黄色当归醇和/或4-羟基德里辛在制备预防和治疗慢性萎缩性胃炎、胃癌药物中的应用的制作方法

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及黄色当归醇（xanthoangelol）和/或4-羟基德里辛（4-hydroxyderricin）在临床制备预防和治疗慢性萎缩性胃炎、胃癌中的应用。


背景技术：

2.癌症仍然是全球健康负担，其中，胃癌的发病率和致死率居高不下。从正常的胃组织发展成为胃癌要经过浅表性胃炎-慢性萎缩性胃炎-肠化生-不典型增生-胃癌几个阶段，但是针对慢性萎缩性胃炎和胃癌的临床用药极为匮乏。慢性萎缩性胃炎大多数是由于感染幽门螺杆菌引起的，目前，世界范围内还没有有效的治疗慢性萎缩性胃炎的药物。因此，发现一种有效的治疗慢性萎缩性胃炎和胃癌的药物对于预防和治疗胃癌，提高病人生存期具有重要的意义，将惠及全球。
3.病人来源的移植瘤模型（pdx：patient derived xenograft）是将癌症病人的癌组织接种在免疫缺陷小鼠的皮下，用小鼠自身提供的微环境进行生长。pdx模型保持了原代肿瘤的特点，接近人类癌症，生物学稳定。自发性肿瘤通常比用试验方法诱发的肿瘤更接近人类肿瘤，更有利于将动物实验的结果推用到人类。pdx模型与利用人类癌细胞系建立的动物模型相比，减少了体外处理的过程，更好地保持了患者临床肿瘤组织的原有生物学特性和组织学特征，并且pdx 模型取材于不同的肿瘤患者，可以保留肿瘤的异质性，同时可以检测药物的抗癌效果，幽门螺旋杆菌感染和酒精共同作用可以诱导小鼠胃部产生慢性萎缩性胃炎和肿瘤，该模型可以用来模拟人类感染幽门螺旋杆菌后发生慢性萎缩性胃炎和胃癌的过程并检测药物是否能治疗慢性萎缩性胃炎和肿瘤。上述两种方法均符合癌症生物学治疗的基本原则，为研究肿瘤的发生和发展的机制提供了新的方法，更为癌症的精准治疗提供可能。
4.明日叶（angelica keiskei, ashitaba），又名“滨海当归”、“长寿芹”、“神仙草”、“还阳草”、“海峰人参”等，为当归属伞形花科（umbelliferae），多年生草本植物。原产于日本太平洋沿岸—伊豆、八丈诸岛。在日本，明日叶的研究始于 20 世纪 60 年代，90 年代末引入中国，目前在山东、云南、两广、海南、台湾等地区均有种植。已有的研究表明日本明日叶具有“五抗”、“四降”、“三改善”、“二预防”、“一提高”的作用，具体来说就是抗氧化、抗炎症、抗病毒、抗溃疡、抗肿瘤；降血压、降血脂、降血糖、降胆固醇；改善肠道功能、改善睡眠、改善视力；预防心血管疾病、预防糖尿病和提高免疫力。市面上关于明日叶的商品已经有代茶饮、精力汤粉、面条、查尔酮胶囊等。黄色当归醇（xanthoangelol）和/或4-羟基德里辛（4-hydroxyderricin）是明日叶中的常见提取物，但是目前尚未有关于两者在预防和治疗慢性萎缩性胃炎、胃癌的相关报道。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种日本明日叶中的提取物黄色当归
醇（xanthoangelol）和/或4-羟基德里辛（4-hydroxyderricin）在临床制备预防和治疗慢性萎缩性胃炎、胃癌药物中的应用。
6.为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：本发明提供了黄色当归醇和/或4-羟基德里辛在制备预防和治疗慢性萎缩性胃炎、胃癌药物中的应用，即黄色当归醇和/或4-羟基德里辛具有治疗慢性萎缩性胃炎和胃癌的作用。
7.黄色当归醇（xanthoangelol，分子式：c
25h28
o4，分子量：392.487，cas号62949-76-2）；4-羟基德里辛（4-hydroxyderricin，分子式：c
21h22
o4，分子量：338.397，cas号55912-03-3），结构式分别如下所示： 。
8.上述的应用中，黄色当归醇和/或4-羟基德里辛在scid小鼠体内的肿瘤治疗浓度为50 ~100 mg/kg体重。
9.本发明还提供了一种黄色当归醇和/或4-羟基德里辛与药学上可接受的载体或赋形剂复配制成具有预防和治疗慢性萎缩性胃炎、胃癌的复方制剂。
10.具体的，所述复方制剂可以为胶囊剂、口服液或片剂等。
11.进一步的，复方制剂中黄色当归醇和/或4-羟基德里辛的浓度为5 ~10mg/kg。即药物可以以5 ~10mg/kg的计量制成胶囊剂、口服液、片剂等，供患者饮用。
