用于获得薰衣草的水性提取物的方法、包含这种提取物的组合物及其化妆品用途与流程

1.本发明涉及化妆品领域，并且更具体地涉及在化妆品配制品的制备中使用的改善皮肤外观或保护皮肤的天然来源的活性成分。
2.本发明涉及一种用于获得薰衣草的水性提取物的方法以及通过所述方法获得的富含小rna、糖、酚类化合物、有机酸的提取物；包含此类提取物的化妆品组合物；和它们用于皮肤护理、头皮和附属器的护理并且更具体地用于保护皮肤免受外部侵害和氧化、对抗皮肤衰老迹象、增加光保护、使皮肤增亮、改善皮肤水合、增强屏障功能、使皮肤舒缓或改善与夜间皮肤修复相关的生物机制的化妆品用途。


背景技术：

3.薰衣草属的植物，通常称为薰衣草，形成47种物种的组。其中最著名且最广泛使用的物种是狭叶薰衣草(lavandula angustifolia)，也称为真正薰衣草，其为一种原产于普罗旺斯(法国东南部)的野生物种；和醒目薰衣草(lavandin)，其为一种由真正薰衣草与穗花薰衣草(spike lavender)杂交而成的杂交种。
4.真正薰衣草在欧洲、北非、中东和亚洲广泛用于精油的生产，特别用于香水行业。
5.精油(eo)通常通过水蒸气蒸馏获得。使预先干燥的花经受蒸汽流，所述蒸汽流将挥发性或可溶性成分带走，并且然后再冷凝以获得纯露(或花水)和上清液，所述上清液包含植物的脂质部分并且构成精油。
6.薰衣草eo非常香，并且主要含有挥发性单萜，如芳樟醇和乙酸芳樟酯。在真正薰衣草eo中，两者都以约30％存在。薰衣草eo因其镇静、缓解疼痛、镇痛、抗炎、防腐和抗细菌特性而特别为人知晓。它还具有解痉和减充血作用，并且被指示用于舒缓皮肤状况和促进愈合。薰衣草eo也被指示用于改善睡眠障碍和各种紧张(焦虑、压力等)。
7.薰衣草花水含有小于百分之几的挥发性有机化合物(类似于精油中的挥发性有机化合物)，以及植物的水溶性化合物。花水具有与薰衣草精油相同的特性，但是由于萜烯化合物的浓度较低而更加减弱。
8.薰衣草精油和花水在化妆品中的用途非常有限，部分是由于大部分萜烯分子(因其对皮肤的刺激作用而为人知晓)的存在。芳樟醇例如已被认为具有潜在的致敏性，并且不建议孕妇和12岁以下的儿童使用薰衣草精油。
9.现有技术中描述的大多数其他薰衣草提取方法使用非极性类型的有机溶剂(这使得可以主要提取挥发性气味化合物(cn10338583，jp11199469))或超临界流体(kr2015042999)。在后一种情况下，所获得的提取物富含多酚和类黄酮，但是不含其他感兴趣的化合物，如氨基酸、有机酸或蛋白质。此外，酚酸不能通过这种类型的技术提取，因为这些分子主要在极性溶剂中提取，并且在理想情况下用水提取。
10.化妆品的消费者希望使用尽可能天然的但是仍与合成产品一样有效或更有效的配方。
11.尽管已经在售各种抗衰老的化妆品，但是对于天然来源的新的有效的化妆品成分的需求不断增加。
12.本发明提出要解决的一个问题是提供一种新的薰衣草水性提取物，所述薰衣草水性提取物应满足当前化妆品市场关于天然性标准的要求，并且还具有出色的生物学功效。
13.本发明提出要解决的另一个问题是提出一种新的薰衣草水性提取物，所述薰衣草水性提取物不具有当前已知提取物的缺点，即强烈的气味、用于外用的配方中eo的不稳定性、或由于萜烯分子如芳樟醇的存在而具有刺激性或致敏性特征。
14.本发明提出要解决的另一个问题是提供一种新的薰衣草水性提取物，所述薰衣草水性提取物富含已知对皮肤有效的化合物，如小rna、糖、酚类化合物和有机酸。
15.诸位发明人已经开发了一种新的薰衣草花提取物，所述薰衣草花提取物特别富含小rna、糖、酚类化合物和有机酸，并且没有所引用的现有技术方法的缺点(如在化妆品中使用潜在有毒的洗涤剂和溶剂)。
16.由此获得的提取物可用于化妆品，以用于皮肤护理、头皮和皮肤附属器护理，并且更特别地用于保护皮肤免受外部侵害和氧化、对抗皮肤衰老迹象、增加光保护、使皮肤亮白、改善皮肤水合、增强屏障功能或使皮肤舒缓。


技术实现要素：

17.本发明首先涉及一种用于获得薰衣草地上部分的水性提取物的方法，所述方法包括以下步骤a)使所述薰衣草地上部分与水接触；b)在10与11之间的ph下将浓度为1与10mm之间的植酸添加到a)中获得的混合物中；c)然后将b)中获得的混合物的ph调节至6与8之间的值；d)将c)中获得的混合物进行纯化以便消除残余的固体植物物质并且获得纯化的水性粗提取物；以及e)检查ph并且如果必要将ph重新调节至6与8之间、优选6与6.5之间的值。
18.另外，本发明其次涉及一种薰衣草地上部分的水性提取物，所述水性提取物富含长度为至多150个核苷酸的小rna、糖、酚类化合物和有机酸，不含dna，可通过根据权利要求1至5中的一项所述的方法获得，其中所述提取物包含，按所述提取物的总重量的重量计，10至30g/kg的干重，其含有2至10g/kg的糖、100至1500mg/kg的有机酸、500至2000mg/kg的酚类化合物和40至200mg/kg的长度为至多150个核苷酸的低分子量rna。
19.本发明第三涉及一种化妆品组合物，所述化妆品组合物包含有效量的作为活性成分的根据权利要求6或7所述的提取物和生理学上可接受的介质。
20.本发明第四涉及本发明的组合物用于以下的化妆品用途：皮肤护理、头皮和皮肤附属器护理，更特别地保护皮肤免受外部侵害和氧化、对抗皮肤衰老迹象、增加光保护、使皮肤增亮、改善皮肤水合、增强屏障功能、使皮肤舒缓或改善与夜间皮肤修复相关的生物机制。
附图说明
21.从参考附图说明的以下描述和非限制性实施方案，将更好地理解本发明及其优点，其中：
22.[图1]示出了通过hplc-ms分析得出的有机酸的表征。
[0023]
[图2]示出了通过bioanalyser 2100对低分子量rna的分析。a：根据本发明的方法获得的薰衣草提取物-b：常规薰衣草提取物。
具体实施方式
定义
[0024]
除非另外说明，否则本说明书中使用的所有术语都具有最广泛已知的含义。出于本发明的目的，以下术语定义如下：
[0025]“薰衣草”是指薰衣草属的所有物种，以及它们的杂交种(如醒目薰衣草)。
[0026]“地上部分”意指薰衣草的茎和花。在本发明的含义内，种子包括在“地上部分”中。
