瓜蒌、苦杏仁或其复方提取物在制备用于修复光老化损伤的化妆品中的用途的制作方法

1.本发明涉及中药复方提取物的用途，具体而言，本发明涉及瓜蒌、苦杏仁或其复方提取物在制备用于修复光老化损伤的化妆品中的用途。


背景技术：

2.随着人们生活水平的提高，对化妆品的要求也逐渐从“遮掩”提高到“养护”。然而，皮肤损伤的机制有多种，除了随年龄老化以外，外伤、干燥、感染、免疫性炎症反应、高低温、日光/紫外光等都会对皮肤产生伤害。因不同原因对皮肤造成的伤害，其修复原理也不同。化妆品难以对因多种原因而造成的皮肤损伤都进行有效修复。
3.在上述的不同损伤原因中，光老化损伤是皮肤由于长期受到日光照射，在自然老化和紫外线辐射共同作用下产生的。皮肤常表现出粗糙、增厚、干燥、皱纹、色素沉着、毛细血管扩张及敏感，甚至出现皮肤黑色素瘤等隐患。因此，从中药及天然植物中寻找抗光老的活性成分，对于日常护肤、预防光老化损伤及修复受损肌肤都有很大的价值，也为挖掘一些源于自然、功能性好及安全性好的化妆品原料，特别是开发天然植物预防及修复光老化肌肤的功能性化妆品都提供了更多的可能性。
4.瓜蒌为葫芦科植物栝楼或双边栝的干燥成熟果实，俗称栝楼、吊瓜，具有抗菌、抗溃疡、抗肿瘤及改善心血管系统等药理活性，瓜蒌的不同部位均有药用价值，如瓜蒌(果实)、瓜蒌皮(果皮)和瓜蒌子(种子)，最初被收录于《神农百草经》。瓜蒌含有多种成分，如黄酮类、氨基酸和蛋白质、油脂和有机酸、甾醇、无机元素等。苦杏仁为蔷薇科植物山杏、西伯利亚杏、东北杏或杏的干燥成熟种子，始载于《神农本草经》，其现代药理作用广泛，主要集中于止咳平喘、免疫调节、抗炎、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗氧化与润肠通便等，该药材炮制后入药可以减毒增效。
5.但现有技术中并未记载其对于皮肤的光老化损伤的特定用途。


