。如未详尽之处，可以参见《现代药学实验教程》、《中国药典》以及药物监管部门(如，cfda)的相关规定和指引等。
23.需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见了。
24.本发明中，银杏酸c15:1的结构式如下：
[0025][0026]
提取方法参照chem.pharm.bull.35(7)3016
‑
3020(1987)。
[0027]
实施例1神经元损伤大鼠模型的构建
[0028]
将大鼠用异氟烷麻醉后，应用耳杆将其头部固定在立体定位仪上，剪毛消毒，在头背中部纵向切口，暴露前囟和人字点，去除骨膜后，选右侧脑室为注射区，定位坐标：前囟0.5mm，中线右旁1.5mm，硬膜下4.5mm，将其钻孔并将引导管插入原造模位点4mm深处。并在引导管周围固定3个螺丝，与引导管呈三角形排列，最后用牙科水泥固定，植入脑室给药套管并缝合。术后三天恢复后微量注射器吸取含有10μg aβ1‑
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溶液10μl，使用微量注射泵以2μl/min的速度进行注射，且为能使药物充分弥散，注射完毕留针5min，最后缓慢退出注射针，缝合伤口，待其清醒。另取7只假手术组大鼠，按上述同样方法和坐标操作，注射等体积的生理盐水。操作过程按无菌手术规程进行，留针后肌肉注射青霉素20万单位/只，缝合，清醒后正常饲养。本次造模大鼠28只，假手术组(control)7只。
[0029]
实施例2银杏酸c15:1对神经元损伤模型的药效实验
[0030]
细胞模型采用原代细胞培养技术，取3
×
tg转基因小鼠胎鼠提取神经元，在六孔板中接种小鼠神经元细胞培养至第七天，分别给予银杏酸c15:12.5μm、5μm、10μm，对照组更换普通培养基孵育24h。24h后提取细胞蛋白，采用western blot方法对细胞蛋白表达进行检测。
[0031]
将造模成功的大鼠随机分成神经元损伤组、神经元损伤+银杏酸c15:1组，每组7只。其中，神经元损伤+银杏酸c15:1组将大鼠头部的引导管与给药管芯相连，每天给予配置好的银杏酸c15:1溶液(1.5μg/μl)10μl，设定2μl/min的给药速率进行给药连续给药21天。作为模型对照的神经元损伤组实施与以上基本相同的步骤，但是给药的溶液中不含银杏酸c15:1；假手术组，每天给相同体积生理盐水21天。于造给药后第17天，大鼠进行水迷宫行为
学实验。
[0032]
水迷宫常用于检测小鼠的长期空间学习和记忆能力。结果如图1所示，可以看出，神经元损伤小鼠显示混乱运动并且花费更多时间找到隐藏的平台(p<0.05)，而经过银杏酸c15:1给药处理过的神经元损伤小鼠能花费较少的时间找到隐藏的平台，逃避潜伏期大大减少(p<0.05)。所有这些数据表明，银杏酸c15:1显著改善了神经元损伤小鼠的认知能力。
[0033]
然后，我们提取野生(wt)及app/ps1/tau转基因(3
×
tg)小鼠胎鼠皮层神经元，并进行实验分组，分为对照组(wt组：野生型小鼠胎鼠皮层神经元)、模型组(3
×
tg组：3
×
tg小鼠胎鼠皮层神经元)、模型组+银杏酸c15:1组(银杏酸的浓度为：2.5μm、5μm、10μm)。给予银杏酸处理24h后，收集细胞并提取蛋白，采用蛋白免疫印迹实验检测皮层神经元中bace
‑
1及p
‑
tau蛋白的表达情况。结果如图2所示，模型组神经元中bace
‑
1及磷酸化tau蛋白(p
‑
tau)的表达较对照组明显上调，而给予银杏酸处理后(浓度为5μm及10μm)显著抑制了bcae
‑
1及p
‑
tau的表达。