[0027]
在本说明书的过程中，术语“地上部分”和“花”将可互换使用，以指代花和带有花的较细茎。
[0028]
术语“小rna”或“低分子量rna”或“长度为至多150个核苷酸的小rna”意指长度为至多150个核苷酸的小分子量的非编码rna(核糖核酸)，如单链和/或双链的所有类型的小非信使rna，例如微小rna、干扰rna、内含子、小核rna或任何rna片段。电泳分析表明，存在于本发明的薰衣草提取物中的小rna具有大约30至150个核苷酸的各种分子量。
[0029]“有机酸”意指α-羟基酸(或aha)，即源自水果或植物糖的羧酸，如乙醇酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸和糖醛酸。
[0030]“酚类化合物”(或多酚)意指具有带有一个或多个羟基的芳环的植物来源的分子，如酚酸、类黄酮或其衍生物。已知多酚类化合物是强力的抗氧化分子。
[0031]“糖”意指单糖(尤其是葡萄糖和果糖)，以及寡糖和多糖。
[0032]“感兴趣的植物分子”意指存在于本发明的薰衣草提取物中的所有分子，并且特别是最大长度为150个核苷酸的小rna、糖、酚类化合物和有机酸。
[0033]
当描述值的范围时，该范围的界限应理解为明确包括所述范围中的所有中间值。例如，在1％与10％之间的值的范围应当被理解为包括1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％和10％，以及1％与10％之间的所有十进制值。
[0034]
除非另有规定，否则数值百分比值是按重量计的百分比，即化合物的重量比预期混合物的总重量。
[0035]
本技术中描述的组合物可以“包含”必要化合物或任选的成分，“由其组成”或“基本上由其组成”。
[0036]“基本上由其组成”意指所述组合物或组分可以包括另外的成分，但是仅当所述另外的成分不改变本技术中所述的组合物或用途的基本或新颖特征时如此。
[0037]“生理学上可接受的介质”意指适于与皮肤外层或粘膜接触，没有毒性、刺激、过度过敏反应等或不耐受反应，并且与合理的益处/风险比相称的媒介物。
[0038]“外用”意指将根据本发明的富含最大长度为150个核苷酸的小rna、糖、酚类化合物和有机酸的水性提取物或含有所述水性提取物的组合物应用或铺展在皮肤表面或粘膜
上。
[0039]“皮肤”是指脸部(特别是眼睛区域和嘴巴)、鼻子、额头、脖子、手的皮肤，以及全身的皮肤。
[0040]“头皮”意指覆盖头骨的皮肤，包括毛囊和毛囊间皮肤空间。
[0041]“皮肤附属器”是指富含角蛋白的毛囊的产物(头发和体毛)，还有指甲。
[0042]
表述“增强屏障功能”意指改善皮肤针对外部侵害(紫外线辐射、可见光或红外光、污染、微生物等)的保护特性。
[0043]
表述“使皮肤舒缓”意指减少刺激反应，所述刺激反应本身表现为可能伴有发红的不适感。
[0044]
表述“使皮肤增亮”意指通过均匀或以局部的方式作用于色素性障碍(如衰老斑或老年性雀斑样痣)来降低与表皮的黑色素含量相关的皮肤颜色强度。
[0045]“有效量”意指根据本发明的提取物的最小量，所述最小量是获得所寻求的至少一种生物学活性(特别是展现对活性氧类的抗氧化活性、增加褪黑素或减少黑色素或研究的任何其他生物标记物)所必需的，并且所述量是无毒的。
[0046]“皮肤水合”是指表皮上层的水含量和水分布。
[0047]“改善的皮肤水合”是指由于脱水而导致的皮肤外观变化(如干燥、紧绷和不适)的任何改善，无论这种状况与内部因素还是外部因素(如不利的环境条件)相关。
[0048]“皮肤衰老迹象”意指由于衰老而导致的皮肤外观的所有变化，例如像皱纹和细纹、开裂、眼袋、黑眼圈、干枯、失去弹性、紧致性和/或肤色；以及不会系统地导致外观改变的皮肤的所有内部修饰，例如像皮肤变薄；或由环境应激(如污染和包括紫外线辐射在内的日光辐射)引起的皮肤的所有内部降解。
[0049]“皮肤衰老迹象”还包括色素性障碍，如老年性雀斑样痣或日光性黑子。
[0050]“外部侵害”意指日光辐射(包括可见光、紫外线和红外辐射)、污染(可能来自室外或室内的环境气氛并且包括各种大小的颗粒(pm10为10μm，pm 2.5为2.5μm，或超细颗粒为小于100nm))以及几种化学元素(挥发性有机化合物、多环芳烃、重金属等)。
[0051]“改善皮肤外观”意指皮肤纹理看起来更细，光度更强，并且肤色更均匀。
[0052]
应当理解，本发明涉及哺乳动物，并且更具体地涉及人类。提取方法
[0053]
经典描述的核糖核酸(rna)提取方案使用不适合化妆品用途的溶剂(zumbo,第2014页"phenol-chloroform extraction",2014)。这些方法旨在获得完全纯化的核酸(rna或dna或小rna)(即不含任何其他感兴趣的分子，如次级代谢物、维生素、糖、肽等)，所述核酸可能对皮肤具有有益作用，并且因此是美容感兴趣的。
[0054]
还已知的是fr2831168，其描述了用于获得富含核酸(dna和/或rna)的植物提取物的方法。所述方法使用纤维素分解酶。
[0055]
在现有技术中还已知的是专利文件ep1723958和wo03101376，其描述了一种用于外用的组合物，所述组合物包含含已知序列和具有sirna(短干扰)功能的长度为12至40个核苷酸的合成双链rna寡核苷酸。
[0056]
还已知的是文献fr 1502361(也公开于编号wo 2017084958下)，其描述了用于获得用于制备化妆品组合物的富含低分子量核糖核酸(rna)的水性植物提取物的方法。所述
方法使用浓度在2与15mm之间的edta。
[0057]
使用植酸代替edta具有以下优点：与edta不同，植酸是一种在种子(如谷物和豆类)外壳中发现的天然分子。因此，使用植酸使得可以获得100％天然的薰衣草提取物，同时维持植物中所含的植物分子的良好提取效率。小rna的提取效率也适用于薰衣草花中存在的其他化合物，如糖、酚类化合物或有机酸(如酒石酸、苹果酸或柠檬酸)。
[0058]
因此，本发明首先涉及一种用于获得干燥或新鲜薰衣草地上部分的水性提取物的提取方法。
