抗病毒化合物的制作方法

抗病毒化合物
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2020年2月18日提交的且标题为“antiviral compounds”的美国临时专利申请62/978,192的优先权权益，该专利申请的全部内容以引用方式并入本文。


背景技术：

3.肺病毒科(pneumoviridae)病毒是造成许多人类和动物流行疾病的负义、单链rna病毒。肺病毒科病毒家族包括人呼吸道合胞病毒(hrsv)和人偏肺病毒。几乎所有儿童到他们两岁时都将有hrsv感染。hrsv是婴儿期和儿童期下呼吸道感染的主要原因，其中0.5％至2％的感染者需要住院。
4.当前没有预防hrsv感染的疫苗可用。单克隆抗体帕利珠单抗(palivizumab)可用于免疫预防，但其使用仅限于高危婴儿，例如早产儿或者患有先天性心脏病或肺病的婴儿，而且一般使用的费用往往过高。另外，核苷类似物利巴韦林(ribavirin)已被批准作为治疗hrsv感染的唯一抗病毒剂，但功效有限。因此，需要抗肺病毒科治疗剂。
5.可用于治疗病毒感染的吡咯并[2,3-d]嘧啶化合物的示例在u.s.2012/0009147 a1(cho等人)、u.s.2012/0020921 a1(cho等人)、wo 2008/089105 a2(babu等人)、wo 2008/141079 a1(babu等人)、wo 2009/132135 a1(butler等人)、wo 2010/002877 a2(francom)、wo 2011/035231 a1(cho等人)、wo 2011/035250 a1(butler等人)、wo 2011/150288 a1(cho等人)、wo 2012/012465(cho等人)、wo 2012/012776 a1(mackman等人)、wo 2012/037038(clarke等人)、wo 2012/087596 a1(delaney等人)和wo 2012/142075 a1(girijavallabhan等人)中描述。
[0006]
因此，需要有效且具有可接受的毒性特征的用于治疗肺病毒科病毒感染(诸如hrsv感染)、黄病毒科感染(包括登革热)和ebov感染的组合物和方法。本公开解决了这些和其他需要。


技术实现要素：

[0007]
在一个实施方案中，本公开提供式(ia)的化合物：
[0008][0009]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0010]
r1和r2各自独立地为h或-c(o)r
1a
，其中r
1a
为c
1-6
烷基，其中r1和r2中的至少一者为
h；
[0011]
或者r1和r2结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-，其中每个r
2a
和r
2b
独立地为h、c
1-6
烷基或c
1-6
烷氧基；
[0012]
r3为-n(h)(r
3a
)；
[0013]r3a
为h或-c(o)r
3a1
，其中r
3a1
为任选地被
–
nh2取代的c
1-18
烷基；
[0014]r4a
为o或s；并且
[0015]r4b
和r
4c
各自独立地为：
[0016]
(a)-oh；
[0017]
(b)
–
or
4b1
，其中
[0018]r4b1
为任选地被1至3个r
4b2
基团取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
6-12
芳基或具有1至3个各自独立地选自n、o或s的杂原子的5至6元杂芳基，其中
[0019]
每个r
4b2
基团独立地为c
1-6
烷氧基、-s-r
4b3
或-s(o)
2-r
4b3
，并且
[0020]
每个r
4b3
基团独立地为c
1-6
烷基；
[0021]
(c)其中
[0022]
下标m为0、1、2、3、4或5；并且
[0023]
每个r
4d
独立地为任选地被1至3个r
4d1
基团取代的c
1-6
烷基、任选地被1至3个r
4d2
基团取代的c
1-3
烷氧基、
–
c(o)or
4d3
或-c(o)n(r
4d3
)2，其中
[0024]
每个r
4d1
基团独立地为-nh2或-c(o)or
4d3
，
[0025]
每个r
4d2
独立地为c
1-3
烷氧基，并且
[0026]
每个r
4d3
独立地为c
1-3
烷基；
[0027]
(d)其中
[0028]
x1和x2各自独立地为-o-或-n(r
4h
)-；
[0029]r4e1
和r
4e2
各自独立地为h、任选地被1至3个r
4e3
基团取代的c
1-6
烷基，或c
3-6
环烷基，其中
[0030]
每个r
4e3
基团独立地为
–
c(o)or
4e4
、-nh2、
–
nhc(o)r
4e4
、
–
nhc(o)o-c
1-6
亚烷基-c
6-12
芳基、c
3-6
环烷基或c
6-12
芳基，并且
[0031]
每个r
4e4
基团独立地为c
1-6
烷基；
[0032]
或者r
4e1
和r
4e2
与它们所附接的原子结合形成c
3-6
环烷基；
[0033]r4f1
和r
4f2
各自为h或一起为氧代基；
[0034]r4g
为任选地被1至3个r
4g1
取代的c
1-6
烷基、c
7-18
烷基、任选地被1至3个r
4g2
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g3
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基、-c(o)r
4g4
、-c(o)or
4g5
，或
[0035][0036]
每个r
4g1
独立地为-oh、c
1-6
烷基、c
1-3
烷氧基、-(ch2och2)
1-5-ch3、c
1-3
卤代烷基、-n(r
4g8
)2、-c(o)n(r
4g8
)2、任选地被1至3个r
4g9
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g10
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基，或c
6-12
芳基；
[0037]
每个r
4g2
独立地为c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤素、c
1-3
卤代烷基、-oh、-nh2或c
6-12
芳基；
[0038]
每个r
4g3
独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基、氧代基、-c(o)r
4g5
或-c(o)or
4g5
；
[0039]
每个r
4g4
独立地为c
1-6
烷基、c
7-18
烷基或c
3-8
环烷基，其中所述c
1-6
烷基任选地被oh、nh2或-nhc(o)or
4g5
取代，并且其中所述环烷基任选地被c
1-6
烷基取代；
[0040]
每个r
4g5
独立地为c
1-6
烷基；
[0041]r4g6
和r
4g7
各自独立地为h或
–
or
4g11
，其中
[0042]r4g6
和r
4g7
中的至少一者为
–
or
4g11
；
[0043]
每个r
4g8
独立地为h或c
1-6
烷基；
[0044]
每个r
4g9
独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基或-nh2；
[0045]
每个r
4g10
独立地为c
1-6
烷基、c
1-3
卤代烷基或氧代基；
[0046]
每个r
4g11
独立地为c
10-18
烷基或苄基；
[0047]r4h
为h；
[0048]
或者r
4e1
和r
4h
与它们所附接的原子结合形成具有1至2个选自n、o和s的附加杂原子的5至6元杂环基；并且
[0049]
下标n为0或1；或
[0050]
(e)-(op(o)(oh))
1-2-oh；或
[0051]
(f)其中
[0052]r4j1
和r
4j2
各自独立地为h、
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，其中r
4j1
和r
4j2
中的至少一者为
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，
[0053]
每个r
4j3
独立地为c
1-18
烷基、c
2-6
烯基或苄基，并且
[0054]
至少一个r
4j3
为c
10-18
烷基；
[0055]
另选地，r2和r
4c
与它们所附接的原子结合形成六元环，并且r1为h或-c(o)r
1a
，其中r
1a
为c
1-6
烷基，
[0056]
条件是当所述式(ia)的化合物具有下式时：
[0057][0058]
并且r
4g
为乙基或2-乙基丁基，那么r1和r2中的一者为-c(o)r
1a
，或者r1和r2结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-，
[0059]
条件是所述式(ia)的化合物不具有以下结构：
[0060][0061]
以及条件是当所述式(ia)的化合物具有下式时：
[0062][0063]
那么r1和r2中的一者为-c(o)r
1a
，或者r1和r2结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-。
[0064]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种药物制剂，该药物制剂包含药学有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0065]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的人的肺病毒科病毒感染的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0066]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的人的小核糖核酸病毒科病毒感染的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0067]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的人的黄病毒科病毒感染的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0068]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的人的丝状病毒科病毒感染的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0069]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种制备用于治疗有需要的人的肺病毒科病毒感染的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0070]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种制备用于治疗有需要的人的小核糖核酸病毒科病毒感染的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0071]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种制备用于治疗有需要的人的黄病毒科病毒感染的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0072]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种制备用于治疗有需要的人的丝状病毒科病毒感染的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0073]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人的肺病毒科病毒感染的药物中的用途。
[0074]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人的小核糖核酸病毒科病毒感染的药物中的用途。
[0075]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人的黄病毒科病毒感染的药物中的用途。
[0076]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人的丝状病毒科病毒感染的药物中的用途。
[0077]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的人的肺病毒科病毒感染。
[0078]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的人的小核糖核酸病毒科病毒感染。
[0079]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的人的黄病毒科病毒感染。
[0080]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的人的丝状病毒科病毒感染。
[0081]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种用于治疗或预防有需要的人的由病毒感染引起的呼吸病症恶化的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其中该呼吸病症是慢性阻塞性肺病。
[0082]
在另一个实施方案中，本公开提供了一种制备用于治疗或预防有需要的人的由病毒感染引起的呼吸病症恶化的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其中该呼吸病症是慢性阻塞性肺病。
[0083]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防人的由病毒感染引起的呼吸病症恶化的药物中的用途，其中该呼吸病症是慢性阻塞性肺病。
[0084]
在另一个实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗或预防有需要的人中病毒感染引起的呼吸道病状的恶化，其中该呼吸道病状是慢性阻塞性肺病。
具体实施方式
[0085]
i.概述
[0086]
本公开提供了用于治疗病毒感染诸如埃博拉、寨卡、西尼罗、黄热病、登革热、hcv、rsv等的2',3'-二羟基-4'-氰基核苷和单酯化合物。
[0087]
ii.定义
[0088]“烷基”是直链或支链的饱和单价烃。例如，烷基可以具有1个至18个碳原子(即c
1-18
烷基)或1个至8个碳原子(即c
1-8
烷基)或1个至6个碳原子(即c
1-6
烷基)或1个至4个碳原子(即c
1-4
烷基)。烷基基团的示例包括但不限于甲基(me、-ch3)、乙基(et、-ch2ch3)、1-丙基(n-pr、正丙基、-ch2ch2ch3)、2-丙基(i-pr、异丙基、-ch(ch3)2)、1-丁基(n-bu、正丁基、-ch2ch2ch2ch3)、2-甲基-1-丙基(i-bu、异丁基、-ch2ch(ch3)2)、2-丁基(s-bu、仲丁基、-ch(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙基(t-bu、叔丁基、-c(ch3)3)、1-戊基(正戊基、-ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊基(-ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)、1-己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(-c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)和3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3)。其它烷基包括庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基和十八烷基。
[0089]“烯基”是指具有至少2个碳原子和至少一个双键的直链或支链烃。烯基可包括任何数量的碳，诸如c2、c
2-3
、c
2-4
、c
2-5
、c
2-6
、c
2-7
、c
2-8
、c
2-9
、c
2-10
、c3、c
3-4
、c
3-5
、c
3-6
、c4、c
4-5
、c
4-6
、c5、c
5-6
和c6。烯基可以具有任何合适数量的双键，包括但不限于1个、2个、3个、4个、5个或更多个。烯基的示例包括但不限于乙烯基(vinyl/ethenyl)、丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、异戊烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1,3-己二烯基、1,4-己二烯基、1,5-己二烯基、2,4-己二烯基或1,3,5-己三烯基。烯基可以是经取代的或未经取代的。
[0090]“烷氧基”是指具有将烷基基团连接到连接点的氧原子的烷基基团：烷基-o-。正如烷基基团，烷氧基基团可以具有任何合适数量的碳原子，诸如c
1-6
。烷氧基基团包括例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。烷氧基基团可以进一步被本文所述的各种取代基取代。烷氧基可以是经取代的或未经取代的。
[0091]“烷氧基-烷氧基”是指烷氧基连接到与化合物其余部分连接的第二烷氧基。烷氧基如上文所定义，并且可以包括但不限于甲氧基-甲氧基(ch3och2o-)、甲氧基-乙氧基(ch3och2ch2o-)等。
[0092]“羟基”是指
–
oh。
[0093]
如本文所用，术语“卤基”或“卤素”是指氟(-f)、氯(-cl)、溴(-br)和碘(-i)。
[0094]
如本文所用，“卤代烷基”是指如本文所定义的烷基，其中该烷基的一个或多个氢原子独立地被卤基取代基替代，所述卤代取代基可以相同或不同。例如，c
1-4
卤代烷基是其中c
1-4
烷基的一个或多个氢原子已被卤基取代基替代的c
1-4
烷基。卤代烷基的示例包括但不限于氟甲基、氟氯甲基、二氟甲基、二氟氯甲基、三氟甲基、1,1,1-三氟乙基和五氟乙基。
[0095]“环烷基”是指具有3个至20个环状碳原子(例如3个至12个环状原子，例如3个至10个环状原子、或3个至8个环状原子、或3个至6个环状原子、或3个至5个环状原子、或3个至4个环状原子)的单个饱和或部分不饱和的所有碳环(即，c
3-20
环烷基)。术语“环烷基”还包括
多个缩合的饱和和部分不饱和的所有碳环系统(例如，包含2个、3个或4个碳环的环系统)。因此，环烷基包括多环碳环，诸如双环碳环(例如具有约6至12个环状碳原子的双环碳环，诸如双环[3.1.0]己烷和双环[2.1.1]己烷)和多环碳环(例如具有多达约20个环状碳原子的三环和四环碳环)。当化合价要求允许时，多稠合环系的环可通过稠合、螺环和桥连键彼此连接。单环的环烷基的非限制性示例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基和1-环己-3-烯基。
[0096]
如本文所用的“杂环基”或“杂环”或“杂环烷基”是指在环中具有至少一个杂原子(即，选自氧、氮和硫的至少一个环状杂原子)的单个饱和或部分不饱和非芳族环或非芳族多环系。除非另外指明，否则杂环基基团具有3至约20个环状原子，例如3至12个环状原子，例如3至10个环状原子、或3至8个环状原子、或3至6个环状原子、或3至5个环状原子、或4至6个环状原子、或4至5个环状原子。因此，该术语包括在环中具有约1至6个环状碳原子和约1至3个选自由氧、氮和硫组成的组的环状杂原子的单个饱和或部分不饱和环(例如，3、4、5、6或7元环)。当化合价要求允许时，多稠环(例如双环杂环基)系统的环可通过稠合、螺环和桥连键彼此连接。杂环包括但不限于氮杂环丁烷、氮丙啶、咪唑烷、吗啉、环氧乙烷(环氧化物)、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、哌嗪、哌啶、吡唑烷、哌啶、吡咯烷、吡咯烷酮、四氢呋喃、四氢噻吩、二氢吡啶、四氢吡啶、奎宁环、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基、6-氧杂-1-氮杂螺[3.3]庚-1-基、2-硫杂-6-氮杂螺[3.3]庚-6-基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基、2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、2-氮杂双环[2.1.1]己基、2-氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、4-氮杂螺[2.4]庚基、5-氮杂螺[2.4]庚基等。
[0097]
如本文所用，“芳基”是指单个所有碳芳族环或多个稠合的所有碳环系统，其中至少一个环是芳族的。例如，在某些实施方案中，芳基基团具有6个至20个碳原子、6个至14个碳原子或6个至12个碳原子。芳基包括苯基基团。芳基还包括具有约9至20个碳原子的多稠合环系(例如，包含2、3或4个环的环系)，其中至少一个环是芳族的，并且其中其他环可以是芳族的或不是芳族的(即，碳环)。此类多稠合环系任选地被一个或多个(例如，1个、2个或3个)在多稠合环系的任何碳环部分上的氧代基基团取代。当化合价要求允许时，多稠合环系的环可通过稠合、螺环和桥连键彼此连接。还应当理解，当参考某一原子范围元芳基(例如，6-10元芳基)时，原子范围是芳基的总环原子。例如，6元芳基将包括苯基，并且10元芳基将包括萘基和1,2,3,4-四氢萘基。芳基的非限制性示例包括但不限于苯基、茚基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基、蒽基等。
[0098]“烷基-芳基”是指具有烷基组分和芳基组分的基团，其中该烷基组分将该芳基组分连接到连接点。除了烷基组分为至少二价的亚烷基以连接到该芳基组分和连接点之外，烷基组分如上文所定义。烷基组分可以包括任何数量的碳，诸如c
0-6
、c
1-2
、c
1-3
、c
1-4
、c
1-5
、c
1-6
、c
2-3
、c
2-4
、c
2-5
、c
2-6
、c
3-4
、c
3-5
、c
3-6
、c
4-5
、c
4-6
和c
5-6
。在一些情形中，可不存在烷基组分。芳基组分如上文所定义。烷基-芳基基团的示例包括但不限于苄基和乙基-苯。烷基-芳基基团可以是经取代的或未经取代的。
[0099]
如本文所用，“杂芳基”是指环中具有至少一个除碳以外的原子的单个芳族环，其中该原子选自由以下组成的组：氧、氮和硫；“杂芳基”还包括具有至少一个这种芳族环的多稠合环系，所述多稠合环系在下文进一步描述。因此，“杂芳基”包括具有约1个至6个碳原子和约1个至4个选自氧、氮和硫的杂原子的单芳族环。硫和氮原子也可以以氧化形式存在，前
提条件是环是芳族的。示例性的杂芳基环系统包括但不限于吡啶基、嘧啶基、噁唑基或呋喃基。“杂芳基”还包括多稠合环系(例如，包含2个、3个或4个环的环系统)，其中如上文所定义的杂芳基与一个或多个环稠合以形成多稠合环系，所述一个或多个环选自杂芳基(以形成例如1,8-萘啶基)、杂环(以形成例如1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶基)、碳环(以形成例如5,6,7,8-四氢喹啉基)和芳基(以形成例如吲唑基)。因此，杂芳基(单个芳族环或多稠合环系)在杂芳基环内具有约1-20个碳原子和约1-6个杂原子。此类多稠合环系可以任选地被一个或多个(例如，1个、2个、3个或4个)在稠合环的碳环或杂环部分上的氧代基基团取代。当化合价要求允许时，多稠合环系的环可通过稠合、螺环和桥连键彼此连接。应当理解，多稠合环系的单个环可以相对于彼此以任何顺序连接。应当理解，杂芳基或杂芳基多稠合环系的连接点可以位于杂芳基或杂芳基多稠合环系的任何合适原子(包括碳原子和杂原子(例如，氮))处。还应当理解，当参考某一原子范围元杂芳基(例如，5元至10元杂芳基)时，原子范围是杂芳基的总环原子并且包括碳原子和杂原子。例如，5元杂芳基将包括噻唑基，并且10元杂芳基将包括喹啉基。示例性杂芳基包括但不限于吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡唑基、噻吩基、吲哚基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、呋喃基、噁二唑基、噻二唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、吲唑基、喹噁啉基、喹唑啉基、5,6,7,8-四氢异喹啉基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、硫茚基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、喹唑啉基-4(3h)-酮和三唑基。
[0100]“本公开的化合物”包括本文公开的化合物，例如本公开的化合物包括式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)和(ii)的化合物，包括实施例的化合物。
[0101]“药物有效量”是指制剂中的本公开化合物或其组合提供所需治疗或药物结果的量。
[0102]“药学上可接受的赋形剂”包括但不限于任何助剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、风味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂，它们已被美国食品药品监督管理局批准为可接受用于人或家畜。
[0103]
如本文所用，“治疗(treatment)”或“治疗(treat)”或“治疗(treating)”是指用于获得有益或期望结果的方法。出于本公开的目的，有益或期望的结果包括但不限于症状的减轻和/或症状程度的减弱和/或预防与疾病或病症相关联的症状的恶化。在一个实施方案中，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”包括以下中的一者或多者：a)抑制疾病或病症(例如，减少由疾病或病症引起的一种或多种症状，和/或减弱疾病或病症的程度)；b)减缓或阻止与疾病或病症相关联的一种或多种症状的发展(例如，稳定疾病或病症，延迟疾病或病症的恶化或进展)；以及c)缓解疾病或病症，例如引起临床症状的消退、改善疾病状态、延迟疾病的进展、提高生活质量和/或延长生存。
[0104]“预防”是指防止或延迟患有病毒感染的患者的临床疾病的进展。
[0105]
如本文所用，“治疗有效量”或“有效量”是指有效引起期望的生物学或医学应答的量，包括当向受试者施用以治疗疾病时足以实现对该疾病的此类治疗的化合物的量。有效量将根据待治疗受试者的化合物、疾病及其严重性以及年龄、体重等而变化。有效量可包括一系列量。如本领域所理解的，有效量可为一个或多个剂量，即，可需要单剂量或多剂量以实现期望的治疗终点。在施用一种或多种治疗剂的上下文中可以考虑有效量，并且如果与一种或多种其他药剂结合，可以达到或实现期望的或有益的结果，则可以考虑以有效量给
予单一药剂。任何共同施用的化合物的合适剂量可任选地由于化合物的联合作用(例如，累加或协同效应)而降低。
[0106]
如本文所用，“共同施用”是指在施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂之前或之后施用单位剂量的本文所公开的化合物，例如，在施用一种或多种附加治疗剂的数秒、数分钟或数小时内施用本文所公开的化合物。例如，在一些实施方案中，首先施用单位剂量的本公开的化合物，随后在数秒或数分钟内施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂。另选地，在其他实施方案中，首先施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂，随后在数秒或数分钟内施用单位剂量的本公开的化合物。在一些实施方案中，首先施用单位剂量的本公开的化合物，然后在数小时(例如，1-12小时)之后施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂。在其他实施方案中，首先施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂，然后在数小时(例如，1-12小时)之后施用单位剂量的本公开的化合物。本文所公开的化合物与一种或多种附加治疗剂的共同施用通常是指同时或顺序施用本文所公开的化合物和一种或多种附加治疗剂，使得治疗有效量的每种药剂存在于患者体内。
[0107]
还提供本文所述化合物的药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、互变异构形式、多晶型物和前药。“药学上可接受的”或“生理上可接受的”是指化合物、盐、组合物、剂型和其他物质，其可用于制备合适兽医或人药物使用的药物组合物。
[0108]
本文所述的化合物可制备和/或配制为药学上可接受的盐，或适当时配制为游离碱。“药学上可接受的盐”是化合物的游离碱形式的无毒盐，该盐具有游离碱的期望的药理活性。这些盐可以衍生自无机或有机酸或碱。例如，含有碱性氮的化合物可通过使该化合物与无机酸或有机酸接触而制备成药学上可接受的盐。药学上可接受的盐的非限制性示例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸酯、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、甲基磺酸盐、丙基磺酸盐、苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐和扁桃酸盐。其他合适的药学上可接受的盐的列表可见于“remington:the science and practice of pharmacy”，第21版，lippincott wiliams and wilkins，philadelphia,pa.，2006年。
[0109]
本文所公开的化合物的“药学上可接受的盐”的示例还包括衍生自适当碱诸如碱金属(例如，钠、钾)、碱土金属(例如镁)、铵和nx
4+
(其中x是c
1-c4烷基)的盐。还包括碱加成盐，诸如钠盐或钾盐。
[0110]
还提供了本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、异构体或混合物，其中附接到碳原子的1个至n个氢原子可被氘原子或d取代，其中n是分子中氢原子的数量。如本领域已知的，氘原子为氢原子的非放射性同位素。此类化合物可增加对代谢的抗性，并且因此可用于在施用于哺乳动物时增加本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、异构体或混合物的半衰期。参见例如，foster，“deuterium isotope effects in studies of drug metabolism”，trends pharmacol.sci.,5(12):524-527(1984)。此类化合物通过本领域熟知的方法合成，例如通过采用一个或多个氢原子已被氘替代的起始物质。
[0111]
可以掺入所公开化合物中的同位素的示例还包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，诸如分别地2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
n、
15
o、
17
o、
18
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f、
36
cl、
123
i和
125
i。用正电子发射同位素诸如
11
c、
18
f、
15
o和
13
n的取代可用于正电子发射断层扫描(pet)研究，用于检查底物受体占用。同位素标记的式(i)的化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术来制备，或通过类似于如下文所列的实施例中描述的那些方法使用适当的同位素标记试剂代替先前采用的非标记试剂来制备。
[0112]
本文所公开的实施方案的化合物或它们的药学上可接受的盐可包括一个或多个不对称中心，并且因此可产生对映体、非对映体和可根据绝对立体化学定义为(r)-或(s)-或针对氨基酸定义为(d)-或(l)-的其他立体异构形式。本公开意在包括所有此类可能的异构体以及它们的外消旋和光学纯形式。光学活性(+)和(-)、(r)-和(s)-或(d)-和(l)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分，例如色谱法和分级结晶。用于制备/分离单独的对映体的常规技术包括从合适的光学纯前体手性合成或使用例如手性高压液相色谱法(hplc)拆分外消旋物(或盐或衍生物的外消旋物)。当本文所述的化合物含有烯族双键或其他几何不对称中心时，并且除非另有说明，否则旨在化合物包括e几何异构体和z几何异构体两者。同样，还旨在包括所有互变异构形式。在化合物以其手性形式表示的情况下，应当理解，实施方案涵盖但不限于具体的非对映异构体或对映体富集的形式。当手性未被指定但存在时，应当理解，该实施方案涉及特定的非对映体或对映体富集形式；或此类化合物的外消旋或非外消旋混合物。如本文所用，“非外消旋混合物”是比率不为1:1的立体异构体的混合物。
[0113]“外消旋物”是指对映体的混合物。混合物可以包含相等或不相等的量的每种对映体。
[0114]“一种立体异构体”和“多种立体异构体”是指在一个或多个立体中心的手性方面不同的化合物。立体异构体包括对映体和非对映异构体。如果化合物具有一个或多个不对称中心或具有不对称取代的双键，则化合物可以立体异构体形式存在，并且因此可以作为单独的立体异构体或作为混合物产生。除非另有说明，否则描述旨在包括单独的立体异构体以及混合物。用于确定立体异构体的方法和立体异构体的分离是本领域熟知的(参见例如advanced organic chemistry(第4版)的第4章，j.march，john wiley and sons，纽约，1992年)。
[0115]“互变异构体”是指在质子的位置方面不同的化合物的替代形式诸如烯醇-酮和亚胺-烯胺互变异构体，或含有附接到环-nh-和环＝n-两者的杂芳基基团的互变异构形式，诸如吡唑、咪唑、苯并咪唑、三唑和四唑。
[0116]
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。化学基团前端或末端的破折号是为了方便；可在没有一个或多个破折号的情况下描绘化学基团，而不会丧失其普通含义。通过结构中的线绘制的波浪线指示基团的附接点。虚线指示可选键。除非化学或结构需要，否则不通过书写化学基团的顺序或其与分子的其余部分连接的点来指示或暗示方向性。例如，基团
“‑
so2ch2‑”
等同于
“‑
ch2so2‑”
并且两者可以在任一方向上连接。类似地，例如“芳基烷基”基团可以在基团的芳基或烷基部分处连接到分子的其余部分。前缀诸如“c
u-v”或(c
u-cv)指示以下基团具有u个至v个碳原子。例如，“c
1-6
烷基”和“c
1-c6烷基”指示烷基基团具有1个至6个碳原子。
[0117]
如本文所用，“溶剂化物”是指溶剂和化合物的相互作用的结果。还提供了本文所述化合物的盐的溶剂化物。还提供了本文所述化合物的水合物。
[0118]
如本文所用，“前药”是指在施用于人体时根据一些化学或酶促途径转化为母体药物的药物衍生物。
[0119]
iii.化合物
[0120]
本公开提供了式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)和(ii)的化合物。
[0121]
在一些实施方案中，本公开提供了一种式(ia)的化合物：
[0122][0123]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0124]
r1和r2各自独立地为h或-c(o)r
1a
，其中r
1a
为c
1-6
烷基，其中r1和r2中的至少一者为h；
[0125]
或者r1和r2结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-，其中每个r
2a
和r
2b
独立地为h、c
1-6
烷基或c
1-6
烷氧基；
[0126]
r3为-n(h)(r
3a
)；
[0127]r3a
为h或-c(o)r
3a1
，其中r
3a1
为任选地被
–
nh2取代的c
1-18
烷基；
[0128]r4a
为o或s；并且
[0129]r4b
和r
4c
各自独立地为：
[0130]
(a)-oh；
[0131]
(b)
–
or
4b1
，其中
[0132]r4b1
为任选地被1至3个r
4b2
基团取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
6-12
芳基或具有1至3个各自独立地选自n、o或s的杂原子的5至6元杂芳基，其中
[0133]
每个r
4b2
基团独立地为c
1-6
烷氧基、-s-r
4b3
或-s(o)
2-r
4b3
，并且
[0134]
每个r
4b3
基团独立地为c
1-6
烷基；
[0135]
(c)其中
[0136]
下标m为0、1、2、3、4或5；并且
[0137]
每个r
4d
独立地为任选地被1至3个r
4d1
基团取代的c
1-6
烷基、任选地被1至3个r
4d2
基团取代的c
1-3
烷氧基、
–
c(o)or
4d3
或-c(o)n(r
4d3
)2，其中
[0138]
每个r
4d1
基团独立地为-nh2或-c(o)or
4d3
，
[0139]
每个r
4d2
独立地为c
1-3
烷氧基，并且
[0140]
每个r
4d3
独立地为c
1-3
烷基；
[0141]
(d)其中
[0142]
x1和x2各自独立地为-o-或-n(r
4h
)-；
[0143]r4e1
和r
4e2
各自独立地为h、任选地被1至3个r
4e3
基团取代的c
1-6
烷基，或c
3-6
环烷基，其中
[0144]
每个r
4e3
基团独立地为
–
c(o)or
4e4
、-nh2、
–
nhc(o)r
4e4
、
–
nhc(o)o-c
1-6
亚烷基-c
6-12
芳基、c
3-6
环烷基或c
6-12
芳基，并且
[0145]
每个r
4e4
基团独立地为c
1-6
烷基；
[0146]
或者r
4e1
和r
4e2
与它们所附接的原子结合形成c
3-6
环烷基；
[0147]r4f1
和r
4f2
各自为h或一起为氧代基；
[0148]r4g
为任选地被1至3个r
4g1
取代的c
1-6
烷基、c
7-18
烷基、任选地被1至3个r
4g2
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g3
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基、-c(o)r
4g4
、-c(o)or
4g5
，或
[0149][0150]
每个r
4g1
独立地为-oh、c
1-6
烷基、c
1-3
烷氧基、-(ch2och2)
1-5-ch3、c
1-3
卤代烷基、-n(r
4g8
)2、-c(o)n(r
4g8
)2、任选地被1至3个r
4g9
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g10
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基，或c
6-12
芳基；
[0151]
每个r
4g2
独立地为c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤素、c
1-3
卤代烷基、-oh、-nh2或c
6-12
芳基；
[0152]
每个r
4g3
独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基、氧代基、-c(o)r
4g5
或-c(o)or
4g5
；
[0153]
每个r
4g4
独立地为c
1-6
烷基、c
7-18
烷基或c
3-8
环烷基，其中所述c
1-6
烷基任选地被oh、nh2或-nhc(o)or
4g5
取代，并且其中所述环烷基任选地被c
1-6
烷基取代；
[0154]
每个r
4g5
独立地为c
1-6
烷基；
[0155]r4g6
和r
4g7
各自独立地为h或
–
or
4g11
，其中
[0156]r4g6
和r
4g7
中的至少一者为
–
or
4g11
；
[0157]
每个r
4g8
独立地为h或c
1-6
烷基；
[0158]
每个r
4g9
独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基或-nh2；
[0159]
每个r
4g10
独立地为c
1-6
烷基、c
1-3
卤代烷基或氧代基；
[0160]
每个r
4g11
独立地为c
10-18
烷基或苄基；
[0161]r4h
为h；
[0162]
或者r
4e1
和r
4h
与它们所附接的原子结合形成具有1至2个选自n、o和s的附加杂原子的5至6元杂环基；并且
[0163]
下标n为0或1；或
[0164]
(e)-(op(o)(oh))
1-2-oh；或
[0165]
(f)其中
[0166]r4j1
和r
4j2
各自独立地为h、
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，其中r
4j1
和r
4j2
中的至少一者为
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，
[0167]
每个r
4j3
独立地为c
1-18
烷基、c
2-6
烯基或苄基，并且
[0168]
至少一个r
4j3
为c
10-18
烷基；
[0169]
另选地，r2和r
4c
与它们所附接的原子结合形成六元环，并且r1为h或-c(o)r
1a
，其中r
1a
为c
1-6
烷基，
[0170]
条件是当所述式(ia)的化合物具有下式时：
[0171][0172]
并且r
4g
为乙基或2-乙基丁基，那么r1和r2中的一者为-[0173]
c(o)r
1a
，或者r1和r2结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-，条件是所述式(ia)的化合物不具有以下结构：
[0174][0175]
以及条件是当所述式(ia)的化合物具有下式时：
[0176][0177]
那么r1和r2中的一者为-c(o)r
1a
，或者r1和r2结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-。
[0178]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)或其药学上可接受的盐表示，条件是式(ia)的化合物不具有以下结构：
[0179][0180]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)或其药学上可接受的盐表示，条件是当式(ia)的化合物具有下式时：
[0181][0182]
并且r
4g
为乙基、2-乙基丁基或环己基，那么r1和r2中的一者为-c(o)r
1a
，或者r1和r2结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-。
[0183]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2各自独立地为h或-c(o)r
1a
，其中r
1a
为c
1-6
烷基，其中r1和r2中的至少一者为h；或者r1和r2结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-，其中每个r
2a
和r
2b
独立地为h、c
1-6
烷基或c
1-6
烷氧基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是h并且r2可以是-c(o)r
1a
，其中r
1a
为c
1-6
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是-c(o)r
1a
，其中r
1a
为c
1-6
烷基，并且r2可以是h。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2可以结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-，其中每个r
2a
和r
2b
独立地为h、c
1-6
烷基或c
1-6
烷氧基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2可以结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-，其中每个r
2a
和r
2b
独立地为h、c
1-4
烷基或c
1-3
烷氧基。
[0184]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2各自独立地为h或-c(o)r
1a
，其中r
1a
为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，其中r1和r2中的至少一者为h；或者r1和r2结合形成
–
c(o)-、-c(me)
2-或
–
ch(oet)-。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是h并且r2可以是-c(o)r
1a
，其中r
1a
为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是-c(o)r
1a
，其中r
1a
为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基，并且r2可以是h。在一些实施方案中，
该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2可以结合形成
–
c(o)-、-c(me)
2-或
–
ch(oet)-。
[0185]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2可以各自为h。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2各自独立地为h或-c(o)r
1a
，其中r
1a
为乙基、异丙基或叔丁基，其中r1和r2中的至少一者为h；或者r1和r2结合形成
–
c(o)-、-c(me)
2-或
–
ch(oet)-。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是h并且r2可以是-c(o)r
1a
，其中r
1a
为乙基、异丙基或叔丁基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是-c(o)r
1a
，其中r
1a
为乙基、异丙基或叔丁基，并且r2可以是h。
[0186]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是h并且r2可以是-c(o)-乙基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是h并且r2可以是-c(o)-异丙基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是h并且r2可以是-c(o)-叔丁基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是-c(o)-乙基并且r2可以是h。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是-c(o)-异丙基并且r2可以是h。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是-c(o)-叔丁基并且r2可以是h。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2可以结合形成-c(o)-。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2可以结合形成-c(me)
2-。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2可以结合形成
–
ch(oet)-。
[0187]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r3为-n(h)(r
3a
)；r
3a
为h或-c(o)r
3a1
，其中r
3a1
为任选地被
–
nh2取代的c
1-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r3为
–
nh2。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r3为-nhc(o)r
3a1
，其中r
3a1
为任选地被
–
nh2取代的c
1-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r3为-nhc(o)r
3a1
，其中r
3a1
为任选地被
–
nh2取代的c
1-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
3a1
可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、
仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十六烷基或十八烷基，各自任选地被-nh2取代。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
3a1
可以是正丙基、异丙基、异丁基、庚基或十二烷基，各自任选地被-nh2取代。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
3a1
可以是正丙基、异丙基、庚基或十二烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
3a1
可以是1-氨基异丁基。
[0188]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4a
可以是o或s。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4a
可以是s。
[0189]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2可以各自独立地为h或-c(o)r
1a
，其中r
1a
可以是乙基、异丙基或叔丁基，其中r1和r2中的至少一者可以是h；或者r1和r2结合形成
–
c(o)-、-c(me)
2-或
–
ch(oet)-；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是h；r2可以是-c(o)-乙基；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是h；r2可以是-c(o)-异丙基；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是h；r2可以是-c(o)-叔丁基；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是-c(o)-乙基；r2可以是h；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是-c(o)-异丙基；r2可以是h；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1可以是-c(o)-叔丁基；r2可以是h；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1；r2可以结合形成-c(o)-；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1；r2可以结合形成-c(me)
2-；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r1和r2可以结合形成
–
ch(oet)-；r3可以是nh2；并且r
4a
可以是o。
[0190]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
和r
4c
可以各自独立地为：
[0191]
(a)-oh；
[0192]
(b)
–
or
4b1
，其中
[0193]r4b1
可以是任选地被1至3个r
4b2
基团取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
6-12
芳基或具有1至3个各自独立地选自n、o或s的杂原子的5至6元杂芳基，其中
[0194]
每个r
4b2
基团可以独立地为c
1-6
烷氧基、-s-r
4b3
或-s(o)
2-r
4b3
，并且
[0195]
每个r
4b3
基团可以独立地为c
1-6
烷基；
[0196]
(c)其中
[0197]
下标m可以是0、1、2、3、4或5；并且
[0198]
每个r
4d
可以独立地为任选地被1至3个r
4d1
基团取代的c
1-6
烷基、任选地被1至3个r
4d2
基团取代的c
1-3
烷氧基、
–
c(o)or
4d3
或-c(o)n(r
4d3
)2，其中
[0199]
每个r
4d1
基团可以独立地为-nh2或-c(o)or
4d3
，
[0200]
每个r
4d2
可以独立地为c
1-3
烷氧基，并且
[0201]
每个r
4d3
可以独立地为c
1-3
烷基；
[0202]
(d)其中
[0203]
x1和x2可以各自独立地为-o-或-n(r
4h
)-；
[0204]r4e1
和r
4e2
可以各自独立地为h、任选地被1至3个r
4e3
基团取代的c
1-6
烷基，或c
3-6
环烷基，其中
[0205]
每个r
4e3
基团可以独立地为
–
c(o)or
4e4
、-nh2、
–
nhc(o)r
4e4
、
–
nhc(o)o-c
1-6
亚烷基-c
6-12
芳基、c
3-6
环烷基或c
6-12
芳基，并且
[0206]
每个r
4e4
基团可以独立地为c
1-6
烷基；
[0207]
或者r
4e1
和r
4e2
与它们所附接的原子结合形成c
3-6
环烷基；
[0208]r4f1
和r
4f2
各自为h或一起为氧代基；
[0209]r4g
可以是任选地被1至3个r
4g1
取代的c
1-6
烷基、c
7-18
烷基、任选地被1至3个r
4g2
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g3
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基、-c(o)r
4g4
、-c(o)or
4g5
，或
[0210][0211]
每个r
4g1
可以独立地为-oh、c
1-6
烷基、c
1-3
烷氧基、-(ch2och2)
1-5-ch3、c
1-3
卤代烷基、-n(r
4g8
)2、-c(o)n(r
4g8
)2、任选地被1至3个r
4g9
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g10
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基，或c
6-12
芳基；
[0212]
每个r
4g2
可以独立地为c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤素、c
1-3
卤代烷基、-oh、-nh2或c
6-12
芳基；
[0213]
每个r
4g3
可以独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基、氧代基、-c(o)r
4g5
或-c(o)
or
4g5
；
[0214]
每个r
4g4
可以独立地为c
1-6
烷基、c
7-18
烷基或c
3-8
环烷基，其中所述c
1-6
烷基可以任选地被oh、nh2或-nhc(o)or
4g5
取代，并且其中所述环烷基可以任选地被c
1-6
烷基取代；
[0215]
每个r
4g5
可以独立地为c
1-6
烷基；
[0216]r4g6
和r
4g7
可以各自独立地为h或
–
or
4g11
，其中
[0217]r4g6
和r
4g7
中的至少一者可以是
–
or
4g11
；
[0218]
每个r
4g8
可以独立地为h或c
1-6
烷基；
[0219]
每个r
4g9
可以独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基或-nh2；
[0220]
每个r
4g10
可以独立地为c
1-6
烷基、c
1-3
卤代烷基或氧代基；
[0221]
每个r
4g11
可以独立地为c
10-18
烷基或苄基；
[0222]r4h
可以为h；
[0223]
或者r
4e1
和r
4h
与它们所附接的原子结合形成具有1至2个选自n、o和s的附加杂原子的5至6元杂环基；并且
[0224]
下标n可以是0或1；或
[0225]
(e)-(op(o)(oh))
1-2-oh；或
[0226]
(f)其中
[0227]r4j1
和r
4j2
可以各自独立地为h、
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，其中r
4j1
和r
4j2
中的至少一者可以是
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，
[0228]
每个r
4j3
可以独立地为c
1-18
烷基、c
2-6
烯基或苄基，并且
[0229]
至少一个r
4j3
可以是c
10-18
烷基；
[0230]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r2和r
4c
可以与它们所附接的原子结合形成六元环。在一些实施方案中，式(ia)的化合物可以具有以下结构：
[0231][0232]
或其药学上可接受的盐。
[0233]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
和r
4c
中的一者可以是
–
oh。
[0234]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
和r
4c
中的一者可以是-or
4b1
，其中r
4b1
为任
选地被1至3个r
4b2
基团取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
3-8
环烷基、c
6-12
芳基或具有1至3个各自独立地选自n、o或s的杂原子的5至6元杂芳基，其中每个r
4b2
基团独立地为c
1-6
烷氧基、-s-r
4b3
或-s(o)
2-r
4b3
，并且每个r
4b3
基团独立地为c
1-6
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b1
可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、-ch2f、-chf2、-cf3、2,2,2-三氟乙基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、2-(硫代甲基)乙基、2-(甲基磺酰基)乙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、萘基或吡啶基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b1
可以是异丙基、2,2,2-三氟乙基、2-甲氧基乙基、2-(硫代甲基)乙基、2-(甲基磺酰基)乙基、环戊基、萘基或吡啶基。
[0235]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
和r
4c
中的一者可以是
[0236][0237]
其中下标m为0、1、2、3、4或5；并且每个r
4d
独立地为任选地被1至3个r
4d1
基团取代的c
1-6
烷基、任选地被1至3个r
4d2
基团取代的c
1-3
烷氧基、
–
c(o)or
4d3
或-c(o)n(r
4d3
)2，其中每个r
4d1
基团独立地为-nh2或-c(o)or
4d3
，每个r
4d2
独立地为c
1-3
烷氧基，并且每个r
4d3
独立地为c
1-3
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4d
可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、甲氧基甲基、2-甲氧基乙氧基、-c(o)ome、-c(o)oet、-c(o)nme2或
[0238][0239]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4d
可以是叔丁基、2-甲氧基乙氧基、-c(o)oet、-c(o)nme2或
[0240][0241]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
和r
4c
中的一者可以是
[0242][0243]
其中x1和x2各自独立地为-o-或-n(r
4h
)-；
[0244]r4e1
和r
4e2
各自独立地为h、任选地被1至3个r
4e3
基团取代的c
1-6
烷基，或c
3-6
环烷基，其中每个r
4e3
基团独立地为
–
c(o)or
4e4
、-nh2、
–
nhc(o)r
4e4
、
–
nhc(o)o-c
1-6
亚烷基-c
6-12
芳基、c
3-6
环烷基或c
6-12
芳基，并且每个r
4e4
基团独立地为c
1-6
烷基；或者r
4e1
和r
4e2
与它们所附接的原子结合形成c
3-6
环烷基；
[0245]r4f1
和r
4f2
各自为h或一起为氧代基；
[0246]r4g
为任选地被1至3个r
4g1
取代的c
1-6
烷基、c
7-18
烷基、任选地被1至3个r
4g2
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g3
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基、-c(o)r
4g4
、-c(o)or
4g5
，或
[0247][0248]
每个r
4g1
独立地为-oh、c
1-6
烷基、c
1-3
烷氧基、-(ch2och2)
1-5-ch3、c
1-3
卤代烷基、-n(r
4g8
)2、-c(o)n(r
4g8
)2、任选地被1至3个r
4g9
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g10
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基，或c
6-12
芳基；每个r
4g2
独立地为c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤素、c
1-3
卤代烷基、-oh、-nh2或c
6-12
芳基；每个r
4g3
独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基、氧代基、-c(o)r
4g5
或-c(o)or
4g5
；
[0249]
每个r
4g4
独立地为c
1-6
烷基、c
7-18
烷基或c
3-8
环烷基，其中所述c
1-6
烷基任选地被oh、nh2或-nhc(o)or
4g5
取代，并且其中所述环烷基任选地被c
1-6
烷基取代；
[0250]
每个r
4g5
独立地为c
1-6
烷基；
[0251]r4g6
和r
4g7
各自独立地为h或
–
or
4g11
，其中r
4g6
和r
4g7
中的至少一者为
–
or
4g11
；
[0252]
每个r
4g8
独立地为h或c
1-6
烷基；
[0253]
每个r
4g9
独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基或-nh2；每个r
4g10
独立地为c
1-6
烷基、c
1-3
卤代烷基或氧代基；每个r
4g11
独立地为c
10-18
烷基或苄基；
[0254]r4h
为h；或者r
4e1
和r
4h
与它们所附接的原子结合形成具有1至2个选自n、o和s的附加杂原子的5至6元杂环基；并且下标n为0或1。
[0255]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中x1和x2各自独立地为-o-或-nh-。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中x1和x2各自为-o-。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中x1和x2各自为-nh-。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中x1可以是-o-并且x2可以是-nh-。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中x1可以是-nh-并且x2可以是-o-。
[0256]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4f1
和r
4f2
各自为h。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4f1
和r
4f2
一起为氧代基。
[0257]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、
(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中下标n为0。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中下标n为1。
[0258]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
和r
4c
中的一者可以是
[0259][0260]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4e1
可以是h、任选地被1至3个r
4e3
基团取代的c
1-6
烷基或c
3-6
环烷基，其中每个r
4e3
基团独立地为
–
c(o)or
4e4
、-nh2、
–
nhc(o)r
4e4
、
–
nhc(o)o-c
1-6
亚烷基-c
6-12
芳基、c
3-6
环烷基或c
6-12
芳基，并且每个r
4e4
基团独立地为c
1-6
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4e1
可以是任选地被1个r
4e3
基团取代的c
1-6
烷基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基，其中每个r
4e3
基团独立地为
–
c(o)or
4e4
、-nh2、
–
nhc(o)r
4e4
、
–
nhc(o)o-苄基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基或苯基，并且每个r
4e4
基团独立地为甲基、乙基、异丙基、正丁基或异丁基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
e1
可以是甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、环丙基甲基、环戊基、环己基或苄基，其中所述甲基、乙基和丁基各自任选地被
–
nh2、-nhc(o)me、-nhc(o)o-苄基、-c(o)o-丁基、-c(o)o-戊基取代。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4e1
可以是甲基。
[0261]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是任选地被1至3个r
4g1
取代的c
1-6
烷基，其中每个r
4g1
独立地为-oh、c
1-6
烷基、c
1-3
烷氧基、-(ch2och2)
1-5-ch3、c
1-3
卤代烷基、-n(r
4g8
)2、-c(o)n(r
4g8
)2、任选地被1至3个r
4g9
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g10
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基，或c
6-12
芳基；每个r
4g8
独立地为h或c
1-6
烷基；每个r
4g9
独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基或-nh2；并且每个r
4g10
独立地为c
1-6
烷基、c
1-3
卤代烷基或氧代基。
[0262]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是
[0263]
任选地被-(ch2och2)
2-ch3取代的甲基、环丙基、环丁基、任选地被cf3或nh2取代的环己基、任选地被ch2cf3取代的哌啶、奎宁环、氧杂环丁烷、四氢-2h-吡喃或苯基，
[0264]
任选地被nme2或n(ipr)2取代的乙基，
[0265]
任选地被甲氧基或吗啉取代的正丙基，
[0266]
任选地被c(o)nh2取代的异丙基，
[0267]
正丁基，
[0268]
任选地被甲氧基、oh或cf3取代的异丁基，
[0269]
戊基、新戊基、己基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基或2-乙基-丁基。
[0270]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、戊基、新戊基、己基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、
[0271][0272]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是c
7-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十六烷基或十八烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是辛基、十二烷基、十六烷基或十八烷基。
[0273]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是任选地被1至3个r
4g2
取代的c
3-8
环烷基，其中每个r
4g2
独立地为c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、卤素、c
1-3
卤代烷基、-oh、-nh2或c
6-12
芳基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是任选地被1至3个r
4g2
取代的c
3-8
环烷基，其中每个r
4g2
独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、f、cl、-ch2f、-chf2、-cf3、-ch2cf3、-nh2或苯基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基，各自任选地被1至2个r
4g2
取代，其中每个r
4g2
独立地为甲基、叔丁基、甲氧基、f、-cf3、-nh2或苯基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基，其中所述环己基可以任选地被1至2个r
4g2
取代，其中每个r
4g2
独立地为甲基、叔丁基、甲氧基、f、-cf3、-nh2或苯基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、
[0274][0275]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是任选地被1至3个r
4g3
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基，其中每个r
4g3
独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基、氧代基、-c(o)r
4g5
或-c(o)or
4g5
。
[0276]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是吡咯烷、哌啶、氮杂环庚烷、奎宁环、氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢吡喃、哌嗪或吗啉，各自任选地被1至3个r
4g3
取代，其中每个r
4g3
独立地为c
1-6
烷基、卤素、c
1-3
卤代烷基、氧代基、-c(o)r
4g5
或-c(o)or
4g5
。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是吡咯烷、哌啶、氮杂环庚烷、奎宁环、氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢吡喃、哌嗪或吗啉，各自任选地被1至3个r
4g3
取代，其中每个r
4g3
独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、f、cl、-ch2f、-chf2、-cf3、-ch2cf3、氧代基、-c(o)me或-c(o)o-c
1-4
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是吡咯烷、哌啶、氮杂环庚烷、奎宁环、氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢吡喃或吗啉，各自任选地被1至3个r
4g3
取代，其中每个r
4g3
独立地为甲基、乙基、f、-ch2cf3、氧代基、-c(o)me或-c(o)o-叔丁基。
[0277]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是任选地被甲基、氧代基、-c(o)me或-c(o)o-叔丁基取代的吡咯烷；任选地被甲基、乙基、f或-c(o)me取代的哌啶；氮杂环庚烷；奎宁环；氧杂环丁烷；任选地被甲基取代的四氢呋喃；任选地被甲基取代的四氢吡喃；或吗啉。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是：
[0278]
[0279]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是-c(o)r
4g4
，其中每个r
4g4
独立地为c
1-6
烷基、c
7-18
烷基或c
3-8
环烷基，其中所述c
1-6
烷基任选地被oh、nh2或-nhc(o)or
4g5
取代，并且其中所述环烷基任选地被c
1-6
烷基取代。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是-c(o)r
4g4
，其中每个r
4g4
独立地为甲基、任选地被nh2取代的乙基、正丙基、异丙基、正丁基、任选地被nh2或
–
nhc(o)o-叔丁基取代的异丁基、仲丁基、任选地被oh取代的叔丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十六烷基、十八烷基、任选地被甲基取代的环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是-c(o)r
4g4
，其中每个r
4g4
独立地为任选地被nh2取代的乙基、任选地被nh2或
–
nhc(o)o-叔丁基取代的异丁基、任选地被oh取代的叔丁基、十一烷基、任选地被甲基取代的环丙基，或环己基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是
[0280][0281]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是-c(o)or
4g5
，其中每个r
4g5
独立地为c
1-6
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g5
可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g5
可以是异丁基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是：
[0282][0283]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是
[0284][0285]
其中r
4g6
和r
4g7
各自独立地为h或
–
or
4g11
，其中r
4g6
和r
4g7
中的至少一者为
–
or
4g11
；并且每个r
4g11
独立地为c
10-18
烷基或苄基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g6
可以是h并
且r
4g7
可以是
–
or
4g11
，其中r
4g11
可以是c
10-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g6
和r
4g7
各自独立地为
–
or
4g11
，其中每个r
4g11
独立地为c
10-18
烷基或苄基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
可以是：
[0286][0287]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
和r
4c
中的一者可以是-(op(o)(oh))
1-2-oh。
[0288]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
和r
4c
中的一者可以是
[0289][0290]
其中r
4j1
和r
4j2
各自独立地为h、
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，其中r
4j1
和r
4j2
中的至少一者为
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，每个r
4j3
独立地为c
1-18
烷基、c
2-6
烯基或苄基，并且至少一个r
4j3
为c
10-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j1
可以是h并且r
4j2
可以是
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，其中每个r
4j3
独立地为c
1-18
烷基、c
2-6
烯基或苄基，并且至少一个r
4j3
为c
10-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j1
和r
4j2
各自独立地为
–
or
4j3
或
–
oc(o)r
4j3
，其中每个r
4j3
独立地为c
1-18
烷基、c
2-6
烯基或苄基，并且至少一个r
4j3
为c
10-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j1
可以是
–
or
4j3
，其中r
4j3
可以是c
1-6
烷基、c
2-6
烯基或苄基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j1
可以是
–
or
4j3
，其中r
4j3
可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、丙-2-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基或苄基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j1
可以是
–
or
4j3
，其中r
4j3
可以是甲基、丙-2-烯基或苄基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j2
可以是
–
or
4j3
，其中r
4j3
可以是c
10-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j2
可以是
–
or
4j3
，其中r
4j3
可以是十二烷基、十一烷基、十二烷基、十六烷基或十八烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j2
可以是
–
or
4j3
，其中r
4j3
可以是十六烷基或十八烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j1
和r
4j2
各自为
–
oc(o)r
4j3
，其中r
4j3
为c
10-18
烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j1
和r
4j2
各自为
–
oc(o)r
4j3
，其中r
4j3
可以是十二烷基、十一烷基、十二烷基、十五烷基、十六烷基或十八烷基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4j1
和r
4j2
各自为
–
oc(o)r
4j3
，其中r
4j3
可以是十五烷基。
[0291]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
和r
4c
各自独立地为：
[0292]
其中
[0293]
下标m为0、1、2、3、4或5；并且每个r
4d
独立地为任选地被1至3个r
4d1
基团取代的c
1-6
烷基、任选地被1至3个r
4d2
基团取代的c
1-3
烷氧基、
–
c(o)or
4d3
或-c(o)n(r
4d3
)2，其中每个r
4d1
基团独立地为-nh2或-c(o)ome，每个r
4d2
为甲氧基，并且每个r
4d3
独立地为甲基或乙基；或
[0294]
其中
[0295]
x1和x2各自独立地为-o-或-nh-；
[0296]r4e1
为任选地被1个r
4e3
基团取代的c
1-6
烷基，或c
3-6
环烷基，其中每个r
4e3
基团独立地为
–
c(o)me、
–
c(o)o-正丁基、-c(o)o-戊基、-nh2、
–
nhc(o)me,
–
nhc(o)o-苄基、c
3-6
环烷基或苯基；
[0297]r4e2
为h；或者r
4e1
和r
4e2
与它们所附接的原子结合形成c
3-6
环烷基；
[0298]r4f1
和r
4f2
各自为h或一起为氧代基；
[0299]r4g
为任选地被1至3个r
4g1
取代的c
1-6
烷基、c
7-18
烷基、任选地被1至3个r
4g2
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g3
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基、-c(o)r
4g4
、-c(o)or
4g5
，或
[0300][0301]
每个r
4g1
独立地为-oh、羟甲基、甲氧基、-(ch2och2)
2-ch3、-cf3、-n(me)2、-c(o)nh2、任选地被1至2个r
4g9
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至2个r
4g10
取代的具有1至3个选自n、o和s
的杂原子的3至8元杂环基，或苯基；
[0302]
每个r
4g2
独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、甲氧基、f、cl、br、cf3、-nh2或苯基；
[0303]
每个r
4g3
独立地为甲基、乙基、f、cl、cf3、ch2cf3、氧代基、-c(o)me或-c(o)o-叔丁基；
[0304]
每个r
4g4
独立地为c
1-6
烷基、c
7-18
烷基或c
3-7
环烷基，其中所述c
1-6
烷基任选地被oh、nh2或-nhc(o)o-叔丁基取代，并且其中所述环烷基任选地被甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基取代；
[0305]
每个r
4g5
独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基；
[0306]r4g6
和r
4g7
各自独立地为h或
–
or
4g11
，其中r
4g6
和r
4g7
中的至少一者为
–
or
4g11
；
[0307]
每个r
4g9
独立地为甲基、cf3或-nh2；
[0308]
每个r
4g10
独立地为甲基、cf3、ch2cf3或氧代基；并且
[0309]
每个r
4g11
独立地为十六烷、十八烷或苄基。
[0310]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4c
可以是：
[0311]
(d)其中
[0312]
x1和x2各自独立地为-o-或-nh-；
[0313]r4e1
为任选地被1个r
4e3
基团取代的c
1-6
烷基，或c
3-6
环烷基，其中每个r
4e3
基团独立地为
–
c(o)me、
–
c(o)o-正丁基、-c(o)o-戊基、-nh2、
–
nhc(o)me,
–
nhc(o)o-苄基、c
3-6
环烷基或苯基；
[0314]r4e2
为h；或者r
4e1
和r
4e2
与它们所附接的原子结合形成c
3-6
环烷基；
[0315]r4f1
和r
4f2
各自为h或一起为氧代基；
[0316]r4g
为任选地被1至3个r
4g1
取代的c
1-6
烷基、c
7-18
烷基、任选地被1至3个r
4g2
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至3个r
4g3
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基、-c(o)r
4g4
、-c(o)or
4g5
，或
[0317][0318]
每个r
4g1
独立地为-oh、羟甲基、甲氧基、-(ch2och2)
2-ch3、-cf3、-n(me)2、-c(o)nh2、任选地被1至2个r
4g9
取代的c
3-8
环烷基、任选地被1至2个r
4g10
取代的具有1至3个选自n、o和s的杂原子的3至8元杂环基，或苯基；
[0319]
每个r
4g2
独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、甲氧基、f、cl、br、cf3、-nh2或苯基；
[0320]
每个r
4g3
独立地为甲基、乙基、f、cl、cf3、ch2cf3、氧代基、-c(o)me或-c(o)o-叔丁基；
[0321]
每个r
4g4
独立地为c
1-6
烷基、c
7-18
烷基或c
3-7
环烷基，其中所述c
1-6
烷基任选地被oh、nh2或-nhc(o)o-叔丁基取代，并且其中所述环烷基任选地被甲基、乙基、正丙基、异丙基、正
丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基取代；
[0322]
每个r
4g5
独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基；
[0323]r4g6
和r
4g7
各自独立地为h或
–
or
4g11
，其中r
4g6
和r
4g7
中的至少一者为
–
or
4g11
；
[0324]
每个r
4g9
独立地为甲基、cf3或-nh2；
[0325]
每个r
4g10
独立地为甲基、cf3、ch2cf3或氧代基；并且
[0326]
每个r
4g11
独立地为十六烷、十八烷或苄基。
[0327]
在一些实施方案中，该化合物具有式(ib)：
[0328][0329]
或其药学上可接受的盐。
[0330]
在一些实施方案中，该化合物具有式ic：
[0331][0332]
或其药学上可接受的盐。
[0333]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
可以是：
[0334][0335]
其中下标m为1；并且
[0336]r4d
独立地为甲基、乙基、正丙基或叔丁基，各自任选地被1至3个r
4d1
基团取代，其中每个r
4d1
基团独立地为-nh2或-c(o)ome，或者
[0337]r4d
为甲氧基、乙氧基或丙氧基，各自任选地被甲氧基取代，或者
[0338]r4d
为
–
c(o)ome、
–
c(o)oet或-c(o)n(me)2；并且
[0339]r4c
可以是：
[0340][0341]
其中r
4e1
为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊烷、新戊烷或正己烷，各自任选地被1个r
4e3
基团取代，其中每个r
4e3
基团独立地为-c(o)me、-c(o)o-正丁基、-c(o)o-戊基、-nh2、
–
nhc(o)me或-nhc(o)o-苄基，或者
[0342]r4e1
为环丙基、环丙基甲基、环丁基、环丁基甲基、环戊基、环戊基甲基、环己基或环己基甲基，或者
[0343]r4e1
为苄基。
[0344]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4b
可以是
[0345]
和
[0346]r4c
可以是
[0347][0348]
其中r
e1
可以是甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、环丙基甲基、环戊基、环己基或苄基，其中所述甲基、乙基和丁基基团各自任选地被
–
nh2、-nhc(o)me、-nhc(o)o-苄基、-c(o)o-丁基、-c(o)o-戊基取代；并且
[0349]r4g
为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、戊基、新戊基、己基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、辛基、十二烷基、十六烷基、十八烷基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、
[0350]
[0351][0352]
在一些实施方案中，该化合物具有式(id)：
[0353][0354]
或其药学上可接受的盐。
[0355]
在一些实施方案中，该化合物具有式(ie)：
[0356][0357]
或其药学上可接受的盐。
[0358]
在一些实施方案中，该化合物具有式(if)：
[0359][0360]
或其药学上可接受的盐。
[0361]
在一些实施方案中，该化合物具有式(ig)：
[0362][0363]
或其药学上可接受的盐。
[0364]
在一些实施方案中，该化合物具有式(ih)：
[0365][0366]
或其药学上可接受的盐。
[0367]
在一些实施方案中，该化合物具有式(ii)：
[0368][0369]
或其药学上可接受的盐。
[0370]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中该化合物或其药学上可接受的盐为所述化合物，其中r
4c
为：
[0371][0372]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中该化合物或其药学上可接受的盐为所述化合物，其中r
4c
为：
[0373][0374]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊烷、新戊烷、正己烷、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、十一烷、十二烷、十五烷、十六烷或十八烷，各自任选地被1至2个r
4g1
取代，其中每个r
4g1
独立地为-oh、羟甲基、甲氧基、-(ch2och2)
2-ch3、-cf3、-n(me)2或-c(o)nh2。
[0375]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基，各自任选地被1至2个r
4g2
取代，其中每个r
4g2
独立地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、ome、f、cf3、-nh2或苯基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基、环庚基甲基或环辛基甲基，各自任选地被1至2个r
4g2
取代，其中每个r
4g2
独立地为甲基、cf3或
–
nh2。
[0376]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为吡咯烷、哌啶、氮杂环庚烷、奎宁环、氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢吡喃、吗啉或1,3-二氧杂环戊烯，各自任选地被1至2个r
4g3
取代，其中每个r
4g3
独立地为甲基、乙基、f、ch2cf3、氧代基、-c(o)me或-c(o)o-叔丁基。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为哌啶甲基、奎宁环甲基、氧杂环丁烷甲基、四氢呋喃甲基、四氢吡喃甲基、吗啉甲基、2-吗啉-乙基、3-吗啉-丙基或1,3-二氧杂环戊烯甲基，各自任选地被1至2个r
4g10
取代，其中每个r
4g10
独立地为甲基、ch2cf3或氧代基。
[0377]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为苄基。
[0378]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为-c(o)r
4g4
，其中r
4g4
为选自由甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊烷、新戊烷、正己烷、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基和2-乙基-丁基组成的组的c
1-6
烷基；选自由庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、十一烷、十二烷、十五烷、十六烷和十八烷组成的组的c
7-18
烷基；或选自由环丙基、环丁基、环
戊基或环己基组成的组的c
3-8
环烷基，其中每个c
1-6
烷基任选地被oh、nh2或-nhc(o)o-叔丁基取代，并且其中每个c
3-8
环烷基任选地被甲基取代。
[0379]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为-c(o)or
4g5
，其中r
4g5
为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。
[0380]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为
[0381]
其中
[0382]r4g6
和r
4g7
各自独立地为h或
–
or
4g11
，其中
[0383]r4g6
和r
4g7
中的至少一者为
–
or
4g11
，并且
[0384]
每个r
4g11
独立地为十六烷、十八烷或苄基。
[0385]
在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，其中r
4g
为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、戊基、新戊基、己基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基-丁基、辛基、十二烷基、十六烷基、十八烷基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、
[0386]
[0387]
[0388][0389]
在一些实施方案中，本公开提供了表1a、表1b、表1c、表1d、表1e、表1f、表1g、表1h、表1i或表1j的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1a的化合物或其药学上的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1b的化合物或其药学上的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1c的化合物或其药学上的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1d的化合物或其药学上的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1e的化合物或其药学上的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1f的化合物或其药学上的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1g的化合物或其药学上的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1h的化合物或其药学上的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1i的化合物或其药学上的盐。在一些实施方案中，该化合物为表1j的化合物或其药学上的盐。
[0390]
表1a.
[0391]
[0392]
[0393]
[0394]
[0395][0396]
表1b.
[0397]
[0398]
[0399]
[0400]
[0401][0402]
表1c.
[0403]
[0404]
[0405]
[0406]
[0407][0408]
表1d.
[0409]
[0410]
[0411]
[0412]
[0413]
[0414]
[0415][0416]
表1e.
[0417]
[0418]
[0419]
[0420]
[0421]
[0422][0423]
表1f.
[0424]
[0425]
[0426]
[0427]
[0428][0429]
表1g.
[0430]
[0431]
[0432]
[0433]
[0434][0435]
表1h.
[0436]
[0437]
[0438]
[0439]
[0440][0441]
表1i.
[0442]
[0443]
[0444]
[0445]
[0446]
[0447][0448]
表1j.
