胶原蛋白脂质体冻干乳及其制备方法与流程

1.本发明涉及医疗器械技术领域，涉及一种胶原蛋白脂质体冻干乳及其制备方法。


背景技术：

2.脂质体(liposomes，lips)是将活性物包封于类脂质的双分子层内而形成的微型泡囊体，脂质体可将水溶性药物包裹在内部水性囊泡中或脂溶性的药物包裹在脂质双分子层中，然后直接作用于角质层细胞的脂质双分子层来改善活性物的渗透，促进其透皮吸收，脂质体可能会通过皮肤附属器官或者细胞间途径完整的透过角质层到达真皮层内，形成活性物贮库缓慢长久地作用于患处。脂质体中的磷脂和胆固醇为人体固有成分，对人体无刺激和毒性。
3.胶原蛋白脂质体是利用脂质体包裹技术，将高活性的重组胶原蛋白(简称rhc)包裹于脂质体囊泡内，使其加速透过皮肤表皮，完整渗透至皮肤基底层，迅速发挥抗衰、修复等功效。然而脂质体在水性环境下不稳定，容易在溶液中发生泄露以及磷脂水解等问题。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种胶原蛋白脂质体冻干乳及其制备方法。
5.实现本发明目的的技术方案如下：
6.胶原蛋白脂质体冻干乳，按总重量份数为100份计，由以下成分组成：10份胶原蛋白脂质体、5～10份甘露糖醇、0.5～2份β-环糊精和78～84.5份纯化水，通过以下步骤制得：
7.(1)按比例，先将胶原蛋白脂质体(lla)加入纯化水中，常温下搅拌溶解，得到胶原蛋白脂质体溶液，然后依次加入甘露糖醇和β-环糊精，常温下搅拌溶解，得到混合溶液；
8.(2)将混合溶液置于冻干机中，设置冷却温度5
±
1℃，预冷20～30min，然后开启预冻程序，冷冻温度为-40～-50℃，冷冻时间2～3h；
9.(3)预冻结束后程序自动进入一次干燥阶段，设置真空度为0.1～0.5mbar，板层温度-25～-20℃，保持时间3～4h，板层升温至-15℃，保持时间2～3h，板层温度升温至0℃，保持时间1～2h；
10.(4)一次干燥结束后程序自动进入二次干燥阶段，设置板层温度升温至15℃，保持时间1～1.5h，设置真空度为0.01mbar，板层温度升温至30℃，保持时间2～4h，得到胶原蛋白脂质体冻干乳。
11.本发明所述的胶原蛋白脂质体中的胶原蛋白为重组人源胶原蛋白，由保藏编号为cgmcc no.5021的巴斯德毕赤酵母pichia pastoris发酵产生，分子量为55kda。
12.本发明所述的胶原蛋白脂质体囊泡平均粒径为300～320nm。与现有技术相比，本发明具有以下优点：
13.(1)本发明以胶原蛋白脂质体(lla)、甘露糖醇、β-环糊精为原料，制备一种胶原蛋白脂质体冻干乳，甘露糖醇作为脂质体冷冻干燥工艺中的骨架剂可以在干燥过程中围绕在生物活性材料周围，形成多孔的网状结构，避免生物活性材料直接暴露在周围环境中，β-环
糊精可以在干燥过程中围绕在生物活性材料周围，提高脂质体囊泡结构的稳定性，保证产品的包封率。
14.(2)采用冷冻干燥工艺制备胶原蛋白脂质体冻干乳，可以迫使溶液过冷结晶，在负压条件下有利于提高干燥效率，随着溶液中水分被逐渐抽离，干燥部分形成疏松结构，甘露糖醇起到骨架的作用。在干燥环境下，有效防止胶原蛋白酶解，提高产品的稳定性，有利于产品的长期保存。
附图说明
15.图1为实施例1制备的胶原蛋白脂质体的产品示意图；
16.图2为对比例1制备的胶原蛋白脂质体的产品示意图。
