N-乙酰半胱氨酸、2-羟丙基-β-环糊精或开环葫芦脲在预防或治疗痛风方面的用途

n-乙酰半胱氨酸、2-羟丙基-β-环糊精或开环葫芦脲在预防或治疗痛风方面的用途
技术领域
1.本发明涉及药学领域，具体涉及n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精或开环葫芦脲在痛风性关节炎预防或治疗方面的新用途。


背景技术：

2.痛风是由于嘌呤代谢紊乱和(或)尿酸排出减少，血尿酸增高，导致尿酸钠晶体(msu)沉积在结缔组织，关节囊、滑囊、软骨等组织中而引发的自限性炎症性疾病，临床常表现为四肢关节反复红、肿、热、痛和严重关节畸形，甚至伴有痛风性肾病等并发症。1990—2017年，全球痛风标准患病率约为7.9
‰
，我国痛风患病率约为1.1％；同时，痛风的患病率存在地区和性别的差异，近年来患病情况有渐趋上升趋势,致使许多学者越来越重视痛风的治疗研究。已有的对痛风性炎症潜在机制的研究主要集中在nlrp3炎性小体的活化和细胞因子的释放，例如il-1β、il-6和tnf-α。临床上现有的治疗痛风的方法通常以缓解急性关节炎的发作，防止复发，纠正高尿酸血症，防止尿酸盐沉积引起的并发症为主要目的。在急性关节炎发作时，主要是消除尿酸盐诱发的炎症反应，推荐的治疗方案有非甾体类抗炎药(nsaids),秋水仙碱和糖皮质激素，这些药物的作用机制都是直接抑制已发生的炎症反应，没有从根本上消除引起炎症的原因。在疾病的缓解及防止痛风复发方面，别嘌呤醇、立加利仙、非布司他、丙磺舒等有一定的疗效，这些药物主要作用是抑制尿酸合成或者促进尿酸的排泄，但是，都没有对已经产生的msu晶体起到抑制作用，同时，在应用的过程中都具有明显的副作用。


技术实现要素：

3.针对上述现有的技术，本发明通过建立尿酸钠晶体的制备方法，研究不同物化特性的尿酸钠晶体的致病机理，基于其致病机理提出了三种化合物n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精(h-β-cd)或开环葫芦脲在预防或治疗痛风中的新用途。
4.本发明的技术方案：
5.n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精(h-β-cd)或开环葫芦脲在预防或治疗痛风的药物中的用途。
6.n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精或开环葫芦脲的结构式如下：
[0007][0008]
进一步的，痛风为急性痛风性关节炎。
[0009]
进一步的，n-乙酰半胱氨酸(nac)作为一种抗氧化剂，能够起到预防痛风发生的作用，使用nac之后明显抑制了msu晶体引起的ros的产生，减弱 nlrp3炎性小体的活化，抑制巨噬细胞细胞因子il-1β的释放；使用小鼠急性关节炎模型证明，nac在体内同样能够抑制msu晶体引起的抑炎性细胞(嗜中性粒细胞)的浸润。
[0010]
所述nac进行的细胞实验使用的细胞是pma诱导的人巨噬细胞系thp-1，细胞的浓度是10-25mm，提前处理细胞30-60min。在小鼠急性痛风性关节炎模型中，nac提前1h腹腔注射到小鼠体内，使用的剂量是320mg/kg。
[0011]
进一步的，2-羟丙基-β-环糊精是一类β-环糊精的羟烷基化衍生物，能够起到预防或治疗痛风的作用。2-羟丙基-β-环糊精能够抑制msu晶体引起的ros的产生，减弱nlrp3炎性小体的活化，抑制细胞因子il-1β的分泌同时，使用小鼠急性关节炎模型证明，2-羟丙基-β-环糊精在体内能够抑制炎性细胞(嗜中性粒细胞)的浸润，起到预防痛风的作用。
[0012]
进一步的，2-羟丙基-β-环糊精进行的细胞实验使用的细胞是pma诱导的人巨噬细胞系thp-1和小鼠巨噬细胞系j774a.1，2-羟丙基-β-环糊精的使用浓度是 1-3mm，可以与msu同时处理细胞24h。使用3mm 2-羟丙基-β-环糊精抑制ros 的产生是通过抑制nadph氧化酶的作用产生的，进一步抑制了线粒体ros的产生。2-羟丙基-β-环糊精和msu混匀之后同时注射到体内。