[0449]
[0450]
[0451]
[0452]
[0453][0454]
在一些实施方案中，本公开提供了一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物或其药学上可接受的盐具有以下结构：
[0455]
[0456][0457]
在一些实施方案中，本公开提供了一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物或其药学上可接受的盐具有以下结构：
[0458]
[0459]
[0460][0461]
在一些实施方案中，条件是当式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物具有下式时：
[0462][0463]
并且r
4g
为乙基或2-乙基丁基，那么r1和r2中的一者为-c(o)r
1a
，或者r1和r2结合形成
–
c(o)-或
–
c(r
2a
)(r
2b
)-。在一些实施方案中，该化合物可以由式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)或其药学上可接受的盐表示，条件是该化合物不为：
[0464][0465]
本文所述化合物的体内代谢产物也落入本文的范围内，在某种程度上，此类产物相对于现有技术是新颖的并且不明显。主要由于酶促过程，此类产物可由例如所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、酯化等产生。因此，包括了通过包括使化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的一段时间的方法来产生的新颖且非显然的化合物。此类产物通常通过以下过程来识别：制备放射性标记(例如
14
c或3h)化合物，将其以可检测剂量(例如大于约0.5mg/kg)肠胃外施用于动物(诸如大鼠、小鼠、豚鼠、猴)或人，允许有足够的时间进行代谢(通常约30秒至30小时)，并且将其转化产物从尿液、血液或其他生物样本中分离出来。这些产物很容易分离，因为它们被标记(其他产物通过使用能够结合在代谢物中存活的表位的抗体来分离)。代谢物结构以常规方式(例如，通过ms或nmr分析)进行确定。通常，代谢物的分析以与常规药物代谢研究相同的方式进行。转化产物只要在体内不以另外的方式被发现，即使它们自身不具有hsv抗病毒活性，也可用于化合物的治疗剂量的诊断测定。
[0466]
用于确定替代胃肠分泌物中化合物的稳定性的配方和方法是已知的。化合物在本文中被定义为在胃肠道中稳定，其中在37℃孵育1小时后，少于约50摩尔％的保护基团在替代肠液或胃液中脱保护。仅仅因为化合物对胃肠道稳定并不意味着它们不能在体内水解。前药通常在消化系统中稳定，但可在消化腔、肝脏、肺或其他代谢器官中或一般来讲在细胞内基本上水解至母体药物。如本文所用，前药被理解为被化学设计成在克服口服递送生物屏障后有效释放母体药物的化合物。
[0467]
iv.药物制剂
[0468]
在一些实施方案中，本公开提供了一种药物制剂，其包含药物有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。本文还提供了一种药物制剂，该药物制剂包含药学有效量的式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或酯以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0469]
本文的化合物用常规载体和赋形剂配制而成，所述载体和赋形剂将根据常规实践
进行选择。片剂将包含赋形剂、助流剂、填料、粘结剂等。水性制剂以无菌形式制备，并且当旨在通过非口服施用递送时，通常将是等渗的。所有制剂将任选地含有赋形剂，诸如“handbook of pharmaceutical excipients”(1986年)中所述的那些赋形剂。赋形剂包括抗坏血酸和其他抗氧化剂、螯合剂诸如edta、碳水化合物诸如糊精、羟烷基纤维素、羟烷基甲基纤维素、硬脂酸等。制剂的ph范围为约3至约11，但通常为约7至10。
[0470]
虽然活性成分可以单独施用，但是可能优选的是将它们作为药物制剂提供。用于兽医用途和人类用途的制剂均包含至少一种如上文所定义的活性成分，连同一种或多种可接受的载体和任选的其他治疗成分，尤其是如本文所讨论的那些附加治疗成分。载体必须是“可接受的”，即与制剂的其他成分相容并且对其接受者在生理上无害。
[0471]
制剂包括适于前述施用途径的那些制剂。制剂可方便地以单位剂型提供，并且可通过药学领域熟知的方法中的任一种方法来制备。技术和制剂通常见于“remington's pharmaceutical sciences”(mack publishing co.,easton,pa)。此类方法包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体缔合的步骤。一般来讲，制剂通过将活性成分与液体载体或细分散的固体载体或两者均匀且紧密地缔合，然后，如果需要，使产品成形来制备。
[0472]
适于口服施用的制剂可作为离散单位诸如各自包含预先确定量的活性成分的胶囊、扁囊剂或片剂提供；作为粉末或颗粒存在；作为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液存在；或者作为水包油型液体乳液或油包水型液体乳液存在。活性成分也可作为丸剂、冲剂或糊剂施用。
[0473]
片剂通过压缩或模制制成，任选地使用一种或多种辅助成分。压缩片剂可通过在合适的机器中压缩自由流动形式(诸如粉末状或颗粒状)的活性成分来制备，任选地与粘结剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合。模制片剂可通过在合适的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物进行模制来制备。片剂可任选地被包衣或刻痕，并且任选地被配制以便提供活性成分从中的缓慢或受控的释放。
[0474]
对于眼睛或其他外部组织(例如口腔和皮肤)的感染，优选地将制剂作为含有活性成分的外用软膏或乳膏施用，这些活性成分的量为例如0.075％w/w至20％w/w(包括在0.1％与20％之间的范围内的活性成分，增量为0.1％w/w，诸如0.6％w/w、0.7％w/w等)，优选地0.2％w/w至15％w/w，并且最优选地0.5％w/w至10％w/w。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡基质或水混溶性软膏基质一起使用。另选地，活性成分可与水包油型乳膏基质一起配制成乳膏。
[0475]
如果需要，乳膏基质的水相可包括例如至少30％w/w的多元醇，即具有两个或更多个羟基的醇诸如丙二醇、丁烷-1,3-二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘油和聚乙二醇(包括peg 400)以及它们的混合物。外用制剂可理想地包括增强活性成分通过皮肤或其他受影响区域的吸收或渗透的化合物。此类皮肤渗透增强剂的示例包括二甲基亚砜和相关类似物。
[0476]
乳液的油相可以已知方式由已知成分构成。虽然该相可以仅包括乳化剂(或者称为乳化剂)，但其理想地包括至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。优选地，亲水性乳化剂连同充当稳定剂的亲脂性乳化剂一起包括在内。还优选地包括油和脂肪两者。具有或不具有稳定剂的乳化剂一起构成所谓的乳化蜡，并且蜡与油和脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，该基质形成乳膏制剂的油性分散相。
[0477]
适用于制剂的乳化剂和乳液稳定剂包括60、80、鲸蜡硬脂醇、苯甲
醇、肉豆蔻醇、甘油单硬脂酸酯和月桂基硫酸钠。
[0478]
基于实现所需的化妆品特性为制剂选择合适的油或脂肪。乳膏应该优选地是不油腻的、不染色的和可洗涤的产品，具有合适的稠度以避免从管或其他容器泄漏。可使用直链或支链的单烷基酯或二烷基酯，诸如二异己二酸酯、异十六烷基硬脂酸酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸-2-乙基己酯或称为crodamol cap的支链酯的混合物，最后三种是优选酯。这些酯可单独或组合使用，具体取决于所需特性。另选地，使用高熔点脂质，诸如白色软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油。
[0479]
本文的药物制剂包含与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂和任选的其他治疗剂的组合。含有活性成分的药物制剂可以是适用于预期施用方法的任何形式。例如当用于口服用途时，可制备片剂、含片、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊、溶液、糖浆或酏剂。旨在口服使用的组合物可根据本领域已知用于制造药物组合物的任何方法制备，并且此类组合物可包含一种或多种药剂，包括甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以便提供适口的制剂。含有与适用于制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分的片剂是可接受的。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；粒化剂和崩解剂，诸如玉米淀粉或藻酸；粘结剂，诸如淀粉、明胶或阿拉伯树胶；以及润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可为未包衣的或可通过包括微胶囊化在内的已知技术来包衣，以延缓胃肠道中的崩解和吸附，从而在较长周期内提供持续作用。例如，可单独使用或与蜡一起使用延时材料，诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
[0480]
用于口服使用的制剂也可作为硬明胶胶囊提供，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如磷酸钙或高岭土)混合，或作为软明胶胶囊提供，其中活性成分与水或油介质(诸如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。
[0481]
水性悬浮液含有与适用于制造水性悬浮液的赋形剂混合的活性物质。此类赋形剂包括悬浮剂，诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；和分散剂或润湿剂，诸如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、烯化氧与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七乙烯氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水性悬浮液还可含有一种或多种防腐剂，诸如对羟基苯甲酸乙酯或正羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂诸如蔗糖或糖精。
[0482]
可通过将活性成分悬浮在植物油(诸如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)中，或者悬浮在矿物油(诸如液体石蜡)中配制油性悬浮液。口服悬浮液可含有增稠剂诸如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可添加甜味剂(诸如上述的那些甜味剂)和矫味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可通过添加抗氧化剂(诸如抗坏血酸)来保存。
[0483]
适用于通过添加水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂由上文所公开的那些例示。还可以存在附加的赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂。
[0484]
药物组合物还可以呈水包油型乳液的形式。油相可以是植物油(诸如橄榄油或花生油)、矿物油(诸如液体石蜡)或它们的混合物。合适的乳化剂包括天然存在的树胶，诸如
阿拉伯树胶和黄蓍胶；天然存在的磷脂，诸如大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，诸如脱水山梨糖醇单油酸酯；和这些偏酯与环氧乙烷的缩合产物，诸如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳液还可含有甜味剂和矫味剂。糖浆和酏剂可与甜味剂诸如甘油、山梨糖醇或蔗糖一起配制。此类制剂还可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂或着色剂。
[0485]
药物组合物可呈无菌可注射或静脉内制剂的形式，诸如无菌可注射水性或油性悬浮液。该悬浮液可根据已知技术使用上述已经提到的那些合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射剂或静脉注射制剂还可以是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液(诸如1,3-丁二醇中的溶液)，或者被制备成冻干粉末。可采用的可接受溶媒和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油通常可用作溶剂或悬浮介质。为此，可采用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸诸如油酸可同样用于制备注射剂。
[0486]
可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的宿主和特定的施用方式而变化。例如，旨在用于向人口服施用的缓释制剂可含有大约1mg至1000mg的活性材料，该活性材料与适当且方便量的载体材料配混，该载体材料可以在总组合物的约5％至约95％(重量：重量)之间变化。可制备药物组合物以提供易于测量的施用量。例如，旨在用于静脉内输注的水溶液每毫升溶液可含有约3至500μg的活性成分，以便以约30ml/hr的速率输注合适的体积。
[0487]
适于局部施用于眼睛的制剂还包括滴眼剂，其中活性成分溶解或悬浮在合适的载体中，尤其是活性成分的水溶剂中。活性成分优选地以0.5％至20％，有利地0.5％至10％，并且特别是约1.5％w/w的浓度存在于此类制剂中。
[0488]
适于在口腔中局部施用的制剂包括含片，该含片中含有调味的活性成分，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；锭剂，该锭剂中含有惰性的活性成分，诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶；以及在合适的液体载体中包含活性成分的漱口剂。
[0489]
用于直肠施用的制剂可作为具有合适基质的栓剂提供，该基质包括例如可可脂或水杨酸盐。
[0490]
适于肺内或鼻腔施用的制剂具有例如0.1微米至500微米范围内(诸如0.5微米、1微米、30微米、35微米等)的粒径，该制剂通过鼻腔通道快速吸入或通过口腔吸入以到达肺泡囊来施用。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液。适于气溶胶或干粉施用的制剂可根据常规方法制备，并且可与其他治疗剂一起递送，诸如迄今为止用于治疗或预防肺病毒科感染的化合物，如下所述。
[0491]
另一个实施方案提供了一种新颖的、有效的、安全的、无刺激性的和生理上相容的可吸入组合物，该可吸入组合物包含式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物或其药学上可接受的盐，其适于治疗肺病毒科感染和潜在相关的细支气管炎。优选的药学上可接受的盐是无机酸盐，包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐或磷酸盐，因为它们可能引起较少的肺部刺激。优选地，可吸入制剂以包含质量中值空气动力学直径(mmad)介于约1μm与5μm之间的颗粒的气溶胶形式递送到支气管内空间。优选地，式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物被配制用于使用喷雾器、加压计量剂量吸入器(pmdi)或干粉吸入器(dpi)进行气溶胶递送。
[0492]
雾化器的非限制性示例包括雾化、喷射、超声波、加压、振动多孔板或等效的雾化
器，包括利用自适应气溶胶递送技术的那些雾化器(denyer,j.aerosol medicine pulmonary drug delivery 2010,23增刊1,s1-s10)。喷射雾化器利用气压将液体溶液破碎成气溶胶液滴。超声波雾化器通过将液体剪切成小气溶胶液滴的压电晶体工作。加压雾化系统迫使溶液在压力下通过小孔以产生气溶胶液滴。振动多孔板装置利用快速振动将液体流剪切成适当的液滴尺寸。
[0493]
在一个优选的实施方案中，使用能够将式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物的制剂烟雾化成所需mmad的颗粒的雾化器来将用于雾化的制剂以包含mmad主要介于约1μm与5μm之间的颗粒的气溶胶形式递送到支气管内空间。为了最佳地治疗有效并且避免上呼吸道和全身副作用，大多数喷雾颗粒不应具有大于约5μm的mmad。如果气溶胶含有大量mmad大于5μm的粒子，则粒子沉积在上部气道中，从而减少递送到下呼吸道中的炎症和支气管收缩部位的药物的量。如果气溶胶的mmad小于约1μm，则粒子具有保持悬浮在吸入的空气中的趋势，并且随后在呼气期间被呼出。
[0494]
当根据本文的方法配制和递送时，用于雾化的气溶胶制剂将足以治疗肺病毒科感染的治疗有效剂量的式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物递送到肺病毒科感染部位。必须调整所施用的药物量以反映治疗有效剂量的式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物的递送效率。在一个优选的实施方案中，水性气溶胶制剂与雾化喷雾器、射流喷雾器、加压喷雾器、振动多孔板喷雾器或超声喷雾器的组合允许(取决于喷雾器)将约至少20％至约90％、通常约70％的所施用剂量的式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物递送到气道中。在一个优选的实施方案中，递送至少约30％至约50％的活性化合物。更优选地，递送约70％至约90％的活性化合物。
[0495]
在另一个实施方案中，式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物或其药学上可接受的盐作为干燥的可吸入粉末递送。化合物通常作为干粉制剂支气管内地施用，以使用干粉或计量剂量吸入器将化合物的细颗粒有效递送到支气管内空间中。对于通过dpi递送，通过研磨喷雾干燥、临界流体加工或从溶液中沉淀将式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物加工成mmad主要介于约1μm与约5μm之间的颗粒。介质研磨、喷射研磨和喷雾干燥装置和能够产生mmad介于约1μm与约5μm之间的粒度的程序在本领域中是熟知的。在一个实施方案中，在加工成所需大小的颗粒之前，将赋形剂添加到式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物中。在另一个实施方案中，将赋形剂与所需大小的粒子掺合以辅助药物粒子的分散，例如通过使用乳糖作为赋形剂。
[0496]
使用本领域熟知的装置进行粒度确定。例如，anderson多级级联撞击器或其它合适的方法(诸如在《美国药典》第601章中特别引用的那些方法)作为计量剂量和干粉吸入器内的气溶胶的表征装置。
[0497]
在另一个优选的实施方案中，使用装置诸如干粉吸入器或其他干粉分散装置以干粉形式递送式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物。干粉吸入器和装置的非限制性示例包括us5,458,135；us5,740,794；us5775320；us5,785,049；us3,906,950；us4,013,075；us4,069,819；us4,995,385；us5,522,385；us4,668,218；us4,667,668；us4,805,811和us5,388,572中公开的那些。干粉吸入器有两种主要的设计。一种设计
是计量装置，其中用于药物的贮存器置于装置内，并且患者将药物剂量添加到吸入室中。第二种设计是工厂计量装置，其中每个单独剂量已制造在单独的容器中。两种系统均取决于将药物配制到mmad为1μm至约5μm的小粒子中，并且常常牵涉与较大赋形剂粒子(诸如但不限于乳糖)的共同配制。药物粉末被放置在吸入室中(通过装置计量或通过破碎工厂计量剂量)，患者的吸气流加速粉末流出装置并进入口腔。粉末路径的非层流特征导致赋形剂-药物聚集体分解，并且大赋形剂颗粒的质量导致其嵌在喉咙后面，而较小的药物颗粒深深沉积在肺中。在优选的实施方案中，使用如本文所述的任一种类型的干粉吸入器以干粉形式递送式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物或其药学上可接受的盐，其中不包括任何赋形剂的干粉的mmad主要在1μm至约5μm的范围内。
[0498]
在另一个实施方案中，使用计量剂量吸入器以干粉形式递送式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物。计量剂量吸入器和装置的非限制性示例包括在us5,261,538；us5,544,647；us5,622,163；us4,955,371；us3,565,070；us3,361306和us6,116,234中公开的那些。在优选的实施方案中，使用计量剂量吸入器以干粉形式递送式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物或其药学上可接受的盐，其中不包括任何赋形剂的干粉的mmad主要在约1μm-5μm的范围内。
[0499]
适于阴道施用的制剂可以子宫托、棉条、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂的形式提供，除了活性成分外还含有本领域已知的适当载体。
[0500]
适于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，它们可能含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，使制剂与预期接受者的血液等渗；以及可包含悬浮剂和增稠剂的水性和非水性无菌悬浮液。
[0501]
制剂存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并且可储存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅需要在使用前立即加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射液和混悬液由前述类型的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂是含有如上所述的活性成分的日剂量或单位日亚剂量或其适当部分的制剂。
[0502]
应当理解，除了上文特别提及的成分之外，制剂可包括与所讨论的制剂类型相关的本领域常规的其他试剂，例如那些适于口服施用的试剂可包括调味剂。
[0503]
进一步提供了包含至少一种如上定义的活性成分及其兽药载体的兽药组合物。
[0504]
兽药载体是可用于施用组合物的材料，并且可以是固体、液体或气体材料，它们在其他方面是惰性的或兽药领域可接受的并且与活性成分相容。这些兽药组合物可口服、经肠胃外或任何其他所需途径施用。
[0505]
本文的化合物用于提供含有一种或多种化合物作为活性成分的控释药物制剂(“控释制剂”)，其中活性成分的释放受到控制和调节，以允许以较低频率给药或改善给定活性成分的药代动力学或毒性特征。
[0506]
活性成分的有效剂量至少取决于所治疗病状的性质、毒性，化合物是预防性地使用(较低剂量)还是用于对抗活性病毒感染，递送方法和药物制剂，并且将由临床医生使用常规剂量递增研究来确定。该剂量可预期为每天约0.0001至约100mg/kg体重；典型地，为每天约0.01至约10mg/kg体重；更典型地，为每天约0.01至约5mg/kg体重；最典型地，为每天约0.05至约0.5mg/kg体重。例如，体重大约70kg的成年人的日候选剂量范围将为1mg至1000mg，优选地为5mg至500mg，并且可采取单剂量或多剂量的形式。
[0507]
v.施用途径
[0508]
式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物(本文称为活性成分)中的一种或多种通过适合待治疗病症的任何途径施用。合适的途径包括口服、直肠、鼻腔、肺、局部(包括颊和舌下)、阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)等。应当理解，优选的途径可随例如接受者的条件而改变。
[0509]
可以通过适合于待治疗病症的任何途径施用本公开的化合物(在本文中也称为活性成分)。合适的途径包括口服、直肠、鼻腔、局部(包括颊和舌下)、经皮、阴道和肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)等。应当理解，优选的途径可随例如接受者的条件而改变。本文所公开的某些化合物的优点是它们是口服生物可利用的并且可以口服给药。
[0510]
本公开的化合物可根据有效的给药方案对个体施用所需的时间段或持续时间，诸如至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约6个月或至少约12个月或更长。在一种变型中，在个体的生命期间，化合物以每日或间歇的时间表施用。
[0511]
本公开的化合物的剂量或给药频率可根据施用医师的判断在治疗过程中进行调整。
[0512]
可将化合物以有效的量施用于个体(例如，人)。在某些实施方案中，化合物每天施用一次。
[0513]
化合物可通过任何可用的途径和手段施用，诸如通过口服或肠胃外(例如静脉内)施用。化合物的治疗有效量可包括每天约0.00001mg/kg体重至每天约10mg/kg体重，诸如每天约0.0001mg/kg体重至每天约10mg/kg体重，或诸如每天约0.001mg/kg体重至每天约1mg/kg体重，或诸如每天约0.01mg/kg体重至每天约1mg/kg体重，或诸如每天约0.05mg/kg体重至每天约0.5mg/kg体重，或诸如每天约0.3mg至约30mg，或诸如每天约30mg至约300mg。
[0514]
本公开的化合物可以本公开的化合物的任何剂量(例如，1mg至1000mg化合物)与一种或多种附加治疗剂组合。治疗有效量可包括约1mg/剂量至约1000mg/剂量，诸如约50mg/剂量至约500mg/剂量，或诸如约100mg/剂量至约400mg/剂量，或诸如约150mg/剂量至约350mg/剂量，或诸如约200mg/剂量至约300mg/剂量。本公开的化合物的其他治疗有效量为约100mg/剂量、约125mg/剂量、约150mg/剂量、约175mg/剂量、约200mg/剂量、约225mg/剂量、约250mg/剂量、约275mg/剂量、约300mg/剂量、约325mg/剂量、约350mg/剂量、约375mg/剂量、约400mg/剂量、约425mg/剂量、约450mg/剂量、约475mg/剂量或约500mg/剂量。本公开的化合物的其他治疗有效量为约100mg/剂量，或约125mg/剂量、约150mg/剂量、约175mg/剂量、约200mg/剂量、约225mg/剂量、约250mg/剂量、约275mg/剂量、约300mg/剂量、约350mg/剂量、约400mg/剂量、约450mg/剂量或约500mg/剂量。单剂量可每小时、每天或每周施用。例如，单剂量可每1、2、3、4、6、8、12、16小时施用一次，或每24小时施用一次。单剂量也可每1、2、3、4、5、6天施用一次，或每7天施用一次。单剂量也可每1、2、3周施用一次，或每4周施用一次。在某些实施方案中，单剂量可每周施用一次。单剂量也可每月施用一次。
[0515]
本公开的化合物的其他治疗有效量为约20mg/剂、25mg/剂、30mg/剂、35mg/剂、40mg/剂、45mg/剂、50mg/剂、55mg/剂、60mg/剂、65mg/剂、70mg/剂、75mg/剂、80mg/剂、85mg/剂、90mg/剂、95mg/剂、或约100mg/剂。
[0516]
本公开的化合物的剂量的频率将由个体患者的需求决定，并且可以是例如每天一
次或者每天两次或更多次。只要治疗病毒感染需要，化合物的施用就持续进行。例如，可以将化合物施用于被病毒感染的人持续20天至180天的时间段，或例如20天至90天的时间段，或例如30天至60天的时间段。
[0517]
施用可以是间歇性的，在几天或更多天的时间段内患者接受每日剂量的本公开化合物，之后在几天或更多天的时间段内患者不接受每日剂量的化合物。例如，患者可以每隔一天或每周三次接受一定剂量的化合物。再次以举例的方式，患者可以在1至14天的时间段内每天接受一定剂量的化合物，接着在7至21天的时间段内，患者不接受一定剂量的化合物，接着在随后的时间段(例如，1至14天)内，患者再次接受一定日剂量的化合物。根据临床需要，可重复施用化合物、之后不施用化合物的交替时间段来治疗患者。
[0518]
在一个实施方案中，提供了药物组合物，这些药物组合物包含与一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种、一种或两种、一种至三种或一种至四种)附加治疗剂组合的本公开的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂。
[0519]
在一个实施方案中，提供了试剂盒，这些试剂盒包括与一种或多种(例如，一种、两种、三种、四种、一种或两种、一种至三种或一种至四种)附加治疗剂组合的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0520]
在某些实施方案中，将本公开的化合物或其药学上可接受的盐与一种、两种、三种、四种或更多种附加治疗剂组合。在某些实施方案中，将本公开的化合物或其药学上可接受的盐与两种附加治疗剂组合。在其他实施方案中，将本公开的化合物或其药学上可接受的盐与三种附加治疗剂组合。在另外的实施方案中，将本公开的化合物或其药学上可接受的盐与四种附加治疗剂组合。该一种、两种、三种、四种或更多种附加治疗剂可以是选自相同类别的治疗剂的不同治疗剂，并且/或者它们可选自不同类别的治疗剂。
[0521]
在某些实施方案中，当本公开的化合物与如本文所述的一种或多种附加治疗剂组合时，组合物的组分作为同时或依序方案施用。当顺序施用时，该组合可以两次或更多次施用的方式施用。
[0522]
在某些实施方案中，将本公开的化合物与一种或多种附加治疗剂以单一剂型组合以用于同时施用于患者，例如作为固体剂型用于口服施用。
[0523]
在某些实施方案中，将本公开的化合物与一种或多种附加治疗剂一起共同施用。
[0524]
为了延长本公开的化合物的作用，通常期望减慢化合物从皮下或肌内注射的吸收。这可以通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，进而又可取决于晶体大小和结晶形式。另选地，通过将化合物溶解或悬浮在油媒介物中实现以肠胃外方式施用的化合物形式的延迟吸收。通过在可生物降解的聚合物(诸如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成化合物的微囊基质来制备可注射长效形式。根据化合物与聚合物的比率以及所采用的特定聚合物的性质，可控制化合物释放速率。其它可生物降解的聚合物的示例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。也通过将化合物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备长效可注射制剂。
[0525]
vi.联合疗法
[0526]
本文提供的式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物和组合物还与其他活性治疗剂组合用于治疗病毒感染，诸如肺病毒科、小核糖核酸病毒科、黄病毒科或丝状病毒科病毒感染。
[0527]
用于治疗肺病毒科的联合疗法
[0528]
本文提供的化合物和组合物还与其他活性治疗剂联合使用。为了治疗肺病毒科病毒感染，优选地，其它活性治疗剂针对肺病毒科病毒感染，特别是呼吸道合胞病毒感染和/或偏肺病毒感染有活性。对rsv有活性的这些其它活性治疗剂的非限制性示例是利巴韦林、帕利珠单抗、莫他珠单抗(motavizumab)、rsv-igivmedi-557、a-60444(也称为rsv604)、mdt-637、bms-433771、aln-rsv0、alx-0171及它们的混合物。对呼吸道合胞病毒感染有活性的其它活性治疗剂的其它非限制性示例包括呼吸道合胞病毒蛋白f抑制剂，诸如ak-0529；rv-521、alx-0171、jnj-53718678、bta-585和普沙托韦(presatovir)；rna聚合酶抑制剂，诸如卢米西他滨(lumicitabine)和als-8112；抗rsv g蛋白抗体，诸如抗g蛋白mab；病毒复制抑制剂，诸如硝唑尼特(nitazoxanide)。
[0529]
在一些实施方案中，其它活性治疗剂可以是用于治疗或防止rsv的疫苗，包括但不限于mva-bn rsv、rsv-f、medi-8897、jnj-64400141、dpx-rsv、syngem、gsk-3389245a、gsk-300389-1a、rsv-mediδm2-2疫苗、vrc-rsvrgp084-00vp、ad35-rsv-fa2、ad26-rsv-fa2和rsv融合糖蛋白亚基疫苗。
[0530]
对偏肺病毒感染有活性的其它活性治疗剂的非限制性示例包括唾液酸酶调节剂，诸如das-181；rna聚合酶抑制剂，诸如als-8112；和用于治疗偏肺病毒感染的抗体，诸如ev-046113。
[0531]
在一些实施方案中，其它活性治疗剂可以是用于治疗或防止偏肺病毒感染的疫苗，包括但不限于mrna-1653和rhmpv-pa疫苗。
[0532]
用于治疗小核糖核酸病毒科的联合疗法
[0533]
本文提供的化合物和组合物还与其他活性治疗剂联合使用。为了治疗小核糖核酸病毒科病毒感染，优选地，其它活性治疗剂针对小核糖核酸病毒科病毒感染，特别是肠病毒感染有活性。这些其他活性治疗剂的非限制性示例是衣壳结合抑制剂，诸如普来可那利、bta-798(伐喷达韦(vapendavir))和wu等人(us 7,078,403)和watson(us 7,166,604)公开的其它化合物；融合唾液酸酶蛋白，诸如das-181；衣壳蛋白vp1抑制剂，诸如vvx-003和azn-001；病毒蛋白酶抑制剂，诸如cw-33；磷脂酰肌醇4激酶β抑制剂，诸如gsk-480和gsk-533；抗ev71抗体。
[0534]
在一些实施方案中，其它活性治疗剂可以是用于治疗或防止小核糖核酸病毒科病毒感染的疫苗，包括但不限于ev71疫苗、tak-021和ev-d68基于腺载体的疫苗。
[0535]
呼吸道感染的联合疗法
[0536]
肺病毒科和小核糖核酸病毒科病毒的许多感染是呼吸道感染。因此，用于治疗呼吸道症状和感染后遗症的附加活性治疗剂可与本文提供的化合物联合使用。附加药剂优选地口服或通过直接吸入施用。例如，与本文提供的化合物组合用于治疗病毒性呼吸道感染的其他优选的附加治疗剂包括但不限于支气管扩张剂和皮质类固醇。
[0537]
糖皮质激素
[0538]
1950年首次作为哮喘疗法介绍的糖皮质激素(carryer,journal of allergy,21,282-287,1950)仍然是针对这种疾病最有效且持续有效的疗法，但它们的作用机制尚未完全理解(morris,j.allergy clin.immunol.,75(1pt)1-13,1985)。不幸的是，口服糖皮质激素疗法与严重的不良副作用相关，诸如躯干性肥胖、高血压、青光眼、葡萄糖耐受不良、白内
障形成加速、骨矿物质损失和心理效应，所有这些副作用限制它们用作长期治疗剂(goodman和gilman，第10版，2001)。解决全身性副作用的方案是将类固醇药物直接递送到炎症部位。已经开发出吸入型皮质类固醇(ics)以减轻口服类固醇的严重不良作用。可与本文提供的化合物联合使用的皮质类固醇的非限制性示例是地塞米松、地塞米松磷酸钠、氟米龙、醋酸氟米龙、氯替泼诺、依碳酸氯替泼诺、氢化可的松、泼尼松龙、氟氢可的松、曲安西龙、曲安奈德、倍他米松、二丙酸倍氯米松、甲泼尼龙、氟轻松、醋酸氟轻松、氟尼缩松、氟可丁-21-丁酸酯、氟米松、新戊酸氟米松、布地奈德、丙酸卤倍他索、糠酸莫米松、氟替卡松、azd-7594、环索奈德；或它们药学上可接受的盐。
[0539]
抗炎剂
[0540]
通过抗炎级联机制起作用的其他抗炎剂也可用作与本文提供的化合物组合用于治疗病毒性呼吸道感染的附加治疗剂。应用“抗炎信号转导调节剂”(在本文中称为aistm)如磷酸二酯酶抑制剂(例如pde-4、pde-5或pde-7特异性)、转录因子抑制剂(例如通过ikk抑制阻断nfκb)或激酶抑制剂(例如阻断p38 map、jnk、pi3k、egfr或syk)是切断炎症的一种合乎逻辑的方法，因为这些小分子靶向有限数量的常见细胞内通路(这些信号转导通路是抗炎治疗干预的关键点)(参见p.j.barnes,2006的综述)。这些非限制性的附加治疗剂包括：5-(2,4-二氟-苯氧基)-1-异丁基-1h-吲唑-6-羧酸(2-二甲基氨基-乙基)-酰胺(p38 map激酶抑制剂arry-797)；3-环丙基甲氧基-n-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-4-二氟甲氧基-苯甲酰胺(pde-4抑制剂罗氟司特(roflumilast))；4-[2-(3-环戊氧基-4-甲氧基苯基)-2-苯基-乙基]-吡啶(pde-4抑制剂cdp-840)；n-(3,5-二氯-4-吡啶基)-4-(二氟甲氧基)-8-[(甲基磺酰基)氨基]-1-二苯并呋喃甲酰胺(pde-4抑制剂欧果米司特(oglemilast))；n-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟苄基)-5-羟基-1h-吲哚-3-基]-2-氧代-乙酰胺(pde-4抑制剂awd 12-281)；8-甲氧基-2-三氟甲基-喹啉-5-羧酸(3,5-二氯-1-氧基-吡啶-4-基)-酰胺(pde-4抑制剂sch 351591)；4-[5-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亚磺酰基-苯基)-1h-咪唑-4-基]-吡啶(p38抑制剂sb-203850)；4-[4-(4-氟-苯基)-1-(3-苯基-丙基)-5-吡啶-4-基-1h-咪唑-2-基]-丁-3-炔-1-醇(p38抑制剂rwj-67657)；4-氰基-4-(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-环己烷羧酸2-二乙基氨基乙酯(西洛司特(cilomilast)，pde-4抑制剂的2-二乙基-乙酯前药)；(3-氯-4-氟苯基)-[7-甲氧基-6-(3-吗啉-4-基-丙氧基)-喹唑啉-4-基]-胺(吉非替尼(gefitinib)，egfr抑制剂)；和4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-n-[4-甲基-3-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-苯基]-苯甲酰胺(伊马替尼(imatinib)，egfr抑制剂)。
[0541]
β2-肾上腺素受体激动剂支气管扩张剂
[0542]
包含吸入的β2-肾上腺素受体激动剂支气管扩张剂诸如福莫特罗、沙丁胺醇或沙美特罗与本文提供的化合物的组合也是可用于治疗呼吸道病毒感染的合适但非限制性组合。
[0543]
吸入型β2-肾上腺素受体激动剂支气管扩张剂(诸如福莫特罗或沙美特罗)与ics的组合也用于治疗支气管收缩和炎症(分别为和)。包含这些ics和β2-肾上腺素受体激动剂组合以及本文提供的化合物的组合也是可用于治疗呼吸道病毒感染的合适但非限制性组合。
[0544]
β2肾上腺素受体激动剂的其它示例是贝多拉君(bedoradrine)、维兰特罗(vilanterol)、茚达特罗(indacaterol)、奥达特罗(olodaterol)、妥洛特罗
(tulobuterol)、福莫特罗、阿贝特罗、沙美特罗、阿福特罗(arformoterol)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)、非诺特罗(fenoterol)和td-5471。
[0545]
抗胆碱能药
[0546]
对于肺支气管收缩的治疗或预防，抗胆碱能剂具有潜在用途，因此可用作与本文提供的化合物组合用于治疗病毒性呼吸道感染的附加治疗剂。这些抗胆碱能药包括但不限于：已经在人类中对于copd胆碱能基调的控制显示出治疗功效的毒蕈碱受体(特别是m3亚型)的拮抗剂(witek，1999)；1-{4羟基1-[3,3,3-三-(4-氟-苯基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-吡咯烷-2-羧酸(1-甲基-哌啶-4-基甲基)-酰胺；3-[3-(2-二乙基氨基-乙酰氧基)-2-苯基-丙酰氧基]-8-异丙基-8-甲基-8-氮鎓-双环[3.2.1]辛烷(异丙托铵-n,n-二乙基甘氨酸盐)；1-环己基-3,4-二氢-1h-异喹啉-2-羧酸-1-氮杂-双环[2.2.2]辛-3-基酯(索利那新(solifenacin))；2-羟甲基-4-甲基亚磺酰基-2-苯基-丁酸1-氮杂-双环[2.2.2]辛-3-基酯(瑞伐托酯(revatropate))；2-{1-[2-(2,3-二氢-苯并呋喃-5-基)-乙基]-吡咯烷-3-基}-2,2-二苯基-乙酰胺(达非那新(darifenacin))；4-氮杂环庚烷-1-基-2,2-二苯基-丁酰胺(布卓(buzepide))；7-[3-(2-二乙基氨基-乙酰氧基)-2-苯基-丙酰氧基]-9-乙基-9-甲基-3-氧杂-9-氮鎓-三环[3.3.1.02,4]壬烷(奥托溴铵-n,n-二乙基甘氨酸盐)；7-[2-(2-二乙基氨基-乙酰氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙酰氧基]-9,9-二甲基-3-氧杂-9-氮鎓-三环[3.3.1.02,4]壬烷(噻托溴铵-n,n-二乙基甘氨酸盐)；二甲基氨基-乙酸2-(3-二异丙基氨基-1-苯基-丙基)-4-甲基-苯基酯(托特罗定-n,n-二甲基甘氨酸盐)；3-[4,4-双-(4-氟-苯基)-2-氧代-咪唑啉-1-基]-1-甲基-1-(2-氧代-2-吡啶-2-基乙基)-吡咯烷鎓；1-[1-(3-氟-苄基)-哌啶-4-基]-4,4-双-(4-氟-苯基)-咪唑烷-2-酮；1-环辛基-3-(3甲氧基1-氮杂-双环[2.2.2]辛-3-基)-1-苯基-丙-2-炔-1-醇；3-[2-(2-二乙基氨基-乙酰氧基)-2,2-二-噻吩-2-基-乙酰氧基]-1-(3-苯氧基-丙基)-1-氮鎓-双环[2.2.2]辛烷(阿地溴铵-n,n-二乙基甘氨酸盐)；或(2-二乙基氨基-乙酰氧基)-二-噻吩-2-基-乙酸1-甲基-1-(2-苯氧基-乙基)-哌啶-4-基酯；瑞非那新(revefenacin)、甘罗溴铵(glycopyrronium bromide)、乌美溴铵(umeclidinium bromide)、噻托溴铵(tiotropium bromide)、阿地溴铵(aclidinium bromide)、苯环喹溴铵(bencycloquidium bromide)。
[0547]
粘液溶解剂
[0548]
本文提供的化合物和本文提供的组合物还可与黏液溶解剂组合以治疗感染和呼吸道感染的症状。粘液溶解剂的非限制性示例为氨溴索(ambroxol)。类似地，式(i)、(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物可与祛痰剂组合以治疗感染和呼吸道感染的症状。祛痰剂的非限制性示例是愈创木酚甘油醚(guaifenesin)。
[0549]
雾化高渗盐水用于改善肺病患者小气道的立即和长期清除(kuzik,j.pediatrics 2007,266)。因此，本文提供的化合物还可与雾化高渗盐水组合，特别是当肺病毒科病毒感染并发细支气管炎时。式(i)或式(ii)的化合物与高渗盐水的组合还可包含上述任何附加药剂。在一个实施方案中，使用约3％的雾化高渗盐水。
[0550]
用于治疗copd的联合疗法
[0551]
本文提供的化合物和组合物还与其他活性治疗剂联合使用。为了治疗copd的呼吸恶化，其它活性治疗剂包括针对copd的其它活性剂。这些其它活性治疗剂的非限制性示例包括抗il5抗体，诸如贝那利珠单抗(benralizumab)、美泊利单抗(mepolizumab)；二肽基肽
酶i(dpp1)抑制剂，诸如azd-7986(ins-1007)；dna促旋酶抑制剂/拓扑异构酶iv抑制剂，诸如盐酸环丙沙星(ciprofloxacin hydrochloride)；mdr相关蛋白4/磷酸二酯酶(pde)3和4抑制剂，诸如rpl-554；cftr刺激剂，诸如依伐卡托(ivacaftor)、qbw-251；mmp-9/mmp-12抑制剂，诸如rbx-10017609；腺苷a1受体拮抗剂，诸如pbf-680；gata 3转录因子抑制剂，诸如sb-010；毒蕈碱受体调节剂/烟碱型乙酰胆碱受体激动剂，诸如asm-024；marcks蛋白抑制剂，诸如bio-11006；试剂盒酪氨酸激酶/pdgf抑制剂，诸如马赛替尼(masitinib)；磷酸二酯酶(pde)4抑制剂，诸如罗氟司特、chf-6001；磷酸肌醇-3激酶δ抑制剂，诸如奈米利塞(nemiralisib)；5-脂氧合酶抑制剂，诸如ta-270；毒蕈碱受体拮抗剂/β2肾上腺素受体激动剂，诸如琥珀酸百芬特罗、azd-887、异丙托溴铵；trn-157；弹性蛋白酶抑制剂，诸如厄多司坦(erdosteine)；金属蛋白酶-12抑制剂，诸如fp-025；白介素18配体抑制剂，诸如tadekinig alfa；骨骼肌肌钙蛋白活化剂，诸如ck-2127107；p38 map激酶抑制剂，诸如阿库马莫德(acumapimod)；il-17受体调节剂，诸如cnto-6785；cxcr2趋化因子拮抗剂，诸如丹尼新(danirixin)；白细胞弹性蛋白酶抑制剂，诸如pol-6014；环氧化物水解酶抑制剂，诸如gsk-2256294；hne抑制剂，诸如chf-6333；vip激动剂，诸如阿肽地尔(aviptadil)；磷酸肌醇-3激酶δ/γ抑制剂，诸如rv-1729；补体c3抑制剂，诸如apl-1；和g蛋白偶联受体-44拮抗剂，诸如am-211。
[0552]
活性治疗剂的其它非限制性示例还包括布地奈德(budesonide)、adipocell、一氧化氮、pur-1800、ylp-001、lt-4001、阿奇霉素(azithromycin)、gamunex、qbkpn、丙酮酸钠、mul-1867、甘露醇、mv-130、medi-3506、bi-443651、vr-096、opk-0018、tev-48107、多索茶碱(doxofylline)、tev-46017、oligog-copd-5/20、zp-051、赖氨酸乙酰水杨酸盐。
[0553]
在一些实施方案中，其它活性治疗剂可以是针对copd有活性的疫苗，包括但不限于mv-130和gsk-2838497a。
[0554]
用于治疗登革热的联合疗法
[0555]
本文提供的化合物和组合物还与其他活性治疗剂联合使用。为了治疗黄病毒科病毒感染，优选地，其它活性治疗剂针对黄病毒科病毒感染，特别是登革热感染有活性。这些其它活性治疗剂的非限制性示例是宿主细胞因子调节剂，诸如gbv-006；芬维a胺(fenretinide)abx-220、brm-211；α-葡糖苷酶1抑制剂，诸如西戈斯韦(celgosivir)；血小板活化因子受体(pafr)拮抗剂，诸如莫地帕泛(modipafant)；钙粘蛋白-5/因子ia调节剂，诸如fx-06；ns4b抑制剂，诸如jnj-8359；病毒rna剪接调节剂，诸如abx-202；ns5聚合酶抑制剂；ns3蛋白酶抑制剂；和tlr调节剂。
[0556]
在一些实施方案中，其它活性治疗剂可以是用于治疗或防止登革热的疫苗，包括但不限于tetravax-dv、dpiv-001、tak-003、活的减毒登革热疫苗、四价登革热疫苗、四价dna疫苗、rden2delta30-7169；和denv-1piv。
[0557]
用于治疗埃博拉的联合疗法
[0558]
本文提供的化合物和组合物还与其他活性治疗剂联合使用。为了治疗丝状毒科病毒感染，优选地，其它活性治疗剂针对丝状病毒科病毒感染，特别是马尔堡病毒(marburg virus)、埃博拉病毒和奎瓦病毒(cueva virus)感染有活性。这些其它活性治疗剂的非限制
性示例是：利巴韦林、帕利珠单抗、莫他珠单抗、rsv-igivmedi-557、a-60444、mdt-637、bms-433771、胺碘酮(amiodarone)、决奈达隆(dronedarone)、维拉帕米(verapamil)、埃博拉恢复期血浆(ecp)、tkm-100201、bcx4430((2s,3s,4r,5r)-2-(4-氨基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)-5-(羟甲基)吡咯烷-3,4-二醇)、tkm-埃博拉、t-705单磷酸、t-705二磷酸、t-705三磷酸、fgi-106(1-n,7-n-双[3-(二甲基氨基)丙基]-3,9-二甲基喹啉并[8,7-h]喹诺酮-1,7-二胺)、rnapc2、os-2966、布罗福韦(brincidofovir)、瑞德西韦(remdesivir)；rna聚合酶抑制剂，诸如加利司韦(galidesivir)、法匹拉韦(favipiravir)(也称为t-705或avigan)、jk-05；宿主细胞因子调节剂，诸如gmv-006；钙粘蛋白-5/因子ia调节剂，诸如fx-06；和用于治疗埃博拉的抗体，诸如regn-3470-3471-3479和zmapp。
[0559]
对埃博拉有活性的其它非限制性活性治疗剂包括α-葡糖苷酶1抑制剂、组织蛋白酶b抑制剂、cd29拮抗剂、树枝状icam-3吞噬非整联蛋白1抑制剂、雌激素受体拮抗剂、因子vii拮抗剂hla ii类抗原调节剂、宿主细胞因子调节剂、干扰素α配体、中性α葡糖苷酶ab抑制剂、niemann-pick c1蛋白抑制剂、核蛋白抑制剂、聚合酶辅因子vp35抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、组织因子抑制剂、tlr-3激动剂、病毒包膜蛋白抑制剂和埃博拉病毒进入抑制剂(npc1抑制剂)。
[0560]
在一些实施方案中，其它活性治疗剂可以是用于治疗或防止埃博拉的疫苗，包括但不限于vrc-eboadc076-00-vp、基于腺病毒的埃博拉疫苗、rvsv-ebov、rvsvn4ct1-ebovgp,mva-bn filo+ad26-zebov方案、ino-4212、vrc-ebodna023-00-vp、vrc-eboadc069-00-vp、gamevac-combi疫苗、src vb载体、hpiv3/ebogp疫苗、mva-eboz、埃博拉重组糖蛋白疫苗、基于vaxart腺病毒载体5的埃博拉疫苗、filovax疫苗、govx-e301和govx-e302。
[0561]
本文提供的化合物和组合物还可与氨基磷酸酯吗啉代寡聚体(pmo)(是被设计成通过与特定rna序列形成碱基对双链体来干扰翻译过程的合成反义寡核苷酸类似物)联合使用。pmo的示例包括但不限于avi-7287、avi-7288、avi-7537、avi-7539、avi-6002和avi-6003。
[0562]
本文提供的化合物和组合物还旨在与为患有丝状病毒科病毒感染的患者提供的一般护理一起使用，包括肠胃外液(包括葡萄糖盐水和林格氏乳酸酯)和营养物、抗生素(包括甲硝唑和头孢菌素抗生素，诸如头孢曲松和头孢呋辛)和/或抗真菌预防药、发热和疼痛药物、止吐药(诸如甲氧氯普胺)和/或止泻药、维生素和矿物质补充剂(包括维生素k和硫酸锌)、抗炎剂(诸如布洛芬)、疼痛药物和用于患者群体中其他常见疾病的药物，诸如抗疟疾剂(包括蒿甲醚和青蒿酯-本芴醇联合治疗)、伤寒疫苗(包括喹诺酮类抗生素诸如环丙沙星，大环内酯类抗生素诸如阿奇霉素，头孢菌素类抗生素诸如头孢曲松，或氨基青霉素诸如氨苄青霉素)或志贺氏菌病疫苗。
[0563]
vii.治疗病毒感染的方法
[0564]
本公开提供了使用式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物来治疗多种疾病(诸如呼吸道合胞病毒(rsv)、埃博拉、寨卡、西尼罗、登革热和hcv)的方法。
[0565]
副粘病毒科
[0566]
在一些实施方案中，本公开提供了用于治疗副粘病毒科感染的方法，该方法包括向感染副粘病毒科病毒的个体(例如人)施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可
接受的盐。副粘病毒科病毒包括但不限于呼吸道合胞病毒(rsv)。
[0567]
肺病毒科
[0568]
在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的人的肺病毒科病毒感染的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。肺病毒科病毒包括但不限于呼吸道合胞病毒和人偏肺病毒。在一些实施方案中，肺病毒科病毒感染是呼吸道合胞病毒感染。在一些实施方案中，肺病毒科病毒感染是人偏肺病毒感染。
[0569]
在一些实施方案中，本公开提供了一种制造用于治疗有需要的人的肺病毒科病毒感染的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人的肺病毒科病毒感染的药物中的用途。在一些实施方案中，肺病毒科病毒感染是呼吸道合胞病毒感染。在一些实施方案中，肺病毒科病毒感染是人偏肺病毒感染。
[0570]
在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的人的肺病毒科病毒感染。在一些实施方案中，肺病毒科病毒感染是呼吸道合胞病毒感染。在一些实施方案中，肺病毒科病毒感染是人偏肺病毒感染。
[0571]
在某些实施方案中，本公开提供了用于治疗rsv感染的方法，该方法包括向感染呼吸道合胞病毒的个体(例如人)施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。典型地，个体患有慢性呼吸道合胞病毒感染，但治疗急性感染rsv的人也在本公开的范围内。
[0572]
在某些实施方案中，提供了一种抑制rsv复制的方法，该方法包括向个体(例如人)施用本公开的化合物或其药学上可接受的盐。
[0573]
在某些实施方案中，本公开提供了一种用于降低与rsv感染相关的病毒载量的方法，其中该方法包括向感染rsv的个体(例如人)施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其中治疗有效量足以降低个体的rsv病毒载量。
[0574]
如本文更充分地描述，可以将本公开的化合物与一种或多种附加治疗剂一起施用于感染rsv的个体(例如人)。可以将附加治疗剂与本公开的化合物同时或者在施用本公开的化合物之前或之后施用于感染个体(例如人)。
[0575]
在某些实施方案中，提供了用于治疗或预防rsv感染的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，提供了制备用于治疗或预防rsv感染的药物的本公开的化合物(例如式(i)的化合物)或其药学上可接受的盐。
[0576]
如本文更充分地描述，可以将本公开的化合物与一种或多种附加治疗剂一起施用于感染rsv的个体(例如人)。此外，在某些实施方案中，当用于治疗或预防rsv时，可将本公开的化合物与一种或多种(例如一种、两种、三种、四种或更多种)选自由以下项组成的组的附加治疗剂一起施用：rsv组合药物、rsv疫苗、rsv dna聚合酶抑制剂、免疫调节剂、toll样受体(tlr)调节剂、干扰素α受体配体、透明质酸酶抑制剂、呼吸道合胞表面抗原抑制剂、细胞毒性t-淋巴细胞相关蛋白4(ipi4)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、rsv病毒进入抑制剂、靶向病毒mrna的反义寡核苷酸、短干扰rna(sirna)和ddrnai内切核酸酶调节剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、rsv e抗原抑制剂、共价闭环dna(cccdna)抑制剂、法尼醇x受体激动剂、rsv抗体、ccr2趋化因子拮抗剂、胸腺素激动剂、细胞因子、核蛋白调节剂、视黄酸诱导基因1刺激剂、nod2刺激剂、磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(ido)途径抑制剂、
pd-1抑制剂、pd-l1抑制剂、重组胸腺素α-1、布鲁顿酪氨酸激酶(btk)抑制剂、kdm抑制剂、rsv复制抑制剂、精氨酸酶抑制剂和其他rsv药物。
[0577]
小核糖核酸病毒科
[0578]
在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的人的小核糖核酸病毒科病毒感染的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。小核糖核酸病毒科病毒是引起一类异质感染的肠病毒，包括疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎、普通感冒样综合征(人鼻病毒感染)、非麻痹性脊髓炎样综合征、流行性胸痛(通常在流行病中出现的急性、发热、感染性疾病)、手足口综合征、小儿和成人胰腺炎和重症心肌炎。在一些实施方案中，小核糖核酸病毒科病毒感染是人鼻病毒感染。
[0579]
在一些实施方案中，本公开提供了一种制造用于治疗有需要的人的小核糖核酸病毒科病毒感染的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人的小核糖核酸病毒科病毒感染的药物中的用途。在一些实施方案中，小核糖核酸病毒科病毒感染是人鼻病毒感染。
[0580]
在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的人的小核糖核酸病毒科病毒感染。在一些实施方案中，小核糖核酸病毒科病毒感染是人鼻病毒感染。
[0581]
黄病毒科
[0582]
在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的人的黄病毒科病毒感染的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。代表性的黄病毒科病毒包括但不限于登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、寨卡病毒、日本脑炎病毒和丙型肝炎病毒(hcv)。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是登革病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是黄热病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是西尼罗病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是寨卡病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是日本脑炎病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是丙型肝炎病毒感染。
[0583]
在一些实施方案中，本公开提供了一种制造用于治疗有需要的人的黄病毒科病毒感染的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人的黄病毒科病毒感染的药物中的用途。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是登革病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是黄热病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是西尼罗病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是寨卡病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是丙型肝炎病毒感染。
[0584]
在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的人的黄病毒科病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是登革病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是黄热病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是西尼罗病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是寨卡病毒感染。在一些实施方案中，黄病毒科病毒感染是丙型肝炎病毒感染。
[0585]
丝状病毒科
[0586]
在一些实施方案中，本公开提供了一种治疗有需要的人的丝状病毒科病毒感染的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐。代表性的丝状病毒科病毒包括但不限于埃博拉病毒和马尔堡病毒。在一些实施方案中，丝状病毒科病毒感染是埃博拉病毒感染。
[0587]
在一些实施方案中，本公开提供了一种制造用于治疗有需要的人的丝状病毒科病毒感染的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗人的丝状病毒科病毒感染的药物中的用途。在一些实施方案中，丝状病毒科病毒感染是埃博拉病毒感染。
[0588]
在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的人的丝状病毒科病毒感染。在一些实施方案中，丝状病毒科病毒感染是埃博拉病毒感染。
[0589]
viii.治疗或预防病毒感染引起的呼吸道病状的恶化的方法
[0590]
式(ia)、(ib)、(ic)、(id)、(ie)、(if)、(ig)、(ih)或(ii)的化合物还可以用于治疗或预防有需要的人的由病毒感染引起的呼吸病症恶化。
[0591]
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗或预防有需要的人的由病毒感染引起的呼吸病症恶化的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其中该呼吸病症是慢性阻塞性肺病。在一些实施方案中，病毒感染由呼吸道合胞病毒、鼻病毒或偏肺病毒引起。
[0592]
在一些实施方案中，本公开提供了一种用于治疗或预防有需要的人的病毒感染引起的呼吸道病状的恶化的方法，该方法包括向人施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其中该呼吸道病状是哮喘。在一些实施方案中，病毒感染由呼吸道合胞病毒、鼻病毒、肠病毒或偏肺病毒引起。
[0593]
在一些实施方案中，本公开提供了一种制备用于治疗或预防有需要的人的由病毒感染引起的呼吸病症恶化的药物的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其中该呼吸病症是慢性阻塞性肺病。在一些实施方案中，病毒感染由呼吸道合胞病毒、鼻病毒或偏肺病毒引起。
[0594]
在一些实施方案中，本公开提供了一种制造用于治疗或预防有需要的人的病毒感染引起的呼吸道病状的恶化的方法，其特征在于，使用本公开的化合物或其药学上可接受的盐，其中该呼吸道病状是哮喘。在一些实施方案中，病毒感染由呼吸道合胞病毒、鼻病毒、肠病毒或偏肺病毒引起。
[0595]
在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或预防人的由病毒感染引起的呼吸病症恶化的药物中的用途，其中该呼吸病症是慢性阻塞性肺病。在一些实施方案中，病毒感染由呼吸道合胞病毒、鼻病毒或偏肺病毒引起。
[0596]
在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐用于制造用于治疗或预防人中病毒感染引起的呼吸道病状的恶化的用途，其中该呼吸道病状是哮喘。在一些实施方案中，病毒感染由呼吸道合胞病毒、鼻病毒、肠病毒或偏肺病毒引起。
[0597]
在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，用于
治疗或预防有需要的人中病毒感染引起的呼吸道病状的恶化，其中该呼吸道病状是慢性阻塞性肺病。在一些实施方案中，病毒感染由呼吸道合胞病毒、鼻病毒或偏肺病毒引起。
[0598]
在一些实施方案中，本公开提供了本公开的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗或预防有需要的人中病毒感染引起的呼吸道病状的恶化，其中该呼吸道病状是哮喘。在一些实施方案中，病毒感染由呼吸道合胞病毒、鼻病毒、肠病毒或偏肺病毒引起。
[0599]
ix.实施例
[0600]
缩写某些缩写和首字母缩略词用于描述实验细节。尽管本领域技术人员将理解这些中的大多数，但是表2包含许多这些缩写和首字母缩略词的列表。
[0601]
表2.缩写和缩略语列表
[0602]
[0603][0604]
可以对化合物进行制备hplc(phenomenex gemini 10u c18axia 250
×
21.2mm柱，30-70％乙腈/含0.1％tfa的水的梯度)。在该制备hplc过程之后，以tfa盐的形式
获得一些化合物。
[0605]
a.中间体
[0606]
中间体1.(2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,4-二羟基-2-(羟甲基)四氢呋喃-2-甲腈
[0607][0608]
可根据wo2015/069939制备产物。例如，wo2015/069939的第43-54页提供了用于制备在wo2015/069939中标识为化合物1的化合物的方法。
[0609]
中间体2.(7-((3as,4s,6r,6as)-6-氰基-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯
[0610][0611]
将含来自wo2015/069939的化合物14j(21.79g，39.93mmol)的thf(400ml)在冰浴中冷却。一次性添加1.0m tbaf的thf溶液(50.0ml，50.0mmol)。使混合物达到环境温度并搅拌约30分钟。通过lcms确定反应完成。用水淬灭反应混合物并减压去除有机物。将粗产物在etoac和水之间分配。分离各层并用etoac洗涤水层。合并有机物并且经硫酸钠干燥。滤出固体并减压去除溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法330g柱30-100％etoac的己烷溶液纯化，得到产物。ms m/z＝431.74[m+1]。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.53(s,1h),8.25(s,1h),7.21(s,1h),7.03(d,j＝4.6hz,1h),5.77(t,j＝6.1hz,1h),5.59(d,j＝4.0hz,1h),5.27(dd,j＝6.7,4.1hz,1h),4.94(d,j＝6.7hz,1h),3.66(dd,j＝6.1,2.4hz,2h),1.62(s,3h),1.50(s,9h),1.33(s,3h)。
[0612]
中间体3.(3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-甲腈
[0613][0614]
可根据wo2015/069939制备产物。例如，wo2015/069939的第127-138页提供了用于制备该化合物(在wo2015/069939中标识为化合物14k)的方法。
[0615]
中间体4.(3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-甲腈
[0616][0617]
取中间体3(8.41g，18.87mmol)放入thf(100ml)中。在环境温度下一次性添加1.0m tbaf的thf溶液(28.31ml，28.31mmol)。允许在环境温度下搅拌10分钟。通过lcms确定反应完成。用水淬灭反应混合物并减压去除有机物。将粗产物在etoac和水之间分配。分离各层并用etoac洗涤水层。合并有机物并且经硫酸钠干燥。滤出固体并减压去除溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法120g柱0-10％ch3oh的ch2cl2溶液纯化，得到产物。lc/ms:tr＝0.76分钟，ms m/z＝332.14[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.87-7.80(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.82(d,j＝4.5hz,1h),5.74(t,j＝5.8hz,1h),5.52(d,j＝4.2hz,1h),5.24(dd,j＝6.8,4.2hz,1h),4.92(d,j＝6.8hz,1h),3.65(dd,j＝6.1,1.7hz,2h),1.61(s,3h),1.33(s,3h)。
[0618]
中间体5.(2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-甲腈
[0619][0620]
将中间体1(2g，6.18mmol)溶解于50ml dmf中，向该溶液中添加叔丁基氯二甲基硅烷(1g，7mmol)和咪唑(1.26g，19mmol)。将所得混合物在室温处搅拌2小时，并且将反应用
etoac稀释，用nh4cl溶液洗涤，将有机溶剂蒸发，并且将残余物通过硅胶柱色谱法(用0-100％etoac的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝406.36[m+1]，tr＝1.45min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.25min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[0621]
中间体6.(2r,3s,4s,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-2-氰基四氢呋喃并-3,4-二基双(2-甲基丙酸酯)
[0622][0623]
将中间体5(1.8g，4.44mmol)溶解于15ml thf中，向该溶液中添加异丁酸酐(1.54g，9.8mmol)和dmap(179mg，1.45mmol)。将所得混合物在室温处搅拌5分钟，并且将反应用meoh淬灭，然后用etoac稀释，用盐水洗涤，将有机溶剂经na2so4干燥并在真空下蒸发。将残余物通过硅胶柱色谱法(用0-100％etoac的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝546.16[m+1]，tr＝1.92min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.88min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[0624]
中间体7.(2r,3s,4s,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二基双(2-甲基丙酸酯)
[0625][0626]
在100ml塑料瓶中将中间体6(3.2g，5.86mmol)溶解于25ml thf中，向该溶液中添加hf-吡啶(10g，0.35mmol)。将所得混合物在室温处搅拌3小时，并且将反应用nahco3淬灭，然后用etoac稀释，用盐水洗涤，将有机溶剂经na2so4干燥并在真空下蒸发。将残余物通过硅
胶柱色谱法(用0-100％etoac的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.90(s,1h),6.83
–
6.74(m,2h),6.33(s,2h),5.84
–
5.74(m,2h),5.62(d,j＝5.4hz,1h),4.31(dd,j＝8.4,5.2hz,1h),3.94(dd,j＝12.2,5.0hz,1h),3.87(dd,j＝12.2,8.4hz,1h),2.70(七重峰，j＝7.0hz,1h),2.56(七重峰，j＝7.0hz,1h),1.28
–
1.17(m,6h),1.12(dd,j＝15.1,7.0hz,6h)。lcms：ms m/z＝432.24[m+1]，tr＝1.47min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.74min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[0627]
中间体8.l-丙氨酸环戊酯hcl盐
[0628][0629]
向(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(3.95g，20.9mmol)、环戊醇(1.5g，17.4mmol)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺hcl盐(edci)(3.5g，22.6mmol)在乙腈(100ml)中的混合物中添加4-(二甲基氨基)吡啶(dmap，3.2g，26.1mmol)。然后将混合物在室温处搅拌2小时，然后将反应混合物用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥有机溶剂，然后真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到中间体，将该中间体溶解于10ml dcm中，向该溶液中添加4n hcl的二噁烷溶液(3ml)。将反应混合物在室温处搅拌30分钟，然后蒸发溶剂，并且将残余物在高真空下干燥，得到粗产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.75
–
8.42(m,2h),5.20(tt,j＝5.6,2.5hz,1h),4.22
–
4.07(m,1h),1.87
–
1.58(m,8h),1.54(dd,j＝12.6,7.2hz,3h)。
[0630]
中间体9.l-丙氨酸环丙酯hcl盐
[0631][0632]
向(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(5.86g，31mmol)、环丙醇(1.5g，25.8mmol)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺hcl盐(edci)(5.2g，33.6mmol)在乙腈(100ml)中的混合物中添加4-(二甲基氨基)吡啶(dmap，4.7g，38.7mmol)。然后将混合物在室温处搅拌2小时，然后将反应混合物用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥有机溶剂，然后真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到中间体，将该中间体溶解于10ml dcm中，向该溶液中添加4n hcl的二噁烷溶液(3ml)。将反应混合物在室温处搅拌30分钟，然后蒸发溶剂，并且将残余物在高真空下干燥，得到粗产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.68(s,2h),4.22(tt,j＝6.3,3.2hz,1h),1.68(d,j＝7.3hz,3h),1.42(s,1h),0.86
–
0.69(m,2h),0.70(dd,j＝7.1,3.6hz,2h)。
[0633]
中间体10.甲缩醛1和2：1,1-二甲氧基-n,n-二甲基甲胺和1-(二甲氧基甲基)-4-甲基哌嗪
[0634][0635]
将n-甲基哌嗪(1.5ml，15.93mmol)和dmf-二甲基缩醛(1ml，7.50mmol)的混合物在密封管中在100℃处加热3天，在60℃处在高真空下浓缩以去除过量的n-甲基哌嗪，然后用于下一反应。基于下一反应的产物组成，产物是甲缩醛1和甲缩醛2的混合物，比率为约1:2。
[0636]
中间体11.(s)-2-氨基丙酸环己酯盐酸盐
[0637][0638]
向l-丙氨酸(5g，56.12mmol)和环己醇(56g，561mmol)的混合物中添加tmscl(20ml)。将所得混合物在约70℃处搅拌约15小时并在约80℃处真空浓缩，与甲苯共蒸发，溶解在己烷中，并在约室温处搅拌，在此期间固体沉淀。过滤收集固体，并将滤饼用5％etoac的己烷溶液洗涤几次，并在高真空下干燥约15小时，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.76(s,3h),4.85(tt,j＝8.7,3.8hz,1h),4.17(p,j＝6.5hz,1h),1.84(dd,j＝9.9,5.5hz,2h),1.70(d,j＝7.3hz,5h),1.57
–
1.42(m,3h),1.32(ddddd,j＝20.3,12.8,9.9,6.4,3.1hz,3h)。
[0639]
中间体12.(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸2-乙基丁酯
[0640][0641]
取(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸(1.09g，4.71mmol)放入乙腈(10ml)中，并且添加2-乙基-1-丁醇(2.88ml，23.56mmol)，然后一次性添加edci(878mg，5.66mmol)和dmap(863mg，7.07mmol)。允许在室温处搅拌过夜。浓缩并用ch2cl2稀释。通过硅胶色谱法0-40％etoac/hex纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.19(d,j＝8.7hz,1h),4.00-3.84(m,3h),1.67-1.22(m,17h),0.91-0.80(m,12h)。
[0642]
中间体13.(s)-2-氨基-4-甲基戊酸2-乙基丁酯盐酸盐
[0643][0644]
取(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸-2-乙基丁酯放入ch2cl2(10ml)和4n hcl的二噁烷溶液(10ml，40mmol)中。在环境温度处搅拌1小时。减压浓缩并与己烷共蒸发。置于高真空下1小时，并且产物不经纯化即原样用于下一步骤。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.43(s,3h),4.08(d,j＝5.6hz,2h),3.92(m,1h),1.69(m,1h),1.61(m,2h),1.47(m,1h),1.34(m,4h),0.83(m,12h)。
[0645]
中间体14.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(苄氧基)-2-甲基丙酯
[0646][0647]
向boc-l-丙氨酸(1.26g，6.66mmol)、2-苄氧基-2-甲基丙醇(1.0g，5.55mmol)和edci(1.12g，7.21mmol)在乙腈(20ml)中的混合物中添加dmap(2.04g，8.32mmol)。然后将混合物在室温处搅拌2小时，然后用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(0至60％etoac的己烷溶液)纯化，得到boc-l-丙氨酸丙酯，将其溶解于dcm(10ml)中，并在室温处添加4n hcl的二噁烷溶液(5.5ml，22.19mmol)。将所得混合物在室温处搅拌2小时，真空浓缩，再溶解于acn(10ml)中，冻干过夜，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.82(s,3h),7.42
–
7.07(m,5h),4.44(s,2h),4.24(m,2h),4.08(d,j＝11.2hz,1h),1.70(d,j＝7.0hz,3h),1.28(d,j＝2.4hz,6h)。lcms m/z＝251.97(游离碱m+h)，tr＝0.85min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0648][0649]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(苄氧基)-2-甲基丙酯。在-78℃处向l-丙氨酸2-(苄氧基)-2-甲基丙酯hcl盐(832mg，2.89mmol)在dcm(20ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.43ml，2.89mmol)，并且在-78℃处在5分钟内滴加三乙胺(0.80ml，5.76mmol)。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟并冷却至-78℃，并且一次性添加对硝基苯酚(402mg，2.89mmol)，并在-78℃处在5分钟内添加三乙胺(0.40ml，2.89mmol)。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌50分钟，然后用dcm稀释，用盐水洗涤，真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至60％etoac的己烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.23
–
8.13(m,2h),7.41
–
7.27(m,3h),7.28
–
7.14(m,4h),4.45(m,2h),4.27
–
4.15(m,2h),4.07(m,1h),3.89(m,1h),1.41(m,3h),1.27(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.10,-3.18。lcms m/z＝528.78(m+h)，tr＝1.70min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0650]
中间体15.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环丁基甲酯
[0651][0652]
将l-丙氨酸环丁基甲基酯-hcl(1.2g，7.16mmol)悬浮于亚甲基氯(10ml)中，冷却至-78℃，并快速添加二氯磷酸苯酯(1.07ml，7.16mmol)。在-78℃处在60分钟内添加三乙胺(2.0ml，14.32mmol)，并且将所得混合物在室温处搅拌3小时。将反应混合物冷却至0℃，并且一次性添加4-硝基苯酚(996mg，7.16mmol)。然后在60分钟内添加三乙胺(1.0ml，7.16mmol)。然后将混合物在室温处搅拌3小时，过滤，滤液浓缩至三分之一体积，并再次过滤。将滤液浓缩并且将残余物通过硅胶柱色谱法(0至35％etoac的己烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.28
–
8.16(m,2h),7.45
–
7.32(m,4h),7.29
–
7.16(m,3h),4.23
–
4.01(m,3h),3.95
–
3.83(m,1h),2.59(m,1h),2.03(m,2h),1.98
–
1.80(m,2h),1.73(m,2h),1.42(d,j＝3.2hz,1.5h),1.40(d,j＝3.3hz,1.5h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.06,-3.11。
[0653]
中间体16.((苄氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯
[0654][0655]
在0℃处在氩气氛下将二氯磷酸4-硝基苯酯(2.00g，7.81mmol)和三乙胺(2.18ml，15.6mmol)相继添加到l-丙氨酸2-乙基丁酯盐酸盐(1.091g，18.9mmol)在二氯甲烷(23ml)中的悬浮液中。1小时后，然后在0℃处相继添加苄醇(0.810ml，7.81mmol)和三乙胺(1.09ml，7.81mmol)，然后使所得混合物升温至室温。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d1)δ8.30
–
8.07(m,2h),7.42
–
7.28(m,7h),5.18
–
5.09(m,2h),4.70(s,1h),4.08
–
3.95(m,2h),3.68(q,j＝9.4hz,1h),1.55
–
1.18(m,8h),0.87(t,j＝7.4hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d1)δ2.32(s),2.28(s)。lcms：ms m/z＝463.00[m
–
1]，tr＝1.56min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。
[0656]
中间体17.((s)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)(磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯
[0657][0658]
如wo 2016/069825中所述制备。
[0659]
中间体18.((s)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[0660][0661]
如cho等人，j.med.chem.2014,57,1812-1825中所述制备。
[0662]
中间体19.((s)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸乙酯
[0663][0664]
如us20120009147a1中所述制备。
[0665]
中间体20.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环丙基甲酯
[0666][0667]
将l-丙氨酸环丙基甲基酯-hcl(1.0g，5.57mmol)悬浮于亚甲基氯(10ml)中，冷却至-78℃，并快速添加二氯磷酸苯酯(0.83ml，5.57mmol)。在-78℃处在30分钟内添加三乙胺(1.54ml，11.13mmol)的dcm(1.5ml)溶液并搅拌30分钟。在-78℃处一次性添加4-硝基苯酚(774mg，5.57mmol)。然后，在30分钟内添加三乙胺(0.77ml，7.16mmol)的dcm(2ml)溶液。然后将混合物在相同温度处搅拌30分钟，用水、饱和na2co3溶液和盐水洗涤，并用硫酸钠干燥，并且真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至20％etoac的己烷溶液)纯化残余物，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.58
–
7.29(m,4h),7.32
–
7.14(m,3h),4.25
–
4.07(m,1h),4.07
–
3.80(m,3h),1.44(d,j＝2.9hz,1.5h),1.42(d,j＝2.9hz,1.5h),1.26
–
1.01(m,
1h),0.66
–
0.49(m,2h),0.42
–
0.15(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.07,-3.11。ms m/z＝420.97。
[0668]
中间体21.新戊酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯
[0669][0670]
新戊酸2-氨基乙酯盐酸盐。在室温处，将新戊酰氯(3.82ml，31.0mmol)添加到(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯(4.8ml，31.0mmol)和二异丙基乙胺(5.4ml，31.0mmol)在二氯甲烷(150ml)中的溶液中。4小时后，将所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(150ml)和盐水(150ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗无色油状物溶解于盐酸在二噁烷(4m，50ml)中的溶液中，并且在室温处搅拌，并且将白色固体从溶液中缓慢沉淀。3小时后，通过真空过滤收集固体，得到产物。1h nmr(400mhz,cd3od)δ4.32
–
4.25(m,2h),3.26(t,j＝5.4hz,2h),1.23(s,9h)。
[0671][0672]
新戊酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。在0℃处在氩气氛下向新戊酸2-氨基乙酯盐酸盐(0.861g，4.74mmol)和二氯磷酸苯酯(0.705ml，4.74mmol)在二氯甲烷(23ml)中的溶液中添加三乙胺(1.2ml，9.4mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1.5小时。然后添加4-硝基苯酚(660mg，4.74mmol)和三乙胺(0.66ml，4.7mmol)。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，并且将所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.23(d,j＝9.2hz,2h),7.47
–
7.31(m,4h),7.29
–
7.16(m,3h),4.18
–
4.06(m,2h),3.45
–
3.31(m,2h),1.17(s,9h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.48(s)。ms m/z＝422.95[m+1]。
[0673]
中间体22.(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸四氢-2h-吡喃-4-基酯
[0674][0675]
(s)-2-氨基丙酸四氢-2h-吡喃-4-基酯盐酸盐。向l-丙氨酸(500mg，5.61mmol)和四氢-2h-吡喃-4-醇(5g，49.0mmol)的混合物中添加tmscl(2ml)。将所得混合物在70℃处搅拌15小时并真空浓缩，并且将所得固体用5％etoac的己烷溶液研磨，过滤，并用5％etoac的己烷溶液洗涤若干次，并在高真空下干燥15小时，得到产物，将其用于下一反应而无需任何表征。
[0676][0677]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸四氢-2h-吡喃-4-基酯。将(s)-2-氨基丙酸四氢-2h-吡喃-4-基酯盐酸盐(1.33g，6.34mmol)溶解于亚甲基氯(15ml)中，冷却至-78℃，并快速添加二氯磷酸苯酯(1.137ml，7.61mmol)。在-78℃处在30分钟内添加三乙胺(2.2ml，15.2mmol)，并将所得混合物在-78℃处搅拌30分钟。然后一次性添加4-硝基苯酚(882mg，6.34mmol)，并在-78℃处在30分钟内添加三乙胺(1.1ml，7.61mmol)。将混合物在-78℃处搅拌30分钟，用水洗涤两次并用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至70％etoac的己烷溶液)纯化残余物，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.49
–
7.06(m,7h),4.95(m,1h),4.14(m,1h),4.07
–
3.80(m,3h),3.52(m,2h),1.95
–
1.81(m,2h),1.64m,2h),1.42(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.09,-3.13。ms m/z＝451(m+h)
+
。
[0678]
中间体23.(s)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-甲基吡咯烷-3-基酯
[0679][0680]
(s)-(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸1-甲基吡咯烷-3-基酯。将boc-l-丙氨酸(2.1g，11mmol)和(r)-3-羟基-1-甲基吡咯烷(1.1ml，10mmol)溶解于无水thf(20ml)中。一次性添加三苯基膦(3.4g，13mmol)。滴加偶氮二甲酸二异丙酯(2.4ml，12mmol)。将反应搅拌2小时。滴加更多的偶氮二甲酸二异丙酯(240μl，1.2mmol)，并且将反应搅拌16小时。将反应用etoac(10ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤。然后用5％柠檬酸水溶液(30ml)萃取有机物。用etoac(2
×
5ml)洗涤柠檬酸萃取物。将柠檬酸部分用1n naoh水溶液碱化，得到ph为9，并用etoac(2
×
10ml)萃取。将有机萃取物合并，经无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.24(m,1h),5.01(m,1h),4.27(m,1h),2.88
–
2.69(m,2h),2.64(m,1h),2.37(s,3h),2.29(m,1h),1.96
–
1.80(m,1h),1.44(s,9h),1.37(d,j＝7.2hz,3h)。
[0681][0682]
(s)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-甲基吡咯烷-3-基酯。将(s)-(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸1-甲基吡咯烷-3-基酯(545mg，2mmol)与10ml 4n hcl的二噁烷溶液混合并搅拌1小时。将反应减压浓缩，得到泡沫，然后将其与20ml无水dcm混合，并在大
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸1-甲基吡咯烷-3-基酯(3.9g，14.3mmol)与30ml 4n hcl的二噁烷溶液混合并搅拌3小时。将反应减压浓缩，得到泡沫，然后将其与30ml无水dcm混合，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将二氯磷酸苯酯(2.34ml，15.75mmol)一次性添加到反应中。将反应搅拌15分钟。将三乙胺(4.4ml，31.5mmol)与无水dcm(5ml)混合并滴加到反应中。将反应搅拌1小时。将三乙胺(2.2ml，15.75mmol)与无水dcm(3ml)混合并滴加到反应中。将反应搅拌15分钟。一次性添加对硝基苯酚(1.8g，12.87mmol)。将反应混合物搅拌2小时。
[0689]
将反应用dcm(20ml)稀释，并用碳酸氢钠水溶液(3
×
20ml)洗涤。将有机物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/dcm)纯化。将级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.29
–
8.15(m,2h),7.48
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.13(m,3h),5.20(m,1h),4.21
–
4.07(m,1h),3.99(m,1h),2.86(m,1h),2.70(m,1h),2.63(m,1h),2.37(m,3h),2.35
