10-羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素A的药物组合物及其应用

10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物及其应用
技术领域
1.本发明涉及制药技术，尤其涉及一种10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物及其应用。


背景技术：

2.随着人们生活水平的日益提高，癌症的发病率也在逐年递增，癌症已成为威胁人类健康和生命的一大杀手。因此，癌症的治疗成为亟待解决的问题。目前治疗癌症的方法主要有手术、放疗及化疗，其中最常用的还是化疗，但多数化疗药物本身的溶解性差，毒副作用强，作用靶点单一，易产生耐药性，从而限制了其临床应用。因此，如何提高这些化疗药物的药效，同时减少其毒副作用，是目前急需解决的问题。而为达到这一目的，最有效的方法就是通过使化疗药物与低毒或无毒的药物联合使用，从而达到协同抗肿瘤的作用。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于，针对目前化疗药物药效差，同时伴有副作用的问题，提出一种10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物，该药物组合物具有显著的协同效用，提高了药物的疗效，降低了用药剂量，减少了副作用的发生。
4.为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物，包括10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a。
5.其中，10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a的结构式如ⅰ、ⅱ所示。
[0006][0007]
进一步地，所述10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物由以下方法制备而成：称取10
‑
羟基喜树碱及鹰嘴豆芽素a，以二甲基亚砜和/或乙醇分别溶解，配成10
‑
羟基喜树碱浓度为50
‑
100mmol/l，鹰嘴豆芽素a浓度为200
‑
600mmol/l的贮存液在
‑
20℃下保存，制备得到10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物。
[0008]
进一步地，所述10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的摩尔比为0.02
‑
2:1，优选为0.3
‑
2:1。
[0009]
进一步地，所述抗肿瘤药物组合物中10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的浓度分别为0.1
‑
25μm和4
‑
25μm，优选的10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的浓度分别为1.5
‑
13μm和5
‑
16μm。
[0010]
进一步地，所述10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的稀释溶剂为二甲基亚砜和/或乙
醇。
[0011]
本发明的另一个目的还公开了一种10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物在抗肿瘤领域的应用。
[0012]
进一步地，所述10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物在制备治疗乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、结肠癌、前列腺癌、肾癌、脑瘤、肉瘤或卵巢癌的药物中的应用。
[0013]
进一步地，所述10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的给药顺序为同时给药。
[0014]
进一步地，所述10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物的作用时间为24
‑
72小时。
[0015]
本发明10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物的组配科学合理，与现有技术相比较具有以下优点：
[0016]
10
‑