[0013]
进一步的，葫芦脲是一类具有出色主客体结合性能的大环主体分子。开环葫芦脲是闭环葫芦脲的类似物，具备同样优秀的主客体结合性能，对尿酸分子具有优秀的结合能力。使用小鼠急性关节炎模型证明，开环葫芦脲能够抑制炎性细胞 (嗜中性粒细胞)的浸润和细胞因子il-1β的产生。300mg/kg开环葫芦脲和msu 混匀之后同时注射到体内，作用是促进msu晶体的溶解。
[0014]
本发明还提供一种大小和形状可控的尿酸钠晶体的制备方法，包括以下步骤：
[0015]
1)将氢氧化钾和尿酸完全溶解于去离子水中形成透明澄清溶液，搅拌均匀，所得溶液称为a溶液；
[0016]
2)将二水氯化钙、氯化钾和氯化钠完全溶解于去离子水形成透明澄清溶液，所得溶液称为b溶液；
[0017]
3)将b溶液以恒定的速率滴加到a溶液，形成混合溶液，不断搅拌保证混合过程的均匀；混合溶液在水浴中反应一定时间，离心，洗涤、干燥，得到尿酸盐晶体。
[0018]
进一步的，氢氧化钾与尿酸溶解于去离子水中的过程是在37℃的条件下进行搅拌，溶解的。
[0019]
进一步的，先将氢氧化钾完全溶解于去离子水形成透明澄清的氢氧化钾溶液，之后再加入一定量尿酸，搅拌均匀，所得溶液称为a溶液。本发明中a溶液制备过程中选择的氢氧化钾溶液，是用来溶解尿酸的，不可以选用氢氧化钠溶液作为a溶液。
[0020]
进一步的，本发明中氢氧化钾的浓度为50-70mm，尿酸的浓度为8-10mm。
[0021]
进一步的，将固体颗粒二水氯化钙、氯化钾和氯化钠完全溶解于去离子水中的过程是在37℃的条件下进行搅拌，溶解的。
[0022]
进一步的，本发明中的b溶液主要是调节钠离子的浓度，但是，必需是二水氯化钙、氯化钾和氯化钠三种盐的混合溶液，不能只有氯化钠。
[0023]
进一步的，所述的二水氯化钙、氯化钾和氯化钠的终浓度分别为2.5mm、 5mm和175mm-375mm。
[0024]
进一步的，步骤1)和步骤2)所述的a溶液和b溶液的ph值为7.4。
[0025]
进一步的，步骤1)所述的a溶液的ph值用盐酸来调节；步骤2)所述的 b溶液的ph值用氢氧化钠来调节。
[0026]
进一步的，步骤3)所述的a溶液和b液溶的体积比为a溶液(2-3):1。
[0027]
进一步的，，步骤3)所述的恒定的滴加速率为0.5ml/min。
[0028]
进一步的，步骤3)所述的a溶液和b溶液混匀时，所需的搅拌速率为 200-500rpm，搅拌温度为37℃，水浴时间为48h。
[0029]
利用氢氧化钾和尿酸的混合溶液作为a溶液，二水氯化钙、氯化钾和氯化钠的混合溶液作为b溶液，将两者按照一定的比例混合，通过水热合成的方法制备尿酸钠晶体，并通过控制b溶液中钠离子的浓度，进而调控尿酸钠晶体的大小和形状，得到不同物化特性的尿酸钠晶体。本发明方法操作简单，模拟生理条件下的温度，且反应产物能够被精确控制。
[0030]
不同物化特性的msu晶体能够影响msu晶体与细胞膜之间的相互作用，进而影响巨噬细胞对晶体的吞噬，刺激细胞产生不同水平的ros，引起nlrp3 炎性小体的活化，促进细胞因子il-1β的分泌。细胞产生的ros主要是线粒体 ros。
[0031]
细胞复苏：将装有冻存人单核细胞thp-1的冻存管从液氮中取出，迅速放入37℃水浴锅中，轻微摇动，待液体融化；将冻存管中的thp-1细胞悬浮于含有10％灭活胎牛血清的无菌rpmi 1640培养液的离心管中，1000rpm，5min离心，离心结束后，弃上清，轻轻弹起细胞，再次入无菌rpmi 1640培养液与离心管中，把细胞悬浮起来，转移到培养瓶中左右轻轻摇动，使培养瓶中的细胞均匀分布，得到复苏的人单核细胞thp-1；将复苏的人单核细胞thp-1置于浓度为5％co2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中培养，24h后观察细胞，若细胞已经成功复苏待细胞长至培养瓶底面积的70％～80％传代1次；
