用于治疗结晶性关节病症的CXCR-2抑制剂的制作方法

用于治疗结晶性关节病症的cxcr-2抑制剂
本技术是申请日为2017年03月09日、申请号为201780029205.4、发明名称为“用于治疗结晶性关节病症的cxcr-2抑制剂”的中国专利申请(其对应pct申请的申请日为2017年03月09日、申请号为pct/us2017/021570)的分案申请。相关申请的交叉引用
1.本技术要求2016年3月11日提交的第62/307,348号美国临时申请的权益，该美国临时申请通过引用整体并入本文。发明背景
2.痛风与尿酸水平升高有关，尿酸结晶并沉积于关节、肌腱以及它们周围的组织中。痛风发作通常反复发生，其特征在于突然发作的剧烈关节疼痛，其中患处关节显示出压痛、肿胀、发热、发红和/或僵硬的迹象。


技术实现要素：

3.本文提供cxcr-2抑制剂化合物和包含所述化合物的药物组合物。主题化合物和组合物可用于治疗结晶性关节病症，包括痛风、痛风性关节炎和痛风发作。
4.本文提供的一些实施方案描述了治疗结晶性关节病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
5.在一些实施方案中，所述结晶性关节病是尿酸单钠结晶性疾病、尿酸结晶性疾病、焦磷酸钙疾病、钙结晶性疾病、碱性磷酸钙羟基磷灰石沉积疾病、钙化性关节周围炎疾病、草酸钙磷酸铝沉积疾病、黄嘌呤沉积疾病、半胱氨酸/胱氨酸沉积疾病、charcot-leyden疾病或溶血磷脂酶沉积疾病。
6.在一些实施方案中，本文还提供了治疗以晶体在一个或多个关节中积累为特征的疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
7.本文提供的其他实施方案描述了用于治疗受试者经历的痛风发作的方法，所述方法包括向该受试者施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
8.在一些实施方案中，本文提供了用于提高经历痛风发作或痛风发作早期症状的受试者中的症状缓解速度的方法，所述方法包括向该受试者施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
9.本文还提供了用于减少受试者经历的痛风发作的持续时间或强度的方法，所述方法包括向该受试者施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
10.在一些实施方案中，本文提供了预防或降低痛风发作的发生率的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
11.本文提供的其他实施方案描述了预防或降低与痛风疗法相关的痛风发作的发生率的方法，所述方法包括向正在接受痛风治疗的受试者施用治疗量的cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述痛风疗法包括用黄嘌呤氧化酶抑制剂、urat1抑制剂、排尿酸剂、尿酸氧化酶、pnp抑制剂、sglt2抑制剂或其组合进行的治疗。在某些实施方案中，所述痛风疗法选自别嘌呤醇、非布司他、尿酸酶、聚乙二醇化尿酸酶、拉布立酶、丙磺舒、磺吡酮、苯溴马隆、非诺贝特、雷西那德(lesinurad)、zurampic、verinurad、阿洛芬酯、口服布西拉明或其组合。
12.本文提供的一些实施方案描述了用于治疗急性痛风发作的方法，其包括向有需要的受试者同时地或顺序地施用以下组合：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，本文还描述了用于预防痛风发作的方法，其包括向有需要的受试者同时地或顺序地施用以下组合：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，本文还提供了用于预防和治疗受试者中的痛风发作的方法，其包括向有需要的受试者同时地或顺序地施用
以下组合：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述受试者是成年的。在其他的或另外的实施方案中，所述组合是协同组合。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在其他的或另外的实施方案中，所述方法包括施用少于1.2mg的秋水仙碱。在其他实施方案中，所述方法包括施用少于0.6mg的秋水仙碱。
13.在一些实施方案中，本文还提供了用于改善秋水仙碱在受试者中的治疗指数的方法，其包括同时地或顺序地向该受试者施用cxcr-2抑制剂。
14.本文提供的其他实施方案描述了包含以下药剂的药物组合物：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含(i)治疗有效量的秋水仙碱；和(ii)治疗有效量的cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含(i)约0.1mg至约0.5mg的秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在其他实施方案中，所述药物组合物包含(i)少于0.5mg的秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的稀释剂或载体。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
15.在一些实施方案中，本文还描述了用于治疗经历痛风发作的受试者的试剂盒，所述试剂盒包含(i)cxcr-2抑制剂；和(ii)关于施用该cxcr-2抑制剂以治疗痛风发作的说明书。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在其他的或另外的实施方案中，所述试剂盒包含秋水仙碱。援引并入
16.本说明书中所提到的所有出版物和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同特别且单独地指出每个单独的出版物或专利申请通过引用而并入。
附图说明
17.本发明的新特征在随附的权利要求中具体阐述。以下详述中提供了其中利用到本发明原理的说明性实施方案，通过参考这些详述以及附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好的理解。附图包括：
18.图1a-图1b描绘了针对化合物1和2采用嗜中性粒细胞和pbmc计数的细胞迁移试验
的结果(参见实施例2)。图1a描绘了嗜中性粒细胞计数。图1b描绘了pbmc计数。
19.图2a-图2c描绘了使用化合物2在晶体诱发的关节病的大鼠气囊模型中的结果(参见实施例4)。图2a描绘了平均渗出液体积。图2b描绘了总白细胞计数。图2c描绘了嗜中性粒细胞计数。
20.图3a-图3c描绘了使用化合物2联合秋水仙碱在晶体诱发的关节病的大鼠气囊模型中的结果(参见实施例5)。图3a描绘了平均渗出液体积。图3b描绘了总白细胞计数。图3c描绘了嗜中性粒细胞计数。
21.图4a-图4c描绘了使用化合物2、3和4在晶体诱发的关节病的大鼠气囊模型中的结果(参见实施例6)。图4a描绘了平均渗出液体积。图4b描绘了总白细胞计数。图4c描绘了嗜中性粒细胞计数。
22.图5a-图5c描绘了使用化合物3和化合物4联合秋水仙碱在晶体诱发的关节病的大鼠气囊模型中的结果(参见实施例7)。图5a描绘了平均渗出液体积。图5b描绘了总白细胞计数。图5c描绘了嗜中性粒细胞计数。
23.图6a-图6c描绘了使用化合物3联合秋水仙碱在晶体诱发的关节病的大鼠气囊模型中的结果(参见实施例8)。图6a描绘了平均渗出液体积。图6b描绘了总白细胞计数。图6c描绘了嗜中性粒细胞计数。
24.图7a-图7c描绘了使用化合物4联合秋水仙碱在晶体诱发的关节病的大鼠气囊模型中的结果(参见实施例9)。图7a描绘了平均渗出液体积。图7b描绘了总白细胞计数。图7c描绘了嗜中性粒细胞计数。
