一种预防和/或治疗骨质疏松症的组合物的制作方法

1.本发明属于药品、保健品或食品技术领域，具体涉及一种预防和/或治疗原发性骨质疏松症和继发性骨质疏松症的组合物。


背景技术：

2.糖皮质激素(gcs)经常用于临床医学中以治疗非传染性炎性疾病。但是，gc的使用会导致小梁骨骨质快速流失和发生骨折的高风险。糖皮质激素诱导的骨丢失(giop)，具有重要的临床意义。流行病学研究发现，接受gc治疗的慢性类风湿性关节炎患者中有50％会发生骨质疏松性骨折。随机临床试验的基线数据报告椎骨骨折的患病率为30％。其他研究发现，不论男女老少，所有种族都通过gc治疗研究了骨质流失，这是一个重要的公共卫生问题。由于接受gc治疗的患者可能需要长期治疗，从而增加了骨折和骨坏死发展的风险，因此迫切需要了解gc引起的骨丢失的生物学机制，以便临床医生可以有效地预防和治疗这种病。来自gc临床研究的观察数据发现，开始gc治疗与骨代谢改变有关，这继而导致发生小梁骨丰富的部位(例如，椎骨和股骨)的骨量迅速减少开始gc治疗后1年内椎骨骨折的风险升高。然而，由于与接受绝经后骨质疏松症的妇女相比，接受gcs治疗的人经常发生较高的bmds骨折，因此骨小梁质量和结构的丧失以及bmd并不能解释骨折风险的增加。改善骨量和骨质量的新治疗方法有待进一步开发。
3.牛膝，一种中药材，为苋科植物牛膝achyranthes bidentata blume.干燥根。主要成分含皂甙、脱皮甾酮和牛膝甾酮等，可以帮助减轻关节和背痛，可增加骨骼肌细胞的蛋白质合成并减少蛋白质降解，因为它增加了啮齿类动物的肌肉质量，被称为“合成代谢”天然来源的补充剂。
4.白桑叶入药历史悠久，具有补血、益肝、通脑、清心、明目，降糖、降脂、降压、利尿、消炎、止咳、长发等药效。它能提高大脑供血量，增强大脑活力，增加生长激素分泌，健肝益肾，改善更年期综合症，药用功能奇特。国家卫生部正式列入“既是食品又是药品”的目录。
5.藜麦是零胆固醇食物，富含不饱和脂肪酸，能显著降低血液胆固醇、三酸甘油脂血液黏稠度。具有均衡营养、增强机体功能、修复体质、调节免疫和内分泌系统、提高机体应激能力、预防疾病、抗癌和减肥等功效，尤其适于高血糖、高血压、高血脂和心脏病等慢性病的辅助治疗。所以藜麦可以广泛用于抑制高血压、高血脂、糖尿病、心脏病、老年痴呆。