具体实施方式
17.下面结合实施例和附图对本发明作进一步详述。
18.下述实施例中采用的胶原蛋白脂质体购买自江苏江山聚源生物技术有限公司。
19.实施例1
20.本实施例的胶原蛋白脂质体冻干乳通过以下步骤制备：
21.按质量份数计，分别称量10份胶原蛋白脂质体、5份甘露糖醇、0.5份β-环糊精，84.5份的纯化水。将胶原蛋白脂质体加入纯化水中，常温下搅拌溶解，得到胶原蛋白脂质体溶液，将甘露糖醇加入胶原蛋白脂质体溶液中，常温下搅拌溶解，得混合溶液a，将β-环糊精加入混合溶液a中，常温下搅拌溶解，得最终混合液。将最终混合液置于冻干机中，设置板层温度5℃，预冷30min，然后开启预冻程序，冷冻温度为-40℃，冷冻时间3h得冻结产品，调节板层温度至-20℃，设置真空度为0.5mbar，保持时间4h，板层升温至-15℃，保持时间3h，板层温度升温至0℃，保持时间2h。一次干燥结束程序自动进入二次干燥阶段，设置板层温度升温至15℃，保持时间1h，设置真空度为0.01mbar，板层温度升温至30℃，保持时间4h，出箱，得胶原蛋白脂质体冻干乳。
22.实施例2
23.本实施例的胶原蛋白脂质体冻干乳通过以下步骤制备：
24.按质量份数计，分别称量10份胶原蛋白脂质体、10份的甘露糖醇、2份的β-环糊精，78份的纯化水。将胶原蛋白脂质体加入纯化水中，常温下搅拌溶解，得到胶原蛋白脂质体溶液，将甘露糖醇加入胶原蛋白脂质体溶液中，常温下搅拌溶解，得混合溶液a，将β-环糊精加入混合溶液a中，常温下搅拌溶解，得最终混合液。将最终混合液置于冻干机中，设置板层温度5℃，预冷30min，然后开启预冻程序，冷冻温度为-40℃，冷冻时间2h得冻结产品，调节板层温度至-25℃，设置真空度为0.1mbar，保持时间4h，板层升温至-15℃，保持时间3h，板层温度升温至0℃，保持时间2h。一次干燥结束程序自动进入二次干燥阶段，设置板层温度升温至15℃，保持时间1h，设置真空度为0.01mbar，板层温度升温至30℃，保持时间4h，出箱，得胶原蛋白脂质体冻干乳。
25.实施例3
26.本实施例的胶原蛋白脂质体冻干乳通过以下步骤制备：
27.按质量份数计，分别称量10份胶原蛋白脂质体、5份甘露糖醇、0.5份β-环糊精，
84.5份的纯化水。将胶原蛋白脂质体加入纯化水中，常温下搅拌溶解，得到胶原蛋白脂质体溶液，将甘露糖醇加入胶原蛋白脂质体溶液中，常温下搅拌溶解，得混合溶液a，将β-环糊精加入混合溶液a中，常温下搅拌溶解，得最终混合液。将最终混合液置于冻干机中，设置板层温度5℃，预冷30min，然后开启预冻程序，冷冻温度为-40℃，冷冻时间2h得冻结产品，调节板层温度至-25℃，设置真空度为0.1mbar，保持时间4h，板层升温至-15℃，保持时间3h，板层温度升温至0℃，保持时间2h。一次干燥结束程序自动进入二次干燥阶段，设置板层温度升温至15℃，保持时间1h，设置真空度为0.01mbar，板层温度升温至30℃，保持时间4h，出箱，得胶原蛋白脂质体冻干乳。
28.对比例1
29.本对比例的胶原蛋白脂质体冻干乳通过以下步骤制备：
