TBL1XR1在肝脏疾病的治疗及肝脏再生中的应用

本发明涉及tbl1xr1在肝脏疾病的治疗及肝脏再生中的应用。

背景技术：

1、在我国，有超过三分之一的人口罹患不同种类的肝脏疾病，包括各种病毒性肝炎、非酒精和酒精性脂肪肝、药物损害等引起的肝纤维化，外源性刺激的长期存在会促发病灶恶化为肝硬化、肝癌等，具有很高的致死率，病程发展至终末期只能通过肝移植来治疗。而器官供体的数目往往十分有限，能接受移植手术的患者百中无一，且术后也有大量潜在预后问题，如长期使用免疫抑制剂造成的副作用等。

2、幸运的是肝脏自身即具有极强再生能力，但在正常肝脏中，细胞周转相对缓慢。而在损伤条件下，肝门静脉区域肝细胞会经历重编程状态转化为肝脏干细胞类似细胞(lpsc)，进入细胞增殖周期，进而完成损伤处的修复。通过外科手术切除了中部和左侧肝叶(相当于减少了70％的肝重量)的小鼠，短短一周内，其肝脏便经过三个阶段完成了再生，这三个阶段包括：(1)起始阶段(也称为启动阶段)，这一阶段肝细胞暴露在外周血循环中，接受了超出平常多倍的细胞因子的信号刺激，肝脏激活一系列完整的损伤反应基因和细胞因子网络，诱导增殖性反应；(2)增殖阶段，此时完全激活的肝脏再生细胞进入细胞周期补充肝脏质量及数目；(3)终止阶段，以tgfβ为首的细胞因子带领细胞退出细胞周期重新进入静息状态。完成再生过程后，肝脏就恢复了相当高的工作能力。

3、肝脏再生是涵盖众多不同的肝内和肝外细胞成分和大量信号分子在损伤或者特定微环境中的复杂且受到精密调节的相互作用，并且具有时序性。在各种促增殖因子和增殖抑制因子的调控下，肝脏启动再生并及时终止再生，实现肝再生调控点对维持机体稳态的重要意义。在如此复杂的再生调控网络中，找到内源性调控肝脏再生的因子，验证其是否为合适的治疗肝损伤靶标，仍然是肝再生领域亟待解决的科学问题。

4、先前的研究证实在卵巢癌、鼻咽癌、肺鳞状细胞癌、结外淋巴瘤中，tbl1xr1基因变异和高拷贝数与恶性肿瘤高度相关，tbl1xr1高表达状态下的肿瘤细胞增殖、迁移能力均增强。以往的研究表明tbl1xr1与tbl1基因高度同源，两者都包含f-box/wd-40重复序列，这是与维甲酸和甲状腺激素受体(smrt)以及核受体抑制因子n-cor阻遏复合物结合的关键位点，其与n-cor/smart介导了非配体核受体的转录抑制。tbl1xr1还作为e3泛素连接酶，招募ubch5泛素结合酶/19s蛋白酶体，随后以配体依赖的方式用辅助激活因子取代辅助抑制因子。tbl1xr1在调控多种信号通路(wnt/β-catenin、notch、nf-κb、核受体)和基因转录中起关键作用，可影响细胞生长、抗凋亡、抗炎症反应以及调节基因转录。

5、有研究发现，肝脏转录辅助因子tbl1/tblr1通过核受体过氧化物酶体增殖物激活受体α(pparα)调控肝脏脂质代谢，tbl1/tblr1活性的缺乏可导致肝脏脂肪变性和高甘油三酯血症。但是具体关于与tbl1和tblr1高度同源的tbl1xr1在肝脏其它疾病中的研究尚未展开和深入。

6、腺相关病毒(aav)可被宿主细胞表面的糖基化受体识别，通过网格蛋白介导的内吞进入细胞内，其遗传物质在细胞核内完成复制和转录。1995年，terence r.flotte等第一次使用aav作为基因治疗载体，通过aav2将正常cftr基因转导到遗传性囊性纤维化病人的病变气管表皮内，展示了aav在人体临床实验上的安全性。2014年欧盟批准了应用于脂蛋白酯酶缺乏(lipoprotein lipase deficiency，lpld)的基因治疗药物glybera(通用名alipogene tiparvovec)，glybera将功能性lpld基因包裹进aav，注射入患者的骨骼肌，通过一次性治疗，可长期显著降低急性胰腺炎的发病率。时隔3年，fda于2017年批准了luxturna(aav2)，用于治疗由rpe65基因突变导致的遗传性视网膜疾病。luxturna将rpe65包裹进aav2，注射进患者的眼睛。2019年5月，美国fda批获了用于治疗脊柱肌肉萎缩的基因治疗药物zolgensma。zolgensma将正常表达smn蛋白的转基因装进aav9病毒载体，通过一次治疗可让患者的细胞重新开始生成smn蛋白，从而缓解sma症状。随着aav治疗效果的有效性和安全性得到证实，在临床上越来越多的将其运用到各种疾病的治疗上，临床前期实验的治疗效果更是能为其应用打下基础。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术的不足，成功在小鼠体内建立了70％肝脏切除术造成的严重肝损伤模型，率先运用aav8型肝脏特异性亲和病毒，来发掘tbl1xr1在肝脏疾病和肝再生领域的潜在医学价值。