25.图8a-图8c描绘了使用化合物3和4联合秋水仙碱在晶体诱发的关节病的大鼠气囊模型中的结果(参见实施例10)。图8a描绘了平均渗出液体积。图8b描绘了总白细胞计数。图8c描绘了嗜中性粒细胞计数。发明详述定义
26.如本文针对罹患病症的个体等使用的术语“受试者”包括哺乳动物和非哺乳动物。在本文提供的方法和组合物的一个实施方案中，所述哺乳动物是人。
27.如本文使用的术语“有效量”、“治疗有效量”或“药学有效量”是指所施用的至少一种药剂或化合物的量，该量足以治疗或预防特定疾病或病况。结果是疾病的指征、症状或原因的减少和/或减轻，或者生物系统的任何其他所期望的改变。例如，针对治疗用途的“有效量”是包含本文公开的化合物的组合物的量，该量是提供疾病在临床上显著减轻所需的。使用诸如剂量递增研究等技术来确定任何个体病例中的适当“有效”量。
28.药剂或疗法的“亚治疗量”是小于该药剂或疗法的有效量的量，但是当与有效量或亚治疗量的另一药剂或疗法联用时，会由于例如在产生有效效果或减少副作用中的协同作用而产生医师所期望的结果。
29.药剂或疗法的“协同有效”治疗量是这样的量，当与有效量或亚治疗量的另一药剂或疗法联用时，其产生比这两种药剂单独使用时更好的效果。在一些实施方案中，协同有效治疗量的药剂或疗法在联合使用时产生比这两种药剂或疗法中的每一种单独使用时的叠加效应更好的效果。术语“更好的效果”不仅包括待治疗的病症的症状的减轻，还包括改善的副作用谱、改善的耐受性、改善的患者依从性、改善的功效或任何其他改善的临床结果。
30.在应用于联合(无论是同时地还是顺序地)使用的两种或更多种药物活性成分的效果时，术语“协同的”和“协同地”是指比单独使用这两种药剂中的任何一种时更好的效果。
31.术语“约”是指规定的数字或值
±
10％。
32.在本说明书的上下文中，除非有相反的具体指示，否则术语“疗法”还包括“预防”。术语“治疗的”和“治疗地”应相应地理解。药剂秋水仙碱
33.秋水仙碱用于治疗急性痛风发作(及其相关症状)以及用于预防急性痛风发作。虽然秋水仙碱既不是镇痛药也不是排尿酸药，并且不会阻止进展为慢性痛风性关节炎，但它确实具有预防、抑制作用，这有助于降低急性发作的发生率并缓解残痛。秋水仙碱迅速从胃肠道吸收。峰值浓度在0.5至2小时出现。该药物及其代谢物分布于白细胞、肾、肝、脾和肠道中。秋水仙碱在肝中代谢，并主要在排泄物中排泄，其中10-20％在尿液中未经改变地排出。
34.colcrys(秋水仙碱，usp)适用于预防和治疗痛风发作(例如，参见colcrys处方信息或美国专利7,964,647和7,981,938)。colcrys的处方信息要求：对于痛风发作的预防，每天一次或两次，每次0.6mg，最大剂量为1.2mg/天；而对于痛风发作的治疗，在痛风发作的第一次体征发生时为1.2mg，一小时后为0.6mg。
35.服用colcys的常见副作用包括腹泻、恶心、呕吐、腹痛和咽喉疼痛。有关使用colcrys的注意事项包括恶血质(骨髓抑制、白细胞减少、粒细胞减少、血小板减少和再生障碍性贫血)；药物与p-gp和/或cyp3a4抑制剂(导致危及生命的相互作用和死亡)相互作用，和神经肌肉毒性(包括横纹肌溶解在内的肌肉毒性)。
36.针对秋水仙碱疗法最常报告的不良副作用是胃肠的，特别是腹泻；腹痛伴抽筋；恶心；和呕吐。与秋水仙碱疗法相关的不太常见或很少报告的不良副作用包括厌食、粒细胞缺乏症、变应性皮炎、变态反应、脱发、血管性水肿、再生障碍性贫血、骨髓抑制、肌病、神经病、皮疹、血小板减少病症和荨麻疹。
37.秋水仙碱的临床试验研究(参见us专利7,964,647)表明，秋水仙碱的“标准”剂量方案(在急性痛风发作开始时施用1.2mg，随后每小时施用0.6mg，持续6小时)导致比安慰剂更多的胃肠副作用(73％对比19％)和比安慰剂更多的腹泻(73％对比14％)。19％的患者出现严重腹泻，而15％的患者出现呕吐。“较低”剂量方案(在急性痛风发作开始时施用1.2mg秋水仙碱，然后在1小时后施用0.6mg)导致比安慰剂更多的胃肠副作用(24％对比19％)和比安慰剂更多的腹泻(22％对比14％)。
38.用于治疗或预防急性痛风性关节炎发作的秋水仙碱的“标准”剂量为1.0-1.2mg，随后通常为每小时0.5-0.6mg，直至疼痛缓解或直至随后发生腹泻(“腹泻剂量”)。如果出现胃肠不适或腹泻，应停止给药(可能需要阿片类药物来控制腹泻)。在随后的发作中，患者应该能足够准确地判断药物需求以避免腹泻剂量。据信，在发作期间控制疼痛和炎症所需的秋水仙碱的总量在4-8mg范围内。建议在秋水仙碱疗程之间间隔三天，以使累积毒性的可能性减至最小。cxcr-2抑制剂
39.趋化因子在各种疾病和病症的免疫和炎症反应中起重要作用。这些分泌的小分子
是8-14kda蛋白质的逐渐增长的超家族，这些蛋白质的特征在于保守的半胱氨酸基序。
40.趋化因子超家族包含展示出特征结构基序的三组，即c-x-c、c-c和c-x3-c家族。c-x-c趋化因子包括几种有效的化学引诱剂和嗜中性粒细胞活化剂，如白细胞介素-8(il-8)和嗜中性粒细胞活化肽2(nap-2)。
41.研究表明，趋化因子的作用是由g蛋白偶联受体亚家族介导的，这些受体中有被指定为cxcr-1、cxcr-2、cxcr-3、cxcr-4和cxcr-5的受体(对于cxc家族)。已知仅il-8和某些其他结合il-8受体的c-x-c趋化因子化学引诱人嗜中性粒细胞。在迄今鉴定的人c-x-c趋化因子受体(cxcr-1、2、3、4和5)中，仅cxcr-1和cxcr-2充当高亲和力il-8受体。化学引诱嗜中性粒细胞的c-x-c趋化因子共享特定的序列基序。这些受体代表用于药物开发的良好靶标，因为调节这些受体的药剂将可用于治疗免疫和炎症相关的病症和疾病。
42.cxcr-2是一种il8受体。结合cxcr-2的趋化因子是急性痛风中的嗜中性粒细胞炎症所需的(terkaltaub等人,arthritis&rheumatism,(1988),vol 41,(no 5)pp 900-909)。尿酸盐晶体可引发、扩大和维持强烈的炎症发作，因为它们刺激体液炎症介质和细胞炎症介质的合成和释放。嗜中性粒细胞性滑膜炎是急性痛风发作的标志。嗜中性粒细胞在正常滑膜液中很少见。来自过饱和细胞外液的一水合尿酸单钠(msum)晶体在滑膜组织中沉积，其激活常驻的单核吞噬细胞和滑膜衬里细胞以释放嗜中性粒细胞化学趋向素——il-8和密切相关的嗜中性粒细胞趋化性c-x-c趋化因子。新生成的嗜中性粒细胞化学趋向素引导嗜中性粒细胞迁移。msum晶体通过以下两大类机制与吞噬细胞相互作用。第一，晶体激活细胞作为经调理和吞噬的颗粒，引发吞噬细胞响应和炎性介质的释放。第二，尿酸盐晶体直接与脂质膜和蛋白质相互作用，引起几种信号转导途径的激活。这些步骤对晶体诱导的白细胞介素(il)-8表达至关重要。在急性痛风和假痛风时il-8均富含于滑膜液中。晶体活化的常驻单核吞噬细胞和滑膜衬里细胞快速释放il-8(和其他嗜中性粒细胞趋化性c-x-c趋化因子)引起急性痛风。一旦进入滑膜组织，嗜中性粒细胞就遵循诸如c5a、白三烯b4、血小板活化因子、il-1和il-8等化学引诱剂的浓度梯度。在这些因子中，il-8在嗜中性粒细胞侵袭中起关键作用，占到单核细胞响应于尿酸盐晶体的嗜中性粒细胞趋化活性的约90％。
43.据推测，秋水仙碱抑制某些嗜中性粒细胞对il-8的响应的能力可有助于其对急性痛风的预防和治疗性质。il-8或其受体cxcr-2的中和作用可以明显减少il-8诱导的嗜中性粒细胞炎性过程，并提供潜在的痛风治疗靶点。
44.在一些实施方案中，下表中提供的下列化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗其中趋化因子受体属于cxc趋化因子受体亚家族(更适宜地，目标趋化因子受体是cxcr-2受体)的疾病。在一些实施方案中，化合物1、2、3和4是cxcr-2抑制剂。