技术实现要素：

6.本发明提供了一种预防及治疗雌激素缺乏引起的原发性骨质疏松症或由糖皮质激素引起的继发性骨质疏松症的组合物，该组合物由牛膝、白桑叶、藜麦组成。
7.牛膝富含植物蜕皮甾酮(βecd)，被称为“合成代谢”自然来源的补品，可增加骨骼肌细胞中的蛋白质合成并减少蛋白质降解，也可增加啮齿动物的肌肉质量，能刺激间充质干细胞的成骨分化，抑制其成脂分化。
8.桑叶是桑科植物桑的干燥叶，为植物之王，有“人参热补，桑叶清补”之美誉，富含
人体需要的17种氨基酸，粗蛋白，粗脂肪，同时含有黄酮类化合物，具有抗氧化性、抑制脂质过氧化反应、维持血管舒张，减少血管脆性，防止心血管疾病发生以及防癌抗癌等功能；桑叶中还富含有丰富的γ氨基丁酸和植物醇，，具有减肥、美容、延长记忆、改善视觉功能、镇定神经、抗焦虑、降血压、降血糖的作用，尤其白桑桑叶中这些物质的含量更高。
9.藜麦是一种营养价值极高的谷物，不仅富含蛋白质及钙、铁、锌、维生素e等微量营养素和全部的必需氨基酸，还具有提高人体营养水平和预防多种疾病的功能成分；藜麦具有高蛋白、高纤维、高维生素和低脂肪、低糖等特性，而且总多酚、皂甙、黄酮和多糖等含量丰富，食用价值高，可用于补充营养，增强体质，预防骨质疏松症。
10.本发明提供的组合物，主要以牛膝的主要成分蜕皮甾酮(βecd)为标志的复方组合，表示为βecd-combo。
11.具体地，本发明提供了一种预防和/或治疗骨质疏松症的组合物，其特征在于，该组合物由如下重量份数的成分组成：牛膝15-150份、藜麦1-60份、白桑叶1-60份。
12.优选地，所述组合物由如下重量份数的成分组成：牛膝15-100份、藜麦1-30份、白桑叶1-30份。
13.更优选地，所述组合物由如下重量份数的成分组成：牛膝15-50份、藜麦1-10份、白桑叶1-10份。
14.本发明还提供了所述组合物的制备方法，即按重量份称取各组分，粉碎后混合均匀。
15.本发明还提供了所述组合物在制备预防和/或治疗骨质疏松症的药物中的用途。
16.本发明中所述的骨质疏松症包括原发性骨质疏松症和继发性骨质疏松症。
17.优选地，本发明中所述的原发性骨质疏松症是由雌激素缺乏引起的原发性骨质疏松症。
18.优选地，本发明中所述的继发性骨质疏松症是由糖皮质激素引起的继发性骨质疏松症。
19.本发明还提供了一种预防和/或治疗骨质疏松症的药物制剂，其包括所述的组合物及药学上可接受的载体。
20.所述药物制剂是采用以上原料药(牛膝、藜麦、白桑叶)组成的组合物，采用常规的制剂工艺方法，制备而成，包括但不限于散剂、粉剂、微丸、片剂、胶囊剂等剂型。
21.本技术的优点或有益效果：
22.本发明的组合物的成分之一牛膝，其以蜕皮甾酮(βecd)为主要成分，增加了骨髓基质细胞成骨作用；同时在雌激素缺乏(卵巢切除术)的骨质疏松症和糖皮质激素引起的骨质疏松症的动物模型中，证实可预防松质骨丢失并保持及增加骨膜骨表面的骨形成。
23.本发明的组合物以牛膝、白桑叶、藜麦等高营养、安全、无毒的天然物质提取物为原料，从提高人体营养水平和预防多种疾病的角度出发，在治疗及预防由雌激素缺乏引起的原发性骨质疏松症和糖皮质激素引起的继发性骨质疏松症方面具有重大作用。
附图说明
24.图1为实施例1.1中成骨基因表达柱状图及矿化分析柱状图；
25.图2为实施例1.2中骨矿化结节形成菌落图；
26.图3为实施例2.1中雌激素缺乏引起的骨质疏松症的松质骨检测图及柱状分析图；
27.图4为实施例2.1中雌激素缺乏引起的骨质疏松症的皮质骨检测图及柱状分析图；
28.图5为实施例3.1中糖皮质激素诱导的骨质疏松症的松质骨检测图及柱状分析图；
29.图6为实施例3.1中糖皮质激素诱导的骨质疏松症的皮质骨检测图及柱状分析图。
具体实施方式
30.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。
31.本发明实施例所采用的原料均来源于市购产品，除特殊说明外，所采用的方法为本领域的常规方法。
32.牛膝(批号：h20200322，厂家：六安市丹贝尔生物科技有限公司)、藜麦(批号：6970093769235，厂家：沈阳信昌粮食贸易有限公司)、白桑叶(批号：s20191208，厂家：亳州中润生物科技有限责任公司)、balb/c裸鼠(购于广西医科大学动物中心)。