30.按质量份数计，分别称量10份胶原蛋白脂质体、2份甘露糖醇、0.5份β-环糊精，87.5份的纯化水。将胶原蛋白脂质体加入纯化水中，常温下搅拌溶解，得到胶原蛋白脂质体溶液，将甘露糖醇加入胶原蛋白脂质体溶液中，常温下搅拌溶解，得混合溶液a，将β-环糊精加入混合溶液a中，常温下搅拌溶解，得最终混合液。将最终混合液置于冻干机中，设置板层温度5℃，预冷30min，然后开启预冻程序，冷冻温度为-40℃，冷冻时间2.5h得冻结产品，调节板层温度至-22.5℃，设置真空度为0.3mbar，保持时间4h，板层升温至-15℃，保持时间3h，板层温度升温至0℃，保持时间2h。一次干燥结束程序自动进入二次干燥阶段，设置板层温度升温至15℃，保持时间1h，设置真空度为0.01mbar，板层温度升温至30℃，保持时间3h，出箱，得胶原蛋白脂质体冻干乳。
31.对比例2
32.本对比例的胶原蛋白脂质体冻干乳通过以下步骤制备：
33.按质量份数计，分别称量10份胶原蛋白脂质体、7.5份甘露糖醇、1.25份β-环糊精，81.25份的纯化水。将胶原蛋白脂质体加入纯化水中，常温下搅拌溶解，得质量分数10％的胶原蛋白脂质体溶液，将甘露糖醇加入胶原蛋白脂质体溶液中，常温下搅拌溶解，得混合溶液a，将β-环糊精加入混合溶液a中，常温下搅拌溶解，得最终混合液。将最终混合液置于冻干机中，设置板层温度5℃，预冷30min，然后开启预冻程序，冷冻温度为-40℃，冷冻时间1h得冻结产品，调节板层温度至-22.5℃，设置真空度为0.3mbar，保持时间4h，板层升温至-15℃，保持时间3h，板层温度升温至0℃，保持时间2h。一次干燥结束程序自动进入二次干燥阶段，设置板层温度升温至15℃，保持时间1h，设置真空度为0.01mbar，板层温度升温至30℃，保持时间3h，出箱，得胶原蛋白脂质体冻干乳。
34.对比例3
35.本对比例的胶原蛋白脂质体冻干乳通过以下步骤制备：
36.按质量份数计，分别称量10份胶原蛋白脂质体、7.5份甘露糖醇、1.25份β-环糊精，81.25份的纯化水。将胶原蛋白脂质体加入纯化水中，常温下搅拌溶解，得质量分数10％的胶原蛋白脂质体溶液，将甘露糖醇加入胶原蛋白脂质体溶液中，常温下搅拌溶解，得混合溶液a，将β-环糊精加入混合溶液a中，常温下搅拌溶解，得最终混合液。将最终混合液置于冻干机中，设置板层温度5℃，预冷30min，然后开启预冻程序，冷冻温度为-40℃，冷冻时间3h得冻结产品，调节板层温度至-22.5℃，设置真空度为0.8mbar，保持时间4h，板层升温至-15℃，保持时间3h，板层温度升温至0℃，保持时间2h。一次干燥结束程序自动进入二次干燥阶
段，设置板层温度升温至15℃，保持时间1h，设置真空度为0.01mbar，板层温度升温至30℃，保持时间3h，出箱，得胶原蛋白脂质体冻干乳。
37.表1各实施例和对比例制得的胶原蛋白脂质体冻干乳的性能数据
[0038][0039]
注：表中复溶能力指标：++表示轻微振摇即可复溶；+表示用力振摇才能复溶；-表示用力振摇也能复溶，但速度较慢；
‑‑
表示用力振摇后不溶解。
[0040]
由表1可知，实施例1-3制备的胶原蛋白脂质体冻干乳，采用冷冻干燥工艺配合甘露糖醇骨架剂可以形成疏松多孔的干燥产品，保证产品的稳定性，解决了脂质体在水性环境下的不稳定、在溶液中的泄露以及磷脂水解等问题。β-环糊精在干燥过程中围绕在生物活性材料周围，保护生物活性材料结构的稳定性，同时提高疏松多孔结构的强度，有效防止胶原蛋白的降解。
[0041]
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。