一种马齿苋提取物溶液及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物活性成分提取，具体涉及一种马齿苋提取物溶液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、马齿苋中含有黄酮、生物碱、氨基酸等多种活性成分，具有清热解毒、凉血止血的功能，常用于痈肿疗疮、湿疹等皮肤病的治疗。现代药理研究表明马齿觅提取液具有抗敏、抗炎、抗菌等作用，可以有效缓解敏感、瘙痒等皮肤问题，因而被广泛应用在护肤和洗护类化妆品中。

2、现有马齿苋提取物溶液在制备技术一般采用酶解预处理马齿苋，如cn102389385a、cn106890202a等采用纤维素酶对马齿苋进行预处理，但马齿苋中含有丰富的金属离子包括ca2+、mg2+等(常珊珊，盐生马齿苋主要营养成分分析和提取物的抗氧化活性及抑菌作用的研究[d].南京师范大学,2013)，而高浓度的ca2+、mg2+对纤维素酶内切酶的活力影响较大(张洪鑫等，金属离子对纤维素酶内切酶和外切酶活性的影响[j].纤维素科学与技术，2011(4):6-13)，这使得现有酶解预处理马齿苋的方法无法达到令人满意的效果。

3、现有马齿苋提取物溶液在制备过程中一般采用一定比例的乙醇/水作为提取溶剂(如cn105640842a、cn108785341a、cn102389385a等)，但乙醇会增加提取液对皮肤的刺激性，即使回收时将乙醇改用乙二醇/丙二醇/丁二醇溶剂等复溶，依然无法解决乙醇残留在提取物中的问题，而且使工艺复杂化。

4、现有马齿苋活性成分制备技术一般采用活性炭脱色(如cn105640842a采用活性碳和活性白土复配脱色、cn106890202a采用活性炭与硅藻土脱色)或大孔吸附树脂脱色并富集活性成分(如cn109419827a和cn10683359a采用大孔树脂脱色并富集黄酮类活性成分)。但活性碳在脱色过程中会大量吸附黄酮、生物碱等成分(韩泳平等，球状活性碳对几类中药有效成分的吸附性能研究[j].中草药，2004，35(05):510-513)，造成马齿苋提取物溶液中活性成分的损失；大孔吸附树脂吸附和解析过程步骤繁琐、再生过程大量使用酸碱造成环境污染，不利于规模化生产。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术中存在的不足之处，提供了一种马齿苋提取物溶液的制备方法，所制备的马齿苋提取物溶液性质稳定，活性成分黄酮、生物碱含量高，具有较好的抗敏功效且安全性好，方法简单易行，便于工业化生产。

2、本发明的目的之一在于提供一种马齿苋提取物溶液的制备方法，包括以下步骤：将马齿苋采用生物发酵得到发酵液，得到的发酵液经过除菌除蛋白处理后，进行溶剂提取、脱色处理后得到马齿苋提取物溶液，其中，马齿苋发酵采用真菌发酵。具体包括以下步骤：

3、(1)将马齿苋与水均匀混合作为发酵底物，向发酵底物中加入真菌进行发酵，得到发酵液；

4、(2)将步骤(1)得到的发酵液通过陶瓷分离膜来除菌除蛋白的分离操作，得到除菌除蛋白的发酵液；

5、(3)向步骤(2)得到的除菌除蛋白的发酵液中加入溶剂进行提取；

6、(4)采用中空纤维素膜对步骤(3)提取后的发酵液进行脱色处理，即得马齿苋提取物溶液。

7、其中，步骤(1)中，马齿苋与水的质量比为1:3～1:50，优选为1:5～1:25；采用的真菌选自镰刀菌属，优选选自腐皮镰孢菌、尖镰孢、串珠镰孢中的至少一种，更优选选自腐皮镰孢菌；以质量百分比来计，真菌质量为马齿苋和水总质量的0.1～20％，优选为1～10％；步骤(1)中发酵底物在发酵前进行高压灭菌处理，优选地，所述的高压灭菌处理条件为压力103.4kpa、温度121.3℃、时间30min；步骤(1)中发酵处理时发酵温度为25～35℃，发酵时间为12～36h；

8、步骤(2)中，陶瓷分离膜选自无机陶瓷膜，优选选自氧化铝、氧化锆、氧化钛、氧化硅中的至少一种；陶瓷分离膜的孔径为0.01～8.0微米，优选为0.1～5.0微米；步骤(2)中采用陶瓷分离膜分离除去发酵的微生物菌以及杂蛋白，陶瓷分离膜分离温度为30～45℃，分离压力为0.02～0.1mpa；