45.在一些实施方案中，化合物1、2、3和4或其药学上可接受的盐可用作药物，特别是作为趋化因子受体(尤其是cxcr-2)活性的调节剂，并可用于治疗(治疗或预防)人和非人动物的病况/疾病，这些病况/疾病由趋化因子的过量产生或不受调节的产生而恶化或引起。在特定的实施方案中，该病况/疾病是痛风发作。因此，本发明提供用于治疗的化合物1、2、3和4或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供用于治疗的化合物3和4或其药学上可接受的盐。
46.化合物3(n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺)和化合物4(n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺)是嘧啶基磺酰胺，并且可用作趋化因子受体的调节剂。
47.wo 2004/011443描述了用作趋化因子受体调节剂的嘧啶基磺酰胺衍生物。
48.在wo 2006/024823和wo 2010/007427中描述了化合物3的体外效力和pk参数。化合物3显示出大鼠中的良好的生物利用度(49％)、犬中的长半衰期、良好的溶解性和高效力。化合物3处于针对copd的ii期试验中。在wo 2012/007748中描述了化合物3以及六种结晶形式的制备。
49.在wo 2013/008002中描述了化合物4以及几种不同的结晶形式的制备。
50.其他cxcr-2抑制剂的实例包括但不限于azd-8309、az-10397767、elubrixin、danirixin、navarixin、瑞帕立辛、ladarixin和meraxin。其他cxcr-2抑制剂的其他实例包括但不限于下表中的化合物：
51.在又一个方面，本发明提供如上文定义的化合物1、2、3和4或其药学上可接受的盐用作治疗结晶性关节病、痛风、痛风性关节炎和痛风发作的药物的用途。
52.在另一个方面，本发明提供如上文定义的化合物1、2、3和4或其药学上可接受的盐在制备用于治疗的药物中的用途。
53.在又一个方面，本发明提供如上文定义的化合物1、2、3和4或其药学上可接受的盐在制备用于治疗其中趋化因子受体活性的调节对其有益的人类疾病或病况的药物中的用途。
54.在又一个方面，本发明提供如上文定义的化合物1、2、3和4或其药学上可接受的盐在制备用于治疗结晶性关节病、痛风、痛风性关节炎和痛风发作的药物中的用途。方法
55.本文描述了在患有结晶性关节病、痛风、痛风性关节炎或痛风发作或具有所述疾病危险的患者中治疗所述疾病的方法，其包括向所述患者施用治疗有效量的cxcr-2抑制剂或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是化合物1、2、3或4或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是化合物3或4或其药学上可接受
的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是化合物3或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是化合物4或其药学上可接受的盐。结晶性关节病
56.结晶性关节病是一类关节病症(关节病)，其特征在于在一个或多个关节中积累微小晶体。偏光显微镜术可鉴别不同的微晶，包括尿酸单钠、焦磷酸钙(软骨钙质沉着症或假痛风)、羟基磷灰石钙和草酸钙。发生结晶性关节病的危险因素包括肥胖、肾衰竭、高磷血症、甲状旁腺功能亢进、高钙血症和组织损伤(营养不良性钙化)。
57.本文提供了通过向有需要的受试者施用cxcr-2抑制剂来治疗结晶性关节病的方法。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述治疗结晶性关节病的方法包括向有需要的受试者施用n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述治疗结晶性关节病的方法包括向有需要的受试者施用n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
58.本文还描述了通过向有需要的受试者施用1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐；或者(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐来治疗结晶性关节病的方法。
59.在一些实施方案中，所述结晶性关节病是尿酸单钠结晶性疾病、尿酸结晶性疾病、焦磷酸钙疾病、钙结晶性疾病、碱性磷酸钙羟基磷灰石沉积疾病、钙化性关节周围炎疾病、草酸钙磷酸铝沉积疾病、黄嘌呤沉积疾病、半胱氨酸/胱氨酸沉积疾病、charcot-leyden疾病或溶血磷脂酶沉积疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是尿酸单钠结晶性疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是尿酸结晶性疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是焦磷酸钙疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是钙结晶性疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是碱性磷酸钙羟基磷灰石沉积疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是钙化性关节周围炎疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是草酸钙磷酸铝沉积疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是黄嘌呤沉积疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是半胱氨酸/胱氨酸沉积疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是charcot-leyden疾病。在一些实施方案中，所述结晶性关节病是溶血磷脂酶沉积疾病。以晶体积累为特征的疾病
60.本文还描述了通过向有需要的受试者施用cxcr-2抑制剂来治疗以晶体在一个或多个关节中积累为特征的疾病的方法。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接
受的盐。在一些实施方案中，所述治疗以晶体在一个或多个关节中积累为特征的疾病的方法包括向有需要的受试者施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述治疗以晶体在一个或多个关节中积累为特征的疾病的方法包括向有需要的受试者施用n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
61.本文还描述了通过向有需要的受试者施用1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐；或者(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐来治疗以晶体在一个或多个关节中积累为特征的疾病的方法。痛风
62.痛风是由尿酸累积引起的疾病(由于尿酸过量产生，或者更常见地是肾脏排泄尿酸的能力降低)，导致在关节和周围组织中的晶体沉积，引起炎症反应。急性痛风性关节炎(或“痛风发作”)是一种突然的疼痛发作，常常在夜间开始，并且通常只涉及一个或几个关节；大脚趾、膝盖或踝关节最常受到影响。疼痛曾被描述为悸动、挤压、灼烧或剧痛。受影响的关节可出现温暖或发热、发红、压痛、肿胀和/或僵硬的迹象。也可能存在低热。每当移动受影响的区域时，关节内的晶体会引起剧烈疼痛。受影响关节的周围组织的炎症可导致皮肤肿胀，并且即使是最轻微的压力也会发生触痛和疼痛。
