1.本发明涉及多肽技术领域，更具体地说，涉及一种用于改善贫血症状的多肽组合物及其制备方法。
背景技术：
2.贫血是全球的常见性疾病，调查显示中国居民贫血患病率达20.1%，其中男性为15.8%，女性为23.3%，约有2.6亿人为缺铁性贫血。铁是人体重要的必需微量元素，如果摄取不足或吸收利用不良即可引起缺铁性贫血，尤以儿童和女性常见，而过量的铁会引起细胞成分的明显损伤。铁可催化自由基生成，使细胞膜脂质过氧化反应而损伤细胞，损害生物分子包括心肌脂质、蛋白质和核酸等，导致组织炎症和多器官的纤维化。
3.1832年，法国学者blaud将硫酸亚铁与碳酸钾制成复方制剂，开创了贫血防治新方法。随后碳酸亚铁、焦磷酸铁等一系列无机铁相继被开发成为补铁剂。但无机铁服用后，会在胃部快速解离，存在肠胃刺激，易产生恶心、呕吐、腹痛、便秘等副作用。同时，铁离子易与硫化物和多酚等结合而失效，限制了它的使用。20世纪60年代初，以乳酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、琥珀酸亚铁、富马酸亚铁等为代表的小分子有机酸铁盐和铁螯合物开始进入市场。虽然有机铁不同程度的在铁腥味、吸收率、生物利用度等方面上有所改进，有机酸酸根与铁离子之间既有离子作用，又有配位作用，形成的化合物具有一定的解离常数，服用后可在胃酸作用下缓慢释放铁离子，避免了高浓度铁离子对消化道的刺激，降低了胃肠道副作用，但其吸收仍然受到食物中鞣酸、 碳酸盐、纤维素及氧化性物质的影响。
4.直至血红素铁的出现，解决了胃肠道刺激和利用率低的问题，但由于血红素铁与珠蛋白分离后即自动氧化成三价铁，因此纯亚铁血红素极难分离得到，一般都是羟高铁血红素或氯高铁血红素，已经变成了非水溶状态。而且，目前市面中的血蛋白多肽产品未见富含血红素铁且多存在严重的苦味、腥味。未见富含血红素铁的血蛋白多肽是由于血红素铁在酶解过程中容易被氧化，并且在酶解过程中酶解不充分会导致蛋白剪切不完全，酶解过度则会导致过度沉淀析出。
技术实现要素：
5.针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种用于改善贫血症状的多肽组合物及其制备方法。
6.为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。
7.本发明的第一目的在于提供一种用于改善贫血症状的多肽组合物，所述多肽组合物包括以下重量百分含量的组分：填充剂10～49%，润滑剂0.1～5%，其余为血蛋白多肽a，所述血蛋白多肽a包含血红素铁，所述血蛋白多肽a是通过在新鲜动物血液中先加入抗凝剂，再离心破壁加热、酶解、超滤、浓缩及干燥获得。
8.其中，填充剂优选为大豆肽、赤藓糖醇、淀粉、微晶纤维素、乳糖、糊精、低聚果糖、d
‑
甘露糖醇、木糖醇和山梨糖醇中的一种或几种。润滑剂优选为硬脂酸镁、二氧化硅和微粉
硅胶中的一种或几种。
9.或者，所述多肽组合物内还可以加入具有改善贫血症状作用的药食同源提取物c10～30%，药食同源提取物c可以选自红枣、桂圆、山药、枸杞、茯苓、阿胶中的一种或多种，也可以还加入仙茅、制黄精、补骨脂、阿胶珠、红枣粉、红枣味粉末香精、枸杞粉和阿胶肽粉中的一种或两种以上混合。
10.或者，所述多肽组合物内还能加入调味剂进行调味，调味剂优选果粉或食用香精等。
11.另外，所述多肽组合物内还可以含有复配被膜剂2～4%，利用复配被膜剂包衣，复配被膜剂可以选用白色、红色、粉色、棕色、黑色和蓝色等透明或不透明的复配被膜剂。
12.另外，多肽组合物可以进行压片便于服用，也可以不进行压片，能以片状、粒状、膏糊状等各种形态存在，实际可根据需要进行选择。
13.优选的，一种用于改善贫血症状的多肽组合物包括填充剂10～49%，润滑剂0.1～5%，具有改善贫血症状作用的药食同源提取物c 10～30%和复配被膜剂2～4%，其余为血蛋白多肽a。