[0032]
材料和药物配制：不同物化性质的msu晶体准确称量之后，用pbs溶解到 5mg/ml。准确称取n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精和开环葫芦脲之后，使用无菌pbs分别溶解到250mm、130mm和20mm，4℃保存备用。
[0033]
处理细胞：将处于对数生长期的细胞离心，细胞计数后，稀释细胞密度为 3
×
104～5
×
104个/ml，吹打混匀，取相应的细胞加入5mg/ml的pma，使其终浓度是1μg/ml，将细胞按照每孔100μl接种于96孔板中，刺激细胞12h后，待细胞分化为巨噬细胞，然后加入nac预处理细胞，30min之后，加入100μg/ml msu 处理相应时间，2-羟丙基-β-环糊精和开环葫芦脲与100μg/ml msu同时加入，然后，置于浓度为5％co2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育相应的时间之后，检测细胞因子il-1β的分泌；
[0034]
检测细胞因子il-1β的分泌：将步骤(4)处理后的细胞，置于浓度为5％co2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育24h，各4个复孔；使用elisa 试剂盒进行检测，收集每孔100μl上清，加入到elisa板中，反应结束后，检测450nm吸光值，计算上清中il-1β的水平；
[0035]
小鼠急性痛风性关节炎模型：8-10周的c57bl/6j雌性小鼠，适应性饲养一周后进行实验，spf级条件常规饲养，12h/12h光暗交替，恒温恒湿，动物自由摄取饲料和饮用水。msu晶体使用生理盐水配成10mg/ml备用，小鼠使用戊巴比妥钠进行麻醉，对照组注射20μl生理盐水，实验组注射20μl msu晶体，nac 处理组是nac提前1h腹腔注射，然后注射20μl msu晶体，2-羟丙基-β-环糊精和开环葫芦脲是和msu混匀之后，一起注射。注射24h之后，小鼠进行安乐死，取小鼠膝关节组织检测炎性细胞的浸润和细胞因子的水平。
[0036]
基于上述合成的不同物化特性的msu晶体，研究了其引起炎症反应的机制，结果显示不同物化特性的msu晶体能够影响msu晶体与细胞膜之间的相互作用和巨噬细胞对msu晶
体的胞吞，进一步引起细胞内不同程度的ros的产生，活化nlrp3炎性小体，引起细胞因子il-1β的释放。如果能够抑制细胞内ros 的产生，抑制nlrp3炎性小体的活性，减少细胞因子il-1β的产生可能会起到预防或者治疗痛风的作用。因此，基于以上的机制，本发明选择了三种不同的药物进行治疗，三种药物分别是n-乙酰半胱氨酸(nac)、羟丙基-β-环糊精和开环葫芦脲。
[0037]
n-乙酰半胱氨酸(nac)是一种含有巯基的化合物，作为一种巯基供给体，具有多种作用，不仅具有抗氧化、清除体内氧自由基、预防dna的损伤、调节细胞的代谢活性、调整基因的表达和信号转导，抑制炎性介质的产生等作用，还可以作为一种一氧化氮(no)载体增加no的生物利用度，发挥no生理效应。随着研究的不断深入，nac的抗氧化应激作用逐渐被重视，并用于呼吸系统、消化系统、心血管系统、泌尿系统疾病的预防和治疗。2-羟丙基-β-环糊精具有内腔疏水，外部亲水的特殊性质，它能与多种客体分子形成包合物，其中，它对胆固醇分子具有强有力地吸收作用，已经被证明能够治疗动脉粥样硬化。同时，它也可以作为一种胆固醇清除剂，用于清除细胞膜或者细胞内的胆固醇。开环葫芦脲是一种由甘脲衍生出的新型的主客体化合物，其对客体分子具有高度的选择性和亲和性，并可以与客体分子形成主客体的包合物。使用以上三种药物之后，在体外细胞实验中明显抑制了msu晶体引起的il-1β的释放，进一步通过小鼠急性关节炎模型，证明了三种药物能够抑制炎性细胞的浸润和细胞因子的分泌。
[0038]