–
2.21(m,2h),1.86
–
1.73(m,1h),1.40(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.12,-3.14。lcms：ms m/z＝450.3[m+1]；448.1[m-1]，tr＝1.24min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝2.63min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[0690]
中间体25.(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环己酯
[0691][0692]
将中间体11(3.4g，16.37mmol)溶解于亚甲基氯(45ml)中，冷却至-78℃，并快速添加二氯磷酸苯酯(2.45ml，16.37mmol)。在-78℃处，在60分钟内添加三乙胺(4.54ml，32.74mmol)，然后一次性添加4-硝基苯酚(2277mg，16.37mmol)。在-78℃处，在60分钟内添加三乙胺(2.27ml，16.37mmol)。将所得混合物在-78℃处搅拌2小时，用亚甲基氯(100ml)稀释，用水洗涤两次并用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至20％etoac的己烷溶液)纯化残余物，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.46
–
7.30(m,4h),7.29
–
7.09(m,3h),4.76(m,1h),4.20
–
4.02(m,1h),3.92(m,1h),1.87
–
1.64(m,4h),1.54(m,2h),1.46
–
1.18(m,7h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.94,-3.00。ms m/z＝449(m+h)
+
。
[0693]
中间体26. 4-(((2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
[0694]
[0695]
4-((l-丙氨酰)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。向((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸(1.26g，5.65mmol)、4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.68g，28.22mmol)和edci(1.05g，6.77mmol)在乙腈(15ml)中的混合物中添加dmap(1.03g，8.47mmol)。然后将混合物在室温处搅拌15小时，用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(0至100％etoac的己烷溶液)纯化，得到cbz-l-丙氨酸哌啶基酯，将其溶解于thf(10ml)中，并且添加20％氢氧化钯(400mg)/碳。将所得混合物在h2气体下搅拌2小时，过滤，并且滤液真空浓缩。将获得的残余物在高真空下干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.95(tt,j＝7.9,3.8hz,1h),3.79
–
3.62(m,2h),3.56(q,j＝7.0hz,1h),3.25(ddd,j＝13.6,8.5,3.7hz,2h),1.85(ddd,j＝13.4,6.4,3.4hz,2h),1.73(s,2h),1.62(ddq,j＝12.7,8.7,4.3,3.9hz,2h),1.46(s,9h),1.34(d,j＝7.0hz,3h)。ms m/z＝273[m+h]。
[0696][0697]
4-(((2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯。将4-((l-丙氨酰)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.9g，3.31mmol)溶解于亚甲基氯(10ml)中，冷却到-78℃，并快速添加二氯磷酸苯酯(0.49ml，3.31mmol)。在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.46ml，3.31mmol)，并且一次性添加4-硝基苯酚(460mg，3.31mmol)。然后在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.49ml，3.31mmol)。将所得混合物在-78℃处搅拌2小时，用亚甲基氯稀释，用水洗涤两次并用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至70％etoac的己烷溶液)纯化残余物，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.23(m,2h),7.42
–
7.31(m,4h),7.25
–
7.16(m,3h),4.93(m,1h),4.26
–
4.03(m,1h),3.85(m,1h),3.75
–
3.56(m,2h),3.21(m,2h),1.91
–
1.75(m,2h),1.66
–
1.48(m,2h),1.46(s,9h),1.44
–
1.38(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.07,-3.13。ms m/z＝550(m+h)
+
。
[0698]
中间体27.反式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯
[0699][0700]
反式-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。以与针对中间体26所述类似的方式由cbz-l-丙氨酸(900mg，4.03mmol)和反式-4-(三氟甲基)环己-1-醇(1.02g，6.05mmol)制备产物。ms m/z＝240[m+h]。
[0701]
[0702]
反式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。以与针对中间体25所述类似的方式由反式-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯(974mg，4.07mmol)制备呈同分异构混合物形式的产物(840mg)。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.19(m,2h),7.43
–
7.31(m,4h),7.26
–
7.16(m,3h),4.68(m,1h),4.11(m,1h),3.84(m,1h),2.02(m,4h),1.50
–
1.27(m,8h)。
19
f nmr(377mhz，氯仿-d)δ-73.91(d,j＝7.7hz)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.08,-3.12。ms m/z＝517[m+h]。
[0703]
通过chiralpak sfc(chiralpak if 20
×
250mm柱，30％异丙醇)分离产物，得到中间体28和中间体29：
[0704][0705]
中间体28。反式-((r)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。中间体27的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(d,j＝9.1hz,2h),7.42
–
7.31(m,4h),7.29
–
7.16(m,3h),4.69(tt,j＝10.7,4.2hz,1h),4.19
–
4.04(m,1h),3.90(dd,j＝11.9,9.5hz,1h),2.12
–
1.97(m,5h),1.52
–
1.21(m,7h)。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-73.90(d,j＝7.7hz)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.07。
[0706]
中间体29。反式-((s)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。中间体27的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.21(d,j＝9.08hz,2h),7.42
–
7.31(m,4h),7.26
–
7.13(m,3h),4.67(tt,j＝10.8,4.2hz,1h),4.11(ddt,j＝15.8,8.9,7.1hz,1h),3.97(dd,j＝12.0,9.4hz,1h),2.07
–
1.91(m,5h),1.51
–
1.19(m,7h)。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-73.90(d,j＝7.9hz)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.08。
[0707]
中间体30.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-甲基哌啶-4-基酯
[0708][0709]
l-丙氨酸1-甲基哌啶-4-基酯。向n-cbz-l-丙氨酸(1.047g，4.688mmol)、4-羟基-n-甲基哌啶(450mg，3.907mmol)和edci(788mg，5.079mmol)在乙腈(20ml)中的混合物中添加dmap(716mg，5.861mmol)。然后将混合物在室温处搅拌15小时，然后用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(0至10％meoh的dcm溶液)纯化，得到cbz-l-丙氨酸4-哌啶基酯，将其溶解于thf(10ml)中，并在室温处添加20％pd(oh)2(300mg，0.427mmol)。将所得混合物在h2气体下在室温处搅拌2小时，过滤，真空浓缩，与dcm共蒸发若干次，并在高真空下干燥过夜，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.81(td,j＝8.3,7.7,3.8hz,1h),3.52(q,j＝7.0hz,1h),2.63(s,2h),2.29(s,5h),2.14
–
1.86(m,4h),1.73(ddt,j＝12.9,8.8,4.5hz,2h),1.32(d,j＝7.0hz,3h)。lcms：ms m/z＝187.09[m+1]；tr＝0.12min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲
酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0710][0711]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-甲基哌啶-4-基酯。在-78℃处向l-丙氨酸1-甲基哌啶-4-基酯(360mg，1.706mmol)在dcm(10ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.255ml，1.706mmol)，然后在-78℃处在30分钟内添加三乙胺(0.24ml，1.706mmol)的dcm(2.76ml)溶液。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟，然后重新冷却至-78℃。一次性添加对硝基苯酚(0.237g，1.706mmol)，并在-78℃处在30分钟内添加三乙胺(0.237ml，1.706mmol)。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟，然后用etoac稀释，用水和盐水洗涤，真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至10％meoh的dcm溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.28
–
8.15(m,2h),7.36(m,4h),7.25
–
7.17(m,3h),4.80(s,1h),4.19
–
4.04(m,1h),3.93(m,1h),2.64(s,2h),2.31(m,5h),1.90(m,2h),1.78
–
1.67(m,2h),1.47
–
1.33(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.04,-3.07。lcms：ms m/z＝464.32[m+1]；tr＝0.74min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0712]
中间体31.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸(四氢-2h-吡喃-4-基)甲酯
[0713][0714]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸(四氢-2h-吡喃-4-基)甲酯。将cbz-l-ala(446mg，2mmol)溶解于无水mecn(10ml)中。一次性添加edci(422mg，2.2mmol)，并且将反应搅拌15分钟。添加四氢吡喃-4-甲醇(279μl，2.4mmol)。然后一次性添加dmap(269mg，2.2mmol)。将反应搅拌16小时。
[0715]
将反应用etoac(30ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(10ml)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，最后用盐水(10ml)洗涤。将有机物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-80％乙酸乙酯/己烷)纯化。将级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.40
–
7.28(m,5h),5.28(d,j＝7.9hz,1h),5.11(s,2h),4.39(t,j＝7.4hz,1h),4.07
–
3.84(m,4h),3.38(t,j＝11.7hz,2h),1.92(s,1h),1.68
–
1.50(m,3h),1.39(m,4h)。
[0716][0717]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸(四氢-2h-吡喃-4-基)甲酯。将((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸(四氢-2h-吡喃-4-基)甲酯(530mg，1.65mmol)溶解于无水thf(12ml)中。添加10％pd/c degussa型，并且将反应混合物在大气氢气下搅拌2小时。过滤催化剂并且滤液不经纯化直接使用。
[0718]
将二氯磷酸苯酯(294μl，1.98mmol)溶解于无水dcm(10ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将上述thf溶液滴加到反应中，然后搅拌10分钟。滴加三乙胺(300μl，2.15mmol)，然后搅拌30分钟。添加对硝基苯酚(207mg，1.49mmol)和三乙胺(300μl，2.15mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌14小时。
[0719]
将反应用etoac(30ml)稀释，并用0.2m碳酸钠溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.23(d,j＝9.0hz,2h),7.45
–
7.30(m,4h),7.30
–
7.16(m,3h),4.23
–
4.07(m,2h),3.97(m,4h),3.85(t,j＝10.5hz,1h),3.35(t,j＝11.8hz,2h),1.99
–
1.79(m,1h),1.56(d,j＝8.4hz,3h),1.48
–
1.29(m,4h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.13(s),-3.16(s)。ms m/z＝464.9[m+1]；463.1[m-1]。
[0720]
中间体32.反式-((s)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(叔丁基)环己酯
[0721][0722]
反式-l-丙氨酸4-(叔丁基)环己酯。以与针对中间体26所述类似的方式由cbz-l-丙氨酸(960mg，4.03mmol)和反式-4-(叔丁基)环己醇(1.0g，6.45mmol)制备产物(845mg)。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.65(tt,j＝11.2,4.5hz,1h),3.51(q,j＝7.1hz,1h),2.07
–
1.93(m,2h),1.87
–
1.73(m,4h),1.40
–
1.23(m,4h),1.19
–
0.94(m,4h),0.85(d,j＝2.6hz,9h)。ms m/z＝228[m+h]。
[0723][0724]
反式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(叔丁基)环己酯。以与针对中间体25所述类似的方式由反式-l-丙氨酸4-(叔丁基)环己酯(420mg，1.85mmol)制备呈同
分异构混合物形式的产物(520mg)。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.19(m,2h),7.37(m,4h),7.28
–
7.16(m,3h),4.62(m,1h),4.17
–
4.00(m,1h),3.88(m,1h),1.95(m,2h),1.80(m,2h),1.39(m,3h),1.35
–
1.22(m,2h),1.15
–
0.92(m,3h),0.85(s,9h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.98,-3.04。ms m/z＝505[m+h]。
[0725]
中间体33.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-(三氟甲基)环已基)甲酯
[0726][0727]
((1s,4s)-4-(三氟甲基)环己基)甲醇。在30分钟内向(1s,4s)-4-(三氟甲基)环己烷羧酸(3g，15.29mmol)在无水四氢呋喃(40ml)中的冰冷溶液中分批添加氢化铝锂(0.871g，22.94mmol)。将反应混合物在室温处搅拌3小时。冷却至0℃，并用水(0.8ml)、5n氢氧化钠水溶液(0.8ml)，然后用水(2.4ml)淬灭。过滤分离的固体并用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液稀释滤液。将有机层分离，用盐水洗涤并经硫酸钠干燥。将乙酸乙酯过滤并减压浓缩，得到产物。将获得的残余物在高真空下干燥1小时，并原样用于后续反应。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ3.47(dd,j＝6.3,1.9hz,2h),2.08-1.77(m,5h),1.62-1.18(m,4h),0.99(qd,j＝13.0,3.2hz,2h)。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-74.33(d,j＝8.2hz)。
[0728][0729]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-(三氟甲基)环己基)甲酯。以与针对中间体12所述类似的方式制备产物(1.48g)。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.00(s,1h),4.30(s,1h),4.04-3.89(m,2h),2.08-1.79(m,5h),1.74-1.57(m,1h),1.44(s,9h),1.38(d,j＝7.2hz,3h),1.30(m,2h),1.12-0.93(m,2h)。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-74.38(d,j＝7.8hz)。
[0730][0731]
(s)-1-氧代-1-(((1r,4s)-4-(三氟甲基)环己基)甲氧基)丙-2-氯化铵。以与针对中间体13所述类似的方式制备产物(1.184g)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.55(s,3h),4.17-3.88(m,3h),2.21(dtd,j＝12.2,8.8,3.3hz,1h),1.83(ddd,j＝29.5,13.4,3.4hz,4h),1.63(tdd,j＝11.9,6.0,3.3hz,1h),1.41(d,j＝7.2hz,3h),1.32-0.93(m,4h)。
19
f nmr(377mhz,dmso-d6)δ-72.84(d,j＝8.8hz)。
[0732][0733]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-(三氟甲基)环已基)甲酯。以与针对中间体35所述类似的方式制备产物(1.4g)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.37-8.22(m,2h),7.56-7.31(m,4h),7.30-7.14(m,2h),6.72(ddd,j＝13.7,10.1,8.6hz,1h),4.10-3.91(m,1h),3.88-3.75(m,2h),2.20-1.99(m,1h),1.86-1.63(m,4h),1.54-1.41(m,1h),1.29-1.06(m,5h),0.98(td,j＝12.7,3.2hz,2h)。ms m/z＝531.02[m+1]。
[0734]
中间体34.((s)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸乙酯
[0735][0736]
在-78℃处，向l-丙氨酸乙酯-hcl(631mg，2.465mmol)在dcm(15ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(0.368ml，2.465mmol)，并且在5分钟内在-78℃处滴加三乙胺(0.68ml，4.93mmol)。在移除干冰浴之后，将所得混合物搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。一次性添加五氟苯酚(454mg，2.465mmol)，并且在5分钟内在-78℃处添加三乙胺(0.34ml，2.465mmol)。移除干冰浴后，将所得混合物搅拌1小时，然后用dcm稀释，用盐水洗涤，真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至60％etoac的己烷溶液)纯化，得到非对映体混合物，向其中添加二异丙醚(4ml)。将悬浮液超声处理并过滤。滤饼的1h nmr显示它是3:1比率的混合物。向滤饼中添加二异丙醚(5ml)，并将悬浮液在70℃处加热至澄清溶液。在移除加热浴后，开始形成针状晶体并且在10分钟之后，过滤混合物，并将滤饼在高真空下干燥30分钟，得到sp异构体。
[0737]
非对映体混合物：1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.43
–
7.30(m,2h),7.32
–
7.17(m,3h),4.29
–
4.11(m,3h),3.94(m,1h),1.52
–
1.42(m,3h),1.28(q,j＝7.0hz,3h)。
[0738]
sp异构体：1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.50
–
7.36(m,2h),7.32
–
7.21(m,3h),4.75(t,j＝11.5hz,1h),4.17
–
3.98(m,3h),1.37(dd,j＝7.1,1.1hz,3h),1.22(t,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ-0.51。
19
f nmr(376mhz，乙腈-d3)δ-155.48
–‑
155.76(m),-162.73(td,j＝21.3,3.7hz),-165.02
–‑
165.84(m)。lcms m/z＝440.5(m-乙基+h),tr＝1.57分钟；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0739]
中间体35.(2s)-2-环己基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酸2-乙基丁酯
[0740][0741]
(s)-2-氨基-2-环己基乙酸2-乙基丁酯盐酸盐。取l-环己基甘氨酸(0.90g，5.75mmol)放入2-乙基-1-丁醇(20ml)中，并一次性添加三甲基氯硅烷(1.31ml，10.30mmol)。置于预热的60℃油浴中16小时。浓缩并在60℃旋转蒸发器浴中与甲苯共蒸发5次。置于高真空下过夜，得到产物。将材料原样用于下一步骤。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.38(s,3h),4.17
–
3.96(m,2h),3.84(d,j＝4.5hz,1h),1.90
–
1.40(m,5h),1.41
–
0.88(m,11h),0.83(t,j＝7.3hz,6h)。
[0742][0743]
(2s)-2-环己基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酸2-乙基丁酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-2-氨基-2-环己基乙酸2-乙基丁酯盐酸盐(1.50g，5.39mmol)和二氯磷酸苯酯(0.803ml，5.39mmol)在二氯甲烷(50ml)中的溶液中添加三乙胺(1.56ml，11.16mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1小时。然后添加4-硝基苯酚(713mg，5.13mmol)和三乙胺(0.81ml，5.63mmol)。2小时后，将反应混合物用et2o(100ml)稀释并滤出固体。将粗制品减压浓缩并通过硅胶色谱法(120g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，然后通过反相hplc纯化而不使用改性剂20％-100％acn的水溶液，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(br d,j＝9.3hz,2h),7.55
–
7.28(m,4h),7.28
–
7.01(m,3h),6.61
–
6.52(m,1h),3.85(d,j＝4.0hz,2h)3.75
–
3.53(m,1h),1.67
–
1.31(m,7h),1.25(m,6h),1.16
–
0.67(m,9h)。lc/ms：tr＝1.48min，ms m/z＝519.03[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。
[0744]
中间体36.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲酯
[0745][0746]
(叔丁氧基羰基)丙氨酸(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲酯。以与针对中间体12所述类似的方式制备产物(3.8g)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.25(d,j＝7.4hz,1h),4.08-3.72(m,3h),3.10(q,j＝10.3hz,2h),2.88(d,j＝11.0hz,2h),2.37-2.18(m,2h),
1.66-1.47(m,3h),1.36(s,9h),1.21(d,j＝7.5hz,5h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-68.52(t,j＝10.3hz)。
[0747][0748]
丙氨酸(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲酯盐酸盐。以与针对中间体13所述类似的方式制备产物(3.52g)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.67(s,3h),4.44
–
3.75(m,5h),3.49
–
2.81(m,4h),2.00
–
1.61(m,5h),1.43(d,j＝7.2hz,3h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-63.30(d,j＝443.2hz)。
[0749][0750]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲酯。以与针对中间体35所述类似的方式制备产物(4.25g)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32
–
8.24(m,2h),7.53
–
7.40(m,2h),7.39(ddd,j＝8.1,6.8,3.1hz,2h),7.24(ddd,j＝17.4,6.5,1.6hz,3h),6.69(ddd,j＝13.7,10.0,8.4hz,1h),4.07
–
3.92(m,1h),3.88
–
3.77(m,2h),3.08(qd,j＝10.3,1.6hz,2h),2.87
–
2.79(m,2h),2.25
–
2.14(m,2h),1.56
–
1.39(m,3h),1.26
–
1.08(m,5h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.26,-1.49。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-68.45(td,j＝10.2,2.4hz)。lcms：ms m/z＝546.27[m+1]；]；tr＝1.12min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0751]
中间体37.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸(1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯
[0752][0753]
4-((((苄氧基)羰基)-l-丙氨酰)氧基)-3,3-二氟哌啶-1-甲酸叔丁酯。向n-cbz-l-丙氨酸(2.0g，8.96mmol)、3,3-二氟-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.12g，8.96mmol)和edci(1.67g，10.75mmol)在乙腈(20ml)中的混合物中添加dmap(1.64g，13.44mmol)。然后将混合物在室温处搅拌15小时，然后用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶色谱法(50至100％etoac的己烷溶液)纯化获得的残余物，得到产物。
19
f nmr(377mhz，氯仿-d)δ-114.32(m),-117.73
–‑
121.11(m)。lcms：ms m/z＝343.14[m+1-boc],386.82(m+1-t-bu)；tr＝1.23min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙
腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0754][0755]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸3,3-二氟哌啶-4-基酯。在室温处向4-((((苄氧基)羰基)-l-丙氨酰)氧基)-3,3-二氟哌啶1-甲酸叔丁酯(330mg，0.746mmol)在dcm(5ml)中的混合物中缓慢添加4m hcl的二噁烷溶液(0.9ml)。将所得混合物在室温处搅拌2小时，真空浓缩，与dcm共蒸发若干次，并在高真空下干燥15小时，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.33(m,5h),5.59(m,1h),5.27
–
5.01(m,3h),4.53
–
4.25(m,1h),3.12(m,1h),3.03
–
2.76(m,2h),2.73(s,1h),1.94(s,1h),1.80(s,1h),1.41(d,j＝7.2hz,3h)。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-114.66(dd,j＝245.9,61.8hz),-119.63。
[0756][0757]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯。将((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸3,3-二氟哌啶-4-基酯(450mg，1.190mmol)、乙醛(0.194ml，2.629mmol)和乙酸(0.15ml，2.629mmol)在dcm(9ml)中的混合物在室温处搅拌20分钟，并且添加氰基硼氢化钠(330mg，5.258mmol)。将所得混合物搅拌1小时，并且通过制备型hplc(phenominex gemini 10u c18 250
×
21.2mm柱，20-80％乙腈(0.1％tfa)/水(0.1％tfa)梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ10.18(bs,2h),7.38(m,5h),6.19(m,1h),5.47
–
5.26(m,1h),4.33(m,1h),3.82
–
2.98(m,6h),2.30(s,1h),2.16(s,1h),1.42(m,3h),1.31(td,j＝7.3,1.5hz,3h)。lcms：ms m/z＝371.27[m+1]；tr＝0.66min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0758][0759]
l-丙氨酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯。在室温处在h2气体下将((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯(450mg，0.929mmol)和20％pd(oh)2/c的thf溶液(10ml)的混合物搅拌1小时，过滤，真空浓缩，与dcm共蒸发若干次，并在高真空下干燥1小时，得到产物。lcms：ms m/z＝237.09[m+1]；tr＝0.15min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0760][0761]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸(1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯。将亚甲基氯(10ml)添加到l-丙氨酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯(480mg，1.37mmol)的浆液中并且添加tea(0.190ml，0.370mmol)，以获得溶液，将其冷却至-78℃并且快速添加二氯磷酸苯酯(0.205ml，1.370mmol)。在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.190ml，1.37mmol)。将所得混合物在相同温度处搅拌30分钟，并一次性添加4-硝基苯酚(191mg，1.370mmol)。然后在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.190ml，1.370mmol)。然后将混合物在室温处搅拌2小时，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。然后通过硅胶柱色谱法(0至100％etoac的己烷溶液)纯化残余物，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.29
–
8.15(m,2h),7.44
–
7.28(m,4h),7.27
–
7.11(m,3h),5.03(m,1h),4.34
–
4.14(m,1h),3.94
–
3.75(m,1h),2.88(s,1h),2.63-2.49(m,4h),2.39(m,1h),2.03
–
1.93(m,1h),1.93
–
1.77(m,1h),1.44(m,3h),1.09(td,j＝7.2,1.0hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.21,-3.26,-3.32,-3.46。
19
f nmr(377mhz，氯仿-d)δ-110.50(d,j＝244.0hz),-116.76(m)。lcms：ms m/z＝514.29[m+1]；tr＝0.80min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0762]
中间体38. 4-硝基苯基-n,n'-乙基l-丙氨酸酯磷二酰胺
[0763][0764]
向l-丙氨酸乙酯hcl盐(1.8g，11.72mmol)在dcm(20ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(1.5g，5.86mmol)。将所得混合物冷却至0℃，并且滴加三乙胺(2.37g，23.44mmol)。在移除冰浴之后，将所得混合物搅拌30分钟，并搅拌过夜。然后将反应混合物用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝417.93[m+1]，tr＝1.23min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.02min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[0765]
中间体39.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸苄酯
[0766][0767]
将二氯磷酸苯酯(1.49ml，10mmol)溶解于20ml无水二氯甲烷中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。将l-丙氨酸苄酯hcl(2.2g，10mmol)一次性添加到反应溶液中，并搅拌10分钟。将三乙胺(3ml，22mmol)溶解于5ml无水二氯甲烷中并滴加到反应中。将反应混合物搅拌2小时。一次性添加对硝基苯酚(1.25g，9mmol)。将三乙胺(1.5ml，11mmol)溶解于3ml无水二氯甲烷中并滴加到反应中。将反应混合物搅拌1小时，并且用二氯甲烷(10ml)稀释并用水(3
×
10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio2combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.24
–
8.10(m,2h),7.40
–
7.10(m,12h),5.14(m,2h),4.19(m,1h),3.87(m,1h),1.47
–
1.36(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.15,-3.29。lcms：ms m/z＝457.1[m+1]；455.1[m-1]，tr＝1.45min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝4.03min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[0768]
中间体40. 4-硝基苯基-n,n'-甲基l-丙氨酸酯磷二酰胺
[0769][0770]
在0℃处在氩气氛下将三乙胺(3.68ml，26.4mmol)添加到l-丙氨酸甲酯盐酸盐(1.63g，12.0mmol)和二氯磷酸4-硝基苯酯(1.5g，5.9mmol)在二氯甲烷(23ml)中的溶液中。3小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d1)8.25
–
8.16(m,2h),7.38(dd,j＝9.3,1.0hz,2h),4.17
–
3.95(m,2h),3.73(br s,6h),3.61(br t,j＝10.0hz,2h),1.42(s,3h),1.40(s,1h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d1)δ7.82(s)。lcms：ms m/z＝389.98[m+1]，tr＝1.11min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.81min；hplc系统：agilent 1100系列；
柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。
[0771]
中间体41.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯
[0772][0773]
在0℃处将二氯磷酸苯酯(2.81ml，18.9mmol)和三乙胺(5.38ml，37.9mmol)相继添加到l-丙氨酸甲酯盐酸盐(2.64g，18.9mmol)在二氯甲烷(100ml)中的悬浮液中。1小时后，然后在0℃处相继添加4-硝基苯酚(2.64g，18.9mmol)和三乙胺(2.64ml，18.9mmol)，然后使所得混合物升温至室温。2.5小时后，将反应混合物用二氯甲烷(100ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)和盐水(100ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d1)δ8.25
–
8.18(m,2h),7.43
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.15(m,3h),4.24
–
4.07(m,1h),3.97(br q,j＝9.8hz,1h),3.70(s,3h),1.45
–
1.35(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d1)δ-3.12(s),-3.17(s)。lcms：ms m/z＝380.98[m+1]，tr＝1.59min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.49min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。
[0774]
中间体42.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯
[0775][0776]
在0℃处在氩气氛下将二氯磷酸4-硝基苯酯(2.00g，7.81mmol)和三乙胺(2.18ml，15.6mmol)相继添加到l-丙氨酸甲酯盐酸盐(1.091g，18.9mmol)在二氯甲烷(23ml)中的悬浮液中。1小时后，然后在0℃处相继添加苄醇(0.810ml，7.81mmol)和三乙胺(1.09ml，7.81mmol)，然后使所得混合物升温至室温。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d1)δ8.32
–
8.09(m,2h),8.32
–
8.09(m,7h),5.15(app t,j＝8.4hz,2h),4.70(s,1h),4.07
–
3.93(m,1h),3.73
–
3.65(m,3h),1.42
–
1.31(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d1)δ2.23(s),2.15(s)。lcms：ms m/z＝394.9[m+1]，tr＝1.34min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：
含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。
[0777]
中间体43.((4-(二甲基氨基甲酰基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[0778][0779]
在-78℃处在30分钟内向二氯磷酸4-硝基苯酯(620mg，2.422mmol)和l-丙氨酸异丙酯-hcl(406mg，2.422mmol)在dcm-thf(10:3ml)中的溶液中添加tea(0.68ml，4.844mmol)的dcm(3.32ml)溶液。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟并冷却至-78℃并且一次性添加n,n-二甲基-4-羟基苯甲酰胺(400mg，2.422mmol)并在-78℃处在30分钟内添加tea(0.34ml，2.422mmol)的dcm(3.66ml)溶液。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌1小时，然后用etoac稀释，用盐水洗涤，真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至100％etoac的己烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.26
–
8.18(m,2h),7.45
–
7.35(m,3h),7.27(m,2h),6.76(m,1h),5.01(m,1h),4.17
–
3.94(m,2h),3.19
–
2.84(m,6h),1.39(m,3h),1.27
–
1.16(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.13,-3.21。ms m/z＝480(m+h)。lcms：ms m/z＝480.26[m+1]；tr＝1.00min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0780]
中间体44.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯
[0781][0782]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯。向((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸(1.8g，8.1mmol)、3-羟基氧杂环丁烷(0.5g，6.75mmol)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺hcl盐(edci)(1.68g，8.77mmol)在乙腈(100ml)中的混合物中添加4-(二甲基氨基)吡啶(dmap，1.24g，10.12mmol)。然后将混合物在室温处搅拌2小时，然后将反应混合物用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥有机溶剂，然后真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.40
–
7.28(m,5h),5.47(p,j＝5.9hz,1h),5.30(d,j＝8.0hz,1h),5.10(s,2h),4.88(t,j＝7.1hz,2h),4.62(ddd,j＝17.5,7.7,5.3hz,2h),4.41(p,j＝7.3hz,1h),1.44(d,j＝7.3hz,3h)。lcms：ms m/z＝280.04[m+1]，tr＝1.11min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙
腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.82min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[0783][0784]
l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯。将((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯(0.1g，0.36mmol)溶解于dcm(5ml)中，向该溶液中添加15mg的pd-c(10％，湿)，将反应烧瓶脱气，然后用h2气球充气，在室温处搅拌2小时，然后将反应混合物过滤，将溶剂在真空下蒸发，将残余物在高真空下干燥5分钟，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.42(p,j＝5.7hz,1h),4.87(t,j＝6.9hz,2h),4.65
–
4.54(m,2h),3.58(qd,j＝7.0,2.1hz,1h),1.49(d,j＝7.1hz,2h),1.34(dd,j＝7.2,2.1hz,3h)。
[0785][0786]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯。向l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯(120mg，0.83mmol)在dcm(10ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(175mg，0.83mmol)。将所得混合物冷却至0℃，并且滴加三乙胺(252mg，2.49mmol)。在移除冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟并冷却至0℃，并且一次性添加对硝基苯酚(115mg，0.83mmol)，并滴加三乙胺(252mg，2.49mmol)。在移除冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝423.06[m+1]，tr＝1.25min；lc系统：thermo accela 1250uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.15min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[0787]
中间体45.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸丙酯
[0788][0789]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸丙酯。在室温处，将n-(3-二甲基氨基丙基)-n
′‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(6.08g，31.71mmol)添加到boc-ala-oh(5g，26.43mmol)和正丙醇(6.02ml，80.6mmol)在乙腈(125ml)中的溶液中。15分钟后，添加4-(二甲基氨基)吡啶(3.23g，
26.43mmol)。16小时后，将反应混合物浓缩至一半体积，并且将混合物用乙酸乙酯(250ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(2
×
200ml)和盐水(200ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-20％etoac的己烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ5.57(s,1h),4.19-3.92(m,3h),1.63(h,j＝7.1hz,2h),1.40(s,9h),1.30(d,j＝7.3hz,3h),0.93(t,j＝7.4hz,3h)。lcms：ms m/z＝231.60[m+1]，tr＝1.10min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0790][0791]
l-丙氨酸丙酯盐酸盐。在室温处，将4m盐酸溶液的二噁烷(16.91ml)溶液添加到(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸丙酯(3.91g，16.91mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。16小时后，将反应混合物减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ8.45(s,3h),4.22-4.11(m,2h),4.11-3.99(m,1h),1.68(dtd,j＝14.0,7.4,6.6hz,2h),1.60(d,j＝7.2hz,3h),0.95(t,j＝7.4hz,3h)。lcms：ms m/z＝131.94[m+1]，tr＝0.32min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0792][0793]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸丙酯。在0℃处在15分钟内将二氯磷酸苯酯(0.89ml，5.97mmol)的二氯甲烷(12ml)溶液滴加到l-丙氨酸丙酯盐酸盐(1.0g，5.97mmol)在二氯甲烷(12ml)中的溶液中。添加完成后，在5分钟内添加三乙胺(2.0ml，14.32mmol)的二氯甲烷(2.5ml)溶液。3.5小时后，然后在0℃处相继添加4-硝基苯酚(0.83g，5.97mmol)和三乙胺(1.0ml，7.16mmol)，然后使所得混合物升温至室温。2小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用水(2
×
100ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ8.28-8.20(m,2h),7.49-7.35(m,4h),7.31-7.19(m,3h),4.72-4.56(m,1h),4.14-4.02(m,1h),3.99(td,j＝6.6,2.5hz,2h),1.58(dtdd,j＝13.9,7.4,6.5,0.9hz,2h),1.31(ddd,j＝7.1,4.2,1.1hz,3h),0.88(t,j＝7.4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ-2.12,-2.22。lcms：ms m/z＝409.12[m+1]，tr＝1.15min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.73min；hplc系统：agilent1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％
tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[0794]
中间体46.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基甲酯
[0795][0796]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基甲酯。向((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸(6.08g，27.24mmol)、氧杂环丁烷-3-基甲醇(2g，22.7mmol)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺hcl盐(edci)(5.66g，29.51mmol)在乙腈(100ml)中的混合物中添加4-(二甲基氨基)吡啶(dmap，4.16g，34.05mmol)。然后将混合物在室温处搅拌2小时，然后将反应混合物用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥有机溶剂，然后真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝280.04[m+1]，tr＝1.11min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.88min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[0797][0798]
l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基甲酯。将((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基甲酯(2.2g，8mmol)溶解于dcm(25ml)中，向该溶液中添加500mg的pd-c(10％，湿)，将反应烧瓶脱气，然后用h2气球充气，在室温处搅拌2小时，然后将反应混合物过滤，将溶剂在真空下蒸发，将残余物在高真空下干燥5分钟，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.77(dd,j＝7.9,6.3hz,2h),4.44(td,j＝6.1,2.5hz,2h),4.38
–
4.23(m,2h),3.55(q,j＝7.0hz,1h),3.34
–
3.19(m,1h),1.31(d,j＝7.0hz,3h)。
[0799][0800]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基甲酯。向l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基甲酯(1.19g，7.11mmol)在dcm(20ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(1.5g，7.11mmol)。将所得混合物冷却至0℃，并且滴加三乙胺(1.44g，14.22mmol)。在移除冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟并冷却至0℃，并且一次性添加对硝基苯酚(0.99g，7.1mmol)，并滴加三乙胺(1.44g，14.22mmol)。在移除冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(用
0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝437.14[m+1]，tr＝1.25min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.36min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[0801]
中间体47.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环丁酯
[0802][0803]
在氮气气氛下在冰浴中，向l-丙氨酸环丁酯(1.8g，10mmol)在dcm(10ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸苯酯(2.1g，10mmol)。然后滴加三乙胺(1.11g，11mmol)。在移除冰浴后，将所得混合物搅拌2小时并冷却至0℃，并且一次性添加对硝基苯酚(2.5g，18mmol)，并滴加三乙胺(1.11g，11mmol)。在移除冰浴后，将所得混合物搅拌2小时，用etoac稀释，用5％柠檬酸水溶液洗涤两次，然后用盐水洗涤，将有机溶剂真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。ms m/z＝422.0(m+h)
+
。
[0804]
sp和rp非对映体的拆分。经由手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，庚烷70％，ipa 30％)纯化产物，形成中间体48和中间体49：
[0805][0806]
中间体48。中间体47的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.33-8.23(m,2h),7.52-7.33(m,4h),7.33-7.17(m,3h),4.96-4.85(m,1h),4.07-3.96(m,1h),2.27(m,2h),2.07-1.91(m,2h),1.83-1.70(m,1h),1.70-1.55(m,1h),1.32(ddd,j＝7.2,5.3,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ1.36。lcms：ms m/z＝421.05[m+1]，tr＝1.42min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝8.07min；hplc系统：chiralpak ic，150
×
4.6mm，5微米，cn＝ic00cd-qc005，1cv＝2.49ml，cv#1，柱阀：位置3，15ml/15min，1ml/min。pmax＝300巴；溶剂阀：d：庚烷70％，#6：ipa 30％。
[0807]
中间体49。中间体47的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.33-8.23(m,2h),7.52-7.33(m,4h),7.33-7.17(m,3h),4.96-4.85(m,1h),4.07-3.96(m,1h),2.27
(m,2h),2.07-1.91(m,2h),1.83-1.70(m,1h),1.70-1.55(m,1h),1.32(ddd,j＝7.2,5.3,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ1.59。lcms：ms m/z＝420.90[m+1]，tr＝1.42min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝11.50min；hplc系统：chiralpak ic，150
×
4.6mm，5微米，cn＝ic00cd-qc005，1cv＝2.49ml，cv#1，柱阀：位置3，15ml/15min，1ml/min。pmax＝300巴；溶剂阀：d：庚烷70％，#6：ipa 30％。
[0808]
中间体50.((s)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯
[0809][0810]
将l-丙氨酸甲酯盐酸盐(14g，100mmol)与50ml无水dcm混合，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将二氯磷酸苯酯(16.4ml，110mmol)滴加到反应中，并将反应混合物搅拌30分钟。将三乙胺(29.4ml，210mmol)与20ml无水dcm混合并滴加到反应中。将反应搅拌1小时。一次性添加五氟苯酚(18.4g，100mmol)。将三乙胺(14.7ml，105mmol)与30ml无水dcm混合并滴加到反应中。将反应混合物在室温下搅拌16小时。
[0811]
将反应用dcm(50ml)稀释并用水(5
×
10ml)洗涤。将有机物经无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩，得到固体。将异丙醚(130ml)添加到固体中。将大块固体破碎，然后超声处理20分钟，然后将混合物搅拌24小时。
[0812]
收集固体并用少量异丙醚(30ml)洗涤。在高真空下干燥固体，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.40
–
7.32(m,2h),7.28
–
7.19(m,3h),4.20(m,1h),3.96
–
3.85(m,1h),3.74(s,3h),1.47(d,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-1.62。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-153.82(dd,j＝18.5,2.7hz),-159.99(td,j＝21.8,3.8hz),-162.65(dd,j＝22.2,17.6hz)。lcms：ms m/z＝425.9[m+1],423.9[m-1]，tr＝1.68min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.76min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[0813]
中间体51.((4-(2-甲氧基乙氧基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[0814]
[0815]
在0℃处在10分钟内将二氯磷酸4-硝基苯酯(503mg，1.97mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液滴加到l-丙氨酸异丙酯盐酸盐(329mg，1.97mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中。添加完成后，滴加三乙胺(0.55ml，3.93mmol)。90分钟后，在0℃处相继添加4-(2-甲氧基-乙氧基)苯酚(331mg，1.97mmol)和三乙胺(0.28ml，1.97mmol)，然后使所得混合物升温至室温。30分钟后，将反应混合物用水(2
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用20％-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.32-8.24(m,2h),7.51-7.39(m,2h),7.24-7.12(m,2h),6.97-6.90(m,2h),4.94(七重峰，j＝6.2,3.2hz,1h),4.12-4.07(m,2h),4.05-3.93(m,1h),3.76-3.68(m,2h),3.41(d,j＝0.5hz,3h),1.32(td,j＝7.1,1.2hz,3h),1.19(dt,j＝6.3,2.0hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-0.86,-1.06。lcms：ms m/z＝483.06[m+1]，tr＝1.39min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.58min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[0816]
中间体52.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸丁酯
[0817][0818]
在0℃处在15分钟内将二氯磷酸苯酯(0.89ml，5.97mmol)的二氯甲烷(12ml)溶液滴加到l-丙氨酸丁酯盐酸盐(cas#81305-85-3，1.0g，5.97mmol)在二氯甲烷(12ml)中的溶液中。添加完成后，在5分钟内添加三乙胺(2.0ml，14.32mmol)的二氯甲烷(2.5ml)溶液。3.5小时后，然后在0℃处相继添加4-硝基苯酚(0.83g，5.97mmol)和三乙胺(1.0ml，7.16mmol)，然后使所得混合物升温至室温。2小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用水(2
×
100ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.31
–
8.23(m,1h),7.52
–
7.34(m,2h),7.32
–
7.18(m,2h),4.04(td,j＝6.6,2.7hz,2h),1.60
–
1.48(m,1h),1.40
–
1.26(m,3h),0.89(t,j＝7.4hz,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-1.36,-1.59。lcms：ms m/z＝423.13[m+1]，tr＝1.22min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0819]
中间体53.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3-甲氧基丙酯
[0820]
[0821]
l-丙氨酸3-甲氧基丙酯。向cbz-l-丙氨酸(2.80g，12.54mmol)、3-甲氧基丙醇(1.00ml，10.45mmol)和edci(2.11g，13.59mmol)在乙腈(40ml)中的混合物中添加dmap(1.92g，15.68mmol)。然后将混合物在室温处搅拌15小时，然后用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(0至50％etoac的己烷溶液，35分钟运行)纯化，得到cbz-l-丙氨酸酯(2.78g)，将其溶解于thf(20ml)中，并在室温处添加20％pd(oh)2(800mg，1.14mmol)。将所得混合物在室温处在氢气气氛下搅拌4小时，过滤，真空浓缩，并在高真空下干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.28
–
4.14(m,2h),3.55(q,j＝7.0hz,1h),3.43(t,j＝6.2hz,2h),3.32(s,3h),1.98
–
1.85(m,4h),1.33(d,j＝7.0hz,3h)。lcms m/z＝161.98(m+h)，tr＝0.12min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0822][0823]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3-甲氧基丙酯。在-78℃处向l-丙氨酸3-甲氧基丙酯(1.32g，8.20mmol)在dcm(20ml)中的溶液中一次性快速添加二氯磷酸苯酯(1.23ml，8.20mmol)。然后在-78℃处，在5分钟内添加三乙胺(1.14ml，8.20mmol)。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟并冷却至-78℃。一次性添加对硝基苯酚(1.14g，8.20mmol)，并在-78℃处在5分钟内添加三乙胺(1.14ml，8.20mmol)。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌2小时。在用dcm稀释后，将混合物用盐水洗涤，真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至100％etoac的己烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.26
–
8.19(m,2h),7.36(m,4h),7.27
–
7.15(m,3h),4.20(m,2h),4.17
–
4.06(m,1h),3.91(m,1h),3.40(m,2h),3.30(m,3h),1.87(m,2h),1.40(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.07,-3.10。lcms：m/z＝439.11(m+h)。tr＝1.36min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0824]
中间体54.(2s)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(4-(((((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)氧基)苯基)丙酸甲酯
[0825][0826]
在0℃处在10分钟内将l-丙氨酸甲酯盐酸盐(275mg，1.97mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液滴加到二氯磷酸4-硝基苯酯(504mg，1.97mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中。添加完
成后，滴加三乙胺(0.55ml，3.93mmol)。60分钟后，在0℃处相继添加n-苄氧羰酰基-l-酪氨酸甲酯(649mg，1.97mmol)和三乙胺(0.28ml，1.97mmol)，然后使所得混合物升温至室温。3小时后，将反应混合物用水(2
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.34-8.17(m,2h),7.53-7.37(m,2h),7.37-7.09(m,9h),5.02(s,2h),4.43(dd,j＝9.4,5.2hz,1h),4.19-3.97(m,1h),3.70(s,3h),3.62(d,j＝4.4hz,3h),3.16(dd,j＝14.0,5.4hz,1h),2.93(dd,j＝14.1,9.8hz,1h),1.32(td,j＝7.3,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-1.30,-1.51。lcms：ms m/z＝616.03[m+1]，tr＝1.63min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.81min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[0827]
中间体55.(s)-四氢呋喃-3-基((4-硝基苯氧基)(苯氧基)
[0828][0829]
(s)-l-丙氨酸四氢呋喃-3-基酯。向n-cbz-l-丙氨酸(3.31，14.83mmol)、(s)-thf-3-醇(1.0ml，12.34mmol)和edci(2.49g，16.04mmol)在乙腈(20ml)中的混合物中添加dmap(2.26g，18.51mmol)。然后将混合物在室温处搅拌15小时，然后用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(0至80％etoac的己烷溶液)纯化，得到cbz-l-丙氨酸4-thf酯，将其溶解于thf(20ml)中，并在室温处添加20％氢氧化钯(433mg，0.617mmol)。将所得混合物在室温处在h2气体下搅拌2小时，过滤，并真空浓缩，与dcm共蒸发多次，并在高真空下干燥15小时，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.37
–
5.29(m,1h),3.97
–
3.77(m,4h),3.61
–
3.52(m,1h),2.27
–
2.12(m,1h),2.02(dt,j＝12.8,5.6hz,1h),1.76(s,2h),1.34(dd,j＝7.1,1.5hz,3h)。lcms m/z＝159.94(m+h)，tr＝0.12min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0830][0831]
(s)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸四氢呋喃-3-基酯。在-78℃处向(s)-l-丙氨酸四氢呋喃-3-基酯(1.45g，9.10mmol)在dcm(20ml)中的溶液中一次性快速添加二氯磷酸苯酯(1.37ml，9.10mmol)。然后在-78℃处，在5分钟内添加三乙胺(1.27ml，
9.10mmol)。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟并冷却至-78℃。一次性添加对硝基苯酚(1.27g，9.10mmol)，并在-78℃处在5分钟内添加三乙胺(1.27ml，9.10mmol)。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌2小时。在用dcm稀释后，将混合物用盐水洗涤，真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至100％etoac的己烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.49
–
7.31(m,4h),7.30
–
7.12(m,3h),5.29(m,1h),4.14(m,1h),4.00
–
3.79(m,4h),3.82
–
3.60(m,1h),2.17(m,1h),1.95(m,1h),1.40(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.18,-3.20。lcms：m/z＝437.05(m+h)，tr＝1.41min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0832]
中间体56.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3-吗啉基丙酯
[0833][0834]
在0℃处在10分钟内将二氯磷酸4-硝基苯酯(503mg，1.97mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液滴加到l-丙氨酸3-吗啉基丙酯盐酸盐(496mg，1.97mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中。添加完成后，滴加三乙胺(0.55ml，3.93mmol)。90分钟后，在0℃处相继添加苯酚(185mg，1.97mmol)和三乙胺(0.28ml，1.97mmol)，然后使所得混合物升温至室温。30分钟后，将反应混合物用水(2
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用20％-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.32-8.24(m,2h),7.51-7.39(m,2h),7.24-7.12(m,2h),6.97-6.90(m,2h),4.94(m,1h),4.12-4.07(m,2h),4.05-3.93(m,1h),3.76-3.68(m,2h),3.41(d,j＝0.5hz,3h),1.32(td,j＝7.1,1.2hz,3h),1.19(dt,j＝6.3,2.0hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ-2.12,-2.22。lcms：ms m/z＝494.35[m+1]，tr＝1.03min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0835]
中间体57.(r)-四氢呋喃-3-基((4-硝基苯氧基)(苯氧基)
[0836][0837]
(r)-l-丙氨酸四氢呋喃-3-基酯。向n-cbz-l-丙氨酸(3.31g，14.83mmol)、(r)-thf-3-醇(1.0ml，12.34mmol)和edci(2.49g，16.04mmol)在乙腈(20ml)中的混合物中添加dmap(2.26g，18.51mmol)。然后将混合物在室温处搅拌15小时，然后用etoac稀释，用盐水洗
涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(0至50％etoac的己烷溶液，35分钟运行)纯化，得到cbz-l-丙氨酸酯(2.78g)，将其溶解于thf(20ml)中，并在室温处添加20％pd(oh)2(433mg，0.617mmol)。将所得混合物在室温处在氢气气氛下搅拌4.5小时，过滤，真空浓缩，并在高真空下干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.32(ddt,j＝6.5,4.3,1.9hz,1h),3.98
–
3.78(m,4h),3.56(q,j＝7.0hz,1h),2.19(dtd,j＝13.7,8.4,6.4hz,1h),2.05
–
1.92(m,1h),1.79(s,2h),1.34(d,j＝7.0hz,3h)。lcms：m/z＝159.92(m+h)，tr＝0.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0838][0839]
(r)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸四氢呋喃-3-基酯。在-78℃处向(r)-l-丙氨酸四氢呋喃-3-基酯(1.66g，10.44mmol)在dcm(40ml)中的溶液中一次性快速添加二氯磷酸苯酯(1.56ml，10.44mmol)。然后在-78℃处，在5分钟内添加三乙胺(1.45ml，10.44mmol)。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌30分钟并冷却至-78℃。一次性添加对硝基苯酚(1.45g，10.44mmol)，并在-78℃处在5分钟内添加三乙胺(1.45ml，10.44mmol)。在移除干冰浴后，将所得混合物搅拌2小时。在用dcm稀释后，将混合物用盐水洗涤，真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至100％etoac的己烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.43
–
7.31(m,4h),7.25
–
7.14(m,3h),5.29(m,1h),4.21
–
4.10(m,1h),3.93
–
3.79(m,4h),3.79
–
3.71(m,1h),2.17(m,1h),1.97
–
1.85(m,1h),1.44
–
1.37(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.24,-3.26。lcms：m/z＝437.02(m+h)，tr＝1.42min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0840]
中间体58.(氯(苯氧基)硫代磷酰基)-l-丙氨酸甲酯
[0841][0842]
在-78℃处在氩气氛下将硫代磷酰氯(5.08ml，50.0mmol)和三乙胺(6.97ml，50.0mmol)相继添加到苯酚(4.70mg，50.0mmol)在tbme(72ml)中的溶液中。然后使反应混合物升温至室温。1小时后，将所得混合物过滤并且将滤液减压浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷(72ml)中，并且添加l-丙氨酸甲酯盐酸盐(6.97mg，50.0mmol)。将所得悬浮液冷却至-78
℃，并且滴加三乙胺(13.9ml，100mmol)。然后使反应混合物升温至室温。16小时后，将反应混合物减压浓缩，并且将tbme(100ml)添加到残余物中。通过真空过滤去除所得白色固体，并且将滤液减压浓缩，得到直接用于下一步骤的产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d1)δ7.45
–
7.12(m,5h),4.67
–
4.44(m,1h),4.44
–
4.24(m,1h),3.81(s,1.5h),3.78(s,1.5h),1.53(app t,j＝6.8hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d1)δ64.78(s),64.63(s)。
[0843]
中间体59.((((s)-1-(2-乙基丁氧基)-1-氧代丙-2-基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯和((((s)-1-环己氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[0844][0845]
向(s)-1-(环己氧基)-1-氧代丙-2-氯化铵中间体11(680mg，3.27mmol)在thf(10ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(838mg，3.27mmol)。将所得混合物在冰浴中冷却，并且在30分钟内添加三乙胺(1.0ml，6.54mmol)的thf(2ml)溶液。将所得混合物在冰浴下搅拌1.5小时，并且一次性添加(s)-1-(2-乙基丁氧基)-1-氧代丙-2-氯化铵(687mg，3.27mmol)并在冰浴下在30分钟内添加三乙胺(1.0ml，6.54mmol)的thf(2ml)溶液。将所得混合物在冰浴下搅拌1.5小时，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，真空浓缩，并且将所得残余物通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.20(m,2h),7.38(m,2h),4.77(m,1h),4.15
–
3.91(m,4h),3.60(m,2h),1.91
–
1.77(m,2h),1.75
–
1.67(m,2h),1.51(m,2h),1.45
–
1.23(m,15h),0.88(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ8.04。lcms：ms m/z＝528.10[m+1]。
[0846]
中间体60. 4-硝基苯基-n,n'-环己基l-丙氨酸酯磷二酰胺
[0847][0848]
(s)-2-氨基丙酸环己酯盐酸盐。将l-丙氨酸(891mg，10mmol)与环己醇(10ml)混合。滴加三甲基甲硅烷基氯(12.7ml，100mmol)并搅拌20分钟。将反应混合物加热至60℃并搅拌16小时。将反应减压浓缩并与甲苯(5
×
)共沸，得到油状物。添加己烷(100ml)并搅拌15小时，得到固体，将该固体收集，用己烷(100ml)洗涤并在高真空下干燥，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.45(s,3h),4.77(tt,j＝8.4,3.7hz,1h),4.02(q,j＝7.2hz,1h),1.71(m,4h),1.53
–
1.17(m,9h)。
[0849][0850]
4-硝基苯基-n,n'-环己基l-丙氨酸酯磷二酰胺。将二氯磷酸4-硝基苯酯(256mg，1mmol)溶解于无水二氯甲烷(10ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加(s)-2-氨基丙酸环己酯盐酸盐(415mg，2mmol)。滴加三乙胺(698μl，5mmol)并搅拌2小时。将反应用二氯甲烷(15ml)稀释并用2％柠檬酸水溶液(20ml)洗涤。将有机物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗制品经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.30
–
8.13(m,2h),7.49
–
7.27(m,2h),5.50(m,2h),4.62(m,2h),3.85(m,2h),1.67(m,8h),1.51
–
1.18(m,18h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ9.50。ms m/z＝526.0[m+1],524.1[m-1]。
[0851]
中间体61. 4-硝基苯基-n,n'-异丙基l-丙氨酸酯磷二酰胺
[0852][0853]
向l-丙氨酸异丙酯hcl盐(1.97g，11.72mmol)在dcm(20ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(1.5g，5.86mmol)。将所得混合物冷却至约0℃，并且滴加三乙胺(2.37g，23.44mmol)。在移除冰浴之后，将所得混合物搅拌约30分钟，并搅拌过夜。然后将反应混合物用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝445.96[m+1]。
[0854]
中间体62. 4-硝基苯基-n,n'-环丁基甲基l-丙氨酸酯磷二酰胺
[0855][0856]
向l-丙氨酸环丁基甲酯hcl盐(1.51g，7.8mmol)在dcm(20ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(1g，3.9mmol)。将所得混合物冷却至0℃，并且滴加三乙胺(1.58g，15.6mmol)。在移除冰浴之后，将所得混合物搅拌30分钟，并搅拌过夜。然后将反应混合物用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(用
0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝497.98[m+1]。
[0857]
中间体63.(1r,4s)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己酯
[0858][0859]
(1r,4s)-((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己酯。在室温处，将4-二甲氨基吡啶(2.84g，23mmol)添加到((1r,4r)-4-羟基环己基)氨基甲酸叔丁酯(4.00g，19.0mmol)和((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸(4.98g，22.0mmol)和edci(3.13g，20.0mmol)在乙腈(100ml)中的溶液中。4小时后，将反应混合物用二氯甲烷(200ml)稀释，用盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.40
–
7.28(m,5h),5.29(br d,j＝7.7hz,1h),5.10(s,2h),4.78
–
4.60(m,1h),4.47
–
4.19(m,2h),3.45(s,1h),2.08
–
1.89(m,4h),1.54
–
1.34(m,14h),1.28
–
1.16(m,2h)。lcms：ms m/z＝420.99[m+1]。
[0860][0861]
(1r,4s)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己酯。在室温处在氩气氛下，将氢气球附加到含有(1r,4s)-((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己酯(1.96g，4.66mmol)和碳载钯(10重量％，2.0g)在四氢呋喃(50ml)中的溶液的烧瓶中。将容器抽空并重新充入氢气气氛(3
×
)，并且剧烈搅拌反应混合物。1.5小时后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且将滤液减压浓缩，得到粗cbz脱保护材料。将粗残余物溶于二氯甲烷(23ml)中并且将所得混合物冷却至0℃。相继添加二氯磷酸苯酯(0.70ml，4.7mmol)和三乙胺(0.66ml，4.7mmol)。1小时后，然后添加4-硝基苯酚(660mg，4.74mmol)和三乙胺(0.66ml，4.7mmol)。1.5小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d1)δ8.26
–
8.18(m,2h),7.43
–
7.30(m,4h),7.25
–
7.17(m,3h),4.77
–
4.58(m,1h),4.40(br s,1h),4.18
–
3.99(m,1h),3.93
–
3.80(m,1h),3.44(br s,1h),2.07
–
1.87(m,4h),1.52
–
1.36(m,14h),1.30
–
1.16(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d1)δ-3.15(s)。lcms：ms m/z＝563.88[m+1]。
[0862]
中间体64.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯
[0863]
方法1.
[0864][0865]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯。将cbz-l-丙氨酸(223mg，1.00mmol)溶解于无水mecn(10ml)中。将反式-1-(boc-氨基)-4-(羟甲基)环己烷(229mg，1.00mmol)和edci(230mg，1.2mmol)添加到反应中，然后将其搅拌25分钟。一次性添加dmap(122mg，1mmol)，并且将反应搅拌4小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(2
×
5ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-40％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.41
–
7.27(m,5h),5.29(d,j＝7.6hz,1h),5.11(s,2h),4.47
–
4.24(m,2h),3.96(d,j＝6.6hz,2h),3.37(bs,1h),2.03(m,2h),1.78(m,2h),1.58(m,2h),1.44(m,12h),1.10(m,4h)。
[0866][0867]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯。将((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯(348mg，0.800mmol)溶解于12ml无水四氢呋喃中。将degussa型10％碳载钯(25mg)添加到反应中，然后在大气氢气下搅拌3小时。滤出碳载钯，并且滤液不经进一步纯化即用于下一反应。将二氯磷酸苯酯(119μl，0.800mmol)溶解于15ml无水二氯甲烷中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。然后将上述滤液滴加到反应溶液中，然后搅拌30分钟。滴加三乙胺(120μl，0.88mmol)并搅拌1小时。一次性添加对硝基苯酚(100mg，0.72mmol)。滴加三乙胺(123μl，0.88mol)，并且将反应混合物在室温处搅拌2小时。然后将反应混合物用二氯甲烷(10ml)稀释并用水(3
×
10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-40％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.18(m,2h),7.44
–
7.30(m,4h),7.27
–
7.17(m,3h),4.35(s,1h),4.22
–
4.06(m,1h),3.99
–
3.88(m,2h),3.85(t,j＝10.6hz,1h),3.36(s,1h),2.03(m,2h),1.75(m,2h),1.57(m,2h),1.48
–
1.36(m,12h),1.15
–
0.98(m,4h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ3.12,3.13。lcms：ms m/z＝478.2[m+1]。
[0868]
方法2.