[0059]
本发明的提取方法使得可以获得富含化妆品感兴趣的植物分子(如最大长度为150个核苷酸的小rna、糖、酚类化合物和有机酸)的提取物，避免了使用不被认为是化妆品溶剂的溶剂。
[0060]
本发明的方法减少了对环境的影响。
[0061]
在根据本发明的方法的第一步骤a)中，将薰衣草地上部分与水混合。使用的水是蒸馏水、去矿物质水或富含矿物盐和/或微量元素的水。所使用的水优选是蒸馏水。
[0062]
优选地，所述薰衣草地上部分是薰衣草花和带有花的小茎。
[0063]
优选地，使用的薰衣草的物种是狭叶薰衣草或真正薰衣草。
[0064]
优选地，所述薰衣草地上部分呈干燥形式。
[0065]
优选地，在步骤a)中，将薰衣草地上部分研磨成粉末，然后带入水中。研磨薰衣草地上部分是一种允许更好提取的机械活动。机械研磨以获得粉末形式的植物材料，然后在植酸的存在下进行碱裂解，从而促进细胞膜并且特别是核膜的完全破坏。优选地，在步骤a)中，以3％至20％w/w的植物材料/水比率，更优选以3％与10％之间的比率，例如以3％、5％或10％(w/w)的比率，将粉末形式的先前研磨的薰衣草地上部分与水混合。
[0066]
然后在步骤b)中将植酸添加到a)中获得的混合物中。此步骤中的ph必须是碱性的，在10与11之间，并且因此如果需要必须通过添加苏打(naoh)来调节。在步骤b)中，必需的是ph是碱性的，在10与11之间。优选地，将ph调节至在10.5与11之间的值。实际上，这种ph水平(与植酸的作用相关)导致包括核膜在内的细胞膜的破坏、细胞的裂解和dna的变性(双螺旋的2条链被分离)。植酸通过络合来螯合在纤维素微纤维周围的果胶分子之间形成离子桥的二价离子(如钙离子)，以削弱和破坏植物细胞的果胶纤维素膜。这导致在提取过程期间促进细胞内容物的释放。植酸处理步骤对于使低分子量rna富集在提取物中是必需的，并且更加总体上确保了其他感兴趣的植物分子(即糖、酚类化合物和有机酸)的更佳提取产率。
[0067]
对ph的监测表明，在步骤b)结束时，ph保持碱性并且稳定在9与11之间。
[0068]
通过使用含有天然螯合剂(如植酸)的水性提取溶液，提取方法使得可以将低分子量rna富集在最终提取物中。植酸是一种天然存在于种子(如谷物和豆类)的壳中的分子。植酸以钙盐或有时以镁盐的形式存在，并且对植物起着重要作用，例如，它是磷的主要来源。
[0069]
优选地，所用的植酸是呈钠盐形式的植酸粉末，浓度优选在1与10mm之间，优选在1与5mm之间，并且更优选地浓度为3mm。
[0070]
如下表1所述，对于浓度在2与3之间的植酸，本发明特别有效。可以观察到，就小rna浓度而言，对于仅2.25mm的植酸获得与10mm edta情况下相同的结果，以及相似的总提取产率。3mm的浓度允许低分子量rna的最佳提取效率。3mm的浓度对于其他感兴趣的化合物
(如糖、酚类化合物和有机酸)的更高产率也是最佳的。植酸浓度为4.5mm时，低分子量rna的提取率甚至更高，但是总提取产率下降。
[0071]
[表1]表1：低分子量rna产率和总提取产率随植酸浓度的变化
[0072]
用植酸处理的步骤b)优选在20℃与80℃之间的温度下持续至少1小时。在此步骤期间，有利地搅动在a)中获得的混合物。
[0073]
有利地，可以在步骤b)结束时添加硅藻土，以促进接下来的步骤中固体残留植物材料与提取物(可溶性级分)的后续分离。
[0074]
在步骤c)中，然后将在b)中获得的混合物的ph调节至6与8之间的值。
[0075]
可以通过添加与化妆品用途兼容的盐酸(hcl)溶液或任何其他等效酸来调节ph。酸化导致dna经历突然的复性(双螺旋链的重新配对)。然而，很长的染色体dna无法完全重新配对而形成不溶性缠绕物。相反，小rna保留在溶液中。因此，dna和小rna分为两个不同的相：固相，其除其他外还含有染色体dna；以及液相，其除其他外还含有小rna。根据本发明的方法的步骤d)中的ph调节步骤对于小rna以及其他感兴趣的植物分子(即糖、酚类化合物和有机酸)的最佳提取是必需步骤。
[0076]
在步骤d)中，将c)中获得的混合物纯化，以消除残余的固体薰衣草地上部分，并且回收构成根据本发明的水性粗提取物的可溶性部分。可以使用本领域技术人员已知的任何方法。例如，可以将c)中获得的混合物在孔隙率大于30μm的过滤器上过滤，以便收集滤液。优选地，将c)中获得的混合物以低速离心，例如以4000g离心至少10min，以便使残余的植物材料沉淀在沉淀物中并且回收上清液中的水性粗提取物。
[0077]
在步骤e)中，检查ph并且将其重新调整至6与8之间的值。优选地，将ph重新调整至6与6.5之间的值，甚至更优选地调整至6.5的值。通过添加与化妆品用途兼容的盐酸(hcl)溶液或任何其他等效酸来重新调节ph。
[0078]
实际上，低于6的ph通常可以导致核酸沉淀，并且因此导致最大长度为150个核苷酸的低分子量rna沉淀。在根据本发明的方法的步骤e)中调节ph的步骤是必需的步骤，以便使提取物中的低分子量rna具有最佳稳定性。
[0079]
在步骤e)结束时，获得浓缩的粗提取物。
[0080]
有利地，在重新调节步骤e)中ph之前，对d)中获得的水性粗提取物进行至少一次过滤。优选地，通过将从20至50μm的过滤阈值降低至0.1-0.3μm的灭菌过滤来进行连续过滤。
[0081]
然后可以将步骤e)中获得的提取物稀释于用于化妆品用途的生理学上可接受的
溶剂中，使得相对于稀释的提取物的总重量，干重在4与20g/kg之间的干提取物。这一步骤改善了提取物随时间的稳定性。
[0082]
本发明其次涉及可以通过上述方法获得的薰衣草地上部分的水性提取物，所述水性提取物富含最大长度为150个核苷酸的小rna、糖、酚类化合物、有机酸并且不含dna。此提取物不含dna(脱氧核糖核酸)。
[0083]
本发明还涉及通过上述方法直接获得的薰衣草地上部分的水性提取物，所述水性提取物富含最大长度为150个核苷酸的小rna、糖、酚类化合物和有机酸。此提取物不含dna(脱氧核糖核酸)。
[0084]