羟基喜树碱是从我国特有且资源十分丰富的喜树中分离出的抗癌作用很强的微量生物碱之一。它是一种细胞周期特异性药物，主要作用于s期癌细胞，通过抑制拓扑异构酶i的活性而使dna断裂，从而抑制细胞增殖。该药对多种人体恶性肿瘤细胞如胃癌、肝癌、直肠癌等均具有杀伤作用。此外，这类药物作用靶点单一，肿瘤细胞易对其产生耐药性，且对肿瘤细胞不具有选择性，即对正常细胞也有杀伤作用，因此，其临床应用范围受到了很大的限制。为了解决这些问题，本研究利用其与其他低毒药物进行联合，从而达到减毒增效的效果。
[0017]
鹰嘴豆芽素a(biochanin a,bca)广泛存在于一些可食用植物中，如大豆、红三叶草、苜蓿、花生和鹰嘴豆中，研究显示其具有扩张血管，增加冠脉流量，降低血压，减慢心律和降低心肌耗氧量及抗心律失常、抑菌，雌激素样作用、治疗更年期综合症、抗骨质疏松、抗癌等作用，但鹰嘴豆芽素a单药抗癌作用极弱，使用高剂量的鹰嘴豆芽素a才会能起到抗癌效果，用鹰嘴豆芽素a单药抗癌并不现实。目前临床上多用于治疗妇女更年期综合症、心脏病、心血管病、骨质疏松等。此外因其毒性极低，价格低廉，具有广泛的应用前景。
[0018]
本发明10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a的药物组合物在治疗乳腺癌、胃癌、肝癌等中具有显著的协同效用，提高了药物的疗效，降低了用药剂量，减少了副作用的发生。
附图说明
[0019]
图1为10
‑
羟基喜树碱与12.5μm鹰嘴豆芽素a的药物组合物对乳腺癌细胞mcf7的增殖的影响；
[0020]
图2为10
‑
羟基喜树碱与12.5μm鹰嘴豆芽素a的药物组合物对胃癌细胞bgc
‑
823的增殖的影响；
[0021]
图3为10
‑
羟基喜树碱与6.25μm鹰嘴豆芽素a的药物组合物对肝癌细胞hepg2的增殖的影响；
具体实施方式
[0022]
下面结合实施例对本发明作进一步的阐述，但本发明并不受限于此，在不脱离本发明的思想和宗旨的情况下，对本发明的技术方案所做的任何变化都应落入本发明权利要求书所限定的范围内。
[0023]
以下结合实施例对本发明进一步说明：
[0024]
实施例1
‑
3中所用的生物材料、药品和实验方法如下：
[0025]
细胞：mcf
‑
7(人乳腺癌细胞株)、bgc823(人胃癌细胞株)、hepg2(人肝癌细胞株)可从商业途径中获得，例如中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。
[0026]
药品：准确称量10
‑
羟基喜树碱及鹰嘴豆芽素a(四川维克奇生物科技有限公司)，以二甲基亚砜或乙醇分别溶解，配成10
‑
羟基喜树碱浓度为50
‑
100mmol/l，鹰嘴豆芽素a浓度为200
‑
600mmol/l的贮存液在
‑
20℃下保存，使用时用新鲜的培养基稀释到合适的浓度，实施例1
‑
3中使用的培养基为dmem高糖培养基。
[0027]
噻唑蓝(mtt)检测细胞增殖：细胞于含5
‑
20％胎牛血清、80
‑
120ku/l青霉素、80
‑
120mg/l链霉素的dmem高糖培养基中，37℃、5％co2的条件下培养。将细胞用胰酶消化后，用血细胞计数板进行计数。按每孔100
‑
200μl体积接种于96孔细胞培养板(细胞接种量8000
‑
10000个/孔，根据细胞大小和生长速度选择)，5％co2、37℃培养箱中培养12
‑
36小时后加入不同浓度的10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药或双药，5％co2、37℃培养箱中孵育24
‑
72小时。弃去培养基，用pbs洗一次，而后每孔加入含有0.2
‑
1.0mg/ml mtt的无血清培养基100
‑
200μl，5％co2、37℃培养箱中孵育4
‑
8小时。将96孔板孔内的培养基吸去，然后每孔加入100
‑
200μl二甲基亚砜。用酶标仪进行检测，检测波长为570nm，参考波长为630nm。根据该波长下的吸光度值计算10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药对肿瘤细胞增殖的影响。
[0028]
两药联合使用时可能会出现三种不同的情况：协同作用、相加作用或拮抗作用。本发明中采用的评判标准是chou和talalay提出的合用指数法(combinational index，ci)。当ci值＜1时，表示两种药物联用是协同作用；当ci值＝1时，表示两种药物联用是相加作用；当ci＞1时，表示两种药物联用是拮抗作用。
[0029]
实施例1
[0030]
本实施例提供了一种10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a的药物组合物，具体步骤如下：
[0031]
(1)mtt检测10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药对乳腺癌细胞mcf7增殖的影响：mcf
‑