[0869][0870]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯。在室温处，将反式-1-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(羟甲基)环己烷(510mg，2.18mmol)，然后n-(3-二甲基氨基丙基)-n
′‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(509g，2.62mmol)添加到z-ala-oh(489g，2.18mmol)在乙腈(22ml)中的溶液中。30分钟后，添加4-(二甲基氨基)吡啶(267mg，2.18mmol)。18小时后，将反应用乙酸乙酯(100ml)稀释，并将所得混合物用10％柠檬酸水溶液(2
×
100ml)和盐水(100ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-50％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.41-7.29(m,5h),5.28(s,1h),5.11(s,2h),4.46-4.27(m,2h),3.96(d,j＝6.6hz,2h),3.37(s,1h),2.03(s,2h),1.78(s,2h),1.56(s,2h),1.44(s,9h),1.42(d,j＝7.2hz,3h),1.08(t,j＝9.7hz,4h)。lcms：ms m/z＝434.87[m+1]，tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.96min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[0871][0872]
l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯。将碳载钯(198mg，10重量％)添加到用氩气吹扫的((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯(719g，1.65mmol)在四氢呋喃(24ml)中的溶液中。然后将混合物用氢气吹扫并在室温处搅拌。1小时后，将混合物通过硅藻土过滤，将过滤器用四氢呋喃冲洗，并且减压去除挥发物，获得产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.38(s,1h),4.02-3.85(m,2h),3.55(q,j＝7.0hz,1h),3.38(s,1h),2.04(d,j＝7.1hz,2h),1.83-1.73(m,2h),1.63(s,2h),1.44(s,10h),1.34(d,j＝7.0hz,3h),1.09(t,j＝10.0hz,4h)。lcms：ms m/z＝300.93[m+1]，tr＝0.65min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0873][0874]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯。在0℃处在15分钟内向l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯(553mg，1.65mmol)的四氢呋喃(24ml)溶液中缓慢添加二氯磷酸苯酯(247μl，1.65mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液。在添加完成后，滴加三乙胺(0.26ml，1.82mmol)。1小时后，然后在0℃处相继添加4-硝基苯酚(240mg，1.65mmol)和三乙胺(0.26ml，1.82mmol)，然后使所得混合物升温至室温。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释并用水(3
×
75ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.23(ddd,j＝9.3,1.3,0.6hz,2h),7.44
–
7.31(m,4h),7.25
–
7.16(m,3h),4.36(s,1h),4.22
–
4.06(m,1h),3.96
–
3.90(m,2h),3.84(t,j＝10.6hz,1h),3.36(s,1h),2.02(s,2h),1.83
–
1.68(m,2h),1.57(s,2h),1.44(s,9h),1.41(dd,j＝7.1,3.2hz,3h),1.06(t,j＝9.6hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.13(d,j＝2.9hz)。lcms：ms m/z＝577.8[m+1]，tr＝1.28min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝6.35min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[0875]
中间体65. 4-硝基苯基-n,n'-丁基l-丙氨酸酯磷二酰胺
[0876][0877]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸丁酯。将boc-l-丙氨酸(380mg，2.0mmol)溶解于无水mecn(10ml)中。将1-丁醇(920μl，10.0mmol)和edci(460mg，2.4mmol)添加到反应中，然后将其搅拌15分钟。一次性添加dmap(240mg，2.0mmol)，并将反应搅拌14小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释反应，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.04(m,1h),4.29(m,1h),4.18
–
4.07(m,2h),1.67
–
1.59(m,2h),1.44(s,9h),1.38(m,5h),0.93(t,j＝7.4hz,3h)。
[0878][0879]
4-硝基苯基-n,n'-丁基l-丙氨酸酯磷二酰胺。将(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸丁酯(291mg，1.18mmol)溶解于7ml 4m hcl的二噁烷溶液中并搅拌1小时。将反应混合物减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于无水二氯甲烷(10ml)中并在大气氮气下在冰浴中搅拌。一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(152mg，0.59mmol)，并将反应搅拌10分钟。将三乙胺(270μl，1.95mmol)溶解于1ml无水二氯甲烷中并滴加到反应溶液中。将反应混合物搅拌1小时。将三乙胺(270μl，1.95mmol)用700μl无水二氯甲烷溶解并滴加到反应中。将反应混合物在室温处搅拌16小时。将反应混合物用二氯甲烷(15ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio2combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.15(m,2h),7.43
–
7.34(m,2h),4.19
–
3.98(m,5h),3.80
–
3.61(m,1h),3.58(m,2h),1.67
–
1.59(m,4h),1.45
–
1.30(m,10h),0.93(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ7.93。lcms：ms m/z＝474.0[m+1]。
[0880]
中间体66.(2s)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(4-(((((s)-1-异丙氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)氧基)苯基)丙酸甲酯
[0881][0882]
在0℃处在10分钟内将二氯磷酸4-硝基苯酯(504mg，1.97mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液滴加到l-丙氨酸异丙酯盐酸盐(330mg，1.97mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中。添加完成后，滴加三乙胺(0.55ml，3.93mmol)。60分钟后，在0℃处相继添加n-苄氧羰酰基-l-酪氨酸甲酯(649mg，1.97mmol)和三乙胺(0.28ml，1.97mmol)，然后使所得混合物升温至室温。30分钟后，将反应混合物用水(2
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用20％-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.32-8.22(m,2h),7.49-7.37(m,2h),7.35-7.13(m,9h),5.02(s,2h),4.93(pd,j＝6.3,1.1hz,1h),4.43(dd,j＝9.4,5.2hz,1h),4.00(dtd,j＝10.1,7.7,6.5hz,1h),3.70(s,3h),3.15(dd,j＝14.0,5.4hz,1h),2.93(dd,j＝13.9,9.6hz,1h),1.32(td,j＝7.2,1.2hz,3h),1.20-1.16(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-1.26,-1.49。lcms：ms m/z＝644.11[m+1]，tr＝1.56min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％
甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝6.21min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[0883]
中间体67.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-吗啉基乙酯
[0884][0885]
在0℃处在10分钟内将二氯磷酸4-硝基苯酯(505mg，1.97mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液滴加到l-丙氨酸2-吗啉基乙酯盐酸盐(496mg，1.97mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中。添加完成后，滴加三乙胺(0.55ml，3.93mmol)。90分钟后，在0℃处相继添加苯酚(185mg，1.97mmol)和三乙胺(0.28ml，1.97mmol)，然后使所得混合物升温至室温。30分钟后，将反应混合物用水(2
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用20％-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.28-8.14(m,2h),7.41-7.29(m,4h),7.24-7.16(m,4h),6.87-6.81(m,1h),4.14-4.04(bs,2h),2.61-2.57(bs,4h),2.45-3.40(bs,4h),1.42(dt,j＝6.3,2.0hz,6h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3)δ-2.70。lcms：ms m/z＝480.27[m+1]，tr＝0.96min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.23min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：kinetx 2.6u 100a c18，100mm
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-8.5min 2-98％acn，8.5min-10.0min 98％acn，1.5ml/min。
[0886]
中间体68.((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(二异丙基氨基)乙酯
[0887][0888]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸2-(二异丙基氨基)乙酯。在室温处，将n-(3-二甲基氨基丙基)-n
′‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(2.06g，10.8mmol)添加到z-ala-oh(2.00g，8.96mmol)和2-(二异丙基氨基)乙醇(3.2ml，17.9mmol)在乙腈(125ml)中的溶液中。10分钟后，添加4-(二甲基氨基)吡啶(1.09g，8.96mmol)。2天后，将反应混合物浓缩至一半体积，并且将混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(100ml)和盐水(100ml)
7.21(m,3h),4.71-4.52(m,1h),4.12-3.99(m,2h),4.00-3.83(m,3h),3.06-2.86(m,2h),2.56(td,j＝7.0,3.8hz,2h),1.31(ddd,j＝7.1,4.7,1.1hz,4h),0.94(d,j＝6.5hz,13h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ-2.15,-2.30。lcms：ms m/z＝494.25[m+1]，tr＝1.27min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.97min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[0893]
中间体69.(2s)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(4-(((((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)氧基)苯基)丙酸异丙酯
[0894][0895]
((苄氧基)羰基)-l-酪氨酸异丙酯。将氯甲酸苄酯(0.94ml，6.58mmol)滴加到l-酪氨酸异丙酯(1.0g，4.48mmol)在丙酮(4.5ml)和7重量％碳酸钠水溶液(4.5ml)中的混合物中。2小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(25ml)稀释，并将所得混合物用水(10ml)和盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.39-7.20(m,5h),7.06-6.97(m,2h),6.74-6.62(m,2h),5.05(d,j＝2.6hz,2h),4.94(p,j＝6.3hz,1h),4.31(dd,j＝8.6,6.1hz,1h),2.99(dd,j＝13.9,6.1hz,1h),2.84(dd,j＝13.9,8.6hz,1h),1.22(d,j＝6.3hz,3h),1.14(d,j＝6.3hz,3h)。lcms：ms m/z＝357.87[m+1]，tr＝1.36min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.19min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[0896][0897]
(2s)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-(4-(((((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)氧基)苯基)丙酸异丙酯。在0℃处将l-丙氨酸异丙酯盐酸盐(97.2mg，0.70mmol)的二氯甲烷(8.0ml)溶液添加到二氯磷酸4-硝基苯酯(179.7mg，
0.70mmol)在二氯甲烷(7.5ml)中的溶液中。添加完成后，滴加三乙胺(0.22ml，1.57mmol)。60分钟后，在0℃处相继添加((苄氧基)羰基)-l-酪氨酸异丙酯(250.9mg，0.70mmol)的二氯甲烷(8.0ml)和三乙胺(0.11ml，0.78mmol)溶液，然后使所得混合物升温至室温。20分钟后，将反应混合物用水(2
×
20ml)和盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.32
–
8.24(m,2h),7.43(ddd,j＝16.0,9.2,1.1hz,2h),7.36
–
7.09(m,9h),5.03(s,2h),4.97(p,j＝6.2hz,1h),4.35(d,j＝8.2hz,1h),4.14
–
3.95(m,1h),3.62(d,j＝4.5hz,3h),3.12(dt,j＝12.6,5.9hz,1h),2.92(t,j＝11.6hz,1h),1.35
–
1.30(m,3h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.16(d,j＝6.2hz,4h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-1.31,-1.52。lcms：ms m/z＝644.07[m+1]，tr＝1.56min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝6.17min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[0898]
中间体70.((2-(甲硫基)乙氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[0899][0900]
将二氯磷酸4-硝基苯酯(512mg，2mmol)与10ml无水二氯甲烷混合，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将l-丙氨酸异丙酯盐酸盐(335mg，2mmol)溶解于无水二氯甲烷(3ml)中并滴加到反应中。将反应混合物搅拌30分钟。将三乙胺(927μl，6.6mmol)溶解于无水二氯甲烷(1ml)中并滴加到反应中，并且将反应搅拌60分钟。一次性添加2-(甲硫基)乙醇(74μl，2mmol)，并将反应混合物搅拌16小时。将反应混合物用二氯甲烷(15ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.18(m,2h),7.44
–
7.33(m,2h),5.02(m,1h),4.33
–
4.21(m,2h),4.07
–
3.94(m,1h),3.70(m,1h),2.84
–
2.73(m,2h),2.14(m,3h),1.40(m,3h),1.29
–
1.19(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ2.08,2.20。lcms：ms m/z＝834.5[2m+na]；405.1[m-1]，tr＝1.33min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.60min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[0901]
中间体71.((2-甲氧基乙氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[0902][0903]
将二氯磷酸4-硝基苯酯(512mg，2mmol)与10ml无水二氯甲烷混合，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将l-丙氨酸异丙酯盐酸盐(335mg，2mmol)溶解于无水二氯甲烷(3ml)中并滴加到反应中。将反应混合物搅拌30分钟。将三乙胺(927μl，6.6mmol)溶解于无水二氯甲烷(1ml)中并滴加到反应混合物中。将反应混合物搅拌60分钟。一次性添加2-甲氧基乙醇(158μl，2mmol)，并将反应混合物搅拌16小时。将反应混合物用二氯甲烷(15ml)稀释并用水(3
×
10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio2combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.25
–
8.15(m,2h),7.43
–
7.32(m,2h),5.00(m,1h),4.36
–
4.17(m,2h),4.06
–
3.82(m,2h),3.65
–
3.55(m,2h),3.37(m,3h),1.41
–
1.34(m,3h),1.27
–
1.18(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ2.52,2.69。lcms：ms m/z＝391.0[m+1]；389.1[m-1]，tr＝1.24min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.29min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[0904]
中间体72.((2-(甲基磺酰基)乙氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[0905][0906]
将三氯氧磷(280μl，3mmol)溶解于无水四氢呋喃(10ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将2-(甲基磺酰基)乙醇(280μl，3mmol)溶解于无水四氢呋喃(2ml)中并滴加到反应中。将反应搅拌1小时。一次性添加l-丙氨酸异丙酯盐酸盐(503mg，3mmol)，并将反应混合物搅拌1小时。将三乙胺(1.38ml，9.9mmol)溶解于无水四氢呋喃(2ml)中并滴加到反应中。将反应搅拌90分钟。一次性添加对硝基苯酚(417mg，3mmol)。添加三乙胺(460μl，3.3mmol)。将反应混合物搅拌16小时。
[0907]
然后将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释并用水(5
×
15ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-80％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.28
–
8.16(m,2h),7.44
–
7.32(m,2h),5.00(m,1h),4.71
–
4.51(m,2h),4.06
–
3.85(m,2h),3.51
–
3.33(m,2h),2.96(m,3h),1.40
–
1.35(m,3h),1.27
–
1.20(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ2.06,2.29。lcms：ms m/z＝439.0[m+1]；tr＝1.18min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.08min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[0908]
中间体73.((全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯单一异构体
[0909][0910]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯。在0℃处在氩气氛下向(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(12.41g，66mmol)和2-(2-乙氧基乙氧基)乙-1-醇(8.00g，60mmol)在无水二氯甲烷(100ml)中的搅拌溶液中添加n-甲基吗啉(19.67ml，179mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(0.15g，1.2mmol)和三丙基膦酸环酐(42.6ml，72mmol，50％的乙酸乙酯溶液)。然后将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用水(50ml)洗涤，用10％柠檬酸溶液(2
×
40ml)洗涤两次，用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
40ml)洗涤两次，并用盐水(50ml)洗涤一次，经硫酸钠干燥，通过3cm硅胶层过滤，将该硅胶层用另外的二氯甲烷洗涤。将合并的有机物减压浓缩，与二氯甲烷共蒸馏并在高真空下干燥过夜，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.27(d,j＝7.4hz,1h),4.23
–
4.14(m,1h),4.14
–
4.06(m,1h),4.05
–
3.94(m,1h),3.64
–
3.56(m,2h),3.55
–
3.49(m,2h),3.49
–
3.39(m,4h),1.38(s,9h),1.23(d,j＝7.4hz,3h),1.09(t,j＝7.0hz,3h)。
[0911][0912]
((全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯单一异构体。将中间体(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯(18.3g，59.93mmol)溶解于50ml 4m hcl的1,4-二噁烷溶液中，并将反应混合物在室温处搅拌2小时，减压浓缩并与甲苯共蒸馏，得到固体，将该固体在高真空下干燥1小时。将固体悬浮于二氯甲烷(100ml)中，并在-78℃处相继添加二氯磷酸苯酯(9.81ml，65.92mmol)和三乙胺(18.28ml，
131.84mmol)，并将所得混合物在室温处搅拌2小时。将反应混合物冷却至0℃，然后相继添加五氟苯酚(11.03g，59.93mmol)和三乙胺(10.80ml，78.05mmol)，然后使所得混合物升温至室温。3小时后，将反应混合物冷却至0℃并滤出固体，将滤液用饱和氯化铵水溶液(100ml)、水(100ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机物经硫酸钠干燥并通过3cm硅胶层过滤，将该硅胶层用1:1乙酸乙酯和二氯甲烷混合物(100ml)洗涤。将合并的有机物减压浓缩，得到21.7g粗产物(基于nmr，该固体粗产物为两种磷上的异构体的混合物)。将固体溶解于最少量的沸腾的二异丙醚中，并将混合物在室温下剧烈搅拌过夜。将固体产物滤出，并用冷二异丙醚(2
×
20ml)和己烷(3
×
40ml)洗涤，得到产物(基于nmr，在磷上为单一异构体)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.47
–
7.36(m,2h),7.30
–
7.20(m,3h),6.92(dd,j＝14.2,9.9hz,1h),4.21
–
4.08(m,2h),4.07
–
3.92(m,1h),3.62
–
3.56(m,2h),3.53
–
3.47(m,2h),3.45
–
3.36(m,4h),1.29(d,j＝7.1hz,3h),1.07(t,j＝7.0hz,3h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-154.24(d,j＝21.5hz,2f),-160.86(t,j＝23.1hz,1f),-163.68(t,j＝21.7hz,2f)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ0.40。lcms：ms m/z＝528.06[m+1]，tr＝1.64min；lc系统：thermo accela 1250uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-0.2min 2％乙腈，0.2min-1.5min 2-100％乙腈，1.5min-2.2min 100％乙腈，2.2min-2.4min 100％-2％乙腈，2.4min-2.5min 2％乙腈，2μl/min。
[0913]
中间体74.((s)-(4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[0914][0915]
将中间体25(1.3g，2.90mmol)悬浮于二异丙醚(3ml)中，并在室温处添加对硝基苯酚(14mg，0.1mmol)和dbu(0.05ml，0.335mmol)。将所得混合物搅拌4小时，并且添加1n盐酸水溶液和乙酸乙酯。将有机层分开，并经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将所得残余物溶于二异丙醚(2ml)中并进行超声处理以分散固体。通过真空过滤收集固体，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.27(d,j＝9.1hz,2h),7.51-7.44(m,2h),7.38(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.28-7.17(m,3h),4.68(dt,j＝8.9,4.6hz,1h),4.02(dq,j＝9.9,7.2hz,1h),1.80-1.64(m,5h),1.52(s,1h),1.57-1.46(m,1h),1.44-1.22(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-1.32。ms m/z＝449(m+h)
+
。
[0916]
b.化合物
[0917]
实施例1.(s)-2-(((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯
[0918][0919]
将中间体1(50mg，0.172mmol)和中间体18(84mg，0.206mmol)在无水n,n-二甲基甲酰胺(2ml)中混合。一次性添加氯化镁(36mg，0.378mmol)。在50℃处加热反应混合物。添加n,n-二异丙基乙胺(75μl，0.43mmol)，并将反应在50℃处搅拌4.5小时。将反应混合物冷却，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％柠檬酸水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-2％-5％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.36
–
7.25(m,2h),7.25
–
7.12(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.1hz,1h),4.91
–
4.84(m,1h),4.62(dd,j＝5.6,5.0hz,1h),4.47(d,j＝5.6hz,1h),4.45
–
4.30(m,2h),3.85(dq,j＝10.0,7.1hz,1h),1.25(d,j＝7.2hz,3h),1.15(t,j＝6.4hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.31。ms m/z＝561.0[m+1],559.0[m-1]。
[0920]
实施例2.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环丁基甲酯
[0921][0922]
将中间体2(50mg，0.116mmol)和中间体15(60mg，0.139mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(17mg，0.174mmol)。将反应升温至60℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)，并且将反应在60℃处搅拌17小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(330μl)并搅拌20小时。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加1n氢氧化钠溶液，得到ph为10。收集有机层并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.37
–
7.10(m,5h),6.84(dd,j＝4.5,2.3hz,1h),6.73(dd,j＝4.5,2.4hz,1h),5.53
–
5.45(m,1h),4.62(q,j＝5.5hz,1h),4.54
–
4.28(m,3h),4.10
–
3.80(m,3h),2.65
–
2.45(m,1h),2.08
–
1.62(m,6h),1.26(d,j＝7.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25,3.24。
ms m/z＝587.2[m+1],585.2[m-1]。
[0923]
实施例3.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-3-苯基丙酸乙酯
[0924][0925]
在室温处向中间体4(52.0mg，0.121mmol)、中间体19(68.0mg，0.145mmol)和氯化镁(17.2mg，0.181mmol)的混合物中添加thf(1.0ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌10分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.052ml，0.301mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌30分钟。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.200ml，2.4mmol)。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用饱和碳酸钠水溶液淬灭至ph＝7。将粗混合物通过制备型hplc(phenominex gemini nx 10u c18 250
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。lc/ms：tr＝1.27min，ms m/z＝623.00[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.88(m,3h),7.37
–
6.84(m,12h),6.71(t,j＝4.2hz,2h),6.22(ddd,j＝23.7,12.9,10.5hz,1h),5.36(dd,j＝9.2,6.1hz,1h),4.39(s,1h),4.16(dd,j＝16.2,5.3hz,1h),4.09
–
3.83(m,5h),2.93(dt,j＝14.3,7.3hz,1h),2.78(m,1h),1.01(t,7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ3.85(s),2.86(s)。
[0926]
实施例4.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环己酯
[0927][0928]
在室温处，向中间体4(99mg，0.30mmol)、中间体25(201mg，0.45mmol)和mgcl2(43mg，0.45mmol)在dmf(4ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.13ml，0.75mmol)。将所得混合物在室温下搅动15小时并且通过制备hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，10％-100％乙腈/水梯度)来纯化，得到中间体，将该中间体溶解在acn(3ml)和c-hcl(0.1ml)中。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，冷却，并且通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，10％-80％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.5h),7.78(s,0.5h),7.42
–
7.05(m,5h),6.84
氨基丙酸2-乙基丁酯盐酸盐(87mg，0.417mmol)和三乙胺(116μl，0.834mmol)并搅拌30分钟。添加更多的(s)-2-氨基丙酸2-乙基丁酯盐酸盐(500mg)。添加三乙胺，得到ph为9。将反应搅拌16小时，用乙酸乙酯(20ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
20ml)、5％柠檬酸水溶液(20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中，添加12m盐酸(400μl)，并且将混合物搅拌4小时。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝4.8hz,1h),4.64
–
4.57(m,1h),4.49(d,j＝5.7hz,1h),4.31(dd,j＝11.1,7.1hz,1h),4.21(dd,j＝11.1,5.8hz,1h),4.11
–
3.94(m,4h),3.94
–
3.84(m,2h),1.58
–
1.29(m,10h),0.98
–
0.82(m,18h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.61。ms m/z＝682.1[m+1],680.1[m-1]。
[0939]
实施例8.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环丙基甲酯
[0940][0941]
在室温处，向中间体4(70mg，0.211mmol)、中间体20(133mg，0.32mmol)和mgcl2(30mg，0.32mmol)在thf(3ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.092ml，0.53mmol)。将所得混合物在60℃处搅拌15小时，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将所得残余物溶解于acn(3ml)中并添加浓hcl(0.3ml)。将混合物在室温处搅拌2小时，并且通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr150
×
30mm柱，10％-70％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.39
–
7.10(m,5h),6.85(m,1h),6.73(m,1h),5.50(m,1h),4.62(m,1h),4.58
–
4.24(m,3h),4.00
–
3.69(m,3h),1.27(m,3h),1.17
–
0.95(m,1h),0.49(m,2h),0.29
–
0.15(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.29,3.22。ms m/z 573(m+h)
+
。
[0942]
(s)和(r)非对映体的分离。通过手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，庚烷80％乙醇20％)分离产物，得到非对映体：
[0943][0944]
实施例9。实施例8的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.29(dd,j＝8.7,7.1hz,2h),7.22
–
7.06(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,
1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.55
–
4.44(m,2h),4.36(dd,j＝10.9,5.1hz,1h),3.97
–
3.77(m,3h),1.26(dd,j＝7.2,1.2hz,3h),1.15
–
1.04(m,1h),0.58
–
0.45(m,2h),0.32
–
0.18(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.30。
[0945]
实施例10。实施例8的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.38
–
7.26(m,2h),7.29
–
7.11(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.1hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.47(d,j＝5.6hz,1h),4.42(dd,j＝10.9,6.3hz,1h),4.34(dd,j＝10.9,5.4hz,1h),3.98
–
3.82(m,2h),3.78(dd,j＝11.4,7.3hz,1h),1.27(dd,j＝7.2,1.1hz,3h),1.11
–
0.98(m,1h),0.52
–
0.45(m,2h),0.25
–
0.14(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.23。
[0946]
实施例11.新戊酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯
[0947][0948]
在室温处向中间体4(22.0mg，0.066mmol)、中间体21(28.1mg，0.066mmol)和氯化镁(6.3mg，0.166mmol)的混合物中添加乙腈(0.50ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌5分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.03ml，0.066mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.077ml，0.93mmol)。1小时后，将反应混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和乙酸乙酯(20ml)稀释。将各层分开并且将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。ms m/z＝575.00[m+h]。
[0949]
(s)和(r)非对映体的分离。经由手性制备型hplc(chiralpak ic,150
×
4.6mm，庚烷80％乙醇20％)纯化产物，得到非对映体：
[0950][0951]
实施例12。实施例11的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.80(s,1h),7.33(t,j＝7.9hz,2h),7.27
–
7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝4.9hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.47(d,j＝5.6hz,1h),4.45
–
4.29(m,2h),3.96(t,j＝5.7hz,2h),3.14(dt,j＝11.8,5.7hz,2h),1.12(s,9h)。
31
p nmr(162mhz,cd3od)δ5.24(s)。ms m/z＝575.00[m+h]。
[0952]
实施例13。实施例11的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.77(s,1h),7.32
–
7.25(m,2h),7.19
–
7.12(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.72(d,j＝4.5hz,1h),5.50
(d,j＝4.9hz,1h),4.62(t,j＝5.2hz,1h),4.49(d,j＝5.5hz,1h),4.42(dd,j＝10.9,6.1hz,1h),4.33(dd,j＝10.9,5.5hz,1h),3.99(d,j＝5.3hz,1h),3.19
–
3.10(m,2h),1.15(s,9h)。
31
p nmr(162mhz,cd3od)δ5.05(br s)。ms m/z＝575.00[m+h]。
[0953]
实施例14.
[0954][0955]
将中间体4(50mg，0.15mmol)和中间体60(95mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(21mg，0.225mmol)。将反应升温至50℃并搅拌30分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(300μl)并在冰浴中搅拌60分钟。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为16。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝4.8hz,1h),4.70(m,2h),4.61(dd,j＝5.7,4.9hz,1h),4.49(d,j＝5.7hz,1h),4.36
–
4.17(m,2h),3.86(m,2h),1.88
–
1.63(m,8h),1.58
–
1.25(m,18h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.64。ms m/z＝678.1[m+1],676.2[m-1]。
[0956]
实施例15.(s)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-甲基吡咯烷-3-基酯
[0957][0958]
将中间体4(99mg，0.3mmol)和中间体23(162mg，0.36mmol)混合并溶解于2ml无水thf中。一次性添加氯化镁(86mg，0.9mmol)。添加dipea(131μl，0.75mmol)，并将反应在50℃处搅拌5小时。
[0959]
将反应用etoac(15ml)稀释并用水(4
×
15ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-10％-20％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于mecn(7ml)中并在冰浴中搅拌。滴加浓盐酸水溶液(500μl)。将反应在冰浴中搅拌2小时。将反应用etoac(30ml)稀释并添加饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)。将
混合物搅拌10分钟。收集有机萃取物，并用etoac(2
×
10ml)萃取含水部分。将有机萃取物合并，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于mecn和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.39
–
7.26(m,2h),7.26
–
7.10(m,3h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.49(m,1h),5.18
–
4.98(m,1h),4.62(m,1h),4.55
–
4.28(m,3h),3.89(m,1h),2.78(m,1h),2.69
–
2.54(m,2h),2.32(m,4h),2.23
–
2.08(m,1h),1.78(m,1h),1.27(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.28,3.14。lcms：ms m/z＝602.2[m+1],600.2[m-1]，tr＝0.99min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝1.84min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝3.868min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[0960]
实施例16.反式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯
[0961][0962]
以与针对实施例3所述类似的方式由中间体(129mg，0.25mmol)和中间体4(55mg，0.25mmol)获得产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(m,1h),7.32(m,2h),7.25
–
7.12(m,3h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(dd,j＝5.1,1.9hz,1h),4.69
–
4.49(m,2h),4.49
–
4.32(m,3h),3.93
–
3.75(m,1h),2.23
–
1.71(m,5h),1.44
–
1.20(m,7h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.28,3.22。
19
f nmr(377mhz，甲醇-d4)δ-75.31-75.40(m)。ms m/z＝669[m+h]。
[0963]
通过sfc使用30％乙醇(ad-h4.6
×
100m柱)分离产物。
[0964]
实施例17.反式-((r)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。
[0965][0966]
实施例16的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.29(t,j＝7.9hz,2h),7.21
–
7.10(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j
＝5.0hz,1h),4.62(q,j＝5.2hz,2h),4.52(d,j＝5.6hz,1h),4.47(dd,j＝10.9,6.0hz,1h),4.35(dd,j＝10.9,5.1hz,1h),3.83(dq,j＝9.1,7.1hz,1h),2.10(m,1h),1.96(m,4h),1.38(m,4h),1.23(dd,j＝7.1,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.29。
19
f nmr(377mhz，甲醇-d4)δ-75.41(d,j＝8.6hz)。
[0967]
实施例18.反式-((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯
[0968][0969]
实施例16的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.39
–
7.27(m,2h),7.29
–
7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.58(m,2h),4.43(m,2h),4.35(dd,j＝10.9,5.5hz,1h),3.86(dq,j＝9.9,7.4hz,1h),2.14
–
1.81(m,5h),1.32(m,4h),1.24(dd,j＝7.1,1.0hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.22。
19
f nmr(377mhz，甲醇-d4)δ-75.33(d,j＝8.5hz)。
[0970]
还以与针对实施例3所述类似的方式由中间体29(701mg，1.36mmol)和中间体4(300mg，0.91mmol)获得产物。
[0971]
实施例19.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-甲基哌啶-4-基酯
[0972][0973]
在室温处，向中间体4(70mg，0.211mmol)、中间体30(293mg，0.317mmol)和mgcl2(30mg，0.317mmol)在thf(3ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.09ml，0.528mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到缩丙酮中间体，将其溶解于乙腈(3ml)中并添加浓hcl(0.5ml)。将所得混合物搅拌2小时，真空浓缩，并冻干，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.85(m,1h),7.41
–
7.12(m,5h),6.97(m,1h),6.79(m,1h),5.51(m,1h),5.04(m,1h),4.62(m,1h),4.53
–
4.31(m,3h),3.98(m,1h),3.66(m,5h),2.82(m,2h),2.10(m,4h),1.30(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.32,3.10。lcms：ms m/z＝616.24[m+1-hcl]；tr＝0.54min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[0974]
实施例20.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸(四氢-2h-吡喃-4-基)甲酯
[0975][0976]
将中间体4(50mg，0.15mmol)和中间体31(84mg，0.18mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(86mg，0.906mmol)，并将反应在50℃处搅拌10分钟。添加dipea(158μl，0.906mmol)，并将反应在50℃处搅拌2小时。添加更多的氯化镁(50mg)并在50℃处搅拌16小时。
[0977]
将反应用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，并用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌1小时。将反应用etoac(25ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/dcm)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.41
–
7.07(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.57
–
5.40(m,1h),4.62(m,1h),4.56
–
4.28(m,3h),3.87(m,5h),3.31(m,2h),1.94
–
1.72(m,1h),1.63
–
1.46(m,2h),1.34
–
1.16(m,5h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.23(s),3.19(s)。ms m/z＝617.1[m+1]；615.0[m-1]。
[0978]
实施例21.反式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(叔丁基)环己酯
[0979][0980]
以与针对实施例3所述类似的方式由中间体32(116mg，0.23mmol)和中间体4(51mg，0.15mmol)获得产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.32(m,2h),7.25
–
7.18(m,2h),7.19
–
7.10(m,1h),6.85(m,1h),6.76
–
6.69(m,1h),5.51(m,1h),4.65
–
4.57(m,1h),4.51(m,1h),4.47
–
4.39(m,2h),4.35(m,1h),3.93
–
3.76(m,1h),1.93(m,2h),1.74(m,2h),1.24(m,5h),1.13
–
0.89(m,3h),0.84(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.35,3.28。ms m/z＝657[m+h]。
[0981]
通过chiralpak sfc(chiralpak id 21
×
250mm柱，30％甲醇)分离混合物。
[0982]
实施例22.反式-((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(叔丁基)环己酯
[0983][0984]
实施例21的第一洗脱非对映体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.33(t,j＝7.8hz,2h),7.26
–
7.12(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝4.9hz,1h),4.59(t,j＝5.3hz,1h),4.51(tt,j＝11.3,4.5hz,1h),4.46
–
4.39(m,2h),4.35(dd,j＝10.9,5.6hz,1h),3.89
–
3.81(m,1h),1.99
–
1.86(m,2h),1.75(t,j＝12.0hz,2h),1.31
–
1.18(m,5h),1.12
–
0.89(m,3h),0.83(s,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25。
[0985]
实施例23.反式-((r)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(叔丁基)环己酯
[0986][0987]
实施例21的第二洗脱非对映体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.29(t,j＝7.8hz,2h),7.18
–
7.11(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝5.0hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.59
–
4.43(m,3h),4.36(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),3.82(q,j＝7.9hz,1h),1.94(m,2h),1.79(m,2h),1.36
–
1.20(m,5h),1.13
–
0.94(m,3h),0.85(s,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.32。
[0988]
实施例24.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯
[0989][0990]
在室温处将乙腈(2.5ml)添加到中间体4(200mg，0.604mmol)、中间体16(280mg，0.604mmol)和氯化镁(57mg，0.60mmol)的混合物中。将混合物加热至50℃持续5分钟，并添加n,n-二异丙基乙胺(0.263ml，0.604mmol)。22小时后，使反应混合物冷却至室温，并滴加
浓盐酸水溶液(0.5ml)。1小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,0.6h),7.75(s,0.4h),7.40
–
7.26(m,5h),6.85
–
6.80(m,1h),6.75
–
6.69(m,1h),5.54
–
5.48(m,2h),5.06(d,j＝7.5hz,1.2h),4.99(d,j＝7.3hz,0.8h),4.64
–
4.58(m,1h),4.52
–
4.46(m,1h),4.41
–
4.20(m,2h),4.07
–
3.77(m,2h),1.54
–
1.21(m,8h),0.95
–
0.77(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ7.90(s),7.82(s)。lcms：ms m/z＝617.14[m+1]，tr＝1.26min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.057min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。
[0991]
实施例25.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-乙基丁酯
[0992][0993]
在室温处向中间体4(700mg，2.113mmol)、中间体17(998mg，2.218mmol)和氯化镁(302mg，3.169mmol)的混合物中添加四氢呋喃(8.5ml)，然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.92ml，5.282mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌3小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且将获得的残余物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(80g sio2combiflash hp gold柱，100％二氯甲烷-14％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱液)纯化。将获得的纯物质溶解在无水乙腈(10ml)中，并在冰浴中冷却，接着滴加浓盐酸(4ml，48mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却并且用水稀释。用3n氢氧化钠中和溶液并用二氯甲烷萃取。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将获得的残余物通过sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，100％二氯甲烷-20％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.38-7.29(m,2h),7.27-7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.0hz,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.49-4.29(m,3h),4.04-3.82(m,3h),1.43(dq,j＝12.5,6.1hz,1h),1.37-1.23(m,7h),0.84(td,j＝7.5,1.1hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.73。ms m/z＝603[m+1]。
[0994]
实施例26.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸((1r,4s)-4-(三氟甲基)环己基)甲酯
[0995][0996]
在室温处向中间体4(0.06g，0.181mmol)、中间体33(0.115g，0.217mmol)和氯化镁(0.028g，0.29mmol)的混合物中添加四氢呋喃(1.5ml)，然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.079ml，0.453mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌3小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且将获得的残余物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，100％二氯甲烷-14％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱液)纯化。将获得的纯物质溶解在无水乙腈(2ml)中，并在冰浴中冷却，接着滴加浓盐酸(0.1ml，1.2mmol)。将反应混合物在室温处搅拌1小时。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却并用饱和碳酸氢钠溶液(1ml)稀释。将所得混合物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，15％-85％乙腈/水梯度，30分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.82(d,j＝3.1hz,1h),7.40-7.10(m,5h),6.81-6.67(m,2h),6.54(s,2h),5.50(t,j＝5.0hz,1h),4.72-4.26(m,6h),4.05-3.69(m,3h),2.17-1.93(m,1h),1.88(dt,j＝13.3,3.6hz,2h),1.82-1.69(m,2h),1.55(dtq,j＝12.0,5.8,3.0hz,1h),1.33-1.14(m,5h),1.10-0.86(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.77,-2.68。
19
f nmr(376mhz，乙腈-d3)δ-74.72(d,j＝8.7hz)。ms m/z＝683.20[m+1]。
[0997]
(s)和(r)非对映体的分离。经由手性制备型hplc(ad-h 5um 21
×
250mm，庚烷70％，乙醇30％)纯化产物，得到非对映体：
[0998][0999]
实施例27。实施例26的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.88(s,1h),7.35(t,j＝7.8hz,2h),7.25-7.15(m,3h),6.79-6.71(m,2h),6.23(s,2h),5.48(d,j＝4.9hz,1h),4.66-4.55(m,1h),4.50(t,j＝6.0hz,1h),4.43(dd,j＝11.1,6.5hz,1h),4.37-4.17(m,3h),4.07-3.83(m,4h),1.93(d,j＝13.5hz,2h),1.81(d,j＝13.5hz,2h),1.62(d,j＝6.2hz,1h),1.40-1.20(m,6h),1.03(q,j＝12.9hz,2h)。
19
f nmr(376mhz，乙腈-d3)δ-74.83(d,j＝8.8hz)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.59。ms m/z＝683.20[m+1]。
[1000]
实施例28。实施例26的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.89(s,1h),7.37(t,j＝7.8hz,2h),7.31-7.14(m,3h),6.75(s,2h),6.24(s,2h),5.47(d,j＝4.9hz,1h),4.58(q,j＝5.1hz,1h),4.48(t,j＝6.0hz,1h),4.43-4.20(m,4h),4.05-3.73(m,4h),1.91(d,j＝13.2hz,2h),1.78(d,j＝13.0hz,2h),1.65-1.47(m,1h),1.39-1.19(m,
110
°
a 250
×
30mm柱，0％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到缩丙酮中间体，将其溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴下添加浓hcl(0.1ml)。然后将所得混合物在冰浴下搅拌约2小时，并缓慢添加饱和nahco3(2ml)。然后将所得混合物通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-80％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.86(s,1h),6.81
–
6.67(m,2h),6.48(s,2h),5.53
–
5.44(m,2h),4.71(m,1h),4.58(m,1h),4.50(m,1h),4.29(m,1h),4.18(m,1h),4.13
–
3.69(m,7h),1.72(m,4h),1.58
–
1.19(m,17h),0.88(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ12.68,12.66。lcms：ms m/z＝680.31[m+1]。
[1007]
实施例31.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)甲酯
[1008][1009]
向中间体4(0.5g，1.509mmol)、中间体36(0.905g，1.66mmol)和氯化镁(0.206g，2.264mmol)的混合物中添加四氢呋喃(7ml)，然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.657ml，3.773mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌3小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且将获得的残余物用乙腈(11ml)稀释并冷却至0℃。添加浓盐酸(1ml，12mmol)并且将反应混合物在室温处搅拌2小时。2小时后，将反应混合物在冰浴中冷却并用5n氢氧化钠水溶液中和。将所得混合物用乙酸乙酯萃取。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(80g sio2combiflash hp gold柱，100％二氯甲烷-20％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(d,j＝8.8hz,1h),7.38
–
7.12(m,5h),6.85(dd,j＝4.5,1.8hz,1h),6.74(dd,j＝4.5,3.2hz,1h),5.49(t,j＝5.2hz,1h),4.63(q,j＝5.5hz,1h),4.55
–
4.30(m,3h),3.98
–
3.86(m,3h),3.91
–
3.76(m,2h),3.07
–
2.86(m,4h),2.32
–
2.17(m,2h),1.61(t,j＝12.5hz,4h),1.26(ddd,j＝7.1,3.5,1.1hz,4h)。
19
f nmr(377mhz，甲醇-d4)δ-71.22(td,j＝9.8,4.6hz)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.23,3.18。lcms：ms m/z＝349.86[m+1]；tr＝0.70min(次要异构体)-0.72min(主要异构体)；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.525min(次要异构体)，3.56min(主要异构体)；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1010]
实施例32.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-乙基-3,3-二氟哌啶-4-基酯
[1011][1012]
向中间体4(50mg，0.151mmol)、中间体37(116mg，0.226mmol)和mgcl2(22mg，0.226mmol)在thf(2ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.1ml，0.574mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，冷却，通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到缩丙酮中间体，将其溶解于acn(2ml)中并添加浓hcl(0.1ml)。将所得混合物在室温处搅拌1小时，用5n naoh中和，并通过制备型hplc(phenominex gemini 10u c18 250
×
21.2mm柱，20％-65％乙腈(0.1％tfa)/水(0.1％tfa)梯度)纯化。浓缩后，将残余物溶解于etoac中，并用饱和nahco3溶液洗涤，真空浓缩，再溶解于dcm中并添加一滴浓hcl，得到白色沉淀。浓缩后，将残余物溶解于水-乙腈中并冻干，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.91(m,1h),7.40
–
7.10(m,6h),6.86(m,1h),5.55
–
5.47(m,1h),5.30(m,1h),4.57(m,1h),4.49
–
4.30(m,3h),4.06(m,1h),3.68(m,2h),3.32
–
3.09(m,2h),2.19(s,2h),1.40
–
1.23(m,8h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.19,3.01,2.97,2.96。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-77.5。lcms：ms m/z＝666.23[m+1]，呈中性形式；tr＝0.68min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.35,3.37,3.38,3.41min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1013]
实施例33.(1r,4s)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-氨基环己酯
[1014][1015]
(1r,4s)-((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己酯。在室温处将乙腈(4.5ml)添加到中间体4(300mg，0.91mmol)、中间体63(510mg，0.91mmol)和氯化镁(86mg，0.91mmol)的混合物中。将混合物加热至50℃持续20分钟，并添加n,n-二异丙基乙胺(0.39ml，2.26mmol)。3.5小时后，使反应混合物冷却至室温，并且将反应混合物用乙酸乙酯(200ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(200ml)和盐水(200ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。
使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d1)δ7.92(s,0.25h),7.91(s,0.75h),7.35
–
7.08(m,5h),6.71
–
6.68(m,1h),6.66
–
6.62(m,1h),5.92(br s,2h),5.65
–
5.60(m,1h),5.27
–
5.22(m,1h),5.10(d,j＝6.7hz,0.25h),5.00(d,j＝6.6hz,0.75h),4.69
–
4.57(m,1h),4.51
–
4.27(m,3h),4.06
–
3.92(m,1h),3.86
–
3.74(m,1h),3.41(br s,1h),2.03
–
1.84(m,4h),1.76(br s,3h),1.44(br s,9h),1.41
–
1.29(m,8h),1.24
–
1.12(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d1)δ-3.15(s)。lcms：ms m/z＝756.11[m+1]。
[1016]
(1r,4s)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-氨基环己酯。在室温处，将浓盐酸溶液(12m，0.47ml)添加到(1r,4s)-((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己酯(470mg，0.62mmol)在乙腈(4.7ml)中的溶液中。1小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，并用饱和碳酸钠水溶液中和至ph＝7。将所得混合物减压浓缩，并将甲醇(4ml)添加到残余物中。然后添加乙酸乙酯(2ml)，并且通过过滤去除所得固体。减压浓缩滤液，并且将粗残余物通过制备型hplc(gemini 5u c18 100
×
30mm柱，10-100％乙腈/水梯度0.1％tfa)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.03(s,0.75h),7.99(s,0.25h),7.42
–
7.12(m,6h),6.96
–
6.92(m,1h),5.57
–
5.51(m,1h),4.74
–
4.60(m,1h),4.56
–
4.49(m,1h),4.49
–
4.34(m,3h),3.96
–
3.84(m,1h),3.18
–
3.04(m,1h),2.12
–
1.99(m,4h),1.57
–
1.42(m,4h),1.33
–
1.28(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.36(s),3.24(s)。lcms：ms m/z＝616.07[m+1]。
[1017]
实施例34.
[1018][1019]
向中间体61(161mg，0.36mmol)、中间体4(100mg，0.3mmol)和mgcl2(43mg，0.45mmol)在thf(2ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(98mg，0.76mmol)。将所得混合物在约50℃处搅拌约2小时，将反应混合物冷却，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，然后将残余物溶解于乙腈(2ml)中，在冰浴中冷却，并浓缩。滴加hcl。将所得混合物在约室温处搅拌约2小时，在冰浴中冷却，通过滴加2n naoh和nahco3溶液中和，用etoac(150ml)稀释，用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将水相用etoac(50ml
×
2)萃取，并将合并的有机层在硫酸钠下干燥，真空浓缩，并且将残余物通过制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.83(s,1h),6.87(d,j＝4.5hz,1h),6.78(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝4.9hz,1h),5.00
–
4.92(m,1h),4.91
–
4.85(m,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.50(d,j＝5.7hz,1h),4.35
–
4.12(m,2h),3.91
–
3.72(m,2h),1.34
–
1.13(m,18h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.61。lcms：ms m/z＝598.05[m+1]。
[1020]
实施例35.((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰
基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基双乙基l-丙氨酸酯磷酸酯
[1021][1022]
向中间体38(100mg，0.3mmol)、中间体4(151mg，0.36mmol)和mgcl2(43mg，0.45mmol)在thf(2ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(98mg，0.76mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，将反应混合物冷却，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，然后将残余物溶解于乙腈(2ml)中，在冰浴中冷却，并浓缩。滴加hcl。将所得混合物在室温处搅拌2小时，在冰浴中冷却，通过滴加2n naoh和nahco3溶液中和，用etoac(150ml)稀释，用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将水相用etoac(50ml
×
2)萃取，并将合并的有机层在硫酸钠下干燥，真空浓缩，并将残余物通过制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝4.9hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.50(d,j＝5.7hz,1h),4.30(dd,j＝11.1,7.0hz,1h),4.23
–
3.99(m,5h),3.86(ddq,j＝19.6,9.4,7.1hz,2h),1.35
–
1.13(m,12h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.61。lcms：ms m/z＝570.10[m+1]，tr＝0.99min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.19min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1023]
实施例36.(2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基双环丁基甲基l-丙氨酸酯磷酸酯
[1024][1025]
向中间体62(132mg，0.27mmol)、中间体4(80mg，0.24mmol)和mgcl2(34mg，0.36mmol)在thf(2ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(78mg，0.6mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，将反应混合物冷却，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，然后将残余物溶解于乙腈(2ml)中，在冰浴中冷却，并浓缩。滴加hcl。将所得混合物在室温处搅拌2小时，在冰浴中冷却，通过滴加2n naoh和nahco3溶液中和，用etoac(150ml)稀释，用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将水相用etoac(50ml
×
2)萃取，并将合并的有机层在硫酸钠下干燥，真空浓缩，并且将残余物通过制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr
(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝4.9hz,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.49(d,j＝5.7hz,1h),4.30(dd,j＝11.1,7.1hz,1h),4.20(dd,j＝11.1,5.7hz,1h),4.14
–
3.98(m,3h),3.98
–
3.80(m,3h),2.60(dp,j＝22.0,7.4hz,2h),2.10
–
1.95(m,4h),1.94
–
1.64(m,8h),1.39
–
1.17(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.54。lcms：ms m/z＝650.12[m+1]。
[1026]
实施例37.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸苄酯
[1027][1028]
将中间体4(83mg，0.25mmol)与中间体39(126mg，0.275mmol)混合并溶解于2ml无水四氢呋喃中。一次性添加氯化镁(71mg，0.75mmol)。然后添加dipea(87μl，0.5mmol)，并将反应在60℃处搅拌16小时。
[1029]
添加更多的中间体39(30mg)和dipea(52μl)。将反应混合物在60℃处搅拌6小时。然后将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(10ml)稀释并用水(5
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将所得物质溶解于5ml的mecn中并在冰浴中搅拌。滴加浓hcl(水溶液)(300μl)，并将反应在冰浴中搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用盐水洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩为油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.77(m,1h),7.35
–
7.08(m,10h),6.83(m,1h),6.71(m,1h),5.52
–
5.48(m,1h),5.14
–
4.93(m,2h),4.61(m,1h),4.53
–
4.27(m,3h),4.01
–
3.87(m,1h),1.26(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.22,3.19。lcms：ms m/z＝609.1[m+1]；607.4[m-1]，tr＝1.19min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝2.78min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝4.626min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1030]
实施例38.
[1031][1032]
在室温处将乙腈(1ml)添加到中间体4(150mg，0.453mmol)、中间体40(176mg，0.453mmol)和氯化镁(43mg，0.453mmol)的混合物中。将混合物加热至50℃持续10分钟，并添加n,n-二异丙基乙胺(0.197ml，1.13mmol)。2小时后，使反应混合物冷却至室温，并滴加浓盐酸水溶液(0.25ml)。1小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝4.9hz,1h),4.64(dd,j＝5.6,5.0hz,1h),4.51(d,j＝5.7hz,1h),4.30(dd,j＝11.1,6.9hz,1h),4.19(dd,j＝11.1,5.6hz,1h),3.86(ddd,j＝14.7,9.4,7.2hz,2h),3.69(s,3h),3.64(s,3h),1.30(dd,j＝7.2,1.0hz,3h),1.25(dd,j＝7.2,0.8hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.58(s)。lcms：ms m/z＝542.08[m+1]，tr＝0.88min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝1.87min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝3.052min；hplc系统：agilent 1290ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1033]
实施例39.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯
[1034][1035]
在室温处将乙腈(5ml)添加到中间体4(348mg，1.05mmol)、中间体41(399mg，1.05mmol)和氯化镁(100mg，1.05mmol)的混合物中。将混合物加热至50℃持续10分钟，并添加n,n-二异丙基乙胺(0.475ml，2.63mmol)。2.5小时后，使反应混合物冷却至室温，并滴加浓盐酸水溶液(0.5ml)。1小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(100ml)和盐水(100ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.65h),7.78(s,0.35h),7.37
–
7.25(m,2h),7.25
–
7.12(m,3h),
6.87
–
6.82(m,1h),6.75
–
6.71(m,1h),5.52
–
5.47(m,1h),4.66
–
4.60(m,1h),4.55
–
4.29(m,3h),3.95
–
3.80(m,1h),3.64(s,1h),3.60(s,2h),1.27
–
1.22(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.24(s)。lcms：ms m/z＝533.13[m+1]，tr＝1.02min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.28min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝3.712min(次要异构体)，3.775min(主要异构体)；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1036]
实施例40.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(2-(甲硫基)乙氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[1037][1038]
将中间体4(50mg，0.15mmol)和中间体70(67mg，0.165mmol)混合并溶解于1.5ml无水四氢呋喃中。一次性添加氯化镁(43mg，0.45mmol)。添加dipea(65μl，0.75mmol)，并将反应在室温处搅拌36小时。将反应用乙酸乙酯(15ml)稀释并用水(5
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于mecn(5ml)中并在冰浴中搅拌。滴加浓盐酸水溶液(300μl)。将反应混合物在冰浴中搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释并添加饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)。将混合物搅拌10分钟。收集有机萃取物并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于mecn和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(m,1h),6.85(m,1h),6.76(m,1h),5.50(m,1h),4.92(m,1h),4.64(m,1h),4.50(m,1h),4.40
–
4.21(m,2h),4.17(m,1h),4.09(m,1h),3.85
–
3.72(m,1h),2.72(m,2h),2.09(m,3h),1.29(m,3h),1.25
–
1.21(m,3h),1.17(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ7.74,7.82。lcms：ms m/z＝559.0[m+1]；557.2[m-1]，tr＝1.04min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝2.36min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝3.976,4.022min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1039]
实施例41.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(2-甲氧基乙氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[1040][1041]
将中间体4(50mg，0.15mmol)和中间体71(64mg，0.165mmol)混合并溶解于1.5ml无水四氢呋喃中。一次性添加氯化镁(43mg，0.45mmol)。添加dipea(65μl，0.375mmol)，并将反应物在室温处搅拌20小时。
[1042]
将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释并用水(5
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将所得物质溶解于mecn(5ml)中并在冰浴中搅拌。滴加浓盐酸水溶液(300μl)。将反应混合物在冰浴中搅拌2小时。将反应用乙酸乙酯(15ml)稀释，并且添加饱和碳酸氢钠水溶液。将混合物搅拌10分钟。将有机萃取物用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio2combiflash hp gold柱，0-5％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于mecn和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.89
–
6.83(m,1h),6.76(m,1h),5.50(m,1h),5.01
–
4.84(m,1h),4.63(m,1h),4.50(m,1h),4.35(m,1h),4.30
–
4.19(m,1h),4.19
–
4.13(m,2h),3.77(m,1h),3.63
–
3.51(m,2h),3.35(m,3h),1.28(m,3h),1.17(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ7.98,8.04。lcms：ms m/z＝543.1[m+1]；541.2[m-1]，tr＝0.96min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝2.18min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝3.599,3.619min；hplc系统：agilent 1290ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1043]
实施例42.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(2-(甲基磺酰基)乙氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
(30mg，0.317mmol)在thf(3ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.1ml，0.528mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，并通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到缩丙酮中间体，将其溶解于乙腈(2ml)中并添加浓hcl(0.2ml)。将混合物搅拌2小时，在冰浴下添加nahco3水溶液(2ml)，并通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(m,1h),7.40(m,1h),7.37
–
7.28(m,2h),7.23(m,1h),6.86(m,1h),6.74(m,1h),5.50(m,1h),5.00
–
4.81(m,1h),4.61(m,1h),4.54
–
4.38(m,2h),4.35(m,1h),3.92
–
3.79(m,1h),3.07(d,j＝3.4hz,3h),2.95(m,3h),1.28(m,3h),1.22
–
1.12(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.18。lcms：ms m/z＝632.32[m+1]；tr＝0.67min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.84min(18％)，3.85(81％)；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1050]
实施例44.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯
[1051][1052]
((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯。向中间体44(133mg，0.31mmol)、中间体4(130mg，0.39mmol)和mgcl2(45mg，0.47mmol)在thf(5ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(127mg，0.98mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，将反应混合物冷却，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，将残余物用硅胶柱色谱法(用0-100％meoh的dcm溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝615.18[m+1]，tr＝1.18min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.40min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1053][1054]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯。将((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基酯(500mg，0.81mmol)溶解于10ml acn中，将20ml tfa与10ml水混合，然后将tfa溶液添加到上述反应混合物中，在室温处搅拌30分钟，用nahco3水溶液淬灭，用etoac萃取，蒸发有机溶剂，用制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(d,j＝9.7hz,1h),7.38
–
7.11(m,5h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(dd,j＝5.6,4.5hz,1h),5.50(t,j＝4.5hz,1h),5.32(dtt,j＝23.9,6.3,5.1hz,1h),4.82
–
4.73(m,2h),4.63(td,j＝5.3,4.1hz,1h),4.60
–
4.44(m,4h),4.44
–
4.26(m,2h),4.01
–
3.85(m,1h),1.29(dt,j＝7.2,1.3hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.3,3.29。lcms：ms m/z＝575.11[m+1]，tr＝0.98min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.63和3.70min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1055]
实施例45.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸丙酯
[1056][1057]
在室温处，将n,n-二异丙基乙胺(0.33ml，1.89mmol)和氯化镁(107.8mg，1.13mmol)添加到中间体4(250.0mg，0.76mmol)和中间体45(462.16mg，1.13mmol)在四氢呋喃(7.5ml)中的混合物中。将混合物加热至55℃。2小时后，使反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释，并将所得混合物用水(5
×
20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。在0℃处，将浓盐酸水溶液(0.53ml)滴加到粗残余物的乙腈(7.5ml)溶液中。将混合物升温至室温。2小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(75ml)和盐水(75ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-20％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(d,j＝7.2hz,1h),7.37-7.27(m,2h),7.26-7.13(m,3h),6.85
(dd,j＝4.5,2.9hz,1h),6.74(dd,j＝4.6,2.1hz,1h),5.50(t,j＝5.3hz,1h),4.63(q,j＝5.3hz,1h),4.54-4.31(m,3h),4.07-3.82(m,3h),1.68-1.49(m,2h),1.31-1.26(m,3h),0.90(dt,j＝9.9,7.4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.27。lcms：ms m/z＝561.20[m+1]，tr＝0.78min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.70min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1058]
sp和rp非对映体的拆分。经由手性sfc(chiralpak ad-h,5um,21
×
250mm，异丙醇30％)纯化产物，得到非对映体：
[1059][1060]
实施例46.实施例45的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.33-7.26(m,2h),7.20-7.12(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝5.0hz,1h),4.68-4.60(m,1h),4.53(d,j＝5.6hz,1h),4.48(dd,j＝10.9,6.0hz,1h),4.36(dd,j＝10.9,5.1hz,1h),4.06-3.95(m,2h),3.88(dq,j＝9.4,7.1hz,1h),1.62(h,j＝7.3hz,2h),1.26(dd,j＝7.1,1.3hz,3h),0.91(t,j＝7.5hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.26。lcms：ms m/z＝561.21[m+1]，tr＝0.76min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.63min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1061]
实施例47.实施例45的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.37-7.29(m,2h),7.26-7.14(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.62(dd,j＝5.6,5.1hz,1h),4.47(d,j＝5.6hz,1h),4.42(dd,j＝10.9,6.3hz,1h),4.34(dd,j＝10.9,5.5hz,1h),4.02-3.85(m,3h),1.58(dtd,j＝14.0,7.4,6.6hz,2h),1.27(dd,j＝7.2,1.1hz,3h),0.88(t,j＝7.5hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.27。lcms：ms m/z＝561.26[m+1]，tr＝0.77min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.74min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1062]
实施例48.((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基甲酯
[1063][1064]
向中间体46(350mg，1.06mmol)、中间体4(507mg，1.16mmol)和mgcl2(130mg，1.37mmol)在thf(10ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(341mg，2.64mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，将反应混合物冷却，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，将残余物用硅胶柱色谱法(用0-100％meoh的dcm溶液洗脱)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝629.10[m+1]，tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.51min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1065]
实施例49.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸氧杂环丁烷-3-基甲酯
[1066][1067]
将实施例48(385mg，0.61mmol)溶解于12ml acn中，将17ml tfa与12ml水混合，然后将tfa溶液添加到上述反应混合物中，在室温处搅拌30分钟，用nahco3水溶液淬灭，用etoac萃取，蒸发有机溶剂，用制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(d,j＝8.5hz,1h),7.31(dt,j＝16.0,7.8hz,2h),7.25
–
7.10(m,3h),6.86(dd,j＝4.6,2.8hz,1h),6.74(t,j＝4.3hz,1h),5.49(t,j＝4.9hz,1h),4.72(dddd,j＝11.0,7.9,6.3,3.6hz,2h),4.67
–
4.57(m,1h),4.55
–
4.29(m,5h),4.29
–
4.23(m,1h),4.24
–
4.09(m,1h),3.91(m,1h),3.28
–
3.10(m,1h),1.27(ddd,j＝7.2,2.7,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.22,3.15。lcms：ms m/z＝589.15[m+1]，tr＝1.01min；lc系统：thermo accela 1250uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝
3.66和3.72min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1068]
实施例50.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环丁酯单一非对映体
[1069][1070]
向中间体48(330mg，0.79mmol)、中间体4(260mg，0.79mmol)和mgcl2(97mg，1.02mmol)在thf(10ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(254mg，1.96mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，将反应混合物冷却，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，将残余物用硅胶柱色谱法(用0-100％meoh的dcm溶液洗脱)纯化，得到缩丙酮中间体，然后将其溶解于乙腈(10ml)中，在冰浴中冷却，并浓缩。滴加hcl。将所得混合物在室温处搅拌2小时，在冰浴中冷却，通过滴加2n naoh和nahco3溶液中和，用etoac(150ml)稀释，用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将水相用etoac(50ml
×
2)萃取，并将合并的有机层在硫酸钠下干燥，真空浓缩，并且将残余物溶解于dcm中并通过硅胶柱色谱法(用0-100％meoh的dcm溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.31(dd,j＝8.7,7.1hz,2h),7.22(dt,j＝8.6,1.3hz,2h),7.20
–
7.08(m,1h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.72(d,j＝4.5hz,1h),5.51(dt,j＝5.0,1.4hz,1h),4.82-4.80(m,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.53
–
4.38(m,2h),4.35(ddd,j＝10.3,5.0,1.4hz,1h),3.86(dq,j＝9.7,7.1hz,1h),2.32
–
2.09(m,2h),2.04
–
1.89(m,2h),1.79
–
1.64(m,1h),1.64
–
1.46(m,1h),1.29
–
1.18(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25。lcms：ms m/z＝573.11[m+1]，tr＝1.12min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝4.395min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1071]
实施例51.(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环丁酯单一非对映体
[1072]
[1073]
向中间体49(355mg，0.85mmol)、中间体4(280mg，0.85mmol)和mgcl2(105mg，1.1mmol)在thf(10ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(273mg，2.1mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，将反应混合物冷却，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，将残余物用硅胶柱色谱法(用0-100％meoh的dcm溶液洗脱)纯化，得到缩丙酮中间体，然后将其溶解于乙腈(10ml)中，在冰浴中冷却，并浓缩。滴加hcl。将所得混合物在室温处搅拌2小时，在冰浴中冷却，通过滴加2n naoh和nahco3溶液中和，用etoac(150ml)稀释，用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将水相用etoac(50ml
×
2)萃取，并将合并的有机层在硫酸钠下干燥，真空浓缩，并且将残余物溶解于dcm中并通过硅胶柱色谱法(用0-100％meoh的dcm溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.28(dd,j＝8.8,7.0hz,2h),7.20
–
7.08(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.6hz,1h),5.51(d,j＝5.0hz,1h),4.97
–
4.86(m,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.52(d,j＝5.6hz,1h),4.47(dd,j＝10.9,5.9hz,1h),4.35(dd,j＝10.9,5.1hz,1h),3.84(dq,j＝9.2,7.1hz,1h),2.34
–
2.19(m,2h),2.13
–
1.91(m,2h),1.84
–
1.69(m,1h),1.69
–
1.52(m,1h),1.25(dd,j＝7.2,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.21。lcms：ms m/z＝573.10[m+1]，tr＝1.15min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝4.364min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1074]
实施例52.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯
[1075][1076]
方法1.在室温处，将n,n-二异丙基乙胺(0.12ml，0.68mmol)和氯化镁(38.8mg，0.41mmol)添加到中间体4(100.0mg，0.30mmol)和中间体50(141.2mg，0.33mmol)在四氢呋喃(3ml)中的混合物中。将混合物加热至50℃。1小时后，使反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(25ml)稀释，并将所得混合物用水(5
×
10ml)和盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。在0℃处，将浓盐酸水溶液(0.2ml)滴加到粗残余物的乙腈(3ml)溶液中。将混合物升温至室温。3小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(25ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-20％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.87(s,1h),7.40-7.30(m,2h),7.27-7.14(m,3h),6.73(s,2h),6.20(s,2h),5.46(d,j＝5.0hz,1h),4.63-4.51(m,1h),4.51-4.40(m,1h),4.35(dd,j＝11.1,6.6hz,2h),4.28(dd,j＝11.1,6.4hz,2h),4.00-3.83(m,2h),3.59(s,3h),1.26(dd,j＝
7.1,1.0hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.64。lcms：ms m/z＝533.15[m+1]，tr＝0.65min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.03min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1077]
方法2.将中间体4(150mg，0.5mmol)和中间体50(234mg，0.55mmol)混合并溶解于4ml无水thf中。一次性添加氯化镁(143mg，1.5mmol)。添加dipea(218μl，1.25mmol)，并将反应在50℃处搅拌4小时。
[1078]
将反应用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
15ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于mecn(10ml)中并在冰浴中搅拌。滴加浓盐酸水溶液(500μl)。将反应在冰浴中搅拌4小时。将反应用etoac(30ml)稀释并添加饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)。将混合物搅拌10分钟。收集有机萃取物并用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于mecn和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.37
–
7.27(m,2h),7.22(m,2h),7.16(m,1h),6.83(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝5.1hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.48(d,j＝5.6hz,1h),4.45
–
4.30(m,2h),3.90(m,1h),3.59(s,3h),1.25(d,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.24。lcms：ms m/z＝533.0[m+1],531.0[m-1]，tr＝1.31min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝2.29min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝3.791min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1079]
实施例53.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[1080][1081]
在室温处，将n,n-二异丙基乙胺(0.06ml，0.33mmol)和氯化镁(12.0mg，0.13mmol)添加到中间体4(41.8mg，0.13mmol)和中间体51(60.9mg，0.13mmol)在四氢呋喃(1.5ml)中的混合物中。将混合物加热至55℃。5小时后，使反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(20ml)
稀释，并将所得混合物用水(5
×
15ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。在0℃处，将浓盐酸水溶液(0.06ml)滴加到粗残余物的乙腈(1.5ml)溶液中。将混合物升温至室温。2小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-20％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(d,j＝3.7hz,1h),7.14(dd,j＝9.0,1.4hz,1h),7.09-7.03(m,1h),6.90-6.80(m,3h),6.73(dd,j＝4.8,1.0hz,1h),5.50(dd,j＝7.8,5.0hz,1h),4.99-4.86(m,1h),4.62(q,j＝5.1hz,1h),4.53-4.29(m,3h),4.10-4.01(m,2h),3.90-3.77(m,1h),3.77-3.68(m,2h),3.41(d,j＝2.1hz,3h),1.26(ddd,j＝7.1,3.7,1.1hz,3h),1.23-1.13(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.71。lcms：ms m/z＝635.19[m+1]，tr＝0.95min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.68min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1082]
实施例54.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸丁酯
[1083][1084]
在室温处，将n,n-二异丙基乙胺(0.13ml，0.76mmol)和氯化镁(43mg，0.45mmol)添加到中间体4(100.0mg，0.30mmol)和中间体52(191mg，0.45mmol)在四氢呋喃(7.5ml)中的混合物中。将混合物加热至55℃。2小时后，使反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释，并将所得混合物用水(5
×
20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。在0℃处，将浓盐酸水溶液(0.53ml)滴加到粗残余物的乙腈(7.5ml)溶液中。将混合物升温至室温。2小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(75ml)和盐水(75ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-20％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(d,j＝7.2hz,1h),7.37
–
7.10(m,4h),6.84(dd,j＝4.5,2.8hz,1h),6.73(dd,j＝4.5,2.0hz,1h),5.49(t,j＝5.2hz,1h),4.62(q,j＝5.3hz,1h),4.55
–
4.28(m,3h),4.15
–
3.80(m,3h),1.68
–
1.46(m,2h),1.46
–
1.22(m,5h),0.99
–
0.83(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25。lcms：ms m/z＝575.14[m+1]，tr＝0.83min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝6.50min；hplc系统：
agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-19.0min 2-95％acn，19.0min-20.0min 95％acn，2ml/min。
[1085]
实施例55.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸四氢-2h-吡喃-4-基酯
[1086][1087]