本发明的有益效果：本发明的数据建立在msu晶体能够通过刺激细胞产生 ros，活化nlrp3炎性小体，促进细胞因子il-1β的基础之上，本发明在此基础上选择了三种不同的药物(n-乙酰半胱氨酸、2-羟丙基-β-环糊精或开环葫芦脲) 通过抑制尿酸钠晶体引起的细胞因子il-1β的分泌达到预防和/或治疗痛风的目的。
附图说明
[0039]
图1是不同物化特性的msu晶体的sem图片，其中，标尺为5μm。
[0040]
图2是不同物化特性的msu晶体的x射线衍射表征结果。
[0041]
图3是细胞因子il-1β的产生。
[0042]
图4是msu晶体在j774a.1细胞中的吞噬作用。
[0043]
图5是线粒体ros的产生。
[0044]
图6是n-乙酰半胱氨酸(nac)和2-羟丙基-β-环糊精体外细胞毒性实验。
[0045]
图7是n-乙酰半胱氨酸(nac)和2-羟丙基-β-环糊精的细胞因子il-1β的分泌。
[0046]
图8是小鼠急性关节炎模型中，n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精和开环葫芦脲的细胞因子il-1β分泌。
[0047]
图9是小鼠急性关节炎模型中，n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精和开环葫芦脲的嗜中性粒细胞的浸润。其中，标尺为100μm。
具体实施方式
[0048]
以下结合附图和技术方案，进一步说明本发明的具体实施方式。
[0049]
本发明使用的细胞、试剂盒以及试剂：人单核细胞系thp-1，胎牛血清、双抗(青霉素/链霉素)，rpmi 1640培养基，ladmac条件培养基，n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环
糊精，开环葫芦脲，elisa试剂盒，he染色。
[0050]
实施例1
[0051]
将1411.2mg氢氧化钾溶解于240ml 37℃去离子水，使其终浓度是70mm，然后加入536.61mg尿酸，400rpm搅拌，用1m盐酸调节ph＝7.4，所得溶液称为 a溶液；将二水氯化钙、氯化钾和氯化钠溶解于37℃去离子水中，配制50mlcacl2
·
2h2o、kcl和nacl混合溶液，cacl2·
2h2o的浓度为2.5mm，kcl的浓度为5mm，nacl的浓度分别为175mm、225mm、275mm、325mm、375mm和 300mm，用1m氢氧化钠调节ph＝7.4，所得溶液称为b溶液；a溶液和b溶液分别用0.22μm滤器过滤，去除杂质。将a溶液和b溶液置于37℃水浴中水浴 1h，然后用注射泵以0.5ml/min的速度将5ml b溶液滴加入15ml a溶液中，混匀液以250rpm的速度进行搅拌，形成混合溶液放置于37℃水浴中，水浴48h；反应结束后，用乙醇洗涤，8000rpm离心两到三次，60℃下恒温干燥24h，得到白色粉末状固体，即为所得产物尿酸钠晶体，分别记作msu-a1(nacl的浓度为 175mm)，msu-a2(nacl的浓度为225mm)，msu-a3(nacl的浓度为275mm)， msu-a4(nacl的浓度为325mm)，msu-s(nacl的浓度为375mm)和msu-p (nacl的浓度为300mm)。
[0052]
上述材料经过表征显示，各个条件合成的产物均是尿酸钠晶体，并且，产物在大小和形状方面有明显的不同(结果见图1和2)。
[0053]
实施例2
[0054]
不同物化特性msu晶体引起的细胞因子il-1β的产生：
[0055]
a：将装有冻存人单核细胞thp-1的冻存管从液氮中取出，迅速放入37℃水浴锅中，轻微摇动，待液体融化，对人单核细胞thp-1进行复苏。将复苏的人单核细胞thp-1培养于含有10％fbs灭活胎牛血清、1％青霉素/1％链霉素(双抗)的无菌rpmi1640培养液的离心管中，置于悬浮细胞瓶中，在37℃、5％co2及相对湿度为90％下的培养箱中培养，细胞长至70％-80％左右传代1次。继续培养得到生长状态活跃的人单核细胞thp-1，收集细胞。将处于对数生长期的细胞离心，细胞计数后，稀释细胞密度为3