使用根据步骤a)至e)的本发明的方法，获得了干重为10至30g/kg的琥珀色至深琥珀色的薰衣草水性浓缩粗提取物，其含有2至10g/kg的糖、100至1500mg/kg的有机酸、500至2000mg/kg的酚类化合物和40至200mg/kg的最大长度为150个核苷酸的低分子量rna。然而，对于地上部分，特别是狭叶薰衣草物种的薰衣草花，获得的提取物可以呈现显著的可变性，这取决于诸如收获的位置或年份、季节、气候条件、生物应激等因素。
[0085]
然后可以将由此获得的提取物稀释于用于化妆品用途的生理学上可接受的溶剂中，使得所述提取物的浓度随后被调节至基于稀释的提取物的总重量，干重为4与20g/kg之间的干提取物。
[0086]
生理学上可接受的溶剂的说明性和非限制性例子是水、甘油、乙醇、丙二醇及其产自玉米的称为的天然形式、丁二醇、二丙二醇、乙氧基化或丙氧基化二甘醇、环状多元醇或这些溶剂的任何混合物。因此，可以将获得的提取物稀释以获得50％源自植物的丁二醇，或50％源自植物的丙二醇，或30％源自植物的甘油的最终浓度。
[0087]
优选地，将通过根据本发明的方法获得的提取物稀释于丁二醇中，使得稀释的提取物包含50％的最终丁二醇浓度。
[0088]
这种所谓的稀释的提取物包含，按所述提取物的总重量的重量计，4至20g/kg的干提取物、0.5至10g/kg的糖、50至700mg/kg的有机酸、50至1500mg/kg的酚类化合物和10至100mg/kg的最大长度为150个核苷酸的低分子量rna。
[0089]
一个非限制性例子是一种稀释的狭叶薰衣草提取物，所述提取物特别含有浓度为1.7g/kg的糖、含量为570mg/kg的有机酸、620mg/kg的酚类化合物和45mg/kg的最大长度为150个核苷酸的低分子量rna。
[0090]
相反，薰衣草花水和精油主要含有萜烯气味分子，并且不含有长度为至多150个核苷酸的低分子量rna，也不含有糖，也不含有酚类化合物或有机酸。
[0091]
因此，本发明的提取物包含宽范围的植物分子，所述植物分子可以对皮肤具有有益作用，而不会呈现皮肤刺激或其他健康损害的风险。
[0092]
例如，糖积极地参与表皮层的水合作用，并且因此参与对外部侵害的抵抗，而没有显示出任何不期望的影响。本发明的薰衣草提取物更具体地含有单糖和多糖，所述单糖和多糖既不存在于花水中，也不存在于薰衣草的精油中。
[0093]
真正薰衣草是唇形科的成员，它具有称为cam(景天酸代谢)的特定代谢。所述植物在其细胞内储存有机酸，并且更具体地是苹果酸、柠檬酸和酒石酸。本发明所述的方法使得可以提取这些有机酸或aha。当应用于皮肤时，这些aha降低了角质细胞之间的细胞凝聚力，
引起角质层的脱屑，并且因此刺激细胞更新。
[0094]
根据本发明的薰衣草提取物还富含酚类化合物，如酚酸。这些因其抗氧化活性而为人知晓的水溶性分子有助于本发明的薰衣草提取物的抗氧化和保护潜力。
[0095]
本发明的第三方面是一种化妆品组合物，所述化妆品组合物包含有效量的作为活性成分的根据本发明获得的富含长度为至多150个核苷酸的小rna、糖、酚类化合物和有机酸的水性提取物，和生理学上可接受的介质。根据本发明获得的富含长度为至多150个核苷酸的小rna、糖、酚类化合物和有机酸的水性提取物有利地作为活性成分用于制备化妆品组合物。
[0096]
有利地，将根据本发明的薰衣草地上部分的提取物以相对于组合物的总重量按重量计0.05％至5％的浓度，优选以相对于组合物的总重量按重量计0.1％至2.5％的浓度，并且甚至更优选以相对于组合物的总重量按重量计0.1％至1.0％的浓度添加到组合物中。根据本发明可使用的组合物可以通过任何合适的途径应用，特别是口服、或外部外用，并且本领域技术人员将调整所述组合物的配制品。
[0097]
优选地，根据本发明的组合物呈适于外用的形式。因此，这些组合物必须含有生理学上可接受的即与皮肤和皮肤附属器相容的介质，在其应用期间没有任何不适的风险，并且必须覆盖所有合适的化妆品形式。
[0098]
用于实施本发明的组合物特别地可以呈水性、水醇性或油性溶液剂、水包油乳剂、油包水乳剂或多重乳剂的形式；它们也可以呈适于应用至皮肤、粘膜、嘴唇和/或毛发的混悬剂或散剂的形式。
[0099]
这些组合物可以是或多或少的流体，并且还可以具有乳膏、洗剂、乳、精华、软膏、凝胶、糊剂(paste)或泡沫的外观。它们也可以呈固体形式，如棒，或者可以以气溶胶的形式应用至皮肤上。在所设想的应用领域中通常使用的生理学上可接受的介质的例子是配制品所需的佐剂，如溶剂、增稠剂、稀释剂、抗氧化剂、着色剂、滤光剂、仿晒剂、色素、填充剂、防腐剂、香料、气味吸收剂、精油、维生素、必需脂肪酸、表面活性剂、成膜聚合物等。
[0100]
在所有情况下，本领域技术人员将确保以不损害根据本发明的组合物所寻求的有利特性的方式选择这些佐剂及其比例。这些佐剂可以例如对应于组合物总重量的0.01％至20％。当根据本发明的组合物是乳剂时，相对于组合物的总重量，脂肪相可以按重量计占5％至80％，并且优选按重量计占5％至50％。组合物中使用的乳化剂和助乳化剂选自所考虑的领域中常规使用的那些。例如，可以以相对于组合物的总重量按重量计0.3％至30％范围内的比例使用它们。
[0101]
根据本发明的另一个有利的实施方案，本发明的水性薰衣草提取物可以被包封或包含在化妆品载体(如脂质体或任何其他用于化妆品领域的纳米胶囊或微胶囊)中，或吸附在粉末状有机聚合物、矿物支持物(如滑石和膨润土)上。
[0102]
有利地，根据本发明的组合物可以包含，除了根据本发明的活性成分之外，至少一种具有与本发明的那些类似和/或互补的美容效果的其他活性剂。
[0103]
例如，所述一种或多种另外的活性剂可以选自：抗衰老剂、紧致剂、增亮剂、保湿剂、引流剂、微循环促进剂、去角质剂、脱屑剂、细胞外基质刺激剂、能量代谢激活剂、抗细菌剂、抗真菌剂、舒缓剂、抗自由基剂、抗紫外线剂、抗痤疮剂、抗炎剂、麻醉剂、温热感诱导剂、
凉爽感诱导剂和减肥剂。
[0104]