向中间体22(1.7g，3.77mmol)、中间体4(1g，3mmol)和mgcl2(359mg，3.77mmol)在乙腈(40ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.98g，8mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，将反应混合物冷却，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，然后将残余物溶解于乙腈中，在冰浴中冷却，并浓缩。滴加hcl。将所得混合物在室温处搅拌2小时，在冰浴中冷却，通过滴加2n naoh和nahco3溶液中和，用etoac(150ml)稀释，用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将水相用etoac(50ml
×
2)萃取，并将合并的有机层在硫酸钠下干燥，真空浓缩，并且将残余物通过硅胶柱色谱法(用0-100％meoh的dcm溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.78(s,1h),7.33
–
7.24(m,2h),7.24
–
7.10(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.54
–
4.42(m,2h),4.35(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),3.97
–
3.80(m,3h),3.56
–
3.44(m,2h),1.89
–
1.81(m,2h),1.60(dtd,j＝12.9,8.6,3.9hz,2h),1.27(dd,j＝7.2,1.3hz,4h),1.14(d,j＝6.1hz,5h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.23。lcms：ms m/z＝603.14[m+1]，tr＝1.20min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.87min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1088]
实施例56.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸四氢-2h-吡喃-4-基酯的单一非对映体
[1089][1090]
实施例55的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.29(dd,j＝8.7,7.0hz,2h),7.16(ddd,j＝7.1,2.1,1.1hz,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝
4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.88(m,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.55
–
4.44(m,2h),4.36(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),3.86(m,3h),3.50(dtd,j＝11.3,5.4,2.7hz,2h),1.94
–
1.76(m,2h),1.60(dtd,j＝12.9,8.4,3.9hz,2h),1.27(dd,j＝7.1,1.3hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.23。ms m/z＝603(m+h)
+
。
[1091]
实施例57.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸四氢-2h-吡喃-4-基酯的单一非对映体
[1092][1093]
实施例55的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.33(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.27
–
7.11(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.0hz,1h),4.80(m,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.50
–
4.38(m,2h),4.35(dd,j＝10.9,5.5hz,1h),3.90(dq,j＝9.9,7.1hz,1h),3.85
–
3.75(m,2h),3.46(dddd,j＝11.8,8.9,6.0,3.2hz,2h),1.81(tdd,j＝9.6,4.6,2.5hz,2h),1.57(dtd,j＝12.7,8.4,3.9hz,2h),1.27(dd,j＝7.1,1.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.23。ms m/z＝603(m+h)
+
。
[1094]
实施例58.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3-甲氧基丙酯
[1095][1096]
在室温处，向中间体4(127mg，0.38mmol)、中间体53(252mg，0.58mmol)和mgcl2(55mg，0.58mmol)在thf(5ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.17ml，0.97mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，并通过制备型hplc(phenominex gemini-nx 10u c18 250
×
30mm柱，10％至100％acn的水溶液)纯化。将获得的残余物溶解于acn(8ml)中并添加浓hcl(0.2ml)。将所得混合物在室温处搅拌1小时，在冰浴下冷却，并缓慢添加nahco3水溶液(4ml)。将混合物浓缩至一半体积并通过制备型hplc(phenominex gemini-nx 10u c18 250
×
30mm柱，10％至100％acn的水溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.64h),7.78(s,0.36h),7.31(m,2h),7.25
–
7.12(m,3h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(m,1h),4.62(m,1h),4.53
–
4.38(m,2h),4.34(m,1h),4.17
–
4.00(m,2h),3.93
–
3.83(m,1h),3.39(m,2h),3.27(m,3h),1.81(m,2h),1.26(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.24。lcms：m/z＝591.18(m+h)，tr＝0.96min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含
0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.96min(35％)和4.02min(64％)；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1097]
sp和rp非对映体的拆分。通过ia sfc 5um，21
×
250mm(30％2-丙醇)分离产物，得到非对映体：
[1098][1099]
实施例59。实施例58的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.33
–
7.25(m,2h),7.19
–
7.12(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.72(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝5.0hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.52(d,j＝5.6hz,1h),4.47(dd,j＝10.9,6.0hz,1h),4.35(dd,j＝10.9,5.1hz,1h),4.12(td,j＝6.5,2.1hz,2h),3.89(ddd,j＝14.4,10.8,6.6hz,1h),3.39(t,j＝6.2hz,2h),3.26(s,3h),1.83(m,2h),1.25(dd,j＝7.1,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.24。hplc：tr＝3.96min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1100]
实施例60。实施例58的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.32(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.22(dt,j＝8.6,1.3hz,2h),7.20
–
7.13(m,1h),6.83(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.47(d,j＝5.6hz,1h),4.41(dd,j＝10.9,6.3hz,1h),4.34(dd,j＝10.9,5.5hz,1h),4.07(qt,j＝10.9,6.4hz,2h),3.90(dq,j＝10.0,7.1hz,1h),3.37(t,j＝6.2hz,2h),3.25(s,3h),1.79(m,2h),1.26(dd,j＝7.2,1.0hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.24。hplc：tr＝4.02min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1101]
实施例61.(r)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-甲基吡咯烷-3-基酯
[1102][1103]
将中间体4(50mg，0.15mmol)和中间体24(81mg，0.18mmol)混合并溶解于1.5ml无
水thf中。一次性添加氯化镁(43mg，0.45mmol)。添加dipea(65μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。
[1104]
将反应用etoac(15ml)稀释并用水(6
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-10％-20％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于mecn(5ml)中并在冰浴中搅拌。滴加浓盐酸水溶液(300μl)。将反应在冰浴中搅拌2小时。将反应用etoac(20ml)稀释并添加饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)。将混合物搅拌10分钟。收集有机萃取物，并用etoac(2
×
10ml)萃取含水部分。将有机萃取物合并，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于mecn和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(m,1h),7.41
–
7.09(m,5h),6.85(m,1h),6.74(m,1h),5.49(m,1h),5.33
–
5.15(m,1h),4.70
–
4.58(m,1h),4.56
–
4.28(m,3h),4.00
–
3.86(m,1h),3.28
–
3.07(m,3h),3.03
–
2.83(m,1h),2.69(m,3h),2.35(m,1h),2.00(m,1h),1.28(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.39,3.05。lcms：ms m/z＝602.2[m+1],599.9[m-1]，tr＝1.00min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝1.85min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝3.142,3.190min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1105]
实施例62.(2s)-3-(4-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)磷酰基)氧基)苯基)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯
[1106][1107]
(2s)-3-(4-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)磷酰基)氧基)苯基)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯。在室温处，将n,n-二异丙基乙胺(0.11ml，0.604mmol)和氯化镁(23mg，0.24mmol)添加到中间体4(80mg，0.24mmol)和中间体54(178mg，0.29mmol)在四氢呋喃(3.8ml)中的混合物中。将混合物加热至55℃。2小时后，使反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(50ml)稀释，并将所得混合物用水(5
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。在0℃处，将浓盐酸水溶液(0.11ml)滴加到粗残余物的乙腈(3.8ml)溶液中。将混合物升温至室温。3.5小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(2
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤。
将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-25％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(d,j＝9.1hz,1h),7.38-7.25(m,5h),7.19-7.09(m,3h),7.06(dd,j＝8.7,1.2hz,1h),6.84(dd,j＝4.5,1.3hz,1h),6.72(dd,j＝7.2,4.5hz,1h),5.56-5.46(m,1h),5.03(d,j＝2.9hz,2h),4.63(td,j＝5.3,4.4hz,1h),4.54-4.29(m,4h),3.87(ddq,j＝16.7,9.4,7.1hz,1h),3.69(d,j＝3.0hz,3h),3.61(d,j＝15.9hz,4h),3.20-3.06(m,1h),2.91(dt,j＝14.0,8.4hz,1h),1.24(td,j＝7.1,1.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.27(d,j＝2.1hz)。lcms：ms m/z＝768.49[m+1]，tr＝1.12min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.95min,4.02min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1108][1109]
(2s)-3-(4-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)磷酰基)氧基)苯基)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯。将碳载钯(10.3mg，10重量％)添加到用氩气吹扫的(2s)-3-(4-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)磷酰基)氧基)苯基)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(30.6mg，0.04mmol)在乙醇(5ml)中的溶液中。然后将混合物用氢气吹扫并在室温处搅拌。18小时后，将混合物通过硅藻土过滤，将过滤器用乙醇冲洗，并且减压去除挥发物。使粗残余物经受制备型hplc(phenomenex synergi 4um polar-rp150
×
21.2mm柱，10-60％乙腈/水梯度，含0.1％tfa)，得到呈tfa盐形式的产物。
[1110]
实施例62。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.95(s,1h),7.29-7.16(m,5h),6.93(s,1h),5.53(d,j＝5.3hz,1h),4.59(t,j＝5.4hz,1h),4.52-4.43(m,2h),4.37(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),4.30(dd,j＝7.6,6.1hz,1h),4.03-3.87(m,1h),3.81(s,3h),3.69(s,3h),3.25(dd,j＝14.5,6.1hz,1h),3.13(dd,j＝14.6,7.4hz,1h),1.34(dd,j＝7.4,1.2hz,3h)。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-77.68。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.54。lcms：ms m/z＝634.18[m+1]，tr＝0.77min；lc系统：thermo accela 1250uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝2.30min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：
0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1111]
实施例63。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.94(s,1h),7.32-7.22(m,4h),7.14(s,1h),6.89(s,1h),5.52(d,j＝4.9hz,1h),4.58(t,j＝5.3hz,1h),4.40(dd,j＝12.5,5.8hz,2h),4.37-4.28(m,2h),3.92(dd,j＝10.0,7.3hz,1h),3.83(s,3h),3.61(s,3h),3.27-3.08(m,2h),1.31(d,j＝7.1hz,3h)。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-77.65。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.48。lcms：ms m/z＝634.24[m+1]，tr＝0.80min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝2.43min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1112]
实施例64.(s)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸四氢呋喃-3-基酯
[1113][1114]
在室温处，向中间体4(132mg，0.40mmol)、中间体55(234mg，0.54mmol)和mgcl2(46mg，0.48mmol)在thf(5ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.10ml，0.60mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，并通过制备型hplc(phenominex gemini-nx 10u c18 250
×
30mm柱，10％至100％acn的水溶液)纯化。将获得的残余物溶解于acn(4ml)中并添加浓hcl(0.2ml)。将所得混合物在室温处搅拌1小时，在冰浴下冷却，用5n naoh中和，并通过制备型hplc(phenominex gemini-nx 10u c18 250
×
30mm柱，10至100％acn的水溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.67h),7.78(s,0.33h),7.37
–
7.13(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.49(m,1h),5.25
–
5.20(m,0.33h),5.18
–
5.10(m,0.67h),4.62(m,1h),4.53
–
4.30(m,3h),3.93
–
3.63(m,5h),2.20
–
1.99(m,1h),1.98
–
1.87(m,1h),1.25(m,3h)。lcms：m/z＝589.02(m+h)，tr＝1.06min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.75min(29％)，3.81min(68％)；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1115]
sp和rp非对映体的拆分。通过chiralpak ad-h,150
×
4.6mm,5um(100％etoh)分离混合物。
[1116]
实施例65.(s)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸四氢呋喃-3-基酯的单一非对映体
[1117][1118]
实施例64的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.28(m,2h),7.16(dt,j＝8.1,1.3hz,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.6hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),5.23(t,j＝5.5hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.51(d,j＝5.5hz,1h),4.47(dd,j＝10.9,5.9hz,1h),4.35(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),3.92
–
3.68(m,5h),2.23
–
2.06(m,1h),2.01
–
1.91(m,1h),1.25(dd,j＝7.1,1.3hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.22。lcms：m/z＝589.02(m+h)，tr＝1.06min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.75min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1119]
实施例66.(s)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸四氢呋喃-3-基酯的单一非对映体
[1120][1121]
实施例64的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.33(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.25
–
7.21(m,2h),7.20
–
7.15(m,1h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.48(d,j＝5.0hz,1h),5.14(dd,j＝6.0,4.1hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.46(d,j＝5.7hz,1h),4.41(dd,j＝10.9,6.4hz,1h),4.33(dd,j＝10.9,5.4hz,1h),3.95
–
3.65(m,5h),2.11
–
1.98(m,1h),1.96
–
1.82(m,1h),1.25(dd,j＝7.1,1.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.19。lcms：m/z＝589.02(m+h)，tr＝1.07min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.82min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，
250
×
30mm柱，10％至100％acn的水溶液)纯化。将获得的残余物溶解于acn(4ml)中并添加浓hcl(0.2ml)。将所得混合物在室温处搅拌1小时，在冰浴下冷却，用5n naoh中和，并通过制备型hplc(phenominex gemini-nx 10u c18250
×
30mm柱，10至100％acn的水溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.71h),7.78(s,0.29h),7.31(m,2h),7.25
–
7.13(m,3h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.49(m,1h),5.23(s,0.29h),5.20
–
5.14(m,0.71h),4.66
–
4.59(m,1h),4.53
–
4.30(m,3h),3.95
–
3.69(m,5h),2.22
–
2.05(m,1h),1.99
–
1.85(m,1h),1.25(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.22,3.17。lcms：m/z＝589.03(m+h)，tr＝1.07min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.77min(25％)，3.82min(75％)；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1128]
sp和rp非对映体的拆分。通过chiralpak ia(150
×
4.6mm，5微米100％etoh)分离混合物，得到非对映体：
[1129][1130]
实施例69。实施例68的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.32
–
7.26(m,2h),7.19
–
7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.6hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),5.26
–
5.20(m,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.50(d,j＝5.6hz,1h),4.47(dd,j＝11.0,6.0hz,1h),4.35(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),3.94
–
3.69(m,5h),2.15(td,j＝14.5,8.3hz,1h),1.99
–
1.86(m,1h),1.25(dd,j＝7.2,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.22。lcms：m/z＝589.09(m+h)，tr＝0.95min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.76min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1131]
实施例70。实施例68的第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.40
–
7.25(m,3h),7.28
–
7.12(m,2h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.1hz,1h),5.17(td,j＝4.1,2.1hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.46(d,j＝5.6hz,1h),4.41(dd,j＝10.9,6.4hz,1h),4.34(dd,j＝10.9,5.4hz,1h),3.98
–
3.68(m,5h),2.18
–
2.03(m,1h),1.96
–
1.83(m,1h),1.25(dd,j＝7.2,1.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.17。lcms：m/z＝589.10(m+h)，tr＝0.96min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.81min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1132]
实施例71.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)硫代磷酰基)-l-丙氨酸甲酯
[1133][1134]
在室温处，将三乙胺(170μl，1.2mmol)添加到中间体4(0.40g，1.2mmol)和中间体58(0.35g，1.2mmol)在乙腈(6ml)中的溶液中。将反应混合物升温至65℃。3小时后，使反应混合物冷却至室温，并添加浓盐酸水溶液(300μl)。1小时后，缓慢添加饱和碳酸氢钠水溶液(5ml)，并将所得混合物用二氯甲烷(3
×
5ml)萃取。将合并的有机萃取物经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.95(br s,1h),7.40
–
7.02(m,5h),6.90
–
6.72(m,2h),5.52
–
5.45(m,1h),4.58
–
4.49(m,1h),4.43
–
4.30(m,2h),3.90
–
3.77(m,2h),3.71
–
3.54(m,3h),1.38
–
1.29(m,3h)。lcms：ms m/z＝549.27[m+1]，tr＝1.23min(次要异构体)，1.25(主要异构体)；lc系统：thermo accela 1250uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.21min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝5.124min(次要异构体)，5.221min(主要异构体)；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1135]
实施例72.(2s)-3-(4-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(((s)-1-异丙氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)磷酰基)氧基)苯基)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯
[1136]
[1137]
在室温处，将n,n-二异丙基乙胺(0.06ml，0.33mmol)和氯化镁(12.3mg，0.13mmol)添加到中间体4(42.7mg，0.13mmol)和中间体66(82.9mg，0.13mmol)在四氢呋喃(1.5ml)中的混合物中。将混合物加热至55℃。4小时后，使反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(20ml)稀释，并将所得混合物用水(5
×
15ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。在0℃处，将浓盐酸水溶液(0.06ml)滴加到粗残余物的乙腈(1.5ml)溶液中。将混合物升温至室温。2小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-20％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(d,j＝8.0hz,1h),7.31(ddd,j＝11.2,6.2,3.3hz,5h),7.20-7.10(m,3h),7.06(d,j＝8.3hz,1h),6.87-6.80(m,1h),6.72(dd,j＝5.5,4.7hz,1h),5.56-5.44(m,1h),5.03(d,j＝3.6hz,2h),4.91(ddd,j＝24.9,12.6,6.3hz,1h),4.62(t,j＝5.4hz,1h),4.48(dd,j＝11.8,5.5hz,1h),4.45-4.28(m,3h),3.90-3.77(m,1h),3.69(d,j＝3.5hz,3h),3.16-3.05(m,1h),2.91(dt,j＝14.0,8.8hz,1h),1.25(dt,j＝7.2,1.4hz,3h),1.20(d,j＝6.3hz,3h),1.16(t,j＝6.3hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.36,3.33。lcms：ms m/z＝796.45[m+1]，tr＝1.17min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.44min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1138]
实施例73.(2s)-3-(4-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)磷酰基)氧基)苯基)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酸异丙酯
[1139][1140]
在室温处，将n,n-二异丙基乙胺(0.11ml，0.0.62mmol)和氯化镁(23.8mg，0.25mmol)添加到中间体4(82.7mg，0.25mmol)和中间体69(176.6mg，0.27mmol)在四氢呋喃(2.5ml)中的混合物中。将混合物加热至55℃。4.5小时后，使反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(25ml)稀释，并将所得混合物用水(2
×
15ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将浓盐酸水溶液(0.12ml)滴加到粗残余物的乙腈(5ml)溶液中。4.5小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(25ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(2
×
20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-25％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(d,j＝9.3hz,1h),7.36
–
7.21(m,5h),7.20
–
7.10(m,3h),7.09
–
7.03(m,1h),6.84(dd,j＝4.5,1.0hz,1h),6.73(dd,j＝7.4,4.5hz,1h),5.51(t,j＝4.8hz,1h),5.04(d,j＝2.2hz,2h),
5.01
–
4.89(m,1h),4.66
–
4.60(m,1h),4.55
–
4.28(m,4h),3.87(ddd,j＝16.3,9.6,7.1hz,1h),3.61(d,j＝16.9hz,3h),3.09(dt,j＝14.2,5.8hz,1h),2.91(dt,j＝15.3,8.2hz,1h),1.24(m,6h),1.16(dd,j＝6.3,3.8hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.27。lcms：ms m/z＝796.51[m+1]，tr＝1.25min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝4.331,4.395min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[1141]
实施例74.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(二异丙基氨基)乙酯
[1142][1143]
在室温处，将n,n-二异丙基乙胺(0.20ml，1.17mmol)和氯化镁(44.7mg，0.47mmol)添加到中间体4(155.6mg，0.47mmol)和中间体68(231.8mg，0.47mmol)在四氢呋喃(5.47ml)中的混合物中。将混合物加热至55℃。2小时后，使反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(50ml)稀释，并将所得混合物用水(2
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。在0℃处将浓盐酸水溶液(0.40ml)滴加到粗残余物的乙腈(5ml)溶液中。将混合物升温至室温。20小时后，减压去除挥发物。将水溶液冻干，得到无需进一步纯化即可使用的产物。lcms：ms m/z＝635.19[m+1]，tr＝0.95min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[1144]
实施例75.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯单一异构体
[1145]
[1146]
在室温处将四氢呋喃(1.4ml)添加到中间体4(202mg，0.610mmol)、中间体73(418mg，0.793mmol)和氯化镁(87mg，0.914mmol)的混合物中。将混合物加热至40℃持续10分钟，并添加n,n-二异丙基乙胺(0.265ml，1.524mmol)。在40℃处搅拌2小时后，使反应混合物冷却至室温，并减压浓缩。将粗残余物溶解于乙酸乙酯(40ml)中，并将所得混合物用水(30ml)和盐水(30ml)洗涤。将有机层分离，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物溶解于乙腈(10ml)中，并在0℃处滴加浓盐酸水溶液(0.508ml)。在0℃处4小时后，在0℃处将反应混合物用乙酸乙酯(50ml)和水(30ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过制备型hplc(phenomenex gemini 5μm c18 100
×
30mm柱)使用10-100％乙腈的水溶液的梯度纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.86(s,1h),7.77(bs,2h),7.41
–
7.32(m,2h),7.27
–
7.12(m,3h),6.85(d,j＝4.4hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),6.25
–
6.07(m,2h),5.50(d,j＝5.9hz,1h),5.38(d,j＝6.2hz,1h),4.54
–
4.42(m,1h),4.35
–
4.21(m,2h),4.22
–
4.08(m,2h),4.07
–
3.95(m,1h),3.92
–
3.77(m,1h),3.55
–
3.49(m,2h),3.49
–
3.44(m,2h),3.43
–
3.36(m,4h),1.20(d,j＝7.1hz,3h),1.07(t,j＝7.0hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ3.24。lcms：ms m/z＝635.07[m+1]，tr＝1.17min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-0.2min 2％乙腈，0.2min-1.5min 2-100％乙腈，1.5min-2.2min 100％乙腈，2.2min-2.4min 100％-2％乙腈，2.4min-2.5min 2％乙腈，2μl/min。hplc：tr＝2.45min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝4.09min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1147]
实施例76.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苄氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯。
[1148][1149]
在室温处将乙腈(2.5ml)添加到中间体4(150mg，0.453mmol)、中间体42(179mg，0.453mmol)和氯化镁(43mg，0.453mmol)的混合物中。将混合物加热至50℃持续5分钟，并添加n,n-二异丙基乙胺(0.197ml，0.453mmol)。22小时后，使反应混合物冷却至室温，并滴加浓盐酸水溶液(0.5ml)。1小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受硅胶色谱法，用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,0.7h),7.73(s,0.3h),7.41
–
7.22(m,5h),6.88
–
6.79(m,1h),
6.76
–
6.67(m,1h),5.56
–
5.43(m,1h),5.09
–
4.93(m,2h),4.69
–
4.18(m,4h),3.92
–
3.72(m,1h),3.61(s,0.9h),3.60(s,2.1h),1.31
–
1.22(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ7.88(s),7.81(s)。lcms：ms m/z＝547.06[m+1]，tr＝1.04min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.381min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。
[1150]
实施例77.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[1151][1152]
将中间体1(0.149g，0.512mmol)溶解在无水thf中并浓缩。将所得残余物置于高真空下1.5小时。然后将残余物溶解在nmp(4ml)中，然后添加thf(1ml)。将该溶液在冰浴中冷却，并且添加1m的tert-bumgcl在thf中的溶液(0.767ml，0.767mmol)，引起形成白色沉淀。5分钟后移除冷浴，将混合物超声处理以分散沉淀固体，并将反应在室温下搅拌10分钟。添加中间体((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯(0.251g，0.614mmol；wo2011123668)在thf(0.9ml)中的溶液。在室温下搅拌反应并通过lc/ms监测进程。在1小时45分钟后，将反应在冰浴中冷却，并且通过添加冰acoh(0.25ml)淬灭。移除冰浴并在室温下继续搅拌5分钟。通过蒸发去除挥发物，并且通过hplc从残余物中分离产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4,带星号(*)的化学位移表示在存在的第2异构体上相关质子的位移)δ7.81(s,0.41h),7.79*(s,0.59h),7.36
–
7.12(m,5h),6.85(m,1h),6.74(m,1h),5.50(m,1h),4.97
–
4.85(m,1h),4.63(m,1h),4.54
–
4.32(m,3h),3.85(m,1h),1.25(d,j＝7.1hz,2h),1.20*(d,j＝6.3hz,4h),1.16(t,j＝6.3hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.30(s)。ms m/z＝561.03[m+1]。
[1153]
sp和rp非对映体的拆分。经由手性制备型hplc(chiralpak ia，庚烷70％乙醇30％)纯化产物。
[1154]
第二洗脱非对映体：实施例1。
[1155]
实施例78.((r)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯。
[1156][1157]
实施例的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(s,1h),7.38
–
7.24(m,2h),7.22
–
7.12(m,3h),6.87(d,j＝4.5hz,1h),6.75(d,j＝4.5hz,1h),5.53(d,j＝5.0hz,1h),4.96(七重峰，j＝6.3hz,1h),4.65(t,j＝5.3hz,1h),4.56
–
4.46(m,2h),4.38(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),3.92
–
3.80(m,1h),1.27(br d,j＝7.1hz,3h),1.22(d,j＝6.3hz,6h)。lcms：ms m/z＝560.96[m+1]，tr＝1.48min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.54min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝4.95min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1158]
实施例79.n2-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-n6-((苄氧基)羰基)-l-赖氨酸2-乙基丁酯
[1159][1160]
(s)-6-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-(氯-l5-氮烷基)己酸2-乙基丁酯。将4n盐酸(5ml)添加到n6-((苄氧基)羰基)-l-赖氨酸(1g，4mmol)在2-乙基-丁醇(10ml)中的溶液中，并且将所得混合物加热至70℃。3小时后，将反应混合物在70℃处减压浓缩。将粗固体残余物溶解到己烷(150ml)中并搅拌4小时。通过真空过滤收集所得固体，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.38
–
7.25(m,5h),5.06(s,2h),4.26
–
4.12(m,2h),4.03(t,j＝6.3hz,1h),3.13(t,j＝6.7hz,2h),2.01
–
1.80(m,2h),1.62
–
1.32(m,8h),0.92(t,j＝7.5hz,6h)。
[1161][1162]
n6-((苄氧基)羰基)-n2-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-赖氨酸2-乙基丁酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-6-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-(氯-l5-氮烷基)己酸2-乙基丁酯(1.3g，3.57mmol)和二氯磷酸苯酯(0.753ml，3.57mmol)在二氯甲烷(23ml)中的溶液中添加三乙胺(0.422ml，7.14mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1.5小时。然后添加4-硝基苯酚(496mg，3.57mmol)和三乙胺(0.5ml，3.57mmol)。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，并且将所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物(～1:0.8非对映体混合物)。1h nmr(400mhz，氯仿-d1)δ8.27
–
8.13(m,2h),7.44
–
7.12(m,12h),5.08(br s,2h),4.72(br s,1h),4.09
–
3.97(m,3h),3.92
–
3.72(m,1h),3.18
–
2.99(m,2h),1.82
–
1.19(m,11h),0.86(br t,j＝7.4hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d1)δ-2.49(s),-2.76(s)。ms m/z＝641.97[m+1]。
[1163][1164]
在室温处，向中间体4(43mg，0.130mmol)、n6-((苄氧基)羰基)-n2-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-赖氨酸2-乙基丁酯(83.3mg，0.130mmol)和氯化镁(12.4mg，0.106mmol)的混合物中添加乙腈(1ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌5分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.057ml，0.324mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.151ml)。1小时后，将反应混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和乙酸乙酯(20ml)稀释。将各层分开并且将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio2combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.4h),7.77(s,0.6h),7.35
–
7.09(m,10h),6.88
–
6.82(m,1h),6.75(d,j＝4.6hz,0.4h),6.71(d,j＝4.5hz,0.6h),5.53
–
5.48(m,1h),5.04(br s,2h),4.65
–
4.53(m,1h),4.51
–
4.28(m,3h),4.07
–
3.76(m,3h),3.08
–
2.94(m,2h),1.74
–
1.13(m,11h),0.89
–
0.78(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.66(s),3.27(s)。ms m/z＝794.51[m+1]。
[1165]
实施例80.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-3-苯基丙酸异丙酯
[1166][1167]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-3-苯基丙酸异丙酯。将二氯磷酸苯酯(718μl，4.8mmol)溶解于无水二氯甲烷(20ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加苯丙氨酸异丙酯盐酸盐(1g，4.1mmol)。滴加三乙胺(736μl，5.3mmol)并搅拌30分钟。滴加更多的三乙胺(736μl，5.3mmol)并搅拌30分钟。滴加另外的三乙胺(736μl，5.3mmol)并搅拌15分钟。添加对硝基苯酚(600mg，4.32mmol)并移除冰浴。然后将反应混合物搅拌2小时。添加更多的对硝基苯酚(50mg)和三乙胺(736μl，5.3mmol)并搅拌1小时。将反应混合物减压浓缩，用乙酸乙酯(50ml)稀释并用5％柠檬酸水溶液(20ml)洗涤两次，然后用盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-15％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.17(t,j＝9.0hz,2h),7.38
–
7.13(m,10h),7.13
–
7.02(m,2h),4.95(pd,j＝6.3,3.9hz,1h),4.31(ddq,j＝10.6,9.2,6.2hz,1h),3.69(td,j＝10.9,4.6hz,1h),3.02(dd,j＝6.1,1.8hz,2h),1.21
–
1.08(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.97,-2.98。ms m/z＝485.0[m+1],483.2[m-1]。
[1168][1169]
将中间体2(50mg，0.116mmol)和(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-3-苯基丙酸异丙酯(67mg，0.139mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(17mg，0.174mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)，并将反应在50℃处搅拌3小时。将反应加热并在60℃处搅拌17小时。将反应混合物冷却至室温。将4n氯化氢的1,4-二噁烷(5ml)溶液以及甲醇(500μl)添加到反应混合物中，将该反应混合物搅拌2小时。添加水(1ml)并搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯(30ml)稀释，并在冰浴中冷却。缓慢添加1n氢氧化钠水溶液，得到ph为10。收集有机层并用5％碳酸钠水溶液(20ml)洗涤两次，然后用盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio2combiflash hp gold柱，0-3％-10％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物用制备型hplc(phenomenex gemini c
18
柱，0-100％乙腈/水，含有0.1％三氟乙酸作为改性剂)纯化。将含有产物的级分
合并，并用乙酸乙酯(30ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.66(s,1h),7.28
–
7.01(m,10h),6.53(dd,j＝11.3,5.1hz,2h),5.55
–
5.38(m,1h),4.91(m,1h),4.43(m,2h),4.34
–
4.01(m,3h),3.10
–
2.81(m,2h),1.12(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ2.90,2.73ms m/z＝637.1[m+1],635.0[m-1]。
[1170]
实施例81.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-3-苯基丙酸2-乙基丁酯
[1171][1172]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-3-苯基丙酸2-乙基丁酯。将二氯磷酸苯酯(354μl，2.38mmol)溶解于无水二氯甲烷(24ml)中，并在冰浴中在大气氩气下搅拌。一次性添加l-苯丙氨酸2-乙基丁酯盐酸盐(680mg，2.38mmol)。滴加三乙胺(730μl，5.24mmol)。将反应混合物搅拌2小时。滴加更多的三乙胺(365μl，2.62mmol)并搅拌60分钟。添加对硝基苯酚(265mg，1.9mmol)。将反应混合物搅拌2小时，并且用二氯甲烷(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(20ml)洗涤两次。有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio2combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.23
–
8.14(m,2h),7.33(t,j＝7.8hz,2h),7.28
–
7.10(m,7h),7.07(m,2h),6.85(m,1h),4.15
–
3.97(m,1h),3.90
–
3.75(m,2h),2.97(m,1h),2.79(m,1h),1.39
–
1.25(m,1h),1.17(dtd,j＝8.8,7.2,3.6hz,4h),0.73(tt,j＝7.6,1.7hz,6h)。
[1173][1174]
将中间体2(50mg，0.116mmol)和(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-3-苯基丙酸2-乙基丁酯(73mg，0.139mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(17mg，0.174mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)，并将反应在50℃处搅拌3小时。将反应加热并在60℃处搅拌17小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释，并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中，添加三氟乙酸水溶液(v/v 1:1，2ml)并搅拌20小时。将反应混合物用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加氢氧化钾水溶液，得到ph为10。收集有机层并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗
涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-5％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(m,1h),7.33
–
6.97(m,10h),6.84(dd,j＝4.5,2.9hz,1h),6.70(dd,j＝4.5,3.0hz,1h),5.54
–
5.44(m,1h),4.59
–
4.50(m,1h),4.37(m,1h),4.26
–
4.02(m,3h),4.02
–
3.80(m,3h),2.99(m,1h),2.85(m,1h),1.42
–
1.29(m,1h),1.29
–
1.13(m,4h),0.80(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.21,2.70。ms m/z＝679.1[m+1],677.1[m-1]。
[1175]
实施例82.(2r)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸2-乙基丁酯
[1176][1177]
(r)-2-氨基丙酸2-乙基丁酯盐酸盐。将d-丙氨酸(891mg，10mmol)与2-乙基-1-丁醇(20ml)混合。滴加三甲基甲硅烷基氯(3.8ml，30mmol)并搅拌30分钟。滴加更多的三甲基甲硅烷基氯(3.8ml，30mmol)。将反应混合物加热至50℃并搅拌2小时。滴加更多的三甲基甲硅烷基氯(3.8ml，30mmol)。将反应混合物加热至75℃并搅拌18小时。将反应混合物在80℃处减压浓缩。将残余物在冰浴中冷却。添加己烷(100ml)并搅拌1小时。收集固体并用己烷(100ml)洗涤，并在高真空下干燥，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.42(s,3h),4.18
–
3.96(m,3h),1.58
–
1.43(m,1h),1.39(d,j＝7.2hz,3h),1.31(ddq,j＝10.2,7.3,3.7hz,4h),0.85(t,j＝7.4hz,6h)。
[1178][1179]
(2r)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸2-乙基丁酯。将二氯磷酸苯酯(354μl，2.38mmol)溶解于无水二氯甲烷(24ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加d-丙氨酸2-乙基丁酯盐酸盐(500mg，2.38mmol)。滴加三乙胺(730μl，5.24mmol)并搅拌2小时。滴加更多的三乙胺(365μl，2.62mmol)并搅拌30分钟。添加对硝基苯酚(265mg，1.9mmol)并且移除冰浴。然后将反应搅拌2小时。将反应混合物用二氯甲烷(20ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-15％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32
–
8.22(m,2h),7.53
–
7.32(m,4h),7.29
–
7.15(m,3h),6.75
–
6.60(m,1h),4.08
–
3.93(m,1h),3.93
–
3.82(m,2h),1.38(m,1h),1.31
–
1.17(m,7h),0.78(t,j＝7.5hz,6h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.26,-1.48。ms m/z＝451.0[m+1],449.1[m-1]。
d4)δ3.06
[1186]
实施例85.(2s)-6-乙酰氨基-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)己酸乙酯
[1187][1188]
(s)-6-乙酰氨基-2-氨基己酸乙酯盐酸盐。将(s)-6-乙酰氨基-2-氨基己酸(1.88g，10mmol)与乙醇(25ml)混合。滴加三甲基甲硅烷基氯(6.3ml，50mmol)并搅拌30分钟。将反应混合物加热至80℃并搅拌20小时。将反应混合物减压浓缩，得到油状物，将该油状物与己烷(100ml)混合并搅拌30分钟。滗出溶剂。添加更多的己烷(100ml)并搅拌30分钟。将溶剂滗出，并且将所得油状物在高真空下干燥，得到标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.59(bs,3h),7.94(s,1h),4.18(m,2h),3.92(d,j＝5.8hz,1h),2.98(d,j＝6.1hz,2h),1.77(m,5h),1.45
–
1.30(m,2h),1.21(t,j＝7.1hz,3h)。
[1189][1190]
(2s)-6-乙酰氨基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)己酸乙酯。将二氯磷酸苯酯(354μl，2.38mmol)溶解于无水二氯甲烷(24ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加(s)-6-乙酰氨基-2-氨基己酸乙酯盐酸盐(601mg，2.38mmol)。滴加三乙胺(730μl，5.3mmol)并搅拌2小时。滴加更多的三乙胺(365μl，2.62mmol)并搅拌60分钟。添加对硝基苯酚(265mg，1.9mmol)并且移除冰浴。然后将反应搅拌2小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.33
–
8.22(m,2h),7.70(t,j＝5.7hz,1h),7.53
–
7.33(m,4h),7.29
–
7.14(m,3h),6.63(dt,j＝13.4,10.6hz,1h),3.99(qd,j＝7.1,2.1hz,2h),3.78(qt,j＝9.7,5.4hz,1h),2.87(qd,j＝6.8,3.4hz,2h),1.74(s,3h),1.51(m,2h),1.34
–
1.00(m,7h)。ms m/z＝494.1[m+1],492.2[m-1]。
[1191]
[1192]
(2s)-6-乙酰氨基-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)己酸乙酯。将中间体2(50mg，0.116mmol)和(2s)-6-乙酰氨基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)己酸乙酯(69mg，0.139mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(17mg，0.174mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)，并将反应在50℃处搅拌3小时。将反应加热并在60℃处搅拌17小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释，并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中，添加三氟乙酸水溶液(v/v 1:1，2ml)并搅拌20小时。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加氢氧化钾水溶液，得到ph为10。收集有机层并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio2combiflash hp gold柱，0-3％-10％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.38
–
7.26(m,2h),7.26
–
7.10(m,3h),6.85(dd,j＝4.5,3.3hz,1h),6.74(dd,j＝4.5,3.0hz,1h),5.54
–
5.45(m,1h),4.63(td,j＝5.4,4.4hz,1h),4.54
–
4.27(m,3h),4.08
–
3.93(m,2h),3.80(m,1h),3.05(tq,j＝6.0,1.8hz,2h),1.90(m,3h),1.74
–
1.62(m,1h),1.62
–
1.48(m,1h),1.47
–
1.25(m,4h),1.16(t,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.54,3.44。ms m/z＝646.1[m+1],644.1[m-1]。
[1193]
实施例86.(2r)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯
[1194][1195]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸异丙酯。将d-丙氨酸异丙酯-hcl(1.21g，7.22mmol)悬浮于二氯甲烷(15ml)中，并且将所得混合物冷却至-78℃。添加二氯磷酸苯酯(1.08ml，7.22mmol)。然后在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(2.0ml，14.44mmol)。然后一次性添加4-硝基苯酚(1004mg，7.22mmol)。然后在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(1.0ml，7.22mmol)。将所得混合物在-78℃处搅拌30分钟，然后使其升温至室温并且用水(2
×
)和饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至30％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化残余物，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.32
–
8.14(m,2h),7.44
–
7.31(m,4h),7.31
–
7.15(m,3h),5.01(pd,j＝6.3,1.0hz,1h),4.22
–
3.99(m,1h),3.89(dd,j＝12.2,9.1hz,1h),1.48
–
1.32(m,3h),1.33
–
1.11(m,6h)；
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.00,-3.03；ms m/z 409(m+1)+。
[1196][1197]
(2r)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯。将中间体2(50mg，0.116mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸异丙酯(57mg，0.139mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(17mg，0.174mmol)。将反应升温至60℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)，并且将反应在60℃处搅拌17小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(330μl)并搅拌20小时。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加1n氢氧化钠溶液，得到ph为10。收集有机层并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.30(m,2h),7.23
–
7.10(m,3h),6.84(t,j＝4.7hz,1h),6.73(dd,j＝13.9,4.5hz,1h),5.53
–
5.46(m,1h),4.93(m,1h),4.62(m,1h),4.52
–
4.41(m,2h),4.35(m,1h),3.93
–
3.78(m,1h),1.26
–
1.14(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.41,3.13。ms m/z＝561.2[m+1],559.2[m-1]。
[1198]
实施例87.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸异丙酯
[1199][1200]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸异丙酯。通过使用用于实施例88的相同程序将(2s)-2-氨基丁酸异丙酯盐酸盐(1.28g，7.05mmol，1:1.6同分异构混合物)转化为中间体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.33
–
8.23(m,2h),7.55
–
7.34(m,4h),7.34
–
7.17(m,3h),5.00
–
4.87(m,1h),3.84(m,1h),1.86
–
1.49(m,2h),1.18(m,6h),0.87(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-0.91,-1.10。ms m/z＝423(m+h)
+
。
[1201][1202]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸异丙酯。使用用于实施例88的相同程序，由中间体(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸异丙酯(80mg，0.19mmol)和中间体4(117mg，0.28mmol)获得产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.7h),7.79(s,0.3h),7.39
–
7.25(m,2h),7.25
–
7.13(m,3h),6.86(m,1h),6.74(m,1h),5.49(m,1h),4.98
–
4.82(m,1h),4.62(m,1h),4.45(m,2h),4.34(m 1h),3.72(m,1h),1.77
–
1.47(m,2h),1.21
–
1.12(m,6h),0.83(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.68,3.65。ms m/z＝575(m+h)
+
。
[1203]
实施例88.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸2-乙基丁酯
[1204][1205]
(s)-2-氨基丁酸2-乙基丁酯盐酸盐。向(s)-2-氨基丁酸(2.5g，24.24mmol)和2-乙基-丁-1-醇(25ml)的混合物中添加tmscl(8.64ml)。将所得混合物在70℃处搅拌15小时并在80℃处在旋转蒸发器中浓缩，与甲苯共蒸发若干次，在高真空下干燥，得到中间体并用于下一反应。
[1206][1207]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸2-乙基丁酯。将化合物(s)-2-氨基丁酸2-乙基丁酯盐酸盐(660mg，2.95mmol)悬浮于亚甲基氯(6ml)中，冷却至-78℃，并快速添加二氯磷酸苯酯(0.44ml，2.95mmol)。在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.82ml，5.90mmol)，并且一次性添加4-硝基苯酚(410mg，2.95mmol)。然后在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.41ml，2.95mmol)。将所得混合物在-78℃处搅拌30分钟，用水洗涤两次并用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至30％etoac的己烷溶液)纯化残余物，得到中间体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.34
–
8.22(m,2h),7.52
–
7.32(m,4h),7.31
–
7.18(m,3h),3.99(m,1.1hz,2h),3.89(m,1h),1.76(m,1h),1.65(m,1h),1.50
–
1.38(m,1h),1.38
–
1.25(m,4h),0.97
–
0.79(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-0.94,-1.20。ms m/z 465(m+h)
+
。
[1208][1209]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸2-乙基丁酯。在室温处，向中间体4(89mg，0.21mmol)、中间体(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸2-乙基丁酯(130mg，0.28mmol)和mgcl2(30mg，0.31mmol)在dmf(4ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.09ml，0.52mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌4小时，然后用etoac稀释，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物溶解于acn(3ml)中并添加浓hcl(0.5ml)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，并且通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，10％-70％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,0.63h),7.78(s,0.37h),7.25(m,5h),6.97
–
6.58(m,2h),5.49(m,1h),4.61(m,1h),4.45(m,2h),4.34(m,1h),3.99(m,1h),3.88(m,1h),3.83
–
3.73(m,1h),1.77
–
1.65(m,1h),1.59(m,1h),1.43(m,1h),1.38
–
1.21(m,4h),0.85(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.62,3.59。ms m/z 617(m+h)
+
。
[1210]
(s)和(r)非对映体的分离。经由手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，庚烷70％乙醇30％)纯化产物，得到非对映体：
[1211][1212]
实施例89。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.28(m,2h),7.20
–
7.11(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.1hz,1h),4.62(t,j＝5.4hz,1h),4.47(m,2h),4.35(m,1h),4.06
–
3.93(m,2h),3.78(m,1h),1.80
–
1.66(m,1h),1.60(m,1h),1.53
–
1.42(m,1h),1.39
–
1.22(m,4h),0.94
–
0.79(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.59。
[1213]
实施例90。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.32(m,2h),7.26
–
7.12(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.48(d,j＝4.9hz,1h),4.64
–
4.58(m,1h),4.46(d,j＝5.6hz,1h),4.45
–
4.29(m,2h),4.01
–
3.83(m,2h),3.82
–
3.73(m,1h),1.77
–
1.65(m,1h),1.59(m,1h),1.42(m,1h),1.30(m,4h),0.84(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.62。
[1214]
实施例91.(2s)-6-氨基-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)己酸2-乙基丁酯
[1215][1216]
n6-((苄氧基)羰基)-l-赖氨酸2-乙基丁酯盐酸盐。将4n盐酸(5ml)添加到n6-((苄氧基)羰基)-l-赖氨酸(1g，4mmol)在2-乙基-丁醇(10ml)中的溶液中，并且将所得混合物加热至70℃。3小时后，将反应混合物在70℃处减压浓缩。将粗固体残余物溶解到己烷(150ml)中并搅拌4小时。通过真空过滤收集所得白色结晶固体，得到中间体。1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.38
–
7.25(m,5h),5.06(s,2h),4.26
–
4.12(m,2h),4.03(t,j＝6.3hz,1h),3.13(t,j＝6.7hz,2h),2.01
–
1.80(m,2h),1.62
–
1.32(m,8h),0.92(t,j＝7.5hz,6h)。
[1217][1218]
n6-((苄氧基)羰基)-n2-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-赖氨酸2-乙基丁酯。在0℃处在氩气氛下向n6-((苄氧基)羰基)-l-赖氨酸2-乙基丁酯盐酸盐(1.3g，3.57mmol)和二氯磷酸苯酯(0.753ml，3.57mmol)在二氯甲烷(23ml)中的溶液中添加三乙胺(0.422ml，7.14mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1.5小时。然后添加4-硝基苯酚(496mg，3.57mmol)和三乙胺(0.5ml，3.57mmol)。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，并且将所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。ms m/z＝641.97[m+1]。
[1219][1220]
(2s)-6-氨基-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)己酸2-乙基丁酯。在室温处，向中间体4(43mg，0.130mmol)、中间体n6-((苄氧基)羰基)-n2-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-赖氨酸2-乙基丁酯(83.3mg，0.130mmol)和氯化镁(12.4mg，0.106mmol)的混合物中添加乙腈(1ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌5分钟。然后
添加n,n-二异丙基乙胺(0.057ml，0.324mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.151ml)。1小时后，将反应混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和乙酸乙酯(20ml)稀释。将各层分开并且将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio2combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到cbz保护的中间体，将该中间体溶解到tfa(1ml)中，并且将所得混合物加热至50℃。2小时后，将粗残余物通过制备型hplc(phenominex luna 5u c18(2)100
×
30mm柱，5-100％乙腈/水梯度)纯化，得到呈tfa盐形式的产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)*表示主要非对映体δ8.05(s,1h),8.00(s,1h*),7.40
–
7.12(m,5h,5h*),6.98(d,j＝4.7hz,1h),6.93(d,j＝4.8hz,1h*),5.55(d,j＝5.2hz,1h),5.53(d,j＝5.0hz,1h*),4.57
–
4.50(m,1h,1h*),4.50
–
4.33(m,3h,3h*),4.08
–
3.96(m,2h,2h*),3.92
–
3.84(m,1h,1h*),2.87(t,j＝7.8hz,2h*),2.83
–
2.75(m,2h),1.87
–
1.73(m,2h,2h*),1.73
–
1.24(m,10h,10h*),0.94
–
0.81(m,6h,6h*)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)*表示主要非对映体δ3.76(s)3.49*(s)。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-77.99。ms m/z＝660.31[m+1]。
[1221]
实施例92.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸新戊酯
[1222][1223]
(s)-2-氨基丙酸新戊酯盐酸盐。将boc-l-丙氨酸(3.8g，20mmol)和新戊醇(2.1g，24mmol)溶解于无水二氯甲烷(20ml)中。将反应混合物在冰浴中冷却并在大气氮气下搅拌。分3份添加n-乙基-n'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(5.8g，30mmol)。一次性添加4-(二甲基氨基)吡啶(244mg，2mmol)。将反应搅拌30分钟，然后移除冰浴。将反应在室温处搅拌5小时。添加更多的新戊醇(210mg，2.4mmol)和n-乙基-n'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(500mg)。将反应搅拌16小时。将反应混合物用二氯甲烷(30ml)稀释并用5％柠檬酸水溶液(15ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(15ml)和盐水(15ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将所得产物溶解于4n氯化氢的1,4-二噁烷(10ml)溶液中并搅拌30分钟。添加无水乙醚(50ml)并搅拌30分钟。收集所得固体，用无水乙醚(100ml)洗涤，然后在真空下干燥，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.51(s,3h),4.10(q,j＝7.2hz,1h),3.92(d,j＝10.4hz,1h),3.79(d,j＝10.4hz,1h),1.42(d,j＝7.2hz,3h),0.91(s,9h)。
[1224][1225]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸新戊酯。将二氯磷酸苯酯(374μl，2.5mmol)溶解于无水二氯甲烷(25ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加(s)-2-氨基丙酸新戊酯盐酸盐(489mg，2.5mmol)。滴加三乙胺(768μl，5.5mmol)并搅拌1
小时。滴加更多的三乙胺(384μl，2.75mmol)并搅拌20分钟。添加对硝基苯酚(278mg，2mmol)并且移除冰浴。然后将反应搅拌2小时。将反应混合物用二氯甲烷(20ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.33
–
8.22(m,2h),7.55
–
7.32(m,4h),7.31
–
7.14(m,3h),6.71(m,1h),4.11
–
3.94(m,1h),3.80
–
3.60(m,2h),1.24(m,3h),0.84(d,j＝1.6hz,9h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.21,-1.40。ms m/z＝436.9[m+1],435.1[m-1]。
[1226][1227]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸新戊酯。将中间体2(50mg，0.116mmol)和(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸新戊酯(61mg，0.139mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(17mg，0.174mmol)。将反应升温至60℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)，并将反应在60℃处搅拌20小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(400μl)并在室温处搅拌4小时。将反应混合物用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为10。收集有机层并用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.38
–
7.08(m,5h),6.84(dd,j＝4.5,1.8hz,1h),6.73(dd,j＝4.6,1.7hz,1h),5.49(m,1h),4.66
–
4.57(m,1h),4.54
–
4.29(m,3h),3.94(dq,j＝9.8,7.1hz,1h),3.86
–
3.60(m,2h),1.30(m,3h),0.89(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.28。ms m/z＝589.0[m+1],586.9[m-1]。
[1228]
(s)和(r)非对映体的分离。经由手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，庚烷70％乙醇30％)纯化产物，得到非对映体：
[1229][1230]
实施例93.第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.28(dd,j＝8.7,7.1hz,2h),7.20
–
7.10(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.48(m,2h),4.36(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),3.94(dq,j＝9.5,7.2hz,1h),3.86
–
3.70(m,2h),1.36
–
1.24(m,3h),0.91(m,9h)。
31
p nmr
(162mhz，甲醇-d4)δ3.26。
[1231]
实施例94.第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.37
–
7.27(m,2h),7.26
–
7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.0hz,1h),4.60(t,j＝5.3hz,1h),4.46(d,j＝5.6hz,1h),4.44
–
4.31(m,2h),3.94(dq,j＝9.9,7.1hz,1h),3.82
–
3.62(m,2h),1.33
–
1.25(m,3h),0.88(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.27。
[1232]
实施例95. 1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸异丙酯
[1233][1234]
1-氨基环丁烷羧酸异丙酯盐酸盐。将1-氨基环丁烷羧酸盐酸盐(1.52g，10mmol)与异丙醇(30ml)混合。滴加三甲基甲硅烷基氯(12.7ml，100mmol)并搅拌30分钟。将反应混合物加热至80℃并搅拌20小时，得到澄清溶液。将反应减压浓缩。添加无水乙醚(50ml)并搅拌30分钟。收集所得固体，用己烷(50ml)洗涤并在高真空下干燥，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.73(s,3h),5.00(p,j＝6.2hz,1h),2.46
–
2.32(m,4h),2.02(m,2h),1.26(d,j＝6.2hz,6h)。
[1235][1236]
1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸异丙酯。将二氯磷酸苯酯(374μl，2.5mmol)溶解于无水二氯甲烷(25ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加1-氨基环丁烷羧酸异丙酯盐酸盐(484mg，2.5mmol)。滴加三乙胺(768μl，5.5mmol)并搅拌1小时。滴加更多的三乙胺(384μl，2.75mmol)并搅拌20分钟。添加对硝基苯酚(278mg，2mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌2小时。
[1237]
将反应用二氯甲烷(20ml)稀释并用1％柠檬酸水溶液(20ml)洗涤，然后用5％碳酸钠水溶液(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32
–
8.23(m,2h),7.49
–
7.43(m,2h),7.43
–
7.35(m,2h),7.27
–
7.17(m,3h),6.92(d,j＝11.7hz,1h),4.85(p,j＝6.2hz,1h),2.46
–
2.36(m,2h),2.25
–
2.11(m,2h),1.86
–
1.68(m,2h),1.10(d,j＝6.2hz,6h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-3.04。ms m/z＝434.9[m+1],433.1[m-1]。
[1238][1239]
1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸异丙酯。将中间体2(50mg，0.116mmol)和1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸异丙酯(60mg，0.139mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(22mg，0.232mmol)。将反应升温至60℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(50μl，0.29mmol)，并且将反应在60℃处搅拌17小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(400μl)并在室温处搅拌4小时。
[1240]
将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为10。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-10％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(m,1h),7.36
–
7.09(m,5h),6.83(m,1h),6.72(m,1h),5.53
–
5.45(m,1h),4.98(m,1h),4.63(m,1h),4.55
–
4.31(m,3h),2.56
–
2.34(m,2h),2.34
–
2.13(m,2h),1.94
–
1.75(m,2h),1.26
–
1.17(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ2.03,1.91。ms m/z＝587.0[m+1],585.0[m-1]。
[1241]
实施例96.((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基((r)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙基)磷酸氢酯
[1242][1243]
(r)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙基(2-氯苯基)磷酸三乙基铵。将二氯磷酸2-氯苯酯(0.371ml，2.3mmol)溶解于acn(9.2ml)中。将所得溶液在冰浴中冷却，并且添加1,2,4-三唑(0.342g，4.95mmol)，然后添加et3n(0.689ml，4.95mmol)。移除冷浴，并且在45分钟后，添加(s)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙-1-醇(1g，2.3mmol)在吡啶(9.2ml)中的溶液。在室温处搅拌1小时25分钟后，将et3n(0.810ml)和水(0.23ml)添加到反应中。将反应搅拌10分钟。添加饱和nahco3水溶液，并且将混合物再搅拌10分钟。将混合物用dcm(3
×
)萃取，并且将合并的有机物经na2so4干燥，将其通过过滤去除。将滤液浓缩并置于高真空下，得到
中间体。该材料直接用于后续反应。1h nmr(400mhz,acn-d3)δ7.61(dt,j＝8.2,1.3hz,1h),7.40
–
7.24(m,6h),7.17(ddd,j＝8.5,7.4,1.7hz,1h),6.99(td,j＝7.7,1.5hz,1h),4.6(m,2h),4.04
–
3.91(m,2h),3.70(五重峰，j＝5.1hz,1h),3.51
–
3.42(m,2h),3.36(t,j＝6.5hz,2h),2.96(m,6h),1.49(m,2h),1.27(m,30h),1.19(t,j＝7.3hz,9h),0.88(t,j＝4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,acn-d3)δ-6.007(s)。ms m/z＝624.97[m+1]。
[1244][1245]
(7-((3as,4s,6r,6as)-6-(((((r)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙氧基)(2-氯苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)-6-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯。将中间体(r)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙基(2-氯苯基)磷酸三乙基铵(0.337g，0.464mmol)溶解于吡啶(4ml)中。向该溶液中添加msnt(0.275g，0.927mmol)，然后添加中间体2(0.1g，0.232mmol)。向该溶液中添加n-甲基咪唑(nmi)(0.046ml，0.579mmol)并且将反应在室温处搅拌，通过lc/ms监测中间体2的消失。将反应在冰浴中冷却并通过缓慢添加饱和nahco3水溶液来淬灭。将水层用水、饱和nahco3水溶液和盐水的1:1:1混合物稀释。用dcm(3
×
)萃取水层，并且将合并的有机物经na2so4干燥，将其通过过滤去除。浓缩滤液，并且通过硅胶柱色谱法(25g装载筒，40g combiflash hp gold柱，洗脱液斜坡为100％己烷至60％etoac/己烷)分离中间体。1h nmr(400mhz,acn-d3)δ8.44(s,1h),8.12(s,1h),7.47
–
7.39(m,1h),7.36
–
7.32(m,1h),7.31
–
7.21(m,5h),7.20
–
7.06(m,3h),6.91(s,1h),5.69(s,1h),5.25(ddd,j＝12.9,6.6,3.2hz,1h),5.04(t,j＝6.8hz,1h),4.60
–
4.13(m,6h),3.72(p,j＝5.0hz,1h),3.43(dd,j＝7.8,5.3hz,2h),3.35(m,2h),1.71
–
1.67(m,3h),1.59
–
1.50(m,9h),1.47(m,2h),1.35(s,3h),1.32-1.20(m,30h),0.87(t,j＝4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,acn-d3)δ-7.31(s),-7.41(s)。ms m/z＝1038.33[m+1]。
[1246][1247]
(r)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙基(((3as,4r,6s,6as)-6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,
3]二氧杂环戊烯-4-基)甲基)磷酸四丁基铵。将中间体(7-((3as,4s,6r,6as)-6-(((((r)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙氧基)(2-氯苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)-6-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.532g，0.512mmol)溶解于thf(5.7ml)和吡啶(0.7ml)中，并且添加水(0.7ml)。向所得澄清均匀溶液中添加tbaf在thf中的1m溶液(1.537ml，1.537mmol)。在室温处搅拌反应并通过lc/ms监测进程。完成后，将反应在冰浴中冷却，并用2个移液管的饱和nahco3水溶液淬灭。将该溶液用2个移液管的水进一步稀释，并且将所得混合物用dcm(4
×
)萃取。用2n hcl使水相呈酸性(ph～3)，然后用另外的dcm(3
×
)萃取。将合并的有机相用盐水(用饱和nahco3水溶液将其ph调节至8)萃取并经na2so4干燥，将其通过过滤去除。浓缩滤液，并且通过硅胶柱色谱法(12g装载筒，80g combiflash hp gold柱，洗脱液斜坡为100％dcm至20％meoh/dcm)分离中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.18(s,1h),8.03(s,1h),7.36
–
7.09(m,6h),6.86(s,1h),5.72(s,1h),5.12(d,j＝6.2hz,1h),5.02(dd,j＝6.6,3.9hz,1h),4.64(dd,j＝18,12hz,2h),4.13(d,j＝4.8hz,2h),3.94(m,2h),3.77(s,1h),3.58(dd,j＝10.4,2.4hz,1h),3.48(dd,j＝10.6,6.5hz,1h),3.35(t,j＝6hz,2h),3.32
–
3.22(m,n
+
(ch2ch2ch2ch3)4,8h),1.70(s,3h),1.66
–
1.56(m,n
+
(ch2ch2ch2ch3)4,8h),1.54(s,9h),1.52
–
1.47(m,2h),1.36
–
1.45(m,n
+
(ch2ch2ch2ch3)4,8h),1.32(s,3h),1.30-1.18(m,30h),1.00
–
0.93(m,n
+
(ch2ch2ch2ch3)4,12h),0.86(t,j＝6.8hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-0.875(s)。ms m/z＝928.18[m+1]。
[1248][1249]
((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基((r)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙基)磷酸氢酯。将中间体(r)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙基(((3as,4r,6s,6as)-6-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲基)磷酸四丁基铵(0.518g，0.558mmol)溶解于thf(15ml)中。在室温处向该溶液中添加12m hcl水溶液(3.837ml，46mmol)。在室温处搅拌反应并通过lc/ms监测进程。完成后，将反应浓缩并将残余物与thf(2
×
)和dcm(2
×
)共蒸发。将所得残余物溶解在dcm中，并且通过硅胶柱色谱法(12g装载筒，40g combiflash hp gold柱，洗脱液斜坡为100％dcm至20％meoh/dcm)分离产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.33
–
7.17(m,5h),6.83(dd,j＝11.6,4.4hz,2h),5.55(d,j＝5.2hz,1h),4.65
–
4.49(m,4h),4.20
–
4.08(m,2h),3.95(t,j＝5.4hz,2h),3.71(五重峰，j＝5hz,1h),3.52(dd,j＝10.6,3.8hz,1h),3.44(dd,j＝10.7,6.0hz,1h),3.37(td,j＝6.6,2.9hz,2h),1.50(五重峰，j＝6.7hz,2h),1.36
–
1.21(m,30h),0.90(t,j＝6.7hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-0.410。ms m/z＝788.16[m+1]。
[1250]
实施例97.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸乙酯
[1251][1252]
(s)-2-氨基丁酸乙酯盐酸盐。向(s)-2-氨基丁酸乙酯(5g，48.5mmol)和乙醇(28ml)的混合物中添加tmscl(17ml)。将所得混合物在70℃处搅拌15小时，并真空浓缩。将所得固体用5％etoac的己烷溶液研磨，过滤，并用5％etoac的己烷溶液洗涤若干次，并在高真空下干燥15小时，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.83(s,3h),4.27(p,j＝7.0hz,2h),4.06(q,j＝5.6hz,1h),2.28
–
2.01(m,2h),1.31(t,j＝7.0hz,3h),1.12(t,j＝7.4hz,3h)。
[1253]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸乙酯。通过用于实施例88的相同程序将中间体(s)-2-氨基丁酸乙酯盐酸盐(1.20g，7.16mmol)转化为中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.34
–
8.09(m,2h),7.45
–
7.30(m,4h),7.27
–
7.14(m,3h),4.15(m,2h),4.09
–
3.97(m,1h),3.90
–
3.74(m,1h),1.88
–
1.62(m,2h),1.24(m,3h),0.86(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.68,-2.73。ms m/z 409(m+h)
+
。
[1254][1255]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸乙酯。通过用于实施例88的相同程序，由中间体4(50mg，0.12mmol)和中间体(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸乙酯(71mg，0.18mmol)获得产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,0.56h),7.78(s,0.44h),7.39
–
7.06(m,5h),6.93
–
6.80(m,1h),6.73(m,1h),5.49(m,1h),4.63(m,1h),4.56
–
4.26(m,3h),4.19
–
3.94(m,2h),3.84
–
3.65(m,1h),1.69(m,1h),1.58(m,1h),1.18(m,3h),0.82(m 3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.61,3.60。ms m/z＝561(m+h)
+
。
[1256]
实施例98.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-缬氨酸环己酯
[1257][1258]
l-缬氨酸环己酯盐酸盐。将4n盐酸(50ml)添加到l-缬氨酸(5g，43mmol)在环己醇(45g)中的溶液中，并且将所得混合物加热至70℃。20小时后，将反应混合物在70℃处减压浓缩。将粗固体残余物溶解到己烷(250ml)中并搅拌24小时。通过真空过滤收集所得白色结晶固体，得到中间体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ4.99
–
4.88(m,1h),3.89(d,j＝4.5hz,1h),2.36
–
2.21(m,1h),1.97
–
1.86(m,2h),1.83
–
1.70(m,1h),1.66
–
1.28(m,7h),1.12
–
1.02(m,
1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝5.92min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1263]
实施例99.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸乙酯
[1264][1265]
(s)-3-氨基丁酸异丙酯盐酸盐。将(s)-3-氨基丁酸(1g，10mmol)与异丙醇(30ml)混合。滴加三甲基甲硅烷基氯(12.7ml，100mmol)并搅拌30分钟。将反应混合物加热至80℃并搅拌20小时。滴加更多的三甲基甲硅烷基氯(6ml)。将反应在80℃处搅拌20小时，得到澄清溶液。将反应减压浓缩，得到糊状物，将该糊状物与无水乙醚(100ml)混合并搅拌5分钟。收集固体，用无水乙醚(50ml)洗涤并在高真空下干燥，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.20(s,3h),4.91(p,j＝6.3hz,1h),3.49
–
3.38(m,1h),2.73(dd,j＝16.3,5.5hz,1h),2.57
–
2.49(m,1h),1.19(m,9h)。
[1266][1267]
(3s)-3-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸异丙酯。将二氯磷酸苯酯(374μl，2.5mmol)溶解于无水二氯甲烷(25ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加(s)-3-氨基丁酸异丙酯盐酸盐(454mg，2.5mmol)。滴加三乙胺(768μl，5.5mmol)并搅拌1小时。滴加更多的三乙胺(384μl，2.75mmol)并搅拌40分钟。添加对硝基苯酚(278mg，2mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌2小时。添加更多的对硝基苯酚(50mg)并搅拌1小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释并用1％柠檬酸水溶液(20ml)洗涤，然后用5％碳酸钠水溶液(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio2combiflash hp gold柱，0-40％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.33
–
8.23(m,2h),7.52
–
7.34(m,4h),7.27
–
7.16(m,3h),6.18(ddd,j＝13.4,9.8,1.8hz,1h),4.79(pd,j＝6.3,4.4hz,1h),3.78
–
3.57(m,1h),2.43
–
2.22(m,2h),1.10(m,6h),1.05(m,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-0.90,-0.98。ms m/z＝422.9[m+1],421.1[m-1]。
[1268][1269]
(3s)-3-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸异丙酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和(3s)-3-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸异丙酯(76mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(29mg，0.3mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并且将反应在50℃处搅拌15小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(400μl)并在室温处搅拌4小时。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为10。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-10％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(m,1h),7.37
–
7.24(m,2h),7.24
–
7.10(m,3h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.53
–
5.46(m,1h),4.97
–
4.89(m,1h),4.66
–
4.57(m,1h),4.48(t,j＝5.4hz,1h),4.45
–
4.26(m,2h),3.75
–
3.61(m,1h),2.47
–
2.23(m,2h),1.17(m,6h),1.11(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.83,3.74。ms m/z＝575.0[m+1],573.0[m-1]。
[1270]
实施例100. 1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸2-乙基丁酯
[1271][1272]
1-氨基环丁烷羧酸2-乙基丁酯盐酸盐。将1-氨基环丁烷羧酸盐酸盐(1.52g，10mmol)与无水四氢呋喃(20ml)混合。添加2-乙基-1-丁醇(1.5ml，12mmol)。滴加三甲基甲硅烷基氯(12.7ml，100mmol)并搅拌30分钟。将反应混合物加热至80℃并搅拌20小时。添加更多的2-乙基-1-丁醇(3ml)并在80℃处搅拌2天。将反应减压浓缩。添加2-乙基-1-丁醇(15ml)。滴加三甲基甲硅烷基氯(10ml)。将反应混合物加热至80℃并搅拌20小时。将反应减压浓缩，得到中间体，将该中间体在高真空下干燥并且无需进一步纯化即可使用。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.85(s,3h),4.12(d,j＝5.4hz,2h),2.55
–
2.36(m,4h),2.11
–
1.93(m,2h),1.63
–
1.45(m,1h),1.35(p,j＝7.3hz,4h),0.87(t,j＝7.4hz,6h)。
[1273][1274]
1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸2-乙基丁酯。将二氯磷酸苯酯(374μl，2.5mmol)溶解于无水二氯甲烷(25ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加1-氨基环丁烷羧酸2-乙基丁酯盐酸盐(590mg，2.5mmol)。滴加三乙胺(768μl，5.5mmol)并搅拌1小时。滴加更多的三乙胺(384μl，2.75mmol)并搅拌20分钟。添加对硝基苯酚(278mg，2mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌1小时。添加更多的对硝基苯酚(55mg)并搅拌1小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释，并用5％碳酸钠水溶液(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.34
–
8.23(m,2h),7.50
–
7.33(m,4h),7.21(m,3h),6.95(m,1h),3.90(d,j＝5.6hz,2h),2.42(m,2h),2.29
–
2.11(m,2h),1.88
–
1.68(m,2h),1.38(m,1h),1.25(m,4h),0.77(m,6h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-3.13。ms m/z＝477.0[m+1],475.2[m-1]。
[1275][1276]
1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸2-乙基丁酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸2-乙基丁酯(76mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(29mg，0.3mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并且将反应在50℃处搅拌15小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)和盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(300μl)并在室温处搅拌80分钟。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为10。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(m,1h),7.37
–
7.09(m,5h),6.83(m,1h),6.72(m,1h),5.51
–
5.49(m,1h),4.62(m,1h),4.53
–
4.32(m,3h),4.07
–
3.99(m,2h),2.57
–
2.36(m,2h),2.36
–
2.18(m,2h),1.96
–
1.76(m,2h),1.58
–
1.43(m,1h),1.43
–
1.29(m,4h),0.94
–
0.80(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ1.95,1.83。ms m/z＝
629.1[m+1],627.0[m-1]。
[1277]
实施例101.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸戊烷-3-基酯
[1278][1279]
(s)-2-氨基丙酸戊烷-3-基酯盐酸盐。向l-丙氨酸盐(5g，56.12mmol)和3-羟基戊烷(50ml)的混合物中添加tmscl(20ml)。将所得混合物在70℃处搅拌15小时并在旋转蒸发器中在80℃处浓缩。将所得固体用5％etoac的己烷溶液研磨，过滤，并用5％etoac的己烷溶液洗涤几次，并在高真空下干燥过夜，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.79(s,3h),4.83(p,j＝6.2hz,1h),4.19(p,j＝6.5hz,1h),1.72(d,j＝7.2hz,3h),1.67
–
1.52(m,4h),0.88(td,j＝7.5,1.7hz,6h)。
[1280][1281]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸戊烷-3-基酯。将中间体(s)-2-氨基丙酸戊烷-3-基酯盐酸盐(1.00g，5.11mmol)悬浮在亚甲基氯(15ml)中，冷却至-78℃，并且快速添加二氯磷酸苯酯(0.76ml，5.11mmol)。在-78℃处在30分钟内添加三乙胺(1.42ml，10.22mmol)，并将所得混合物在-78℃处搅拌30分钟。然后一次性添加4-硝基苯酚(711mg，5.11mmol)，并且在-78℃处在30分钟内添加三乙胺(0.71ml，5.11mmol)。将混合物在-78℃处搅拌30分钟，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至20％etoac的己烷溶液)纯化残余物，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.46
–
7.30(m,4h),7.31
–
7.14(m,3h),4.78(m,1h),4.27
–
4.04(m,1h),3.98
–
3.77(m,1h),1.72
–
1.45(m,4h),1.42(m,3h),0.84(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.99,-3.06。ms m/z＝437(m+h)
+
。
[1282][1283]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸戊烷-3-基酯。在室温处，向中间体4(66mg，0.30mmol)、中间体(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸戊烷-3-基酯(170mg，0.39mmol)和mgcl2(28mg，0.30mmol)在dmf(3ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.087ml，0.50mmol)。将所得混合物在60℃处搅拌15小时并且通过
hplc(0至100％acn的水溶液)纯化，得到中间体，将该中间体溶解在acn(3ml)中并且添加浓hcl(0.1ml)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，并且通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，5％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.36
–
7.07(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(m,1h),4.76
–
4.59(m,2h),4.54
–
4.40(m,2h),4.34(m,1h),3.89(m,1h),1.63
–
1.42(m,4h),1.27(m,3h),0.91
–
0.75(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.37,3.29。ms m/z＝589(m+h)
+
。
[1284]
实施例102.(2r)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸新戊酯
[1285][1286]
(r)-2-氨基丙酸新戊酯盐酸盐。通过使用用于实施例97的相同程序，由中间体(r)-2-氨基丙酸(500mg，5.61mmol)和中间体新戊醇(5.0g，56.7mmol)获得中间体。
[1287][1288]
(2r)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸新戊酯。通过用于实施例88的相同程序将中间体(r)-2-氨基丙酸新戊酯盐酸盐(1.0g，5.11mmol)转化为中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.43
–
7.30(m,4h),7.28
–
7.15(m,3h),4.25
–
4.13(m,1h),3.97
–
3.88(m,1h),3.86(dd,j＝10.6,1.2hz,1h),3.78(dd,j＝10.5,3.4hz,1h),1.43(m,3h),0.92(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.01,-3.06。ms 437(m+h)
+
。
