用于治疗癌症的药物组合的制作方法

1.本发明涉及abtl0812在治疗人类患者的癌症中的用途，其中所述癌症治疗涉及化学疗法、靶向疗法治疗、免疫疗法治疗或放射疗法治疗。


背景技术：

2.ep2409963b1(lipopharma-于2010年提交)描述了多不饱和脂肪酸的1,2-衍生物(被称为d-pufa)化合物用于治疗癌症的用途。
3.所描述的脂肪酸衍生化合物具有以下式：
4.coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝ch-ch2)b-(ch2)c-ch35.优选化合物的实例为：
6.cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(182a1)
7.文章“erazo等人；临床癌症研究(clinical cancer research)；22(10)2016年5月15日”进一步详细描述了上述化合物(182a1)-在所述文章中这种化合物被称为“abtl0812”并且此术语在本文中使用。
8.如本领域已知的，癌症的药物治疗通常基于四个主要药物组，包含化学疗法、靶向疗法、激素疗法和免疫疗法。此外，放射疗法也是癌症治疗的基石，它多次与药物疗法一起施用。
9.wo2018/210830a1(ability pharmaceuticals)描述了abtl0812化合物与其它化学治疗剂组合用于癌症治疗-例如，关于一线疗法的abtl0812与化学治疗剂多西他赛(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、卡铂(carboplatin)或顺铂(cisplatin)的药物组合。


技术实现要素：

10.从wo2018/210830a1(ability pharmaceuticals)作为最相关的现有技术文件(所谓的最近的现有技术文件)开始-本发明要解决的问题可以被视为提供可以提供改进的治疗癌症的abtl0812的替代性用途。
11.如上文所讨论的，化合物cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3在本文中被称为abtl0812。
12.如上文所讨论的，wo2018/210830a1(ability pharmaceuticals)描述了abtl0812化合物与其它化学治疗剂组合用于癌症治疗-例如，关于一线疗法的abtl0812与化学治疗剂多西他赛、紫杉醇、卡铂或顺铂的药物组合。
13.wo2018/210830a1(ability pharmaceuticals)没有直接和明确地描述abtl0812在二线疗法中用于治疗癌症-例如，wo2018/210830a1中甚至没有提到与二线疗法相关的术语“二线(second-line/second line)”。
14.本文的工作实例提供了合理的详细实验数据，证明了关于使用上文所讨论的abtl0812化合物与其它化学治疗剂组合用于例如人类患者的癌症的二线疗法的显著协同效应。
15.abtl0812化合物在结构上和功能上类似于在上文所讨论的ep2409963b1中所描述的另一种多不饱和脂肪酸的1,2-衍生物(d-pufa)化合物。
16.因此，初步看来，ep2409963b1的基本上所有脂肪酸衍生化合物与如本文所讨论的化学治疗剂和/或其它优选的癌症治疗组合将具有本文相关的协同效应，这是合理的。
17.因此，本发明的第一方面涉及一种药物组合，其包括：
18.(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
19.(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
20.(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
21.(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
22.(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
23.(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
24.以及
25.(b1)：化学治疗剂化合物
26.用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症，其中所述治疗是癌症的二线疗法治疗。
27.如本领域已知的，一线疗法是医疗机构普遍接受的用于对给定类型和阶段的癌症进行初始治疗的一种或多种治疗方案。一线疗法也被称为主要治疗或疗法。一线疗法的目的是治愈癌症，如果可能的话。此主要疗法也被称为诱导疗法，它是化疗药物对恶性肿瘤的第一次攻击。
28.与技术人员的一般常识一致-第一方面的术语“二线疗法”涉及当一线疗法不能充分发挥作用时尝试的二线疗法治疗。癌症病例的管理需要定期评估治疗并且根据需要进行调整。打破主要一线疗法治疗并采用新方案标志着“二线疗法”治疗。
29.如技术人员在本发明上下文中所理解的-术语“二线疗法”要求一线疗法中的患者已经用与“二线疗法”的癌症药剂的特性/混合物不同的癌症药剂的特性/混合物进行治疗。
30.有人可能会说，如果一线疗法的癌症药剂的特性/混合物效果令人满意(即治愈了患者的癌症)，那么可能不需要使用“二线疗法”。
31.作为实例-在本发明的上下文中，一线疗法可能例如涉及使用多西他赛、紫杉醇以及可能还有abtl0812，并且二线疗法然后可以是不同的癌症药剂的特性/混合物，例如可以是abtl0812与替莫唑胺(temozolomide)的组合，如本文的工作实例1.1中所讨论的。
32.根据本领域，化学疗法是使用一种或多种抗癌药物(化学治疗剂)作为标准化化学疗法方案的一部分的癌症治疗类型。术语化学疗法已经开始意味着细胞内有毒化合物的非特异性使用来抑制有丝分裂、细胞分裂-即化学治疗剂化合物被理解为干扰细胞复制的化合物。由于dna/细胞复制是所有细胞想要复制更多自身时使用的常见过程，因此化学疗法无法区分癌细胞和正常细胞。因此，经典化学疗法可能具有显著的副作用。
33.如上文所讨论的，wo2018/210830a1(ability pharmaceuticals)描述了abtl0812化合物与其它化学治疗剂的组合在癌症治疗中的使用-因此，此文件没有直接和明确地描述abtl0812用于癌症治疗的靶向疗法、免疫疗法和/或放射疗法。
34.本文的工作实例提供了合理的详细实验数据，证明了关于上文所讨论的abtl0812化合物用于癌症患者的癌症治疗的靶向疗法、免疫疗法和/或放射疗法的显著积极效果。
35.因此，本发明的第二方面涉及一种药物组合，其包括：
36.(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
37.(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
38.(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
39.(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
40.(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
41.(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
42.以及
43.(b2)：靶向治疗剂化合物
44.用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症，其中所述治疗是癌症的靶向疗法治疗。
45.第二方面的术语“靶向疗法”应根据本领域进行理解。
46.如本领域已知的，靶向疗法或分子靶向疗法是癌症的主要医学治疗(药物疗法)形式之一，其它是例如细胞毒性化学疗法。作为分子医学的形式，靶向疗法通过干扰致癌作用和肿瘤生长所需的特异性靶向分子而不是通过简单地干扰所有分裂细胞(例如使用传统化学疗法)来阻止癌细胞的生长。
47.本发明的第三方面涉及一种药物组合，其包括：
48.(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
49.(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
50.(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
51.(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
52.(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
53.(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
54.以及
55.(b3)：免疫治疗剂化合物
56.用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症，其中所述治疗是癌症的免疫疗法治疗。
57.第三方面的术语“免疫疗法”应根据本领域进行理解。
58.如本领域已知的，免疫疗法通过激活或抑制免疫系统来治疗疾病。旨在引发或放大免疫应答的免疫疗法被归类为激活免疫疗法，而减少或抑制免疫反应的免疫疗法被归类为抑制免疫疗法。近年来，免疫疗法成为了研究人员、临床医生和制药公司的极大兴趣，尤其是免疫疗法有望治疗各种形式的癌症。
59.本发明的第四方面涉及一种药物组合物，其包括：
60.(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
61.(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
62.(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
63.(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
64.(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
65.(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
66.用于治疗人类患者的癌症，其中所述治疗是癌症的放射疗法治疗。
67.第四方面的术语“放射疗法”应根据本领域进行理解。
68.如本领域已知的，放射疗法(也被称为放射疗法(radiation therapy))是使用高剂量放射杀死癌细胞和缩小肿瘤的癌症治疗。
69.本发明的第五方面涉及一种药物组合，其包括：
70.(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
71.(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
72.(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
73.(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
74.(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
75.(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
76.以及
77.(b1)：化学治疗剂化合物
78.用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
79.替莫唑胺；
80.拓扑替康(topotecan)；
81.伊立替康(irinotecan)；
82.环磷酰胺(cyclophosphamide)；
83.氟尿嘧啶(fluorouracil)；
84.奥沙利铂(oxaliplatin)；
85.甲酰四氢叶酸(leucovorin)；以及
86.多柔比星(doxorubicin)。
87.当本文通常提及化合物(b)时，应理解为指化合物(b1)、化合物(b2)和/或化合物(b3)中的任一种。
88.如技术人员在本发明上下文中所理解的-上述相关方面的化合物(b)的药剂当然不是上述相关方面的化合物(a)的范围内的化合物。
89.如技术人员在本发明上下文中所理解的-关于本文所讨论的组合治疗，如果两种化合物(a)和(b)例如作为单一组合物同时施用或者例如作为两种单独的组合物依次施用，
那么这不是必需的。重要的是，当施用第二种化合物/药剂时，首先施用的有效量的化合物/药剂在患者体内和/或已经在患者体内发挥了其作用。
90.如技术人员在本发明上下文中所理解的-本发明的各方面涉及化合物(a)与至少一种化合物(b)的组合，例如化合物(a)+化合物(b1)、化合物(a)+化合物(b2)、化合物(a)+化合物(b3)或化合物(a)+化合物(b1)+化合物(b3)的组合。还应理解，由于化合物(a)可以与根据本发明的第四方面所述的放射疗法组合施用，所以放射疗法也可以与上文提及的与任何化合物(b)的组合组合施用。
91.因此，上述各相关方面的术语“组合”在本文中涉及化合物(a)与(b)的各种组合，例如在单一药物组合物中、在由单一活性化合物的单独药物调配物/组合物构成的组合混合物(如“罐混合(tank-mix)”)中以及当以依次方式(即，一个接一个地用相当短的时间段，如几个小时或几天或同时施用)施用时单一活性成分的组合使用。应用化合物(a)和(b)的顺序不是必需的。
92.可以调配化合物(a)和(b)的组合用于同时、单独或依次施用。具体地，如果施用不是同时的，那么化合物在彼此接近的相对较近的时间施用。此外，化合物以相同或不同的剂型或通过相同或不同的施用途径施用，例如一种化合物可以静脉内施用而另一种化合物可以口服施用。可以例如以以下方式施用两种化合物的组合：
[0093]-作为属于相同药物调配物的一部分的组合，那么两种化合物总是同时施用；
[0094]-作为两个单元/组合物的组合，每个单元/组合物都具有产生同时、依次或单独施用的可能性的物质之一。
[0095]
例如，化合物(a)独立于化合物(b)(即以在两个单元中)但同时施用。
[0096]
在另一个合适的实例中，首先施用化合物(a)，并且然后单独地或依次地施用化合物(b)-可替代地，首先施用化合物(b)，并且然后单独地或依次地施用化合物(a)。
[0097]
在另一个合适的实例中，当施用两种化合物(b)时，首先施用化合物(a)，第二，单独地或依次地施用第一种化合物(b)，并且然后第三，单独地或依次地施用第二种化合物(b)。可替代地，首先施用第一种化合物(b)，第二，单独地或依次地施用第二种化合物(b)，并且然后第三，单独地或依次地施用化合物(a)。可替代地，首先施用第一种化合物(b)，第二，单独地或依次地施用化合物(a)，并且然后第三，单独地或依次地施用第二种化合物(b)。
[0098]
例如关于“药物组合物”的术语“药物”应根据本领域理解-即所述术语是指其形式准许活性成分的生物活性有效并且生理上可耐受的制剂/组合物，即，所述制剂/组合物不包含对将要施用所述组合物的受试者具有不可接受毒性的另外的组分。具体地，术语“药学上可接受的”是指其被州或联邦政府的监管机构批准或被包含在美国药典(u.s.pharmacopoeia)或其它公认的用于动物，并且更具体地用于人类的药典中。
[0099]
下文仅通过实例的方式描述本发明的实施例。
[0100]
本文所描述的优选实施例与本文所描述的另一个优选实施例的组合是甚至更优选的实施例。
附图说明
[0101]
abtl0812和abtl在本说明中的使用没有区别。
[0102]
图1：abtl0812(abtl)和替莫唑胺(tmz)在la1-5s和sk-n-be(2)细胞中的细胞毒性。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0103]
图2：abtl0812和拓扑替康在la1-5s中的细胞毒性。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0104]
图3：abtl0812和伊立替康在la1-5s中的细胞毒性。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0105]
图4：abtl0812和环磷酰胺(cyclophosphamide)在la1-5s中的细胞毒性。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0106]
图5：abtl0812和硼替佐米(bortezomib)在体外对多发性骨髓瘤细胞系jjn-3和opm2具有很强的协同效应。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0107]
图6：abtl0812在使用miapaca2细胞植入裸小鼠的人胰腺癌异种移植模型中显著增强folfirinox的抗癌作用而不增加毒性。结果表明组合治疗可能对胰腺癌的治疗具有临床意义。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0108]
图7：abtl0812在使用石川细胞(ishikawa cell)植入裸小鼠的人子宫内膜癌异种移植模型中显著增强多柔比星(doxorubicin)的抗癌作用而不增加毒性。结果表明abtl0812加多柔比星的组合疗法可能对子宫内膜癌的治疗具有临床意义。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0109]
图8：abtl0812增加携带胶质母细胞瘤肿瘤小鼠的无病存活期并增强替莫唑胺的抗肿瘤活性。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0110]
图9：abtl0812减少胶质母细胞瘤肿瘤(u87mg、t98g细胞)的生长并增强放射疗法的抗肿瘤活性。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0111]
图10：abtl0812增加携带胶质母细胞瘤肿瘤小鼠的无病存活期并增强放射疗法的抗肿瘤活性。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0112]
图11：abtl0812在使用石川细胞植入裸小鼠的人子宫内膜癌异种移植模型中显著增强奥拉帕尼(olaparib)的抗癌作用而不增加毒性。结果表明abtl0812加奥拉帕尼的组合疗法可能对子宫内膜癌的治疗具有临床意义。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0113]
图12：abtl0812在使用石川细胞植入裸小鼠的人子宫内膜癌异种移植模型中显著增强贝伐单抗(bevacizumab)的抗癌作用而不增加毒性。结果表明abtl0812加贝伐单抗的组合疗法可能对子宫内膜癌的治疗具有临床意义。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0114]
图13：abtl0812通过显著增加il-1b和tnf-a基因表达来增强朝向m1促炎性抗肿瘤表型的巨噬细胞极化。重要地，abtl0812通过显著抑制il10基因表达(免疫抑制的主要调节剂之一)来抑制m2朝向抗炎性促肿瘤表型的极化。tbp是tata盒结合性蛋白。nt意指非极化巨噬细胞。abtl50um意指用50μm abtl0812处理的非极化巨噬细胞。m1意指m1表型的极化巨噬细胞。m1+abtl50意指用50μm abtl0812处理的m1表型的极化巨噬细胞。abtl100um意指用100μm abtl0812处理的非极化巨噬细胞。m1+abtl100意指用100μm abtl0812处理的m1表型的极化巨噬细胞。m2意指m2表型的极化巨噬细胞。m2+abtl50意指用50μm abtl0812处理的m2表型的极化巨噬细胞。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0115]
图14：abtl0812在子宫内膜和胰腺癌细胞系中诱导pdl1表达，abtl0812介导的pdl1表达显著低于由pdl1表达的主要调节剂ifnγ诱导的pdl1表达水平。这些结果突出了
abtl0812与免疫检查点抑制剂的潜在组合，因为介导的pdl1水平的诱导将使癌细胞可由免疫检查点抑制剂靶向。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0116]
图15：abtl0812促进人胰腺miapaca2癌细胞中的免疫原性癌细胞死亡，所述免疫原性癌细胞死亡通过显著诱导持续的il-1b和tnf-a持续的基因表达来诱导免疫原性因子的释放，所述免疫原性因子促进巨噬细胞的持续活化和其朝向m1促炎性和抗肿瘤表型的极化。这些数据连同图13表明abtl0812除了对人巨噬细胞的直接作用外，还能够通过其对癌细胞的抗癌作用来免疫调节肿瘤微环境，因此突出了其与免疫检查点抑制剂的潜在组合以增强抗癌功效。rpmi或nt涉及初始条件培养基(对照)。miapaca-2 nt或miapaca-2 cm nt涉及来自未经处理的miapaca2细胞的条件培养基。miapaca-2 40um abtl涉及来自经abtl0812处理的miapaca2细胞(40μm abtl0812)的条件培养基。miapaca-2 cm 70um涉及来自经abtl0812处理的miapaca2细胞(70μm abtl0812)的条件培养基。tbp是tata盒结合性蛋白。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0117]
图16：通过将llc1细胞皮下植入c57bl6小鼠中，单独施用abtl0812增加同基因小鼠肺癌模型的存活率。与抗pd1、abtl0812和媒剂治疗相比，abtl0812与抗pd1组合示出更高的存活率增加。数据表明abtl0812增强了抗pd1治疗，从而导致小鼠存活增加。此结果指示组合抗pd1和abtl0812在人类患者中的潜在益处。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0118]