此类另外的活性剂可以选自：-维生素a，特别是视黄酸、视黄醇、丙酸视黄醇、棕榈酸视黄醇；-维生素b3，特别是烟酰胺、生育酚烟酸酯；-维生素b5、维生素b6、维生素b12、泛醇；-维生素c，特别是抗坏血酸、抗坏血酸葡萄糖苷、抗坏血酸四棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸镁和抗坏血酸磷酸钠；-维生素e、f、h、k、pp、辅酶q10；-金属蛋白酶抑制剂或timp激活剂；-dhea及其前体和衍生物；-氨基酸，如精氨酸、鸟氨酸、羟脯氨酸、羟脯氨酸二棕榈酸酯、棕榈酰甘氨酸、羟赖氨酸、甲硫氨酸及其衍生物、n-酰化氨基酸化合物；-天然或合成肽，包括二、三、四、五和六肽及其亲脂性衍生物、同分异构衍生物和与诸如金属离子(例如铜、锌、锰、镁和其他)的其他物质的复合衍生物，作为例子，可以提及商业上称为以下的肽：chronogen
tm
、laminixyl is
tm
、peptide q10
tm
、collaxyl
tm
(专利fr2827170，)、peptide vinci 01
tm
(专利fr2837098，)、peptide vinci 02
tm
(专利fr2841781，)、atpeptide
tm
(专利fr2846883，)或arg-gly-ser-nh2序列的合成肽(以的名称atpeptide
tm
市售)；-盐水卤虫(artemia salina)提取物，以gp4g
tm
(fr2817748、)的名称市售；-植物肽提取物，如亚麻提取物(lipigenin
tm
，专利fr2956818，)、大豆提取物、斯佩耳特小麦提取物、藤本植物提取物、油菜籽提取物、亚麻提取物、稻米提取物、玉米提取物、豌豆提取物；-酵母提取物，例如dynagen
tm
(专利fr2951946，)或actopontine
tm
(专利fr2944526，)；-脱氢乙酸(dha)；-合成或天然来源的植物甾醇；-水杨酸及其衍生物，α-和β-羟基酸，硅醇；-氨基糖，葡糖胺、d-葡糖胺、n-乙酰葡糖胺、n-乙酰-d-葡糖胺、甘露糖胺、n-乙酰甘露糖胺、半乳糖胺，n-乙酰半乳糖胺；-多酚、异黄酮、类黄酮的提取物，如葡萄提取物、松木提取物、橄榄提取物；-脂质如神经酰胺或磷脂，动物来源的油(如角鲨烯或角鲨烷)，植物油(如甜杏仁油、椰干油、蓖麻油、荷荷巴油、橄榄油、油菜籽油、花生油、向日葵油、小麦胚芽油、玉米胚芽油、大豆油、棉籽油、苜蓿油、苜蓿油、矢车菊油、苜蓿油等、棉花油、苜蓿油、罂粟油、南瓜油、月见草油、小米油、大麦油、黑麦油、红花油、西番莲油、榛子油、棕榈油、杏仁油、鳄梨油、金盏花油；乙氧基化植物油、乳木果油)；-所有防紫外线剂和滤光剂；-环状amp及其衍生物、腺苷酸环化酶激活剂和磷酸二酯酶抑制剂、积雪草
(centella asiatica)提取物、积雪草苷和积雪草酸、甲基黄嘌呤、咖啡碱、咖啡因及其衍生物、茶碱、可可碱、毛喉素(forskolin)、七叶苷(esculin)和七叶苷糖(esculoside)、ace抑制剂、val-trp肽、神经肽y抑制剂、脑啡肽、银杏(ginkgo biloba)提取物、薯蓣属(dioscorea)提取物、芦丁、巴拉圭茶提取物、瓜拉那提取物、寡糖、多糖、肉碱、常春藤提取物、岩藻提取物、水解的夏枯草(prunella vulgaris)提取物、水解的鸡冠花(celosia cristata)提取物、马拉胶(anogeissus leiocarpus)提取物、木薯(manihot utilissima)叶提取物、棕榈酰肉碱(palmitoylcarnitine)、肌肽、牛磺酸、接骨木提取物和海藻提取物如掌状红皮藻(palmaria palmata)提取物。
[0105]
本发明第四涉及包含本发明的薰衣草提取物的组合物用于以下的化妆品用途：皮肤护理、头皮和皮肤附属器护理，更具体地用于保护皮肤免受外部侵害和氧化、对抗皮肤衰老迹象、增加光保护、使皮肤增亮、改善皮肤水合、增强屏障功能、使皮肤舒缓或改善与夜间皮肤修复相关的生物机制。
[0106]
皮肤是由几层(真皮、表皮和角质层)构成的器官，所述皮肤覆盖身体的整个表面，并且确保针对外部、感觉、免疫、代谢或温度调节性侵害的保护功能，或限制脱水的屏障功能。
[0107]
特别地，角质层充当保护性物理屏障，通常称为“皮肤屏障功能”。这种功能对于组织稳态和保护免受外部环境影响至关重要。
[0108]
皮肤的外观可以通过内部改变(内在衰老、疾病和激素变化，如怀孕)或外部因素(环境因素，如污染、阳光、病原体、温度变化等)来改变。所有这些变化不仅影响皮肤，还影响角质附属器，如体毛、睫毛、眉毛、指甲和头上的头发。
[0109]
已经针对与夜间皮肤修复机制相关的关键生物标记物测试了本发明的薰衣草地上部分的提取物。夜间皮肤发生的机制包括dna修复增加、细胞增殖率增加、皮肤温度升高、皮肤血流量增加、瘙痒发生率增加、和导致水分流失的皮肤屏障通透性增加(matsui m.s.等人,biological rhythms in the skin,int.j.mol.sci.2016,17,801)。特别地，针对嘧啶二聚体(cpd为环丁烷嘧啶二聚体)的修复率评价本发明的薰衣草地上部分提取物。在中枢神经系统水平上感知到的昼夜节律包括松果腺产生褪黑素(slominski a.t.等人,melatonin:a cutaneous perspective on its production,metabolism,and functions.j invest dermatol,2018年3月；138(3):490-499)。褪黑素也由色氨酸在皮肤中局部产生。这些功能分别有助于降低活性氧类(ros)和活性氮类(rns)的水平。事实上，褪黑素除了其作为自由基清除剂的直接作用外，还刺激抗氧化酶(如过氧化氢酶和超氧化物歧化酶)的产生，并且参与dna修复。通过优化线粒体的功能发挥，褪黑素还有助于增加由细胞产生的atp的水平。评估了本发明的薰衣草地上部分提取物对皮肤的褪黑素水平的影响和对酶aanat(芳烷基胺n-乙酰基转移酶或5-羟色胺n-乙酰基转移酶或timezyme)的表达的影响，所述酶催化5-羟色胺n-乙酰化为n-乙酰基5-羟色胺，即褪黑素合成的最后一步。此外，外源性褪黑素的外用已经表明对与雄激素性脱发相关的毛发脱落有影响(fisher tw,topical melatonin for treatment of androgenetic alopecia,int j trichology,2012年10月-12月,4(4):236-245)。