63.慢性痛风涉及关节疼痛的反复发作，其通常持续较长时间。一年内发生数次痛风发作可导致关节畸形和关节活动受限。被称为痛风石的尿酸沉积物在软骨组织、腱和软组织中形成，但通常仅在患者患有该疾病多年后才发生。在肾脏中也可出现沉积物，导致慢性肾衰竭。痛风发作
64.本文还描述了通过向有需要的受试者施用cxcr-2抑制剂来治疗受试者经历的痛风发作的方法。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述治疗受试者经历的痛风发作的方法包括向有需要的受试者施用n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述治疗受试者经历的痛风发作的方法包括向有需要的受试者施用n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
65.本文还描述了通过向有需要的受试者施用1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐；或(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐来治疗受试者经历的痛风发作的方法。
((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述预防或降低痛风发作的发生率的方法包括向有需要的受试者施用n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
71.本文还描述了通过向有需要的受试者施用1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐；或(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐来预防或降低痛风发作的发生率的方法。
72.在一些情况下，由于血清尿酸水平改变导致从组织沉积物中动员尿酸盐，在痛风疗法(例如，降尿酸疗法)开始后发生痛风发作的增加。在某些情况下，预防性疗法对于降尿酸疗法的前6个月是有益的。本文描述了通过向有需要的受试者施用cxcr-2抑制剂来预防或降低与痛风疗法相关的痛风发作的发生率的方法。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐，或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述预防或降低与痛风疗法相关的痛风发作的发生率的方法包括向有需要的受试者施用n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述预防或降低与痛风疗法相关的痛风发作的发生率的方法包括向有需要的受试者施用n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述痛风疗法包括用黄嘌呤氧化酶抑制剂、urat1抑制剂、排尿酸剂、尿酸氧化酶、pnp抑制剂、sglt2抑制剂或其组合进行的治疗。在一些实施方案中，所述痛风疗法选自别嘌呤醇、非布司他、尿酸酶、聚乙二醇化尿酸酶、拉布立酶、丙磺舒、磺吡酮、苯溴马隆、非诺贝特、雷西那德、zurampic、verinurad、rhalofenate、口服布西拉明或其组合。
73.在一些实施方案中，在降尿酸疗法的前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月，预防性地施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，在降尿酸疗法的前6个月，预防性地施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，在降尿酸疗法的前3-6个月，预防性地施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，在降尿酸疗法的前6-9个月，预防性地施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，在降尿酸疗法的前9-12个月，预防性地施用cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，在降尿酸疗法的前3-9个月，预防性地施用cxcr-2抑制剂。
74.本文还描述了通过向有需要的受试者施用1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐；或(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐来预防或降低与痛风疗法相关的痛风发作的发生率的方法。在一些实施方案中，所述痛风疗法包括用黄嘌呤氧化酶抑制剂、urat1抑制剂、排尿酸剂、尿酸氧化酶、pnp抑制剂、sglt2抑制剂或其组合进行的治疗。在一些实施方案中，所述痛风疗法选自别嘌呤醇、非布司他、尿酸酶、聚乙二醇化尿酸酶、拉布立酶、丙磺舒、磺吡酮、
苯溴马隆、非诺贝特、雷西那德、zurampic、verinurad、阿洛芬酯、口服布西拉明或其组合。与秋水仙碱的组合
75.本文还描述了联合疗法，其中将本文公开的cxcr-2抑制剂或其药学上可接受的盐中的任一种与另外的用于治疗结晶性关节病、痛风、痛风性关节炎或痛风发作的疗法和/或药剂同时地或顺序地施用。在一些实施方案中，将cxcr-2抑制剂或其药学上可接受的盐与另外的用于治疗痛风、痛风性关节炎或痛风发作的药剂同时地或顺序地施用。在一些实施方案中，将cxcr-2抑制剂或其药学上可接受的盐与秋水仙碱同时地或顺序地施用。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是化合物1、2、3或4或其药学上可接受的盐。
76.本文还描述了通过向有需要的受试者同时地或顺序地施用以下组合来治疗急性痛风发作的方法：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述组合是协同组合。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是本文公开的化合物中的一种或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
77.在一些实施方案中，所述方法包括施用少于1.2mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用少于0.6mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用少于1.2mg、1.1mg、1.0mg、0.9mg、0.8mg、0.7mg、0.6mg、0.5mg、0.4mg、0.3mg、0.2mg或0.1mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约1.2mg、约1.1mg、约1.0mg、约0.9mg、约0.8mg、约0.7mg、约0.6mg、约0.5mg、约0.4mg、约0.3mg、约0.2mg或约0.1mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.05至0.55mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.2至0.4mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.1至0.3mg的秋水仙碱。