14.优选的，所述血蛋白多肽a是通过以下具体步骤获得：s1：原料处理：新鲜动物血液从屠宰场收集后，迅速抗凝，抗凝优选采用抗凝剂柠檬酸钠，离心弃血浆，收集血红细胞；s2：破壁加热：对s1收集的血红细胞进行高剪切细胞膜破碎，破壁优选采用高剪切破碎方法，可通过高压均质机进行；然后避光条件下加热，得到血红蛋白；s3：酶解：在45～55℃的温度和7～7.5ph下，以料液比1:10～20向s2的血红蛋白内加入纯化水和蛋白酶进行酶解；所述蛋白酶优选采用胰蛋白酶和风味蛋白酶；s4：超滤：在s3血红蛋白酶解后，利用超滤膜截留酶解液分子量为6000
‑
30000；s5：浓缩：将s4截留后的酶解液进行单效浓缩；s6：干燥：在s5浓缩后干燥得到所述血蛋白多肽a。
15.其中，步骤s1的血液优选为牛血或羊血，也可以是其他动物血液，比如鹿血、猪血和骆驼血等。步骤s2中避光条件下，加热温度为45～55℃，加热时间为25～35min。加热温度优选为50℃，加热时间优选为30 min。
16.优选的，步骤s3中酶解的具体过程为，在45～55℃的温度和7～7.5ph下，以料液比1:10～20加入纯化水，通过筛选按固含量3%先后加入胰蛋白酶和风味蛋白酶，酶解时间为7.5～8.5 h，煮沸0.4～0.6 h灭酶，优选为酶解8 h，煮沸0.5 h灭酶。所述酶解还可以分两步进行，先维持前6 h在温度45℃ ph=7.5的条件下酶解，再维持后2h在温度55℃ ph=7的条件下酶解，胰蛋白酶和风味蛋白酶也可以对应分两次先后放入。
17.优选的，步骤s4超滤膜截留分子量为6000
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30000；酶解液浓度浓缩至30%～50%最好。步骤s6优选采用喷雾干燥法，喷雾干燥条件为进风温度160～180℃，出风温度80～100℃。
18.本发明的第二目的在于提供另一种一种用于改善贫血症状的多肽组合物，所述多肽组合物包括以下重量百分含量的组分：填充剂10～49%，润滑剂0.1～5%，其余为血蛋白多肽组合物制剂b；所述血蛋白多肽组合物制剂b是通过在新鲜动物血液中先加血液重量3
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6倍的水，接着添加0.4％
‑
0.9％的动物蛋白水解复合酶酶解搅拌，再加入药食同源提取物d，
加热离心，超滤、浓缩及灭菌获得。
19.其中，所述药食同源提取物d包括仙茅、制黄精、补骨脂、阿胶珠、红枣粉、红枣味粉末香精、枸杞粉和阿胶肽粉中的一种或两种以上混合。所述药食同源提取物d分两次加入血蛋白多肽组合物制剂b内，第一次在酶解搅拌后，加热离心前加入，第二次在超滤的滤液中加入，搅拌均匀后再进行过滤浓缩。
20.优选的，填充剂优选为大豆肽、赤藓糖醇、淀粉、微晶纤维素、乳糖、糊精、低聚果糖、d
‑
甘露糖醇、木糖醇和山梨糖醇中的一种或几种。润滑剂优选为硬脂酸镁、二氧化硅和微粉硅胶中的一种或几种。
21.或者，所述多肽组合物内还能加入调味剂进行调味，调味剂优选果粉或食用香精等。
22.另外，多肽组合物可以进行干燥后压片便于服用，也可以不进行压片，能以片状、粒状、膏糊状等各种形态存在，实际可根据需要进行选择。
23.具体的，所述血蛋白多肽组合物制剂b可以是通过将新鲜动物血液除菌，再加血液重量3
‑
6倍的水，接着添加0.4％
‑
0.9％的动物蛋白水解复合酶酶解，之后与仙茅、制黄精、补骨脂、阿胶珠搅拌加热离心，离心液超滤，超滤液与抗性糊精、大豆肽、赤藓糖醇、血蛋白多肽粉、红枣粉、红枣味粉末香精、枸杞粉、阿胶肽粉和二氧化硅均匀搅拌后浓缩、灭菌得到。此处说明的是在前述的一种一种用于改善贫血症状的多肽组合物内，实际制备时也会进行除菌灭菌等操作。