33.实施例中使用的蜕皮甾酮组合物(βecd-combo)的制备方法为：取牛膝、藜麦、白桑叶原材料以2:1:1的重量比称量，经粉碎机粉碎后得到混合物粉末。然后取75g的混合物粉末溶于1000ml蒸馏水中，得到实施例中的蜕皮甾酮组合物(βecd-combo)。
34.实施例中使用的βecd的制备方法为：取一定质量的牛膝经粉碎机粉碎后得到牛膝粉末。然后取75g的牛膝粉末溶于1000ml蒸馏水中，得到实施例中的βecd。
35.实施例1：蜕皮甾酮组合物(βecd-combo)增加成骨作用试验
36.1.1用βecd和βecd-combo各2ml分别在成骨培养基中(themofisher scientific)于10-7
mol培养骨髓基质细胞28天。在第7天测量成骨基因表达(runx2和bgalp)，在第21天测量骨矿化结节形成的合格性。结果如图1所示。该结果表明，通过与βecd对照组处理的倍数变化相比，βecd-combo更能促进体外成骨。在图1的成骨基因表达柱状图中，给出的结果是βecd-combo比βecd更能促进天测量成骨runx2和bgalp基因表达。
37.1.2将骨髓基质细胞与βecd和βecd-combo各2ml分别于10-7
mol培养28天，然后染色以代表总菌落形成的结晶紫。然后将相同的细胞培养孔用于茜素红染色，代表骨矿化结节的形成。结果如图2所示。该结果表明，βecd-combo比βecd更能促进骨矿化结节形成.
38.实施例2：蜕皮甾酮组合物(βecd-combo)对雌激素缺乏症引起的骨质疏松症影响试验
39.2.1将两个月大的雌性小鼠随机分为3个实验组，每组8只动物。组1，正常小鼠，即对照组；组2，去卵巢组(ovx)；ovx后立即开始治疗。组3，为去卵巢+βecd-combo(ovx+βecd-combo，口服灌胃βecd-combo，给药剂量相当于0.5mg/kg牛膝，0.25mg/kg藜麦，0.25mg/kg白桑叶，每周给药5次，即每周给药5天停药2天)。给药4周后对小鼠实施安乐死。
40.2.1.1松质骨检测结果见图3。
41.结果表明，雌激素缺乏(卵巢切除术)后，骨量和骨形成(白色荧光标记的骨表面总数)减少。在该原发性骨质疏松症模型中，蜕皮甾酮组合物的使用可预防松质骨丢失并保持骨形成。
42.2.1.2皮质骨检测结果见图4。
43.结果表明，雌激素缺乏症(卵巢切除术)与皮质骨骨膜表面的骨转换增加有关。蜕
皮甾酮组合物的使用可进一步增加骨膜骨表面的骨形成。
44.实施例3：蜕皮甾酮组合物(βecd-combo)对糖皮质激素诱导的骨质疏松的影响试验
45.3.1将两个月大的雄性swiss-webster小鼠随机分为4个实验组，每组8只。泼尼松龙(gc)的缓释微丸(美国创新研究公司，佛罗里达州萨拉索塔)的植入方法如下：第1组，对照组，植入安慰剂微丸(pl)；第2组，植入pl微丸+βecd(pl+βecd-combo 0.5mg/kg，每周给药5次)；第3组，植入泼尼松龙5mg/60天缓释微丸，相当于2.8mg/kg/d(gc)；第4组，植入泼尼松龙5mg/60天缓释微丸+βecd(gc+βecd-combo，蜕皮甾酮组合物的给药剂量相当于0.5mg/kg牛膝，0.25mg/kg藜麦，0.25mg/kg白桑叶))，蜕皮甾酮组合物口服灌胃，每周给药5次)。其中，每周给药5次的方式为每周给药5天，停药2天。
46.3.1.1松质骨检测结果见图5。
47.结果表明，糖皮质激素治疗大大降低了腰椎的松质骨质量，并伴有较低的骨形成表面(总的绿色荧光标记的骨表面)。在这种糖皮质激素诱发的骨质疏松症模型中，蜕皮甾酮组合物的使用可预防松质骨丢失并维持骨形成。
48.3.1.2皮质骨检测结果见图6。
49.结果表明，糖皮质激素(泼尼松龙缓释微丸)大大减少了皮质骨的形成和骨体积。在这种糖皮质激素诱发的骨质疏松症模型中，蜕皮甾酮组合物的使用可防止皮质骨丢失并维持骨形成。
50.结论，蜕皮甾酮组合物不仅能促进增加骨髓基质细胞的成骨作用，还能治疗由雌激素缺乏引起的原发性骨质疏松症和由糖皮质激素引起的继发性骨质疏松症。