×
104～5
×
104个/ml，吹打混匀，取相应的细胞加入5mg/ml的pma，使其终浓度是1μg/ml，将细胞按照每孔3
×
104/100μl 接种于96孔板中，刺激细胞12h后，待细胞分化为巨噬细胞，然后分别加入 25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml实施例1中物化特性不同的msu 晶体(msu-a1、msu-a2、msu-a3、msu-a4、msu-s和msu-p)，然后，置于浓度为5％co2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育24h之后，收集细胞培养的上清，检测细胞因子il-1β的分泌，结果如图3中a所示，实施例 1中不同物化特性的msu晶体在thp-1细胞中能够引起不同程度的细胞因子 il-1β的产生。
[0056]
b：取c57bl/6小鼠骨髓细胞，400g，4℃，离心10min，将细胞培养在含有25％ladmac细胞培养上清的条件培养基中，细胞的培养密度是 1
×
106cell/ml，每隔两天更换一次条件培养基，7天之后收集细胞，按照5
×
104个/well铺到96孔板中，10ng/ml重组鼠的ifn-γ刺激48h，之后加入100μg/ml 实施例1中不同物化特性的msu晶体(msu-a1、msu-a2、msu-a3、msu-a4、 msu-s、和msu-p)，ctrl是不加任何处理组。然后，置于浓度为5％co2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育24h之后，收集细胞培养的上清，检测细胞因子il-1β的分泌，结果如图3中b所示,实施例1中不同物化特性的msu 晶体在小鼠原代巨噬细胞bmdms细胞中能够引起不同程度的细胞因子il-1β的产生。
[0057]
实施例3
[0058]
不同物化特性msu晶体引起的细胞因子il-1β的产生：将装有冻存人单核细胞thp-1的冻存管从液氮中取出，迅速放入37℃水浴锅中，轻微摇动，待液体融化，对人单核细胞thp-1进行复苏。将复苏的人单核细胞thp-1培养于含有10％fbs灭活胎牛血清、1％青霉素/1％链霉素(双抗)的无菌rpmi1640培养液的离心管中，置于悬浮细胞瓶中，在37℃、5％co2及相对湿度为90％饱和湿度下的培养箱中培养，细胞长至70％-80％左右传代1次。继续培养得到生长状态活跃的人单核细胞thp-1，收集细胞。将处于对数生长期的细胞离心，细胞计数后，稀释细胞密度为3
×
104～5
×
104个/ml，吹打混匀，取相应的细胞加入 5mg/ml的pma，使其终浓度是1μg/ml，将细胞按照每孔100μl接种于96孔板中，刺激细胞12h后，待细胞分化为巨噬细胞，然后加入100μg/ml实施例1中不同物化特性的msu晶体(分别为msu-a1、msu-a2、msu-a3、msu-a4、 msu-s、和msu-p)，然后，置于浓度为5％co2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育4h之后，加入5μmmitosox孵育4h，酶标仪读取荧光值，结果如图5所示，实施例1中不同物化特性的msu晶体在thp-1细胞中引起了不同程度的线粒体ros的产生。
[0059]
实施例4
[0060]
不同物化特性msu晶体引起的胞吞：将复苏的小鼠巨噬细胞系j774a.1培养于含有10％fbs灭活胎牛血清、1％青霉素/1％链霉素(双抗)的无菌dmem 培养液的离心管中，置于悬浮细胞瓶中，在37℃、5％co2及相对湿度为90％下的培养箱中培养，细胞长至70％-80％左右传代1次。继续培养得到生长状态活跃的小鼠巨噬细胞j774a.1，收集细胞。将处于对数生长期的细胞离心，细胞计数后，稀释细胞密度为3
×
104～5
×
104个/ml，吹打混匀，将细胞按照每孔2
×