24.优选的，所述血蛋白多肽组合物制剂b主要包括以下步骤：步骤一：检测动物生命特征，接着采集健康动物的血液，将血液通过过滤装置进行除菌，接着将除菌后的血液放置于容器内；优选的，过滤装置的超滤膜分子量为3000
‑
100；步骤二：向容器内加入水，水为血液的三至六倍，优选四倍，接着添加0.4％
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0.9％的动物蛋白水解复合酶处理，优选0.5％的动物蛋白水解复合酶，将其混合物搅拌，其中酶解温度为56
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58℃，酶解时间为70
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160min；酶解温度优选为56℃，酶解时间优选为80min。
25.步骤三：将步骤二中的混合液体中加入，8
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18份的仙茅，6
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20份的制黄精，10
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30份的补骨脂，11
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26份的阿胶珠，接着搅拌；优选的，仙茅为9份，制黄精为8份，补骨脂为12份，阿胶珠为13份；搅拌速率优选为1200rpm/min。
26.步骤四：将步骤三中的混合液体进行加热，加热温度为55
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95℃，接着离心，获取清液；优选的，加热温度为60℃，离心速率为12000rpm/min。。
27.步骤五：将清液经过截留分子量3000d的超滤设备超滤，收集滤后的液体和滤前的液体；优选的，滤后的液体为经过超滤设备超滤后的液体，滤前的液体为没有经过超滤设备的液体；步骤六：在步骤五的液体中依次加入：抗性糊精、大豆肽、赤藓糖醇、血蛋白多肽粉、红枣粉、红枣味粉末香精、枸杞粉、阿胶肽粉、二氧化硅，并均匀搅拌；优选的，以百分比计算，其中抗性糊精45.9％、大豆肽30％、赤藓糖醇3.5％、血蛋白多肽粉10％、红枣粉1.2％、红枣味粉末香精2 .5％、枸杞粉2.2％、阿胶肽粉2.9％、二氧化硅1.8％。
28.步骤七：将过滤后的液体进行浓缩、灭菌，即得到血蛋白多肽膏状液。灭菌包括紫外照射灭菌、电子束灭菌中的一种。
29.本发明的第三目的在于提供上述任一个多肽组合物的制备方法，主要是通过将上
述任一所述的多肽组合物内的各组分混合过筛，制粒后压片或直接压片或不压片，包衣或不包衣，得到所述多肽组合物，可以用于改善贫血症状。为了方便服用和携带，可以将多肽组合物制成片剂使用。
30.相比于现有技术，本发明的优点在于：一、本方案的血蛋白多肽组合物以血蛋白肽为核心配料，快速补充人体合成血红蛋白所需要的两大必须成分：蛋白和铁。铁的存在形式为2价血红素铁，与现有铁补充剂相比，具有吸收率高、无胃肠道刺激的特点，解决了贫血人群服用铁剂后产生胃肠道不适症状的问题。蛋白以肽的形式存在，解决了血红蛋白因本身球形结构导致难于消化利用的问题。本发明通过解决血红蛋白合成所需要的营养吸收问题，来提高人体血红蛋白合成的速度，改善贫血症状症状，效果已经经过动物实验和临床验证。
31.二、本方案的血蛋白多肽组合物在制备时可以采用片剂的形式，方便服用和携带。
具体实施方式
32.实施例1多肽组合物，包括以下质量分数的成分：麦芽糖醇48.49%,血蛋白多肽47.5%，硬脂酸镁2%，复配被膜剂2%，食品香精0.01%。其制备方法是将所述麦芽糖醇、血蛋白多肽、硬脂酸镁、食品香精混合过筛，制粒后压片，加入复配被膜剂进行包衣，包装即成。