[1289][1290]
(2r)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸新戊酯。通过用于实施例88的相同程序，由中间体4(80mg，0.19mmol)和中间体(2r)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸新戊酯(198mg，0.45mmol)获得产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.5h),7.78(s,0.5h),7.37
–
7.25(m,2h),7.23
–
7.08(m,3h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(m,1h),4.62(m,1h),4.52
–
4.41(m,2h),4.35(m,1h),3.96(m,1h),3.83(m,1h),3.70(m,1h),1.31(dd,j＝7.2,1.0hz,1.5h),1.24(dd,j＝7.2,1.2hz,1.5h),0.89(d,j＝1.7hz,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.39,3.08。ms m/z＝589(m+h)
+
。
[1291]
实施例103.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸环己酯
[1292][1293]
(s)-2-氨基丁酸环己酯盐酸盐。将4n盐酸(12ml)添加到(s)-2-氨基丁酸(1g，10mmol)在环己醇(5ml)中的溶液中，并且将所得混合物加热至70℃。20小时后，将反应混合物在70℃处减压浓缩。将粗固体残余物溶解到己烷(150ml)中并搅拌4小时。通过真空过滤收集所得白色结晶固体，得到中间体。1h nmr(400mhz,cd3od)δ4.96
–
4.86(m,1h),3.96(t,j＝6.1hz,1h),2.02
–
1.85(m,4h),1.82
–
1.70(m,2h),1.63
–
1.26(m,6h),1.05(t,j＝7.5hz,3h)。
[1294][1295]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸环己酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-2-氨基丁酸环己酯盐酸盐(0.878g，4.74mmol)和二氯磷酸苯酯(0.705ml，4.74mmol)在二氯甲烷(23ml)中的溶液中添加三乙胺(1.2ml，9.4mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1.5小时。然后添加4-硝基苯酚(660mg，4.74mmol)和三乙胺(0.66ml，4.7mmol)。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，并且将所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(br d,j＝9.1hz,2h),7.52
–
7.33(m,4h),7.29
–
7.17(m,3h),6.61(td,j＝12.8,10.2hz,1h),4.65
–
4.55(m,1h),3.74(tdd,j＝10.1,7.8,5.6hz,1h),1.75
–
1.37(m,6h),1.36
–
1.13(m,5h),0.76(dd,j＝7.4,6.3hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-0.79(s),-1.03(s)。ms m/z＝462.93[m+1]。
[1296][1297]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸环己酯。在室温处，向中间体4(35.0mg，0.106mmol)、中间体(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸环己酯(49.0mg，0.106mmol)和氯化镁(10.1mg，0.106mmol)的混合物中添加乙腈(0.50ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌5分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.05ml，0.246mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.123ml，1.5mmol)。1小时后，将反应混合物用饱和碳酸钠
水溶液(20ml)和乙酸乙酯(20ml)稀释。将各层分开并且将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr150
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。ms m/z＝615.16[m+h]。
[1298]
(s)和(r)非对映体的分离。经由手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，庚烷80％乙醇20％)纯化产物，得到非对映体：
[1299][1300]
实施例104。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.82(s,1h),7.39
–
7.17(m,5h),6.87(d,j＝4.5hz,1h),6.76(d,j＝4.5hz,1h),5.52(d,j＝5.0hz,1h),4.74
–
4.61(m,2h),4.53
–
4.32(m,3h),3.95(p,j＝6.2hz,1h),3.78(dt,j＝9.5,6.6hz,1h),1.84
–
1.22(m,11h),0.86(t,j＝7.4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,cd3od)δ3.69(s)。ms m/z＝615.16[m+h]
[1301]
实施例105。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.81(s,1h),7.37
–
7.27(m,2h),7.24
–
7.14(m,3h),6.88(d,j＝4.5hz,1h),6.76(d,j＝4.5hz,1h),5.54(d,j＝5.1hz,1h),4.78
–
4.69(m,1h),4.65(t,j＝5.3hz,1h),4.55
–
4.47(m,2h),4.39(dd,j＝10.9,5.3hz,1h),3.95(p,j＝6.2hz,1h),3.77(td,j＝7.9,5.4hz,1h),1.87
–
1.25(m,11h),0.86(t,j＝7.4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,cd3od)δ3.68(br s)。ms m/z＝615.16[m+h]
[1302]
实施例106. 1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丙烷羧酸乙酯
[1303][1304]
1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丙烷羧酸乙酯。通过用于实施例88的相同程序将1-氨基环丙烷-1-羧酸乙酯盐酸盐(1.0g，6.04mmol)转化为中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.21(m,2h),7.41
–
7.30(m,4h),7.30
–
7.14(m,3h),4.05(m,3h),1.68
–
1.44(m,4h),1.16(t,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.16。ms m/z＝407(m+h)
+
。
[1305][1306]
1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丙烷羧酸乙酯。在室温处，向中
间体4(100mg，0.30mmol)、中间体1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丙烷羧酸乙酯(147mg，0.36mmol)和mgcl2(43mg，0.45mmol)在thf(4ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.13ml，0.76mmol)。将所得混合物在60℃处搅拌15小时，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将所得残余物溶解于acn(3ml)中并添加浓hcl(0.5ml)。将混合物在室温处搅拌2小时，并且通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，10％-70％乙腈/水梯度)，然后通过硅胶柱色谱法(0至15％meoh的亚甲基氯溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.5h),7.77(s,0.5h),7.38
–
7.23(m,2h),7.24
–
7.11(m,3h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.53
–
5.45(m,1h),4.64(m,1h),4.54(m,0.5h),4.52
–
4.40(m,2h),4.37(m,0.5h),4.13
–
4.01(m,2h),1.32(m,2h),1.17(m,3h),1.07(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.7,3.61。ms m/z＝559(m+h)
+
。
[1307]
实施例107. 1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丙烷羧酸乙酯
[1308][1309]
1-氨基环丁烷羧酸环己酯盐酸盐。将1-氨基环丁烷羧酸盐酸盐(758mg，5mmol)与环己醇(5ml)混合。滴加三甲基甲硅烷基氯(6.4ml，50mmol)并在室温处搅拌30分钟。将反应混合物加热至80℃并搅拌20小时。添加更多的环己醇(5ml)和三甲基甲硅烷基氯(6ml)。将反应在80℃处搅拌并搅拌20小时。将反应减压浓缩。将残余物与甲苯(5
×
)共沸，得到凝胶/固体。添加己烷(100ml)并搅拌15分钟，得到固体，将该固体收集，用己烷(50ml)洗涤并在高真空下干燥，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.77(s,3h),4.84(tt,j＝7.8,3.6hz,1h),2.47
–
2.35(m,4h),2.10
–
1.95(m,2h),1.78(m,2h),1.67(m,2h),1.59
–
1.24(m,6h)。
[1310][1311]
1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸环己酯。将二氯磷酸苯酯(374μl，2.5mmol)溶解于无水二氯甲烷(25ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加1-氨基环丁烷羧酸环己酯盐酸盐(584mg，2.5mmol)。滴加三乙胺(768μl，5.5mmol)并搅拌1小时。滴加更多的三乙胺(384μl，2.75mmol)并搅拌20分钟。添加对硝基苯酚(278mg，2mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌14小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio2combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.34
–
8.23(m,2h),7.50
–
7.43(m,2h),7.43
–
7.35(m,2h),7.27
–
7.16(m,3h),6.90(d,j＝11.7hz,1h),4.64(m,1h),2.43(m,2h),2.28
–
2.14(m,2h),1.88
–
1.72(m,2h),1.72
–
1.52(m,4h),1.42(dd,j＝11.7,6.4hz,1h),1.36
–
1.16(m,5h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-3.06。ms m/z＝474.9[m+1],473.2[m-1]。
[1312][1313]
1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸环己酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸环己酯(85mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(21mg，0.225mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并且将反应在50℃处搅拌14小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(300μl)并在室温处搅拌60分钟。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为10。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(m,1h),7.37
–
7.09(m,5h),6.87
–
6.81(m,1h),6.72(m,1h),5.52
–
5.47(m,1h),4.75(m,1h),4.67
–
4.59(m,1h),4.54
–
4.32(m,3h),2.47(m,2h),2.34
–
2.17(m,2h),1.97
–
1.59(m,7h),1.58
–
1.24(m,5h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ2.00,1.88。ms m/z＝627.1[m+1],625.0[m-1]。
[1314]
实施例108.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环戊酯
[1315][1316]
(s)-2-氨基丙酸环戊酯盐酸盐。通过用于中间体11的相同程序，由l-丙氨酸盐(3g，33.67mmol)和环戊醇(31ml)制备中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.73(d,j＝5.8hz,3h),5.26(tt,j＝5.7,2.4hz,1h),4.14(q,j＝6.5hz,1h),1.99
–
1.41(m,11h)。
[1317][1318]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环戊酯。通过用于中间体25的相同程序将(s)-2-氨基丙酸环戊酯盐酸盐(1.0g，5.16mmol)转化为中间体。1h nmr
(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.45
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.11(m,3h),5.17(m,1h),4.18
–
3.97(m,1h),3.93
–
3.75(m,1h),1.92
–
1.79(m,2h),1.76
–
1.51(m,6h),1.38(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.99,-3.03。ms m/z＝435(m+h)
+
。
[1319][1320]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环戊酯。在室温处，向中间体4(79mg，0.24mmol)、中间体(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环戊酯(155mg，0.326mmol)和mgcl2(34mg，0.36mmol)在thf(3ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.104ml，0.60mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌15小时，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将所得残余物溶解于acn(3ml)中并添加浓hcl(0.3ml)。将混合物搅拌2小时，并且通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，10％-70％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(m,1h),7.41
–
7.08(m,5h),6.87(m,1h),6.74(m,1h),5.50(m,1h),5.13
–
5.06(m,0.31h),5.03(td,j＝6.0,3.1hz,0.69h),4.69
–
4.55(m,1h),4.55
–
4.21(m,3h),3.84(m,1h),1.93
–
1.43(m,8h),1.24(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.32,2.75。ms m/z＝587(m+h)
+
。
[1321]
实施例109.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸环戊酯
[1322][1323]
(s)-2-氨基丁酸环戊酯盐酸盐。将(s)-2-氨基丁酸(515mg，5mmol)与环戊醇(10ml)混合。滴加亚硫酰氯(1.1ml，15mmol)。将反应混合物加热至60℃并搅拌20小时。将反应减压浓缩，得到固体。添加己烷(100ml)并搅拌15分钟。收集固体，用己烷(100ml)洗涤并在高真空下干燥，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.48(s,3h),5.17(ddt,j＝5.9,4.0,2.1hz,1h),3.88(t,j＝6.0hz,1h),1.81(m,4h),1.73
–
1.50(m,6h),0.90(t,j＝7.5hz,3h)。
[1324][1325]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸环戊酯。将二氯磷酸苯酯(374μl，2.5mmol)溶解于无水二氯甲烷(25ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加(s)-2-氨基丁酸环戊酯盐酸盐(519mg，2.5mmol)。滴加三乙胺(768μl，5.5mmol)并搅拌1
小时。滴加更多的三乙胺(384μl，2.75mmol)并搅拌20分钟。添加对硝基苯酚(278mg，2mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌14小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释，并用水(20ml)洗涤，然后用2％柠檬酸水溶液(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.34
–
8.22(m,2h),7.53
–
7.31(m,4h),7.30
–
7.15(m,3h),6.60(dt,j＝13.4,10.4hz,1h),4.98(m,1h),3.72(m,1h),1.82
–
1.67(m,2h),1.67
–
1.40(m,8h),0.75(m,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-0.82,-1.02。ms m/z＝448.9[m+1],447.1[m-1]。
[1326][1327]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸环戊酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸环戊酯(81mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(21mg，0.225mmol)。将反应升温至50℃并搅拌30分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌14小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(300μl)并在室温处搅拌60分钟。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为9。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.36
–
7.10(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.53
–
5.47(m,1h),5.19
–
4.93(m,1h),4.62(m,1h),4.53
–
4.39(m,2h),4.35(m,1h),3.72(m,1h),1.90
–
1.43(m,10h),0.82(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.66,3.59。ms m/z＝601.1[m+1],699.0[m-1]。
[1328]
(s)和(r)非对映体的分离。经由手性制备型hplc(chiralpak ic,150
×
4.6mm，庚烷80％乙醇20％)纯化产物，得到非对映体：
[1329][1330]
实施例110。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.37
–
7.27(m,2h),7.27
–
7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.48(d,j＝4.9hz,1h),5.02(tt,j＝5.6,2.4hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.50
–
4.37(m,2h),4.32
(dd,j＝10.9,5.3hz,1h),3.71(ddd,j＝9.6,7.4,5.7hz,1h),1.85
–
1.46(m,10h),0.83(t,j＝7.4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.67。
[1331]
实施例111。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.33
–
7.23(m,2h),7.20
–
7.10(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.1hz,1h),5.09(tt,j＝5.6,2.5hz,1h),4.62(t,j＝5.4hz,1h),4.54
–
4.41(m,2h),4.36(dd,j＝10.9,5.3hz,1h),3.77
–
3.65(m,1h),1.91
–
1.48(m,10h),0.82(t,j＝7.4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.61。
[1332]
实施例112. 2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酸环戊酯
[1333][1334]
2-氨基乙酸环戊酯盐酸盐。将甘氨酸(750mg，10mmol)与环戊醇(10ml)混合。滴加亚硫酰氯(2.6ml)并搅拌30分钟。将反应混合物加热至60℃并搅拌20小时。将反应减压浓缩并在高真空下干燥。添加己烷(100ml)并搅拌15分钟，得到固体。收集固体，用己烷(100ml)洗涤并在高真空下干燥，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.38(s,3h),5.17(tt,j＝6.3,2.5hz,1h),3.71(s,2h),1.94
–
1.73(m,2h),1.73
–
1.47(m,6h)。
[1335][1336]
2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酸环戊酯。将二氯磷酸苯酯(374μl，2.5mmol)溶解于无水二氯甲烷(25ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加2-氨基乙酸环戊酯盐酸盐(449mg，2.5mmol)。滴加三乙胺(768μl，5.5mmol)并搅拌1小时。滴加更多的三乙胺(384μl，2.75mmol)并搅拌20分钟。添加对硝基苯酚(278mg，2mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌3小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释，并用水(10ml)洗涤，然后用2％柠檬酸水溶液(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.34
–
8.21(m,2h),7.53
–
7.43(m,2h),7.43
–
7.34(m,2h),7.29
–
7.15(m,3h),6.53(dt,j＝14.3,7.1hz,1h),5.04(m,1h),3.71(dd,j＝14.9,7.1hz,2h),1.77(m,2h),1.54(m,6h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-0.11。ms m/z＝420.9[m+1],419.1[m-1]。
[1337][1338]
2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酸环戊酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酸环戊酯(76mg，0.18mmol)溶
解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(21mg，0.225mmol)。将反应升温至50℃并搅拌30分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并且将反应在50℃处搅拌8小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(300μl)并在室温处搅拌60分钟。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为9。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.37
–
7.10(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(m,1h),5.12(m,1h),4.62(m,1h),4.56
–
4.32(m,3h),3.67
–
3.58(m,2h),1.81(m,2h),1.74
–
1.48(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ4.52,4.36。ms m/z＝573.1[m+1],571.0[m-1]。
[1339]
(s)和(r)非对映体的分离。经由手性制备型hplc(chiralpak ic,150
×
4.6mm，庚烷80％乙醇20％)纯化产物，得到非对映体：
[1340][1341]
实施例113.第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(s,1h),7.37
–
7.27(m,2h),7.26
–
7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.2hz,1h),5.09(tt,j＝5.6,2.5hz,1h),4.68
–
4.58(m,1h),4.44(m,3h),3.66
–
3.58(m,2h),1.80(m,2h),1.74
–
1.48(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ4.54。
[1342]
实施例114.第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.34
–
7.25(m,2h),7.23
–
7.12(m,3h),6.87
–
6.82(m,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.1hz,1h),5.15(ddt,j＝8.1,5.4,2.4hz,1h),4.65
–
4.57(m,1h),4.51(m,2h),4.36(dd,j＝10.8,5.1hz,1h),3.67
–
3.55(m,2h),1.83(m,2h),1.75
–
1.50(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ4.39。
[1343]
实施例115.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸戊烷-3-基酯
[1344][1345]
(s)-2-氨基丁酸戊烷-3-基酯盐酸盐。将l-2-氨基丁酸(515mg，5mmol)与3-戊醇(10ml)混合。滴加三甲基甲硅烷基氯(6.4ml，50mmol)并搅拌30分钟。将反应混合物加热至60℃并搅拌20小时。将反应减压浓缩。添加己烷(100ml)并搅拌15分钟，得到固体。收集固体，用己烷(100ml)洗涤并在高真空下干燥，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.50(s,3h),4.76(tt,j＝7.2,5.1hz,1h),3.97(t,j＝5.9hz,1h),1.84(m,2h),1.67
–
1.43(m,4h),
0.93(t,j＝7.5hz,3h),0.84(td,j＝7.4,2.8hz,6h)。
[1346][1347]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸戊烷-3-基酯。将二氯磷酸苯酯(374μl，2.5mmol)溶解于无水二氯甲烷(25ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加(s)-2-氨基丁酸戊烷-3-基酯盐酸盐(524mg，2.5mmol)。滴加三乙胺(768μl，5.5mmol)并搅拌1小时。滴加更多的三乙胺(384μl，2.75mmol)并搅拌20分钟。添加对硝基苯酚(278mg，2mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌14小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释，并用水(10ml)洗涤，然后用2％柠檬酸水溶液(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.31
–
8.23(m,2h),7.52
–
7.33(m,4h),7.28
–
7.15(m,3h),6.62(m,1h),4.62(m,1h),3.85
–
3.71(m,1h),1.74
–
1.31(m,6h),0.84
–
0.67(m,9h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-0.77,-1.00。ms m/z＝451.0[m+1],449.1[m-1]。
[1348][1349]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸戊烷-3-基酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸戊烷-3-基酯(81mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(21mg，0.225mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(6μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(300μl)并在冰浴中搅拌60分钟。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为9。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.36
–
7.10(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(m,1h),4.76
–
4.56(m,2h),4.54
–
4.40(m,2h),4.34(m,1h),3.78(m,1h),1.73(m,1h),1.66
–
1.44(m,5h),0.90
–
0.75(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.72,3.63。ms m/z＝603.1[m+1],601.0[m-1]。
[1350]
实施例116.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-2-环己基乙酸
2-乙基丁酯。
[1351][1352]
在室温处向中间体4(40.0mg，0.093mmol)、中间体35(57.69mg，0.111mmol)和氯化镁(13.24mg，0.139mmol)的混合物中添加thf(1.0ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌10分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.040ml，0.232mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌30分钟。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.200ml，2.4mmol)。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用饱和碳酸钠水溶液淬灭至ph＝7。将粗混合物通过制备型hplc(phenominex gemini nx 10u c18 250
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。lc/ms：tr＝1.36min，ms m/z＝671.34[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.83(s,1h),7.75(br s,2h),7.39
–
7.20(m,3h),7.23
–
7.04(m,2h),6.84(d,j＝4.5,1h),6.70(d,j＝4.5,1h),6.09(m,1h),5.96(m,1h),5.47(d,j＝5.9hz,1h),5.37(m,1h),4.45(m,1h),4.39
–
4.22(m,2h),3.99
–
3.81(m,2h),3.77(m,1h),3.62
–
3.44(m,1h),1.67
–
0.65(m,22h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ4.06(s),3.90(s)。
[1353]
实施例117.(2r)-1-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)吡咯烷-2-羧酸乙酯
[1354][1355]
(s)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-乙酯。将(叔丁氧基羰基)-l-脯氨酸(10g，0.046mol)溶解于ch2cl2(200ml)中。向该溶液中添加edci(8.66g，0.056mol)、dmap(1.70g，0.014mol)和dipea(8.9ml，0.051mol)。然后添加etoh(13.56ml，0.232ml)，并且将反应在室温处搅拌。2小时后，将反应在冰浴中冷却，并经由移液管分批添加饱和nahco3水溶液来淬灭。将混合物升温至室温并进一步用ch2cl2和饱和nahco3水溶液稀释。分离各层，并且用水洗涤有机层。然后将有机相用ph 3水(将水添加到分液漏斗中，并且通过添加0.5n hcl来调节ph)、半饱和盐水洗涤，并经na2so4干燥。通过过滤去除干燥剂。浓缩滤液，并且通过硅胶柱色谱法(25g装载筒，220g combiflash hp gold柱，洗脱液斜坡为100％己烷至35％etoac/己烷)分离中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ4.17
–
4.00(m,3h),3.40
–
3.26(m,2h),2.26
–
2.12(m,1h),1.88
–
1.75(m,3h),1.39(s,boc旋转异构体#1,4h),1.33(s,boc旋转异构体#2,5h),1.22-1.15(m,3h)。
[1356][1357]
(s)-吡咯烷-2-羧酸乙酯盐酸盐。将中间体(s)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-乙酯(6.94g，0.029mol)溶解于ch2cl2(20ml)中。向该溶液中添加4n hcl的二噁烷(35.66ml，0.143mol)溶液。将所得溶液在室温处搅拌，并且通过tlc监测反应进程。1小时5分钟后，将反应物浓缩成油状物中，然后与ch2cl2共蒸发两次。将所得残余物置于高真空下过夜并原样用于后续反应。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.34(brs,1h),9.03(brs,1h),4.33(t,j＝9.1hz,1h),4.21(四重峰，j＝7.2hz,2h),3.28-3.13(m,2h),2.31
–
2.20(m,1h),2.04
–
1.84(m,3h),1.24(t,j＝7.2hz,3h)。
[1358][1359]
(2s)-1-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)吡咯烷-2-羧酸乙酯。将中间体(s)-吡咯烷-2-羧酸乙酯盐酸盐(1.725g，9.602mmol)溶解于ch2cl2(50ml)中。将该溶液在冰浴中冷却，并且添加二氯磷酸苯酯(1.242ml，8.35mmol)，然后添加et3n(2.58ml，18.37mmol)。反应变成异质白色混合物。移除冷浴，并且将反应在室温处搅拌1小时30分钟。然后添加4-硝基苯酚(1.1g，7.932mmol)，然后添加另外的et3n(1.17ml，8.35mmol)。通过lc/m监测反应进程，并且在40分钟后添加nmi(0.632ml，7.932mmol)。将反应再搅拌30分钟，然后用et2o稀释。通过过滤去除所得固体。浓缩滤液，并且通过硅胶柱色谱法(25g装载筒，120g combiflash hp gold柱，洗脱液斜坡为100％己烷至50％etoac/己烷)分离中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.35
–
8.25(m,2h),7.56
–
7.39(m,4h),7.33
–
7.21(m,3h),4.35
–
4.26(m,1h),4.10
–
3.96(m,2h),3.41-3.33(m,2h),2.18
–
2.06(m,1h),1.96
–
1.74(m,3h),1.11(td,j＝7.1,2.8hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-3.589(s),-3.688(s)。ms m/z＝421.2[m+1]。
[1360][1361]
(2r)-1-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)吡咯烷-2-羧酸乙酯。将中间体4(0.05g，0.151mmol)溶解于nmp(0.5ml)中，然后添加thf(0.5ml)。将该溶液在冰浴中冷却，并且添加1m的tert-bumgcl在thf中的溶液(0.181ml，0.181mmol)，引起形成白色沉淀。移除冷浴，并且将反应在室温处搅拌10分钟。添加中间体(2s)-1-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)吡咯烷-2-羧酸乙酯(0.089g，0.211mmol)在thf(0.5ml)中的溶液。在室温下搅拌反应
并通过lc/ms监测进程。5小时后，将反应在冰浴中冷却，并且通过添加冰acoh(0.026ml，0.453mmol)淬灭。移除冰浴，在室温处继续搅拌10分钟。通过蒸发去除挥发物，并且通过hplc从残余物中分离产物(0.065g，70％)。
[1362]
将来自先前反应的产物(0.065g，0.106mmol)溶解于thf(2ml)中，并且逐滴添加12m hcl水溶液。在室温下搅拌反应并通过lc/ms监测进程。2小时10分钟后，将反应在冰浴中冷却，并且通过添加饱和nahco3水溶液(～3ml)，然后分批添加固体nahco3直至反应的ph不再为酸性来淬灭反应。通过旋转蒸发去除所得混合物的挥发性组分，并且将残余物在最少量的水和ch2cl2之间分配。然后将水相用ch2cl2进一步萃取，并且浓缩合并的有机物，并且通过hplc从残余物中分离产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),7.38
–
7.29(m,2h),7.29
–
7.15(m,3h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.75(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝4.7hz,1h),4.63(dd,j＝5.7,4.7hz,1h),4.45(d,j＝5.7hz,1h),4.37
–
4.34(m,2h),4.12(dt,j＝8.6,3.8hz,1h),4.02(四重峰，j＝7.1hz,2h),3.42
–
3.34(m,1h),3.30
–
3.24(m,1h),2.02
–
1.94(m,1h),1.86
–
1.67(m,3h),1.15(t,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ1.605(s),1.354(s)。ms m/z＝572.99[m+1]。
[1363]
实施例118.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环丁酯
[1364][1365]
在室温处，向中间体4(79mg，0.24mmol)、中间体47(150mg，0.36mmol)和mgcl2(34mg，0.36mmol)在thf(3ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.104ml，0.60mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌15小时，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将所得残余物溶解于acn(3ml)中并添加浓hcl(0.5ml)。将所得混合物搅拌2小时，并且通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr150
×
30mm柱，10％-70％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.70(m,1h),7.26
–
7.16(m,2h),7.17
–
7.01(m,3h),6.75(m,1h),6.64(m,1h),5.40(m,1h),4.75(m,1h),4.60
–
4.47(m,1h),4.47
–
4.13(m,3h),3.85
–
3.65(m,1h),2.26
–
2.03(m,2h),1.99
–
1.77(m,2h),1.77
–
1.37(m,2h),1.16(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.27。ms m/z＝573(m+h)
+
。
[1366]
实施例119.实施例2非对映体的分离
[1367]
通过手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，庚烷80％乙醇20％)分离实施例2，得到非对映体：
[1368][1369]
第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.34
–
7.25(m,2h),7.18
–
7.10(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.55
–
4.42(m,2h),4.35(dd,j＝10.9,5.1hz,1h),4.03(qd,j＝10.9,6.7hz,2h),3.88(dq,j＝9.5,7.1hz,1h),2.59(p,j＝7.3hz,1h),2.07
–
1.94(m,2h),1.94
–
1.66(m,4h),1.26(dd,j＝7.2,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.26。
[1370]
实施例120。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.38
–
7.27(m,2h),7.26
–
7.09(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.0hz,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.46(d,j＝5.6hz,1h),4.41(dd,j＝10.9,6.3hz,1h),4.33(dd,j＝10.9,5.5hz,1h),4.00(dd,j＝10.9,6.8hz,1h),3.96
–
3.83(m,2h),2.54(p,j＝7.4hz,1h),2.04
–
1.93(m,2h),1.93
–
1.77(m,2h),1.77
–
1.61(m,2h),1.26(dd,j＝7.1,1.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.24。
[1371]
实施例121.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-2-环己基乙酸环丙基甲酯
[1372][1373]
(s)-2-氨基-2-环己基乙酸环丙基甲酯盐酸盐。取l-环己基甘氨酸(0.80g，5.75mmol)放入环丙基甲醇(10ml)中，并一次性添加三甲基氯硅烷(1.16ml，9.16mmol)。置于预热的60℃油浴中16小时。浓缩并在60℃旋转蒸发器浴中与甲苯共蒸发5次。置于高真空下过夜，得到中间体。将材料原样用于下一步骤。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.44(br s,2h),4.40(br s,1h),4.12
–
3.91(m,1h),3.86(dd,j＝18.9,6.2hz,2h),1.88
–
1.51(m,2h),1.39
–
0.71(m,5h),0.65
–‑
0.07(m,8h)。
[1374][1375]
(2s)-2-环己基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酸环丙基甲酯。在
nmr(162mhz,dmso-d6)δ3.96(s),3.93(s)。
[1378]
实施例122.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(s)-吡咯烷-3-基酯
[1379][1380]
(s)-3-(((s)-2-氨基丙酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。将cbz-l-丙氨酸(446mg，2mmol)与(s)-boc-3-吡咯烷醇(374mg，2mmol)混合，并溶解于无水n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中。一次性添加hatu(789mg，2.1mmol)，并搅拌15分钟。一次性添加三乙胺(588μl，4mmol)。将反应搅拌16小时。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％柠檬酸水溶液(2
×
15ml)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
15ml)洗涤，最后用盐水(15ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于四氢呋喃(15ml)中。添加degussa 10％碳载钯(50mg)，并且将反应混合物在大气氢气下搅拌2小时。滤出催化剂，并且将滤液减压浓缩，得到中间体。将材料用于下一步骤而不经纯化。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.30(s,1h),3.64
–
3.28(m,5h),2.17
–
1.93(m,2h),1.46(s,9h),1.33(dd,j＝7.0,2.2hz,3h)。
[1381][1382]
(3s)-3-(((2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。将二氯磷酸苯酯(161μl，1.08mmol)溶解于无水二氯甲烷(10ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加(s)-3-(((s)-2-氨基丙酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(280mg，1.08mmol)。滴加三乙胺(332μl，2.4mmol)并搅拌1小时。添加对硝基苯酚(120mg，0.86mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌14小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释，并用水(10ml)洗涤，然后用2％柠檬酸水溶液(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(m,2h),7.53
–
7.32(m,4h),7.30
–
7.15(m,3h),6.69(m,1h),5.13(s,1h),4.01
–
3.92(m,1h),3.52
–
3.30(m,2h),3.17(t,j＝9.6hz,2h),2.02(m,1h),1.80(m,1h),1.35(m,9h),1.21(m,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.36,-1.45。ms m/z＝558.1[m+na],534.2[m-1]。
[1383][1384]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(s)-吡咯烷-3-基酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和(3s)-3-(((2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(88mg，0.165mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(21mg，0.225mmol)。将反应升温至50℃并搅拌30分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(300μl)并在冰浴中搅拌100分钟。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为19。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由制备型hplc(phenomenex gemini c
18
柱，0-100％乙腈/水，含有0.1％三氟乙酸作为改性剂)纯化。将具有期望产物的级分合并并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.05
–
7.96(m,1h),7.43
–
7.09(m,6h),6.98
–
6.90(m,1h),5.58
–
5.50(m,1h),5.47
–
5.34(m,1h),4.59
–
4.51(m,1h),4.51
–
4.31(m,3h),3.97(m,1h),3.56
–
3.32(m,4h),2.36
–
2.09(m,2h),1.41
–
1.29(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.55,3.43。ms m/z＝588.1[m+1],586.0[m-1]。
[1385]
实施例123.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-2-环戊基乙酸环丙基甲酯
[1386][1387]
(s)-2-氨基-2-环戊基乙酸环丙基甲酯盐酸盐。取l-环己基甘氨酸(0.80g，5.75mmol)放入环丙基甲醇(10ml)中，并一次性添加三甲基氯硅烷(1.16ml，9.16mmol)。置于预热的60℃油浴中16小时。浓缩并在60℃旋转蒸发器浴中与甲苯共蒸发5次。置于高真空下过夜，得到中间体。将材料原样用于下一步骤。lc/ms：tr＝0.61min，ms m/z＝197.95[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。
[1388][1389]
(2s)-2-环戊基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酸环丙基甲酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-2-氨基-2-环己基乙酸2-乙基丁酯盐酸盐(1.19g，4.80mmol)和二氯磷酸苯酯(0.72ml，4.80mmol)在二氯甲烷(50ml)中的溶液中添加三乙胺(1.40ml，9.92mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1小时。然后添加4-硝基苯酚(635mg，4.56mmol)和三乙胺(0.69ml，4.97mmol)。2小时后，将反应混合物用et2o(100ml)稀释并滤出固体。将粗产物减压浓缩并通过硅胶色谱法(120g sio2combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到不纯的中间体。然后在不使用改性剂20％-100％acn的水溶液的情况下通过反相hplc纯化部分纯的物质，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,j＝9.0hz,2h),7.58
–
7.28(m,3h),7.31
–
7.08(m,3h),6.70(dt,j＝13.0,10.7hz,1h),3.87
–
3.71(m,2h),3.63(qd,j＝9.5,5.7hz,1h),2.09(dt,j＝13.7,6.8hz,1h),1.64
–
0.68(m,10h),0.53
–
0.35(m,2h),0.19(m,2h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-0.71(s),-0.97(s)。lc/ms：tr＝1.94min，ms m/z＝475.02[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。
[1390][1391]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-2-环戊基乙酸环丙基甲酯。在室温处，向中间体4(43.0mg，0.10mmol)、中间体(2s)-2-环戊基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酸环丙基甲酯(64.0mg，0.135mmol)和氯化镁(14.23mg，0.149mmol)的混合物中添加thf(1.0ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌10分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.043ml，0.249mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。添加氯化镁(20mg，0.20mmol)并在50℃处搅拌3小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.300ml，3.6mmol)。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用饱和碳酸钠水溶液淬灭至ph＝7。将粗混合物通过制备型hplc(phenominex gemini nx 10u c18 250
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。lc/ms：tr＝1.37min，ms m/z＝627.07[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μ
xb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.83(s,1h),7.75(s,2h),7.31(m,2h),7.25
–
7.05(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.71(d,j＝4.5hz,1h),6.22
–
5.95(m,2h),5.47(d,j＝5.9hz,1h),5.36(t,j＝6.0hz,1h),4.45(m,1h),4.28(m,2h),4.13(m,1h),3.94
–
3.61(m,2h),3.62
–
3.40(m,1h),1.71
–
0.88(m,10h),0.43(m,2h),0.31
–
0.08(m,2h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ3.74(s),3.64(s)。
[1392]
实施例124.(2r)-1-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)吡咯烷-2-羧酸丁酯
[1393][1394]
(s)-吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-丁酯。以与针对实施例117所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ4.18
–
3.96(m,3h),3.40
–
3.26(m,2h),2.26
–
2.13(m,1h),1.87
–
1.75(m,3h),1.60
–
1.48(m,2h),1.39(s,boc旋转异构体#1,3h),1.33(s,boc旋转异构体#2,6h),1.36
–
1.28(m,2h),0.88(td,j＝7.4,2.8hz,3h)。
[1395][1396]
(s)-吡咯烷-2-羧酸丁酯盐酸盐。以与针对实施例117所述类似的方式制备中间体。
[1397][1398]
(2s)-1-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)吡咯烷-2-羧酸丁酯。以与针对实施例117所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.30(m,2h),7.55
–
7.50(m,2h),7.49-7.21(m,5h),4.36
–
4.28(m,1h),4.05
–
3.90(m,2h),3.41-3.33(m,2h),2.18
–
2.06(m,1h),1.95
–
1.74(m,3h),1.50
–
1.40(m,2h),1.30
–
1.20(m,2h),0.82(q,j＝7.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-3.596(s),-3.726(s)。ms m/z＝449.03[m+1]。
[1399][1400]
(2r)-1-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)吡咯烷-2-羧酸丁酯。以与针对实
施例117所述类似的方式制备产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(s,1h),7.37
–
7.14(m,5h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.75(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝4.7hz,1h),4.62(dd,j＝5.6,4.8hz,1h),4.44(d,j＝5.7hz,1h),4.35(d,j＝7.2hz,2h),4.16
–
4.10(m,1h),4.03
–
3.93(m,2h),3.43
–
3.35(m,1h),3.30
–
3.24(m,1h),2.04
–
1.91(m,1h),1.87
–
1.69(m,3h),1.56
–
1.46(m,2h),1.36
–
1.24(m,2h),0.88(t,j＝7.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ1.575(s),1.347(s)。ms m/z＝601.13[m+1]。
[1401]
实施例125. 1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷-1-羧酸(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲酯
[1402][1403]
1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丁烷羧酸(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲酯。以与针对实施例117所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.73(s,旋转异构体#1,0.80h),7.41(s,旋转异构体#2,0.2h),5.00(s,旋转异构体#2,0.5h),4.96(s,旋转异构体#1,1.5h),2.48
–
2.39(2h),2.20
–
2.05(5h),1.95
–
1.76(2h),1.34(s,旋转异构体#1,6.75h),1.26(s,旋转异构体#2,2.25h)。
[1404][1405]
1-氨基环丁烷羧酸(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲酯盐酸盐。以与针对实施例117所述类似的方式制备中间体。
[1406][1407]
1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲酯。以与针对实施例117所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.32
–
8.27(m,2h),7.47
–
7.37(m,4h),7.25
–
7.19(m,3h),7.04(d,j＝11.8hz,1h),4.95(s,2h),2.48-2.42(m,2h),2.29
–
2.16(m,2h),2.09(s,3h),1.88
–
1.73(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-3.216(s)。ms m/z＝504.93[m+1],1008.74[2m+1]。
[1408][1409]
1-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷-1-羧酸(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲酯。将中间体4(0.054g，0.163mmol)、中间体1-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)环丁烷羧酸(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲酯(0.099g，0.196mmol)和mgcl2(0.023g，0.244mmol)溶解在thf中(2.5ml)。将所得混合物置于50℃浴中10分钟，然后添加dipea(0.071ml，0.407mmol)。在50℃处搅拌反应并通过lc/ms监测进程。2小时40分钟后，将反应冷却至室温并且滴加12m hcl(水溶液)(0.3ml)。在室温处搅拌反应并通过lc/ms监测进程。35分钟后，添加另外的12m hcl(水溶液)(0.15ml)。将反应再搅拌35分钟。将反应在冰浴中冷却，并添加饱和nahco3溶液来淬灭。将所得混合物用ch2cl2(3
×
)萃取。将合并的有机萃取物浓缩，并且通过hplc从残余物中分离产物，其为磷的异构体混合物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4,带星号(*)的化学位移表示在存在的第2异构体上相关质子的位移)δ7.80(s,0.6h),7.77*(s,0.4h),7.36-7.12(m,5h),6.87-6.82(m,1h),6.75(d,j＝4.6hz,0.6h),6.71*(d,j＝4.6hz,0.4h),5.52
–
5.48(m,1h),4.94(d,j＝2.2hz,0.8h),4.89*(d,j＝2.2hz,1.2h),4.65(t,j＝5.6hz,0.6h),4.62*(t,j＝5.6hz,0.4h),4.49(四重峰，j＝5.5hz,1h),4.46
–
4.33(m,2h),2.57
–
2.42(m,2h),2.31
–
2.15(m,2h),2.13(s,1.2h),2.10(s,1.8h),1.94
–
1.80(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ1.841(s),1.735(s)。ms m/z＝657.01[m+1]。
[1410]
实施例126. 3-羟基-2,2-二甲基丙酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯
[1411][1412]
2,2-二甲基-3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙酸甲酯。将2,2-二甲基-3-羟基丙酸甲酯(1.3g，10mmol)溶解于无水二氯甲烷(12ml)中并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加对甲苯磺酸一水合物(190mg，1mmol)。滴加3,4-二氢-2h-吡喃(1.1ml，12mmol)。将反应缓慢升温至室温并搅拌12小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释并用碳酸氢钠水溶液(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.59(t,j＝3.3hz,1h),3.80(ddd,j＝11.6,8.9,2.9hz,1h),3.73(d,j＝9.2hz,1h),3.68(s,3h),3.50(ddt,j＝9.2,5.6,2.6hz,1h),3.37(d,j＝9.2hz,1h),1.78(m,1h),1.70
–
1.44(m,5h),1.22(s,3h),1.20(s,3h)。
[1413][1414]
2,2-二甲基-3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯。将2,2-二甲基-3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙酸甲酯(1.5g，6.9mmol)溶解于无水四氢呋喃(15ml)中。将氢氧化钠(276mg，6.9mmol)溶解于水(10ml)中并添加到反应中并搅拌16小时。添加甲醇(10ml)。将反应搅拌16小时。将反应用己烷(100ml)洗涤，然后用5％柠檬酸水溶液酸化至ph 4，并用乙酸乙酯(2
×
30ml)萃取。将乙酸乙酯萃取物合并并且经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到油状物，然后将该油状物溶解于无水n,n-二甲基甲酰胺(7ml)中并在室温处搅拌。一次性添加n-cbz-氨基乙醇(1.35g，6.9mmol)。添加hatu(2.88g，7.6mmol)并搅拌5分钟。添加三乙胺(1.9ml，13.8mmol)并搅拌10分钟。然后添加4-(二甲基氨基)吡啶(84mg，0.69mmol)。将反应搅拌1小时。添加更多的4-(二甲基氨基)吡啶(340mg)并搅拌2小时。添加更多的4-(二甲基氨基)吡啶(310mg)并搅拌16小时。将反应用乙酸乙酯(35ml)稀释，并用水(2
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.41
–
7.27(m,5h),5.78(bs,1h),5.21
–
4.98(m,2h),4.43(m,1h),4.40
–
4.28(m,1h),4.03(ddd,j＝11.0,7.1,3.4hz,1h),3.91(d,j＝8.8hz,1h),3.81(m,1h),3.55
–
3.33(m,3h),3.27(d,j＝8.7hz,1h),1.66(m,2h),1.41(m,4h),1.19(d,j＝9.8hz,6h)。
[1415][1416]
2,2-二甲基-3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将2,2-二甲基-3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯(1.3g，3.4mmol)溶解于四氢呋喃(20ml)中。添加degussa型10％碳载钯(50mg)，并且将反应在大气氢气下搅拌20小时。滤出催化剂，并且将滤液减压浓缩，并且将所得粗产物用于下一反应而不经纯化。将二氯磷酸苯酯(510μl，3.4mmol)溶解于无水二氯甲烷(15ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。将上述制备的粗产物溶解于无水二氯甲烷(5ml)中并滴加。滴加三乙胺(1.4ml，7.5mmol)并搅拌1小时。添加对硝基苯酚(378mg，2.72mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌2小时。添加更多的对硝基苯酚(40mg)并搅拌1小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释，并用1％柠檬酸水溶液(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio2combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.23(d,j＝9.0,2h),7.48
–
7.30(m,4h),7.30
–
7.14(m,3h),4.59
–
4.27(m,3h),3.95(m,3h),3.46(m,1h),3.41
–
3.29(m,2h),3.26(dd,j＝8.7,4.2hz,1h),1.85
–
1.34(m,6h),1.24(s,3h),1.16(s,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-0.42,-0.56。ms m/z＝521.1[m-1]。
[1417][1418]
3-羟基-2,2-二甲基丙酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和2,2-二甲基-3-((四氢-2h-吡喃-2-基)氧基)丙酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯(94mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(21mg，0.225mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌20小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用2％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(2ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(200μl)并在冰浴中搅拌2小时。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为9。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio2combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(m,1h),7.28(m,5h),6.88(m,1h),6.76(m,1h),5.54(m,1h),4.66(m,1h),4.52(t,j＝5.1hz,1h),4.49
–
4.30(m,2h),4.05(m,2h),3.53(d,j＝10.0hz,2h),3.18(dt,j＝11.7,5.6hz,2h),1.15(s,3h),1.13(s,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ5.31,5.14。ms m/z＝591.0[m+1],589.1[m-1]。
[1419]
实施例127.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-4-甲基戊酸2-乙基丁酯
[1420][1421]
(2s)-4-甲基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)戊酸2-乙基丁酯。在0℃处在氩气氛下向中间体13(0.76g，3.02mmol)和二氯磷酸苯酯(0.45ml，3.02mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中添加三乙胺(0.87ml，6.23mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1小时。然后添加4-硝基苯酚(399mg，2.87mmol)和三乙胺(0.44ml，3.11mmol)。2小时后，将反应混合物用et2o(100ml)稀释并滤出固体。将粗产物减压浓缩并通过硅胶色谱法(120g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。lc/ms：tr＝2.19min，ms m/z＝493.00[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：
2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(m,2h),7.52
–
7.29(m,3h),7.28
–
7.09(m,2h),6.66(m,1h),3.93
–
3.70(m,2h),1.58
–
1.31(m,6h),1.31
–
1.13(m,5h),0.86
–
0.60(m,12h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-0.87(s),-1.24(s)。
[1422][1423]
在室温处，向中间体4(38.0mg，0.09mmol)、(2s)-4-甲基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)戊酸2-乙基丁酯(52.0mg，0.106mmol)和氯化镁(12.58mg，0.132mmol)的混合物中添加thf(1.0ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌10分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.038ml，0.220mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。添加氯化镁(20mg，0.20mmol)并在50℃处搅拌3小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.300ml，3.6mmol)。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用饱和碳酸钠水溶液淬灭至ph＝7。将粗混合物通过制备型hplc(phenominex gemini nx 10u c18 250
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。lc/ms：tr＝1.53min，ms m/z＝645.10[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.83(s,1h),7.74(s,2h),7.39
–
7.23(m,2h),7.23
–
7.06(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.70(d,j＝4.5hz,1h),6.19
–
5.92(m,2h),5.48(d,j＝5.8hz,1h),5.37(t,j＝6.7hz,1h),4.45(m,1h),4.36
–
4.14(m,2h),3.94
–
3.59(m,3h),1.52
–
1.30(m,4h),1.30
–
1.13(m,5h),0.89
–
0.65(m,12h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ3.61(s),3.48(s)。
[1424]
(s)和(r)非对映体的分离。经由手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，庚烷80％乙醇20％)纯化产物，得到非对映体：
[1425][1426]
实施例128。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.28(dd,j＝8.6,7.1hz,2h),7.20
–
7.08(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.7hz,2h),4.61(t,j＝5.4hz,1h),4.48(dd,j＝11.3,5.6hz,2h),4.36(dd,j＝
10.9,5.5hz,1h),4.00(d,j＝5.7hz,1h),3.93
–
3.82(m,1h),1.63
–
1.42(m,3h),1.41
–
1.08(m,10h),1.00
–
0.68(m,11h)。
31
p nmr(162mhz,cd3od)δ3.52(s)。
[1427]
实施例129。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.32(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.27
–
7.10(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.60
–
5.37(m,2h),4.60(t,j＝5.3hz,1h),4.43(dd,j＝16.8,5.9hz,2h),4.31(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),4.05
–
3.76(m,3h),1.67(dp,j＝13.4,6.7hz,3h),1.56
–
1.15(m,10h),0.93
–
0.70(m,11h)。
31
p nmr(162mhz,cd3od)δ3.38(s)。
[1428]
实施例130.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-4-甲基戊酸环丙基甲酯
[1429][1430]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸环丙基甲酯。取(叔丁氧基羰基)-l-亮氨酸环丙基甲酯(1.85g，7.99mmol)放入乙腈(20ml)中，并且添加环丙基甲醇(3.16ml，39.99mmol)，然后一次性添加edci(1.49g，9.60mmol)和dmap(1.47g，12.0mmol)。允许在室温处搅拌过夜。浓缩并用ch2cl2稀释。通过硅胶色谱法0-40％etoac/hex纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ6.93(d,j＝8.7hz,1h),3.74-3.58(m,3h),1.44-1.09(m,12h),0.83(m,1h),0.64(m,6h),0.25(m,2h),0.06(m,2h)。
[1431][1432]
(s)-2-氨基-4-甲基戊酸环丙基甲酯盐酸盐。取(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酸环丙基甲酯放入ch2cl2(15ml)和4n hcl的二噁烷溶液(15ml，40mmol)中。在环境温度处搅拌1小时。减压浓缩并与乙醚共蒸发。置于高真空下1小时，并且中间体不经纯化即原样用于下一步骤。
[1433][1434]
(2s)-4-甲基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)戊酸环丙基甲酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-2-氨基-4-甲基戊酸环丙基甲酯盐酸盐(1.29g，5.82mmol)和二氯磷酸苯酯(0.87ml，5.82mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液中添加三乙胺(1.68ml，12.03mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1小时。然后添加4-硝基苯酚(769mg，5.53mmol)和三乙胺(0.44ml，6.01mmol)。2小时后，将反应混合物用et2o(100ml)稀释并滤
出固体。将粗产物减压浓缩并通过硅胶色谱法(120g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(m,2h),7.59
–
7.31(m,5h),7.33
–
7.09(m,2h),6.67(m,1h),3.80(m,2h),1.69
–
1.29(m,3h),0.99(m,1h),0.86
–
0.62(m,6h),0.44(ddt,j＝7.0,5.7,4.1hz,2h),0.19(dq,j＝6.7,4.5,3.5hz,2h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-0.85(s),-1.15(s)。lc/ms：tr＝1.97min，ms m/z＝463.01[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。
[1435][1436]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-4-甲基戊酸环丙基甲酯。在室温处，向中间体4(52.0mg，0.12mmol)、中间体(2s)-4-甲基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)戊酸环丙基甲酯(67mg，0.145mmol)和氯化镁(17.21mg，0.18mmol)的混合物中添加thf(1.0ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌10分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.052ml，0.220mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。添加氯化镁(20mg，0.20mmol)并在50℃处搅拌3小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.300ml，3.6mmol)。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用饱和碳酸钠水溶液淬灭至ph＝7。将粗混合物通过制备型hplc(phenominex gemini nx 10u c18 250
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。lc/ms：tr＝1.37min，ms m/z＝615.07[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.83(s,1h),7.75(s,2h),7.41
–
7.23(m,2h),7.24
–
7.03(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.71(d,j＝4.5hz,1h),6.31
–
5.93(m,2h),5.47(d,j＝5.8hz,1h),5.37(m,1h),4.45(m,1h),4.36
–
4.16(m,2h),3.96
–
3.60(m,3h),1.56
–
1.31(m,2h),1.08
–
0.87(m,2h),0.93
–
0.54(m,6h),0.43(m,2h),0.33
–
0.03(m,2h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ3.71(s),3.43(s)。
[1437]
实施例131.(2s)-2-氨基-3-甲基丁酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯
[1438][1439]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯。将boc-l-缬氨酸(435mg，2mmol)和cbz-氨基乙醇(390mg，2mmol)混合并溶解于无水二氯甲烷(15ml)。添加n-乙基-n'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(422mg，2.2mmol)。添加三乙胺(420μl，3mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(244mg，0.2mmol)，并且将反应搅拌16小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释并用2％柠檬酸水溶液(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(12g sio2combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.39(m,5h),5.17(m,2h),5.00(d,j＝8.4hz,1h),4.41
–
4.08(m,3h),3.52(m,2h),2.25
–
2.09(m,1h),1.46(s,9h),1.00(d,j＝6.8hz,3h),0.93(d,j＝6.8hz,3h)。
[1440][1441]
(2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯(378mg，0.958mmol)溶解于四氢呋喃(20ml)中。添加degussa型10％碳载钯(50mg)，并且将反应在大气氢气下搅拌20小时。滤出催化剂，并且将滤液减压浓缩，并且将所得产物用于下一反应而不经纯化。将二氯磷酸苯酯(143μl，0.958mmol)溶解于无水二氯甲烷(10ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。将上述制备的油状物溶解于无水二氯甲烷(5ml)中并滴加。滴加三乙胺(300μl，2.1mmol)并搅拌1小时。添加对硝基苯酚(107mg，0.766mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌2小时。将反应用二氯甲烷(10ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27(d,j＝8.7hz,2h),7.50
–
7.33(m,4h),7.25(m,3h),4.98(m,1h),4.41
–
4.24(m,1h),4.14(m,2h),3.87(m,1h),3.43(m,2h),2.08(m,1h),1.47(s,9h),0.99(d,j＝6.8hz,3h),0.94(d,j＝6.9hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-1.02,-1.06。ms m/z＝560.0[m+na],536.0[m-1]。
[1442][1443]
(2s)-2-氨基-3-甲基丁酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,
4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和(2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯(97mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(21mg，0.225mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌20小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(1.5ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(250μl)并在冰浴中搅拌75分钟。将反应用乙酸乙酯(30ml)稀释并在冰浴中冷却。滴加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph为9。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％-20％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.38
–
7.09(m,5h),6.88
–
6.80(m,1h),6.73(m,1h),5.51(d,j＝4.9hz,1h),4.63(q,j＝5.0hz,1h),4.49(dd,j＝7.1,5.6hz,1h),4.46
–
4.27(m,2h),4.06(m,2h),3.29
–
3.24(m,1h),3.17(m,2h),1.98(m,1h),0.89(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ5.21,5.06。ms m/z＝590.1[m+1],588.0[m-1]。
[1444]
实施例132.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-3-环丙基丙酸2-乙基丁酯
[1445][1446]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-环丙基丙酸2-乙基丁酯。取2-乙基丁醇(1.04g，4.54mmol)放入乙腈(10ml)中，并且添加2-乙基-1-丁醇(2.78ml，22.68mmol)，然后一次性添加edci(845mg，5.44mmol)和dmap(831mg，6.80mmol)。允许在室温处搅拌过夜。浓缩并用ch2cl2稀释。通过硅胶色谱法0-40％etoac/hex纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.22(d,j＝8.4hz,1h),3.99-3.87(m,3h),1.64-1.23(m,16h),0.87-0.76(m,7h),0.41(m,2h),0.15(m,1h),0.01(m,1h)。
[1447][1448]
(s)-2-氨基-3-环丙基丙酸2-乙基丁酯盐酸盐。取(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-环丙基丙酸2-乙基丁酯(1.03g，3.29mmol)放入ch2cl2(15ml)和4n hcl的二噁烷溶液(15ml，40mmol)中。在环境温度处搅拌1小时。减压浓缩并与乙醚共蒸发。置于高真空下1小时，并且中间体不经纯化即原样用于下一步骤。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.57(s,3h),4.14
–
3.98(m,3h),1.79(dt,j＝14.4,6.5hz,1h),1.70
–
1.45(m,1h),1.40
–
1.28(m,2h),1.31
–
1.20(m,1h),1.23(s,1h),0.85(t,j＝7.5hz,6h),0.84
–
0.70(m,1h),0.49
–
0.39(m,2h),0.14
–
0.06(m,2h)。
[1449][1450]
(2s)-3-环丙基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸2-乙基丁酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-2-氨基-3-环丙基丙酸2-乙基丁酯盐酸盐(0.87g，3.48mmol)和二氯磷酸苯酯(0.52ml，3.49mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中添加三乙胺(1.0ml，7.20mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1小时。然后添加4-硝基苯酚(460mg，3.30mmol)和三乙胺(0.52ml，3.60mmol)。2小时后，将反应混合物用et2o(100ml)稀释并滤出固体。将粗产物减压浓缩并通过硅胶色谱法(120g sio2combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(m,2h),7.60
–
7.32(m,4h),7.32
–
7.08(m,3h),6.82
–
6.52(m,1h),3.87(m,3h),1.65
–
1.30(m,3h),1.30
–
1.18(m,4h),0.97
–
0.70(m,6h),0.63(d,j＝6.5hz,1h),0.27(m,2h),-0.07(q,j＝3.8hz,2h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.09(s),-1.35(s)。lc/ms：tr＝2.13min，ms m/z＝490.99[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。
[1451][1452]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)-3-环丙基丙酸2-乙基丁酯。在室温处，向中间体4(52.0mg，0.12mmol)、中间体(2s)-3-环丙基-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸2-乙基丁酯(71mg，0.145mmol)和氯化镁(17.21mg，0.18mmol)的混合物中添加thf(1.0ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌10分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.052ml，0.220mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。添加氯化镁(20mg，0.20mmol)并在50℃处搅拌3小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.300ml，3.6mmol)。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用饱和碳酸钠水溶液淬灭至ph＝7。将粗混合物通过制备型hplc(phenominex gemini nx 10u c18 250
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。lc/ms：tr＝1.48min，ms m/z＝643.09[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分
钟2％acn，1.8ml/分钟。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.83(s,1h),7.74(s,2h),7.31(m,2h),7.24
–
7.04(m,3h),6.83(d,j＝4.5hz,1h),6.70(d,j＝4.5hz,1h),6.27
–
5.97(m,2h),5.48(m,1h),5.37(m,1h),4.44(m,1h),4.37
–
4.01(m,3h),3.95
–
3.65(m,3h),1.64
–
1.30(m,3h),1.24(m,4h),0.90
–
0.69(m,6h),0.69
–
0.55(m,1h),0.28(m,2h)-0.04(m,2h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ3.51(s),3.35(s)。
[1453]
实施例133.l-丙氨酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯
[1454][1455]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯。将boc-l-丙氨酸(567mg，3mmol)溶解于无水乙腈(15ml)。添加n-乙基-n'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(633mg，3.3mmol)并搅拌20分钟。一次性添加cbz-氨基乙醇(586mg，3mmol)。添加4-(二甲基氨基)吡啶(403mg，3.3mmol)并且将反应搅拌16小时。将反应用乙酸乙酯(20ml)稀释并用5％柠檬酸水溶液(20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.35(m,5h),5.10(m,3h),4.96(s,1h),4.23(m,3h),3.48(m,2h),1.42(s,9h),1.36(d,j＝7.2hz,3h)。
[1456][1457]
(2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯(818mg，2.23mmol)溶解于四氢呋喃(50ml)中。添加degussa型10％碳载钯(100mg)，并且将反应在大气氢气下搅拌4小时。滤出催化剂，并且将滤液减压浓缩，得到油状物，将该油状物用于下一反应而不经纯化。将二氯磷酸苯酯(332μl，2.23mmol)溶解于无水二氯甲烷(15ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。将所得产物溶解于无水二氯甲烷(5ml)中并滴加。滴加三乙胺(684μl，4.9mmol)并搅拌1小时。添加对硝基苯酚(248mg，1.78mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌14小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.28
–
8.17(m,2h),7.47
–
7.30(m,4h),7.28
–
7.13(m,3h),4.92(m,1h),4.33
–
4.08(m,2h),3.84(m,1h),3.39(m,2h),1.43(s,9h),1.36(d,j＝7.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-1.07。ms m/z＝532.0[m+na],508.0[m-1]。
[1458][1459]
l-丙氨酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和(2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯(92mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(21mg，0.225mmol)。将反应升温至50℃并搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(1.6ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(160μl)并在冰浴中搅拌90分钟。将反应用甲醇(500μl)稀释，并用制备型hplc(phenomenex gemini c
18
柱，5％-95％乙腈/水，不含酸改性剂)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物用制备型hplc(phenomenex gemini c
18
柱，5％-70％乙腈/水，不含酸改性剂)再纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.01(m,1h),7.41
–
7.26(m,3h),7.26
–
7.11(m,3h),6.94(m,1h),5.55(m,1h),4.53(m,1h),4.49
–
4.31(m,3h),4.22(m,2h),4.11
–
3.95(m,1h),3.30
–
3.19(m,2h),1.56
–
1.42(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ5.24,5.18。ms m/z＝562.1[m+1],559.9[m-1]。
[1460]
实施例134.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环庚酯
[1461][1462]
(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸环庚酯。取cbz-l-丙氨酸盐(1.04g，5.49mmol)放入乙腈(10ml)中，并且添加环庚醇(2.17ml，27.48mmol)，然后一次性添加edci(1.02g，6.59mmol)和dmap(1.01g，8.25mmol)。允许在室温处搅拌过夜。浓缩并用ch2cl2稀释。通过硅胶色谱法0-40％etoac/hex纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.20(d,j＝7.3hz,1h),4.81(tt,j＝8.0,4.2hz,1h),3.90(p,j＝7.4hz,1h),1.78(dt,j＝15.0,10.6hz,2h),1.67
–
1.27(m,19h),1.19(d,j＝7.3hz,3h)。
[1463][1464]
(s)-2-氨基丙酸环庚酯盐酸盐。取(s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸环庚酯(1.00g，3.50mmol)放入ch2cl2(10ml)和4n hcl的二噁烷溶液(10ml，40mmol)中。在环境温度
处搅拌1小时。减压浓缩并与己烷共蒸发。置于高真空下1小时，并且中间体不经纯化即原样用于下一步骤。
[1465][1466]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环庚酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-2-氨基丙酸环庚酯盐酸盐(0.77g，3.50mmol)和二氯磷酸苯酯(0.52ml，3.50mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中添加三乙胺(1.0ml，7.02mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1小时。然后添加4-硝基苯酚(463mg，3.32mmol)和三乙胺(0.53ml，3.51mmol)。2小时后，将反应混合物用et2o(100ml)稀释并滤出固体。将粗产物减压浓缩并通过硅胶色谱法(120g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.40
–
8.16(m,2h),7.60
–
7.32(m,4h),7.32
–
7.13(m,3h),6.64(m,1h),4.75(m,1h),3.92(m,1h),1.83
–
1.65(m,2h),1.65
–
1.42(m,8h),1.34(m,2h),1.26
–
1.07(m,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.22(s),-1.46(s)。lc/ms：tr＝2.03min，ms m/z＝462.81[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，1.8ml/分钟。
[1467][1468]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环庚酯。在室温处，向中间体4(50.0mg，0.12mmol)、中间体(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸环庚酯(64.3mg，0.140mmol)和氯化镁(16.55mg，0.174mmol)的混合物中添加thf(1.0ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌10分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.05ml，0.29mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。添加氯化镁(20mg，0.20mmol)并在50℃处搅拌3小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.300ml，3.6mmol)。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用饱和碳酸钠水溶液淬灭至ph＝7。将粗混合物通过制备型hplc(phenominex gemini nx 10u c18 250
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。lc/ms：tr＝1.39min，ms m/z＝615.02[m+1]；lc系统：thermo accela 1250 uhplc。ms系统：thermo lcq fleet；柱：2.6μxb-c18 100a，50
×
3.00mm。溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水。梯度：0分钟-2.4分钟2-100％acn，2.4分钟-2.80分钟100％acn，2.8分钟-2.85分钟100％-2％acn，2.85分钟-3.0分钟2％acn，
nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.41
–
7.28(m,5h),5.28(m,2h),5.11(s,2h),4.45
–
4.26(m,1h),3.66
–
3.25(m,4h),2.04(m,2h),1.47(s,9h),1.41(d,j＝7.2hz,3h)。
[1476][1477]
(3r)-3-(((2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。将(r)-3-(((s)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)丙酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(693mg，1.76mmol)溶解于四氢呋喃(40ml)中。添加degussa型10％碳载钯(100mg)，并且将反应在大气氢气下搅拌4小时。滤出催化剂，并且将滤液减压浓缩，并且将所得产物用于下一反应而不经纯化。将二氯磷酸苯酯(263μl，1.76mmol)溶解于无水二氯甲烷(15ml)中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。将上述制备的油状物溶解于无水二氯甲烷(5ml)中并滴加。滴加三乙胺(544μl，4mmol)并搅拌1小时。添加对硝基苯酚(197mg，1.42mmol)并移除冰浴。然后将反应搅拌14小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.29
–
8.16(m,2h),7.37(m,4h),7.29
–
7.15(m,3h),5.28(s,1h),4.13(m,2h),3.83(t,j＝10.6hz,1h),3.65
–
3.23(m,4h),2.15
–
2.05(m,1h),1.96(m,1h),1.46(s,9h),1.41(d,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.21,-3.26。ms m/z＝558.0[m+na],534.1[m-1]。
[1478][1479]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸(r)-吡咯烷-3-基酯。将中间体4(73mg，0.22mmol)和(3r)-3-(((2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(130mg，0.242mmol)溶解于无水乙腈(3ml)中。一次性添加氯化镁(32mg，0.33mmol)。将反应升温至50℃并搅拌30分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(65μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用2％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(1.6ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(200μl)并在冰浴中搅拌9小时。将反应用甲醇(500μl)稀释，并用制备型hplc(phenomenex gemini c
18
柱，5％-95％乙腈/水，不含酸改性剂)纯化。将具有期望产物的级分合并并冷冻干燥。将残余物用制备型hplc(phenomenex gemini c
18
柱，5％-70％乙腈/水，不含酸改性剂)再纯化。将具有期望产物的级分合并并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.84(m,1h),
7.41
–
7.10(m,5h),6.96(m,1h),6.78(m,1h),5.50(d,j＝4.8hz,1h),5.43
–
5.27(m,1h),4.63(q,j＝5.4hz,1h),4.56
–
4.29(m,3h),3.94(m,1h),3.52
–
3.32(m,4h),2.34
–
2.06(m,2h),1.30(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.41,3.06。ms m/z＝588.1[m+1],586.1[m-1]。
[1480]
实施例138.((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯基((s)-1-(环己基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基磷酸酯
[1481][1482]
(s)-(1-(环己基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。将boc-l-丙氨酸(378mg，2mmol)溶解于无水四氢呋喃(10ml)。添加n-乙基-n'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(422mg，2.2mmol)并搅拌20分钟。一次性添加环己胺(252μl，2.2mmol)。添加三乙胺(419μl，3mmol)并且将反应搅拌20小时。将反应用乙酸乙酯(20ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(2
×
20ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到中间体，将其用于下一步骤而不经进一步纯化。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ4.00(m 1h),3.62(m,1h),1.94
–
1.68(m,4h),1.61(m,1h),1.43(s,9h),1.40
–
1.29(m,2h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),1.21(m,3h)。
[1483][1484]
4-硝基苯基苯基((s)-1-(环己基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基磷酸酯。将(s)-(1-(环己基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(232mg，0.859mmol)溶解于4n盐酸盐的1,4-二噁烷溶液(5ml)中并搅拌30分钟。将反应减压浓缩，并且所得产物不经纯化即使用。将上述产物与无水二氯甲烷(12ml)混合并在大气氮气下在冰浴中搅拌。一次性添加二氯磷酸苯酯(128μl，0.859mmol)。滴加三乙胺(264μl，1.89mmol)并搅拌1小时。滴加更多的三乙胺(132μl，0.945mmol)并搅拌30分钟。添加对硝基苯酚(97mg，0.687mmol)。移除冰浴并且将反应混合物搅拌14小时。将反应用二氯甲烷(20ml)稀释并用水(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio2combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。ms m/z＝448.1[m+1],446.1[m-1]。
[1485][1486]
((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯基((s)-1-(环己基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基磷酸酯。将中间体4(15mg，0.044mmol)和4-硝基苯基苯基((s)-1-(环己基氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基磷酸酯(20mg，0.044mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(6.5mg，0.068mmol)。将反应升温至50℃并搅拌30分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(20μl，0.113mmol)，并且将反应在50℃处搅拌16小时。将反应冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸钠水溶液(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈(1.6ml)中并在冰浴中搅拌。滴加12m盐酸(300μl)并在冰浴中搅拌2小时。分小份添加碳酸氢钠(360mg)。将粗产物用制备型hplc(phenomenex gemini c
18
柱，5％-100％乙腈/水，不含酸改性剂)纯化。将具有期望产物的级分合并并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.99(m,1h),7.52(m,1h),7.42
–
7.09(m,5h),6.95(m,1h),5.54(m,1h),4.53(m,1h),4.47
–
4.29(m,3h),3.78(m,1h),3.62
–
3.43(m,1h),1.84
–
1.51(m,5h),1.26
–
1.00(m,8h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.68,3.31。ms m/z＝600.1[m+1],598.1[m-1]。
[1487]
实施例139.(2s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯
[1488][1489]
将产物从实施例131的反应中分离。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(m,1h),7.41
–
7.06(m,5h),6.87(m,1h),6.74(m,1h),5.51(d,j＝4.8hz,1h),4.69
–
4.57(m,1h),4.57
–
4.28(m,3h),4.14
–
3.91(m,3h),3.26(m,1h),3.16(m,2h),2.18
–
1.96(m,1h),1.43(s,9h),0.88(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ5.15,4.99。ms m/z＝689.9[m+1],688.1[m-1]。
[1490]
实施例140.(3r)-3-(((2r)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酰基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
[1491][1492]
还将产物从实施例137的反应中分离。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.91(m,1h),7.41
–
7.05(m,6h),6.86(m,1h),5.52(m,1h),5.22(m,1h),4.57(m,1h),4.52
–
4.28(m,3h),3.91(m,1h),3.60
–
3.31(m,4h),2.01(m,2h),1.44(s,9h),1.29(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25,3.22。ms m/z＝688.0[m+1],686.1[m-1]。
[1493]
实施例141. 1-甲基环丙烷-1-羧酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯
[1494][1495]
1-甲基环丙烷-1-羧酸2-氨基乙酯盐酸盐。将(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.53ml，9.0mmol)和1-甲基环丙烷-1-羧酸(0.92ml，9.0mmol)溶解于乙腈(150ml)中。然后添加edci(1.54g，10.0mmol)和dmap(1.21g，10.0mmol)，并将反应混合物在室温处搅拌。20小时后，将混合物用乙酸乙酯(300ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(300ml)和盐水(300ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗油状物溶解于二噁烷(5ml)中并且添加4m hcl的二噁烷溶液(20ml)。2小时后，通过真空过滤收集所得固体，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ4.10(t,j＝5.3hz,2h),3.38(q,j＝5.5hz,2h),1.29(s,3h),1.22(q,j＝3.9hz,2h),0.68(q,j＝3.9hz,2h)。
[1496][1497]
1-甲基环丙烷-1-羧酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。在0℃处在氩气氛下向中间体1-甲基环丙烷-1-羧酸2-氨基乙酯盐酸盐(0.426g，2.37mmol)和二氯磷酸苯酯(0.500ml，2.37mmol)在二氯甲烷(11ml)中的溶液中添加三乙胺(0.66ml，4.74mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1小时。然后添加4-硝基苯酚(330mg，2.37mmol)和三乙胺(0.33ml，2.37mmol)。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，并且将所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.24(dd,j＝9.2,2.1hz,2h),7.44
–
7.32(m,4h),7.28
–
7.18(m,3h),4.17
–
4.09(m,2h),3.41
–
3.32(m,2h),1.25(d,j＝1.6hz,3h),1.21
–
1.15(m,2h),0.70
–
0.65(m,2h)。
31
p nmr(162mhz,cd3od)δ-1.50(s)。ms m/
z＝421.04[m+1]。
[1498][1499]
1-甲基环丙烷-1-羧酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。在室温处，向中间体4(34.0mg，0.102mmol)、中间体1-甲基环丙烷-1-羧酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯(43.0mg，0.102mmol)和氯化镁(9.7mg，0.102mmol)的混合物中添加乙腈(0.50ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌5分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.045ml，0.256mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.119ml)。1.5小时后，将反应混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和乙酸乙酯(20ml)稀释。将各层分开并且将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由制备型hplc(phenominex luna 5u c18(2)100