图17：abtl0812单独施用示出与抗pd1加卡铂/紫杉醇治疗类似的肿瘤体积减少，与通过将llc1细胞皮下植入c57bl6小鼠的媒剂组同基因小鼠肺癌模型相比，两种治疗均显著减少肿瘤体积。三重组合abtl0812加抗pd1加卡铂/紫杉醇治疗引入最高肿瘤体积减少，显著改善治疗的其余部分。这种更高的抗癌功效与肿瘤内cd8/cd4基因表达水平的增加相关，从而在体内验证了先前的体外观察(图15和13)。通常评估cd8/cd4比率以分析药物治疗后的细胞毒性抗肿瘤t淋巴细胞。结果表明用于肺癌患者的标准治疗abtl0812加抗pd1+紫杉醇/卡铂组合疗法可能对肺癌的治疗具有临床意义。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0119]
图18：abtl0812与抗pd1加卡铂/紫杉醇治疗组合通过将llc1细胞腹膜内植入c57bl6小鼠中，在同基因肺癌小鼠模型中诱导最高肿瘤体积减少。结果表明用于肺癌患者的标准治疗abtl0812加抗pd1+紫杉醇/卡铂组合疗法可能对肺癌的治疗具有临床意义。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0120]
图19：abtl0812在体外诱导子宫内膜癌细胞系和胰腺癌细胞系中的pdl1表达。这些结果突出了abtl0812与免疫检查点抑制剂的潜在组合，因为pdl1水平的诱导将使癌细胞可由免疫检查点抑制剂靶向。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0121]
图20：abtl0812抑制激活的和非激活的人原代t细胞中pd1的表达。pd1介导t细胞活性的抑制信号，因此abtl0812对所述t细胞活性的降低可以促进t细胞的激活以引发其抗癌活性。rfu意指相对荧光单位。wb意指蛋白质印迹。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0122]
图21：abtl0812促进抑制人癌细胞中免疫抑制性趋化因子的释放，从而导致促进促炎性环境。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0123]
图22：abtl0812通过诱导icd标志物细胞外hmgb1和atp、表面钙网蛋白和激活的胱天蛋白酶3和8的剂量依赖性增加来诱导人胰腺癌细胞中的免疫原性细胞死亡(icd)。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0124]
图23：abtl0812促进cd3 t细胞在经受子宫内膜癌的pten-ko小鼠的肿瘤病变中的
浸润，同时阻碍致癌进展并减少肿瘤病变(ein，子宫内膜上皮内瘤变)。un为未经处理。
[0125]
图24：abtl0812通过显著增加il-1β和tnf-α基因表达来增强朝向m1促炎性抗肿瘤表型的永生化thp-1和人原代巨噬细胞极化。重要地，abtl0812通过显著抑制il10基因表达(免疫抑制的主要调节剂之一)来抑制m2朝向抗炎性促肿瘤表型的极化。这些数据表明abtl0812在巨噬细胞中对抗肿瘤表型具有免疫调节作用，潜在地与免疫疗法协同作用。意指媒剂。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0126]
图25：abtl0812促进促炎性细胞因子的释放和人原代巨噬细胞中和永生化thp1巨噬细胞中免疫抑制性细胞因子的分泌的抑制，从而导致促进促炎性环境。这些结果支持与免疫疗法的潜在协同作用。ctrl意指控制。参见本文工作实例获得另外的细节。
[0127]
图26：当两种细胞类型在体外共培养时，abtl0812增强激活的t细胞对癌细胞的细胞毒性作用。
[0128]
图27：abtl0812单一疗法示出与抗pd1类似的肿瘤体积减少，与皮下植入mt5胰腺癌细胞的c57bl6小鼠的同系小鼠模型中与媒剂组相比，两种治疗均显著减少肿瘤体积。与抗pd1治疗相比，abtl0812更有效地促进促炎性抗肿瘤环境，从而导致肿瘤内骨髓细胞和nk抗癌细胞的增加以及脾脏中th1/th2比率增加。
[0129]
图28：与包含单独的抗pd1和abtl0812+folfirinox的组的其它部分相比，abtl0812与抗pd1和folfirinox组合施用示出最高肿瘤体积减少，从而促进促炎性抗肿瘤环境并且增加肿瘤内骨髓细胞和cd8抗癌细胞浸润。
具体实施方式
[0130]
相关方面的化合物(a)
[0131]
优选实施例为其中
[0132]
(i)a可为介于5与7之间的任何整数值，
[0133]
(ii)b可为介于2与4之间的任何整数值，
[0134]
(iii)c可为介于1到5之间的任何整数值。
[0135]
优选地，r1可以为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2。
[0136]
优选地，r2可以为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2。
[0137]
在优选实施例中，r1为h，并且r2为oh。
[0138]
在另一个优选实施例中，r1为na，并且r2为oh。
[0139]
优选地，化合物(a)是选自由以下组成的组的至少一种化合物：
[0140]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)；
[0141]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
3-ch3(183a1)；
[0142]
cooh-choh-(ch2)
3-(ch＝ch-ch2)
3-(ch2)
3-ch3(183a2)；
[0143]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
4-(ch2)
3-ch3(204a1)；
[0144]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
5-ch3(205a1)；以及
[0145]
cooh-choh-ch
2-(ch＝ch-ch2)
6-ch3(226a1)。
[0146]
最优选地，化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)。
[0147]
化合物(a)的药学上可接受的盐是指化合物(a)的任何药学上可接受的盐。如本领域已知的，存在许多已知的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的实例包含但不限于钠(na)、钾、醋酸盐、硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、链烷磺酸盐(例如，甲磺酸盐(methane-sulfonate/mesylate))、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。在一具体实施例中，化合物(a)的盐是钠盐。
[0148]
如技术人员在本发明上下文中所理解的，当本文提及化合物(a)的优选式时，例如abtl0812-其在本文中被理解为其也作为其盐而被包含-例如，当本文提及化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)时，那么也提及abtl0812的盐。
[0149]
优选地，化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)的钠盐。
[0150]
化学治疗剂-第一方面的化合物(b1)
[0151]
在一些实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0152]
替莫唑胺；
[0153]
拓扑替康；
[0154]
伊立替康；
[0155]
环磷酰胺；
[0156]
氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶，5-fu)；
[0157]
顺铂；
[0158]
卡铂；
[0159]
奥沙利铂；
[0160]
甲酰四氢叶酸；
[0161]
多柔比星；
[0162]
博莱霉素(bleomycin)；
[0163]
卡培他滨(capecitabine)；
[0164]
丝裂霉素b(mitomycin b)；
[0165]
紫杉醇；
[0166]
纳布紫杉醇(nab-paclitaxel)；
[0167]
多西他赛；
[0168]
吉西他滨(gemcitabine)；
[0169]
甲氨蝶呤(methotrexate)；
[0170]
培美曲塞(pemetrexed)；
[0171]
阿糖胞苷(cytarabine)；
[0172]
巯基嘌呤(mercaptopurine)；
[0173]
葡磷酰胺(glufosfamide)；
[0174]
伊沙匹隆(ixabepilone)；
[0175]
尼莫司汀(nimustine)；
[0176]
卡莫司汀(carmustine)；
[0177]
洛莫司汀(lomustine)；
[0178]
米托蒽醌(mitoxantrone)；
[0179]
依托泊苷(etoposide)；
[0180]
长春新碱(vincristine)；
[0181]
长春碱(vinblastine)；以及
[0182]
他莫昔芬(tamoxifen)。
[0183]
如在本发明上下文中所理解的-关于所列出的化合物(b1)的优选实例中的任何优选实例，最优选的是，化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)。
[0184]
在其它实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0185]
替莫唑胺；
[0186]
拓扑替康；
[0187]
伊立替康；
[0188]
环磷酰胺；
[0189]
氟尿嘧啶；
[0190]
奥沙利铂；
[0191]
甲酰四氢叶酸；以及
[0192]
多柔比星。
[0193]
在其它实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0194]
替莫唑胺；
[0195]
拓扑替康；
[0196]
氟尿嘧啶；
[0197]
奥沙利铂；以及
[0198]
甲酰四氢叶酸。
[0199]
在其它实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0200]
伊立替康；
[0201]
氟尿嘧啶；
[0202]
奥沙利铂；以及
[0203]
甲酰四氢叶酸。
[0204]
在其它实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0205]
卡铂；以及
[0206]
紫杉醇。
[0207]
可以优选的是，第一方面的化合物(b1)包括两种或更多种不同的化学治疗剂(具体地，当化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)时)-如优选地其中第一方面的化合物(b1)包括：
[0208]
伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶；或者
[0209]
伊立替康、拓扑替康和环磷酰胺。
[0210]
如技术人员在本发明上下文中所理解的-可以将化合物(b1)与其它癌症治疗相关药剂/化合物，例如一种或多种靶向治疗剂(b2)组合使用。
[0211]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是替莫唑胺-具体地其中癌症是成神经细胞瘤癌(参见实例1.1获得此优选实施例的实例)。
[0212]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是拓扑替康-具体地其中癌症是成神经细胞瘤癌。(参见实例1.2获得此优选实施例的实例)。在其它实施例中，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是拓扑替康-具体地其中癌症是胰腺癌或胶质母细胞瘤。
[0213]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是伊立替康-具体地其中癌症是成神经细胞瘤癌。(参见实例1.3获得此优选实施例的实例)。在其它实施例中，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是伊立替康-具体地其中癌症是胰腺癌或胶质母细胞瘤。
[0214]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是环磷酰胺-具体地其中癌症是成神经细胞瘤癌。(参见实例1.4获得此优选实施例的实例)。
[0215]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶-具体地其中癌症是胰腺癌。(参见例如实例3.1获得此优选实施例的实例)。
[0216]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是多柔比星-具体地其中癌症是子宫内膜细胞癌。(参见实例3.2获得此优选实施例的实例)。
[0217]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是替莫唑胺-具体地其中癌症是胶质母细胞瘤癌。(参见实例3.3获得此优选实施例的实例)。
[0218]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是培美曲塞-具体地其中癌症是肺癌。
[0219]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是甲氨蝶呤-具体地其中癌症是肺癌。
[0220]
优选地，如本文所讨论的药物组合是其中化合物(a)是abtl0812，并且其中：
[0221]-化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0222]-化合物(b1)是拓扑替康，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0223]-化合物(b1)是伊立替康，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0224]-化合物(b1)是环磷酰胺，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0225]-化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶，并且所述癌症是胰腺癌；
[0226]-化合物(b1)是多柔比星，并且所述癌症是子宫内膜癌；或
[0227]-化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述癌症是胶质母细胞瘤。
[0228]
化合物(a)(具体地abtl0812)优选地口服施用。
[0229]
化合物(a)(具体地abtl0812)的施用剂量优选地为每日剂量200mg到7000mg，更优选地每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地每日剂量3500mg到4300mg。
[0230]
优选地，化合物(a)(具体地abtl0812)的每日剂量为每日施用3次每日剂量-最优选地如3次1200-1400mg。
[0231]
靶向治疗剂-第二方面的化合物(b2)
[0232]
优选地，化合物(b2)是选自由以下组成的组的至少一种靶向治疗剂化合物：
[0233]
伊马替尼(imatinib)；
[0234]
吉非替尼(gefitinib)；
[0235]
埃罗替尼(erlotinib)；
[0236]
索拉非尼(sorafenib)；
[0237]
舒尼替尼(sunitinib)；
[0238]
达沙替尼(dasatinib)；
[0239]
拉帕替尼(lapatinib)；
[0240]
尼罗替尼(nilotinib)；
[0241]
蛋白酶体抑制剂(优选地卡非佐米(carfilzomib)、伊沙佐米(ixazomib)或硼替佐米)；
[0242]
他莫昔芬；
[0243]
janus激酶抑制剂(优选地托法替尼(tofacitinib))；
[0244]
alk抑制剂(优选地克唑替尼(crizotinib))；
[0245]
bcl-2抑制剂(优选地奥巴托克斯(obatoclax)、纳威托克斯(navitoclax)或棉酚(gossypol))；
[0246]
parp抑制剂(优选地伊尼帕尼(iniparib)或奥拉帕尼(olaparib))；
[0247]
pi3k抑制剂(优选地哌立福辛(perifosine))；
[0248]
阿帕替尼(apatinib)；
[0249]
braf抑制剂(优选地维罗非尼(vemurafenib)或达拉非尼(dabrafenib))；
[0250]
mek抑制剂(优选地曲美替尼(trametinib))；
[0251]
cdk抑制剂；
[0252]
hsp90抑制剂；
[0253]
盐霉素(salinomycin)；
[0254]
val-083(二去水卫矛醇(dianhydrogalactitol))；
[0255]
长春福肽(vintafolide)；
[0256]
丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(优选地西罗莫司(temsirolimus)、依维莫司(everolimus)、维罗非尼、曲美替尼或达拉非尼)；以及
[0257]
单克隆抗体(优选地抗vegf mab；利妥昔单抗(rituximab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、阿仑单抗(alemtuzumab)、西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗
(panitumumab)或贝伐单抗)。
[0258]
如在本发明上下文中所理解的-关于所列出的化合物(b2)的优选实例中的任何优选实例，最优选的是，化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)。
[0259]
在其它实施例中，化合物(b2)是选自由以下组成的组的至少一种靶向治疗剂化合物：
[0260]
蛋白酶体抑制剂(优选地卡非佐米、伊沙佐米或硼替佐米)；
[0261]
parp抑制剂(优选地伊尼帕尼或奥拉帕尼)；以及
[0262]
单克隆抗体(优选地抗vegf mab、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、阿仑单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗或贝伐单抗)。
[0263]
在其它实施例中，化合物(b2)是选自由以下组成的组的至少一种靶向治疗剂化合物：
[0264]
硼替佐米；
[0265]
奥拉帕尼；以及
[0266]
贝伐单抗。
[0267]
可以优选的是，第二方面的化合物(b2)包括两种或更多种不同的靶向治疗剂(具体地，当化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)时)。
[0268]
如技术人员在本发明上下文中所理解的-可以将化合物(b2)与其它癌症治疗相关药剂/化合物，例如一种或多种化学治疗剂化合物组合使用。
[0269]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b2)是硼替佐米-具体地其中癌症是多发性骨髓瘤癌(参见实例2.1获得此优选实施例的实例)。
[0270]
硼替佐米是蛋白酶体抑制剂，并且可以说不同的蛋白酶体抑制剂基于类似的机制来治疗癌症-因此据信本文所讨论的针对硼替佐米的阳性实验数据使得类似的阳性结果也可以是通过使用除硼替佐米以外的其它蛋白酶体抑制剂，例如卡非佐米或伊沙佐米，可获得的是合理的。
[0271]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b2)是奥拉帕尼-具体地其中癌症是子宫内膜癌(参见实例5.1获得此优选实施例的实例)。
[0272]
奥拉帕尼是parp抑制剂，并且可以说不同的parp抑制剂基于类似的机制来治疗癌症-因此据信本文所讨论的针对奥拉帕尼的阳性实验数据使得类似的阳性结果也可以是通过使用除奥拉帕尼以外的其它parp抑制剂，例如伊尼帕尼，可获得的是合理的。
[0273]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b2)是贝伐单抗-具体地其中癌症是子宫内膜癌(参见实例5.2获得此优选实施例的实例)。
[0274]
贝伐单抗通过抑制血管内皮生长因子(vegf)来减缓新血管的生长-即，贝伐单抗可以被视为抗vegf mab的实例。
[0275]
因此，贝伐单抗可以被视为抗vegf mab的实例，并且可以说不同的抗vegf mab基于类似的机制来治疗癌症-因此据信本文所讨论的针对贝伐单抗的阳性实验数据使得类似的阳性结果可以是通过使用除贝伐单抗以外的其它抗vegf mab可获得的是合理的。
[0276]
优选地，如本文所讨论的药物组合是其中化合物(a)是abtl0812，并且其中：
[0277]-化合物(b2)是硼替佐米，并且所述癌症是多发性骨髓瘤癌；
[0278]-化合物(b2)是奥拉帕尼，并且所述癌症是子宫内膜癌；或
[0279]-化合物(b2)是贝伐单抗，并且所述癌症是子宫内膜癌。
[0280]
化合物(a)(具体地abtl0812)优选地口服施用。
[0281]
化合物(a)(具体地abtl0812)的施用剂量优选地为每日剂量200mg到7000mg，更优选地每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地每日剂量3500mg到4300mg。
[0282]
优选地，化合物(a)(具体地abtl0812)的每日剂量为每日施用3次每日剂量-最优选地如3次1200-1400mg。
[0283]
免疫治疗剂-第三方面的化合物(b3)
[0284]
如本领域已知的，检查点抑制剂疗法是癌症免疫疗法的一种形式。所述疗法靶向免疫检查点，免疫检查点是免疫系统的关键调节剂，其在受到刺激时可以抑制对免疫刺激的免疫应答。检查点抑制剂是能够阻断免疫检查点蛋白的分子。因此，检查点抑制剂增强促进消除癌细胞的免疫应答。
[0285]
目前经批准的检查点抑制剂通常是抗体并且靶向分子ctla4、pd-1和pd-l1-这些检查点抑制剂可以被称为抗pd1检查点抑制剂、抗pdl1检查点抑制剂、抗ctla4检查点抑制剂。
[0286]