12.黄色当归醇和/或4-羟基德里辛也可以与其他抗癌和抗炎药物相结合，制成具有预防和治疗慢性萎缩性胃炎和胃癌作用的复方药物。
13.具体的，可以将本发明中的黄色当归醇和/或4-羟基德里辛与合适的药学上可接受的载体联用。这类药物组合物含有治疗有效量的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括但并不限于：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的黄色当归醇和/或4-羟基德里辛可以被制成溶液形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约5 ~10mg/kg体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。此外，本发明的黄色当归醇和/或4-羟基德里辛还可以与其他抗菌消炎制剂一起使用。
14.和现有技术相比，本发明具有如下有益效果：1）目前尚未曾见黄色当归醇和/或4-羟基德里辛用于临床预防和治疗慢性萎缩性胃炎和胃癌的相关报道；
2）本发明通过实验发现：黄色当归醇和/或4-羟基德里辛能够抑制小鼠模型的慢性萎缩性胃炎和胃癌进程，从而提出黄色当归醇和/或4-羟基德里在临床预防和治疗慢性萎缩性胃炎和胃癌中的潜在应用。通过本发明的相关实验可证明该药物可以用于临床预防和治疗慢性萎缩性胃炎和胃癌。
附图说明
15.图1为黄色当归醇、4-羟基德里辛在胃癌（编号：lwg9）pdx小鼠模型上的肿瘤生长治疗效果：其中，a为给药期间小鼠肿瘤体积变化趋势图；b为给药期间小鼠体重变化趋势图；c为对照组与给药组的肿瘤图片（与对照组相比，差异有统计学意义，*表示p《0.05，**表示p《0.01）；图2为日本明日叶保健胶囊在胃癌（编号：lwg16）pdx小鼠模型上的肿瘤生长治疗效果：其中，a为给药期间小鼠肿瘤体积变化趋势图；b为给药期间小鼠体重变化趋势图；c为对照组与给药组的肿瘤图片与对照组相比，差异有统计学意义，*表示p《0.05，**表示p《0.01）；图3为黄色当归醇、4-羟基德里辛在幽门螺杆菌和酒精诱导的小鼠胃癌进程中的苏木精-伊红染色（h&e）。
具体实施方式
16.下面结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围，本领域的技术人员根据上述发明内容作出的一些非本质改进和调整，均在本发明保护范围内。
17.实施例：材料与方法1材料1.1 肿瘤组织本发明使用了2例人胃癌组织标本（病人信息见表1）。2种模型编号分别为lwg9和 lwg16。
18.表1 本发明中使用的2例人胃癌组织标本的病人基本信息1.2实验动物本实施例中nod/scid免疫缺陷小鼠和cb57小鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司；许可证编号为：scxk(京)2012-0001，spf级，5-6周龄，体重18-20g。
19.小鼠饲料购于北京华阜生物科技股份有限公司。
20.实验动物饲养于中美（河南）荷美尔肿瘤研究院的动物设施内，在恒温（25-27℃）、恒湿（45%-50%）、新鲜空气、除尘除菌的无特殊病原菌（spf级）饲养条件下饲养，动物先放于有机塑料盒内（苏州市冯氏实验动物设备有限公司），再置于ivc系统饲养，每个饲养盒内饲
养6只动物，经无菌处理的饲料供动物自由摄入，高温消毒的垫料每三天更换一次，笼具及饮水每三天紫外线消毒一次，饮用无菌蒸馏水。更换饲养用品时严格遵循无菌原则操作。将实验动物在12:12小时光照/黑暗循环下饲养，可以自由接近食物和水，室温控制在25℃。
21.1.3 试剂配制4%戊巴比妥钠（国药集团化学试剂有限公司）：称量0.2g戊巴比妥钠溶解于50ml无菌蒸馏水中过滤；双抗：青霉素和链霉素（华北制药股份有限公司），两者浓度为500u/ml；生理盐水500ml一瓶（辰欣药业股份有限公司）；黄色当归醇、4-羟基德里辛从mce公司购买获得。
22.1.4仪器与器材：海尔医用低温保存箱（青岛海尔特种电器有限公司）；电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；thermo 超净工作台 ；ivc系统（苏州市冯氏实验动物设备有限公司）；眼科剪，手术镊，无菌培养皿，手术刀，溶药针，1ml注射器。