105/100μl 接种于8孔板中，对照组没有加入msu晶体，实验组加入浓度为100μg/ml fitc 荧光标记的msu晶体(分别为实施例1中msu-a1、msu-a2、msu-a3、msu-a4、 msu-s和msu-p)材料处理细胞3h，之后分别染色细胞膜和细胞核。结果如图 4所示，实施例1中合成的不同物化特性的msu晶体在j774a.1细胞引起了明显的胞吞。
[0061]
实施例5
[0062]
材料和药物配制：实施例1中不同物化性质的msu晶体准确称量之后，分别用pbs溶解到5mg/ml。准确称取n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精(h-β-cd)和开环葫芦脲之后，使用无菌pbs分别溶解到250mm、130mm 和20mm，4℃保存备用，在使用时用无菌pbs将nac稀释到5mm，将2-羟丙基-β-环糊精(h-β-cd)分别稀释到0.68mm、1mm和3mm。
[0063]
n-乙酰半胱氨酸(nac)和2-羟丙基-β-环糊精对msu晶体引起的人巨噬细胞thp-1细胞因子il-1β的抑制作用：将复苏的人单核细胞thp-1培养于含有 10％fbs灭活胎牛血清、1％青霉素/1％链霉素(双抗)的无菌rpmi1640培养液中，置于悬浮细胞瓶中，在37℃、5％co2及相对湿度为90％下的培养箱中培养，细胞长至70％-80％左右传代1次。继续培养得到生长状态活跃的人单核细胞 thp-1，收集细胞。将处于对数生长期的细胞离心，细胞计数后，稀释细胞密度为3
×
104～5
×
104个/ml，吹打混匀，取相应的细胞加入5mg/ml的pma，使其终浓度是1μg/ml，将细胞按照每孔100μl接种于96孔板中，刺激细胞16h后，待细胞分化为巨噬细胞，然后加入25mm nac预处理细胞，30min之后，加入 100μg/ml实施例1中msu-a2晶体(当使用2-羟丙基-β-环糊精处理细胞时，将nac替换为2-羟丙基-β-环糊精，1mm和3mm 2-羟丙基-β-环糊精与100μg/ml实施例1中msu-a2晶体同时加入)，然后，置于浓度为5％co2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育24h之后，使用细胞检测mts，如图6所示两种
种药物(nac和h-β-cd)对细胞没有明显的毒性；收集细胞培养的上清，使用 elisa试剂盒，检测细胞因子il-1β的分泌(收集每孔100μl上清，加入到elisa 板中，反应结束后，检测450nm吸光值，计算上清中il-1β的水平)；结果如图 6所示，n-乙酰半胱氨酸(nac)和2-羟丙基-β-环糊精都能明显抑制il-1β的产生。
[0064]
实施例6
[0065]
8-10周的c57bl/6j雌性小鼠，适应性饲养一周后进行实验，spf级条件常规饲养，12h/12h光暗交替，恒温恒湿，动物自由摄取饲料和饮用水。实施例1 中msu-a2晶体使用生理盐水配成10mg/ml备用，小鼠使用戊巴比妥钠进行麻醉，对照组注射20μl生理盐水，实验组注射20μl msu-a2晶体(nac处理组是 320mg/kgnac提前1h腹腔注射，然后注射20μl msu-a2晶体；500mg/kg2-羟丙基-β-环糊精和300mg/kg开环葫芦脲处理组是和20μl msu-a2混匀之后，一起注射)，注射24h之后，小鼠进行安乐死，取小鼠膝关节组织进行组织匀浆，匀浆之后离心分离上清液，使用elisa试剂盒检测细胞因子il-1β的水平，如图8 所示，n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精和开环葫芦脲对细胞因子il-1β分泌起到抑制作用；另外，取小鼠膝关节组织，用4％多聚甲醛固定之后进行脱钙处理，处理之后石蜡包埋，切片，最后进行he染色结果如图9所示，n-乙酰半胱氨酸(nac)、2-羟丙基-β-环糊精和开环葫芦脲能够抑制嗜中性粒细胞的浸润，说明在体内起到了抑制急性痛风性炎症的作用。