以下工作实例6.1的结论写到：
[0287]“这些结果表明，除了abtl0812对肿瘤细胞的抗癌作用外，其还刺激免疫系统以形成促炎性表型，从而改变肿瘤微环境，促进其它免疫细胞作为细胞毒性t淋巴细胞募集，因此将诱导免疫系统抑制的“冷”肿瘤变为“热”且免疫源性肿瘤，通过促进促炎性和抗肿瘤微环境突出了abtl0812与具体地免疫检查点抑制剂的潜在组合以增强抗癌功效。”[0288]
以下工作实例7的结论写到：
[0289]
“…
abtl0812在体内的免疫调节作用示出其如何诱导肿瘤病变内t淋巴细胞的浸润，指示存在有利于免疫细胞浸润以杀死癌细胞的促炎性抗肿瘤微环境。
…
突出了其与具体地免疫检查点抑制剂的潜在组合以增强抗癌功效。”[0290]
因此，本文的实验数据(参见实例6-8)提供了证据，表明abtl0812本身对于癌症的免疫疗法治疗具有积极的免疫调节作用是合理的-具体地与免疫检查点抑制剂的使用有关。
[0291]
肿瘤可以操纵pd-1/pd-l1免疫检查点通路来关闭癌症靶向性t细胞。因此，在一些实施例中，化合物(b3)是靶向pd-1/pd-l1通路的检查点抑制剂，也被称为抗pd-1或抗pd-l1，其可以使得t细胞能够消除癌细胞。
[0292]
ctla-4是可以被能够阻断ctla-4受体的检查点抑制剂靶向的另一个通路。在一些实施例中，化合物(b3)是靶向ctla-4的检查点抑制剂。
[0293]
在一些实施例中，检查点抑制剂可以是基于抗体的药剂或非基于抗体的药剂(例如，小分子或肽)。
[0294]
在一具体实施例中，检查点抑制剂是检查点抑制剂抗体。靶向pd-1/pdl-1通路的检查点抑制剂的实例为阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、西米普利单抗(cemiplimab)、度伐鲁单抗(durvalumab)、纳武单抗(nivolumab)和派姆单抗(pembrolizumab)。伊匹单抗(ipilimumab)是靶向ctla-4通路的检查点抑制剂的实例。
[0295]
在另一个实施例中，检查点抑制剂是非基于抗体的药剂(例如小分子或肽)。小分子检查点抑制剂的实例是基于肽的免疫调节剂。具体地，某些大环肽已被证明抑制pd-1和pdl-1。进一步地，抗水解d肽也已被证明拮抗pd-l1。被表征为检查点抑制剂的免疫调节小分子的其它实例是磺胺间甲氧嘧啶和磺胺甲二唑衍生物(磺酰胺)、联芳基衍生化合物和转化为拟肽或受氨基酸启发的小分子的非肽分子。
[0296]
在其它实施例中，检查点抑制剂可以靶向在肿瘤免疫逃避和癌症进展中起作用的vista和cd47/sirpα信号传导通路。靶向这些通路的非抗体肽是具有抗肿瘤作用的免疫调节剂小分子的实例。
[0297]
优选地，化合物(b3)是选自由以下组成的组的至少一种免疫治疗剂化合物：
[0298]
检查点抑制剂抗体(优选地抗pd1、抗pdl1或抗ctla4检查点抑制剂抗体)。
[0299]
如在本发明上下文中所理解的-关于所列出的化合物(b3)的优选实例中的任何优选实例，最优选的是，化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)。
[0300]
优选的抗pd1检查点抑制剂抗体的实例是纳武单抗、派姆单抗(pembrolizumab)或斯巴达珠单抗(spartalizumab)。
[0301]
在本文的工作实例中，使用可被视为对应于派姆单抗的抗pd1检查点抑制剂抗体获得了阳性结果。简而言之，派姆单抗供人类使用，并且在本文的工作实例中使用了经优化以用于本文工作实例中使用的小鼠模型的经修饰版本。
[0302]
因此，在一优选实施例中是抗pd1检查点抑制剂抗体派姆单抗。
[0303]
优选的抗pdl1检查点抑制剂抗体的实例是阿特珠单抗、阿维鲁单抗或度伐鲁单抗。
[0304]
优选的抗ctla4检查点抑制剂抗体实例是伊匹单抗。
[0305]
本文实例8示出了与使用抗pd1检查点抑制剂抗体有关的阳性结果-因此，优选的实施例涉及其中化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体(优选地纳武单抗、派姆单抗或斯巴达珠单抗)-具体地其中化合物(a)是abtl0812。
[0306]
可以优选的是，第三方面的化合物(b3)包括两种或更多种不同的检查点抑制剂抗体(具体地，当化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)时)。
[0307]
如技术人员在本发明上下文中所理解的-可以将化合物(b3)与其它癌症治疗相关药剂/化合物，例如一种或多种化学治疗剂化合物组合使用。
[0308]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体(最优选地派姆单抗)-具体地其中癌症是肺癌(参见实例8.1获得此优选实施例的实例)。
[0309]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体(最优选地派姆单抗)，所述化合物(a)和化合物(b3)进一步与至少一种化合物(b1)(例如紫杉醇和卡铂)组合施用-具体地其中癌症是肺癌(参见实例8.2和8.3获得此优选实施例的实例)。
[0310]
优选地，如本文所讨论的药物组合是其中化合物(a)是abtl0812，并且其中：
[0311]-化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体(最优选地派姆单抗)，并且所述癌症是肺癌；或
[0312]-化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体(最优选地派姆单抗)，其与至少一种化合
物(b1)，具体地紫杉醇和卡铂组合施用，并且所述癌症是肺癌。
[0313]
以下工作实例6.7的结论写到(着重强调)：
[0314]“abtl0812可以在肿瘤中诱导icd(免疫原性细胞死亡)，使所述肿瘤更加免疫原性并且对于免疫系统更加可靶向，从而帮助将诱导免疫系统抑制的“冷”肿瘤变成“热”且免疫原性肿瘤
…”
[0315]
以下工作实例6.9的结论写到(着重强调)：
[0316]“abtl0812促进促炎性因子的分泌并抑制癌细胞中免疫抑制因子的释放。这些数据与m1巨噬细胞表型的增强和m2表型的抑制组合，表明abtl0812可以促进促炎性抗肿瘤环境对其对免疫细胞的作用，突出了其与其它免疫疗法的潜在组合以增加对肿瘤的功效，特别是在那些高度免疫抑制的肿瘤，如胰腺癌中。”[0317]
因此，本文的实验数据(参见实例6-8)提供了证据表明abtl0812本身具有积极的免疫调节作用以增强与免疫系统应答和其调节(例如细胞因子)而不是检查点抑制剂相互作用的治疗的抗癌功效是合理的。因此，abtl0812可以增强免疫调节剂的抗癌作用对于技术人员来说是显而易见的。
[0318]
因此，在一些实施例中，化合物(b3)是抗癌免疫调节剂化合物。术语“抗癌免疫调节剂化合物”(也被称为“抗癌免疫调节剂药剂化合物”)在本文中用于指代作为能够靶向调节免疫系统的活性，从而改进其攻击和消除癌细胞的能力的通路的分子的免疫调节剂。免疫调节剂是癌症免疫治疗剂中的一组已知分子，并且可以包括例如检查点抑制剂、细胞因子、激动剂和佐剂。免疫系统的调节包括免疫系统的机制的刺激或抑制。
[0319]
在一些实施例中，化合物(b3)是免疫治疗剂化合物，所述免疫治疗剂化合物是为细胞因子的抗癌免疫调节剂化合物。细胞因子是调节免疫细胞成熟、生长和反应性的信使分子。免疫调节剂细胞因子的实例是靶向il-2/il-2r通路的细胞因子和靶向ifnar1和/或ifnar2通路的细胞因子。阿地白介素(aldesleukin)是靶向il-2/il-2r通路的免疫调节剂细胞因子的实例。靶向ifnar1和/或ifnar2通路的免疫调节剂细胞因子的实例是干扰素α-2a、干扰素α-2b(intron)和聚乙二醇干扰素α-2b细胞因子的其它实例是用于治疗成神经细胞瘤的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)。
[0320]
在一些实施例中，化合物(b3)是免疫治疗剂化合物，所述免疫治疗剂化合物是为激动剂的抗癌免疫调节剂化合物。激动剂是能够激活促进适应性免疫应答的通路的分子。例如，免疫调节剂激动剂可以增强“杀伤”t细胞的激活或刺激先天免疫细胞(例如树突细胞)的活性。
[0321]
在一些实施例中，化合物(b3)是免疫治疗剂化合物，所述免疫治疗剂化合物是为佐剂的抗癌免疫调节剂化合物。佐剂是能够激活先天免疫系统中涉及的通路的分子，其可以刺激一般免疫应答并最终促进适应性免疫应答。免疫调节剂佐剂的实例是那些靶向toll样受体(例如tlr7或tlr3)的佐剂。咪喹莫特(imiquimod)和poly iclc是靶向toll样受体用于治疗癌症的佐剂的实例。
[0322]
化合物(a)(具体地abtl0812)优选地口服施用。
[0323]
化合物(a)(具体地abtl0812)的施用剂量优选地为每日剂量200mg到7000mg，更优选地每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地每
日剂量3500mg到4300mg。
[0324]
优选地，化合物(a)(具体地abtl0812)的每日剂量为每日施用3次每日剂量-最优选地如3次1200-1400mg。
[0325]
放射疗法治疗-第四方面
[0326]
优选地，放射疗法治疗通过辐射剂量2到200gy，例如，5到100gy或更优选地15到85gy完成。
[0327]
对于淋巴瘤，优选的是，放射疗法治疗通过辐射剂量15到45gy完成。
[0328]
对于实体瘤，优选的是，放射疗法治疗通过辐射剂量55到85gy完成。
[0329]
优选地，在施用化合物(a)(优选地abtl0812)之后施用辐射剂量-例如在第一次施用化合物(a)(优选地abtl0812)之后至少一天。
[0330]
如在本发明上下文中所理解的-关于如本文所描述的放射疗法治疗的任何实施例，最优选的是，化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)。
[0331]
如技术人员在本发明上下文中所理解的-可以将放射疗法治疗与相关癌症治疗相关药剂/化合物，例如一种或多种化学治疗剂化合物的使用组合。
[0332]
关于第四方面的放射疗法的使用-优选地，癌症是胶质母细胞瘤癌。
[0333]
关于第四方面的放射疗法的使用-特别优选的是，化合物(a)是abtl0812-具体地其中癌症是胶质母细胞瘤癌。(参见实例4获得此优选实施例的实例)。
[0334]
关于第四方面的放射疗法的使用-特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，其与至少一种化合物(b1)(化学治疗剂化合物)组合施用。具体地，化合物(b1)是替莫唑胺或拓扑替康。具体地，癌症是胶质母细胞瘤癌。
[0335]
化合物(a)(具体地abtl0812)优选地口服施用。
[0336]
化合物(a)(具体地abtl0812)的施用剂量优选地为每日剂量200mg到7000mg，更优选地每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地每日剂量3500mg到4300mg。
[0337]
优选地，化合物(a)(具体地abtl0812)的每日剂量为每日施用3次每日剂量-最优选地如3次1200-1400mg。
[0338]
优选化学治疗剂-第五方面
[0339]
关于上文所讨论的第五方面-优选地，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0340]
替莫唑胺；
[0341]
拓扑替康；
[0342]
氟尿嘧啶；
[0343]
奥沙利铂；以及
[0344]
甲酰四氢叶酸。
[0345]
在其它实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0346]
伊立替康；
[0347]
氟尿嘧啶；
[0348]
奥沙利铂；以及
[0349]
甲酰四氢叶酸。
[0350]
在其它实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0351]
卡铂；以及
[0352]
紫杉醇。
[0353]
如在本发明上下文中所理解的-关于所列出的化合物(b1)的优选实例中的任何优选实例，最优选的是，化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)。
[0354]
可以优选的是，第五方面的化合物(b1)包括两种或更多种不同的化学治疗剂(具体地，当化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)时)-如优选地其中第一方面的化合物(b1)包括：
[0355]
伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶；或者
[0356]
伊立替康、拓扑替康和环磷酰胺。
[0357]
如技术人员在本发明上下文中所理解的-可以将化合物(b1)与其它癌症治疗相关药剂/化合物，例如一种或多种靶向治疗剂组合使用。
[0358]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是替莫唑胺-具体地其中癌症是成神经细胞瘤癌(参见实例1.1获得此优选实施例的实例)。
[0359]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是拓扑替康-具体地其中癌症是成神经细胞瘤癌。(参见实例1.2获得此优选实施例的实例)。在其它实施例中，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是拓扑替康-具体地其中癌症是胰腺癌或胶质母细胞瘤。
[0360]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是伊立替康-具体地其中癌症是成神经细胞瘤癌。(参见实例1.3获得此优选实施例的实例)。在其它实施例中，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是伊立替康-具体地其中癌症是胰腺癌或胶质母细胞瘤。
[0361]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是环磷酰胺-具体地其中癌症是成神经细胞瘤癌。(参见实例1.4获得此优选实施例的实例)。
[0362]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶-具体地其中癌症是胰腺癌。(参见例如实例3.1获得此优选实施例的实例)。
[0363]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是多柔比星-具体地其中癌症是子宫内膜细胞癌。(参见实例3.2获得此优选实施例的实例)。
[0364]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且化合物(b1)是替莫唑胺-具体地其中癌症是胶质母细胞瘤癌。(参见实例3.3获得此优选实施例的实例)。
[0365]
优选地，如本文所讨论的药物组合是其中化合物(a)是abtl0812，并且其中：
[0366]-化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0367]-化合物(b1)是拓扑替康，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0368]-化合物(b1)是伊立替康，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0369]-化合物(b1)是环磷酰胺，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0370]-化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶，并且所述癌症是胰腺癌；
[0371]-化合物(b1)是多柔比星，并且所述癌症是子宫内膜癌；或
[0372]-化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述癌症是胶质母细胞瘤。
[0373]
化合物(a)(具体地abtl0812)优选地口服施用。
[0374]
化合物(a)(具体地abtl0812)的施用剂量优选地为每日剂量200mg到7000mg，更优选地每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地每日剂量3500mg到4300mg。
[0375]
优选地，化合物(a)(具体地abtl0812)的每日剂量为每日施用3次每日剂量-最优选地如3次1200-1400mg。
[0376]
与本文所有方面有关的其它特定组合
[0377]
在本文的工作实例中，使用化合物(a)、化合物(b1)和化合物(b3)的组合，使用即三重组合，获得了积极的结果。
[0378]
因此，本发明还涉及一种药物组合，所述药物组合包括：
[0379]
(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
[0380]
(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
[0381]
(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
[0382]
(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
[0383]
(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
[0384]
(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
[0385]
(b1)：化学治疗剂化合物；以及
[0386]
(b3)：免疫治疗剂化合物
[0387]
用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症。
[0388]
在具体实施例中：(i)a可为介于5与7之间的任何整数值，(ii)b可为介于2与4之间的任何整数值，并且(iii)c可为介于1到5之间的任何整数值。在另一个实施例中，r1为h，并且r2为oh。
[0389]
在一具体实施例中，化合物(a)是选自由以下组成的组的至少一种化合物或其药学上可接受的盐：
[0390]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)；
[0391]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
3-ch3(183a1)；
[0392]
cooh-choh-(ch2)
3-(ch＝ch-ch2)
3-(ch2)
3-ch3(183a2)；
[0393]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
4-(ch2)
3-ch3(204a1)；
[0394]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
5-ch3(205a1)；以及
[0395]
cooh-choh-ch
2-(ch＝ch-ch2)
6-ch3(226a1)。
[0396]
具体地，化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。更具体地，化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)的钠盐。
[0397]
在一些实施例中，癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0398]
肺癌；
[0399]
非小细胞肺癌；
[0400]
鳞状细胞癌；
[0401]
腺癌；
[0402]
子宫内膜癌；
[0403]
子宫内膜浆液性癌；
[0404]
子宫内膜样癌；
[0405]
胰腺癌；
[0406]
胶质母细胞瘤；
[0407]
耐药复发性乳腺癌；
[0408]
头颈癌；
[0409]
多发性骨髓瘤癌；
[0410]
成神经细胞瘤；以及
[0411]
胆管癌。
[0412]
在一些实施例中，化合物(b3)是免疫治疗剂化合物，所述免疫治疗剂化合物是抗癌免疫调节剂化合物。在一具体实施例中，化合物(b3)是检查点抑制剂。本说明书的“免疫治疗剂-第三方面的化合物(b3)”部分中描述了具体实施例和实例。
[0413]
在一些实施例中，化合物(b3)是选自由以下组成的组的至少一种免疫治疗剂化合物：检查点抑制剂，优选地检查点抑制剂抗体。优选地，所述检查点抑制剂抗体是抗pd1抗体、抗pdl1抗体或抗ctla4抗体。
[0414]
在一些实施例中，化合物(b3)是选自由以下组成的组的至少一种免疫治疗剂化合物：
[0415]-抗pd1抗体，优选地其中所述抗pd1抗体是纳武单抗、派姆单抗或斯巴达珠单抗；
[0416]-抗pdl1抗体，优选地其中所述抗pdl1抗体是阿特珠单抗、阿维鲁单抗或度伐鲁单抗；
[0417]-抗ctla4抗体，优选地其中所述抗ctla4抗体是伊匹单抗。
[0418]
具体地，化合物(b3)是抗pd1抗体，优选地其中所述抗pd1抗体是派姆单抗。
[0419]
在一些实施例中：
[0420]-化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体，优选地派姆单抗，并且所述癌症是肺癌；或
[0421]-化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体，优选地派姆单抗，其与至少一种化合物(b1)，优选地紫杉醇和卡铂组合施用，并且所述癌症是肺癌。
[0422]
在一些实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0423]
替莫唑胺；
[0424]
拓扑替康；
[0425]
伊立替康；
[0426]
环磷酰胺；
[0427]
氟尿嘧啶；
[0428]
顺铂；
[0429]
卡铂；
[0430]
奥沙利铂；
[0431]
甲酰四氢叶酸；
[0432]
多柔比星；
[0433]
博莱霉素；
[0434]
卡培他滨；
[0435]
丝裂霉素b；
[0436]
紫杉醇；