7细胞于含体积比为10％胎牛血清、100ku/l青霉素、100mg/l链霉素的dmem高糖培养基中，37℃、5％co2的条件下培养。将细胞用胰酶消化后，用血细胞计数板进行计数。按每孔100μl体积接种于96孔细胞培养板(细胞接种量8000
‑
10000个/孔，根据细胞大小和生长速度选择)，5％co2、37℃培养箱中培养24小时后加入不同浓度梯度的10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药，5％co2、37℃培养箱中孵育48小时。弃去培养基，用pbs洗一次，而后每孔加入含有0.5mg/ml mtt的无血清培养基100μl，5％co2、37℃培养箱中孵育4小时。将96孔板孔内的培养基吸去，然后每孔加入100μl二甲基亚砜。用酶标仪进行检测，检测波长为570nm，参考波长为630nm。根据该波长下的吸光度值计算10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药对mcf7细胞增殖的影响，结果显示10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a单药均对mcf7细胞具有抑制作用，10
‑
羟基喜树碱单药对mcf7作用48小时后的半数致死浓度为16.91
±
2.36μm，鹰嘴豆芽素a单药对mcf7作用48小时后的半数致死浓度为276.17
±
5.68μm。
[0032]
(2)mtt法检测12.5μm鹰嘴豆芽素a与不同浓度10
‑
羟基喜树碱联用对mcf7细胞增殖的影响：mcf
‑
7细胞于含10％胎牛血清、100ku/l青霉素、100mg/l链霉素的dmem高糖培养基中，37℃、5％co2的条件下培养。将细胞用胰酶消化后，用血细胞计数板进行计数。按每孔100μl体积接种于96孔细胞培养板(细胞接种量8000
‑
10000个/孔，根据细胞大小和生长速
度选择)，5％co2、37℃培养箱中培养24小时后同时加入终浓度为12.5μm的鹰嘴豆芽素a和终浓度为0.78
‑
12.5μm的10
‑
羟基喜树碱的药物组合，5％co2、37℃培养箱中孵育48小时。弃去培养基，用pbs洗一次，而后每孔加入含有0.5mg/ml mtt的无血清培养基100μl，5％co2、37℃培养箱中孵育4小时。将96孔板孔内的培养基吸去，然后每孔加入100μl二甲基亚砜。用酶标仪进行检测，检测波长为570nm，参考波长为630nm。根据该波长下的吸光度值，以及合用指数的计算方法计算12.5μm鹰嘴豆芽素a和10
‑
羟基喜树碱的联用效果。结果显示12.5μm鹰嘴豆芽素a和0.78
‑
12.5μm的10
‑
羟基喜树碱对mcf7细胞联合作用48小时后，对人乳腺癌mcf7细胞增殖的影响见附图1，其合用指数ci值为0.26
‑
0.54，均小于1，此时两药联合使用具有协同作用。
[0033]
实施例2
[0034]
本实施例提供了一种10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a的药物组合物，具体步骤如下：
[0035]
(1)mtt检测10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药对胃癌细胞bgc
‑
823增殖的影响：bgc
‑
823细胞于含10％胎牛血清、100ku/l青霉素、100mg/l链霉素的dmem高糖培养基中，37℃、5％co2的条件下培养。将细胞用胰酶消化后，用血细胞计数板进行计数。按每孔100μl体积接种于96孔细胞培养板(细胞接种量8000
‑
10000个/孔，根据细胞大小和生长速度选择)，5％co2、37℃培养箱中培养24小时后加入不同浓度梯度的10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药，5％co2、37℃培养箱中孵育48小时。弃去培养基，用pbs洗一次，而后每孔加入含有0.5mg/ml mtt的无血清培养基100μl，5％co2、37℃培养箱中孵育4小时。将96孔板孔内的培养基吸去，然后每孔加入100μl二甲基亚砜。用酶标仪进行检测，检测波长为570nm，参考波长为630nm。根据该波长下的吸光度值计算10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药对bgc
‑
823细胞增殖的影响，结果显示10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a单药均对bgc
‑
823细胞具有抑制作用，10
‑
羟基喜树碱单药对bgc
‑
823作用48小时后的半数致死浓度为7.42
±
0.72μm，鹰嘴豆芽素a单药对bgc
‑
823细胞作用48小时后的半数致死浓度为147.78
±
5.92μm.