2、具体而言，本发明第一方面提供促进tbl1xr1基因的表达和/或提高tbl1xr1蛋白的活性的试剂在制备促进对象肝再生的药物中的应用。

3、在一个或多个实施方案中，所述促进tbl1xr1基因的表达的试剂为含tbl1xr1基因的表达载体，用于在靶细胞或靶组织内过表达tbl1xr1 mrna或蛋白质。

4、在一个或多个实施方案中，所述表达载体为利用aav8载体构建得到的表达载体。

5、在一个或多个实施方案中，所述对象是实施了肝切除术的患者。

6、在一个或多个实施方案中，所述对象是肝病患者。

7、在一个或多个实施方案中，所述对象是肝肿瘤、肝外伤、肝脓肿、肝内胆管结石或肝囊肿患者。

8、在一个或多个实施方案中，所述对象是肝移植患者。

9、本发明第二方面提供抑制tbl1xr1基因的表达和/或抑制tbl1xr1蛋白的活性的试剂在制备治疗或预防tbl1xr1介导的疾病的药物中的应用。

10、在一个或多个实施方案中，所述试剂为tbl1xr1蛋白的抗体或其抗原结合片段。

11、在一个或多个实施方案中，所述抗体为人源抗体，更优选为单克隆抗体。

12、在一个或多个实施方案中，所述试剂为表达抑制tbl1xr1基因表达的核酸分子，或含有所述核酸分子的表达载体。

13、在一个或多个实施方案中，所述核酸分子选自sirna、反义rna和核酶的编码序列。

14、在一个或多个实施方案中，所述表达载体为基因编辑载体。

15、在一个或多个实施方案中，所述表达载体为使用aav8构建的表达载体。

16、在一个或多个实施方案中，所述tbl1xr1介导的疾病选自：肝癌、前列腺癌、卵巢癌、肺鳞状细胞癌、乳腺癌、宫颈癌、鼻咽癌、食管鳞状细胞癌、胃癌、结肠癌、大肠癌、结外淋巴瘤和急性白血病；优选地，所述疾病为肝癌。

17、本发明第三方面提供一种促进对象肝细胞或肝组织再生的方法，所述方法包括使用能促进tbl1xr1基因的表达和/或提高tbl1xr1蛋白活性的试剂处理肝细胞或肝组织的步骤。

18、在一个或多个实施方案中，所述试剂为含tbl1xr1基因的表达载体，用于在靶细胞或靶组织内过表达tbl1xr1 mrna或蛋白质；优选地，所述表达载体为利用aav8载体构建得到的表达载体。

19、在一个或多个实施方案中，所述方法为体外方法。

20、在一个或多个实施方案中，所述对象为实施了肝切除术的患者。

21、在一个或多个实施方案中，所述对象是肝病患者。

22、在一个或多个实施方案中，所述对象是肝肿瘤、肝外伤、肝脓肿、肝内胆管结石或肝囊肿患者。

23、在一个或多个实施方案中，所述方法包括在实施肝切除术之前、同时和/或之后给予所述试剂。

24、本发明第四方面还提供一种药物组合物，所述药物组合物含有本文所述的以tbl1xr1蛋白或基因为靶点、抑制tbl1xr1基因表达或降低tbl1xr1蛋白活性的试剂，或以其为靶点促进该基因的表达或提高该蛋白的活性的试剂，和生理学或药学上可接受的载体或赋形剂。

25、本发明第五方面提供一种构建肝再生动物模型的方法，所述方法包括对动物实施肝切除术之前、同时和/或之后给予有效量的能促进tbl1xr1基因的表达和/或提高tbl1xr1蛋白的活性的试剂。

26、在一个或多个实施方案中，所述促进tbl1xr1基因的表达的试剂为含tbl1xr1基因的表达载体，用于在靶细胞或靶组织内过表达tbl1xr1 mrna或蛋白质。

27、在一个或多个实施方案中，所述表达载体为利用aav8载体构建得到的表达载体。

28、本发明第六方面提供促进tbl1xr1基因的表达和/或提高tbl1xr1蛋白的活性的试剂和抑制tbl1xr1基因的表达和/或抑制tbl1xr1蛋白的活性的试剂在制备治疗患者肝脏疾病的药物或药盒中的应用。

29、在一个或多个实施方案中，所述治疗包括：给予患者所述抑制tbl1xr1基因的表达和/或抑制tbl1xr1蛋白的活性的试剂，以抑制患病肝细胞的生长或杀灭患病的肝细胞，然后实施肝切除术，切除患病肝组织，之后给予所述促进tbl1xr1基因的表达和/或提高tbl1xr1蛋白的活性的试剂，促进正常肝细胞的再生和肝组织修复。

30、在一个或多个实施方案中，所述肝脏疾病为肝癌。