[0437]
纳布紫杉醇；
[0438]
多西他赛；
[0439]
吉西他滨；
[0440]
甲氨蝶呤；
[0441]
培美曲塞；
[0442]
5-氟尿嘧啶；
[0443]
阿糖胞苷；
[0444]
巯基嘌呤；
[0445]
葡磷酰胺；
[0446]
伊沙匹隆；
[0447]
尼莫司汀；
[0448]
卡莫司汀；
[0449]
洛莫司汀；
[0450]
米托蒽醌；
[0451]
依托泊苷；
[0452]
长春新碱；
[0453]
长春碱；以及
[0454]
他莫昔芬。
[0455]
在一具体实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0456]
替莫唑胺；
[0457]
拓扑替康；
[0458]
伊立替康；
[0459]
环磷酰胺；
[0460]
氟尿嘧啶；
[0461]
奥沙利铂；
[0462]
甲酰四氢叶酸；以及
[0463]
多柔比星。
[0464]
具体地，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0465]
替莫唑胺；
[0466]
拓扑替康；
[0467]
氟尿嘧啶；
[0468]
奥沙利铂；以及
[0469]
甲酰四氢叶酸。
[0470]
在另一个实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0471]
伊立替康；
[0472]
氟尿嘧啶；
[0473]
奥沙利铂；以及
[0474]
甲酰四氢叶酸。
[0475]
在另一个实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0476]
卡铂；以及
[0477]
紫杉醇。
[0478]
在另一个实施例中，化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0479]
替莫唑胺；
[0480]
拓扑替康；
[0481]
伊立替康；
[0482]
环磷酰胺；
[0483]
氟尿嘧啶；
[0484]
奥沙利铂；
[0485]
甲酰四氢叶酸；
[0486]
多柔比星；
[0487]
卡铂；以及
[0488]
紫杉醇。
[0489]
具体地，化合物(b1)是紫杉醇和卡铂。
[0490]
在另一个实施例中，化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶。
[0491]
在一具体实施例中，化合物(a)是abtl0812，化合物(b1)是紫杉醇和卡铂，并且化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体。
[0492]
在一个实施例中，化合物(a)是abtl0812，化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶，并且化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体。具体地，化合物(b3)是选自以下的抗pd1检查点抑制剂抗体：纳武单抗、派姆单抗和斯巴达珠单抗，优选地派姆单抗。
[0493]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，化合物(b1)包括紫杉醇/卡铂，并且化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体。在一具体实施例中，癌症是肺癌(参见实例8.2和8.3获得此优选实施例的实例)。
[0494]
特别优选的是，化合物(a)是abtl0812，化合物(b1)包括伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶，并且化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体。在一具体实施例中，癌症是胰腺癌(参见实例8.5获得此优选实施例的实例)。
[0495]
取决于化合物(b1)的类型，其可以例如静脉内施用(例如在抗体的情况下)或口服施用(例如在小分子的情况下)。具体地，化合物(3)通过输注溶液静脉内施用。
[0496]
具体地，化合物(a)口服施用。在一具体实施例中，其中化合物(a)的施用剂量为每日剂量200mg到7000mg，更优选地每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地每日剂量3500mg到4300mg。
[0497]
癌症-关于本文的所有方面
[0498]
关于本文的第一方面到第五方面中的任一项-优选地，癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0499]
肺癌；
[0500]
非小细胞肺癌；
[0501]
鳞状细胞癌；
[0502]
腺癌；
[0503]
子宫内膜癌；
[0504]
子宫内膜浆液性癌；
[0505]
子宫内膜样癌；
[0506]
胰腺癌；
[0507]
胶质母细胞瘤；
[0508]
耐药复发性乳腺癌；
[0509]
头颈癌；
[0510]
多发性骨髓瘤癌；
[0511]
成神经细胞瘤；以及
[0512]
胆管癌。
[0513]
更优选地，癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0514]
非小细胞肺癌；
[0515]
鳞状细胞癌；
[0516]
子宫内膜癌；
[0517]
胰腺癌；
[0518]
胶质母细胞瘤；
[0519]
乳腺癌；
[0520]
多发性骨髓瘤癌；
[0521]
成神经细胞瘤；以及
[0522]
胆管癌。
[0523]
更具体地，癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0524]
肺癌；
[0525]
子宫内膜癌；
[0526]
胰腺癌；
[0527]
胶质母细胞瘤；
[0528]
乳腺癌；
[0529]
成神经细胞瘤；以及
[0530]
胆管癌。
[0531]
在一具体实施例中，癌症是实体瘤。“实体瘤”或实体癌是由除了血液、骨髓或淋巴细胞之外的身体组织细胞异常生长形成的瘤(细胞的新生长)或病变(解剖结构的损伤或生理功能的紊乱)。实体瘤由异常细胞团组成，所述异常细胞团可能来自于不同的组织类型，如肝脏、结肠、乳腺或肺并且最初在其细胞来源的器官中生长。然而，此类癌症可能会在疾病的晚期阶段通过转移性肿瘤生长扩散到其它器官。
[0532]
在具体实施例中，癌症是癌、肉瘤、生殖细胞瘤或母细胞瘤。
[0533]
在一具体实施例中，癌症是癌。癌是源自上皮细胞的癌症，并且占所有癌症病例的80％到90％，因为上皮组织在体内最丰富。在具体实施例中，癌包含许多最常见的癌症，具体地例如肺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、喉癌、舌癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、头颈癌、食道癌、肾癌、子宫内膜癌、胆囊癌、膀胱癌或胃癌。
[0534]
癌有两种类型：腺癌和鳞状细胞癌。腺癌在上皮细胞或腺体中发展，并且鳞状细胞癌起源于鳞状上皮。腺癌通常可以影响黏膜，并且最初表现为增厚的斑块状白色黏膜。这些是快速传播的癌症。
[0535]
在一具体实施例中，癌症是腺癌。
[0536]
在具体实施例中，癌症是肺癌、子宫内膜癌或胰腺癌。
[0537]
在一具体实施例中，癌症是肺癌，更具体地，非小细胞肺癌。
[0538]
在一具体实施例中，癌症是鳞状细胞癌。
[0539]
在一具体实施例中，癌症是子宫内膜癌，更具体地子宫内膜样癌或子宫内膜浆液性癌。
[0540]
在一具体实施例中，癌症是胰腺癌。更具体地，胰腺癌是外分泌胰腺癌(最普遍的一种)或神经内分泌胰腺癌。
[0541]
在一具体实施例中，癌症是胆管癌。
[0542]
在一具体实施例中，癌症是乳腺癌，并且更具体地是耐药复发性乳腺癌。
[0543]
在一具体实施例中，癌症是头颈癌。
[0544]
在一具体实施例中，癌症是肉瘤。肉瘤是由结缔组织(包含肌肉、骨骼、软骨和脂肪)引起的癌症。在具体实施例中，肉瘤是例如(骨的)骨肉瘤、(软骨的)软骨肉瘤、平滑肌肉瘤(平滑肌)、横纹肌肉瘤(骨骼肌)、间皮肉瘤或间皮瘤(体腔膜层)、纤维肉瘤(纤维组织)、血管肉瘤或血管内皮瘤(血管)、脂肪肉瘤(脂肪组织(adipose/fatty tissue))、神经胶质瘤或星形细胞瘤(大脑中发现的神经源性结缔组织)、粘液肉瘤(原始胚胎结缔组织)或间充质或混合中胚层肿瘤(混合结缔组织类型)。
[0545]
在一具体实施例中，癌症是脑癌。具体地，脑癌是神经胶质瘤。更具体地，神经胶质瘤是胶质母细胞瘤。
[0546]
在一具体实施例中，癌症是生殖细胞瘤。生殖细胞瘤是指生殖细胞肿瘤，来源于多能细胞，最常出现在睾丸或卵巢中(分别为精原细胞瘤和无性细胞瘤)。
[0547]
在一具体实施例中，癌症是母细胞瘤。母细胞瘤是源自未成熟前体细胞或胚胎组
织的癌症。母细胞瘤在儿童中比在老年人中更常见。在具体实施例中，母细胞瘤是例如肝母细胞瘤、成神经细胞瘤、髓母细胞瘤、肾母细胞瘤、胰腺母细胞瘤、胸膜肺母细胞瘤、视网膜母细胞瘤或多形性胶质母细胞瘤。在一具体实施例中，癌症是成神经细胞瘤。
[0548]
可以通过本发明的药物组合治疗的癌症是实体瘤，例如，肺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、喉癌、舌癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝癌、头颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、无性细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤(wilms'tumor)、宫颈癌、睾丸肿瘤、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、成神经细胞瘤、视网膜母细胞瘤。
[0549]
在一具体实施例中，癌症是转移性或晚期癌症。
[0550]
在一具体实施例中，癌症是血液恶性肿瘤。术语“血液恶性肿瘤”是指一种影响血液、骨髓和淋巴结的癌症，并且包含淋巴瘤、骨髓瘤和白血病。历史上，科学家和医生根据这些疾病在体内的位置、显微镜下受影响细胞的外观以及疾病的自然进展对这些疾病进行分类。在白血病中，发现癌细胞在血液和骨髓中循环，而在淋巴瘤中，细胞倾向于在淋巴组织中聚集并形成肿块或肿瘤。骨髓瘤是骨髓的肿瘤，并且涉及产生独特蛋白质的特定白细胞的子集。
[0551]
在具体实施例中，血液恶性肿瘤是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
[0552]
在一具体实施例中，血液恶性肿瘤是白血病。更具体地，白血病是例如急性髓性白血病(aml)、急性淋巴细胞白血病(all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)和急性单核细胞白血病(amol)。
[0553]
在一具体实施例中，血液恶性肿瘤是淋巴瘤。更具体地，淋巴瘤是霍奇金淋巴瘤(hodgkin's lymphoma，hl)或非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin lymphoma，nhl)。
[0554]
在一具体实施例中，血液恶性肿瘤是骨髓瘤，也被称为多发性骨髓瘤(即浆细胞，通常是白细胞的癌症，通常产生抗体)。
[0555]
在另一个具体实施例中，血液恶性肿瘤处于癌症前期阶段。如本文所使用的，术语“癌症前期阶段”是指可以发展成癌症的一种过度增殖性病症或初癌病状。
[0556]
化合物(a)和/或化合物(b)的施用-关于本文所有方面：
[0557]
如上文所讨论的并且关于本文第一方面到第五方面中的任一项-如果两种化合物(a)和(b)例如作为单一组合物同时施用或例如作为两种单独组合物依次施用，那么关于本文所讨论的组合治疗不是必需的。重要的是，当施用第二种化合物/药剂时，首先施用的有效量的化合物/药剂在患者体内和/或已经在患者体内发挥了其作用。
[0558]
当本文通常提及化合物(b)时，应理解为指化合物(b1)、化合物(b2)和/或化合物(b3)中的任一种。
[0559]
可以优选的是，如本文所描述的药物组合是包括化合物(a)和化合物(b)两者的单一组合物。
[0560]
化合物(a)(具体地abtl0812)优选地口服施用。
[0561]
化合物(a)(具体地abtl0812)的施用剂量优选地为每日剂量200mg到7000mg，更优选地每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地每
日剂量3500mg到4300mg。
[0562]
优选地，化合物(a)(具体地abtl0812)的每日剂量为每日施用3次每日剂量-最优选地如3次1200-1400mg。
[0563]
本文中已成功进行使用abtl0812的相关人类临床研究，其中每日剂量为3900mg-施用3次，每次1300mg。
[0564]
因此，最优选的是，化合物(a)是abtl0812，并且施用剂量为3800mg到4000mg(最优选地3900mg)-具体地施用3次，每次1300mg。
[0565]
关于化合物(b)，优选的施用途径通常取决于所关注的化合物(b)。
[0566]
技术人员可以常规地确定用于所关注的特定化合物(b)的优选施用途径。
[0567]
针对优选化合物(b)的优选施用途径简单描述如下：
[0568]
替莫唑胺；-优选地通过口服胶囊或片剂施用；
[0569]
拓扑替康；-优选地通过输注溶液静脉内施用；
[0570]
伊立替康；-优选地通过输注溶液静脉内施用；
[0571]
环磷酰胺；-优选地通过输注溶液静脉内施用；
[0572]
氟尿嘧啶；-优选地通过输注溶液静脉内施用；
[0573]
奥沙利铂；-优选地通过输注溶液静脉内施用；
[0574]
甲酰四氢叶酸；-优选地通过输注溶液静脉内施用；
[0575]
多柔比星；-优选地通过输注溶液静脉内施用；
[0576]
硼替佐米；-优选地通过输注溶液静脉内施用；
[0577]
奥拉帕尼；-优选地通过口服胶囊或片剂施用；
[0578]
贝伐单抗；-优选地通过输注溶液静脉内施用；抗pd1检查点抑制剂抗体-优选地通过输注溶液静脉内施用。
[0579]
所谓权利要求格式的本发明的各方面/实施例
[0580]
此“权利要求格式”部分分为6个子部分，分别针对如本文所讨论的第一方面到第五方面和其实施例。
[0581]
第一方面和相关实施例-(b1)：化学治疗剂化合物-癌症的二线疗法治疗
[0582]
1.一种药物组合，其包括：
[0583]
(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
[0584]
(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
[0585]
(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
[0586]
(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
[0587]
(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
[0588]
(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
[0589]
以及
[0590]
(b1)：化学治疗剂化合物
[0591]
用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症，其中所述治疗是癌症的二线疗法治疗。
[0592]
2.根据权利要求1所述的药物组合，其中
[0593]
(i)a可为介于5与7之间的任何整数值，
[0594]
(ii)b可为介于2与4之间的任何整数值，并且
[0595]
(iii)c可为介于1到5之间的任何整数值。
[0596]
3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中r1为h，并且r2为oh。
[0597]
4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是选自由以下组成的组的至少一种化合物或其药学上可接受的盐：
[0598]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)；
[0599]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
3-ch3(183a1)；
[0600]
cooh-choh-(ch2)
3-(ch＝ch-ch2)
3-(ch2)
3-ch3(183a2)；
[0601]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
4-(ch2)
3-ch3(204a1)；
[0602]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
5-ch3(205a1)；以及
[0603]
cooh-choh-ch
2-(ch＝ch-ch2)
6-ch3(226a1)。
[0604]
5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0605]
6.根据权利要求5所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)的钠盐。
[0606]
7.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0607]
肺癌；
[0608]
非小细胞肺癌；
[0609]
鳞状细胞癌；
[0610]
腺癌；
[0611]
子宫内膜癌；
[0612]
子宫内膜浆液性癌；
[0613]
子宫内膜样癌；
[0614]
胰腺癌；
[0615]
胶质母细胞瘤；
[0616]
耐药复发性乳腺癌；
[0617]
头颈癌；
[0618]
多发性骨髓瘤癌；
[0619]
成神经细胞瘤；以及
[0620]
胆管癌。
[0621]
8.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0622]
替莫唑胺；
[0623]
拓扑替康；
[0624]
伊立替康；
[0625]
环磷酰胺；
[0626]
氟尿嘧啶；
[0627]
顺铂；
[0628]
卡铂；
[0629]
奥沙利铂；
[0630]
甲酰四氢叶酸；
[0631]
多柔比星；
[0632]
博莱霉素；
[0633]
卡培他滨；
[0634]
丝裂霉素b；
[0635]
紫杉醇；
[0636]
纳布紫杉醇；
[0637]
多西他赛；
[0638]
吉西他滨；
[0639]
甲氨蝶呤；
[0640]
培美曲塞；
[0641]
5-氟尿嘧啶；
[0642]
阿糖胞苷；
[0643]
巯基嘌呤；
[0644]
葡磷酰胺；
[0645]
伊沙匹隆；
[0646]
尼莫司汀；
[0647]
卡莫司汀；
[0648]
洛莫司汀；
[0649]
米托蒽醌；
[0650]
依托泊苷；
[0651]
长春新碱；
[0652]
长春碱；以及
[0653]
他莫昔芬。
[0654]
9.根据权利要求8所述的药物组合，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0655]
替莫唑胺；
[0656]
拓扑替康；
[0657]
伊立替康；
[0658]
环磷酰胺；
[0659]
氟尿嘧啶；
[0660]
奥沙利铂；
[0661]
甲酰四氢叶酸；以及
[0662]
多柔比星。
[0663]
10.根据权利要求9所述的药物组合，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至
少一种化学治疗剂化合物：
[0664]
替莫唑胺；
[0665]
拓扑替康；
[0666]
氟尿嘧啶；
[0667]
奥沙利铂；以及
[0668]
甲酰四氢叶酸。
[0669]
11.根据权利要求8到10中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0670]
12.根据权利要求11所述的药物组合，其中
[0671]-化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0672]-化合物(b1)是拓扑替康，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0673]-化合物(b1)是伊立替康，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0674]-化合物(b1)是环磷酰胺，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0675]-化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶，并且所述癌症是胰腺癌；
[0676]-化合物(b1)是多柔比星，并且所述癌症是子宫内膜癌；或
[0677]-化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述癌症是胶质母细胞瘤。
[0678]
13.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述药物组合是包括化合物(a)和化合物(b1)两者的单一组合物。
[0679]
14.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)口服施用。
[0680]
15.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)的施用剂量为每日剂量200mg到7000mg，更优选地为每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地为每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地为每日剂量3500mg到4300mg。
[0681]
16.根据权利要求14到15中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0682]
17.根据权利要求16所述的药物组合，其中
[0683]