[0036]
(2)mtt法检测12.5μm鹰嘴豆芽素a与不同浓度10
‑
羟基喜树碱联用对bgc
‑
823细胞增殖的影响：bgc
‑
823细胞于含10％胎牛血清、100ku/l青霉素、100mg/l链霉素的dmem高糖培养基中，37℃、5％co2的条件下培养。将细胞用胰酶消化后，用血细胞计数板进行计数。按每孔100μl体积接种于96孔细胞培养板(细胞接种量8000
‑
10000个/孔，根据细胞大小和生长速度选择)，5％co2、37℃培养箱中培养24小时后同时加入终浓度为12.5μm的鹰嘴豆芽素a和终浓度为0.10
‑
1.56μm的10
‑
羟基喜树碱的药物组合，5％co2、37℃培养箱中孵育48小时。弃去培养基，用pbs洗一次，而后每孔加入含有0.5mg/ml mtt的无血清培养基100μl，5％co2、37℃培养箱中孵育4小时。将96孔板孔内的培养基吸去，然后每孔加入100μl二甲基亚砜。用酶标仪进行检测，检测波长为570nm，参考波长为630nm。根据该波长下的吸光度值，以及合用指数的计算方法计算12.5μm鹰嘴豆芽素a和10
‑
羟基喜树碱的联用效果。结果显示12.5μm鹰嘴豆芽素a和0.10
‑
1.56μm的10
‑
羟基喜树碱对bgc
‑
823细胞联合作用48小时后，对人胃癌bgc823细胞增殖的影响见附图2，其合用指数ci值为0.14
‑
0.22，均小于1，此时两药联合使用具有协同作用。
[0037]
实施例3
[0038]
本实施例提供了一种10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a的药物组合物，具体步骤如
下：
[0039]
(1)mtt检测10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药对肝癌细胞hepg2增殖的影响：hepg2细胞于含10％胎牛血清、100ku/l青霉素、100mg/l链霉素的dmem高糖培养基中，37℃、5％co2的条件下培养。将细胞用胰酶消化后，用血细胞计数板进行计数。按每孔100μl体积接种于96孔细胞培养板(细胞接种量8000
‑
10000个/孔，根据细胞大小和生长速度选择)，5％co2、37℃培养箱中培养24小时后加入不同浓度梯度的10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药，5％co2、37℃培养箱中孵育48小时。弃去培养基，用pbs洗一次，而后每孔加入含有0.5mg/ml mtt的无血清培养基100μl，5％co2、37℃培养箱中孵育4小时。将96孔板孔内的培养基吸去，然后每孔加入100μl二甲基亚砜。用酶标仪进行检测，检测波长为570nm，参考波长为630nm。根据该波长下的吸光度值计算10
‑
羟基喜树碱和鹰嘴豆芽素a单药对hepg2细胞增殖的影响，结果显示10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a单药均对hepg2细胞具有抑制作用，10
‑
羟基喜树碱单药对hepg2作用48小时后的半数致死浓度为50.12
±
3.12μm，鹰嘴豆芽素a单药对hepg2作用48小时后的半数致死浓度为205.65
±
6.23μm。
[0040]
(2)mtt法检测6.25μm鹰嘴豆芽素a与不同浓度10
‑
羟基喜树碱联用对肝癌细胞hepg2增殖的影响：hepg2细胞于含10％胎牛血清、100ku/l青霉素、100mg/l链霉素的dmem高糖培养基中，37℃、5％co2的条件下培养。将细胞用胰酶消化后，用血细胞计数板进行计数。按每孔100μl体积接种于96孔细胞培养板(细胞接种量8000
‑
10000个/孔，根据细胞大小和生长速度选择)，5％co2、37℃培养箱中培养24小时后同时加入终浓度为6.25μm的鹰嘴豆芽素a和终浓度为0.39
‑
6.25μm的10
‑
羟基喜树碱的药物组合，5％co2、37℃培养箱中孵育48小时。弃去培养基，用pbs洗一次，而后每孔加入含有0.5mg/ml mtt的无血清培养基100μl，5％co2、37℃培养箱中孵育4小时。将96孔板孔内的培养基吸去，然后每孔加入100μl二甲基亚砜。用酶标仪进行检测，检测波长为570nm，参考波长为630nm。根据该波长下的吸光度值，以及合用指数的计算方法计算6.25μm鹰嘴豆芽素a和10
‑
羟基喜树碱的联用效果。结果显示6.25μm鹰嘴豆芽素a和0.39
‑
6.25μm的10
‑
羟基喜树碱对mcf7细胞联合作用48小时后，对人肝癌hepg2细胞增殖的影响见附图3,其合用指数ci值为0.02
‑
0.05，均小于1，此时两药联合使用具有协同作用。
[0041]
综上，实施例1
‑
3所述药物组合物含有10
‑
羟基喜树碱与鹰嘴豆芽素a。本发明的药物组合物在治疗乳腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌等中具有显著的协同效用，降低了用药剂量，提高了药物的疗效，减少了副作用的发生。
[0042]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。