78.本文还描述了通过向有需要的受试者同时地或顺序地施用以下组合来防止痛风发作的方法：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述组合是协同组合。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是本文公开的化合物中的一种或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
79.在一些实施方案中，所述方法包括施用少于1.2mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用少于0.6mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用少于1.2mg、1.1mg、1.0mg、0.9mg、0.8mg、0.7mg、0.6mg、0.5mg、0.4mg、0.3mg、0.2mg或0.1mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约1.2mg、约1.1mg、约1.0mg、约0.9mg、约0.8mg、约0.7mg、约0.6mg、约0.5mg、约0.4mg、约0.3mg、约0.2mg或约0.1mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.05至0.55mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.2至0.4mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.1至0.3mg的秋水仙碱。
80.本文还描述了通过向有需要的受试者同时地或顺序地施用以下组合来改善秋水仙碱在受试者中的治疗指数的方法：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述组合是协同组合。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是本文公开的化合物中的一种或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
81.在一些实施方案中，所述方法包括施用少于1.2mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用少于0.6mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用少于1.2mg、1.1mg、1.0mg、0.9mg、0.8mg、0.7mg、0.6mg、0.5mg、0.4mg、0.3mg、0.2mg或0.1mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约1.2mg、约1.1mg、约1.0mg、约0.9mg、约0.8mg、约0.7mg、约0.6mg、约0.5mg、约0.4mg、约0.3mg、约0.2mg或约0.1mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.05至0.55mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.2至0.4mg的秋水仙碱。在一些实施方案中，所述方法包括施用约0.1至0.3mg的秋水仙碱。
82.本文还描述了通过向有需要的受试者同时地或顺序地施用以下组合来预防和治疗受试者中的痛风发作的方法：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述受试者是成年的。在一些实施方案中，所述组合是协同组合。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是本文公开的化合物中的一种或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基
1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药物组合物还包含秋水仙碱。
90.在一些实施方案中，本文还描述了包含秋水仙碱和cxcr-2抑制剂以及药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体的药物组合物。本文还公开了包含治疗有效量的秋水仙碱和治疗有效量的cxcr-2抑制剂的药物组合物。本文还公开了包含亚治疗有效量的秋水仙碱和亚治疗有效量的cxcr-2抑制剂的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物具有固定的剂量组合。在一些实施方案中，所述药物组合物包含约0.1mg至约0.5mg的秋水仙碱；和cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg或约0.5mg的秋水仙碱；和cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含约0.1mg至约0.6mg的秋水仙碱；和cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg或约0.6mg的秋水仙碱；和cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含约0.1mg至约1.0mg的秋水仙碱；和cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg或1.0mg的秋水仙碱；和cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包含少于0.5mg的秋水仙碱；和cxcr-2抑制剂。在一些实施方案中，所述药物组合物还包含药学上可接受的稀释剂或载体。
91.在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是本文公开的化合物中的一种或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是1-(4-氯-2-羟基-3-(哌嗪-1-基磺酰基)苯基)-3-(2-氯-3-氟苯基)脲(化合物1)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是(r)-2-羟基-n,n-二甲基-3-((2-((1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)苯甲酰胺(化合物2)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。
92.在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗病症。在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗哺乳动物的病症。在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗人的病症。在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗或预防结晶性关节病。在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗或预防以晶体在一个或多个关节中积累为特征的疾病。在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗或预防痛风、痛风性关节炎和痛风发作。