化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述化合物通过口服胶囊或片剂施用；
[0684]
化合物(b1)是拓扑替康，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0685]
化合物(b1)是伊立替康，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0686]
化合物(b1)是环磷酰胺，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0687]
化合物(b1)是氟尿嘧啶，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0688]
化合物(b1)是奥沙利铂，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0689]
化合物(b1)是甲酰四氢叶酸，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；或者
[0690]
化合物(b1)是多柔比星，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用。
[0691]
第二方面和相关实施例-(b2)：靶向治疗剂化合物-癌症的靶向疗法治疗
[0692]
1.一种药物组合，其包括：
[0693]
(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
[0694]
(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
[0695]
(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
[0696]
(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
[0697]
(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
[0698]
(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
[0699]
以及
[0700]
(b2)：靶向治疗剂化合物
[0701]
用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症，其中所述治疗是癌症的靶向疗法治疗。
[0702]
2.根据权利要求1所述的药物组合，其中
[0703]
(i)a可为介于5与7之间的任何整数值，
[0704]
(ii)b可为介于2与4之间的任何整数值，并且
[0705]
(iii)c可为介于1到5之间的任何整数值。
[0706]
3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中r1为h，并且r2为oh。
[0707]
4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是选自由以下组成的组的至少一种化合物或其药学上可接受的盐：
[0708]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)；
[0709]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
3-ch3(183a1)；
[0710]
cooh-choh-(ch2)
3-(ch＝ch-ch2)
3-(ch2)
3-ch3(183a2)；
[0711]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
4-(ch2)
3-ch3(204a1)；
[0712]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
5-ch3(205a1)；以及
[0713]
cooh-choh-ch
2-(ch＝ch-ch2)
6-ch3(226a1)。
[0714]
5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0715]
6.根据权利要求5所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)的钠盐。
[0716]
7.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0717]
肺癌；
[0718]
非小细胞肺癌；
[0719]
鳞状细胞癌；
[0720]
腺癌；
[0721]
子宫内膜癌；
[0722]
子宫内膜浆液性癌；
[0723]
子宫内膜样癌；
[0724]
胰腺癌；
[0725]
胶质母细胞瘤；
[0726]
耐药复发性乳腺癌；
[0727]
头颈癌；
[0728]
多发性骨髓瘤癌；
[0729]
成神经细胞瘤；以及
[0730]
胆管癌。
[0731]
8.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(b2)是选自由以下组成的组的至少一种靶向治疗剂化合物：
[0732]
伊马替尼；
[0733]
吉非替尼；
[0734]
埃罗替尼；
[0735]
索拉非尼；
[0736]
舒尼替尼；
[0737]
达沙替尼；
[0738]
拉帕替尼；
[0739]
尼罗替尼；
[0740]
蛋白酶体抑制剂(优选地卡非佐米、伊沙佐米或硼替佐米)；
[0741]
他莫昔芬；
[0742]
janus激酶抑制剂(优选地托法替尼)；
[0743]
alk抑制剂(优选地克唑替尼)；
[0744]
bcl-2抑制剂(优选地奥巴托克斯、纳威托克斯或棉酚)；
[0745]
parp抑制剂(优选地伊尼帕尼或奥拉帕尼)；
[0746]
pi3k抑制剂(优选地哌立福辛)；
[0747]
阿帕替尼；
[0748]
braf抑制剂(优选地维罗非尼或达拉非尼)；
[0749]
mek抑制剂(优选地曲美替尼)；
[0750]
cdk抑制剂；
[0751]
hsp90抑制剂；
[0752]
盐霉素；
[0753]
val-083(二去水卫矛醇)；
[0754]
长春福肽；
[0755]
丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(优选地西罗莫司、依维莫司、维罗非尼、曲美替尼或达拉非尼)；以及
[0756]
单克隆抗体(优选地抗vegf mab；利妥昔单抗、曲妥珠单抗、阿仑单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗或贝伐单抗)。
[0757]
9.根据权利要求8所述的药物组合，其中化合物(b2)是选自由以下组成的组的至少一种靶向治疗剂化合物：
[0758]
蛋白酶体抑制剂(优选地卡非佐米、伊沙佐米或硼替佐米)；
[0759]
parp抑制剂(优选地伊尼帕尼或奥拉帕尼)；以及
[0760]
单克隆抗体(优选地抗vegf mab、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、阿仑单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗或贝伐单抗)。
[0761]
10.根据权利要求9所述的药物组合，其中化合物(b2)是选自由以下组成的组的至
少一种靶向治疗剂化合物：
[0762]
硼替佐米；
[0763]
奥拉帕尼；以及
[0764]
贝伐单抗。
[0765]
11.根据权利要求8到10中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0766]
12.根据权利要求11所述的药物组合，其中
[0767]-化合物(b2)是硼替佐米，并且所述癌症是多发性骨髓瘤癌；
[0768]-化合物(b2)是奥拉帕尼，并且所述癌症是子宫内膜癌；或
[0769]-化合物(b2)是贝伐单抗，并且所述癌症是子宫内膜癌。
[0770]
13.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述药物组合是包括化合物(a)和化合物(b2)两者的单一组合物。
[0771]
14.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)口服施用。
[0772]
15.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)的施用剂量为每日剂量200mg到7000mg，更优选地为每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地为每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地为每日剂量3500mg到4300mg。
[0773]
16.根据权利要求14到15中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0774]
17.根据权利要求16所述的药物组合，其中
[0775]
化合物(b2)是硼替佐米，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0776]
化合物(b2)是奥拉帕尼，并且所述化合物通过口服胶囊或片剂施用；或
[0777]
化合物(b2)是贝伐单抗，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用。
[0778]
第三方面和相关实施例-(b3)：免疫治疗剂化合物-癌症的免疫疗法治疗
[0779]
1.一种药物组合，其包括：
[0780]
(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
[0781]
(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
[0782]
(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
[0783]
(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
[0784]
(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
[0785]
(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
[0786]
以及
[0787]
(b3)：免疫治疗剂化合物
[0788]
用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症，其中所述治疗是癌症的免疫疗法治疗。
[0789]
2.根据权利要求1所述的药物组合，其中
[0790]
(i)a可为介于5与7之间的任何整数值，
[0791]
(ii)b可为介于2与4之间的任何整数值，并且
[0792]
(iii)c可为介于1到5之间的任何整数值。
[0793]
3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中r1为h，并且r2为oh。
[0794]
4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是选自由以下组成的组的至少一种化合物或其药学上可接受的盐：
[0795]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)；
[0796]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
3-ch3(183a1)；
[0797]
cooh-choh-(ch2)
3-(ch＝ch-ch2)
3-(ch2)
3-ch3(183a2)；
[0798]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
4-(ch2)
3-ch3(204a1)；
[0799]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
5-ch3(205a1)；以及
[0800]
cooh-choh-ch
2-(ch＝ch-ch2)
6-ch3(226a1)。
[0801]
5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0802]
6.根据权利要求5所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)的钠盐。
[0803]
7.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0804]
肺癌；
[0805]
非小细胞肺癌；
[0806]
鳞状细胞癌；
[0807]
腺癌；
[0808]
子宫内膜癌；
[0809]
子宫内膜浆液性癌；
[0810]
子宫内膜样癌；
[0811]
胰腺癌；
[0812]
胶质母细胞瘤；
[0813]
耐药复发性乳腺癌；
[0814]
头颈癌；
[0815]
多发性骨髓瘤癌；
[0816]
成神经细胞瘤；以及
[0817]
胆管癌。
[0818]
8.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(b3)是选自由以下组成的组的至少一种免疫治疗剂化合物：
[0819]
检查点抑制剂抗体，优选地其中所述检查点抑制剂抗体是抗pd1抗体、抗pdl1抗体或抗ctla4抗体。
[0820]
9.根据权利要求8所述的药物组合，其中化合物(b3)是选自由以下组成的组的至少一种免疫治疗剂化合物：
[0821]-抗pd1抗体，优选地其中所述抗pd1抗体是纳武单抗、派姆单抗或斯巴达珠单抗；
[0822]-抗pdl1抗体，优选地其中所述抗pdl1抗体是阿特珠单抗、阿维鲁单抗或度伐鲁单抗；
[0823]-抗ctla4抗体，优选地其中所述抗ctla4抗体是伊匹单抗。
[0824]
10.根据权利要求9所述的药物组合，其中化合物(b3)是抗pd1抗体，并且所述抗pd1抗体是派姆单抗。
[0825]
11.根据权利要求8到10中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0826]
12.根据权利要求11所述的药物组合，其中
[0827]-化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体，优选地派姆单抗，并且所述癌症是肺癌；或
[0828]-化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体，优选地派姆单抗，其与至少一种化合物(b1)，优选地紫杉醇和卡铂组合施用，并且所述癌症是肺癌。
[0829]
13.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述药物组合是包括化合物(a)和化合物(b3)两者的单一组合物。
[0830]
14.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)口服施用。
[0831]
15.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)的施用剂量为每日剂量200mg到7000mg，更优选地为每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地为每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地为每日剂量3500mg到4300mg。
[0832]
16.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)(具体地abtl0812)在施用免疫治疗剂化合物(b3)之前施用。
[0833]
17.根据权利要求14到16中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0834]
18.根据权利要求17所述的药物组合，其中
[0835]
化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体，优选地是派姆单抗，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用。
[0836]
第四方面和相关实施例-癌症的放射疗法治疗
[0837]
1.一种药物组合物，其包括：
[0838]
(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
[0839]
(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
[0840]
(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
[0841]
(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
[0842]
(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
[0843]
(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
[0844]
用于治疗人类患者的癌症，其中所述治疗是癌症的放射疗法治疗。
[0845]
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中
[0846]
(i)a可为介于5与7之间的任何整数值，
[0847]
(ii)b可为介于2与4之间的任何整数值，并且
[0848]
(iii)c可为介于1到5之间的任何整数值。
[0849]
3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中r1为h，并且r2为oh。
[0850]
4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中化合物(a)是选自由以下组成的组的至少一种化合物或其药学上可接受的盐：
[0851]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)；
[0852]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
3-ch3(183a1)；
[0853]
cooh-choh-(ch2)
3-(ch＝ch-ch2)
3-(ch2)
3-ch3(183a2)；
[0854]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
4-(ch2)
3-ch3(204a1)；
[0855]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
5-ch3(205a1)；以及
[0856]
cooh-choh-ch
2-(ch＝ch-ch2)
6-ch3(226a1)。
[0857]
5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0858]
6.如权利要求5所述的药物组合物，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)的钠盐。
[0859]
7.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0860]
肺癌；
[0861]
非小细胞肺癌；
[0862]
鳞状细胞癌；
[0863]
腺癌；
[0864]
子宫内膜癌；
[0865]
子宫内膜浆液性癌；
[0866]
子宫内膜样癌；
[0867]
胰腺癌；
[0868]
胶质母细胞瘤；
[0869]
耐药复发性乳腺癌；
[0870]
头颈癌；
[0871]
多发性骨髓瘤癌；
[0872]
成神经细胞瘤；以及
[0873]
胆管癌。
[0874]
8.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述放射疗法治疗通过辐射剂量2到200gy，优选地5到100gy或更优选地15到85gy完成。
[0875]
9.如权利要求8所述的药物组合物，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0876]
10.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中在施用化合物(a)之后施用所述辐射剂量，优选地在第一次施用化合物(a)之后至少一天。
[0877]
11.如权利要求10所述的药物组合物，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0878]
12.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中化合物(a)口服施用。
[0879]
13.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中化合物(a)的施用剂量为每日剂量200mg到7000mg，更优选地为每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地为每日剂量
3000mg到4700mg，并且最优选地为每日剂量3500mg到4300mg。
[0880]
14.根据权利要求12到13中任一项所述的药物组合物，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0881]
15.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，其中所述癌症是胶质母细胞瘤。
[0882]
16.如权利要求15所述的药物组合物，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0883]
第五方面和相关实施例-优选的(b1)化学治疗剂化合物-一般癌症的治疗
[0884]
1.一种药物组合，其包括：
[0885]
(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