9、步骤(3)中，以质量百分含量来计，步骤(3)中加入的溶剂用量为步骤(2)得到的除菌除蛋白的发酵液总重的5～10倍；上述溶剂为醇和水的混合溶剂，其中，醇选自多元醇，优选选自乙二醇、丙二醇、丁二醇、丙三醇、聚乙二醇中的至少一种，以质量百分比来计，溶剂中醇用量为混合溶剂总重的20～80％；步骤(3)中的提取在超声条件下进行，提取温度为30～50℃，提取时间为5～10h；

10、步骤(4)中，脱色处理采用组合式中空纤维膜组件，其中，组合式中空纤维膜组件中，滤过膜孔径为0.05～0.1微米，滤过温度为30～40℃，滤过压力为0.01～0.1mpa；截留膜孔径为0.001～0.02微米，截留温度为40～50℃，截留压力为0.1～0.2mpa。

11、本发明的目的之二在于提供一种采用上述制备方法得到的马齿苋提取物溶液，上述马齿苋提取物溶液中黄酮含量为80～95mg/l，生物碱含量为20～30mg/l。

12、本发明的目的之三在于提供一种上述马齿苋提取物溶液在护肤化妆品或洗护化妆品中的应用。以质量百分比来计，护肤化妆品中马齿苋提取物溶液的含量为0.5～10％；洗护化妆品中马齿苋提取物溶液的含量为0.1～5.0％。上述护肤化妆品和洗护化妆品中除马齿苋提取物溶液外，还可以加入其他化妆品中常用的组分，例如可包含一些常规的油相和水相以及其他添加剂，如乳化剂、表面活性剂、抗氧剂、保湿剂、香精、皮肤调理剂等，还可以添加一些功能成分，这些具体成分的应用及用量可根据所述化妆品的具体种类而进行选择，可以按照常规量添加。

13、本发明的目的是以下述方式实现的：

14、(1)为了提高马齿苋的前处理效果，本发明采用从半夏根中分离得到的腐皮镰孢菌(fusarium solani(mart.)，保藏编号cgmcc no.9580)，其生物合成的纤维素酶类尤其纤维二糖酶的活力较强，该酶活力受金属离子的影响较小，用腐皮镰孢菌预处理马齿苋可以有效的破坏马齿苋的细胞壁结构，使得胞内活性成分更多、更易溶出，显著提高提取效率；

15、(2)为了提高溶剂的渗透性，提高活性成分的提取率，本发明直接采用乙二醇/丙二醇/丁二醇/聚乙二醇和水作为提取溶剂，其渗透性虽然不及乙醇和水，但辅以超声波振荡可以大大提高溶剂的渗透性，使得活性成分提取率也显著提升，相对于现有技术采用乙醇和水提取，因乙醇无法除尽而引起的皮肤刺激，简化提取工艺；

16、(3)为了提高脱色效果，克服现有活性炭脱色技术造成马齿苋提取物溶液中活性成分的损失，以及大孔吸附树脂脱色技术、吸附和解析过程步骤繁琐、再生过程大量使用酸碱造成了环境污染，本发明组合应用中空纤维素膜对马齿苋提取物溶液进行脱色，脱色效果好，脱色效率高，且不会造成活性物的损失，便于规模化生产。

17、与现有马齿苋提取物溶液制备技术相比，本发明具有如下有益效果：

18、(1)采用腐皮镰孢菌(fusarium solani(mart.)，保藏编号cgmcc no.9580)，发酵前处理马齿苋，可以有效地破坏马齿苋的细胞壁结构，克服了传统采用纤维素酶前处理，纤维素酶活力受马齿苋中ca2+、mg2+影响较大的缺陷；

19、(2)采用无机陶瓷膜除菌除蛋白，可以实现在较低温度下除菌及除蛋白，克服了传统高温灭菌对马齿苋热敏活性成分的破坏，同时有效去除一部分杂蛋白；

20、(3)采用超声辅助乙二醇/丙二醇/丁二醇/聚乙二醇和水提取，可以提高溶剂的渗透性，同时克服传统用乙醇和水提取，因乙醇无法除尽而引起的皮肤刺激，同时简化提取工艺；

21、(4)采用组合中空纤维膜脱色，不仅能克服了传统工艺中活性炭脱色造成的黄酮、生物碱等活性物的损失，而且能克服传统大孔吸附树脂脱色过程繁琐、有污染、不利于规模化生产的不足。