93.根据施用方式，所述药物组合物将适宜地包含0.05至99％w(重量百分比)、更适宜地0.05至80％w、另外更适宜地0.10至70％w、甚至更适宜地0.10至50％w的活性成分，其中所有重量百分比均基于组合物总量。
94.本文还描述了制备本发明药物组合物的方法，其包括将cxcr-2抑制剂(例如，化合
物3或4)或其药学上可接受的盐与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体混合。在一些实施方案中，所述药物组合物以溶液、悬浮液、七氟烷烃气雾剂和干粉制剂的形式局部施用(例如施用于肺和/或气道或施用于皮肤)；或者全身施用，例如通过以片剂、胶囊、糖浆、粉末或颗粒的形式口服施用，或以溶液或悬浮液的形式肠胃外施用，或以栓剂或经皮的形式皮下施用或直肠施用。适宜地，口服施用化合物3或化合物4或其药学上可接受的盐。施用方式
95.根据标准药学实践，本文所述的化合物、化合物形式和组合物或者单独施用，或者在药物组合物中与药学上可接受的佐剂、载体、赋形剂或稀释剂联合施用。
96.本文所述的药物组合物是例如适于口服施用的形式，如片剂、胶囊、丸剂、粉剂、持续释放制剂、溶液、悬浮液，适于肠胃外注射的形式，如无菌溶液、悬浮液或乳液，适于局部施用的形式，如软膏或乳膏，或适于直肠施用的形式，如栓剂。在一些实施方案中，所述药物组合物是适于单次施用精确剂量的单位剂量形式。药物组合物包含作为活性成分的本文所述化合物或化合物形式，以及常规的药物载体或赋形剂。在一些实施方案中，这些组合物包含其他或另外的医用或药用剂、载体、佐剂等。
97.药物组合物以单位剂量形式便利地提供。在一些实施方案中，它们通过制药领域技术人员熟知的或显而易见的任何方法用特定量的活性化合物来制备。剂量
98.所施用的药物组合物的量首先取决于所治疗的哺乳动物。在将药物组合物施用于人类受试者的情况下，每日剂量通常将由处方医师确定，其中剂量通常根据年龄、性别、饮食、体重、一般健康状况和个体患者的反应、患者症状的严重程度、所治疗的确切适应症或病况、所治疗的适应症或病况的严重程度、施用时间、施用途径、组合物的处置、排泄速率、药物组合和处方医师的判断而变化。此外，施用途径根据病况及其严重程度而变化。在一些实施方案中，所述药物组合物是单位剂量形式。在这样的形式下，将制品细分为单位剂量，所述单位剂量含有适量的活性成分，例如达到所需目的的有效量。针对特定情况确定适当的剂量在本领域的技术范围内。在一些实施方案中，为方便起见，如果需要，则将总每日剂量分开并在一天中分份施用。考虑如上所述的这类因素，根据主治临床医师的判断来调节施用量和频率。因此，待施用的药物组合物的量可根据情况而变化。在一些情况下，低于上述范围下限的剂量水平绰绰有余，而在其他情况下，以不会引起任何有害副作用的方式使用更大的剂量，例如，将这样的更大剂量分成数个小剂量以供在全天施用。在化合物不是唯一疗法的联合应用中，可以施用较少量的化合物而仍然具有治疗或预防作用。试剂盒
99.本文所述的化合物、化合物形式、组合物和方法提供用于治疗疾病和病症的试剂盒，如本文所述的试剂盒。这些试剂盒包含处于容器中的本文所述化合物、化合物形式、多种化合物、多种化合物形式或组合物，并且任选地，包含教导根据本文所述各种方法和途径来使用该试剂盒的说明书。在一些实施方案中，该类试剂盒还包括信息，如科学参考文献、包装说明书材料、临床试验结果和/或其概述等，这类信息指示或明确了该组合物的活性和/或优点，并且/或者描述了给药、施用、副作用、药物相互作用或对医疗保健提供者有用的其他信息。这类信息可基于各种研究的结果，例如，使用涉及体内模型的实验动物的研究和基于人类临床试验的研究的结果。向包括医生、护士、药剂师、处方人员等健康提供者提
供、销售和/或促销本文所述的试剂盒。在一些实施方案中，也直接向消费者销售试剂盒。
100.本文描述了包含cxcr-2抑制剂如本文所述的任何一种化合物或其药学上可接受的盐的组合物或试剂盒。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述试剂盒还包含秋水仙碱。
101.本文描述了用于治疗经历痛风发作的受试者的组合物或试剂盒，其中包含cxcr-2抑制剂，如本文所述的任何一种化合物，以及关于施用该cxcr-2抑制剂来治疗痛风发作的说明书。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述cxcr-2抑制剂是n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述试剂盒还包含秋水仙碱。
102.在某些实施方案中，提供了包含cxcr-2抑制剂、双重低密度聚乙烯塑料袋和hdpe容器的组合物或试剂盒。在进一步的实施方案中，所述组合物或试剂盒还包含箔袋(例如无水箔袋，如热密封的无水箔袋)。在一些实施方案中，所述组合物或试剂盒还包含干燥剂；在另外其他的实施方案中，干燥剂不是必需的和/或不存在。在一些情况下，这样的包装改善了cxcr-2抑制剂的稳定性。
103.在一些实施方案中，本文所述的化合物、化合物形式和药物组合物用于诊断和用作研究试剂。例如，在一些实施方案中，所述化合物、化合物形式和药物组合物单独地或与其他化合物组合地用作差异分析和/或组合分析中的工具，以阐明在细胞和组织内表达的基因的表达模式。作为一个非限制性实例，将经一种或多种化合物处理的细胞或组织内的表达模式与未经化合物处理的对照细胞或组织进行比较，并分析所产生的模式的基因表达的差异水平，这是因为它们涉及例如所检查的基因的疾病关联、信号传导途径、细胞定位、表达水平、大小、结构或功能。在存在或不存在影响表达模式的其他化合物的情况下对刺激或未刺激的细胞进行这些分析。
104.除了可用于人类治疗外，本文所述的化合物、化合物形式和药物组合物还可用于动物的兽医治疗。
105.以下所提供的实施例和制备进一步说明和例示了本发明的化合物和制备这样的化合物的方法。应当理解，本发明的范围绝不受限于下面的实施例和制备的范围。本发明提供了包括但不限于以下实施方式：1.一种治疗结晶性关节病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用：n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)：
基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)：或其药学上可接受的盐；或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)：或其药学上可接受的盐。5.一种用于提高经历痛风发作或痛风发作早期症状的受试者中的症状缓解速度的方法，其包括向该受试者施用：n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)：或其药学上可接受的盐；或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)：或其药学上可接受的盐。6.一种用于减少受试者经历的痛风发作的持续时间或强度的方法，其包括向该受试者施用：n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)：
或其药学上可接受的盐；或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)：或其药学上可接受的盐。7.一种预防或降低痛风发作的发生率的方法，其包括向有需要的受试者施用：n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)：或其药学上可接受的盐；或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)：或其药学上可接受的盐。8.一种预防或降低与痛风疗法相关的痛风发作的发生率的方法，其包括向正在接受痛风治疗的受试者施用治疗量的：n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)：