[0886]
(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
[0887]
(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
[0888]
(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
[0889]
(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
[0890]
(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
[0891]
以及
[0892]
(b1)：化学治疗剂化合物
[0893]
用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0894]
替莫唑胺；
[0895]
拓扑替康；
[0896]
伊立替康；
[0897]
环磷酰胺；
[0898]
氟尿嘧啶；
[0899]
奥沙利铂；
[0900]
甲酰四氢叶酸；以及
[0901]
多柔比星。
[0902]
2.根据权利要求1所述的药物组合，其中
[0903]
(i)a可为介于5与7之间的任何整数值，
[0904]
(ii)b可为介于2与4之间的任何整数值，并且
[0905]
(iii)c可为介于1到5之间的任何整数值。
[0906]
3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中r1为h，并且r2为oh。
[0907]
4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是选自由以下组成的组的至少一种化合物或其药学上可接受的盐：
[0908]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)；
[0909]
cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
3-ch3(183a1)；
[0910]
cooh-choh-(ch2)
3-(ch＝ch-ch2)
3-(ch2)
3-ch3(183a2)；
[0911]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
4-(ch2)
3-ch3(204a1)；
[0912]
cooh-choh-(ch2)
2-(ch＝ch-ch2)
5-ch3(205a1)；以及
[0913]
cooh-choh-ch
2-(ch＝ch-ch2)
6-ch3(226a1)。
[0914]
5.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0915]
6.根据权利要求5所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)的钠盐。
[0916]
7.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述癌症是选自由以下组成的组的至少一种癌症：
[0917]
肺癌；
[0918]
非小细胞肺癌；
[0919]
鳞状细胞癌；
[0920]
腺癌；
[0921]
子宫内膜癌；
[0922]
子宫内膜浆液性癌；
[0923]
子宫内膜样癌；
[0924]
胰腺癌；
[0925]
胶质母细胞瘤；
[0926]
耐药复发性乳腺癌；
[0927]
头颈癌；
[0928]
多发性骨髓瘤癌；
[0929]
成神经细胞瘤；以及
[0930]
胆管癌。
[0931]
8.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[0932]
替莫唑胺；
[0933]
拓扑替康；
[0934]
氟尿嘧啶；
[0935]
奥沙利铂；以及
[0936]
甲酰四氢叶酸。
[0937]
9.根据权利要求8所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0938]
10.根据权利要求9所述的药物组合，其中
[0939]-化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0940]-化合物(b1)是拓扑替康，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0941]-化合物(b1)是伊立替康，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0942]-化合物(b1)是环磷酰胺，并且所述癌症是成神经细胞瘤；
[0943]-化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶，并且所述癌症是胰腺癌；
[0944]-化合物(b1)是多柔比星，并且所述癌症是子宫内膜癌；或
[0945]-化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述癌症是胶质母细胞瘤。
[0946]
11.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中所述药物组合是包括化合物(a)和化合物(b1)两者的单一组合物。
[0947]
12.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)口服施用。
[0948]
13.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)的施用剂量为每日剂量200mg到7000mg，更优选地为每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地为每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地为每日剂量3500mg到4300mg。
[0949]
14.根据权利要求12到13中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是cooh-choh-(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[0950]
15.根据权利要求14所述的药物组合，其中
[0951]
化合物(b1)是替莫唑胺，并且所述化合物通过口服胶囊或片剂施用；
[0952]
化合物(b1)是拓扑替康，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0953]
化合物(b1)是伊立替康，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0954]
化合物(b1)是环磷酰胺，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0955]
化合物(b1)是氟尿嘧啶，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0956]
化合物(b1)是奥沙利铂，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；
[0957]
化合物(b1)是甲酰四氢叶酸，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用；或者
[0958]
化合物(b1)是多柔比星，并且所述化合物通过输注溶液静脉内施用。
[0959]
与本文所有方面有关的其它特定组合-(a)与多于一种化合物(b)的组合。
[0960]
1.一种药物组合，其包括：
[0961]
(a)：化合物，所述化合物为式coor
1-chr
2-(ch2)a-(ch＝chch2)b-(ch2)c-ch3的多不饱和脂肪酸、其药学上可接受的盐或其组合，其中
[0962]
(i)a可为介于0与7之间的任何整数值，
[0963]
(ii)b可为介于2与7之间的任何整数值，
[0964]
(iii)c可为介于0到7之间的任何整数值，
[0965]
(iv)r1为h、na、k、ch3、ch
3-ch2或po(o-ch
2-ch3)2，并且
[0966]
(v)r2为oh、och3、o-ch2cooh、ch3、cl、ch2oh、opo(o-ch
2-ch3)2、n(oh)2、f、hcoo或n(och2ch3)2；
[0967]
(b1)：化学治疗剂化合物；以及
[0968]
(b3)：免疫治疗剂化合物
[0969]
用于同时、单独或依次用于治疗人类患者的癌症。
[0970]
2.根据权利要求1所述的药物组合，其中
[0971]
(i)a可为介于5与7之间的任何整数值，
[0972]
(ii)b可为介于2与4之间的任何整数值，并且
[0973]
(iii)c可为介于1到5之间的任何整数值。
[0974]
3.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中r1为h，并且r2为oh。
[0975]
4.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是选自由以下组成的组的至少一种化合物或其药学上可接受的盐：
(ch2)
6-(ch＝ch-ch2)
2-(ch2)
3-ch3(abtl0812)或其药学上可接受的盐。
[1007]
12.根据权利要求11所述的药物组合，其中
[1008]-化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体，优选地派姆单抗，并且所述癌症是肺癌；或
[1009]-化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体，优选地派姆单抗，其与至少一种化合物(b1)，优选地紫杉醇和卡铂组合施用，并且所述癌症是肺癌。
[1010]
13.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[1011]
替莫唑胺；
[1012]
拓扑替康；
[1013]
伊立替康；
[1014]
环磷酰胺；
[1015]
氟尿嘧啶；
[1016]
顺铂；
[1017]
卡铂；
[1018]
奥沙利铂；
[1019]
甲酰四氢叶酸；
[1020]
多柔比星；
[1021]
博莱霉素；
[1022]
卡培他滨；
[1023]
丝裂霉素b；
[1024]
紫杉醇；
[1025]
纳布紫杉醇；
[1026]
多西他赛；
[1027]
吉西他滨；
[1028]
甲氨蝶呤；
[1029]
培美曲塞；
[1030]
5-氟尿嘧啶；
[1031]
阿糖胞苷；
[1032]
巯基嘌呤；
[1033]
葡磷酰胺；
[1034]
伊沙匹隆；
[1035]
尼莫司汀；
[1036]
卡莫司汀；
[1037]
洛莫司汀；
[1038]
米托蒽醌；
[1039]
依托泊苷；
[1040]
长春新碱；
[1041]
长春碱；以及
[1042]
他莫昔芬。
[1043]
14.根据权利要求13所述的药物组合，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[1044]
替莫唑胺；
[1045]
拓扑替康；
[1046]
伊立替康；
[1047]
环磷酰胺；
[1048]
氟尿嘧啶；
[1049]
奥沙利铂；
[1050]
甲酰四氢叶酸；以及
[1051]
多柔比星。
[1052]
15.根据权利要求13所述的药物组合，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[1053]
替莫唑胺；
[1054]
拓扑替康；
[1055]
氟尿嘧啶；
[1056]
奥沙利铂；以及
[1057]
甲酰四氢叶酸。
[1058]
16.根据权利要求13所述的药物组合，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[1059]
伊立替康；
[1060]
氟尿嘧啶；
[1061]
奥沙利铂；以及
[1062]
甲酰四氢叶酸。
[1063]
17.根据权利要求13所述的药物组合，其中化合物(b1)是选自由以下组成的组的至少一种化学治疗剂化合物：
[1064]
卡铂；以及
[1065]
紫杉醇。
[1066]
18.根据权利要求17所述的药物组合，其中化合物(b1)是紫杉醇和卡铂。
[1067]
19.根据权利要求16所述的药物组合，其中化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶。
[1068]
20.根据权利要求1到19中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是abtl0812，化合物(b1)是紫杉醇和卡铂，并且化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体。
[1069]
21.根据权利要求1到19中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)是abtl0812，化合物(b1)是伊立替康、甲酰四氢叶酸、奥沙利铂和氟尿嘧啶，并且化合物(b3)是抗pd1检查点抑制剂抗体。
[1070]
22.根据权利要求20到21中任一项所述的药物组合，其中化合物(b3)是选自以下的抗pd1检查点抑制剂抗体：纳武单抗、派姆单抗和斯巴达珠单抗，优选地派姆单抗。
[1071]
23.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(b1)通过输注溶液
静脉内施用。
[1072]
24.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)口服施用。
[1073]
25.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合，其中化合物(a)的施用剂量为每日剂量200mg到7000mg，更优选地为每日剂量1500mg到5000mg，甚至更优选地为每日剂量3000mg到4700mg，并且最优选地为每日剂量3500mg到4300mg。
[1074]
26.根据权利要求1到7、13到19和23到25中任一项所述的药物组合，其中化合物(b3)是抗癌免疫调节剂化合物。
[1075]
27.根据权利要求26所述的药物组合，其中化合物(b3)是选自由以下组成的组的免疫调节剂化合物：细胞因子、检查点抑制剂、激动剂和佐剂。
[1076]
实例
[1077]
实例1：abtl0812与不同的/另外的化学治疗剂组合：体外测定
[1078]
1.1：单独的abtl0812或与替莫唑胺组合在成神经细胞瘤中的细胞活力测定
[1079]
目的：研究abtl0812在添加到替莫唑胺中时在成神经细胞瘤细胞系sk-n-be(2)和la1-5s中的潜在协同作用。替莫唑胺是常见的化学治疗剂，例如其用于高危成神经细胞瘤的二线治疗。因此，了解abtl0812与替莫唑胺之间是否有任何增强作用很有趣。
[1080]
方法：将la1-5s和sk-n-be(2)细胞与浓度增加的替莫唑胺(500μm、1000μm和1500μm)和子ic50固定浓度abtl0812一起温育。(对于sk-n-be(2)，30μm，并且对于la1-5s，40μm)。细胞在含0.5％fbs的imdm中处理48小时。通过结晶紫测定评估细胞活力。以六次重复评估不同剂量，并且示出的结果是两个独立实验的平均值。使用graphpad5.0软件根据t检验原理进行统计分析。
[1081]
结果：添加30μm或40μm的abtl0812增加了替莫唑胺的细胞毒性。这种增加在所有浓度下均具有统计学意义(**p《0.01；***p《0.001)-参见本文图1。
[1082]
结论：abtl0812在体外增强替莫唑胺在成神经细胞瘤细胞系sk-n-be(2)和la1-5s中的细胞毒性作用。这些结果支持两种药物组合的体内研究。
[1083]
1.2：单独的abtl0812或与拓扑替康组合在成神经细胞瘤中的细胞活力测定
[1084]
目的：研究abtl0812在添加到拓扑替康中时在成神经细胞瘤细胞系la1-5s中的潜在协同作用。拓扑替康是常见的化学治疗剂，例如其用于高危成神经细胞瘤的二线治疗。因此，了解abtl0812与拓扑替康之间是否有任何增强作用很有趣。
[1085]
方法：将la1-5s细胞与浓度增加的拓扑替康(0.5μm、1μm和2μm)和固定浓度abtl0812(30μm)一起温育。细胞在含0.5％fbs的imdm中处理72小时。通过结晶紫测定评估细胞活力。数据呈现为三个独立实验的平均值
±
sem。使用graphpad5.0软件根据t检验原理进行统计分析。
[1086]
结果：添加30μm abtl0812显著增加了拓扑替康的细胞毒性。(相较于媒剂，*p《0.05，**p《0.01；相较于作为单一药剂的每种药物的匹配浓度，
$
p《0.05)。参见本文图2。
[1087]
结论：abtl0812在体外增强拓扑替康在成神经细胞瘤细胞系la1-5s中的细胞毒性作用。这些结果支持两种药物组合的体内研究。
[1088]
1.3：单独的abtl0812或与伊立替康组合在成神经细胞瘤中的细胞活力测定
[1089]
目的：研究abtl0812在添加到伊立替康中时在成神经细胞瘤细胞系la1-5s中的潜在协同作用。伊立替康是常见的化学治疗剂，例如其用于高危成神经细胞瘤的二线治疗。因
此，了解abtl0812与伊立替康之间是否有任何增强作用很有趣。
[1090]
方法：将la1-5s细胞与浓度增加的伊立替康(4μm、8μm和16μm)和固定浓度abtl0812(30μm)一起温育。细胞在含0.5％fbs的imdm中处理72小时。通过结晶紫测定评估细胞活力。数据呈现为三个独立实验的平均值
±
sem。使用graphpad5.0软件根据t检验原理进行统计(*p《0.05；**p《0.01；***p《0.001)。
[1091]
结果：添加30μm abtl0812显著增加了伊立替康的细胞毒性。(相较于媒剂，*p《0.05，**p《0.01；相较于作为单一药剂的abtl0812，
#
p《0.05；相较于作为单一药剂的每种药物的匹配浓度，
$
p《0.05)。参见本文图3。
[1092]
结论：abtl0812在体外增强伊立替康在成神经细胞瘤细胞系la1-5s中的细胞毒性作用。这些结果支持两种药物组合的体内研究。
[1093]
1.4：单独的abtl0812或与环磷酰胺组合在成神经细胞瘤中的细胞活力测定
[1094]
目的：研究abtl0812在添加到环磷酰胺中时在成神经细胞瘤细胞系la1-5s中的潜在协同作用。环磷酰胺是常见的化学治疗剂，例如其用于高危成神经细胞瘤的二线治疗。因此，了解abtl0812与环磷酰胺之间是否有任何增强作用很有趣。
[1095]
方法：将la1-5s细胞与浓度增加的环磷酰胺(1μm、1.5μm和2μm)和子ic50固定浓度abtl0812(30μm)一起温育。细胞在含0.5％fbs的imdm中处理72小时。通过结晶紫测定评估细胞活力。数据呈现为三个独立实验的平均值
±
sem。使用graphpad5.0软件根据t检验原理进行统计(*p《0.05；**p《0.01；***p《0.001)。
[1096]
结果：添加30μm abtl0812显著增加了环磷酰胺的细胞毒性1μm。(相较于作为单一药剂的每种药物的匹配浓度，
$
p《0.05)。参见本文图4。
[1097]
结论：abtl0812在体外增强环磷酰胺在成神经细胞瘤细胞系la1-5s中的细胞毒性作用。这些结果支持两种药物组合的体内研究。
[1098]
实例2：abtl0812与靶向疗法组合：体外测定
[1099]
2.1：单独的abtl0812或与硼替佐米组合在多发性骨髓瘤中的细胞活力测定
[1100]
目的：研究abtl0812在添加到硼替佐米中时在多发性骨髓瘤细胞系jjn-3和opm2中的潜在协同作用。硼替佐米是靶向疗法，是首个经批准用于治疗多发性骨髓瘤患者的蛋白酶体抑制剂。因此，了解两种药物之间是否有任何加性效应很有趣。
[1101]
方法：将jjn-3和opm2细胞接种在24孔板中，用abtl0812(5μm)、硼替佐米(分别为0.5nm和1nm)或两种药物的组合处理，并且然后留在培养箱中持续48小时(0.5％fbs)。通过mtt测定研究细胞活力并测定组合指数以评估可能的协同作用。
[1102]
结果：jjn-3细胞与5μm(子ic50浓度)abtl0812和0.5nm(子ic50浓度)硼替佐米一起温育，分别诱导约10％和15％的细胞死亡。当两种药物组合时，细胞死亡增强，从而诱导约40％的细胞死亡。在所有情况下，通过mtt测定评估细胞活力，并且根据chou和talalay的方法计算用于评估协同作用组合指数(ci)(chou 2006；chou 2010)，如下：ci＝(d)1/(dx)1+(d)2/(dx)2，其中ci《1、＝1和》1分别指示协同作用、加性效应和拮抗作用。在分母中，(dx)1表示d1“单独”抑制系统x％，并且(dx)2表示d2“单独”抑制系统x％。在分子中，(d)1和(d)2“组合”也抑制x％。此组合的ci为0.049，指示非常高的协同作用。在opm2细胞的情况下，其与5μm(子ic50浓度)abtl0812和1nm(子ic50浓度)硼替佐米一起温育，分别诱导约20％和10％的细胞死亡。当两种药物组合时，细胞死亡增强，从而诱导约55％的细胞死亡。组合指
数为0.50，指示协同作用-参见本文图5。
[1103]
结论：abtl0812和硼替佐米在体外对多发性骨髓瘤细胞系jjn-3和opm2具有很强的协同效应。当两种药物以子ic50浓度组合时，存在抗癌活性增强，因此证明两种药物之间的协同作用。这些结果为两种药物的体内组合提供了机会。
[1104]
实例3：abtl0812与不同的化学治疗剂组合：体内测定
[1105]
3.1：单独的abtl0812或与folfirinox(5-fu、甲酰四氢叶酸、伊立替康和奥沙利铂)组合在使用miapaca2细胞植入裸小鼠中的人胰腺癌异种移植模型中的抗癌活性
[1106]
测试系统：nu/nu磁性小鼠。
[1107]
目的：研究单独的abtl0812和与用于治疗胰腺癌的标准护理疗法folfirinox组合的抗肿瘤活性。
[1108]
方法：在一侧向小鼠注射5
×