×
30mm柱，5％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81
–
7.76(m,1h),7.37
–
7.25(m,2h),7.24
–
7.11(m,3h),6.87
–
6.81(m,1h),6.75
–
6.70(m,1h),5.54
–
5.47(m,1h),4.67
–
4.58(m,1h),4.52
–
4.27(m,3h),4.02
–
3.90(m,2h),3.19
–
3.07(m,2h),1.24
–
1.19(m,3h),1.18
–
1.11(m,2h),0.68
–
0.61(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ5.24(s),5.06(s)。lcms：ms m/z＝573.31[m+1]，tr＝1.36min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.56min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝4.93min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1500]
实施例142.(2s)-(1r,4s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸4-甲基环己酯
[1501][1502]
(s)-(1r,4s)-2-氨基丙酸4-甲基环己酯。向cbz-l-丙氨酸盐(1.0g，4.48mmol)、反式-4-甲基环己醇(1.62g，14.21mmol)和edci(0.83g，5.38mmol)在乙腈(10ml)中的混合物中一次性添加dmap(0.82g，6.72mmol)。将所得混合物在室温处搅拌15小时，用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(0至50％etoac
的己烷溶液)纯化，得到cbz-l-丙氨酸-反式-4-甲基环己基酯，将其溶解于thf(10ml)中，并且添加20％氢氧化钯/碳(250mg)。将所得混合物在氢气球下搅拌2小时，通过硅藻土垫过滤。将滤液真空浓缩，并在高真空下干燥，得到用于下一反应的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.66(tt,j＝11.1,4.4hz,1h),3.49(qd,j＝7.0,0.9hz,1h),1.93(ddt,j＝12.8,6.0,2.8hz,2h),1.83(d,j＝1.9hz,2h),1.77
–
1.66(m,2h),1.43
–
1.22(m,6h),1.10
–
0.93(m,2h),0.88(d,j＝6.5hz,3h)。ms m/z＝186(m+h)
+
。
[1503][1504]
(2s)-(1r,4s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸4-甲基环己酯。通过用于中间体25的相同程序将(s)-(1r,4s)-2-氨基丙酸4-甲基环己酯(470mg，2.54mmol)转化为该中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.37(m,4h),7.28
–
7.13(m,3h),4.65(m,1h),4.18
–
4.01(m,1h),3.88(m,1h),1.96
–
1.81(m,2h),1.80
–
1.60(m,2h),1.45
–
1.22(m,6h),1.11
–
0.95(m,2h),0.89(d,j＝6.5hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.00,-3.06。ms m/z＝463(m+h)
+
。
[1505][1506]
(2s)-(1r,4s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸4-甲基环己酯。在室温处，向中间体4(50mg，0.15mmol)、中间体(2s)-(1r,4s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸4-甲基环己酯(116mg，0.23mmol)和mgcl2(22mg，0.23mmol)在thf(3ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.066ml，0.38mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌4小时，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将所得残余物溶解于acn(2ml)中并添加浓hcl(0.2ml)。将混合物搅拌2小时，以及制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，10％-70％乙腈/水梯度)，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.37
–
7.08(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(m,1h),4.70
–
4.47(m,2h),4.47
–
4.29(m,3h),3.85(m,1h),1.92
–
1.76(m,2h),1.73
–
1.61(m,2h),1.38
–
1.20(m,6h),1.05
–
0.82(m,5h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.30,3.26。ms m/z＝615(m+h)
+
。
[1507]
通过手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，庚烷70％/异丙醇30％)分离产物，得到非对映体：
[1508][1509]
实施例143。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.38
–
7.29(m,2h),7.26
–
7.14(m,3h),6.84(d,j＝4.6hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.60(t,j＝5.3hz,1h),4.53(tt,j＝11.0,4.3hz,1h),4.45(d,j＝5.6hz,1h),4.43
–
4.39(m,1h),4.34(dd,j＝10.9,5.6hz,1h),3.85(dq,j＝9.9,7.1hz,1h),1.93
–
1.76(m,2h),1.66(ddt,j＝13.5,10.1,3.2hz,2h),1.35
–
1.21(m,6h),1.04
–
0.88(m,2h),0.86(d,j＝6.5hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.26。
[1510]
实施例144。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.34
–
7.21(m,2h),7.22
–
7.09(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.6hz,1h),5.51(d,j＝5.0hz,1h),4.65
–
4.53(m,2h),4.51(d,j＝5.6hz,1h),4.47(dd,j＝10.9,6.0hz,1h),4.35(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),3.92
–
3.75(m,1h),1.87(d,j＝12.1hz,2h),1.70(d,j＝13.2hz,2h),1.40
–
1.26(m,3h),1.24(dd,j＝7.1,1.2hz,3h),1.00(q,j＝12.8hz,2h),0.88(d,j＝6.5hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.30。
[1511]
实施例145.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸哌啶-4-基酯
[1512][1513]
在室温处，向中间体4(52mg，0.16mmol)、中间体26(144mg，0.24mmol)和mgcl2(23mg，0.24mmol)在thf(3ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.069ml，0.43mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将所得残余物溶解于acn(2ml)中并添加浓hcl(0.2ml)。将混合物在室温处搅拌2小时，并且通过制备型hplc(phenominex gemini 10u 250
×
21mm柱，0-60％1％tfa乙腈/水梯度)纯化，得到呈三氟乙酸盐形式的产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.02(m,1h),7.47
–
7.11(m,6h),6.95(m,1h),5.54(m,1h),5.01(m,1h),4.54(m,1h),4.50
–
4.34(m,3h),3.99(m,1h),3.28(m,2h),3.17(m,2h),2.02(m,2h),1.97
–
1.86(m,2h),1.35(dt,j＝7.2,1.8hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.32,3.17。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-77.95。ms m/z＝602(m+h
)+
。
[1514]
实施例146.(2s)-(r)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸1-乙酰基吡咯烷-3-基酯
[1515][1516]
将乙酸(4.8μl，0.084mmol)溶解于无水二氯甲烷(300μl)中。一次性添加n-乙基-n'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(16mg，0.084mmol)并搅拌30分钟。添加三乙胺(12μl，0.084mmol)并搅拌30分钟。将实施例137(15mg，0.0255mmol)溶解于无水n,n-二甲基甲酰胺(300μl)和吡啶(150μl)中。将上述制备的混合物分2份添加到反应中，然后将其搅拌14小时。将反应用乙酸乙酯(20ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于乙腈和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.41-7.07(m,5h),6.89
–
6.79(m,1h),6.74(m,1h),5.55
–
5.48(m,1h),5.35
–
5.15(m,1h),4.62(m,1h),4.58
–
4.28(m,3h),3.90(m,1h),3.69
–
3.44(m,4h),2.09(m,2h),1.96(m,3h),1.26(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.14,3.11。ms m/z＝630.4[m+1],628.6[m-1]。
[1517]
实施例147.((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲基(2-氯苯基)(2-(十八烷氧基)乙基)磷酸酯
[1518][1519]
在室温处向1,2,4-三唑(27.83mg，0.4mmol)和三乙胺(0.06ml，0.4mmol)在thf(0.50ml)中的溶液中添加二氯磷酸2-氯苯酯(0.03ml，0.2mmol)。1小时后，将反应混合物过滤以去除固体。然后添加中间体4(50mg，0.15mmol)和1-甲基咪唑(0.02ml，0.2mmol)。1.5小时后，添加乙二醇单十八烷基醚(47.47mg，0.15mmol)。20小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用水(10ml)洗涤。将有机层分开，并经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-7.76(s)。ms m/z＝818.34[m+1]。
[1520]
实施例148.((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基(2-(十八烷氧基)乙基)磷酸氢酯
1-醇(300mg，1mmol)溶解于无水二氯甲烷(2ml)中并滴加到反应中。滴加三乙胺(153μl，1.1mmol)并搅拌1小时。移除冰浴并搅拌4小时。添加对硝基苯酚(111mg，0.8mmol)以及三乙胺(153μl，1.1mmol)。将反应混合物搅拌14小时。将反应用乙酸乙酯(20ml)稀释并用水(2
×
20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.32
–
8.18(m,2h),7.39(m,2h),4.45(q,j＝6.6hz,1h),4.29(q,j＝6.6hz,1h),3.48(dd,j＝6.7,5.4hz,2h),3.36(td,j＝6.7,3.0hz,2h),1.98(dt,j＝16.4,6.2hz,2h),1.53(m,2h),1.25(m,26h),0.87(t,j＝6.6hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-13.35。
[1528][1529]
((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基(3-(十六烷氧基)丙基)磷酸氢酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和3-(十六烷氧基)丙基双(4-硝基苯基)磷酸酯(112mg，0.18mmol)溶解于无水四氢呋喃(3ml)中。一次性添加氯化镁(71mg，0.75mmol)。将反应升温至50℃并搅拌15分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(130μl，0.75mmol)，并将反应在50℃处搅拌2小时。将反应冷却至室温并用乙酸乙酯(50ml)稀释。将混合物过滤并且将滤液减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将材料溶解于1,4-二噁烷(2ml)中并在冰浴中搅拌。添加0.1n氢氧化钠水溶液(1ml)并且将反应搅拌3小时。将反应用1n盐酸中和，得到ph为7，然后用乙酸乙酯(30ml)萃取。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗产物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％甲醇/二氯甲烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到白色固体(29mg)。将材料溶解于乙腈(2ml)中。滴加12n盐酸(300μl)，然后搅拌1小时。将反应减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.08(s,1h),7.46(d,j＝4.5hz,1h),7.02(d,j＝4.5hz,1h),5.56(d,j＝4.7hz,1h),4.52(t,j＝5.1hz,1h),4.40(d,j＝5.1hz,1h),4.29(qd,j＝11.0,5.5hz,2h),4.11(q,j＝6.5hz,2h),3.49(t,j＝6.0hz,2h),3.39(t,j＝6.5hz,2h),1.89(p,j＝6.2hz,2h),1.52(q,j＝6.7hz,2h),1.27(s,26h),0.89(t,j＝6.7hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-1.56。
[1530]
实施例150.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸哌啶-4-基酯
[1531][1532]
(s)-2-氨基丙酸1-甲基哌啶-4-基酯。将cbz-l-丙氨酸盐(2.33g，10.42mmol)、n-甲基-4-羟基-哌啶(1.00g，7.99mmol)和hatu(3.47g，9.12mmol)溶解于dmf(10ml)中，并且
将所得混合物在室温处搅拌15分钟。然后立即添加三乙胺(2.41ml，17.37mmol)。将所得混合物在室温处搅拌15小时，用etoac稀释，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(0至20％meoh的亚甲基氯溶液)纯化，将其溶解于thf(15ml)中，并且添加20％氢氧化钯/碳(250mg)。将所得混合物在室温处搅拌4小时，过滤，真空浓缩，与甲苯共蒸发若干次，并在高真空下干燥15小时，得到中间体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ5.01
–
4.87(m,1h),3.83(q,j＝7.2hz,1h),2.92(m,2h),2.71(m,2h),2.50(s,3h),2.01(m,2h),1.94
–
1.76(m,2h),1.43(d,j＝7.1hz,3h)。
[1533][1534]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸1-甲基哌啶-4-基酯。将(s)-2-氨基丙酸1-甲基哌啶-4-基酯(400mg，2.15mmol)溶解于亚甲基氯(5ml)中，冷却至-78℃，并快速添加二氯磷酸苯酯(0.32ml，2.15mmol)。在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.30ml，2.15mmol)，并且一次性添加4-硝基苯酚(299mg，2.15mmol)。然后在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.30ml，2.15mmol)。将混合物在-78℃处搅拌2小时并在室温处搅拌15小时，用亚甲基氯稀释，用水洗涤两次并用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至10％meoh的亚甲基氯溶液)纯化残余物，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.21
–
8.00(m,2h),7.50
–
7.04(m,7h),4.90(m,1h),4.08(m,1h),2.96(m,4h),2.55(m,3h),2.08(m,2h),1.87(m,2h),1.35(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.48,-2.79。ms m/z-464(m+h)
+
。
[1535][1536]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸哌啶-4-基酯。在室温处，向中间体4(52mg，0.16mmol)、(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸1-甲基哌啶-4-基酯(135mg，0.246mmol)和mgcl2(23mg，0.24mmol)在thf(3ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.069ml，0.43mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌15小时，通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，10％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到呈白色固体状的缩丙酮中间体(60mg，58％)。将20mg的缩丙酮溶解于acn(1ml)中，并添加浓hcl(0.1ml)。将所得混合物在室温处搅拌1小时并通过制备型hplc(phenominex gemini 10u 250
×
21mm柱，0-60％1％tfa乙腈/水梯度)纯化，得到呈tfa盐形式的产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.99(m,1h),7.46
–
7.08(m,6h),6.92m,1h),5.53(d,j
＝5.1hz,1h),5.06(m,1h),4.56(m,1h),4.52
–
4.31(m,3h),4.12
–
3.89(m,1h),3.55(m,1h),3.34(s,1h),3.24
–
3.09(m,2h),2.84(m,3h),2.23(m 1h),2.04(m,2h),1.83(s,1h),1.42
–
1.24(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.36,3.18。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-77.67。ms m/z＝616(m+h)
+
。
[1537]
实施例151. 3-(((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)氧基)丙烷-1,2-二基二棕榈酸酯
[1538][1539]
3-((双(4-硝基苯氧基)磷酰基)氧基)丙烷-1,2-二基-二棕榈酸酯。在-30℃处，向1,2-二棕榈酰基-外消旋-甘油(562mg，0.988mmol)和pocl3(167mg，1.087mmol)在ch2cl2(5ml)中的溶液中添加tea(0.14ml，1.0mmol)。将反应混合物在-30℃处搅拌10分钟，然后缓慢升温至室温并搅拌0.5小时。在0℃处，滴加4-硝基苯酚(261mg，1.877mmol)和tea(0.286ml，2.06mmol)在ch2cl2(1.5ml)中的溶液。将所得反应混合物在0℃处搅拌0.5小时，然后在室温处搅拌0.5小时。将反应混合物用己烷(15ml)稀释并过滤。将滤液加载到硅胶柱(～25ml)上，用20％-33％ch3co2et-己烷洗脱，并将含有产物的级分合并，并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.28(d,j＝8.8hz,4h),7.40(2d,j＝9.2hz,4h),5.25-5.35(m,1h),4.38-4.52(m,2h),4.31(dd,j＝12,4.4hz,1h),4.17(d,j＝12,5.2hz,1h),2.20-2.32(m,4h),1.50-1.70(m,8h),1.25(brs,44h),0.88(t,j＝7.2hz,6h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3):δ-13.24。
[1540][1541]
3-(((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)氧基)丙烷-1,2-二基二棕榈酸酯。向中间体4(124mg，0.374mmol)和磷酸酯3-((双(4-硝基苯氧基)磷酰基)氧基)丙烷-1,2-二基-二棕榈酸酯(335mg，0.376mmol)在thf中的溶液中添加mgcl2(60mg，0.63mmol)。将反应混合物在室温处搅拌10分钟，然后添加n,n-二异丙基乙胺(150mg，1.16mmol)。将反应混合物在室温处搅拌16小时。tlc显示反应完成。将反应混合物用己烷-ch3co2et(1:1，5ml)稀释，用h2o洗涤，经mgso4干燥，通过硅胶柱(用30％-70％ch3co2et-己烷洗脱)纯化，得到所需产物。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.10(d,j＝8.8hz,1h),7.97(d,j＝8.4hz,1h),7.89(d,j＝4hz,1h),7.30(d,j＝7.6hz,1h),7.21(d,j＝8.4,1h),6.68-6.75(m,2h),5.61(d,j＝18.4hz,1h),5.15-5.27(m,2h),5.03-5.05(m,1h),4.4-4.58
基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-氧代吡咯烷-3-基酯
[1548][1549]
(s)-(叔丁氧基羰基)丙氨酸2-氧代吡咯烷-3-基酯。以与针对实施例117所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.57(s,0.26h),7.48(s,0.74h),5.33
–
5.20(m,1h),5.15(brs,1h),4.38
–
4.22(m,1h),3.39(m,1h),3.30(m,1h),2.61
–
2.46(m,1h),2.12
–
1.97(m,1h),1.37(m,12h)。
[1550][1551]
(s)-丙氨酸2-氧代吡咯烷-3-基酯盐酸盐。以与针对中间体13所述类似的方式制备中间体。
[1552][1553]
(s)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-氧代吡咯烷-3-基酯。以与针对中间体35所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.34
–
8.24(m,2h),8.14
–
8.03(m,1h),7.57
–
7.36(m,3h),7.33
–
7.19(m,2h),6.84
–
6.69(m,1h),5.25
–
5.09(m,1h),4.14
–
3.97(m,1h),3.25
–
3.11(m,2h),2.45
–
2.30(m,1h),1.87
–
1.72(m,1h),1.32
–
1.21(m,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.247(s),-1.520(s),-1.581(s)。ms m/z＝898.62[m+1]。
[1554][1555]
(s)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-氧代吡咯烷-3-基酯。将中间体4(54mg，0.163mmol)、中间体(s)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-氧代吡咯烷-3-基酯(88mg，0.196mmol)和mgcl2(62mg，0.652mmol)溶解在thf(3ml)中。5分钟后，将所得混合物置于50℃浴中。搅拌10分钟后，以逐滴方式添加dipea(0.071ml，0.407mmol)。运行反应直到通过lc/ms确定中间体被消耗。将反应冷却至室温，并经由添加饱和nahco3水溶
液来淬灭。分离各层并用dcm(3
×
)洗涤水层。将合并的有机层用盐水洗涤并经na2so4干燥。通过真空过滤去除干燥剂后，浓缩滤液，并且通过hplc分离中间体缩丙酮保护的产物(48mg)。将中间体缩丙酮保护的产物溶解于thf(2.5ml)中，将所得溶液在冰浴中冷却，并且滴加12n hcl的水溶液(0.3ml)。通过lc/ms监测反应进程。反应完成后，浓缩反应，将残余物与来自以完全相同的比例进行的另一反应的残余物合并，并且通过反相hplc从合并的残余物中分离产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4,带星号(*)的化学位移表示在另一异构体上相关质子的位移)δ7.81(s,0.6h),7.80(s,0.4h),7.37
–
7.27(m,2h),7.26
–
7.14(m,3h),6.87
–
6.83(m,1h),6.78
–
6.72(m,1h),5.54
–
5.48(m,1h),5.33
–
5.20(m,1h),4.67
–
4.59(m,1h),4.54
–
4.30(m,3h),4.07
–
3.88(m,1h),3.40
–
3.24(m,2h),2.58
–
2.37(m,1h),2.03
–
1.88(m,1h),1.31(d,j＝7.2hz,2.13h),1.26(d,j＝7.1hz,0.87h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.233(s),3.099(s),2.896(s)。ms m/z＝602.08[m+1]。
[1556]
实施例154.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3,3-二甲基环己酯
[1557][1558]
l-丙氨酸3,3-二甲基环己酯。以与针对中间体26所述类似的方式由cbz-l-丙氨酸盐(1.2g，5.38mmol)和3,3-二甲基环己醇(2.1g，16.13mmol，外消旋混合物)制备中间体。ms m/z＝200[m+h]。
[1559][1560]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3,3-二甲基环己酯。以与针对中间体25所述类似的方式由l-丙氨酸3,3-二甲基环己酯(1.0g，5.02mmol)制备呈同分异构混合物形式(1:1:1:1)的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.18(m,2h),7.40
–
7.31(m,4h),7.27
–
7.21(m,3h),4.93
–
4.80(m,1h),4.08(m,1h),3.91(m,1h),1.78-1.41(m,3h),1.39(m,3h),1.36
–
1.04(m,5h),0.96
–
0.90(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.00,-3.03,-3.06,-3.08。ms m/z＝477[m+h]。
[1561][1562]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3,3-二甲基环己酯。以与针对实施例3所述类似的方式由中间体4(60mg，0.18mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰
基)-l-丙氨酸3,3-二甲基环己酯(129mg，0.27mmol)制备产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.38
–
7.10(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.55
–
5.44(m,1h),4.78(m,1h),4.67
–
4.55(m,1h),4.54
–
4.30(m,3h),3.95
–
3.74(m,1h),1.83(s,1h),1.65
–
1.35(m,3h),1.34
–
0.98(m,7h),0.97
–
0.82(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.30,3.27。ms m/z＝629[m+h]。
[1563]
实施例155.反式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-甲基环己酯
[1564][1565]
反式-l-丙氨酸2-甲基环己酯。以与针对中间体26所述类似的方式由cbz-l-丙氨酸盐(1.0g，4.48mmol)和反式-2-甲基环己醇(2.2g，17.9mmol，外消旋混合物)制备中间体。ms m/z＝186[m+h]。
[1566][1567]
反式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-甲基环己酯。以与针对中间体25所述类似的方式由反式-l-丙氨酸2-甲基环己酯(590mg，2.66mmol)制备呈同分异构混合物形式的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.18(m,2h),7.45
–
7.32(m,4h),7.30
–
7.15(m,3h),4.43(m,1h),4.28
–
4.03(m,1h),3.90(m,1h),1.88(m,1h),1.75(m,2h),1.69
–
1.47(m,2h),1.41(m,3h),1.38
–
1.13(m,3h),1.12
–
0.98(m,1h),0.84(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.99,-3.00,-3.05,-3.08。ms m/z＝463[m+h]。
[1568][1569]
反式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-甲基环己酯。以与针对实施例3所述类似的方式由中间体4(83mg，0.25mmol)和反式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-甲基环己酯(174mg，0.38mmol)制备产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.31(m,2h),7.19m,3h),6.85(m,1h),6.73m,1h),5.56
–
5.46(m,1h),4.62(m,1h),4.53
–
4.39(m,2h),4.38
–
4.25(m,2h),3.96
–
3.78(m,1h),1.85(m,1h),1.79
–
1.38(m,4h),1.36
–
1.11(m,6h),1.12
–
0.90(m,1h),0.89
–
0.70(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.32,3.29,3.28,3.27。ms m/z＝615[m+h]。
[1570]
实施例156.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2,2-二甲基四氢-2h-吡喃-4-基酯
[1571][1572]
丙氨酸2,2-二甲基四氢-2h-吡喃-4-基酯。以与针对中间体26所述类似的方式由cbz-l-丙氨酸盐(1.8g，8.06mmol)和2,2-二甲基-4-羟基四氢-2h-吡喃(1.36ml，9.68mmol，外消旋混合物)制备中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.08(m,1h),3.90
–
3.76(m,1h),3.69(m,1h),3.55(m,1h),2.10
–
1.74(m,4h),1.67
–
1.39(m,2h),1.34(dd,j＝7.0,0.9hz,3h),1.27(s,3h),1.24(s,3h)。ms m/z＝202[m+h]。
[1573][1574]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2,2-二甲基四氢-2h-吡喃-4-基酯。以与针对中间体25所述类似的方式由丙氨酸2,2-二甲基四氢-2h-吡喃-4-基酯(1.10g，5.47mmol)制备呈同分异构混合物形式的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.28
–
8.14(m,2h),7.44
–
7.27(m,3h),7.27
–
7.10(m,4h),5.10
–
4.97(m,1h),4.18
–
4.02(m,1h),3.91
–
3.73(m,2h),3.71
–
3.59(m,1h),1.89
–
1.74(m,2h),1.75
–
1.46(m,2h),1.40m,3h),1.23(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.15,-3.13。ms m/z＝479[m+h]。
[1575][1576]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2,2-二甲基四氢-2h-吡喃-4-基酯。以与针对实施例3所述类似的方式由中间体4(55mg，x0.17mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2,2-二甲基四氢-2h-吡喃-4-基酯(119mg，0.25mmol)制备产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.85
–
7.72(m,1h),7.36
–
7.07(m,5h),6.85(m,1h),6.80
–
6.65(m,1h),5.51(m,1h),5.06
–
4.92(m,1h),4.68
–
4.54(m,1h),4.54
–
4.29(m,3h),3.97
–
3.80(m,1h),3.77
–
3.54(m,2h),1.88
–
1.72(m,2h),1.41(m,2h),1.29
–
1.13(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.37,3.21,3.19,2.97。ms m/z＝631[m+h]。
[1577]
实施例157.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸新戊酯
[1578][1579]
(s)-2-氨基丁酸新戊酯盐酸盐。将三甲基氯硅烷(1.23ml，10.0mmol)添加到(s)-2-氨基丁酸(1g，10mmol)在新戊醇(8.54g)中的溶液中，并且将所得混合物加热至80℃。21小时后，将反应混合物在70℃处减压浓缩。将粗固体残余物溶解到己烷(150ml)中并搅拌4小时。通过真空过滤收集所得固体，得到中间体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ4.05(t,j＝6.1hz,1h),3.96(qd,j＝10.5,0.9hz,2h),2.08
–
1.88(m,2h),1.07(td,j＝7.6,0.9hz,3h),0.99(s,9h)。
[1580][1581]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸新戊酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-2-氨基丁酸新戊酯盐酸盐(0.994g，4.74mmol)和二氯磷酸苯酯(0.705ml，4.74mmol)在二氯甲烷(23ml)中的溶液中添加三乙胺(1.2ml，9.4mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌1.5小时。然后添加4-硝基苯酚(660mg，4.74mmol)和三乙胺(0.66ml，4.7mmol)。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，并且将所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.22(d,j＝8.3hz,2h),7.47
–
7.29(m,4h),7.28
–
7.15(m,3h),4.18
–
4.03(m,1h),3.94
–
3.72(m,3h),1.90
–
1.69(m,2h),0.97
–
0.82(m,12h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3)δ-2.64(s),-2.70(s)。ms m/z＝450.96[m+1]。
[1582][1583]
(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸新戊酯。在室温处，向中间体4(34.0mg，0.102mmol)、(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丁酸新戊酯(46.1mg，0.102mmol)和氯化镁(9.7mg，0.102mmol)的混合物中添加乙腈(0.50ml)。将所得混合物升温至50℃，并使其搅拌5分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.045ml，0.256mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.119ml，1.43mmol)。1小时后，将反应混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和乙酸乙酯(20ml)稀释。将各层分开并且将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸
钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过制备型hplc(phenominex luna 5u c18(2)100
×
30mm柱，5％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,0.6h),7.78(s,0.4h),7.35
–
7.10(m,5h),6.86
–
6.82(m,1h),6.75
–
6.71(m,1h),5.53
–
5.47(m,1h),4.65
–
4.58(m,1h),4.52
–
4.30(m,3h),3.87
–
3.63(m,3h),1.80
–
1.54(m,2h),0.93
–
0.81(m,12h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.61(s)3.57(s)。lcms：ms m/z＝603.30[m+1]，tr＝1.59min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.88min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝5.66min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1584]
sp和rp非对映体的拆分。经由手性制备型sfc(sfc id 5um 4.6
×
150mm柱，sfc 30％ipa)纯化产物，得到非对映体：
[1585][1586]
实施例158。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.34
–
7.23(m,2h),7.19
–
7.11(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.1hz,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.52
–
4.43(m,2h),4.36(dd,j＝10.8,5.3hz,1h),3.86
–
3.70(m,3h),1.82
–
1.69(m,1h),1.69
–
1.54(m,1h),0.91(s,9h),0.85(t,j＝7.4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.58(s)。lcms：ms m/z＝603.30[m+1]，tr＝1.57min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.88min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝5.66min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1587]
实施例159。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.83(s,1h),7.38
–
7.27(m,2h),7.25
–
7.14(m,3h),6.93(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.6hz,1h),5.49(d,j＝5.0hz,1h),4.59(t,j＝5.3hz,1h),4.48
–
4.38(m,2h),4.34(dd,j＝10.9,5.5hz,1h),3.86
–
3.78(m,1h),3.76(d,j＝10.5hz,1h),3.66(d,j＝10.5hz,1h),1.80
–
1.56(m,2h),0.90
–
0.82(m,12h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.62(s)。lcms：ms m/z＝603.30[m+1]，tr＝
1.59min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.88min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝5.66min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1588]
实施例160.(s)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-氨基-1-氧代丙-2-基酯
[1589][1590]
(s)-((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸1-氨基-1-氧代丙-2-基酯。将cbz-l-ala(446mg，2mmol)溶解于无水乙腈(15ml)中。一次性添加edci(460mg，2.4mmol)，并且将反应搅拌15分钟。一次性添加(s)-乳酰胺(178mg，2mmol)，然后添加dmap(269mg，2.2mmol)。将反应搅拌6小时。将反应用etoac(30ml)稀释并用5％柠檬酸水溶液(15ml)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(15ml)洗涤，最后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到中间体，将其用于下一步骤而不经纯化。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.35(m,5h),6.55(s,1h),5.38
–
4.93(m,5h),4.34(p,j＝7.2hz,1h),1.47(m,6h)。
[1591][1592]
(s)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-氨基-1-氧代丙-2-基酯。将(s)-((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸1-氨基-1-氧代丙-2-基酯(479mg，1.63mmol)溶解于无水thf(25ml)中。添加10％pd/c degussa型，并且将混合物在大气氢气下搅拌3小时。滤出催化剂并用无水thf(5ml)洗涤。将滤液减压浓缩，并且所得物质不经纯化即使用。将二氯磷酸苯酯(242μl，1.63mmol)溶解于无水dcm(15ml)中并在冰浴中在大气氮气下搅拌。将上述制备的物质与无水thf(5ml)混合并在15分钟内分几份添加到反应中。将反应搅拌1小时。将三乙胺(250μl，1.79mmol)滴加到反应混合物中。将反应搅拌1小时。将更多的三乙胺(250μl，1.79mmol)滴加到反应混合物中。将反应搅拌45分钟。将对硝基苯酚(181mg，1.3mmol)一次性添加到反应中。移除冰浴并且将反应混合物搅拌14小时。将反应用dcm(20ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤。有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱
法(40g sio2combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.29
–
8.15(m,2h),7.47
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.14(m,3h),6.52(m,1h),5.56(s,1h),5.17(m,1h),4.20(m,1h),4.07
–
3.96(m,1h),1.53
–
1.40(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.53(s),-2.79(s)。ms m/z＝438.0[m+1]；436.0[m-1]。
[1593][1594]
(s)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-氨基-1-氧代丙-2-基酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和(s)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-氨基-1-氧代丙-2-基酯(79mg，0.18mmol)在无水thf(3ml)中混合。一次性添加氯化镁(36mg，0.375mmol)。将反应在50℃处搅拌30分钟。添加dipea(65μl，0.375mmol)，并将反应在50℃处搅拌14小时。
[1595]
将反应冷却至室温，用etoac(15ml)稀释，并用2％碳酸钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-10％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将所得油状物溶解于mecn(2ml)中并在冰浴中搅拌。将12m hcl(水溶液)(300μl)滴加到反应中，然后搅拌1小时。将反应用etoac(10ml)稀释。添加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph 8。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％-20％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.38
–
7.08(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(d,j＝4.9hz,1h),5.04
–
4.93(m,1h),4.67
–
4.58(m,1h),4.54
–
4.29(m,3h),3.97(m,1h),1.46
–
1.25(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.52(s),3.39(s)。ms m/z＝590.1[m+1]；588.0[m-1]。
[1596]
实施例161.(4ar,6s,7s,7as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(环戊氧基)-7-羟基二氢-4h-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧杂环己膦烷-4a(6h)-甲腈2-氧化物
[1597][1598]
环戊基双(4-硝基苯基)磷酸酯。在-78℃处在氩气氛下向环戊醇(0.87g，10.1mmol)和三氯氧磷(1.56ml，10.17mmol)在二氯甲烷(15ml)中的溶液中添加三乙胺(1.4ml，10.1mmol)。使所得混合物升温至0℃并搅拌0.5小时。然后添加4-硝基苯酚(2.65g，
19.05mmol)和三乙胺(2.8ml，20.2mmol)。1小时后，将反应混合物用己烷(15ml)稀释并且将所得混合物过滤。将滤液通过硅胶柱(用20％-33％乙酸乙酯/己烷洗脱)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝9.6hz,4h),7.39(d,j＝9.6hz,4h),5.15
–
5.25(m,1h),1.60
–
2.0(m,8h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3)δ-14.2(s)。
[1599][1600]
((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲基环戊基(4-硝基苯基)磷酸酯。向中间体4(105mg，0.317mmol)、环戊基双(4-硝基苯基)磷酸酯(140mg，0.343mmol)和氯化镁(54mg，0.567mmol)在thf(2.0ml)中的混合物中添加n,n-二异丙基乙胺(115μl，0.66mmol)。将所得混合物在室温处搅拌16小时。将反应混合物用乙酸乙酯(5ml)稀释，用水洗涤，经mgso4干燥并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶柱(用30％-100％乙酸乙酯/己烷洗脱)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.09(d,j＝8.8hz,1h),7.93(d,j＝9.6hz,1h),7.86(d,j＝5.2hz,1h),7.3(d,j＝9.2hz,1h),7.2(d,j＝9.6hz,1h),6.65
–
6.71(m,1h),6.55
–
6.59(m,1h),5.8(brs,2h),5.58-5.63(m,1h),5.2
–
5.3(m,1h),5.0
–
5.15(m,2h),4.38
–
4.52(m,2h),1.5
–
2.0(m,11h),1.35-1.37(2s,3h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3)δ-8.84(s),-9.13(s)。ms m/z＝601.0[m+h]。
[1601][1602]
((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基环戊基(4-硝基苯基)磷酸酯。在0℃处，向((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲基环戊基(4-硝基苯基)磷酸酯(120mg，0.20mmol)在乙腈(1.2ml)和水(0.2ml)中的溶液中添加hcl(0.2ml，37％)。将反应混合物在室温处搅拌3小时。将反应混合物用nahco3(210mg)淬灭，搅拌1小时并浓缩。将残余物用ch3co2et处理，用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并在高真空下干燥，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3+5％cd3od)δ8.09(d,j＝8.8hz,1h),7.95(d,j＝8.6hz,1h),7.74(d,j＝10hz,1h),7.27(d,j＝7.6hz,1h),7.19(d,j＝9.6hz,1h),6.55
–
6.7(m,2h),4.95
–
5.1(m,1h),4.3-4.55(m,4h),1.45
–
1.95(m,8h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3+5％cd3od)δ-8.88(s),-9.06(s)。ms m/z＝561.0[m+h]。
[1603][1604]
(4ar,6s,7s,7as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-(环戊氧基)-7-羟基二氢-4h-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧杂环己膦烷-4a(6h)-甲腈2-氧化物。将((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基环戊基(4-硝基苯基)磷酸酯(55mg，0.098mmol)和dmap(110mg，0.9mmol)在乙酸乙酯(10ml)中的混合物在85℃处搅拌36小时。将反应混合物减压浓缩。将粗残余物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，40％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,cd3cn)δ7.86(s,1h),6.78-6.81(m,2h),6.43(brs,2h),5.63(brs,1h),5.26
–
5.29(m,1h),5.0
–
5.1(m,2h),4.84(d,j＝5.6hz,1h),4.68-4.77(m,1h),4.44(d,j＝10.4hz,1h),4.25(brs,1h),1.6
–
2.0(m,8h)。
31
p nmr(162mhz,cd3cn)δ-8.3(s)。ms m/z＝422.3[m+h]。
[1605]
实施例162.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(二甲基氨基)乙酯
[1606][1607]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸2-(二甲基氨基)乙酯。将cbz-l-ala(446mg，2mmol)溶解于无水dmf(10ml)中。一次性添加三乙胺(698μl，5mmol)。添加2-氯-n,n-二甲基乙胺盐酸盐(317mg，2.2mmol)。将反应搅拌2小时。添加dmap(24mg，0.2mmol)，并将反应搅拌2小时。将反应升温至50℃并搅拌2小时。添加更多的三乙胺(700μl)和2-氯-n,n-二甲基乙胺盐酸盐(317mg)。将反应在50℃处搅拌16小时。
[1608]
将反应冷却至室温，用etoac(30ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
15ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(24g sio2combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/dcm)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.41
–
7.27(m,5h),5.37(m,1h),5.11(s,2h),4.50
–
4.33(m,1h),4.26(m,2h),2.59(m,2h),2.29(s,6h),1.42(d,j＝7.2hz,3h)。
[1609][1610]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(二甲基氨基)乙酯。将((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸2-(二甲基氨基)乙酯(310mg，1.05mmol)溶解于无水thf(15ml)中。添加10％pd/c degussa型，并且将混合物在大气氢气下搅拌3小时。滤出催化剂并用无水thf
(5ml)洗涤。将滤液减压浓缩，并且所得物质不经纯化即使用。将二氯磷酸苯酯(157μl，1.05mmol)溶解于无水thf(10ml)中并在冰浴中在大气氮气下搅拌。将上述制备的物质用无水thf(3ml)溶解并在5分钟内滴加到反应中。将反应搅拌1小时。将三乙胺(322μl，2.32mmol)滴加到反应混合物中。将反应搅拌1小时。将对硝基苯酚(117mg，0.84mmol)一次性添加到反应中。移除冰浴并且将反应混合物搅拌14小时。将反应用etoac(20ml)稀释并用水(2
×
20ml)洗涤。有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0
–
3％-7％甲醇/dcm)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.46
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.14(m,3h),4.33
–
4.02(m,4h),2.58(m,2h),2.29(s,6h),1.42(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.04(s)。ms m/z＝438.1[m+1]；436.1[m-1]。
[1611][1612]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(二甲基氨基)乙酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-(二甲基氨基)乙酯(79mg，0.18mmol)在无水thf(3ml)中混合。一次性添加氯化镁(43mg，0.45mmol)。将反应搅拌10分钟。添加dipea(52μl，0.3mmol)，并将反应搅拌4小时。添加更多的氯化镁(90mg，0.9mmol)，并将反应搅拌16小时。将反应用etoac(15ml)稀释，并用2％碳酸钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-10％-20％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将所得油状物溶解于mecn(2ml)中并在冰浴中搅拌。将12m hcl(水溶液)(300μl)滴加到反应中，然后搅拌2小时。将反应用etoac(10ml)稀释。添加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph 8。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％-20％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，并且然后将所得化合物溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3,水-d2)δ7.89
–
7.78(m,1h),7.45
–
7.29(m,2h),7.29
–
7.04(m,3h),6.85(m,1h),6.79
–
6.71(m,1h),5.50(d,j＝4.8hz,1h),4.66
–
4.54(m,1h),4.54
–
4.27(m,5h),3.97(m,1h),3.40
–
3.24(m,2h),2.88
–
2.71(m,6h),1.29(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3,水-d2)δ0.93(s),0.80(s)。ms m/z＝590.2[m+1]；588.1[m-1]。
[1613]
实施例163.(4ar,6s,7s,7as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-7-羟基-2-异丙氧基二氢-4h-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧杂环己膦烷-4a(6h)-甲腈2-氧化物
[1614][1615]
异丙基双(4-硝基苯基)磷酸酯。在-78℃处向异丙醇(0.780ml，10.2mmol)和pocl3(0.945ml，10.2mmol)在二氯甲烷中的溶液中添加三乙胺(1.42ml，10.2mmol)。将反应混合物在-78℃处搅拌10分钟，然后缓慢升温至0℃并搅拌30分钟。然后缓慢添加4-硝基苯酚(2.83g，20.4mmol)和三乙胺(2.84ml，20.4mmol)在二氯甲烷中的溶液。将所得混合物在0℃处搅拌30分钟，然后温热至室温。30分钟后，将反应混合物用己烷(15ml)稀释，并且通过真空过滤去除固体。将滤液经由sio2柱色谱法(120g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.27(d,j＝9.1hz,4h),7.40(d,j＝9.3hz,2h),4.97(h,j＝6.3hz,1h),1.42(d,j＝6.2hz,6h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3)δ-14.22(s)。
[1616][1617]
((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基异丙基(4-硝基苯基)磷酸酯。在室温处，向中间体4(167mg，0.438mmol)、中间体异丙基双(4-硝基苯基)磷酸酯(145mg，0.438mmol)和氯化镁(41.7mg，0.438mmol)的混合物中添加乙腈(2.00ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌5分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.076ml，0.438mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.511ml)。1小时后，将反应混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和乙酸乙酯(20ml)稀释。将各层分开并且将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过制备型hplc(gemini 5u c18 100
×
30mm柱，10-100％乙腈/水梯度0.1％tfa)纯化。将具有期望产物的级分合并并浓缩至～5ml体积，并且添加饱和碳酸氢钠水溶液以中和至ph＝7。将所得含水混合物用乙酸乙酯(2
×
10ml)萃取，并且将有机萃取物经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。
[1618][1619]
(4ar,6s,7s,7as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-7-羟基-2-异丙氧基二氢-4h-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧杂环己膦烷-4a(6h)-甲腈2-氧化物。将((2r,3s,
4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基异丙基(4-硝基苯基)磷酸酯(167mg，0.438mmol)溶解于乙酸乙酯(2ml)中，并且添加dmap(428mg)，并将所得混合物加热至80℃。24小时后，减压浓缩所得混合物。将粗残余物通过制备型hplc(gemini 5u c18 100
×
30mm柱，10％-100％乙腈/水梯度0.1％tfa)纯化，并且将具有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解到水/乙腈混合物中，并用饱和碳酸氢钠水溶液中和，并且经由制备型hplc(gemini 5u c18 100
×
30mm柱，10％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1:0.15异构体混合物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.78(d,j＝4.5hz,1h),5.59(d,j＝1.5hz,1h),5.41(dd,j＝5.4,2.8hz,1h),4.84
–
4.77(m,1h),4.51(d,j＝10.0hz,1h),1.47(dd,j＝6.2,3.2hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-7.61(s)。ms m/z＝396.18[m+h]。lcms：ms m/z＝396.18[m+1]，tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.12min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。
[1620]
实施例164.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-甲氧基-2-甲基丙酯
[1621][1622]
l-丙氨酸2-甲氧基-2-甲基丙酯盐酸盐。将(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(1.82ml，10.0mmol)和2-甲氧基-2-甲基丙-1-醇(1.00g，10.0mmol)溶解于乙腈(150ml)中。然后添加edci(1.49g，10.0mmol)和dmap(1.17g，10.0mmol)，并将反应混合物在室温处搅拌。2小时后，将混合物减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(25g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有boc保护的中间体的级分合并并减压浓缩。将4m hcl的二噁烷溶液(20ml)添加到浓缩物中，并且4小时后，通过真空过滤收集所得固体，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.33
–
4.20(m,1h),4.17(d,j＝11.3hz,1h)4.07(d,j＝11.4hz,1h),3.28
–
3.18(m,3h),1.75(d,j＝7.1hz,3h),1.21(br s,6h)。
[1623][1624]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-甲氧基-2-甲基丙酯。在0℃处在氩气氛下向l-丙氨酸2-甲氧基-2-甲基丙酯盐酸盐(0.120g，0.57mmol)和二氯磷酸苯酯(0.084ml，0.57mmol)在二氯甲烷(3ml)中的溶液中添加三乙胺(0.160ml，1.13mmol)。使所
得混合物升温至室温并搅拌1小时。然后添加4-硝基苯酚(0.080mg，0.57mmol)和三乙胺(0.08ml，0.57mmol)。1小时后，将反应混合物用二氯甲烷(20ml)稀释，并且将所得混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(dd,j＝9.3,2.7hz,2h),7.44
–
7.31(m,4h),7.27
–
7.18(m,3h),4.28
–
4.12(m,1h),4.08(d,j＝11.4hz,1h),4.01(dd,j＝11.3,5.1hz,1h),3.87(t,j＝10.8hz,1h),3.20(d,j＝1.3hz,3h),1.44(dd,j＝7.1,3.1hz,3h),1.17(s,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.15(s),-3.21(s)。ms m/z＝453.06[m+1]。
[1625][1626]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-甲氧基-2-甲基丙酯。在室温处，向中间体4(81.3mg，0.245mmol)、中间体((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-甲氧基-2-甲基丙酯(111mg，0.245mmol)和氯化镁(23.4mg，0.245mmol)的混合物中添加乙腈(1.20ml)。将所得混合物升温至50℃，并使其搅拌5分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.107ml，0.613mmol)，并且将所得混合物在50℃处搅拌1小时。然后使反应混合物冷却至室温，并且添加浓盐酸水溶液(12m，0.286ml)。1.5小时后，将反应混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和乙酸乙酯(20ml)稀释。将各层分开并且将有机层用盐水(20ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由制备型hplc(gemini 5u c18 100
×
30mm柱，50％-100％乙腈/水梯度)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,0.7h),7.78(s,0.3h),7.36
–
7.12(m,5h),6.86
–
6.82(m,1h),6.75
–
6.71(m,1h),5.52
–
5.46(m,1h),4.65
–
4.30(m,4h),4.07
–
3.82(m,3h),3.19(s,0.9h),3.16(s,2.1h),1.29(d,j＝7.2hz,3h),1.16(s,1.8h),1.12(s,4.2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25(s),3.16(s)。lcms：ms m/z＝605.50[m+1]，tr＝1.35min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.54min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝4.82min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1627]
实施例165.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸4-甲氧基环己酯
[1628]
[1629]
4-甲氧基环己-1-醇。以与针对实施例204所述类似的方式由4-甲氧基环己酮(1000mg，7.80mmol)获得中间体。
[1630][1631]
丙氨酸4-甲氧基环己酯。以与针对中间体26所述类似的方式由4-甲氧基环己醇(700mg，5.38mmol)和cbz-l-丙氨酸(1000mg，4.48mmol)制备产物。
[1632][1633]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸4-甲氧基环己酯。以与针对中间体25所述类似的方式由丙氨酸4-甲氧基环己酯(540mg，2.68mmol)制备呈同分异构混合物形式的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.26
–
8.19(m,2h),7.44
–
7.30(m,4h),7.26
–
7.17(m,3h),4.92
–
4.69(m,1h),4.21
–
4.01(m,1h),3.87(m,1h),3.32(m,3h),3.31
–
3.18(m,1h),1.92(m,2h),1.83
–
1.53(m,4h),1.41(m,5h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.03,-3.12。ms m/z＝479[m+h]。
[1634][1635]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸4-甲氧基环己酯。以与针对实施例3所述类似的方式由((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸4-甲氧基环己酯(141mg，0.29mmol)和中间体4(65mg，0.20mmol)获得产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.85
–
7.71(m,1h),7.36
–
7.12(m,5h),6.84(m,1h),6.72(m,1h),5.52(m,1h),4.81
–
4.55(m,2h),4.55
–
4.28(m,3h),3.89(m,1h),3.29(m,4h),1.97
–
1.78(m,2h),1.81
–
1.47(m,4h),1.49
–
1.12(m,5h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.45,3.40,3.29,3.28,3.25,3.08,3.04。ms m/z＝631[m+h]。
[1636]
实施例166.环己烷羧酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯
[1637][1638]
环己烷羧酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯。将环己烷羧酸(256mg，2mmol)溶解于无水乙腈(6ml)中。一次性添加edci(422mg，2.2mmol)，并且将反应搅拌15分钟。一次性添加n-cbz-氨基乙醇(390mg，2mmol)，然后添加dmap(269mg，2.2mmol)。将反应搅拌16小时。将反应用etoac(30ml)稀释并用5％柠檬酸水溶液(15ml)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(15ml)洗涤，最后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-40％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.42
–
7.28(m,5h),5.11(s,2h),4.96(s,1h),4.15(t,j＝5.2hz,2h),3.47(q,j＝5.6hz,2h),2.29(m,1h),1.88(m,2h),1.75(m,2h),1.62(m,2h),1.42(m,2h),1.25(m,3h)。
[1639][1640]
环己烷羧酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将环己烷羧酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯(372mg，1.22mmol)溶解于无水thf(20ml)中。添加10％pd/c degussa型，并且将混合物在大气氢气下搅拌3小时。滤出催化剂并用无水thf(5ml)洗涤。将滤液减压浓缩，并且所得物质不经纯化即使用。将二氯磷酸苯酯(181μl，1.22mmol)溶解于无水dcm(10ml)中并在冰浴中在大气氮气下搅拌。将上述制备的物质用无水dcm(2ml)溶解并在5分钟内滴加到反应中。将反应搅拌1小时。将三乙胺(374μl，2.68mmol)滴加到反应混合物中。将反应搅拌1小时。将对硝基苯酚(136mg，0.976mmol)一次性添加到反应中。移除冰浴并且将反应混合物搅拌16小时。将反应用dcm(15ml)稀释并用水(2
×
20ml)洗涤。有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.29
–
8.17(m,2h),7.46
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.13(m,3h),4.19
–
4.06(m,2h),3.39(m,2h),2.24(m,1h),2.00
–
1.54(m,5h),1.54
–
1.11(m,5h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-1.51(s)。ms m/z＝449.0[m+1]；447.2[m-1]。
[1641][1642]
环己烷羧酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和环己烷羧酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯(81mg，0.18mmol)在无水thf(3ml)中混合。一次性添加氯化镁(57mg，0.6mmol)。将反应搅拌20分钟。添加dipea(52μl，0.3mmol)，并且将反应在50℃处搅拌16小时。将反应冷却至室温，用etoac(15ml)稀释，并用2％碳酸钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将所得油状物溶解于mecn(2ml)中并在冰浴中搅拌。将12m hcl(水溶液)(300μl)滴加到反应中，然后搅拌1小时。将反应用etoac(10ml)稀释。添加饱和碳酸氢钠水溶液，得到ph 8。收集有机层，用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-8％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.31(m,2h),7.25
–
7.11(m,3h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.51(m,1h),4.63(m,1h),4.48(m,1h),4.45
–
4.29(m,2h),3.98(m,2h),3.14(m,2h),2.24(m,1h),1.80(m,2h),1.74
–
1.49(m,3h),1.45
–
1.10(m,5h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ5.20(s),5.03(s)。ms m/z＝601.1[m+1]；599.1[m-1]。
[1643]
实施例167.(r)-2-(烯丙氧基)-3-(十八烷氧基)丙基(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)磷酸氢酯
[1644][1645]
(r)-1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-(十八烷氧基)丙-2-醇。将1-o-十八烷基-sn-甘油(3g，8.706mmol)溶解在吡啶(23ml)、dmf(5ml)和dcm(5ml)中。添加咪唑，将反应烧瓶在冰浴中冷却。经由加料漏斗以滴加方式添加tbscl(1.443g，0.01mol)在吡啶(23ml)中的溶液。完成添加后，将反应烧瓶在冰浴中继续静置。1小时25分钟后，移除冰浴并在室温处继续搅拌2小时50分钟。将反应在冰浴中冷却，并用水和饱和nahco3水溶液的1:1混合物淬灭。将混合物用水和饱和nahco3水溶液的1:4混合物进一步稀释，并且将所得混合物用己烷萃取。将合并的有机洗涤物用盐水洗涤并经na2so4干燥。通过过滤去除干燥剂后，浓缩滤液，并且通过硅胶柱色谱法(24g装载筒，120g combiflash hp gold柱，洗脱液斜坡为100％己烷至30％etoac/己烷)分离中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ3.79(p,j＝5.4hz,1h),
3.67
–
3.57(m,2h),3.48
–
3.37(m,4h),1.60
–
1.49(m,2h),1.34
–
1.19(m,30h),0.90
–
0.83(m,12h),0.05(s,6h)。
[1646][1647]
(r)-(2-(烯丙氧基)-3-(十八烷氧基)丙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷。将nah(60％w/w分散体于矿物油中)(0.439g，0.011mol)悬浮于thf(30ml)中。将反应烧瓶置于冰浴中，并且经由加料漏斗以逐滴方式将(r)-1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-(十八烷氧基)丙-2-醇(3.36g，7.323mmol)在thf(15ml)中的溶液添加到反应中。移除冷浴，并在30分钟后通过加料漏斗以逐滴方式添加烯丙基溴(1.267ml，0.015mol)在thf(4ml)中的溶液。将反应在室温处搅拌24小时。将反应在冰浴中冷却，并经由添加饱和nh4cl水溶液淬灭。将所得混合物用水和己烷稀释并分离各层。将水层用己烷萃取，并且将合并的有机物用盐水洗涤并经na2so4干燥。通过过滤去除干燥剂，并将滤液浓缩。通过硅胶柱色谱法(12g装载筒，120g combiflash hp gold柱，洗脱液斜坡为100％己烷至15％etoac/己烷)从残余物中分离中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.90(ddt,j＝17.3,10.4,5.6hz,1h),5.25(dq,j＝17.2,1.7hz,1h),5.13(dq,j＝10.4,1.4hz,1h),4.13(dt,j＝5.8,1.5hz,2h),3.70
–
3.58(m,2h),3.57
–
3.48(m,2h),3.47
–
3.36(m,3h),1.58
–
1.49(m,2h),1.34
–
1.19(s,30h),0.90
–
0.83(s,12h),0.04(s,6h)。
[1648][1649]
(s)-2-(烯丙氧基)-3-(十八烷氧基)丙-1-醇。将(r)-(2-(烯丙氧基)-3-(十八烷氧基)丙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(1.74g，3.49mmol)溶解于thf(20ml)中。在室温处添加tbaf在thf(10.46ml，10.46mmol)中的1m溶液，并使反应在室温处搅拌，直到通过tlc确定起始物质被消耗。将反应在冰浴中冷却，并经由添加饱和nh4cl水溶液淬灭。将混合物用dcm和水稀释并分离各层。将水相用dcm(3
×
)萃取，并且将合并的有机物用盐水洗涤并经na2so4干燥。通过真空过滤去除干燥剂，并将滤液浓缩。通过硅胶柱色谱法(12g装载筒，80g combiflash hp gold柱，洗脱液斜坡为100％己烷至30％etoac/己烷)从残余物中分离中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.91(ddt,j＝17.3,10.4,5.7hz,1h),5.27(dq,j＝17.2,1.6hz,1h),5.17(dq,j＝10.4,1.4hz,1h),4.19
–
4.04(m,2h),3.76
–
3.35(m,7h),1.54(p,j＝6.7hz,2h),1.23(brs,30h),0.86(t,j＝6.8hz,3h)。
基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯。将(7-((3as,4s,6r,6as)-6-(((((r)-2-(烯丙氧基)-3-(十八烷氧基)丙氧基)(2-氯苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)-6-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.1g，0.101mmol)溶解于thf(1.2ml)中。将所得溶液在冰浴中冷却，并且以逐滴方式添加1n naoh水溶液(0.121ml，0.003mol)。将反应在室温处搅拌55分钟，然后置于预热的45℃油浴中。1小时55分钟后，添加另外的thf(0.5ml)，然后添加更多的1n naoh水溶液(0.2ml，0.006mol)。2小时后，将反应冷却至室温并在5℃冷藏机中储存过夜。将反应放回预热的45℃油浴中。1小时后，将反应在冰浴中冷却，并经由添加2n hcl水溶液(0.2ml)淬灭。将所得混合物用水(10ml)和dcm(10ml)稀释。分离各层并用dcm(3
×
)萃取水层。将合并的有机物用盐水萃取，并经na2so4干燥。通过过滤去除干燥剂，并将滤液浓缩。通过硅胶柱色谱法(12g装载筒，25g combiflash hp gold柱，洗脱液斜坡为100％dcm至20％meoh/dcm，在10％meoh/dcm处暂停斜坡)从残余物中分离中间体。ms m/z＝878.43[m+1]
[1656][1657]
(r)-2-(烯丙氧基)-3-(十八烷氧基)丙基(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)磷酸氢酯。以与针对实施例96所述类似的方式制备产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.01(s,1h),7.35(d,j＝4.7hz,1h),7.05(d,j＝4.8hz,1h),5.90(ddt,j＝17.3,10.8,5.6hz,1h),5.56(d,j＝4.1hz,1h),5.27(dq,j＝17.3,1.7hz,1h),5.11(dq,j＝10.5,1.5hz,1h),4.51
–
4.47(m,2h),4.21(ddd,j＝29.1,11.0,5.6hz,2h),4.12(dq,j＝5.4,1.7hz,2h),3.95(dq,j＝13.6,5.4hz,2h),3.69(p,j＝5.1hz,1h),3.58
–
3.40(m,4h),1.54(p,j＝6.8hz,2h),1.38
–
1.23(m,30h),0.94
–
0.86(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-0.417(s)。ms m/z＝738.43[m+1]。
[1658]
实施例168.((s)-(((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2-氧代四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[1659][1660]
将实施例6(10mg，0.0167mmol)溶解于无水dmf(1ml)中。将n,n'-羰基二咪唑(13.5mg，0.084mmol)添加到反应中。添加dmap(2mg，0.0167mmol)，并将反应搅拌16小时。
[1661]
添加更多的n,n'-羰基二咪唑(7.5mg，0.045mmol)，并将反应搅拌3小时。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩为油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.88(s,1h),7.35(t,j＝7.8hz,2h),7.28
–
7.14(m,3h),6.75(d,j＝4.5hz,1h),6.64(d,j＝4.5hz,1h),6.03(s,2h),5.65(m,2h),5.49(dt,j＝6.7,1.9hz,1h),4.76(td,j＝8.9,4.3hz,1h),4.48
–
4.33(m,2h),4.18
–
3.94(m,2h),2.02
–
1.61(m,5h),1.58
–
1.27(m,8h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ2.63(s)。ms m/z＝627.0[m+1]；625.2[m-1]。
[1662]
实施例169.((4ar,6s,7s,7as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4a-氰基-7-羟基-2-氧代四氢-4h-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧杂环己膦-2-基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯
[1663][1664]
(双(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯。在-40℃处在氩气氛下向4-硝基苯酚(0.52g，3.74mmol)和二氯磷酸4-硝基苯酯(1.06g，4.14mmol)在二氯甲烷(15ml)中的溶液中添加三乙胺(0.61ml，4.38mmol)。使所得混合物升温至室温并搅拌0.5小时。然后添加l-丙氨酸2-乙基丁酯盐酸盐(0.85g，4.05mmol)和三乙胺(1.22ml，8.77mmol)。1小时后，将反应混合物用己烷(15ml)稀释并且将所得混合物过滤。将滤液通过硅胶柱(用20％-33％乙酸乙酯/己烷洗脱)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.25(d,j＝9.2hz,4h),7.2-7.4(m,4h),4.0-4.2(m,3h),1.48
–
1.58(m,1h),1.43(d,j＝7.2hz,3h),1.3-1.4(m,4h),0.87(t,j＝7.2hz,6h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3)δ-3.47(s)。
[1665][1666]
((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯。向中间体4(155mg，0.468mmol)、(双(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯(255mg，0.515mmol)和氯化镁(85mg，0.893mmol)在thf(2.0ml)中的混合物中添加n,n-二异丙基乙胺(200μl，0.115mmol)。将所得混合物在室温处搅拌16小时。将反应混合物用乙酸乙酯(5ml)稀释，用水洗涤，经mgso4干燥并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶柱(用30％-100％乙酸乙酯/己烷洗脱)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.9-8.19(m,3h),7.2-7.4(m,2h),6.66-6.73(m,2h),5.62(brs,1h),5.24
–
5.3(m,1h),5.0
–
5.1(m,1h),4.3-4.55(m,2h)。3.7
–
4.2(m,3h),2.0-2.1(2s,3h),1.75-1.78(2s,3h),1.2
–
1.55(m,8h),0.87(t j＝7.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3)δ1.92(s),1.66(s)。ms m/z＝688.2[m+h]。
[1667][1668]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯。在0℃处，向((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯(105mg，0.153mmol)在乙腈(1.2ml)和水(0.2ml)中的溶液中添加hcl(0.15ml，37％)。将反应混合物在室温处搅拌3小时。将反应混合物用固体nahco3(210mg)淬灭，搅拌1小时并浓缩。将残余物用乙酸乙酯处理，用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并在高真空下干燥，得到中间体。1h nmr(400mhz,cdcl3+5％cd3od)δ8.04-8.18(m,2h),7.74
–
7.76(m,1h),7.02
–
7.32(m,2h),6.60
–
6.65(m,2h),5.48(d,j＝3.6hz,1h),4.3-4.6(m,3h),3.8
–
4.1(m,3h),1.2-1.5(m,8h),0.7
–
0.9(m,6h)。
31
p nmr(162mhz,cdcl3+5％cd3od)δ2.39(s),2.33(s)。ms m/z＝648.1[m+h]。
[1669][1670]
((4ar,6s,7s,7as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4a-氰基-7-羟基-2-氧代四氢-4h-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧杂环己膦-2-基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯。将((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯(82mg，0.127mmol)和dmap(164mg，1.342mmol)在乙酸乙酯(10ml)中的混合物在55℃处搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩。将粗残余物通过硅胶柱(用50％-100％乙酸乙酯/己烷洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.75(s,1h),6.76(d,j＝4.8hz,1h)6.66(d,j＝4.8hz,1h),5.52(d,j＝1.2hz,1h),5.26(dd,j＝4.8,3.2hz,1h),4.68(d,j＝4.8hz,1h),4.48
–
4.59(m,2h),4.05
–
4.11(m,1h),4.0(d,j＝5.6hz,2h),1.4
–
1.47(m,1h),1.28
–
1.37(m,7h),0.83(t,j＝7.6hz,3h)。
31
p nmr(162mhz,cd3od)δ6.9(s)。ms m/z＝509.1[m+h]。
[1671]
实施例170.((4ar,6s,7s,7as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4a-氰基-7-羟基-2-氧代四氢-4h-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧杂环己膦-2-基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯
[1672][1673]
(r)-1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-(十八烷氧基)丙-2-醇。将1-o-十八烷
基-2-o-苄基-sn-甘油(869mg，2mmol)溶解于thf(50ml)中。将degussa型10％活性碳钯(50mg)的添加到反应溶液中，然后将其在大气氢气下搅拌2小时。通过硅藻土滤出催化剂。将滤液减压浓缩。将所得固体溶解于无水thf(20ml)中并在室温处搅拌。将咪唑(207mg，3mmol)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯物(275mg，1.8mmol)添加到反应中，然后将其搅拌4小时。添加更多的咪唑(207mg，3mmol)和tbs-cl(275mg，1.8mmol)，并将反应搅拌16小时。添加更多的咪唑(207mg，3mmol)和tbs-cl(140mg，0.9mmol)，并将反应搅拌3小时。
[1674]
将反应用etoac(40ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ3.80(p,j＝5.4hz,1h),3.70
–
3.58(m,2h),3.50
–
3.38(m,4h),1.56(q,j＝6.9hz,2h),1.25(m,30h),0.94
–
0.81(m,12h),0.07(s,6h)。
[1675][1676]
(r)-叔丁基(2-甲氧基-3-(十八烷氧基)丙氧基)二甲基硅烷。将氢化钠(60％于油中)(57ml，1.43mmol)悬浮于无水thf(5ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将(r)-1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-(十八烷氧基)丙-2-醇(437mg，0.95mmol)溶解于无水thf(5ml)中并逐滴添加到悬浮液中。将所得反应混合物搅拌30分钟。滴加碘甲烷(89μl，1.43mmol)。移除冰浴，并将反应搅拌2小时。
[1677]
将反应用etoac(20ml)稀释，并缓慢添加饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)。收集有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ3.72
–
3.60(m,2h),3.53(m,1h),3.49
–
3.31(m,7h),1.56(m,2h),1.25(m,30h),0.94
–
0.80(m,12h),0.06(s,6h)。
[1678][1679]
(s)-2-甲氧基-3-(十八烷氧基)丙-1-醇。将(r)-叔丁基(2-甲氧基-3-(十八烷氧基)丙氧基)二甲基硅烷(381mg，0.806mmol)溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加tbaf三水合物(381mg，1.21mmol)。将反应搅拌3小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ3.76-3.65(m,2h),3.54(m,2h),3.49
–
3.38(m,6h),1.57(m,2h),1.25(m,30h),0.88(t,j＝6.7hz,3h)。
7.45(s)。
[1686][1687]
((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基((r)-2-甲氧基-3-(十八烷氧基)丙基)磷酸氢酯。将(7-((3as,4s,6r,6as)-6-((((2-氯苯氧基)((r)-2-甲氧基-3-(十八烷氧基)丙氧基)磷酰基)氧基)甲基)-6-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)氨基甲酸叔丁酯(360mg，0.274mmol)溶解于乙腈(5ml)中。添加1n naoh(水溶液)(500μl)，并将反应搅拌18小时。添加1n naoh(水溶液)(500μl)，并将反应在30℃处搅拌6小时。添加更多的1n naoh(水溶液)(500μl)，并将反应在30℃处搅拌3小时，然后在室温处搅拌16小时。将反应用etoac(25ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液(3
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-30％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，并且然后将所得产物溶解于7ml 70％tfa的水溶液中，并在室温处搅拌。用hplc和lc-ms监测反应。5小时后，将反应在冰浴中冷却。缓慢添加1n naoh(水溶液)，得到ph为4。形成沉淀并通过过滤收集。将固体溶解于1m三乙基碳酸氢铵溶液和乙腈中。将粗残余物经由c18柱(20％-100％mecn，缓冲液a为0.1m三乙基碳酸氢铵)纯化。将具有期望产物的级分合并并冷冻干燥，得到呈三乙基铵盐形式的产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.87(s,1h),7.02(d,j＝4.6hz,1h),6.91(d,j＝4.6hz,1h),5.54(d,j＝5.3hz,1h),4.55(t,j＝5.4hz,1h),4.50(d,j＝5.4hz,1h),4.23
–
4.07(m,2h),3.97
–
3.82(m,2h),3.54
–
3.46(m,2h),3.46
–
3.36(m,6h),3.20(q,j＝7.3hz,4h),1.51(m,2h),1.36
–
1.20(m,36h),0.89(t,j＝6.7hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-0.38(s)。ms m/z＝712.2[m+1]；710.5[m-1]。
[1688]
实施例171.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环辛酯
[1689][1690]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸环辛酯。将cbz-l-ala(446mg，2mmol)溶解于无水mecn(15ml)中。一次性添加edci(422mg，2.2mmol)，并且将反应搅拌15分钟。添加环辛醇(291μl，2.2mmol)。然后一次性添加dmap(269mg，2.2mmol)。将反应搅拌16小时。
[1691]
将反应用etoac(30ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(10ml)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，最后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己
烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.41
–
7.28(m,5h),5.31(d,j＝7.5hz,1h),5.11(s,2h),4.97(td,j＝8.3,4.2hz,1h),4.32(t,j＝7.4hz,1h),1.88
–
1.43(m,14h),1.39(d,j＝7.1hz,3h)。
[1692][1693]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环辛酯。将((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸环辛酯(440mg，1.34mmol)溶解于无水thf(15ml)中。添加10％pd/c degussa型，并且将反应混合物在大气氢气下搅拌5小时。过滤催化剂并且滤液不经纯化直接使用。
[1694]
将二氯磷酸苯酯(219μl，1.47mmol)溶解于无水dcm(10ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将上述thf溶液滴加到反应中，然后搅拌20分钟。滴加三乙胺(448μl，3.2mmol)，然后搅拌30分钟。添加对硝基苯酚(168mg，1.21mmol)和三乙胺(224μl，1.61mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌14小时。
[1695]
将反应用etoac(30ml)稀释，并用0.2m碳酸钠溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.29
–
8.15(m,2h),7.37(m,4h),7.29
–
7.13(m,3h),4.94(m,1h),4.17
–
4.01(m,1h),3.89(m,1h),1.83
–
1.42(m,14h),1.38(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.97(s),-3.04(s)。ms m/z＝476.7[m+1]；475.1[m-1]。
[1696][1697]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环辛酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环辛酯(86mg，0.18mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(86mg，0.906mmol)，并将反应在50℃处搅拌10分钟。添加dipea(158μl，0.906mmol)，并将反应在50℃处搅拌2小时。添加更多的氯化镁(50mg)并搅拌2小时。将反应在35℃处搅拌16小时。
[1698]
将反应用etoac(20ml)稀释，并用5％柠檬酸溶液(10ml)洗涤，用0.2m碳酸钠水溶液(2
×
10ml)洗涤并用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌1小时。将反应用etoac(25ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无
水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，并且然后将所得产物溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.31(m,2h),7.26
–
7.10(m,3h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(m,2h),4.88(m,1h),4.62(m,1h),4.54
–
4.29(m,3h),3.92
–
3.76(m,1h),1.80
–
1.35(m,14h),1.24(d,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.29(s)。ms m/z＝629.0[m+1]；627.0[m-1]。
[1699]
(s)和(r)非对映体的分离。经由手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，sfc-30％乙醇等度)纯化产物，得到非对映体：
[1700][1701]
实施例172.第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.37
–
7.22(m,2h),7.20
–
7.09(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.57
–
5.44(m,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.54
–
4.41(m,2h),4.36(m,1h),3.83(m,1h),1.81
–
1.39(m,14h),1.24(d,j＝7.1,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.30(s)。
[1702]
实施例173.第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.33(m,2h),7.27
–
7.10(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.49
–
4.26(m,3h),3.85(dq,j＝9.7,7.0hz,1h),1.77
–
1.36(m,14h),1.24(d,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.29(s)。
[1703]
实施例174.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4,4-二氟环己酯
[1704][1705]
l-丙氨酸4,4-二氟环己酯。以与针对中间体26所述类似的方式由cbz-l-丙氨酸(1.1g，4.93mmol)和4,4-二氟环己醇(1.01g，7.39mmol)制备中间体。ms m/z＝208[m+h]。
[1706][1707]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4,4-二氟环己酯。以与针对中间体25所述类似的方式由l-丙氨酸4,4-二氟环己酯(673mg，3.25mmol)制备呈同分异构混合物形式的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.32
–
8.19(m,2h),7.43
–
7.31(m,4h),7.29
–
7.12
(m,3h),4.95(d,j＝7.7hz,1h),4.23
–
4.07(m,1h),3.94
–
3.77(m,1h),2.15
–
1.69(m,8h),1.41(ddd,j＝7.1,3.4,0.7hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.08,-3.16。
19
f nmr(377mhz，氯仿-d)δ-95.69(d,j＝239.1hz),-101.23(d,j＝236.5hz)。ms m/z＝485[m+h]。
[1708][1709]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4,4-二氟环己酯。以与针对实施例3所述类似的方式由((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4,4-二氟环己酯(158mg，0.33mmol)和中间体4(72mg，0.22mmol)获得产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.39
–
7.11(m,5h),6.84(m,1h),6.74(m,1h),5.49(m,1h),4.93-4.80(m,1h),4.62(m,1h),4.54
–
4.30(m,3h),4.00
–
3.81(m,1h),2.15
–
1.63(m,8h),1.27(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.26,3.24。
19
f nmr(377mhz，甲醇-d4)δ-96.36(d,j＝233.1hz),-102.62(d,j＝236.8hz)。ms m/z＝637[m+h]。
[1710]
通过sfc(ad-h 21
×
250mm柱，30％乙醇)分离混合物，得到非对映体：
[1711][1712]
实施例175。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.34
–
7.23(m,2h),7.20
–
7.11(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.87(m,1h,被溶剂峰掩埋),4.54
–
4.43(m,2h),4.36(dd,j＝10.9,5.3hz,1h),3.97
–
3.84(m,1h),2.10
–
1.68(m,8h),1.28(dd,j＝7.1,1.3hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.22。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-96.61(d,j＝235.4hz),-102.50(d,j＝235.6hz)。
[1713]
实施例176。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.42
–
7.27(m,2h),7.26
–
7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝4.9hz,1h),4.81(s,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.46(d,j＝5.7hz,1h),4.42(dd,j＝10.9,6.5hz,1h),4.34(dd,j＝10.9,5.5hz,1h),3.91(dq,j＝9.9,7.1hz,1h),2.15
–
1.69(m,8h),1.27(dd,j＝7.1,1.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.24。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-96.36(d,j＝236.3hz),-102.62(d,j＝237.6hz)。
[1714]
实施例177. 2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙基异丁基碳酸酯
[1715][1716]
(2-((异丁氧基羰基)氧基)乙基)氨基甲酸苄酯。将n-cbz-氨基乙醇(390mg，2mmol)溶解于无水thf(10ml)中并在大气氮气下搅拌。一次性添加吡啶(425μl，5mmol)。滴加氯甲酸异丁酯(285μl，2.2mmol)。将反应搅拌15分钟。将反应用etoac(30ml)稀释并用水(2
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.41
–
7.28(m,5h),5.11(m,3h),4.22(t,j＝5.2hz,2h),3.92(d,j＝6.7hz,2h),3.50(q,j＝5.5hz,2h),1.97(dp,j＝13.4,6.7hz,1h),0.95(d,j＝6.8hz,6h)。
[1717][1718]
异丁基(2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙基)碳酸酯。将(2-((异丁氧羰基)氧基)乙基)氨基甲酸苄酯(570mg，1.93mmol)溶解于无水thf(12ml)中。添加10％pd/c degussa型，并且将反应混合物在大气氢气下搅拌3小时。过滤催化剂并且滤液不经纯化直接使用。
[1719]
将二氯磷酸苯酯(344μl，2.32mmol)溶解于无水dcm(10ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将上述thf溶液滴加到反应中，然后搅拌50分钟。滴加三乙胺(350μl，2.51mmol)，然后搅拌30分钟。添加对硝基苯酚(242mg，1.74mmol)和三乙胺(350μl，2.51mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌14小时。
[1720]
将反应用etoac(30ml)稀释并用水(2
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.18(m,2h),7.45
–
7.30(m,4h),7.28
–
7.15(m,3h),4.22
–
4.15(m,2h),3.90(d,j＝6.7hz,2h),3.51(m,1h),3.41(m,2h),1.95(m,1h),0.94(d,j＝6.7hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-1.51(s)。ms m/z＝438.9[m+1]；437.0[m-1]。
[1721][1722]
2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,
4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙基异丁基碳酸酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和异丁基(2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙基)碳酸酯(73mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(86mg，0.906mmol)，并将反应在50℃处搅拌10分钟。添加dipea(158μl，0.906mmol)，并将反应在50℃处搅拌3小时。添加更多的氯化镁(100mg)并在50℃处搅拌16小时。
[1723]
将反应用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，并用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(6ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌1小时。将反应用etoac(25ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，并且然后将所得产物溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.38
–
7.09(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.51(m,1h),4.62(m,1h),4.54
–
4.26(m,3h),4.04(m,2h),3.85(m,2h),3.18(m,2h),1.88(m,1h),0.96
–
0.80(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ5.22(s),5.06(s)。ms m/z＝591.0[m+1]；588.9[m-1]。
[1724]
实施例178.顺式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯
[1725][1726]
顺式-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。向cbz-l-丙氨酸(1.80g，8.06mmol)、反式-4-三氟甲基环己醇(0.9g，5.35mmol)和ph3p(3.17g，12.10mmol)在thf(50ml)中的混合物中添加diad(2.38ml，12.10mmol)。将混合物在室温处搅拌15小时并真空浓缩。将获得的残余物通过硅胶色谱法(0至30％etoac的己烷溶液)纯化，得到cbz-l-丙氨酸环己基酯，将其溶解于thf(10ml)中，并且添加20％氢氧化钯/碳(250mg)。将所得混合物在h2下搅拌2小时并过滤。将滤液真空浓缩，在高真空下干燥，并用于下一反应(747mg，39％)。ms m/z＝240[m+h]。
[1727][1728]
顺式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。以与针对中间体25所述类似的方式由顺式-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯(747mg，3.13mmol)制备呈同分异构混合物形式的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.46
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.13(m,3h),5.05(m,1h),4.27
–
4.08(m,1h),3.90(m,1h),2.05(m,1h),1.95(m,2h),1.77(m,2h),1.56(m,4h),1.43(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.10。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-74.36(dd,j＝8.5,4.8hz)。ms m/z＝517[m+h]。
[1729][1730]
顺式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。以与针对实施例3所述类似的方式由顺式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯(117mg，0.23mmol)和中间体4(50mg，0.15mmol)获得产物。
[1731]
使用30％乙醇(ad-h4.6
×
100m柱)通过sfc分离产物，得到第一洗脱非对映体和第二洗脱非对映体。
[1732][1733]
实施例179。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.29(dd,j＝8.8,7.1hz,2h),7.24
–
7.12(m,3h),6.84(d,j＝4.6hz,1h),6.73(d,j＝4.6hz,1h),5.50(d,j＝5.1hz,1h),4.97(s,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.49(dd,j＝12.5,5.7hz,2h),4.36(dd,j＝11.0,5.3hz,1h),4.02
–
3.86(m,1h),2.17(m,1h),1.92(m,2h),1.71(m,2h),1.58(m,4h),1.31(d,j＝7.2,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.31。
19
f nmr(377mhz，甲醇-d4)δ-75.89(d,j＝8.6hz)。ms m/z＝669[m+1]。
[1734]
实施例180。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.39
–
7.27(m,2h),7.28
–