或其药学上可接受的盐；或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)：或其药学上可接受的盐。9.根据实施方式8所述的方法，其中痛风疗法包括用黄嘌呤氧化酶抑制剂、urat1抑制剂、排尿酸剂、尿酸氧化酶、pnp抑制剂、sglt2抑制剂或其组合进行的治疗。10.根据实施方式8所述的方法，其中所述痛风疗法选自别嘌呤醇、非布司他、尿酸酶、聚乙二醇化尿酸酶、拉布立酶、丙磺舒、磺吡酮、苯溴马隆、非诺贝特、雷西那德、zurampic、verinurad、阿洛芬酯、口服布西拉明或其组合。11.一种治疗急性痛风发作的方法，其包括向有需要的受试者同时地或顺序地施用以下组合：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。12.一种预防痛风发作的方法，其包括向有需要的受试者同时地或顺序地施用以下组合：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。13.一种预防和治疗受试者中的痛风发作的方法，其包括向有需要的受试者同时地或顺序地施用以下组合：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。14.根据实施方式13所述的方法，其中所述受试者是成年的。15.根据实施方式11-14中任一项所述的方法，其中所述组合是协同组合。16.根据实施方式11-15中任一项所述的方法，其中所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)：
或其药学上可接受的盐；或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)：或其药学上可接受的盐。17.根据实施方式11-16中任一项所述的方法，其包括施用少于1.2mg的秋水仙碱。18.根据实施方式11-16中任一项所述的方法，其包括施用少于0.6mg的秋水仙碱。19.一种改善秋水仙碱在受试者中的治疗指数的方法，其包括同时地或顺序地向该受试者施用cxcr-2抑制剂。20.一种药物组合物，其包含：(i)秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。21.一种药物组合物，其包含：(i)治疗有效量的秋水仙碱；和(ii)治疗有效量的cxcr-2抑制剂。22.根据实施方式20或21所述的药物组合物，其具有固定剂量组合。23.根据实施方式20或21所述的药物组合物，其包含：(i)约0.1mg至约0.5mg的秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。24.根据实施方式20或21所述的药物组合物，其包含：(i)少于0.5mg的秋水仙碱；和(ii)cxcr-2抑制剂。25.根据实施方式20-24中任一项所述的药物组合物，其进一步包含药学上可接受的稀释剂或载体。26.根据实施方式20-25中任一项所述的药物组合物，其中所述cxcr-2抑制剂是n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)：
或其药学上可接受的盐；或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)：或其药学上可接受的盐。27.一种用于治疗经历痛风发作的受试者的试剂盒，其包含：i)n-(2-((2,3-二氟苄基)硫基)-6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)嘧啶-4-基)氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物3)：或其药学上可接受的盐；或者n-(6-(((2r,3s)-3,4-二羟基丁-2-基)氧基)-2-((4-氟苄基)硫基)嘧啶-4-基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-磺酰胺(化合物4)：或其药学上可接受的盐；和ii)关于施用化合物3或化合物4以治疗痛风发作的说明书。28.根据实施方式27所述的试剂盒，其进一步包含秋水仙碱。
实施例
106.以下实施例进一步说明了本发明，但绝不应解释为限制其范围。具体而言，加工条件仅为示例性的，并且本领域普通技术人员可容易地对其进行改变。
107.除非本文另有说明或上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法均可以适当的顺序进行。除非另有声明，否则本文提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“如”)的使用仅旨在更好地说明本发明，而不是对本发明的范围进行限制。除非另有定义，否则本文使用的技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的含义相同的含义。
108.本文描述了本发明的实施方案。在阅读以上描述后，这些实施方案的变化对于本领域普通技术人员而言可能是显而易见的。发明人预期熟练的技术人员将适当地采用这类变化，并且发明人意在使本发明以不同于本文所具体描述的方式实施。因此，本发明包括本文所述主题的所有修改和等同物。此外，除非本文另有说明或上下文明显矛盾，否则本发明涵盖上述元素的所有可能变化的任何组合。实施例1：测试化合物
109.在晶体诱发的关节病的疾病模型中测试单独的或与秋水仙碱组合的化合物1、2、3和4。
110.秋水仙碱从sigma aldrich获得。化合物1、2、3和4显示出抑制cxcr-2(参见dwyer&
yu,expert opin.ther.patents(2014),24(5),519)。化合物1先前已有描述(参见例如wo 2009/039091)，并且从r&d systems获得。化合物2先前已有描述(参见例如wo 2009/073683)，并且从medchem express获得。化合物3先前已有描述，并如美国专利号8,748,603所示进行制备。化合物4如方案1(下文)和美国专利8,735,413所示进行制备。方案1实施例2：细胞迁移试验(体外炎症)
111.实施例2a：从leukopack分离单核细胞
112.从来自正常供体的外周血的淋巴细胞层(血沉棕黄层)获得原代血液单核细胞(pbmc)。用等体积的pbs稀释每个leukopack(interstate blood bank)，并将35ml血液制品覆盖在15ml ficoll-paque
tm plus(ge healthcare bio-sciences)上。将管在室温下以700x g不间断地离心30分钟。
113.将血沉棕黄层界面取出，添加至pbs(40ml)中，并以300x g离心。通过在室温下将细胞在红细胞裂解缓冲液(10ml，r&d systems)中温育10分钟来使细胞沉淀物中任何剩余的红细胞裂解。裂解后，添加pbs(40ml)，并使细胞以200x g离心5分钟。将沉淀物用pbs洗涤一次，并重悬浮于完全rpmi中，并接种至bd falcon
tm 100mm组织培养皿(目录号353003)上。一小时后，吸出培养基，并使用细胞刮刀收获贴壁细胞(主要是单核细胞)，并在趋化性试验中使用。
114.实施例2b：趋化性试验
115.在带有hfn涂覆的具有3μm孔的bd falcon fluoroblok multiwell插件(目录号351161或351162)的48孔板中测定趋化性。简言之，将新鲜分离的单核细胞以2x106个细胞/ml的密度重悬浮于趋化性测定缓冲液(补充有0.1％bsa的hbss)中。用1.0μm钙黄绿素am将细胞在37℃、5％co2下标记40分钟。温育后，将细胞洗涤一次，并以2.0x106个细胞/ml的密度重悬浮于测定缓冲液中。将标记的细胞悬浮液添加至插件(250μl/孔)上并静置。在单独的bd falcon