33.实施例2多肽组合物，包括以下质量分数的成分：木糖醇45%,血蛋白多肽30%，红枣提取物15%，山药提取物7.99%，硬脂酸镁2%，食品香精0.01%。其制备方法是将所述木糖醇、血蛋白多肽、红枣提取物、山药提取物、硬脂酸镁、食品香精混合过筛，制粒后压片，包装即成。
34.实施例3多肽组合物，包括以下质量分数的成分：山梨糖醇45%,血蛋白多肽30%，草莓果粉18.99%，硬脂酸镁3%，复配被膜剂3%，食品香精0.01%。其制备方法是将所述山梨糖醇、血蛋白多肽、草莓果粉、硬脂酸镁、食品香精混合过筛，制粒后压片，加入复配被膜剂进行包衣，包装即成。
35.实施例4：安全性评价动物实验采用本发明多肽组合物内实施例1
‑
3的产品，与硫酸亚铁对比进行老鼠喂养，连续30天。
36.观察大鼠状态，每周称体重1次。灌胃30天后，取血，分别用生物化学方法或elisa方法检测铁代谢指标（采用南京建成公司试剂盒）；肝肾功能和血脂、血糖（使用医院检验科的全自动生化分析仪检测）。取胃、十二指肠、盲肠，组织切片，he染色，观察是否有炎性反应等改变。取肝、肾，测量各脏器重量，计算各脏器的脏器体重比值（脏体比）。
37.结论：1、补充本发明实施例1
‑
3的产品30天对普通日粮喂养的健康大鼠体重以及肝肾功能、肝肾大小、糖脂代谢均无明显影响。
38.2、补充本发明实施例1
‑
3的产品30天对普通日粮喂养的健康大鼠铁代谢无明显影响。
39.3、补充本发明实施例1
‑
3的产品30天，大鼠胃肠道黏膜无明显炎症变化。
40.4、补充不同剂量的硫酸亚铁，胃粘膜出现炎性表现，特别是高剂量硫酸亚铁组，黏
膜层及黏膜下层炎细胞浸润明显，伴随毛细血管扩张充血、间质水肿现象。
41.组织学检查结果证明，与硫酸亚铁相比，本发明实施例1
‑
3的产品无明显胃肠道刺激表现。
42.实施例5：对肿瘤放化疗患者改善贫血症状效果的影响1.试食入组标准：成人患者，患者依从性较好。
43.符合在海平面地区，肿瘤患者中成年男性血红蛋白（hb)<l20g/l;非妊娠成年女性hb<110g/l等相关诊断标准。
44.合并低蛋白血症患者（血清总蛋白≤60g/l或白蛋白≤35g/l）优先纳入。排除过敏、患有导致体内铁蓄积的疾病（血色病，含铁血黄素沉着症）、地中海贫血、铁粒幼红性细胞贫血、溶血性贫血、骨髓增生异常性综合征、维生素b12缺乏、叶酸缺乏、再生障碍性贫血等患者。
45.2.试食疗效判定：显效：症状和体征消失或明显改善，贫血指标、铁四项指标显著性提升或改善；好转：症状和体征有所改善，贫血指标、铁四项指标有提升或改善；无效：症状和体征无改善，各项指标下降或没有变化。
46.选取病例60例，男20例，女40例，均有肿瘤患病史，符合贫血入组标准。随机平均分为5组，每组12例，按试食方法试食本发明实施例1
‑
3的产品，对比硫酸亚铁、蛋白琥珀酸铁，食用30天疗程。试食期间无退出情况，分析试食本发明实施例1
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3的产品、硫酸亚铁和蛋白琥珀酸铁的抗贫血效果对比，其结果见表： 显著有效无效有效率本发明实施例1
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3的产品65191.7%硫酸亚铁25558.3%蛋白琥珀酸铁35466.7%实验结果表明，实验组与对照组对肿瘤放化疗患者的指标均有改善作用，实验组优于对照组，说明本发明实施例1
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3的产品具有优异的改善肿瘤患者贫血的作用。实验组在改善肿瘤放化疗患者的体征和症状改善上优于对照组。