技术实现要素：

6.本发明以瓜蒌(瓜蒌皮:瓜蒌子为1:1)、苦杏仁单独提取，以及二药合提，分别制备三种提取物，进行斑马鱼光老化抑制实验，发现该单味药及复方提取物都可以对光损伤带来改善，并基于该实验完成了本发明。
7.因此，本发明的目的在于提供瓜蒌、苦杏仁及其复方提取物在制备用于修复光老化损伤的化妆品中的用途。根据本发明的一个实施方式，其提供了瓜蒌苦杏仁复方提取物在制备用于修复光老化损伤的化妆品中的用途。
8.根据本发明的另一个实施方式，其提供了瓜蒌提取物在制备用于修复光老化损伤的化妆品中的用途。
9.根据本发明的另一个实施方式，其提供了苦杏仁提取物在制备用于修复光老化损伤的化妆品中的用途。
10.有益效果
11.(1)瓜蒌及苦杏仁单用或二者合用，均对斑马鱼光损伤模型具有抗光老化效果。
12.(2)二者合用后对抗光老化效果具有协同作用，更显中药配伍的优势。
13.(3)无论是瓜蒌、苦杏仁单独使用，亦或是二者构成的复方，均具有开发为化妆品原料的有效性及安全性。
附图说明
14.图1为正常组、模型组、使用阳性对照物白藜芦醇以及使用不同浓度的根据本发明的样品(瓜蒌提取物gl06、苦杏仁提取物xr07和复方提取物 sg537)处理后的斑马鱼尾鳍面积典型图。
15.图2为对图1的面积进行计算之后绘制的柱状图。
具体实施方式
16.为使本领域具有普通知识的人员可了解本发明的特点及效果，以下谨就说明书及申请专利范围中提及的术语及用语进行一般性的说明及定义。除非另有指明，否则文中使用的所有技术及科学上的字词，皆具有本领域技术人员对于本发明所了解的通常意义，当有冲突情形时，应以本说明书的定义为准。
17.在本文中，用语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其他任何类似用语均属于开放性连接词(open-ended transitional phrase)，其意欲涵盖非排他性的包括物。举例而言，含有复数要素的一组合物或制品并不仅限于本文所列出的这些要素而已，而是还可包括未明确列出但却是该组合物或制品通常固有的其他要素。除此之外，除非有相反的明确说明，否则用语“或”是指涵盖性的“或”，而不是指排他性的“或”。例如，以下任何一种情况均满足条件“a或b”：a为真(或存在)且b为伪(或不存在)、a为伪(或不存在)且b为真(或存在)、a和b均为真(或存在)。此外，在本文中，用语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”的解读应视为已具体公开并同时涵盖“由
…
所组成”及“实质上由
…
所组成”等封闭式或半封闭式连接词。
18.在本文中，所有以数值范围或百分比范围形式界定的特征或条件仅是为了简洁及方便。据此，数值范围或百分比范围的描述应视为已涵盖且具体公开所有可能的次级范围及范围内的个别数值，特别是整数数值。举例而言，“1至8”的范围描述应视为已经具体公开如1至7、2至8、2至6、3至6、 4至8、3至8等等所有次级范围，特别是由所有整数数值所界定的次级范围，且应视为已经具体公开范围内如1、2、3、4、5、6、7、8等个别数值。除非另有指明，否则前述解释方法适用于本发明全文的所有内容，不论范围广泛与否。
19.若数量或其他数值或参数是以范围、较佳范围或一系列上限与下限表示，则其应理解成是本文已特定公开了由任一对该范围的上限或较佳值与该范围的下限或较佳值构成的所有范围，不论这些范围是否有分别公开。此外，本文中若提到数值的范围时，除非另有说明，否则该范围应包括其端点以及范围内的所有整数与分数。
20.在本文中，在可实现发明目的的前提下，数值应理解成具有该数值有效位数的精确度。举例来说，数字40.0则应理解成涵盖从39.50至40.49的范围。
21.以下具体实施方式本质上仅是例示性，且并不欲限制本发明及其用途。此外，本文并不受前述现有技术或发明内容或以下具体实施方式或实施例中所描述的任何理论的限
制。
22.根据本发明的一个实施方式，其提供了瓜蒌苦杏仁复方提取物在制备用于修复光老化损伤的化妆品中的用途。根据本发明的一个实施方式，其中，所述瓜蒌苦杏仁复方提取物是指瓜蒌和苦杏仁经过水提取及醇沉后制备的提取物。
23.根据本发明的一个实施方式，其中，所述瓜蒌苦杏仁复方提取物的有效浓度为16.5-33.0mg/ml(以生药浓度计)。
24.根据本发明的一个实施方式，其提供了瓜蒌提取物在制备用于修复光老化损伤的化妆品中的用途。
25.根据本发明的一个实施方式，其中，所述瓜蒌提取物是指瓜蒌经过水提取及醇沉后制备的提取物。
26.根据本发明的一个实施方式，其中，所述瓜蒌提取物的有效浓度为 1.15-4.59mg/ml(以生药浓度计)。
27.根据本发明的另一个实施方式，其提供了苦杏仁提取物在制备用于修复光老化损伤的化妆品中的用途。
28.根据本发明的一个实施方式，其中，所述苦杏仁提取物是指苦杏仁经过水提取及醇沉后制备的提取物。
29.根据本发明的一个实施方式，其中，所述苦杏仁提取物的有效浓度为13.5 mg/ml(以生药浓度计)。
30.实施例
31.仪器材料
32.供试品制备方法
33.瓜蒌提取物(gl06，生药浓度为9.397g/ml)：将瓜蒌皮和瓜蒌子以1:1 的重量比混合(也可以用全瓜蒌)，加入适量去离子水回流提取，放冷，过滤，滤渣再用去离子水回流提取，放冷，过滤，合并两次滤液，然后适量加入无水乙醇搅拌，冷藏，然后抽滤，取上清液浓缩后得到提取物。
34.苦杏仁提取物(xr07，生药浓度为13.782g/ml)：将苦杏仁加入适量去离子水回流提取，放冷，过滤，滤渣再用去离子水回流提取，放冷，过滤，合并两次滤液，然后加入适量无水乙醇搅拌，冷藏，然后抽滤，取上清液浓缩后得到提取物。