[0110]
本发明的薰衣草地上部分的提取物已经表明有效于增加培养的皮肤活检物中的褪黑素产生。
[0111]
屏障功能的变化是由外部侵害(如紫外线)引起的。后果主要是细胞凝聚力和机械完整性的丧失。参与角质形成细胞分化的末端阶段的某些酶在紫外线保护中起关键作用。这些酶的表达和/或活性的变化对屏障功能的完整性和皮肤的稳态具有重要影响。
[0112]
本发明的薰衣草地上部分的提取物已经展现出其有效于增强屏障功能并且因此改善了皮肤对抗外部侵害(紫外线辐射、污染、微生物等)的保护。
[0113]
本发明的薰衣草地上部分的提取物已经表明有效于降低皮肤活检物中的黑色素水平并且因此诱导增亮作用。实施例
[0114]
提供说明的方式，下文描述了根据本发明的方法的示例性实施方案。
[0115]
实施例1：制备富含小rna的唇形科薰衣草(狭叶薰衣草)提取物提取方法
[0116]
使狭叶薰衣草物种的薰衣草花在通风的地方避光预干燥。在第一步，将3％的经干燥的薰衣草花和带花茎研磨成粒度范围为500μm至1mm、优选800μm的粉末，即相当于在968g蒸馏水中的30g经干燥薰衣草花粉末。然后，添加2g/l或3mm的植酸。将ph调节至10.8，以便最佳地富集具有低分子量rna的提取物。
[0117]
然后将混合物在80℃下在搅拌的情况下加热1小时。在这一小时的提取后，将硅藻土添加到混合物中，以便促进随后在固体残余植物材料与提取物(可溶性级分)之间的分离。
[0118]
然后将混合物通过孔径为30μm的过滤器过滤，以去除固体物质。然后将ph使用hcl溶液调节至ph 7.5。然后在孔隙率渐减的过滤器上进行顺序过滤，以便使植物提取物澄清，直到以0.2μm灭菌过滤。
[0119]
在此步骤结束时，检查ph，然后用hcl溶液调节至6.3。6和6.5的ph值保留了提取物中的小rna。获得干重为12.6g/kg的水性提取物。薰衣草提取物的表征
[0120]
获得的提取物具有12.6g/kg的干重。物理化学分析表明获得的提取物具有以下浓度的物质：3.7g/kg的总糖、1160g/kg的总有机酸、1270mg/kg的总酚类化合物和118mg/kg的具有最大长度为150个核苷酸的低分子量rna。然后将提取物用化妆品溶剂稀释，所述化妆品溶剂是生理学上可接受的并且使得可以确保随时间的推移提取物的更佳稳定性和更佳保存。
[0121]
用源自植物的丁二醇进行稀释以获得50％丁二醇和50％薰衣草提取物的终浓度。然后，稀释的提取物具有6g/kg的干重，并且具有以下浓度的物质：1.7g/kg的总糖、570mg/kg的总有机酸、620mg/kg的总酚类和45mg/kg的具有长度为至多150个核苷酸的低分子量rna。用于确定最终薰衣草提取物中所含的不同化合物的量的测定方法：
[0122]
基于dubois等人(1956)(dubois等人,"colorimetric method for the determination of sugars and related substances",anal.chem,1956,28(3),350-356)所述的测定的改编，通过分光光度测定法测定提取物的总糖含量。此分析由以下组成：将原
材料溶解在浓硫酸中，并且然后使其与苯酚反应以形成有色复合物。在分光光度计上在490nm处读取复合物的吸光度。使用标准葡萄糖曲线确定糖含量。tlc分析表明，本发明提取物中存在的大多数糖是葡萄糖和果糖分子以及高分子量糖(寡糖和多糖)。
[0123]
通过福林酚(folin-ciocalteu)分光光度测定法测定薰衣草提取物的总多酚含量(singleton等人,analysis of total phenols and other oxidative and antioxidant substrates by means of the folin-ciocalteu reagent,1999,299:152)。样品中的多酚化合物与福林酚试剂反应；试剂的氧化产生蓝色。在分光光度计上在760nm处读取样品的吸光度。使用没食子酸标准曲线以没食子酸当量表示含量。
[0124]
对来自实施例1的薰衣草提取物、花水和参考精油进行有机酸的表征。使用了偶联质量检测器的高效液相色谱分析。将所有样品通过agilent 1260hplc系统(agilent technologies)在ec 150/4.6nucleoshell rp 18plus-5μm柱(150x4.6 mm)(macherey nagel：763236.46)上分离。流速为0.3ml/min。流动相由甲酸(hcooh)(a)和乙腈(b)的0.01％溶液组成。梯度程序促进洗脱，如表2中所述。
[0125]
[表2]
[0126]
将柱温维持在25℃，并且进样体积为5μl。通过具有负模式的电喷雾离子源的acquity qda质谱仪检测器(waters)进行检测。将源设置为0.8kv的毛细管电压和600℃的探针温度。目标为每种化合物的m/z和锥孔电压，如表3中所述。
[0127]
[表3]
[0128]
通过将样品的保留时间和质谱峰与标准品进行比较来进行有机酸的鉴定。根据与标准品的最大表面相比而言样品浓度的最大表面进行有机酸的定量估计。
[0129]
允许提取物中所含有机酸的定量和鉴定的hplc-ms分析表明，只有薰衣草提取物含有不同类型的有机酸，主要是柠檬酸、苹果酸和酒石酸，如图1所呈现。hplc-ms分析表明，
这些有机酸不存在于真正薰衣草花水或真正薰衣草精油中。
[0130]
使用微型电泳技术在特异于核酸(如低分子量rna)的分析的微流控芯片上(bioanalyseragilent)进行低分子量rna的定量。这种方法使得可以确定几微升的提取物中所含核酸的大小和浓度。结果呈现为在纵坐标上为任意荧光单位(fu)和在横坐标上为核苷酸数(nt)的图。将内部标记物添加到每个分析中(图2中25nt处的峰)，并且用作内部对照以验证分析的正确性。