106个miapaca2细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤体积为大约100mm3时，动物被均匀地随机化并且开始不同的治疗。通过口服途径以120mg/kg/天施用abtl0812。folfirinox化学疗法组合每周一次腹膜内施用，共施用四次。在不同的两天中腹膜内施用30mg/kg 5-fu、50mg/kg甲酰四氢叶酸、50mg/kg伊立替康和2.5mg/kg奥沙利铂。周二施用5-fu和甲酰四氢叶酸，并且周四施用伊立替康和奥沙利铂。每周3次监测肿瘤体积和体重。
[1109]
结果：与folfirinox、abtl0812和媒剂组相比，abtl0812与folfirinox的组合显著增加了化学疗法的治疗潜力，并示出最高肿瘤体积减少。统计分析表明与单独的用于治疗晚期胰腺癌的标准护理folfirinox相比，组合疗法显著改进肿瘤生长的减少(p《0.001，通过t检验得出)。另外，在治疗组(包含abtl0812与folfirinox一起施用的治疗组)中的任何组中均未观察到体重或血液计数(未示出)的减少，这表明此组合没有毒性作用。参见本文图6。
[1110]
结论：abtl0812在使用miapaca2细胞植入裸小鼠的人胰腺癌异种移植模型中显著增强folfirinox的抗癌作用而不增加毒性。folfirinox是用于治疗晚期胰腺癌患者的标准护理，因此这些结果表明abtl0812加folfirinox组合疗法可能对治疗胰腺癌具有临床意义。
[1111]
3.2：单独的abtl0812或与多柔比星组合在使用石川细胞植入裸小鼠中的人子宫内膜癌异种移植模型中的抗癌活性
[1112]
目的：研究单独的abtl0812和与用于治疗子宫内膜癌的参考二线治疗药物多柔比星组合的抗肿瘤活性。
[1113]
方法：在一侧向小鼠注射4
×
106个石川细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤体积为大约50mm3时，动物被均匀地随机分配并且开始不同的治疗。通过口服途径以120mg/kg/天施用abtl0812。每周一次腹膜内施用多柔比星5mg/kg。每周3次监测肿瘤体积和体重。
[1114]
结果：与对照动物相比，abtl0812和多柔比星显著减少了肿瘤体积(anova，然后是t检验)。abtl0812的功效确实与针对多柔比星治疗观察到的功效类似。有趣的是，abtl0812增强了多西他赛的抗肿瘤作用。统计分析表明与单独的多柔比星相比，此组合疗法显著改进肿瘤生长的减少(*p《0.05，通过t检验得出)。另外，在治疗组(包含abtl0812与多柔比星一起施用的治疗组)中的任何组中均未观察到体重或血液计数(未示出)的减少，这表明此组合没有毒性作用。参见本文图7。
[1115]
结论：abtl0812减少源自石川细胞的子宫内膜癌异种移植模型中的肿瘤生长。在此模型中，abtl0812的功效与soc多柔比星类似。abtl0812增强了多柔比星的抗肿瘤活性，并且没有毒性作用。这些结果表明abtl0812加多柔比星的组合疗法可能对子宫内膜癌的治疗具有临床意义。
[1116]
3.3：单独的abtl0812或与替莫唑胺组合在使用u87mg细胞植入裸小鼠脑中的人胶质母细胞瘤原位异种移植模型中的抗癌活性
[1117]
目的：研究单独的abtl0812和与用于治疗胶质母细胞瘤的参考药物替莫唑胺组合的抗肿瘤活性。
[1118]
方法：向小鼠脑内注射萤光素酶转染的u87mg细胞。动物在细胞接种后5天被随机分配并且开始治疗。以240mg/kg 5天/周口服施用abtl0812；在前5天以32mg/kg口服施用替莫唑胺。通过对所关注区的生物发光强度(bli)进行量化来测量肿瘤。
[1119]
结果：abtl0812和替莫唑胺作为单一药剂显著增加了脑中携带胶质母细胞瘤的动物的无病存活期。有趣的是，abtl0812与替莫唑胺的组合明显比单一治疗更有效。参见本文图8。
[1120]
结论：abtl0812作为单一药剂增加携带肿瘤小鼠的无病存活期并增强替莫唑胺的抗肿瘤活性。这些结果表明abtl0812加替莫唑胺的组合疗法可能对治疗胶质母细胞瘤具有临床意义。
[1121]
实例4：abtl0812与放射疗法组合：体内测定
[1122]
4.1：单独的abtl0812或与放射疗法组合在使用u87mg和t98g细胞植入裸小鼠中的人胶质母细胞瘤皮下异种移植模型中的抗癌活性
[1123]
目的：研究单独的abtl0812和与用于胶质母细胞瘤的主要疗法策略放射疗法组合的抗肿瘤活性。
[1124]
方法：在每侧向小鼠皮下注射1
×
106个u87mg或t98g细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤体积为0.8-1.3cm3时，动物被均匀地随机分配并且开始不同的治疗。以240mg/kg 5天/周口服施用abtl0812，并且在第3天以单一剂量4gy施用放射疗法。
[1125]
结果：abtl0812作为单一药剂显著减少了胶质母细胞瘤皮下肿瘤的生长。此外，abtl0812与放射疗法的组合明显比abtl0812或放射疗法作为单一治疗更有效。参见本文图9。
[1126]
结论：abtl0812作为单一药剂减少胶质母细胞瘤的生长并增强放射疗法的抗肿瘤活性。这些结果表明abtl0812加放射疗法的组合疗法可能对治疗胶质母细胞瘤具有临床意义。
[1127]
4.2：单独的abtl0812或与放射疗法组合在使用u87mg细胞植入裸小鼠脑中的人胶质母细胞瘤原位异种移植模型中的抗癌活性
[1128]
目的：研究单独的abtl0812和与用于胶质母细胞瘤的主要疗法策略放射疗法组合的抗肿瘤活性。
[1129]
方法：向小鼠脑内注射萤光素酶转染的u87mg细胞。动物在细胞接种后5天被随机分配并且开始治疗。以240mg/kg 5天/周口服施用abtl0812，并且在第10天以单一剂量4gy施用放射疗法。通过对所关注区的生物发光强度(bli)进行量化来测量肿瘤。
[1130]
结果：abtl0812和放射疗法作为单一药剂显著增加了脑中携带胶质母细胞瘤的动
物的无病存活期。有趣的是，abtl0812与放射疗法的组合明显比单一治疗更有效。参见本文图10。
[1131]
结论：abtl0812作为单一药剂增加携带肿瘤小鼠的无病存活期并增强放射疗法的抗肿瘤活性。这些结果表明abtl0812加放射疗法的组合疗法可能对治疗胶质母细胞瘤具有临床意义。
[1132]
实例5：abtl0812与靶向疗法组合：体内测定
[1133]
5.1：单独的abtl0812或与奥拉帕尼组合在使用石川细胞植入裸小鼠中的人子宫内膜癌模型中的抗癌活性
[1134]
目的：研究单独的abtl0812和与用于治疗子宫内膜癌的参考药物奥拉帕尼组合的抗肿瘤活性。
[1135]
方法：在一侧向小鼠注射4
×
106个石川细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤体积为大约50mm3时，动物被均匀地随机分配并且开始不同的治疗。通过口服途径以120mg/kg/天施用abtl0812。以50mg/kg/天通过口服途径施用奥拉帕尼。每周3次监测肿瘤体积和体重。
[1136]
结果：与对照动物相比，abtl0812和奥拉帕尼显著减少了肿瘤体积(anova，然后是t检验)。abtl0812的功效确实与针对奥拉帕尼治疗观察到的功效类似。有趣的是，abtl0812增强了多西他赛的抗肿瘤作用。统计分析表明与单独的奥拉帕尼相比，此组合疗法显著改进肿瘤生长的减少(***p《0.01，通过t检验得出)。另外，在治疗组(包含abtl0812与奥拉帕尼一起施用的治疗组)中的任何组中均未观察到体重或血液计数(未示出)的减少，这表明此组合没有毒性作用。参见本文图11。
[1137]
结论：abtl0812减少源自石川细胞的子宫内膜癌异种移植模型中的肿瘤生长。在此模型中，abtl0812的功效与奥拉帕尼治疗类似。abtl0812增强了奥拉帕尼的抗肿瘤活性，并且没有毒性作用。这些结果表明abtl0812加奥拉帕尼的组合疗法可能对子宫内膜癌的治疗具有临床意义。
[1138]
5.2：单独的abtl0812或与贝伐单抗组合在使用石川细胞植入裸小鼠中的人子宫内膜癌模型中的抗癌活性
[1139]
目的：研究单独的abtl0812和与示出对子宫内膜癌的潜在功效的贝伐单抗组合的抗肿瘤活性。
[1140]
方法：在一侧向小鼠注射4
×
106个石川细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤体积为大约50mm3时，动物被均匀地随机分配并且开始不同的治疗。通过口服途径以120mg/kg/天施用abtl0812。以100μg/剂量皮下施用贝伐单抗，每四天至多施用四次。每周3次监测肿瘤体积和体重。
[1141]
结果：与对照动物相比，abtl0812和贝伐单抗显著减少了肿瘤体积(anova，然后是t检验)。abtl0812的功效确实与针对贝伐单抗治疗观察到的功效类似。有趣的是，abtl0812增强了多西他赛的抗肿瘤作用。统计分析表明与单独的贝伐单抗相比，此组合疗法显著改进肿瘤生长的减少(*p《0.05，通过t检验得出)。另外，在治疗组(包含abtl0812与贝伐单抗一起施用的治疗组)中的任何组中均未观察到体重或血液计数(未示出)的减少，这表明此组合没有毒性作用。参见本文图12。
[1142]
结论：abtl0812减少源自石川细胞的子宫内膜癌异种移植模型中的肿瘤生长。在此模型中，abtl0812的功效与贝伐单抗治疗类似。abtl0812增强了贝伐单抗的抗肿瘤活性，
并且没有毒性作用。这些结果表明abtl0812加贝伐单抗的组合疗法可能对子宫内膜癌的治疗具有临床意义。
[1143]
实例6：abtl0812的免疫调节作用：体外测定
[1144]
6.1：abtl0812通过增强m1促炎性和抑制m2抗炎性表型对人thp-1人巨噬细胞的免疫调节作用
[1145]
目的：研究abtl0812对巨噬细胞极化为m1表型(促炎性和抗肿瘤)和m2表型(抗炎性促肿瘤)的免疫调节作用，这将影响abtl0812治疗后的肿瘤微环境。
[1146]
方法：将在悬浮液中生长的thp-1单核细胞通过用pma温育24小时分化为巨噬细胞，从而诱导其附着到板上。一旦thp-1分化为巨噬细胞，通过在存在abtl0812(50μm或100μm)的情况下用lps温育6小时或24小时来将所述巨噬细胞极化为m1。同时，通过在存在abtl0812(50μm)的情况下用il-4和il-13温育24小时来将分化的巨噬细胞极化为m2。然后，裂解极化的巨噬细胞，提取总rna，逆转录为cdna，并使用特定探针通过rt-qpcr评估il1β、tnfα(m1标志物)和il-10(m2标志物)的mrna水平。
[1147]
结果：abtl0812免疫调节作用在巨噬细胞极化为m1时显著增强il-1β和tnfαmrna水平，并且在巨噬细胞极化为m2时显著抑制il-10mrna水平。(t检验**p《0.01并且***p《0.001)。当分化的巨噬细胞与单独的abtl0812一起温育而不使其极化时，abtl0812能够显著诱导il-1β的表达，突出了其对人thp-1细胞的免疫调节作用。参见本文图13。
[1148]
结论：abtl0812增强人thp-1单核细胞向m1的极化，显著增加il-1β和tnfα的基因表达，从而促进将施加抗肿瘤作用的促炎性环境。此外，abtl0812抑制人thp-1单核细胞向m2的极化，显著减少il-10的基因表达，从而避免了由m2巨噬细胞介导的免疫抑制，这是肿瘤细胞逃避免疫系统的常见机制。这些结果表明，除了abtl0812对肿瘤细胞的抗癌作用外，其还刺激免疫系统以形成促炎性表型，募集其它免疫细胞作为细胞毒性t淋巴细胞，因此将诱导免疫系统抑制的“冷”肿瘤变为“热”且免疫源性肿瘤，通过促进促炎性和抗肿瘤微环境突出了abtl0812与具体地免疫检查点抑制剂的潜在组合以增强抗癌功效。
[1149]
6.2：在用abtl0812处理的癌细胞中诱导pdl1表达
[1150]
目的：研究单独的abtl0812或与pdl1表达的充分描述的主要调节剂ifnγ组合对癌细胞中pdl1表达的免疫调节作用。
[1151]
方法：在48小时期间用100μm abtl0812温育人类癌细胞系并且采集用于用荧光团标记的抗pdl1抗体染色。在用抗pdl1抗体将细胞染色后，将细胞在流式细胞仪(facs canto)上运行以分析癌细胞中的pdl1水平。另外，将panc-1细胞与abtl0812(50μm)、ifnγ(2.5ng/ml)、pdl1表达的主要调节剂或两者的组合一起温育。然后，采集细胞，用抗-pdl1抗体染色并通过流式细胞仪分析pdl1的表达。
[1152]
结果：abtl0812诱导pdl1在所有测试的癌细胞系中表达，其之间效力类似，从基础水平到增加34％(miapaca2细胞)到86％(capan-2细胞)(t检验*p《0.05，**p《0.01)。当在含有或不含abtl0812的ifnγ温育的panc-1细胞中分析pdl1水平时，与abtl0812相比，ifnγ诱导显著更高水平的pdl1(t检验**p《0.01)。有趣的是，用abtl0812和ifnγ温育的细胞诱导的pdl1水平类似于abtl0812介导的作用与ifnγ介导的作用的总和。与abtl0812治疗相比，abtl0812与ifnγ组合诱导显著更高的pdl1水平(t检验***p《0.001)，尽管与ifnγ治疗相比，这种增加并不显著，这表明当两种药物一起施用时对pdl1表达的加性效应。参见本文
图14。
[1153]
结论：abtl0812在人胰腺癌细胞和子宫内膜癌细胞中诱导pdl1表达。与abtl0812相比，pdl1表达的主要调节剂ifnγ诱导更高的pdl1水平，尽管当两种药物一起施用时，对pdl1表达水平有加性效应，诱导更高的水平。abtl0812对癌细胞具有细胞毒性，并刺激巨噬细胞形成促炎性表型，其中包含产生高水平的ifnγ。这些结果突出了abtl0812与免疫检查点抑制剂的潜在组合，因为介导的pdl1水平的诱导将使癌细胞可由免疫检查点抑制剂靶向。
[1154]
6.3：巨噬细胞中促炎性环境的诱导
[1155]
目的：在评估abtl0812对人巨噬细胞的免疫调节作用后，研究abtl0812对癌细胞的影响以及这种经abtl0812处理的癌细胞的条件培养基如何影响人巨噬细胞的活力和极化。
[1156]
方法：在72小时期间用40μm abtl0812温育miapaca2细胞，并采集这些经abtl0812处理的细胞的条件培养基(rpmi)。同时，通过用pma(佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯)温育24小时将人thp-1细胞分化为巨噬细胞，诱导其附着到板上。然后，将来自经abtl0812处理的miapaca2细胞的条件培养基转移到经pma激活的thp-1巨噬细胞中，并在24小时期间温育以用于m1表型标志物il-1β和tnf-α的rt-qpcr分析，或在48小时期间使用mtt测定进行细胞活力研究。对于m1标志物分析，采集细胞，提取rna，逆转录为cdna，并通过rt-qpcr评估il-1β和tnf-α的mrna水平。
[1157]
结果：先前的结果表明，abtl0812对miapaca2细胞具有细胞毒性，其中ic50为50μm，还诱导不同因子释放到培养基中。当经abtl0812处理的miapaca2细胞的此培养基被转移到激活的thp-1巨噬细胞时，这会诱导其代谢激活，从而显著增加thp-1细胞活力。此外，abtl0812条件培养基诱导thp-1巨噬细胞向促炎性抗肿瘤表型极化，显著增加il-1β和tnf-α的基因表达，因此通过abtl0812对癌细胞的作用证实其介导的免疫调节作用。参见本文图15。
[1158]
结论：abtl0812不仅通过对巨噬细胞极化的直接作用，而且通过对癌细胞的作用示出免疫调节作用，因为来自miapaca2细胞的abtl0812条件培养基不仅能够增加人thp-1巨噬细胞的活力和代谢活性，而且能够通过增加这些巨噬细胞中il-1β和tnf-α的表达来诱导其向m1极化。这些数据与icd的诱导(实例6.7)和免疫抑制因子分泌的抑制(实例6.6)组合，强烈表明除了其人巨噬细胞的直接作用外，abtl0812能够通过其对癌细胞的抗癌作用来免疫调节肿瘤微环境，进而将“冷”肿瘤转化为“热”肿瘤并且免疫系统可靶向，因此突出了其与免疫检查点抑制剂的潜在组合以增强抗癌功效。
[1159]
6.4：在用abtl0812处理的癌细胞中诱导pdl1表达
[1160]
目的：研究abtl0812对癌细胞中pdl1表达的免疫调节作用，可能使癌细胞暴露于使用免疫检查点抑制剂的免疫疗法。
[1161]
方法：以0μm到80μm的剂量用abtl0812温育人胰腺癌细胞系(miapaca2、panc-1、capan-2和su.86.86)和人子宫内膜癌细胞系(石川、anc3、hec-1a、ark1和ark2)24小时。然后采集细胞并用抗pdl1抗体染色，用于流式细胞术分析pdl1阳性细胞的百分比。
[1162]
结果：abtl0812在所有测试的癌细胞系中诱导pdl1的表达，在胰腺癌细胞中增加34％到86％，并且在子宫内膜癌细胞中增加10％到35％(t检验*p《0.05，**p《0.01)。参见本
文图19。
[1163]
结论：abtl0812在人胰腺癌细胞和子宫内膜癌细胞中诱导pdl1表达，可能使癌细胞可由免疫检查点抑制剂靶向。这些结果支持abtl0812和免疫疗法用于治疗癌症的潜在协同作用。
[1164]
6.5：来自用abtl0812离体治疗的健康供体的外周血的原代人cd4和cd8 t细胞中pd1表达的抑制
[1165]
目的：研究abtl0812对cd3和cd28激活或未激活的原代人t细胞中pd1表达的免疫调节作用。
[1166]
方法：使用ficoll从健康供体的外周血中纯化人pbmc，并且在体外进行培养。通过用il-2和cd3和cd28抗体温育10天激活人t细胞，并且然后用abtl0812处理6小时。最后，使用特异性抗体通过流式细胞术分析t细胞膜中表达的pd1水平。结果表示为阳性细胞的％，并且示出三个独立实验的平均值(t检验**p《0.01并且***p《0.001)。
[1167]
结果：abtl0812在非激活的和激活的人原代cd4和cd8 t淋巴细胞中诱导pd1表达的抑制。参见本文图20。
[1168]
结论：abtl0812在从健康供体的血液中纯化的激活的和未激活的原代人cd4和cd8 t细胞两者中诱导pd1表达的抑制。这可能通过阻断由pd1介导的免疫抑制和t细胞失活而有助于增强免疫系统对抗癌细胞。
[1169]
6.6：abtl0812对人胰腺癌细胞分泌组的免疫调节作用
[1170]
目的：通过使用检测至多38种不同趋化因子的蛋白质微阵列分析培养基中的分泌因子来研究abtl0812对癌细胞分泌组的免疫调节作用。
[1171]
方法：将人胰腺癌细胞用100um abtl0812处理24小时，并且采集培养基用于使用raybio c系列人趋化因子抗体阵列c1(瑞博奥公司(raybiotec))进行温育。将培养基与含有针对38种不同趋化因子的抗体的膜一起温育。之后，将所述膜与二级抗体一起温育，并使用hrp底物进一步发展。使用密度测定法评估信号强度，并且图形示出三种不同生物复制的结果。
[1172]
结果：abtl0812免疫调节作用诱导免疫抑制趋化因子cxcl6减少(与免疫抑制、侵袭和不良预后有关)；cxcl16减少(促进肿瘤侵袭并且其在胰腺癌中上调)；血管生成素减少(促进免疫抑制和血管生成)；以及ccl5减少(促进treg肿瘤浸润和免疫抑制)。参见本文图21。
[1173]
结论：abtl0812促进抑制人胰腺癌细胞中免疫抑制因子的释放。这些数据表明abtl0812对癌细胞分泌组的作用调节肿瘤微环境朝向更促炎性和抗肿瘤表型，从而抑制免疫抑制剂因子的分泌。
[1174]
6.7：abtl0812通过诱导免疫原性细胞死亡对人胰腺癌细胞的免疫调节作用
[1175]
目的：通过评估免疫原性细胞死亡(icd)诱导来研究abtl0812对癌细胞的免疫调节作用。
[1176]
方法：将人胰腺癌细胞用增加浓度的abtl0812(从0μm到150μm)处理24小时，并通过elisa(hmgb1和atp)、流式细胞术(钙网蛋白)和免疫印迹(胱天蛋白酶3和8)评估icd标志细胞外hmgb1和atp、表面钙网蛋白和胱天蛋白酶3和8激活。对于细胞外hmgb1和atp，采集来自经abtl0812处理的细胞的培养基并与特异性抗体一起温育，以用于使用比色测定进一步
检测。对于表面钙网蛋白，采集癌细胞并与特异性抗体一起温育，以用于使用流式细胞术进一步检测。对于胱天蛋白酶3和8激活，采集癌细胞，获得蛋白质裂解物，与特异性抗体一起温育以用于使用免疫印迹进一步检测，并且最后使用密度测定法进行量化。
[1177]
结果：abtl0812免疫调节作用在以下所有icd标志中诱导剂量依赖性增加：细胞外hmgb1和atp、表面钙网蛋白和胱天蛋白酶3和8激活，如分别通过elisa、荧光素酶测定、流式细胞术和基于荧光的底物测定检测的(t检验**p《0.01并且***p《0.001)。参见本文图22。用不同的人胰腺癌细胞系获得了类似的结果；在图23中，miapaca2细胞中的结果示出为代表性实验。
[1178]
结论：abtl0812在人胰腺癌细胞中诱导icd，如以下icd标志物的剂量依赖性增加所指示的：细胞外hmgb1和atp、表面钙网蛋白和胱天蛋白酶3和8激活。这些结果表明abtl0812可以在肿瘤中诱导icd，使所述肿瘤更加免疫原性并且对于免疫系统更加可靶向，从而帮助将诱导免疫系统抑制的“冷”肿瘤变成“热”且免疫原性肿瘤。这些数据支持abtl0812与免疫疗法的潜在组合以增强抗癌功效。
[1179]
6.8：abtl0812通过增强m1促炎性和抑制m2抗炎性表型对人永生化thp-1和人主要巨噬细胞的免疫调节作用
[1180]
目的：研究abtl0812对永生化和主要巨噬细胞极化为m1表型(促炎性和抗肿瘤)和m2表型(抗炎性促肿瘤)的免疫调节作用，这将影响abtl0812治疗后的肿瘤微环境。
[1181]
方法：将在悬浮液中生长的thp-1单核细胞通过用pma温育24小时分化为巨噬细胞，从而诱导其附着到板上。将单核细胞分化为巨噬细胞，用20ng/ml m-csf1温育7天。同时，从健康供体采集全血，并且使用免疫磁分离纯化循环单核细胞。使用与磁性珠粒结合的抗cd14抗体选择单核细胞，所述磁性珠粒保留在磁性柱中并且进一步洗脱用于体外培养。在获得激活的巨噬细胞(永生化和原代)后，通过在存在100μm abtl0812的情况下用lps+ifnγ温育6小时将所述激活的巨噬细胞极化为m1。同时，通过在存在abtl0812(100μm)的情况下用il-4和il-13温育24小时来将分化的巨噬细胞极化为m2。之后，裂解极化的巨噬细胞，提取总rna，逆转录为cdna，并使用特定探针通过rt-qpcr评估il1β、tnfα(m1标志物)和il-10(m2标志物)的mrna水平。