35.瓜蒌苦杏仁复方提取物(sg357，生药浓度为8.445g/ml)：将苦杏仁、瓜蒌皮、瓜蒌子以2:1:1的重量比混合，加入适量去离子水回流提取，放冷，过滤，滤渣再用去离子水回流提取，放冷，过滤，合并两次滤液，然后加入适量无水乙醇搅拌，冷藏，然后抽滤，取上清液浓缩后得到提取物。
36.以上提取物均吸取原液，按需稀释。
37.阳性对照：白藜芦醇，白色粉末，批号f2121344，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，-20℃储存。用dmso配制成2.00mg/ml母液，现配现用。
38.实验动物
39.斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质：每1l反渗透水中加入200 mg速溶海盐，电导率为450～550μs/cm；ph为6.5～8.5；硬度为50～100 mg/l caco3)，实验动物使用许可证号为：syxk(浙)2012-0171。饲养管理符合国际aaalac认证(认证编号：001458)的要求。
40.野生型ab品系，以自然成对交配繁殖方式进行。年龄为受精后2天(2 dpf)的斑马鱼用于样品最大容忍浓度(mtc)测定和抗光老化功效评价。
41.仪器、耗材与试剂
42.解剖显微镜(szx7，olympus，日本)；ccd相机(verta1，上海土森视觉科技有限公司，中国)；精密电子天平(cp214，ohaus，usa)；6 孔板(nest biotech，中国)；紫外线光疗仪(kn-4006，徐州市科诺医学仪器设备有限公司，中国)。
43.甲基纤维素(批号b2006074，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，中国)。
44.实施例1
45.最大容忍浓度(mtc)
46.随机选取2dpf野生型ab品系于6孔板中，每孔(实验组)均处理30 尾斑马鱼。分别将药物gl06、xr07和sg357加到养鱼用的标准稀释水中(浓度见表1)，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3ml。除正常对照组外，其余各实验组均照射紫外线建立斑马鱼光老化模型。样品处理期间，统计各实验组的斑马鱼死亡数量并及时移除。28℃处理1天后，测定样品对光老化模型斑马鱼的mtc。
47.表1.样品最大容忍浓度摸索实验结果(n＝30)
48.[0049][0050]
通过表1的实验结果可以看出，gl06、xr07和sg357对光老化模型斑马鱼的mtc分别为4.59、13.5和33.0mg/ml。也就是说，斑马鱼对复方提取物相比单独的瓜蒌和苦杏仁提取物具有更高的容忍度(也就是说具有更低的死亡率或更高的存活率)，这是出人意料的，表明复方提取物中的瓜蒌提取物和苦杏仁提取物产生了协同效应，两种药物组成复方合用后增加了单用的耐受性，说明复方安全性更高，配伍有减毒作用。
[0051]
抗光老化功效评价
[0052]
随机选取2dpf野生型ab品系于6孔板中，每孔(实验组)均处理30 尾斑马鱼。分别将药物gl06、xr07和sg357加到养鱼用的标准稀释水中(浓度见表2)，阳性对照白藜芦醇10.0μg/ml浓度，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3ml。除正常对照组外，其余各实验组均照射紫外线建立斑马鱼光老化模型。28℃处理1天后，每个实验组随机选取10尾斑马鱼，在解剖显微镜下观察斑马鱼尾鳍，拍照并保存图片，参见图1。用nis-elementsd 3.20高级图像处理软件进行图像分析，分析斑马鱼尾鳍面积(即图中虚线部分面积)，以该指标的统计学分析结果评价样品抗光老化功效。尾鳍面积越大，表明抗光老化的效果越好。统计学处理结果采用mean
±
se表示，参见图2。用spss26.0软件进行统计学分析，p《0.05表明差异具有统计学意义。
[0053]
表2.样品抗光老化功效评价实验结果(n＝10)
[0054][0055]
与模型对照组比较，*p《0.05，***p《0.001
[0056]
在本实验条件下，gl06、sg357和xr07均具有抗光老化功效。详见表 2、图1和图2。
[0057]
其中，图1为正常组、模型组、使用阳性对照药白藜芦醇以及使用不同浓度的根据本发明的样品(瓜蒌提取物gl06、苦杏仁提取物xr07和复方提取物sg537)处理后的斑马鱼尾鳍面积典型图。
[0058]
图2为对图1的面积进行计算之后绘制的柱状图。与模型对照组比较， *p《0.05，***p《0.001。
[0059]
根据上述结果可以看出，与模型对照组相比，瓜蒌提取物、苦杏仁提取物和复方提取物都可以增加尾鳍面积，表现出一定的抗光老化功能，特别是在浓度较高(但都低于最大容忍浓度)的情况下，进一步可知瓜蒌提取物的抗光老化效果好于苦杏仁提取物，说明复方中瓜蒌发挥了更大的抗光老化作用，但在杏仁的配伍下，复方进一步提高了两味药的单独效果，体现出中药方剂的配伍价值。
[0060]
特别令人意外的是，复方提取物在较高浓度下表现出了特别优异的抗光老化功能，结果超过了阳性对照药，甚至与正常对照组(不进行紫外照射的组)结果相近，这说明瓜蒌提取物和苦杏仁提取物在抗光老化的功效方面具有协同效应。
[0061]
综上所述，在本实验条件下，瓜蒌提取物gl06、苦杏仁提取物xr07 和瓜蒌苦杏仁复方提取物sg357均具有抗光老化功效，具有开发成为化妆品原料及研发预防或修复光老化功能性化妆品的前景，而且复方提取物在特定浓度范围内在安全性和有效性方面都表现出了单味药配伍成为复方后的协同效应，既瓜蒌苦杏仁复方发挥了单用基础上的增效减毒的优势。