[0131]
图2示出了通过2100bioanalyzer对低分子量rna的分析。a：根据实施例1的薰衣草提取物。b：根据实施例2的常规薰衣草提取物。
[0132]
生物分析型分析表明，本发明所述的方法能够从薰衣草中提取低分子量rna，如图2a中所展示。图2a示出了存在于本发明的薰衣草提取物中的rna具有范围为从大于25至约150个核苷酸的分子量。
[0133]
常规提取方法(如下文实施例2所述的浸渍)不能提取低分子量rna(图2b)。分析还表明，这些分子既不存在于花水中，也不存在于精油中。此外，此分析证明提取物中不存在dna。
[0134]
通过gc-fid对根据本发明的薰衣草提取物、花水和精油进行挥发性气味化合物(voc)的分析。将所有样品通过agilent gc/fid 7890a气相色谱法(agilent technologies)在30mx 250μm x 0.25μm gc optima 5ht柱(macherey-nagel 726106.30)上进行分离。在40min内从75℃升至320℃的程序性烘箱中，使用氦气作为载气，将3μl的样品产品以1.3ml/min的流速注射到柱上。
[0135]
使用氢气(30ml/min)和空气(400ml/min)进行点火，在230℃下在火焰电离检测器上检测分子。通过比较化合物的保留时间来完成voc的鉴定。
[0136]
对于水性样品，在注射前进行在己烷中的液/液萃取(1:1)。将硫酸镁添加到有机相中，以便去除所有痕量的水。
[0137]
[表4][表4]表4：薰衣草提取物中挥发性气味化合物的测定
[0138]
表4中的gc-fid分析的结果表明，实施例1中的薰衣草提取物不含有萜烯性质的任何有气味的分子，这与已知大多数含有这些分子的薰衣草花水和精油不同。
[0139]
实施例2制备薰衣草浸渍物
[0140]
为了将所谓的经典提取与本发明的提取进行比较，使用与实施例1中相同量的狭叶薰衣草物种的经干燥薰衣草花，即在蒸馏水中3％的压碎的经干燥薰衣草花，制备薰衣草浸渍物。然后将混合物在80℃下加热1小时，然后将混合物通过以30μm的大孔隙率的第一次过滤进行过滤，以便将固体残余植物物质从液体部分中去除，然后通过以渐减至0.2μm的孔
隙率进行顺序过滤。此方法的目的是制备对照提取物，以获得关于通过本发明的方法获得的薰衣草提取物的对比性分析数据。获得的结果展示于图2b和本技术文本中。
[0141]
实施例3：评价实施例1的狭叶薰衣草提取物对在正常人角质形成细胞上应用可见光应激后的活性氧类的影响：
[0142]
原则：本研究的目的是表明根据实施例1制备的薰衣草提取物对减少由可见光应激产生的活性氧类的影响。在400和700nm之间的这种类型的光旨在模仿日光。活性氧类参与与皮肤衰老相关的蛋白质和dna变化的各种机制。
[0143]
方案：将正常人角质形成细胞用实施例1的提取物处理过夜。然后将细胞暴露于由24瓦特、5000
°
开尔文聚光灯产生的可见光(以模拟日光)下。将这种暴露在日间重复4次，持续10分钟。在夜间再次应用处理，然后再次使细胞经受相同的可见光应激。在这种应激结束时，通过线粒体探针mitosox
tm
red(thermofisher scientific)检测活性氧类。
[0144]
结果：与未暴露的细胞相比，应用日光应激导致+43％的活性氧类(ros)的增加。与未处理的细胞相比，当将细胞用0.1％(体积/体积稀释度)的实施例1的提取物处理时，ros高度显著地减少-12％。根据实施例2获得并在相同条件下测试的薰衣草浸渍物导致-5％的较小减少。
[0145]
结论：薰衣草提取物针对线粒体水平上的活性氧类示出了抗氧化活性。发现这种活性高于用来自常规浸渍的薰衣草提取物获得的活性。
[0146]
实施例4：评价实施例1的提取物对暴露于uvb应激的正常人黑素细胞中的dna损伤的影响：
[0147]
原则：基因组不稳定性可以被定义为dna的所有化学修饰，这些化学修饰发生在不同的过程期间并且可以随时间积累。dna变化是光老化的主要组成部分。在本研究中，我们专注于黑素细胞中的uvb损伤。嘧啶二聚体是由uvb对dna嘧啶碱基的直接作用产生的。形成环丁烷嘧啶二聚体(cpd)，并且它是uvb诱导的dna损伤的最常见形式。在黑素细胞中，uvb暴露后继续产生cpd持续多于3小时。它们被称为“暗cpd”，并且是由于黑色素的化学激发，导致能量转移到dna。在本研究中，评价了实施例1中的提取物减少黑素细胞中暗cpd形成的能力。
[0148]
方案：将从人表皮提取的黑素细胞用0.1％(体积/体积稀释度)的实施例1的提取物处理过夜，然后用60mj/cm2的uvb辐照，并且用薰衣草提取物再次处理过夜。第二天早上，通过用抗cpd的抗体(环丁烷嘧啶二聚体小鼠单克隆，euromedex)免疫染色来检测嘧啶二聚体。孵育一个半小时随后冲洗后，将细胞在偶联至荧光团(alexa 488，invitrogen)的抗小鼠二抗的存在下孵育。然后在落射荧光显微镜(zeiss axiovert 200m显微镜)下检查细胞。然后通过图像分析(图像分析软件，improvision)观察和量化cpd的存在。
[0149]
结果：
在非辐照的条件下，黑素细胞不展示cpd。它们的形成是由于uvb应激诱导的。将来自实施例1的提取物应用于黑素细胞使通过uvb诱导的暗cpd减少-37％(与未处理的经辐照细胞相比，通过学生t检验得出高度显著性)。在相同条件和0.1％的相同浓度下，根据实施例2获得的薰衣草浸渍物没有显著的作用。
[0150]
结论：实施例1中的提取物降低了通过uvb应激在黑素细胞中产生的“暗cpd”。通过这种活性，薰衣草提取物示出了减少dna损伤的益处，促成夜间皮肤的修复机制。
[0151]
实施例5：评价实施例1的提取物对离体皮肤活检物和人毛囊中的褪黑素合成途径的影响：
[0152]