tm 48孔平底板中添加化合物1或化合物2(750μl，10mμ)。将含有细胞的多孔插件轻轻下降到含有化学引诱剂的平板中，并立即置于底部荧光读板器中。在不同的时间点测量从已迁移到插件的底部表面的细胞发出的荧光。在485/530nm(ex/em)波长处读取用钙黄绿素am标记的细胞。
116.使用尿酸单钠晶体条件培养基。使用10μm的化合物1。使用10μm的化合物2。
117.实施例2c：结果
118.在图1a中以图形呈现嗜中性粒细胞计数，其显示化合物1和化合物2提供对嗜中性粒细胞(在msu条件培养基中)迁移的显著抑制。在图1b中以图形呈现pbmc计数，其显示化合物1和2提供对pbmc迁移的显著抑制。实施例3：用于晶体诱发的关节病的大鼠气囊模型的通用程序
119.实施例3a：试剂的制备
120.尿酸单钠(msu)：将氢氧化钠(40g，fisher scientific)溶解于去离子水(100ml，dh2o)中，得到10n溶液。将尿酸(16g，sigma)添加至含有氢氧化钠溶液(11.8ml，10n)的去离子水(3400ml)中，并在持续搅拌下加热至60℃。用10n氢氧化钠溶液将ph调节至8.9。将得到的澄清溶液冷却至4-8℃，形成晶体，将晶体通过过滤分离，用去离子水(1l)洗涤三次，并在37℃下干燥。将干燥的尿酸单钠晶体筛分至气密容器中储存。将尿酸单钠(10g)悬浮于无菌盐水(1l，0.9％，usp，hospira)中用于注射，并置于搅拌板上以维持恒定的10mg/ml均匀悬浮液。
121.媒介物：将甲基纤维素(0.4g，sigma)溶解于去离子水(100ml)中，得到0.4％溶液，用作媒介物。
122.秋水仙碱：将秋水仙碱(7mg，sigma)溶解于无菌盐水(7ml)中，得到1mg/ml溶液。
123.肝素化盐水：通过将肝素(0.4ml，10,000u/ml，app pharmaceuticals)添加至无菌氯化钠溶液(400ml，0.9％)中来制备肝素化盐水(10u/ml)。
124.测试化合物：将测试化合物悬浮在媒介物中以提供所需浓度，并相应地进行稀释。例如，将测试化合物(102.5mg)悬浮于媒介物(3.417ml)中，得到30mg/ml悬浮液。将0.3ml的30mg/ml悬浮液添加至媒介物(2.7ml)中，得到3mg/ml悬浮液。将0.3ml的3mg/ml悬浮液添加至媒介物(2.7ml)中，得到0.3mg/ml悬浮液。
125.实施例3b：大鼠
126.接收雄性sprague-dawley大鼠(charles river laboratories，160-180g)，单独检查，并关在笼中，每笼5只大鼠。这些动物的健康状况良好，没有疾病或疼痛的临床体症。将大鼠隔离，每天进行检查，制作耳标以用于标识目的，并剃除颈背部的毛发。
127.第0天：将大鼠麻醉(异氟烷)，用70％异丙醇(butler animal health supply)清洗颈背部，然后用聚维酮-碘溶液(ricca chemical co.)清洗。使用固定在30ml注射器上的23g x 11/2英寸针头皮下注射无菌空气(30ml，0.2μm，millipore)。使大鼠回到日常住所，未观察到不良反应。
128.第3天：将大鼠麻醉(异氟烷)，用70％异丙醇(butler animal health supply)清洗颈背部，然后用聚维酮-碘溶液(ricca chemical co.)清洗。使用固定在20ml注射器上的23g x 11/2英寸针头皮下注射无菌空气(15ml，0.11μm，millipore)。使大鼠回到日常住所，未观察到不良反应。
129.将大鼠称重并基于平均体重分成治疗组。
130.在适当时，向大鼠经口给予测试化合物或媒介物(仅盐水)。
131.在适当时，向大鼠皮下注射秋水仙碱(1ml/kg)。
132.在适当时，向大鼠给予测试化合物(经口施用)联合秋水仙碱(皮下注射)。
133.皮下注射后30分钟或经口给药后2小时，使用装配到20ml注射器上的18g x 2英寸
针头将msu(15ml)注入气囊中。向对照组注射15ml无菌盐水(媒介物)。将注射部位闭合(火棉胶，macron)，并使大鼠返回笼中，未观察到不良反应。
134.实施例3c：样品
135.在注射msu/盐水后4小时，将大鼠麻醉，并将肝素化盐水(5ml，10u/ml)注入气囊中。轻轻按摩气囊，使用装配到6ml注射器上的14g x 1英寸针头立即取出内容物，并记录渗出液体积。将一份渗出液转移到绿色eppendorf管中用于测量总白细胞(wbc)。在使msu晶体沉积10分钟后，将一份渗出液转移至肝素化微量管(becton dickinson)中用于白细胞分类计数。对剩余的渗出液进行离心，并将一份上清液分配到标记的透明eppendorf管中，并在-80℃下储存。将大鼠放血至预冷的血清分离管中，将其加工成血清，并将0.5ml等分试样在标记的eppendorf管中在-80℃下储存。实施例4：在大鼠气囊模型中的化合物2
136.根据实施例2中描述的方案测试化合物2。使用60只大鼠，分成6组，每组10只，如下：*roa＝施用途径-经口(po)或者皮下注射(sc)
137.结果——平均渗出液体积(图2a)、总白细胞计数(图2b)和嗜中性粒细胞计数(图2c)在下表中提供并在图2中示出。2c)在下表中提供并在图2中示出。p-检验：***＝p《0.001；**＝p《0.05；*＝p《0.01
实施例5：在大鼠气囊模型中的化合物2联合秋水仙碱
138.根据实施例2中描述的方案，在存在和不存在秋水仙碱的情况下，以各种剂量测试化合物2。使用90只大鼠，分成9组，每组10只，如下：化合物2。使用90只大鼠，分成9组，每组10只，如下：
139.结果——平均渗出液体积(图3a)、总白细胞计数(图3b)和嗜中性粒细胞计数(图3c)在下表中提供并在图3中示出。
实施例6：在大鼠气囊模型中的化合物2、化合物3和化合物4
140.根据实施例2中描述的方案测试化合物2、3和4。使用100只大鼠，分成10组，每组10只，如下：只，如下：
141.结果——平均渗出液体积(图4a)、总白细胞计数(图4b)和嗜中性粒细胞计数(图4c)在下表中提供并在图4中示出。
实施例7：在大鼠气囊模型中的化合物3和化合物4联合秋水仙碱
142.根据实施例2中描述的方案，在存在和不存在秋水仙碱的情况下，以各种剂量测试化合物3和4。使用100只大鼠，分成10组，每组10只，如下：
143.结果——平均渗出液体积(图5a)、总白细胞计数(图5b)和嗜中性粒细胞计数(图5c)在下表中提供并在图5中示出。
实施例8：在大鼠气囊模型中的化合物3联合秋水仙碱
144.根据实施例2中描述的方案，在存在和不存在秋水仙碱的情况下，以各种剂量测试化合物3。使用100只大鼠，分成10组，每组10只，如下：
145.结果——平均渗出液体积(图6a)、总白细胞计数(图6b)和嗜中性粒细胞计数(图6c)在下表中提供并在图6中示出(第1、2、3、6和10组)。
实施例9：在大鼠气囊模型中的化合物4联合秋水仙碱
146.根据实施例2中描述的方案，在存在和不存在秋水仙碱的情况下，以各种剂量测试化合物4。使用100只大鼠，分成10组，每组10只，如下：化合物4。使用100只大鼠，分成10组，每组10只，如下：
147.结果——平均渗出液体积(图7a)、总白细胞计数(图7b)和嗜中性粒细胞计数(图7c)在下表中提供并在图7中示出(第1、2、3、6和10组)。
实施例10：在治疗模型模型中的化合物3和化合物4联合秋水仙碱
148.根据实施例2中描述的方案，在存在和不存在秋水仙碱的情况下以各种剂量测试化合物3和4。使用140只大鼠，分成14组，每组10只，如下：
149.结果——平均渗出液体积(图8a)、总白细胞计数(图8b)和嗜中性粒细胞计数(图8c)在下表中提供并在图8中示出(第1、2、3、6、9、11和14组)。