23.2. 人胃癌免疫缺陷鼠种植瘤模型的建立将新鲜的胃癌病人的肿瘤组织取出坏死组织，剪成直径为3立方毫米左右，塞入6周龄、18g左右的雌性小鼠的背部皮下。将小鼠放入小鼠ivc系统饲养。等待肿瘤形成约15mm3左右，无菌切除皮下肿瘤，选择实性肿块，取材剪成3mm3小块，移植于另外小鼠。颈椎脱臼处死小鼠，肿瘤周围皮肤用75%酒精消毒。用溶药针扎开一个小口，用镊子撑开后取出肿瘤放到小鼠皮下。
24.用上述方法进行肿瘤传代，至第三代小鼠，小鼠皮下移植瘤均出现且肿瘤大小差异不大。再移植至免疫缺陷小鼠皮下，传三代。
25.分别记录每一次皮下移植瘤小鼠肿瘤生长情况及成瘤率，皮下移植瘤等待肿瘤长到1.5mm时，取第四代小鼠皮下移植瘤标本，将组织用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片he染色。
26.3. 幽门螺旋杆菌联合酒精诱导小鼠胃癌模型的建立3.1 以5 g/kg的酒精剂量饲喂小鼠12周。
27.3.2将幽门螺杆菌以10
9 cfu 定植于小鼠胃部，共三次。
28.3.3以5 g/kg的酒精剂量饲喂小鼠36周。
29.4.实验动物的胃癌治疗研究4.1定植一周或者两周后，小鼠背部肿瘤结节长到200 mm3左右时开始分组，即按照肿瘤体积大小均匀分配小鼠至每组，每组10只。每组小鼠分别按照以下剂量自由饮水。当对照组小鼠肿瘤长到1500 mm3左右时，终止实验，取下背部皮下肿瘤并称重。
30.a. 对照组：饮用无菌蒸馏水；b. 黄色当归醇低剂量组：每天以50mg/kg小鼠体重灌胃黄色当归醇；c. 黄色当归醇高剂量组：每天以100mg/kg 小鼠体重灌胃黄色当归醇；d. 4-羟基德里辛低剂量组：每天以50mg/kg 小鼠体重灌胃4-羟基德里辛；e. 4-羟基德里辛高剂量组：每天以100mg/kg 小鼠体重灌胃4-羟基德里辛。
31.f. 明日叶保健胶囊（swanson，sw1086）组：每天以50mg/kg 小鼠体重灌胃胶囊内含物。
32.4.2 每周两次记录小鼠体重以及肿瘤体积。
33.4.3 当对照组小鼠肿瘤体积大于1000mm3左右（约40天），终止实验，取出肿瘤组织，称量肿瘤重量以及拍照。
34.5 实验动物的慢性萎缩性胃炎和胃癌的治疗研究5.1 待造模48周后用黄色当归醇和4-羟基德里辛每天以50mg/kg 小鼠体重灌胃。
35.5.2 灌胃一个月后终止试验，取出小鼠胃部组织，进行苏木精-伊红染色（h&e）。
36.实验结果图1为黄色当归醇和4-羟基德里辛在胃癌pdx小鼠模型上的肿瘤生长治疗效果。如图1中a所示，黄色当归醇和4-羟基德里辛的低剂量（50mg/kg）与高剂量（100mg/kg）组在给药第32天起小鼠肿瘤体积较对照组有显著差异p《0.05。如图1中b所示，对照组与给药组相比，小鼠体重没有显著性差异。图1中c中可以看出，与对照组相比，给药组的肿瘤生长得到明显抑制。由此得出，黄色当归醇和4-羟基德里辛的低剂量与高剂量在胃癌（编号：lwg9）pdx小鼠模型上的肿瘤生长治疗效果很显著。
37.图2为明日叶保健胶囊在胃癌pdx小鼠模型上的肿瘤生长治疗效果。如图2中a所示，明日叶保健胶囊组在给药25天后能显著抑制小鼠肿瘤的生长，与对照组相比，具有显著性差异（p《0.01）。图2中b中可以看出，明日叶保健胶囊组与对照组相比体重无显著变化。图2中c为小鼠肿瘤图片。由此得出，明日叶保健胶囊在胃癌（编号：lwg16）pdx小鼠模型上有显著的肿瘤治疗效果。
38.图3为黄色当归醇和4-羟基德里辛在幽门螺杆菌联合酒精诱导慢性萎缩性胃炎和胃癌中的治疗效果。如图3所示，与正常对照相比，酒精组发展成为萎缩性胃炎，酒精联合幽门螺杆菌组出现了胃腺瘤，黄色当归醇和4-羟基德里辛处理后，酒精组和酒精联合幽门螺杆菌组的胃部组织与正常组织的形态学和病理学一致。由此得出，黄色当归醇和4-羟基德里辛处理能够阻断由慢性萎缩性胃炎发展成胃癌的过程。
39.虽然有报道明日叶具有抗炎和抗肿瘤的作用，但未有研究表明明日叶中的提取物黄色当归醇和4-羟基德里辛及明日叶保健胶囊在治疗慢性萎缩性胃炎和胃癌中有效果。本发明的主要创新点在于使用了人源性异种移植模型和幽门螺杆菌联合酒精诱导的小鼠胃癌模型。上述两种模型保留了固有的基因和表型，是一种更接近人体肿瘤发生、发展过程的模型，对个体化治疗非常有意义的模型。本发明使用了两例pdx模型表明黄色当归醇和4-羟基德里辛及明日叶保健胶囊在治疗胃癌中有效果，同时使用幽门螺杆菌联合酒精诱导的小鼠胃癌模型表明黄色当归醇和4-羟基德里辛能治疗慢性萎缩性胃炎并阻断胃癌进程，揭示其潜在的临床预防和治疗慢性萎缩性胃炎和胃癌中的应用价值。