原则：此实验的目的是证明来自实施例1的提取物对在培养的人皮肤活检物中的褪黑素合成的影响。此评价包括两种标记物：1-酶aanat(芳烷基胺n-乙酰基转移酶或5-羟色胺n-乙酰基转移酶或timezyme)，其催化5-羟色胺n-乙酰化为n-乙酰基5-羟色胺，即褪黑素合成的最后一步，2-褪黑素本身的评价。aanat酶控制松果腺中褪黑素产生的昼夜节律。由于褪黑素也在皮肤中局部合成，因此寻求监测其响应于薰衣草提取物的应用的合成。
[0153]
方案：在经外用薰衣草提取物48小时(每天两次)而预处理的皮肤活检物上通过间接免疫荧光评估酶aanat和褪黑素。此外，使在培养基中稀释至0.5％(体积/体积稀释度)的实施例1的提取物与从头皮活检物分离的人毛囊接触。对在相同条件下平行孵育的对照活检物以及不添加薰衣草提取物的对照毛囊给予安慰剂(磷酸盐缓冲盐水，pbs)。孵育后，将活检物和毛囊固定并且包埋在石蜡中，以便产生组织切片。通过与相应的抗体(抗aanat(invitrogen)和抗褪黑素(abnova，cliniscience))孵育来进行酶aanat和褪黑素的检测。孵育一个半小时随后冲洗后，将切片在偶联至荧光团(alexa 488，invitrogen)的抗兔二抗的存在下孵育。然后在落射荧光显微镜(zeiss axiovert 200m显微镜)下检查切片。然后通过图像分析(图像分析软件，improvision)观察和量化i型胶原蛋白表达。
[0154]
结果：酶aanat和褪黑素的评估示出了在用实施例1的0.5％提取物处理的皮肤活检物中分别增加+20％和+51％(与接受安慰剂的活检物相比，通过学生t检验得出高度显著性)。根据实施例2获得的薰衣草浸渍物得到了等同的aanat结果，但是导致褪黑激较小的增加(+34％，与接受安慰剂的活检物相比，通过学生t检验得出高度显著性)。在培养的毛囊中，在毛囊的外上皮鞘中观察到，来自实施例1的0.5％提取物导致褪黑素产生的+23％增加。
[0155]
结论：来自实施例1的提取物示出了对离体皮肤活检物和毛囊中的褪黑素产生的活性。这种增加与aanat酶的增加相关，在从白天到晚上的过渡期间，所述酶在松果腺中的表达增加。尤其是在dna中及由于褪黑素的抗氧化活性，褪黑素的特性与细胞损伤修复活性相关。因此，通过薰衣草提取物增加皮肤中的褪黑素显现对夜间皮肤的损伤修复过程有益。毛囊中褪黑素的增加指示对毛囊生理学的有益作用，因为褪黑素与毛发生长期相关。
[0156]
实施例6：评价实施例1的提取物在离体皮肤活检物上的增亮潜力：
[0157]
原则：
本研究的目的是基于含氨硝酸银溶液还原为金属银，使用黑色素fontana-masson的组织学染色，评价实施例1的提取物在离体皮肤活检物上的增亮潜力。获得的染色揭示黑色素含量，并且通过图像分析进行量化。
[0158]
方案：将离体人皮肤活检物进行培养，并且用0.5％(体积/体积稀释度)和1％(体积/体积稀释度)的实施例1的提取物处理48小时。处理后，将活检物固定用于组织学分析，并且包埋在石蜡中。脱蜡后，将切片与含氨硝酸银溶液在60℃下孵育10分钟。冲洗后，将它们用5％硫代硫酸钠处理2分钟，再次冲洗并且在eclipse e600显微镜(nikon)下安装用于检查。这些照片是用qimaging retiga 2000r fast1394相机拍摄的，并且用q-capture pro 7软件(qimaging)进行分析。
[0159]
结果和结论：在离体的皮肤活检物中，在应用分别为0.5％(体积/体积稀释度)和1％(体积/体积稀释度)的实施例1的提取物后，观察到负55％和负72％的黑色素含量降低(与安慰剂活检物相比，通过学生t检验得出高度显著性)，而根据实施例2获得的薰衣草浸渍物在0.5％时没有示出降低，而在1％时显示较小的降低(-47％)。
[0160]
因此，此测试得出结论，实施例1的狭叶薰衣草提取物对离体皮肤活检物存在潜在的增亮作用。
[0161]
实施例7：精华霜的配方
[0162]
[表5]
[0163]
制备方法：1.使a相在主器皿中均匀化，并且开始加热至75℃-80℃；2.在30℃下，撒在b相中，并且在均匀化的同时加热；3.在单独的烧杯中，制备c相，在75℃-80℃下加热直至均匀；4.在75℃下，将c相添加到主器皿中，并且均匀化10分钟；5.允许将温度冷却并且在65℃下添加d相。充分混合以均匀化10分钟；6.将e相预混合，然后将其添加到主器皿中；7.在60℃下添加e相。充分混合以均匀化10分钟；8.在35℃下，将f相预混合，然后添加并且充分混合；9.将g相预混合，然后将其添加到主器皿中；10.在35℃下添加g相。充分混合以均匀化；11.在单独的烧杯中，制备h相：将natrosoltm撒入室温水中，并且在均匀化的同时加热至60℃；12.在30℃下添加h相。充分混合以均匀化；13.在25℃下停止。
[0164]
由此，所述组合物呈粉红色奶油霜的形式，ph在4.90与5.40之间，并且粘度(d0)为160,000-210,000cps(brookfield rvt/转子d/5rpm/1分钟/25℃)。
[0165]
实施例8：抗衰老面膜配方
[0166]
[表6]
[0167]
制备方法：1.在25℃下，使a相在主容器中均匀化；2.在25℃下，撒在b相中并且充分混合直至均匀；3.在25℃下，添加c相并且充分混合直至均匀；4.将d相在单独的烧杯中预混合，并且在25℃下添加到主器皿中；5.在25℃下，将e相添加到主器皿中，并且充分混合；6.将f相预混合并且将其缓慢添加。充分混合直至均匀；7.将g相在单独的烧杯中预混合，并且添加到主器皿中直至均匀；8.在25℃下停止。
[0168]
因此，所述组合物呈现为具有闪烁的绿色效果的霜状凝胶，ph在5.30与5.80之间，并且粘度(d0)为70,000-100,000cps(brookfield rvt/转子c/5rpm/1分钟/25℃)。
[0169]
实施例9：精华配方
[0170]
[表7]
[0171]
制备方法：1.将水添加到主容器中并且用hi-lo螺旋桨叶片开始混合；2.一个接一个地添加剩余的成分，同时在每次添加之间进行混合。
[0172]
因此，所述组合物是一种光滑的半透明精华，ph在5.75与6.25之间，并且粘度(d0)为1,100-1,400cps(brookfield rvt/转子3/20rpm/25℃/1分钟)。