[1182]
结果：abtl0812免疫调节作用在巨噬细胞极化为m1时显著增强il-1β和tnfαmrna水平，并且在巨噬细胞极化为m2时显著抑制il-10mrna水平(t检验**p《0.01并且***p《0.001)。当分化的巨噬细胞与单独的abtl0812一起温育而不使其极化时，abtl0812显著诱导il-1β的表达，突出了其对人thp-1细胞的免疫调节作用。参见本文图24。
[1183]
结论：abtl0812增强人thp-1和人原代巨噬细胞两者向m1的极化，显著增加il-1β和tnfα的基因表达，从而促进将施加抗肿瘤作用的促炎性环境。此外，abtl0812抑制人thp-1单核细胞向m2的极化，显著减少il-10的基因表达，从而避免了由m2巨噬细胞介导的免疫抑制，这是肿瘤细胞逃避免疫系统的常见机制。这些结果表明，除了abtl0812对肿瘤细胞的抗癌作用外，其还刺激免疫系统以形成促炎性表型，募集其它免疫细胞作为细胞毒性t淋巴细胞，因此将诱导免疫系统抑制的“冷”肿瘤变为“热”且免疫源性肿瘤。这些结果支持abtl0812与免疫疗法的潜在组合，以通过促进促炎性和抗肿瘤微环境来增强抗癌功效。
[1184]
6.9：abtl0812通过蛋白质微阵列对人永生化thp1巨噬细胞和人原代巨噬细胞分泌组的免疫调节作用
[1185]
目的：研究abtl0812对永生化和原代巨噬细胞分泌组的免疫调节作用，使用经abtl0812处理后检测至多42种不同细胞因子的蛋白质微阵列分析培养基中分泌的因子。
[1186]
方法：从健康供体采集全血，并且使用免疫磁分离纯化循环单核细胞。使用与磁性珠粒结合的抗cd14抗体选择单核细胞，所述磁性珠粒保留在磁性柱中并且进一步洗脱用于体外培养。将单核细胞分化为巨噬细胞，用20ng/ml m-csf1温育7天。一旦原代单核细胞分化为巨噬细胞，通过在存在abtl0812(50μm或100μm)的情况下用lps温育6小时或24小时来将所述巨噬细胞极化为m1。同时，通过在存在abtl0812(50μm)的情况下用il-4和il-13温育24小时来将分化的巨噬细胞极化为m2。将在悬浮液中生长的thp-1单核细胞通过用pma温育24小时分化为巨噬细胞，从而诱导其附着到板上。一旦thp-1分化为巨噬细胞，通过在存在abtl0812(50μm)的情况下用lps温育6小时或24小时来将所述巨噬细胞极化为m1。同时，通过在存在abtl0812(50μm)的情况下用il-4和il-13温育24小时来将分化的巨噬细胞极化为m2。使用raybio c系列人细胞因子抗体阵列c3(瑞博奥公司)温育来自经abtl0812处理的m1、m2和分化的巨噬细胞(m0)的培养基。将培养基与含有针对42种不同细胞因子的抗体的pvdf(聚偏二氟乙烯)膜一起温育。培养基温育之后，将所述膜与二级抗体一起温育，并使用hrp(辣根过氧化物酶)底物进一步发展。使用密度测定法评估信号强度，并且图形示出三种不同生物复制的结果。
[1187]
结果：abtl0812免疫调节作用诱导免疫抑制趋化因子减少以及如il-1β和tnf-α等不同促炎性因子上调。在abtl0812治疗后被抑制的所有免疫抑制细胞因子中，其中以下五种在永生化thp1细胞和原代巨噬细胞中很常见：il-10(与不同癌症的免疫抑制、侵袭和不良预后相关联)；ccl22(与不同癌症的免疫抑制、侵袭和不良预后相关联)；ccl17(与不同癌症的免疫抑制、侵袭和不良预后相关联)；ccl8(与免疫抑制、增殖和侵袭相关联)；以及ccl7(与免疫抑制和侵袭相关联)。参见本文图25。
[1188]
结论：abtl0812促进促炎性因子的分泌并抑制癌细胞中免疫抑制因子的释放。这些数据与m1巨噬细胞表型的增强和m2表型的抑制(实例6.8)组合，表明abtl0812可以促进促炎性抗肿瘤环境对其对免疫细胞的作用。这些结果支持abtl0812与免疫疗法的潜在组合，以增加对肿瘤，具体地，在那些高度免疫抑制性肿瘤，如胰腺癌中的治疗效果。
[1189]
6.10：abtl0812免疫调节作用增加t细胞在癌细胞中的细胞毒性
[1190]
目的：研究abtl0812对与激活的t细胞共培养的癌细胞的免疫调节作用。
[1191]
方法：使用ficoll从健康供体的外周血中纯化人pbmc，并且在体外进行培养。通过用il-2和cd3和cd28抗体温育10天激活人t细胞。同时，将石川子宫内膜癌细胞用50μm abtl0812处理6小时，并且然后与激活的t淋巴细胞共培养24小时。然后，通过mtt测定评估细胞活力。未经处理的石川细胞用作对照。结果示出三个不同实验的平均值(t检验*p《0.05)。
[1192]
结果：与未经abtl0812处理的癌细胞相比，abtl0812对癌细胞的作用增强了激活的t细胞的细胞毒性作用，这与由abtl0812介导的促炎性环境对癌细胞的促进有关。参见本文图26。
[1193]
结论：abtl0812对癌细胞的作用促进免疫系统的激活，从而增强激活的原代细胞对癌细胞的细胞毒性作用。
[1194]
实例7：abtl0812的免疫调节作用：体内测定
[1195]
7.1：在植入h157细胞的人肺癌异种移植模型和植入miapaca2细胞的人胰腺癌模型中在用abtl0812处理的癌细胞中诱导pdl1表达
[1196]
目的：在两个体内模型中使用植入裸小鼠体内的人鳞状nslc细胞系h157和人胰腺癌细胞系miapaca2验证体外观察到的abtl0812对pdl1表达的诱导作用。
[1197]
方法：在一侧向小鼠注射4
×
106个h157细胞或5
×
106个miapaca2细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤体积为大约50mm3时，动物被均匀地随机分配并且开始不同的治疗。通过口服途径以120mg/kg/天施用abtl0812，持续三周。治疗后，处死动物，提取肿瘤并通过蛋白质印迹分析癌细胞中pdl1的蛋白质水平。
[1198]
结果：abtl0812在体内增加肿瘤中pdl1的蛋白质水平，从而进一步验证先前的体外结果(图14)。这些结果突出了abtl0812与免疫检查点抑制剂的潜在组合，因为介导的pdl1水平的诱导将使癌细胞可由免疫检查点抑制剂靶向。
[1199]
7.2：来自用abtl0812治疗的患有子宫内膜癌的雌性小鼠的子宫肿瘤病灶内t细胞浸润的诱导
[1200]
目的：验证abtl0812在由上皮细胞中pten缺失诱导的子宫内膜癌变的同基因模型中的抗癌功效和免疫调节作用，所述癌变导致增生的发展，最终导致子宫内膜上皮内瘤变。
[1201]
方法：向小鼠注射他莫昔芬以诱导pten缺失。使用他莫昔芬三周后，当动物发展增生时，在3周期间以每天120mg/kg施用abtl0812或施用媒剂。当时，经媒剂处理的动物(注射他莫昔芬后6周)发展瘤形成，通过对提取的子宫的免疫组织化学对所述瘤变进行量化。abtl0812治疗后，处死动物，石蜡包埋所提取的子宫以用于进一步免疫组织化学分析，通过苏木精-伊红染色进行癌变评估，或者用抗cd3评估肿瘤病灶内表明肿瘤微环境免疫调节的t淋巴细胞浸润。
[1202]
结果：用abtl0812治疗的经受子宫内膜癌变的小鼠示出子宫内膜上皮内瘤变(ein)的发展显著减少，阻止了增生中的癌变进展，其中通过苏木精-伊红染色分析，经媒剂治疗的小鼠示出80％的动物患有ein，与之相比，80％经abtl0812治疗的动物患有增生。当分析经处理的子宫中cd3 t淋巴细胞的表达时，abtl0812诱导cd3 t淋巴细胞在肿瘤病变内的浸润，而经媒剂处理的动物在内衬肿瘤病变的周围基质中示出cd3 t淋巴细胞，而没有浸润到肿瘤内。参见本文图23。
[1203]
结论：abtl0812在体内的免疫调节作用示出其如何诱导肿瘤病变内t淋巴细胞的浸润，指示存在有利于免疫细胞浸润以杀死癌细胞的促炎性抗肿瘤微环境。这些数据与良好功效结果相关，其中abtl0812能够阻止增生中的子宫内膜癌变进展，而经媒剂治疗的动物示出上皮内瘤变，突出了其与免疫检查点抑制剂的潜在组合以增强抗癌功效。
[1204]
实例8：abtl0812与免疫治疗剂组合：体内测定
[1205]
8.1：单独的abtl0812或与抗pd1组合在使用植入c57bl6小鼠中的llc1细胞的肺癌小鼠模型中的抗癌活性
[1206]
目的：在存活率方面并且基于针对大于800mm3的肿瘤的端点标准或鉴定毒性或痛苦的临床症状研究单独的abtl0812和与用于治疗肺癌的参考药物抗pd1抗体组合的抗肿瘤活性。派姆单抗是人用抗pd1检查点抑制剂-在本实例中使用了经优化用于本实例中使用的鼠类模型的对应经修饰版本。
[1207]
方法：路易斯肺癌细胞(lewis lung carcinoma cell，llc1)是高度致瘤性鼠类细
胞系，其最初来源于被植入原发性路易斯肺癌(lewis lung carcinoma)的c57bl小鼠的肺。这些细胞可以在同基因c57bl6小鼠中皮下生长，在那里所述细胞发展出非常具有侵袭性的肿瘤，并且可以用于评估免疫疗法治疗。在一侧向c57bl6小鼠注射0.25
×
106个llc1细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤体积为大约50mm3时，动物被均匀地随机分配到治疗组中(n＝7)并且开始不同的治疗。通过口服途径以120mg/kg/天施用abtl0812。以每三天100ug/剂量腹膜内施用抗pd1抗体，总共施用四次。每周3次监测肿瘤体积和体重。端点标准基于超过800mm3的肿瘤，或指示动物安乐死的毒性、剧痛或痛苦的临床体征。
[1208]
结果：与媒剂和抗pd1治疗组相比，单独施用abtl0812能够略微增加小鼠存活率，治疗14天后示出15％的存活率，与之相比，媒剂和抗pd1组中的存活率为0％。有趣的是，abtl0812+抗pd1抗体的双重组合示出最好的存活率，治疗14天后存活率为38％。治疗9天后，媒剂组示出29％的存活率，抗pd1组15％的存活率，abtl0812组43％的存活率，以及abtl0812+抗pd1治疗62％的存活率。参见本文图16。
[1209]
结论：与媒剂、抗pd1和abtl0812治疗相比，abtl0812与抗pd1治疗(免疫检查点抑制剂)组合显著增加了小鼠存活率。单独施用abtl0812在治疗14天后略微增加了小鼠存活率，尽管其单独施用的效果在较短的时间内更高。这些数据表明abtl0812与抗pd1治疗之间的协同效应，导致小鼠存活率增加，并且突出了其用于人类患者的潜在组合。
[1210]
8.2：单独的abtl0812或与抗pd1/紫杉醇/卡铂组合在使用植入c57bl6小鼠中的llc1细胞的肺癌小鼠模型中的抗癌活性
[1211]
目的：研究单独的abtl0812和与用于治疗人肺癌的组合参考疗法抗pd1抗体和卡铂/紫杉醇组合的抗肿瘤活性，评估abtl0812与抗pd1+卡铂/紫杉醇治疗之间在皮下生长的llc1异种移植物的肿瘤体积减少方面的潜在协同作用。
[1212]
方法：路易斯肺癌细胞(llc1)是高度致瘤性鼠类细胞系，其最初来源于被植入原发性路易斯肺癌的c57bl小鼠的肺。这些细胞可以在同基因c57bl6小鼠中皮下生长，在那里所述细胞发展出非常具有侵袭性的肿瘤，并且可以用于评估免疫疗法治疗。在一侧向c57bl6小鼠注射0.25
×
106个llc1细胞以诱导肿瘤形成。肿瘤植入之后一天，将动物分配到治疗组中，并且开始治疗(n＝5)。以120mg/kg/天口服施用abtl0812；每三天以100μg/剂量腹膜内(i.p.)施用抗pd1抗体，总共施用五次；分别以15和5mg/kg腹膜内施用卡铂和紫杉醇，每周一次，总共施用三四次。每周3次监测肿瘤体积和体重。
[1213]
结果：与对照动物相比，abtl0812和抗pd1+卡铂/紫杉醇治疗显著减少了肿瘤体积(anova，然后是t检验*p《0.05)。abtl0812的功效确实与针对多西他赛治疗观察到的功效类似。有趣的是，abtl0812增强了多西他赛的抗肿瘤作用。统计分析表明与单独的多西他赛相比，此组合疗法显著改进肿瘤生长的减少(p《0.001，通过t检验得出)。另外，在治疗组(包含abtl0812与多西他赛一起施用的治疗组)中的任何组中均未观察到体重或血液计数(未示出)的减少，这表明此组合没有毒性作用。参见本文图17。
[1214]
结论：有关llc1异种移植物的文献描述了抗pd1治疗在这些肿瘤中无效，尽管与紫杉醇/卡铂的组合与媒剂对照组相比示出显著的肿瘤体积减少，因为使用化学疗法的治疗使肿瘤细胞具有免疫原性并且可由免疫系统识别，这是由抗pd1抗体增强的。单独施用abtl0812示出与抗pd1+紫杉醇/卡铂类似的功效，但当施用abtl0812+抗pd1+紫杉醇/卡铂三重组合时，与抗pd1+紫杉醇/卡铂相比，所述三重组合诱导显著的肿瘤体积减少，进一步
证明abtl0812之间的潜在协同作用，其也充当免疫调节剂诱导促炎性抗肿瘤肿瘤微环境，所述微环境与免疫检查点抑制剂协同作用以诱导更高的肿瘤体积减少。这些结果表明用于肺癌患者的标准治疗abtl0812加抗pd1+紫杉醇/卡铂组合疗法可能对肺癌的治疗具有临床意义。
[1215]
8.3：单独的abtl0812或与抗pd1/紫杉醇/卡铂组合在使用腹膜内注射到c57bl6小鼠中的llc1细胞的肺癌小鼠模型中的抗癌活性
[1216]
目的：研究单独的abtl0812和与用于治疗人肺癌的组合参考疗法抗pd1抗体和卡铂/紫杉醇组合的抗肿瘤活性，评估abtl0812与抗pd1+卡铂/紫杉醇治疗之间在腹膜内生长的llc1肿瘤的肿瘤体积减少方面的潜在协同作用。
[1217]
方法：路易斯肺癌细胞(llc1)是高度致瘤性鼠类细胞系，其最初来源于被植入原发性路易斯肺癌的c57bl小鼠的肺。这些细胞可以在同基因c57bl6小鼠中腹膜内生长，在那里所述细胞发展出附着到肠的非常侵袭性的肿瘤，并且可以用于评估免疫疗法治疗。在向c57bl6小鼠腹膜中注射1
×
106个llc1细胞以诱导肿瘤形成。肿瘤植入之后一天，将动物分配到治疗组中，并且开始治疗(n＝2)。以120mg/kg/天口服施用abtl0812；每三天以100ug/剂量腹膜内施用抗pd1抗体，总共施用五次；分别以15和5mg/kg腹膜内施用紫杉醇和卡铂，每周一次，总共施用三四次。治疗14天后对动物实施安乐死并采集在肠中生长的肿瘤。
[1218]
结果：与对照，即llc1细胞在c57bl6小鼠中腹膜内生长的异种移植模型中的abtl0812与抗pd1+紫杉醇/卡铂治疗相比，abtl0812与抗pd1+紫杉醇/卡铂组合显著减少了肿瘤体积，示出约一半大小。参见本文图18。
[1219]
结论：llc1细胞可以在c57bl6小鼠中腹膜内生长，从而发展附着到肠的非常侵袭性的肿瘤。与媒剂、abtl0812和抗pd1+紫杉醇/卡铂治疗相比，abtl0812+抗pd1+紫杉醇/卡铂的三重组合减少肿瘤生长。这些结果表明用于肺癌患者的标准治疗abtl0812加抗pd1+紫杉醇/卡铂组合疗法可能对肺癌的治疗具有临床意义。
[1220]
8.4：使用植入c57bl6小鼠中的mt5细胞的胰腺癌小鼠模型中abtl0812介导的抗癌活性和肿瘤微环境免疫调节
[1221]
目的：研究单独的abtl0812的抗肿瘤活性和体内肿瘤免疫调节作用，并与用于治疗不同人类癌症类型的参考药物抗pd1抗体进行比较。将通过肿瘤体积减少来评估抗癌功效，并且将通过肿瘤免疫细胞浸润分析来评估肿瘤微环境免疫调节。派姆单抗是人用抗pd1检查点抑制剂-在本实例中使用了经优化用于本实例中使用的鼠类模型的对应经修饰版本。
[1222]
方法：mt5细胞是最初来源于携带胰腺导管腺癌的三重转基因kras-p53-cre(kpc)小鼠的胰腺的kras和p53中突变的高致瘤性鼠类细胞。这些细胞可以在同基因c57bl6小鼠中皮下生长，在那里所述细胞发展出非常具有侵袭性的肿瘤，并且可以用于评估免疫疗法治疗。在一侧向c57bl6小鼠注射2
×
106个mt5细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤体积为大约50mm3时，动物被均匀地随机分配到治疗组中(n＝9)并且开始不同的治疗。治疗组是媒剂、abtl0812和抗pd1。通过口服途径以480mg/kg/天施用abtl0812。每三天以200μg/剂量腹膜内施用抗pd1抗体。每周3次监测肿瘤体积和体重。在治疗结束时，将小鼠安乐死，采集肿瘤并通过使用含有胶原酶和脂肪酶的消化培养基消化肿瘤并进一步用胰蛋白酶和dna酶进一步处理来获得单细胞悬浮液。另外，采集经处理的小鼠的脾，用滤网切碎，并且用胰蛋白酶
和dna酶处理后获得单细胞。获得细胞悬浮液后，使用针对不同免疫细胞亚群的特异性抗体对在肿瘤内浸润的癌细胞和免疫细胞进行染色，并使用流式细胞术进一步分析。使用的组合为：th1细胞＝cd45+cd4+ccr4-cxcr3+，th2细胞＝cd45+cd4+ccr4+cxcr3-，骨髓细胞＝cd45+cd11b+ly6c+，并且nk细胞＝cd45+nk1.1+。
[1223]
结果：单独施用abtl0812示出对mt5肿瘤的抗癌功效，与媒剂治疗组相比显著减少肿瘤体积，并示出与单独施用抗pd1治疗类似的功效。没有一种治疗示出小鼠体重的任何变化，动物中也没有任何毒性、疼痛或痛苦的临床体征。此外，abtl0812诱导肿瘤内骨髓细胞的增加，这与其在体外增强m1表型的能力相关，这伴随着肿瘤内具有抗癌活性的细胞nk细胞的百分比的增加。另外，经abtl0812治疗的小鼠的脾示出并且增加th1/th2比率，指示促炎性免疫系统应答(***p《0.001)。参见本文图27。
[1224]
结论：abtl0812通过将肿瘤微环境调节为更促炎性和抗肿瘤的环境，在使用mt5细胞的小鼠胰腺癌模型中示出抗癌功效。abtl0812增加脾中的th1/th2比率，指示脾中的促炎性环境，这通常用作指标或小鼠免疫系统激活。因此，abtl0812诱导肿瘤内骨髓细胞和nk细胞的增加，这指示促炎性抗肿瘤免疫浸润。重要的是，与抗pd1治疗相比，abtl0812介导的这种免疫调节作用显著更高。胰腺癌被认为是高度免疫抑制性和低免疫原性肿瘤，其中单独施用免疫疗法并没有示出非常乐观的效果。这些数据表明与抗pd1相比，abtl0812能够更有效地促进冷胰腺肿瘤转化为热且更免疫原性的肿瘤，因此突出了其与免疫疗法和化学疗法的潜在组合以提高抗癌功效。
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8.5：使用植入c57bl6小鼠中的mt5细胞的胰腺癌小鼠模型中abtl0812与抗pd1和folfirinox组合介导的抗癌活性和肿瘤微环境免疫调节
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目的：研究abtl0812与抗pd1和folfirinox组合施用的抗肿瘤活性和体内肿瘤免疫调节作用。先前的研究表明abtl0812在使用植入裸小鼠的miapaca2细胞的人胰腺癌异种移植模型中增强用于人类晚期胰腺癌患者的标准治疗folfirinox的抗癌功效的能力(实例3.1)。基于abtl0812在体内介导的肿瘤微环境调节的结果(实例8.4)，决定测试三重组合以评估其在肿瘤体积减少方面的效率。派姆单抗是人用抗pd1检查点抑制剂-在本实例中使用了经优化用于本实例中使用的鼠类模型的对应经修饰版本。
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方法：如实例8.4中所述，在一侧向c57bl6小鼠注射2
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106个mt5细胞以诱导肿瘤形成。当肿瘤体积为大约50mm3时，动物被均匀地随机分配到治疗组中(n＝9)并且开始不同的治疗。治疗组为媒剂、抗pd1、abtl0812+folfirinox以及三重组合abtl0812+抗pd1+folfirinox。通过口服途径以480mg/kg/天施用abtl0812。每三天以200μg/剂量腹膜内施用抗pd1抗体。folfirinox化学疗法组合每周一次腹膜内施用，共施用四次。在不同的两天中腹膜内施用30mg/kg 5-fu、50mg/kg甲酰四氢叶酸、50mg/kg伊立替康和2.5mg/kg奥沙利铂。周二施用5-fu和甲酰四氢叶酸，并且周四施用伊立替康和奥沙利铂。每周3次监测肿瘤体积和体重。在治疗结束时，将小鼠安乐死，采集肿瘤并通过使用含有胶原酶和脂肪酶的消化培养基消化肿瘤并进一步用胰蛋白酶和dna酶进一步处理来获得单细胞悬浮液。获得细胞悬浮液后，使用针对不同免疫细胞亚群的特异性抗体对在肿瘤内浸润的癌细胞和免疫细胞进行染色，并使用流式细胞术进一步分析。使用的组合为：骨髓细胞＝cd45+cd11b+ly6c+，以及cd8细胞＝cd45+cd3-cd8+。
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结果：与治疗中的其它治疗相比，abtl0812、抗pd1和folfirinox三重治疗示出最
高的抗肿瘤效果和最显著的肿瘤体积减少。没有一种治疗示出小鼠体重的任何变化，动物中也没有任何毒性、疼痛或痛苦的临床体征。当分析肿瘤免疫浸润时，针对mt5肿瘤的抗癌功效与肿瘤内骨髓细胞和cd8细胞的显著增加相关联，示出抗癌活性并促进促炎性表型。没有一种其它治疗示出cd8抗癌细胞的显著增加(****p《0.001)。参见本文图28。
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结论：abtl0812与抗pd1和folfirinox组合，通过将肿瘤微环境调节为更促炎性和抗肿瘤的环境，在使用mt5细胞的小鼠胰腺癌模型中示出增强的抗癌功效。abtl0812增加肿瘤内的骨髓细胞，这与cd8抗癌免疫细胞的增加有关，这可以转化为更促炎性和抗癌的环境。胰腺癌被认为是高度免疫抑制性和低免疫原性肿瘤，其中单独施用免疫疗法并没有示出非常乐观的效果。这些数据表明abtl0812+抗pd1和folfirinox三重组合可以为治疗此类型的癌症提供更有效的替代方案。
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参考文献
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1：ep2409963b1(lipopharma-于2010年提交)
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2：erazo等人；《临床癌症研究(clinical cancer research)》；22(10)2016年5月15日
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3：wo2018/210830a1(ability pharmaceuticals)