7.09(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.48(d,j＝5.2hz,1h),4.89(m,1h,被溶剂峰掩埋),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.46(d,j＝5.6hz,1h),4.42(dd,j＝10.9,6.4hz,1h),4.34(dd,j＝10.9,5.4hz,1h),3.94(dq,j＝9.8,7.1hz,1h),2.26
–
2.03(m,1h),1.96
–
1.79(m,2h),1.68(d,j＝10.0hz,2h),1.62
–
1.41(m,4h),1.29(d,j＝7.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.30。
19
f nmr(377mhz，甲醇-d4)δ-75.87(d,j＝8.6hz)。ms m/z＝669[m+1]。
[1735]
实施例181.十二烷酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯
[1736][1737]
十二烷酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯。将月桂酸(481mg，2.4mmol)与无水乙腈(10ml)混合。一次性添加edci(460mg，2.4mmol)，并且将反应搅拌15分钟。添加n-cbz-氨基乙醇(390mg，2mmol)。然后添加dmap(293mg，2.4mmol)，并将反应搅拌16小时。
[1738]
将反应用etoac(40ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.36(m,5h),5.11(s,2h),4.99(s,1h),4.15(t,j＝5.3hz,2h),3.47(q,j＝5.6hz,2h),2.32(m,2h),1.72
–
1.52(m,2h),1.40
–
1.16(m,16h),0.88(t,j＝6.6hz,3h)。ms m/z＝377.8[m+1]。
[1739][1740]
十二烷酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将十二烷酸2-(((苄氧基)羰基)氨基)乙酯(439mg，1.16mmol)溶解于无水thf(12ml)中。添加10％pd/c degussa型，并且将反应混合物在大气氢气下搅拌2小时。过滤催化剂并且滤液不经纯化直接使用。
[1741]
将二氯磷酸苯酯(190μl，1.28mmol)溶解于无水dcm(10ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将上述thf溶液滴加到反应中，然后搅拌30分钟。滴加三乙胺(194μl，1.39mmol)，然后搅拌30分钟。添加对硝基苯酚(145mg，1.04mmol)和三乙胺(194μl，1.39mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌16小时。
[1742]
将反应用etoac(30ml)稀释并用水(4
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-40％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.28
–
8.19(m,2h),7.45
–
7.30(m,4h),7.30
–
7.16(m,3h),4.15(dt,j＝10.1,4.8hz,2h),3.52(d,j＝5.4hz,1h),3.38(dt,j＝10.6,4.9hz,2h),2.29(m,2h),1.59(m,2h),1.27(m,16h),0.88(t,j＝6.7hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-1.51(s)。ms m/z＝520.9[m+1]；519.2[m-1]。
[1743][1744]
十二烷酸2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和十二烷酸2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)乙酯(86mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(86mg，0.906mmol)，并将反应在50℃处搅拌10分钟。添加dipea(158μl，0.906mmol)，并将反应在45℃处搅拌16小时。
[1745]
将反应用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，并用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(3ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌3小时。将反应用etoac(25ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)
4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸1-乙酰基哌啶-4-基酯
[1761][1762]
(叔丁氧基羰基)丙氨酸1-乙酰基哌啶-4-基酯。以与针对实施例117所述类似的方式制备该中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26(d,j＝7.3hz,1h),4.90(tt,j＝7.6,3.8hz,1h),4.03
–
3.97(m,1h),3.67
–
3.50(m,3h),3.41
–
3.31(m,3h),2.02
–
1.96(m,4h),1.77(d,j＝39.0hz,2h),1.61
–
1.40(m,1h),1.37(s,9h),1.24(d,j＝7.3hz,4h)。
[1763][1764]
丙氨酸1-乙酰基哌啶4-基酯盐酸盐。以与针对中间体13所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.57(s,3h),5.00(dt,j＝7.2,3.6hz,1h),4.11
–
3.99(m,1h),3.55(m,2h),3.38(dtd,j＝13.7,8.7,7.3,3.6hz,2h),1.99(s,3h),1.90
–
1.70(m,2h),1.65
–
1.45(m,2h),1.41(d,j＝7.2hz,3h)。
[1765][1766]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸1-乙酰基哌啶-4-基酯。以与针对中间体35所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.37
–
8.21(m,2h),7.54
–
7.32(m,4h),7.32
–
7.11(m,3h),6.69(ddd,j＝13.6,10.0,5.6hz,1h),4.83(dd,j＝8.0,4.0hz,1h),4.07
–
3.87(m,1h),3.69
–
3.37(m,2h),3.29(m,2h),1.95(s,3h),1.70(d,j＝36.7hz,2h),1.40(d,j＝31.8hz,2h),1.27
–
1.19(m,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.28,-1.42。ms m/z＝492.08[m+1]。
[1767][1768]
((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸1-乙酰基哌啶-4-基酯。在室温处向中间体4(50.0mg，0.151mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧
基)磷酰基)丙氨酸1-乙酰基哌啶-4-基酯(164mg，0.332mmol)和氯化镁(144mg，1.51mmol)的混合物中添加乙腈(8ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌10分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.26ml，1.51mmol)，并将所得混合物在50℃处搅拌4小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且将获得的残余物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，100％二氯甲烷-14％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.84(d,j＝16.8hz,3h),7.32(dt,j＝12.1,7.9hz,2h),7.24
–
7.04(m,3h),6.89
–
6.72(m,2h),6.24
–
6.06(m,1h),5.61(dd,j＝5.4,3.6hz,1h),5.27(dd,j＝6.6,3.8hz,1h),5.06(t,j＝6.9hz,1h),4.82(s,1h),4.37
–
4.17(m,1h),3.82(q,j＝9.4hz,1h),3.67
–
3.38(m,2h),3.29(s,3h),1.95(d,j＝2.6hz,3h),1.63(d,j＝3.1hz,5h),1.33(d,j＝3.5hz,4h),1.22(dt,j＝18.3,6.8hz,5h)。ms m/z＝684.18[m+1]。
[1769]
实施例185.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸1-乙酰基哌啶-4-基酯
[1770][1771]
在0℃处向实施例184(0.09g，0.132mmol)在乙腈(2ml)中的混合物中添加浓盐酸(0.1ml，2.743mmol)，并将反应混合物在室温处搅拌1小时。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用饱和碳酸氢钠溶液(1ml)稀释。将所得混合物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，5％-60％乙腈/水梯度，30分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.88-7.66(m,3h),7.45-7.02(m,5h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.77-6.66(m,1h),6.22-5.99(m,2h),5.56-5.44(m,1h),5.38(t,j＝5.4hz,1h),4.94-4.72(m,1h),4.53-4.39(m,1h),4.40-4.08(m,3h),3.94-3.73(m,1h),3.70-3.39(m,2h),1.95(q,j＝2.9,2.4hz,3h),1.70(d,j＝32.9hz,2h),1.55-1.31(m,2h),1.27-1.06(m,3h)。ms m/z＝644.15[m+1]。
[1772]
实施例186.反式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-苯基环己酯
[1773][1774]
(1r,4s)-l-丙氨酸4-苯基环己酯。以与针对中间体26所述类似的方式由cbz-l-丙氨酸(1000mg，4.48mmol)和反式-4-苯基环己醇(950mg，5.38mmol)制备中间体。ms m/z＝248[m+h]。
[1775][1776]
反式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-苯基环己酯。以与针对中间体25所述类似的方式由(1r,4s)-l-丙氨酸4-苯基环己酯(488mg，1.97mmol)制备呈同分异构混合物形式的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.23(m,2h),7.45
–
7.16(m,12h),4.87
–
4.71(m,1h),4.13(m,1h),3.95
–
3.82(m,1h),2.51(m,1h),2.05(m,2h),1.96(m,2h),1.68
–
1.46(m,4h),1.42(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.03,-3.06。ms m/z 525＝[m+h]。
[1777][1778]
反式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-苯基环己酯。以与针对实施例3所述类似的方式由((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸4-苯基环己酯(131mg，0.25mmol)和中间体4(55mg，0.17mmol)获得产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.39
–
7.06(m,10h),6.85(m,1h),6.74(m,1h),5.52(d,j＝4.9hz,1h),4.76
–
4.51(m,2h),4.51
–
4.33(m,3h),3.97
–
3.80(m,1h),2.57
–
2.38(m,1h),2.05
–
1.92(m,2h),1.91
–
1.74(m,2h),1.67
–
1.37(m,4h),1.27(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.32,3.25。ms m/z＝677[m+1]。
[1779]
实施例187.((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯基(3-(十六烷氧基)丙基)氨基磷酸酯
[1780][1781]
3-(十六烷氧基)丙-1-胺。将3-(十六烷氧基)丙-1-醇(300mg，1mmol)溶解于无水dmf(5ml)中并在大气氮气下搅拌。一次性添加二苯基磷酰基叠氮化物(259μl，1.2mmol)。添加dbu(179μl，1.2mmol)，并将反应搅拌16小时。
[1782]
将反应升温至90℃并搅拌2小时。将反应冷却至室温，用etoac(25ml)稀释并用盐水(2
×
10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩成油状物，然后将其溶解于thf(5ml)中。添加三苯基膦(220mg，0.833mmol)并搅拌20分钟。将水(1ml)和thf(1ml)添加到反应中，将该反应搅拌24小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio2combiflash hp gold柱，0-5％-10％甲醇/dcm，含0.1％tea)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中
间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ3.48(t,j＝6.2hz,2h),3.39(t,j＝6.7hz,2h),2.79(t,j＝6.7hz,2h),1.71(p,j＝6.5hz,2h),1.55(p,j＝6.8hz,2h),1.25(m,26h),0.88(t,j＝6.7hz,3h)。
[1783][1784]
4-硝基苯基苯基(3-(十六烷氧基)丙基)氨基磷酸酯。将二氯磷酸苯酯(104μl，0.698mmol)溶解于无水dcm(10ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将3-(十六烷氧基)丙-1-胺(190mg，0.634mmol)溶解于无水dcm(4ml)中并滴加到反应中。将反应搅拌10分钟。滴加三乙胺(106μl，0.761mmol)，然后搅拌1小时。添加对硝基苯酚(113mg，0.571mmol)和三乙胺(106μl，0.761mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌2小时。
[1785]
将反应用dcm(20ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(10ml)洗涤，然后用水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.17(m,2h),7.41(d,j＝8.9hz,2h),7.35(t,j＝7.8hz,2h),7.26
–
7.16(m,3h),3.73(m,1h),3.48(t,j＝5.6hz,2h),3.35(t,j＝6.7hz,2h),3.24(m,2h),1.75(m,2h),1.59
–
1.46(m,2h),1.25(m,26h),0.88(t,j＝6.7hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-1.12(s)。ms m/z＝577.1[m+1]；575.5[m-1]。
[1786][1787]
((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基苯基(3-(十六烷氧基)丙基)氨基磷酸酯。将中间体4(75mg，0.226mmol)和4-硝基苯基苯基(3-(十六烷氧基)丙基)氨基磷酸酯(131mg，0.226mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(108mg，1.13mmol)，并将反应搅拌10分钟。添加dipea(98μl，0.565mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。一次性添加更多的氯化镁(108mg，1.13mmol)，并将反应在50℃处搅拌7小时。
[1788]
将反应冷却至室温，用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，并用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌1小时。将反应用etoac(25ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残
余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(m,1h),7.31(m,2h),7.18(m,3h),6.85(m,1h),6.73(m,1h),5.51(m,1h),4.62(m,1h),4.49(m,1h),4.45
–
4.26(m,2h),3.56
–
3.42(m,1h),3.40
–
3.23(m,4h),3.07
–
2.90(m,2h),1.64(m,2h),1.48(m,2h),1.40
–
1.18(m,26h),0.89(t,j＝6.7hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ5.48(s),5.31(s)。ms m/z＝729.1[m+1]；726.8[m-1]。
[1789]
实施例188.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸辛酯
[1790][1791]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸辛酯。将boc-l-ala(567mg，3mmol)溶解于无水乙腈(15ml)中。添加1-辛醇(569μl，3.6mmol)。一次性添加edci(690mg，3.6mmol)，并且将反应搅拌15分钟。然后添加dmap(403mg，3.3mmol)，并将反应搅拌2小时。添加更多的1-辛醇(120μl)和edci(140mg)，并将反应搅拌2小时。将反应用etoac(40ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.04(bs,1h),4.30(m,1h),4.13(m,2h),1.64(m,2h),1.44(s,9h),1.39(d,j＝7.2hz,3h),1.27(m,10h),0.88(t,j＝6.8hz,3h)。
[1792][1793]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸辛酯。将(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸辛酯(674mg，2.24mmol)溶解于无水4m hcl的二噁烷溶液(15ml)中。将反应搅拌2小时。将反应减压浓缩。将所得固体溶解于dcm(20ml)中并减压浓缩。
[1794]
将二氯磷酸苯酯(366μl，2.46mmol)溶解于无水dcm(15ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将上述de-boc材料溶解于无水dcm(10ml)中并滴加到反应中。将反应搅拌30分钟。滴加三乙胺(750μl，5.4mmol)，然后搅拌60分钟。添加对硝基苯酚(280mg，2.02mmol)和三乙胺(375μl，2.69mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌16小时。
[1795]
将反应用etoac(40ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.48
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.12(m,3h),4.22
–
4.02
(m,3h),3.94
–
3.79(m,1h),1.60(m,2h),1.41(m,3h),1.35
–
1.16(m,10h),0.88(t,j＝6.6hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.07(s),-3.11(s)。ms m/z＝479.0[m+1]；477.2[m-1]。
[1796][1797]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸辛酯。将中间体4(50mg，0.151mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸辛酯(79mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(72mg，0.755mmol)，并将反应在50℃处搅拌10分钟。添加dipea(66μl，0.378mmol)，并将反应在50℃处搅拌3小时。添加更多的氯化镁(80mg)和dipea(66μl，0.378mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。
[1798]
将反应冷却至室温，用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，并用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌1小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(m,1h),7.38
–
7.07(m,5h),6.84(m,1h),6.72(m,1h),5.51(m,1h),4.62(m,1h),4.55
–
4.29(m,3h),4.13
–
3.82(m,3h),1.54(m,2h),1.35
–
1.15(m,13h),0.87(t,j＝6.8hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25(s)。ms m/z＝631.1[m+1]；629.1[m-1]。
[1799]
实施例189.(r)-((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯
[1800][1801]
(r)-(叔丁氧基羰基)丙氨酸2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯。以与针对实施例117所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.41
–
7.17(m,5h),4.65
–
4.49(m,2h),4.23(dd,j＝11.6,4.0hz,1h),4.02(ddd,j＝11.2,8.8,4.9hz,2h),3.77
–
3.61(m,1h),3.45(d,j＝5.3hz,2h),3.36(t,j＝6.5hz,2h),1.45(t,j＝6.7hz,2h),1.35(s,7h),1.21(s,27h),0.92
–
0.70(m,2h)。
[1802][1803]
1-((r)-2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙氧基)-1-氧代丙-2-氯化铵。以与针对中间体35所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.56(s,3h),7.44-7.15(m,5h),4.59(s,2h),4.37(dd,j＝11.6,3.8hz,1h),4.21-3.97(m,2h),3.76(dd,j＝5.6,3.8hz,1h),3.48(d,j＝5.3hz,2h),3.37(t,j＝6.5hz,2h),1.42(dd,j＝25.5,7.0hz,5h),1.21(s,28h),0.83(t,j＝6.7hz,3h)。
[1804][1805]
(r)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯。以与针对中间体35所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.35
–
8.14(m,2h),7.50
–
7.31(m,4h),7.31
–
7.12(m,8h),6.71(dt,j＝13.6,10.2hz,1h),4.55(d,j＝2.3hz,2h),4.18(dt,j＝11.6,4.3hz,1h),4.10
–
3.95(m,2h),3.66(t,j＝5.0hz,1h),3.42(d,j＝5.3hz,2h),1.42(t,j＝6.7hz,2h),1.20(d,j＝3.6hz,36h),0.92
–
0.75(m,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.28,-1.56。
[1806][1807]
(r)-((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯。在室温处向中间体4(50.0mg，0.151mmol)、(r)-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯(177mg，
0.226mmol)和氯化镁(100mg，1.056mmol)的混合物中添加乙腈(8ml)。将所得悬浮液升温至50℃，并使其搅拌10分钟。然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.184ml，1.056mmol)，并将所得混合物在50℃处搅拌3小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且将获得的残余物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio2combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.89(s,1h),7.47
–
7.06(m,8h),6.85
–
6.67(m,2h),6.26(s,2h),5.66(d,j＝3.3hz,1h),5.27(dt,j＝6.4,3.1hz,1h),5.08(d,j＝6.6hz,1h),4.60(dd,j＝6.7,2.0hz,2h),4.49
–
4.16(m,3h),4.15
–
3.87(m,1h),3.72(dd,j＝10.3,5.1hz,1h),3.49(t,j＝5.8hz,2h),3.45
–
3.32(m,2h),1.71(d,j＝2.4hz,3h),1.52(t,j＝6.6hz,2h),1.38(d,j＝3.7hz,3h),1.28(d,j＝2.1hz,33h),1.02
–
0.79(m,3h)。ms m/z＝976.31[m+1]。
[1808]
实施例190.(r)-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸2-(苄氧基)-3-(十八烷氧基)丙酯
[1809][1810]
在0℃处向实施例189(0.1g，0.226mmol)在乙腈(2ml)中的混合物中添加浓盐酸(0.1ml，2.743mmol)，并将反应混合物在室温处搅拌1小时。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用水稀释。用2n氢氧化钠中和溶液并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将获得的残余物通过sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，100％二氯甲烷-8％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.85(m,3h),7.44
–
7.04(m,10h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.72(dd,j＝4.5,2.9hz,1h),6.27
–
6.01(m,2h),5.60
–
5.20(m,2h),4.54(dd,j＝7.6,2.6hz,2h),4.45(t,j＝5.8hz,1h),4.36
–
4.07(m,4h),4.07
–
3.77(m,1h),3.74
–
3.61(m,1h),3.52
–
3.19(m,4h),1.53
–
1.36(m,2h),1.20(d,j＝3.3hz,33h),0.94
–
0.75(m,3h)。ms m/z＝936.08[m+1]。
[1811]
实施例191.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十二烷酯
[1812]
[1813]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸十二烷酯。将boc-l-ala(567mg，3mmol)溶解于无水乙腈(15ml)中。添加1-十二烷醇(818μl，3.6mmol)。一次性添加edci(690mg，3.6mmol)，并且将反应搅拌15分钟。然后添加dmap(403mg，3.3mmol)，并将反应搅拌2小时。将反应用etoac(40ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(24g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.04(m,1h),4.29(m,1h),4.19
–
4.04(m,2h),1.62(m,2h),1.44(s,9h),1.38(d,j＝7.2hz,3h),1.26(m,18h),0.88(t,j＝6.7hz,3h)。
[1814][1815]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十二烷酯。将(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸十二烷酯(600mg，1.67mmol)溶解于无水4m hcl的二噁烷溶液(10ml)中。将反应搅拌1小时。将反应减压浓缩。
[1816]
将二氯磷酸苯酯(275μl，1.85mmol)溶解于无水dcm(15ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将上述de-boc材料溶解于无水dcm(5ml)中并滴加到反应中。将反应搅拌30分钟。滴加三乙胺(560μl，4mmol)，然后搅拌60分钟。添加对硝基苯酚(210mg，1.51mmol)和三乙胺(281μl，2.01mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌2小时。
[1817]
将反应用dcm(40ml)稀释，并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio2combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.45
–
7.29(m,4h),7.28
–
7.15(m,3h),4.20
–
4.02(m,3h),3.88(m,1h),1.60(m,2h),1.41(m,3h),1.25(m,18h),0.88(t,j＝6.6hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.06(s),-3.11(s)。
[1818][1819]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十二烷酯。将中间体4(50mg，0.151mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十二烷酯(89mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(72mg，0.755mmol)，并将反应在50℃处搅拌20分钟。添加dipea(131μl，0.755mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。
[1820]
将反应冷却至室温，用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，并用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(250μl)。将反应搅拌1小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-3％-5％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，并且然后将所得产物溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(m,1h),7.40
–
7.10(m,5h),6.86(m,1h),6.74(m,1h),5.52(m,1h),4.63(m,1h),4.58
–
4.30(m,3h),4.15
–
3.82(m,3h),1.57(m,2h),1.28(m,21h),0.90(t,j＝6.8hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.26(s)。ms m/z＝687.1[m+1]；685.3[m-1]。
[1821]
实施例192.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸己酯
[1822][1823]
l-丙氨酸己酯盐酸盐。将l-丙氨酸(4.45g，50mmol)与1-己醇(30ml)混合。滴加tms-cl(19.1ml，150mmol)，并将反应在室温处搅拌16小时。
[1824]
添加更多的1-己醇(10ml)和tms-cl(5ml)。将反应混合物加热至80℃并搅拌20小时。
[1825]
将反应减压浓缩，在高真空下干燥，得到呈盐酸盐形式的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.77(s,3h),4.20(m,3h),1.71(m,5h),1.47
–
1.19(m,6h),1.01
–
0.78(m,3h)。
[1826][1827]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸己酯。将二氯磷酸苯酯(3.7ml，25mmol)溶解于无水dcm(50ml)中，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。一次性添加l-丙氨酸己酯盐酸盐(5.2g，25mmol)。将反应搅拌30分钟。滴加三乙胺(8.4ml，60mmol)，然后搅拌60分钟。添加对硝基苯酚(3.1g，22.5mmol)和三乙胺(4.2ml，30mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌16小时。将反应用dcm(100ml)稀释，并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(120g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.25(d,j＝9.1hz,2h),7.51
–
7.32(m,4h),7.32
–
7.15(m,3h),4.14(m,3h),3.93(m,1h),1.62(m,2h),1.44(m,3h),1.39
–
1.20(m,6h),0.99
–
0.82(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.03(s),-3.08(s)。
[1828][1829]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸己酯。将中间体4(50mg，0.151mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸己酯(75mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(72mg，0.755mmol)，并将反应搅拌5分钟。添加dipea(131μl，0.755mmol)，并将反应在50℃处搅拌36小时。
[1830]
将反应冷却至室温，用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，并用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(250μl)。将反应搅拌1小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-4％-10％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，然后溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(m,1h),7.42
–
7.09(m,5h),6.86(m,1h),6.74(m,1h),5.57
–
5.44(m,1h),4.64(m,1h),4.58
–
4.28(m,3h),4.17
–
3.81(m,3h),1.64
–
1.48(m,2h),1.38
–
1.19(m,9h),0.94
–
0.82(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.27(s)。ms m/z＝603.0[m+1]；600.8[m-1]。
[1831]
实施例193.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十八烷酯
[1832][1833]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸十八烷酯。将boc-l-ala(5.67g，30mmol)溶解于无水乙腈(50ml)中。一次性添加edci(6.9g，36mmol)，并且将反应搅拌20分钟。添加1-十八烷醇(9.74g，36mmol)。然后添加dmap(4g，33mmol)，并将反应搅拌2小时。添加更多的无水乙腈(30ml)，并将反应搅拌20小时。添加无水dmf(25ml)，并将反应搅拌2小时。将反应用etoac(100ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(2
×
20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(80g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.04(m,1h),4.39
–
4.21(m,1h),4.12(q,j＝6.4hz,2h),1.62(m,2h),1.44(s,9h),1.38(d,j＝7.1hz,3h),1.25(s,30h),0.87(t,j＝6.8hz,3h)。
[1834][1835]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十八烷酯。将(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸十八烷酯(663mg，1.5mmol)溶解于无水4m hcl的二噁烷溶液(15ml)中。将反应搅拌2小时。将反应减压浓缩，得到固体，将其与无水dcm(25ml)混合并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将二氯磷酸苯酯(223μl，1.5mmol)一次性添加到反应中。将反应搅拌15分钟。滴加三乙胺(500μl，3.6mmol)，然后搅拌2小时。添加对硝基苯酚(188mg，1.35mmol)和三乙胺(251μl，1.8mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌3小时。将反应用dcm(50ml)稀释，并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.23(m,2h),7.49
–
7.30(m,4h),7.30
–
7.12(m,3h),4.23
–
3.98(m,3h),3.88(m,1h),1.69
–
1.52(m,2h),1.41(m,3h),1.25(s,30h),0.88(t,j＝6.6hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.05(s),-3.09(s)。
[1836][1837]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十八烷酯。将中间体4(50mg，0.151mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十八烷酯(103mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(3ml)中。一次性添加氯化镁(72mg，0.755mmol)，并将反应搅拌10分钟。添加dipea(131μl，0.755mmol)，并将反应在50℃处搅拌6小时。
[1838]
将反应冷却至室温，用etoac(20ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(250μl)。将反应搅拌1.5小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-4％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.85
–
7.72(m,1h),7.40
–
7.08(m,5h),6.88
–
6.79(m,1h),6.79
–
6.66(m,1h),5.55
–
5.43(m,2h),4.61(m,1h),4.55
–
4.26(m,3h),4.14
–
3.79(m,3h),1.55(m,2h),1.27(m,33h),0.89(t,j＝6.7hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ
3.28(s)。ms m/z＝771.0[m+1]；768.5[m-1]。
[1839]
实施例194.反式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯
[1840][1841]
反式-d-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。通过用于中间体26的相同方法，由cbz-d-丙氨酸(990mg，4.03mmol)和反式-4-(三氟甲基)环己醇(1.0g，5.95mmol)制备中间体。ms m/z 240＝[m+h]。
[1842][1843]
反式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。以与针对中间体25所述类似的方式由反式-d-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯(0.95g，3.97mmol)制备呈同分异构混合物形式的中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.21(m,2h),7.48
–
7.29(m,4h),7.22(m,3h),4.67(m,1h),4.06(m,2h),2.01(m,5h),1.52
–
1.20(m,7h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.01,-3.06。
19
f nmr(377mhz，氯仿-d)δ-73.89(d,j＝7.9hz)。ms m/z＝517[m+h]。
[1844][1845]
反式-((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯。以与针对实施例3所述类似的方式由反式-((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸4-(三氟甲基)环己酯(117mg，0.23mmol)和中间体4(50mg，0.15mmol)获得产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(s,0.58h),7.78(s,0.42h),7.31(m,2h),7.23
–
7.12(m,3h),6.88
–
6.83(m,1h),6.76(d,j＝4.5hz,0.58h),6.72(d,j＝4.5hz,0.42h),5.50(m,1h),4.70
–
4.54(m,2h),4.52
–
4.42(m,2h),4.35(m,1h),3.86(m,1h),1.99(m,5h),1.50
–
1.27(m,4h),1.24(d,j＝7.1hz,1.26h),1.20(d,j＝7.0hz,1.74h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.48,3.00。
19
f nmr(377mhz，甲醇-d4)δ-75.39(m)。ms m/z＝669[m+1]。
[1846]
经由手性制备型hplc(chiralpak ia,150
×
4.6mm，庚烷70％异丙醇30％)分离产物，得到非对映体：
[1847][1848]
实施例195。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(s,1h),7.38
–
7.28(m,2h),7.28
–
7.12(m,3h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.76(d,j＝4.6hz,1h),5.51(d,j＝5.2hz,1h),4.62(m,2h),4.49(d,j＝5.6hz,1h),4.45(dd,j＝10.9,5.6hz,1h),4.38(dd,j＝10.8,5.7hz,1h),3.97
–
3.79(m,1h),2.18
–
1.82(m,6h),1.46
–
1.24(m,3h),1.20(dd,j＝7.2,1.2hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.48。
19
f nmr(377mhz，甲醇-d4)δ-75.42(d,j＝8.5hz)。
[1849]
实施例196。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.30(t,j＝7.8hz,2h),7.22
–
7.11(m,3h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.71(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.1hz,1h),4.60(dt,j＝10.8,5.7hz,2h),4.49
–
4.41(m,2h),4.31(dd,j＝10.8,5.1hz,1h),3.90
–
3.79(m,1h),2.00(td,j＝34.4,32.8,9.9hz,5h),1.50
–
1.16(m,7h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ2.97。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-75.42(d,j＝8.4hz)。
[1850]
实施例197.((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸3-(十六烷氧基)丙酯
[1851][1852]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸3-(十六烷氧基)丙酯。在0℃处，向3-(十六烷氧基)丙-1-醇(1.85g，6.156mmol)、(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(1.864g，9.85mmol)和三苯基膦(3.714g，14.16mmol)在四氢呋喃(20ml)中的混合物中添加偶氮二羧酸二异丙酯(2.67ml，2.74mmol)。将反应混合物在室温处搅拌2小时并减压浓缩。将粗残余物通过sio2柱色谱法(120g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱液)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.04(d,j＝5.1hz,1h),4.39-4.10(m,3h),3.46(t,j＝6.2hz,2h),3.38(t,j＝6.7hz,2h),1.90(p,j＝6.3hz,2h),1.60-1.49(m,2h),1.37(d,j＝7.2hz,3h),1.25(s,35h),0.92-0.83(m,3h)。
[1853][1854]
(s)-1-(3-(十六烷氧基)丙氧基)-1-氧代丙-2-氯化铵。以与针对中间体35所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.45(s,3h),4.32-3.85(m,3h),3.40(d,j＝6.3hz,2h),1.81(q,j＝6.3hz,2h),1.53-1.32(m,5h),1.22(s,26h),0.83(t,j＝6.4hz,
3h)。
[1855][1856]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3-(十六烷氧基)丙酯。以与针对中间体35所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ8.26(dd,j＝9.2,2.0hz,2h),7.52-7.34(m,4h),7.34-7.20(m,3h),4.76-4.57(m,1h),4.19-4.00(m,3h),3.38(dt,j＝28.0,6.4hz,4h),1.79(td,j＝6.3,1.2hz,2h),1.50(t,j＝6.6hz,2h),1.38-1.23(m,27h),0.95-0.81(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ-2.16,-2.27。ms m/z＝649.05[m+1]。
[1857][1858]
((((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸3-(十六烷氧基)丙酯。在室温处向中间体4(50.0mg，0.151mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3-(十六烷氧基)丙酯(187mg，0.288mmol)和氯化镁(71.84mg，0.755mmol)的混合物中添加四氢呋喃(2ml)，然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.131ml，0.755mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌3小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且将获得的残余物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio2combiflash hp gold柱，30％乙酸乙酯/己烷-100％乙酸乙酯作为洗脱液)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.89(s,1h),7.42-7.28(m,2h),7.28-7.11(m,3h),6.77(ddd,j＝14.5,4.5,2.8hz,2h),6.28(s,2h),5.67(t,j＝2.8hz,1h),5.29(dd,j＝6.6,3.4hz,1h),5.09(dd,j＝6.6,3.9hz,1h),4.48-4.20(m,3h),4.18-4.02(m,2h),3.93(td,j＝9.6,7.0hz,1h),3.37(dt,j＝21.0,6.3hz,4h),1.80(dt,j＝10.5,6.3hz,2h),1.71(d,j＝2.9hz,3h),1.50(t,j＝6.7hz,2h),1.38(d,j＝4.2hz,3h),1.28(s,26h),0.90(t,j＝6.6hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.4,-2.38。ms m/z＝842.07[m+1]。
[1859]
实施例198.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸3-(十六烷氧基)丙酯
[1860][1861]
在0℃处向实施例197(0.09g，0.107mmol)在乙腈(2ml)中的混合物中添加浓盐酸(0.1ml，2.743mmol)，并将反应混合物在室温处搅拌1小时。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却，并用水稀释。用2n氢氧化钠中和溶液并用二氯甲烷萃取。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将获得的残余物通过sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，100％二氯甲烷-10％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.87(m,3h),7.31(dt,j＝13.4,7.9hz,2h),7.23-7.08(m,3h),6.89(dd,j＝4.5,1.9hz,1h),6.73(dd,j＝4.5,2.2hz,1h),6.11(ddd,j＝13.3,9.9,3.5hz,1h),5.37(t,j＝5.7hz,2h),4.45(t,j＝5.7hz,1h),4.27(td,j＝11.4,5.6hz,2h),4.15(ddd,j＝19.3,10.9,4.9hz,1h),4.09-3.91(m,2h),3.86-3.72(m,1h),3.39-3.18(m,4h),1.70(dq,j＝12.7,6.3hz,2h),1.41(t,j＝6.6hz,2h),1.28-1.10(m,26h),0.90-0.69(m,3h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ3.30,-3.24。ms m/z＝801.78[m+1]。
[1862]
实施例199.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十六烷酯
[1863][1864]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸十六烷酯。将boc-l-ala(1.89g，10mmol)溶解于无水thf(50ml)中。添加1-十六醇(3.6g，15mmol)和三苯基膦(5.8g，22mmol)。滴加diad(3.9ml，20mmol)。将反应搅拌20小时。
[1865]
将反应用etoac(50ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)洗涤，然后用盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(80g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.11
–
4.83(m,1h),4.28(m,1h),4.19
–
4.03(m,2h),1.68
–
1.48(m,2h),1.42(s,9h),1.36(d,j＝7.2hz,3h),1.23(m,26h),0.86(t,j＝6.7hz,3h)。
[1866][1867]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十六烷酯。将(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸十六烷酯(3g，7.25mmol)溶解于无水4m hcl的二噁烷溶液(40ml)中。将反应搅拌16小时。将反应减压浓缩，得到固体，将其与无水dcm(40ml)混合并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将二氯磷酸苯酯(1.08ml，7.25mmol)一次性添加到反应中。将反应搅拌15分钟。滴加三乙胺(2.4ml，17.4mmol)，然后搅拌2小时。添加对硝基苯酚(908mg，6.53mmol)和三乙胺(1.21ml，8.7mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温处搅拌3小时。将反应用dcm(60ml)稀释，并用水(5
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.47
–
7.29(m,4h),7.29
–
7.09(m,3h),4.11(m,3h),3.87(m,1h),1.60(m,2h),1.41(m,3h),1.25(m,26h),0.87(t,j＝6.6hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.07(s),-3.11(s)。
[1868][1869]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十六烷酯。将中间体4(50mg，0.151mmol)和((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸十六烷酯(98mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(72mg，0.755mmol)，并将反应搅拌20分钟。添加dipea(131μl，0.755mmol)，并将反应在50℃处搅拌6小时。
[1870]
将反应冷却至室温，用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌2小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-10％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(m,1h),7.38
–
7.08(m,5h),6.84(m,1h),6.72(m,1h),5.51(m,1h),4.62(m,1h),4.56
–
4.28(m,3h),4.14
–
3.81(m,3h),1.55(m,2h),1.26(m,26h),0.95
–
0.81(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25(s)。ms m/z＝743.2[m+1]；741.0[m-1]。
nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.07(s,1h),7.39(d,j＝4.7hz,1h),7.03(d,j＝4.7hz,1h),5.54(d,j＝5.2hz,1h),4.54(t,j＝5.4hz,1h),4.43(d,j＝5.5hz,1h),4.36
–
4.18(m,2h),4.14
–
3.62(m,6h),1.50(m,1h),1.35(m,10h),1.00
–
0.83(m,15h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.57(s)。ms m/z＝668.0[m+1]；665.9[m-1]。
[1878]
实施例201.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(2,2,2-三氟乙氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[1879][1880]
((4-硝基苯氧基)(2,2,2-三氟乙氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯。将二氯磷酸4-硝基苯酯(256mg，1mmol)与无水dcm(10ml)混合，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加l-丙氨酸环己酯盐酸盐(208mg，1mmol)，并将反应搅拌15分钟。滴加三乙胺(334μl，2.4mmol)，并将反应搅拌1小时。一次性添加2,2,2-三氟乙醇(72μl，1mmol)。滴加三乙胺(167μl，1.2mmol)，并且将反应在室温处搅拌3小时。
[1881]
将反应用dcm(20ml)稀释，并用水(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio2combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.30
–
8.19(m,2h),7.45
–
7.33(m,2h),4.79(m,1h),4.52
–
4.27(m,2h),4.08
–
3.94(m,1h),3.88
–
3.71(m,1h),1.91
–
1.64(m,4h),1.55
–
1.22(m,9h)。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-75.56(t,j＝8.3hz)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ2.11(s),2.03(s)。ms m/z＝454.7[m+1]；453.1[m-1]。
[1882][1883]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(2,2,2-三氟乙氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯。将中间体4(50mg，0.151mmol)和((4-硝基苯氧基)(2,2,2-三氟乙氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯(75mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(72mg，0.755mmol)，并将反应搅拌15分钟。添加dipea(131μl，0.755mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。
[1884]
将反应冷却至室温，用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌2小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-10％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，然后溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产
物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(m,1h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.75(d,j＝4.5hz,1h),5.51(m,1h),4.76
–
4.59(m,2h),4.54
–
4.25(m,5h),3.80(m,1h),1.86
–
1.62(m,4h),1.57
–
1.26(m,9h)。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-77.28(t,j＝8.3hz),-77.25(t,j＝8.3hz)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ7.87(s),7.77(s)。ms m/z＝607.0[m+1]；605.0[m-1]。
[1885]
实施例202.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[1886][1887]
(双(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯。将二氯磷酸4-硝基苯酯(256mg，1mmol)与无水dcm(10ml)混合，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加l-丙氨酸环己酯盐酸盐(208mg，1mmol)，并将反应搅拌15分钟。滴加三乙胺(334μl，2.4mmol)，并且将反应搅拌2小时。一次性添加对硝基苯酚(125mg，0.9mmol)。滴加三乙胺(167μl，1.2mmol)，并且将反应在室温处搅拌3小时。
[1888]
将反应用dcm(20ml)稀释，并用水(4
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio2combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.30
–
8.19(m,4h),7.46
–
7.35(m,4h),4.76(m,1h),4.19
–
4.04(m,1h),3.99(m,1h),1.86
–
1.62(m,4h),1.54(m,2h),1.47
–
1.29(m,7h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.40(s)。
[1889][1890]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯。将中间体4(50mg，0.151mmol)和(双(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯(82mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(72mg，0.755mmol)，并将反应搅拌15分钟。添加dipea(131μl，0.755mmol)，并将反应在室温处搅拌5小时。
[1891]
将反应用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌2小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％-10％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于mecn(3ml)中并在冰浴中搅拌。添加1m三乙基碳酸氢铵溶液(3ml)，并将反应在室温处搅拌3小时。将反应用水(10ml)稀释并
用etoac(2
×
10ml)洗涤。用1n hcl(水溶液)中和水溶液，得到ph为5-6。然后将材料冷冻干燥，得到白色粉末。将粗残余物经由制备型hplc c18柱(phenominex gemini 4u150
×
30mm柱，5％-100％乙腈/水梯度，teab作为改性剂)纯化，得到呈三乙基铵盐形式的产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(s,1h),6.88
–
6.80(m,2h),5.52(d,j＝5.8hz,1h),4.69(td,j＝8.8,4.2hz,1h),4.57(t,j＝5.6hz,1h),4.48(d,j＝5.4hz,1h),4.12
–
3.98(m,2h),3.90
–
3.77(m,1h),3.06(m,6h),1.84
–
1.74(m,2h),1.74
–
1.63(m,2h),1.55
–
1.19(m,18h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ5.42(s)。ms m/z＝525.1[m+1]；523.3[m-1]。
[1892]
实施例203.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(萘-1-基氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[1893][1894]
((萘-1-基氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯。将二氯磷酸4-硝基苯酯(256mg，1mmol)与无水dcm(10ml)混合，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。一次性添加l-丙氨酸环己酯盐酸盐(208mg，1mmol)，并将反应搅拌20分钟。滴加三乙胺(334μl，2.4mmol)，并将反应搅拌1小时。一次性添加1-萘酚(72mg，0.9mmol)。滴加三乙胺(167μl，1.2mmol)，并且将反应在室温处搅拌3小时。
[1895]
将反应用dcm(20ml)稀释，并用水(2
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio2combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.15(m,2h),8.08
–
7.96(m,1h),7.92
–
7.80(m,1h),7.73
–
7.64(m,1h),7.55(m,3h),7.47
–
7.33(m,3h),4.81
–
4.64(m,1h),4.27
–
4.11(m,1h),4.06
–
3.88(m,1h),1.84
–
1.61(m,4h),1.54(m,2h),1.44
–
1.18(m,7h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.77(s),-2.81(s)。
[1896][1897]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(萘-1-基氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯。将中间体4(50mg，0.151mmol)和((萘-1-基氧基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯(83mg，0.166mmol)混合并溶解于无水thf(5ml)中。一次性添加氯化镁(72mg，0.755mmol)，并将反应搅拌15分钟。添加dipea(131μl，0.755mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。
[1898]
将反应冷却至室温，用etoac(20ml)稀释并用水(5
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，然后将其溶解于mecn(5ml)中。滴加12m hcl(水溶液)(300μl)。将反应搅拌2小时。将反应用etoac(20ml)稀释，并用饱和碳酸氢
钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-4％甲醇/dcm)纯化。将具有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.19
–
8.09(m,1h),7.91
–
7.82(m,1h),7.75(m,1h),7.72
–
7.64(m,1h),7.56
–
7.41(m,3h),7.35(m,1h),6.80(m,1h),6.68(m,1h),5.50(m,1h),4.68
–
4.36(m,5h),4.00
–
3.85(m,1h),1.79
–
1.56(m,4h),1.48-1.17(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.75(s),3.62(s)。ms m/z＝651.1[m+1]；649.0[m-1]。
[1899]
实施例204.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环庚-4-基酯
[1900][1901]
8-(2,2,2-三氟乙基)1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.6]十一烷。向1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.6]十一烷(4.73g，0.03mol)、二异丙基胺(6.25ml，0.036mol)在无水二氯甲烷(15ml)中的冰冷溶液中添加三氟甲磺酸2,2,2-三氟乙酯(4.74ml，0.033ml)。将所得反应混合物在室温处搅拌过夜，然后经由硅胶柱色谱法(80g柱，100％己烷至40％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ3.90(s,4h),3.12(q,j＝9.6hz,2h),2.88(dt,j＝25.5,5.5hz,4h),1.95-1.81(m,4h),1.69(p,j＝5.9hz,2h)。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-70.86(t,j＝9.7hz)。
[1902][1903]
1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环庚-4-酮。向8-(2,2,2-三氟乙基)1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.6]十一烷(5.197g，0.022mol)在四氢呋喃(21ml)中的溶液中添加3n盐酸(25ml)，并将反应混合物在室温处搅拌过夜。将反应混合物在冰浴中冷却至0℃，用水(10ml)稀释并用3n氢氧化钠水溶液中和。用乙酸乙酯进行萃取。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将获得的残余物经由硅胶柱色谱法(80g柱，100％己烷至70％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ3.16(q,j＝9.4hz,2h),3.00(dt,j＝13.6,5.5hz,4h),2.66-2.50(m,4h),1.87-1.75(m,2h)。
19
f nmr(376mhz，氯仿-d)δ-70.46(t,j＝9.3hz)。
[1904][1905]
1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环庚-4-醇。向1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环庚-4-酮(3.8g，0.195mol)在异丙醇(40ml)中的溶液中添加硼氢化钠(0.737g，0.155mol)，并将反应混合物在室温处搅拌3小时。将反应混合物用水(20ml)稀释并搅拌5分钟。用乙酸乙酯进行萃取。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将获得的残余物经由硅胶柱色谱法(80g柱，100％己烷至100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ4.39(d,j＝4.1hz,1h),3.65(tq,j＝8.1,4.0hz,1h),3.24(qd,j＝10.1,1.0hz,2h),2.86-2.73(m,3h),2.65(ddd,j＝13.8,9.0,2.9hz,1h),1.81-1.58(m,3h),1.56-1.33(m,3h)。
19
f nmr(377mhz,dmso-d6)δ-70.01(t,j＝10.2hz)。
[1906][1907]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环庚-4-基酯。以与针对中间体12所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.21(d,j＝7.2hz,1h),4.85(tt,j＝7.9,4.0hz,1h),3.91(p,j＝7.3hz,1h),3.36-3.17(m,2h),2.94-2.63(m,4h),1.92-1.58(m,5h),1.57-1.40(m,1h),1.35(s,9h),1.19(d,j＝7.3hz,3h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-70.06(td,j＝10.0,3.5hz)。
[1908][1909]
l-丙氨酸1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环庚-4-基酯二盐酸盐。以与针对中间体35所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ5.23(s,1h),4.16(dt,j＝15.0,8.1hz,2h),3.76-3.36(m,4h),2.42-1.77(m,6h),1.55(dd,j＝7.2,1.2hz,3h)。
[1910][1911]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环庚-4-基酯。以与针对中间体35所述类似的方式制备中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.30-8.16(m,2h),7.45-7.30(m,4h),7.29-7.16(m,3h),4.98(dt,j＝8.1,4.0hz,1h),4.22-4.03(m,1h),3.91(d,j＝11.2hz,1h),3.14(q,j＝9.4hz,2h),3.00-2.71(m,4h),2.05-1.67(m,6h),1.39(dt,j＝7.2,1.8hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-3.05。ms m/z＝546.12[m+1]。
[1912][1913]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环庚-4-基酯。在室温处向中间体4(0.06g，0.181mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环庚-4-基酯(0.119g，0.217mmol)和氯化镁(0.028g，0.29mmol)的混合物中添加四氢呋喃(1.5ml)，然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.079ml，0.453mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌3小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且将获得的残余物用饱和氯化钠溶液和二氯甲烷稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，15％-85％乙腈/水梯度，30分钟运行)纯化。将获得的纯物质溶解在无水乙腈(2ml)中，并在冰浴中冷却，接着滴加浓盐酸(0.1ml，1.2mmol)。将反应混合物在室温处搅拌1小时。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却并用饱和碳酸氢钠溶液(1ml)稀释。将所得混合物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr150
×
30mm柱，15％-85％乙腈/水梯度，30分钟运行)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.88(d,j＝4.4hz,1h),7.36(q,j＝8.5hz,2h),7.26-7.13(m,3h),6.75(d,j＝1.7hz,2h),6.26(s,2h),5.48(t,j＝4.6hz,1h),4.98-4.78(m,1h),4.58(s,1h),4.53-4.18(m,6h),3.90(dd,j＝16.8,9.5hz,2h),3.20(qd,j＝9.8,5.6hz,2h),2.98-2.64(m,2h),1.92-1.62(m,3h),1.53(s,1h),1.26(t,j＝7.7hz,3h)。
19
f nmr(376mhz，乙腈-d3)δ-72.20(td,j＝10.0,2.2hz)。ms m/z＝697.89[m+1]。
[1914]
实施例205.(2s,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-氰基-5-((((s)-(((s)-1-(环己氧基)-1-氧代丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)-4-羟基四氢呋喃-3-基异丁酸酯
[1915][1916]
将中间体实施例6(100mg，0.167mmol)、异丁酸(0.031ml，0.333mmol)和n,n-二异丙基碳二亚胺(0.052ml，0.333mmol)在dmf(2ml)中的混合物在室温处搅拌20分钟，并添加dmap(20.34mg，0.167mmol)。将所得混合物在室温处搅拌1小时并通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到呈浆液形式的区域异构体混合物(39mg，35％，1:3.69区域异构混合物)，然后将其通过sfc(30％乙醇，柱ad-h4.6
×
100mm)分离。
[1917]
第一洗脱区域异构体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.83(s,1h),7.31(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.26
–
7.13(m,3h),6.92(d,j＝4.5hz,1h),6.76(d,j＝4.6hz,1h),5.66
–
5.56(m,2h),4.78(d,j＝5.7hz,1h),4.63(dt,j＝8.7,4.6hz,1h),4.45(dd,j＝11.1,6.7hz,1h),4.37(dd,j＝11.1,5.7hz,1h),3.85(dq,j＝9.9,7.1hz,1h),2.68(p,j＝7.0hz,1h),1.79
–
1.59(m,4h),1.56
–
1.42(m,1h),1.42
–
1.17(m,14h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25。lcms：ms m/z＝671.18[m+1]；tr＝1.05min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.48min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1918]
实施例206.(2r,3s,4s,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-2-((((s)-(((s)-1-(环己氧基)-1-氧代丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)-4-羟基四氢呋喃-3-基异丁酸酯
[1919][1920]
实施例205的第二洗脱区域异构体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.84(s,1h),7.33(t,j＝7.9hz,2h),7.27
–
7.14(m,3h),6.89(d,j＝4.6hz,1h),6.77(d,j＝4.6hz,1h),5.52(d,j＝5.7hz,1h),5.48(d,j＝6.9hz,1h),4.91
–
4.85(m,1h),4.68(dq,j＝8.8,4.2hz,1h),4.40(qd,j＝10.9,5.9hz,2h),3.94
–
3.82(m,1h),2.76(p,j＝7.0hz,1h),1.72(dd,j＝31.4,10.5hz,4h),1.56
–
1.46(m,1h),1.46
–
1.17(m,14h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.16。
lcms：ms m/z＝671.18[m+1]；tr＝1.05min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.61min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1921]
实施例207.((r)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯
[1922][1923]
来自wo 2015/069939的实施例34的sp和rp非对映体的拆分。经由手性制备型sfc(chiralpak ad-h，30％乙醇等度)纯化产物，得到非对映异构体：
[1924]
来自wo 2015/069939的实施例34的第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.32
–
7.24(m,2h),7.19
–
7.10(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.72(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝5.0hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.54
–
4.43(m,2h),4.36(m,1h),4.07
–
3.84(m,3h),1.53
–
1.42(m,1h),1.38
–
1.24(m,7h),0.86(t,j＝7.5hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.26(s)。hplc：tr＝5.068min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1925]
第二洗脱非对映体：实施例25。hplc：tr＝5.080min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1926]
实施例208.
[1927][1928]
(((4-硝基苯氧基)磷酰基)双(氮烷二基))双(乙烷-2,1-二基)双(2,2-二甲基丙酸酯)。在0℃处在氩气氛下将三乙胺(2.28ml，16.4mmol)添加新戊酸2-(氯-λ5-氮烷基)乙酯(1.5g，7.8mmol)和二氯磷酸4-硝基苯酯(1.0g，3.9mmol)在二氯甲烷(23ml)中的溶液中。3.5小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到中间体。lcms：ms m/z＝474.09[m+1]，tr＝1.31min；lc系
统：thermo accela 1250uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.799min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。
[1929][1930]
在室温处将乙腈(1ml)添加到中间体4(70.0mg，0.211mmol)、(((4-硝基苯氧基)磷酰基)双(氮烷二基))双(乙烷-2,1-二基)双(2,2-二甲基丙酸酯)(100mg，0.211mmol)和氯化镁(20.0mg，0.211mmol)的混合物中。将混合物加热至50℃持续5分钟，并添加n,n-二异丙基乙胺(0.092ml，0.53mmol)。2小时后，使反应混合物冷却至室温，并滴加浓盐酸水溶液(0.25ml)。30分钟后，将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，0-100％乙腈/水梯度，0.01％tfa)纯化，得到实施例，得到呈tfa盐形式的产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.04(s,1h),7.35(d,j＝4.7hz,1h),7.00(d,j＝4.7hz,1h),5.54(d,j＝5.3hz,1h),4.54(t,j＝5.4hz,1h),4.39(d,j＝5.5hz,1h),4.28
–
4.16(m,2h),4.10
–
4.04(m,2h),4.03
–
3.94(m,2h),3.19
–
3.04(m,4h),1.20(s,9h),1.16(s,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ17.21(s)。lcms：ms m/z＝626.14[m+1]，tr＝1.12min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.73min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-5.0min 2-98％acn，5.0min-6.0min 98％acn，2ml/min。hplc：tr＝4.51min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1931]
实施例209.((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基双-2-乙基苯甲酸酯磷酸酯
100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.88min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1936]
实施例210.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-氨基环己基)甲酯
[1937][1938]
((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯。将cbz-l-丙氨酸(223mg，1.00mmol)溶解于无水mecn(10ml)中。将反式-1-(boc-氨基)-4-(羟甲基)环己烷(229mg，1.00mmol)和edci(230mg，1.2mmol)添加到反应中，然后将其搅拌25分钟。一次性添加dmap(122mg，1mmol)，并且将反应搅拌4小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释，并用5％柠檬酸水溶液(2
×
5ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-40％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.41
–
7.27(m,5h),5.29(d,j＝7.6hz,1h),5.11(s,2h),4.47
–
4.24(m,2h),3.96(d,j＝6.6hz,2h),3.37(bs,1h),2.03(m,2h),1.78(m,2h),1.58(m,2h),1.44(m,12h),1.10(m,4h)。
[1939][1940]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯。将((苄氧基)羰基)-l-丙氨酸((1r,4s)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)甲酯(348mg，0.800mmol)溶解于12ml无水四氢呋喃中。将degussa型10％碳载钯(25mg)添加到反应中，然后在大气氢气下搅拌3小时。滤出碳载钯，并且滤液不经进一步纯化即用于下一反应。将二氯磷酸苯酯(119μl，0.800mmol)溶解于15ml无水二氯甲烷中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。然后将上述滤液滴加到反应溶液中，然后搅拌30分钟。滴加三乙胺(120μl，0.88mmol)并搅拌1小时。一次性添加对硝基苯酚(100mg，0.72mmol)。滴加三乙胺(123μl，0.88mol)，并且将反应混合物在室温处搅拌2小时。然后将反应混合物用二氯甲烷(10ml)稀释并用水(3
×
10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-40％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期
fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝6.51min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1949]
实施例213.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸奎宁环-4-基甲酯
[1950][1951]
(((((苄氧基)羰基)-l-丙氨酰)氧基)甲基)奎宁环-1-鎓2,2,2-三氟乙酸盐。向奎宁环-4-甲醇(250mg，1.770mmol)、n-cbz-l-丙氨酸(474mg，2.123mmol)和edci(357mg，2,300mmol)在dmf(10ml)中的混合物中添加dmap(324mg，2.652mmol)，并且将反应混合物在室温处搅拌过夜，用水稀释，并通过制备型hplc(phenominex gemini 10u c18 250
×
21.2mm柱，5％-95％乙腈(0.1％tfa)/水(0.1％tfa)梯度，30分钟运行)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.58(s,1h),7.77(d,j＝7.3hz,1h),7.41
–
7.25(m,5h),5.02(s,2h),4.10(p,j＝7.3hz,1h),3.88(p,j＝12.3,11.7hz,2h),3.23(t,j＝8.1hz,6h),1.70
–
1.61(m,5h),1.59(s,1h),1.28(d,j＝7.3hz,3h)。lcms：ms m/z＝347.28[m+1-tfa]；tr＝0.63min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[1952][1953]
4-(((l-丙氨酰)氧基)甲基)奎宁环-1-鎓2,2,2-三氟乙酸盐。在室温处，向(((((苄氧基)羰基)-l-丙氨酰)氧基)甲基)奎宁环-1-鎓2,2,2-三氟乙酸盐(545mg，1.57mmol)在thf(10ml)中的溶液中添加pd(oh)2(700mg，0.997mmol)。将所得混合物在室温处搅拌1小时，过滤并真空浓缩。将获得的残余物与dcm共蒸发若干次，并且将所得中间体在高真空下干燥过夜并用于下一反应。lcms：ms m/z＝213.14[m+1-tfa]；tr＝0.13min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[1954][1955]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸奎宁环-4-基甲酯。将dcm(100ml)添加到4-(((l-丙氨酰)氧基)甲基)奎宁环-1-鎓2,2,2-三氟乙酸盐(399mg，1.223mmol)和三乙胺(0.169ml，1.223mmol)的混合物中，得到溶液，将其冷却至-78℃并快速添加二氯磷酸苯酯(0.183ml，1.223mmol)。在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.169ml，1.223mmol)的dcm(2ml)溶液。将所得混合物在相同温度处搅拌30分钟。然后一次性添加4-硝基苯酚(170mg，1.223mmol)。然后在-78℃处，在30分钟内添加三乙胺(0.169ml，1.223mmol)的dcm(2ml)溶液。然后将混合物在室温处搅拌2小时，用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(2％tea，含有0至10％甲醇的dcm溶液)纯化。将分离的具有期望产物的级分合并并真空浓缩，得到粗中间体，其用于下一反应而不经进一步纯化。lcms：ms m/z＝490.40[m+1]；tr＝0.86min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[1956][1957]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸奎宁环-4-基甲酯。向中间体4(50mg，0.151mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸奎宁环-4-基甲酯(111mg，0.226mmol，粗品)和mgcl2(22mg，0.226mmol)在thf(2ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.1ml，0.574mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，冷却，并通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到缩丙酮中间体(50mg，49％)，将其溶解于乙腈(1ml)中并添加浓hcl(0.05ml，0.51mmol)。将所得混合物在室温处搅拌2小时，用5n naoh中和，并通过制备型hplc(phenominex gemini 10u c18 250
×
21.2mm柱，20％-65％乙腈(0.1％tfa)/水(0.1％tfa)梯度，30分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.94(m,1h),7.40
–
7.12(m,6h),6.88(m,1h),5.52(m,1h),4.56(m,1h),4.49
–
4.32(m,3h),4.06
–
3.90(m,3h),3.41
–
3.29(m,6h),1.81(m,6h),1.33(d,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.33,3.08。lcms：ms m/z＝642.34[m+1-tfa]；tr＝0.64min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，
1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝3.28min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1958]
实施例214.((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基双环丙基甲基l-丙氨酸酯磷酸酯
[1959][1960]
4-硝基苯基-n,n'-环丙基甲基l-丙氨酸酯磷二酰胺。向l-丙氨酸环丙基甲酯hcl盐(146mg，0.6mmol)在dcm(3ml)中的溶液中一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(77mg，0.3mmol)。将所得混合物冷却至0℃，并且滴加三乙胺(121mg，1.2mmol)。在移除冰浴之后，将所得混合物搅拌30分钟，并搅拌过夜。然后将反应混合物用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到中间体。lcms：ms m/z＝470.03[m+1]，tr＝1.36min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.01min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1961][1962]
((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基双环丙基甲基l-丙氨酸酯磷酸酯。向4-硝基苯基-n,n'-环丙基甲基l-丙氨酸酯磷二酰胺4-硝基苯基-n,n'-环丙基甲基l-丙氨酸酯磷二酰胺(55mg，0.12mmol)、中间体4(35mg，0.11mmol)和mgcl2(15mg，0.16mmol)在thf(2ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(34mg，0.26mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，将反应混合物冷却，用etoac稀释，用水和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，然后将残余物溶解于乙腈(2ml)中，在冰浴中冷却，并浓缩。滴加hcl。将所得混合物在室温处搅拌2小时，在冰浴中冷却，通过滴加2n naoh和nahco3溶液中和，用etoac(150ml)稀释，用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将水相用etoac(50ml
×
2)萃取，并将合并的有机层在硫酸钠下干燥，真空浓
双(戊氧基)丁-2-氯化铵(1.0g，3.288mmol)溶解于dcm(20ml)中并冷却至-78℃。一次性添加二氯磷酸苯酯(0.48ml，3.228mmol)。然后在30分钟内添加三乙胺(1.1ml，7.22mmol)的dcm(2ml)溶液，并搅拌直至内部温度达到0℃。一次性添加对硝基苯酚(449mg，3.228mmol)并且在-78℃处在30分钟内添加三乙胺(0.508ml，3.228mmol)的dcm(2ml)溶液。在三乙胺完全添加后，将混合物在室温处搅拌15小时，用dcm稀释，用饱和nahco3溶液和水洗涤，用硫酸钠干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱色谱法(0至60％etoac的己烷溶液)纯化获得的残余物，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.22(m,2h),7.48
–
7.29(m,4h),7.25
–
7.14(m,3h),4.42
–
4.26(m,2h),4.11(m,2h),4.02(m,2h),2.97(m,1h),2.78
–
2.63(m,1h),1.57(m,4h),1.29(m,8h),0.98
–
0.79(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.60,-2.88。lcms：ms m/z＝551.21[m+1]；tr＝1.44min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[1968][1969]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-天冬氨酸二戊酯。向中间体4(50mg，0.151mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-天冬氨酸二戊酯(195mg，0.354mmol)和mgcl2(22mg，0.226mmol)在thf(2ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.1ml，0.574mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，冷却，用dcm稀释，用水和盐水洗涤，并用dcm萃取水层。将合并的有机层用硫酸钠干燥，并真空浓缩。将获得的残余物溶解于乙腈(2ml)中，并用浓hcl(0.1ml)处理，在室温处搅拌1小时，并在冰浴下添加nahco3水溶液(2ml)。将混合物通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-76％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.38
–
7.06(m,5h),6.90
–
6.77(m,1h),6.73(m,1h),5.51(m,1h),4.62(m,1h),4.52(m,1h),4.48
–
4.32(m,2h),4.24(m,1h),4.14
–
3.88(m,4h),2.84
–
2.57(m,2h),1.64
–
1.46(m,4h),1.38
–
1.08(m,8h),0.87(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.22,3.13。lcms：ms m/z＝703.28[m+1]；tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.76min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1970]
sp和rp非对映体的拆分。通过sfc(ad-h,5u,21
×
250mm，30％乙醇，55ml/min)分离非对映体，得到第一洗脱异构体和第二洗脱异构体：
[1971][1972]
实施例216。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.28(dd,j＝8.7,7.1hz,2h),7.21
–
7.11(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.72(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝5.1hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.58
–
4.48(m,2h),4.38(dd,j＝10.9,5.5hz,1h),4.23(dd,j＝11.5,5.8hz,1h),4.15
–
4.02(m,2h),3.99(td,j＝6.7,2.3hz,2h),2.70(d,j＝5.9hz,2h),1.58(dp,j＝9.3,6.9hz,4h),1.29(dq,j＝7.2,3.9,3.3hz,8h),0.88(dt,j＝8.5,6.9hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.18。lcms：ms m/z＝703.28[m+1]；tr＝1.23min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.77min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1973]
实施例217。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.32(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.26
–
7.14(m,3h),6.83(d,j＝4.5hz,1h),6.72(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.2hz,1h),4.61(t,j＝5.4hz,1h),4.45(d,j＝5.6hz,1h),4.38(qd,j＝10.9,5.8hz,2h),4.25(dt,j＝12.0,6.1hz,1h),4.04-3.94(m,4h),2.72(qd,j＝16.4,6.1hz,2h),1.54(pd,j＝6.8,3.4hz,4h),1.26(pd,j＝7.7,6.4,2.3hz,8h),0.86(td,j＝6.8,4.7hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.10。lcms：ms m/z＝703.35[m+1]；tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.75min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1974]
实施例218.
[1975][1976]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸丁酯。将boc-l-丙氨酸(380mg，2.0mmol)溶解于无水mecn(10ml)中。将1-丁醇(920μl，10.0mmol)和edci(460mg，2.4mmol)添加到反应中，然后将其搅拌15分钟。一次性添加dmap(240mg，2.0mmol)，并将反应搅拌14小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释反应，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到期望产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.04(m,1h),4.29(m,1h),4.18
–
4.07(m,2h),1.67
–
1.59(m,2h),1.44(s,9h),1.38(m,5h),0.93(t,j＝7.4hz,3h)。
[1977][1978]
2,2'-(((4-硝基苯氧基)磷酰基)双(氮烷二基))(2s,2's)-二丙酸二丁酯。将(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸丁酯(291mg，1.18mmol)溶解于7ml 4m hcl的二噁烷溶液中并搅拌1小时。将反应混合物减压浓缩，得到油状物，然后将其溶解于无水二氯甲烷(10ml)中并在大气氮气下在冰浴中搅拌。一次性添加二氯磷酸4-硝基苯酯(152mg，0.59mmol)，并将反应搅拌10分钟。将三乙胺(270μl，1.95mmol)溶解于1ml无水二氯甲烷中并滴加到反应溶液中。将反应混合物搅拌1小时。将三乙胺(270μl，1.95mmol)用700μl无水二氯甲烷溶解并滴加到反应中。将反应混合物在室温处搅拌16小时。将反应混合物用二氯甲烷(15ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.27
–
8.15(m,2h),7.43
–
7.34(m,2h),4.19
–
3.98(m,5h),3.80
–
3.61(m,1h),3.58(m,2h),1.67
–
1.59(m,4h),1.45
–
1.30(m,10h),0.93(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ7.93。lcms：ms m/z＝474.0[m+1]；472.1[m-1]，tr＝1.46min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝4.02min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[1979][1980]
将中间体4(50mg，0.15mmol)和2,2'-(((4-硝基苯氧基)磷酰基)双(氮烷二基))(2s,2's)-二丙酸二丁酯(71mg，0.15mmol)合并并溶解于1.5ml无水四氢呋喃中。一次性添加氯化镁(73mg，0.45mmol)。添加dipea(52μl，0.3mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。
[1981]
添加更多的氯化镁(73mg)和dipea(52μl)，并将反应在50℃处搅拌6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用水(5
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物溶解于mecn(5ml)中并在冰浴中搅拌。滴加浓hcl(12n水溶液，300μl)，然后在冰浴中搅拌1小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将材料溶解于mecn和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝4.9hz,1h),4.62(dd,j＝5.7,4.9hz,1h),4.50(d,j＝5.7hz,1h),4.31(dd,j＝11.1,7.0hz,1h),4.20(dd,j＝11.1,5.7hz,1h),4.16
–
3.95(m,4h),3.88(m,2h),1.66
–
1.52(m,4h),1.44
–
1.29(m,7h),1.26(m,3h),0.92(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.59。lcms：ms m/z＝626.2[m+1]；624.3[m-1]，tr＝1.20min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝2.85min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝4.752min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1982]
实施例219.
[1983][1984]
2,2'-(((4-硝基苯氧基)磷酰基)双(氮烷二基))(2s,2's)-二丙酸二苄酯。将二氯磷酸4-硝基苯酯(1.28g，5mmol)与10ml无水二氯甲烷混合，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。
添加l-丙氨酸苄酯盐酸盐(2.16g，10mmol)在无水二氯甲烷(10ml)中的溶液，然后添加三乙胺(1.74ml，12.5mmol)。将所得混合物滴加到反应混合物中。将反应混合物搅拌10分钟。将三乙胺(1.5ml)溶解于10ml无水二氯甲烷中并滴加到反应溶液中。将反应混合物搅拌3小时，并且用二氯甲烷(15ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.20
–
8.05(m,2h),7.41
–
7.19(m,12h),5.14(s,4h),4.18
–
4.00(m,2h),3.54(m,2h),1.39(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ7.69。lcms：ms m/z＝542.0[m+1]；540.0[m-1]，tr＝1.44min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝4.00min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[1985][1986]
将中间体4(50mg，0.15mmol)和2,2'-(((4-硝基苯氧基)磷酰基)双(氮烷二基))(2s,2's)-二丙酸二苄酯(97mg，0.18mmol)混合并溶解于1.5ml无水四氢呋喃中。一次性添加氯化镁(43mg，0.45mmol)。添加dipea(52μl，0.30mmol)，并将反应在50℃处搅拌16小时。
[1987]
添加更多的dipea(52μl)，并将反应在60℃处搅拌6小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用水(5
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将所得物质溶解于5ml的mecn中并在冰浴中搅拌。滴加浓hcl(水溶液)(200μl)，然后在冰浴中搅拌3小时。将反应用乙酸乙酯(10ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将材料溶解于mecn和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.37
–
7.21(m,10h),6.83(d,j＝4.5hz,1h),6.74(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝4.9hz,1h),5.15
–
4.96(m,4h),4.61(dd,j＝5.7,4.9hz,1h),4.48(d,j＝5.7hz,1h),4.29(dd,j＝11.1,7.1hz,1h),4.17(dd,j＝11.1,5.7hz,1h),4.00
–
3.84(m,2h),1.28(m,3h),1.24
–
1.20(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.47。lcms：ms m/z＝694.4[m+1]；692.2[m-1]，tr＝1.22min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝2.90min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：
phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝4.824min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1988]
实施例220.
[1989][1990]
双(2-乙基丁基)2,2'-(((4-硝基苯氧基)磷酰基)双(氮烷二基))(2s,2's)-二丁酸酯。将二氯磷酸4-硝基苯酯(572mg，2.23mmol)与10ml无水二氯甲烷混合，并在大气氮气下在冰浴中搅拌。将(s)-2-氨基丁酸2-乙基丁酯(837mg，4.47mmol)溶解于无水二氯甲烷(5ml)中并滴加到反应中。将反应搅拌10分钟。将三乙胺(778μl，5.58mmol)用3ml无水二氯甲烷溶解并滴加到反应溶液中。将反应混合物搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20ml)稀释并用水(2
×
20ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.23
–
8.16(m,2h),7.42
–
7.34(m,2h),4.09
–
3.89(m,6h),3.52(t,j＝10.1hz,2h),1.81(m,2h),1.71(m,2h),1.56
–
1.45(m,2h),1.40
–
1.28(m,8h),0.97
–
0.82(m,18h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ8.75。lcms：ms m/z＝558.1[m+1]；556.1[m-1]，tr＝1.69min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝4.85min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[1991][1992]
将中间体4(50mg，0.15mmol)和双(2-乙基丁基)2,2'-(((4-硝基苯氧基)磷酰基)双(氮烷二基))(2s,2's)-二丁酸酯(109mg，0.195mmol)混合并溶解于1.5ml无水四氢呋喃中。一次性添加氯化镁(43mg，0.45mmol)。添加dipea(131μl，0.75mmol)，并将反应在60℃处搅拌4小时。
[1993]
将反应混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用碳酸钠水溶液(3
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将所得物质溶解于5ml的mecn中并在冰浴中搅拌。滴加浓hcl(水溶液)(200μl)，并将反应混合物在冰浴中搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，然后将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝4.7hz,1h),4.62(dd,j＝5.7,4.7hz,1h),4.50(d,j＝5.8hz,1h),4.33(dd,j＝11.1,7.0hz,1h),4.22(dd,j＝11.1,6.1hz,1h),4.12
–
3.97(m,3h),3.92(m,1h),3.78(m,2h),3.30(m,1h),1.83
–
1.41(m,6h),1.41
–
1.27(m,8h),0.95
–
0.79(m,18h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ14.07。lcms：ms m/z＝710.3[m+1]；708.4[m-1]，tr＝1.46min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.51min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝5.980min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1994]
实施例221.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯
[1995][1996]
((((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯。在室温处向二氯磷酸4-硝基苯酯(1.467g，5.732mmol)在dcm(30ml)中的溶液中一次性添加l-丙氨酸甲酯(800mg，5.732mmol)。在3分钟内向所得混合物中滴加三乙胺(1.6ml，11.464mmol)。将所得混合物在室温处搅拌30分钟，并且一次性添加(s)-1-(2-乙基丁氧基)-1-氧代丙-2-氯化铵(1.202g，5.732mmol)，然后在3分钟内添加三乙胺(1.6ml，11.464mmol)。将所得混合物在室温处搅拌30分钟，用etoac稀释，用盐水稀释，真空浓缩，并且所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至60％etoac的己烷溶液持续45分钟，然后etoac 100％持续15分钟)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.21(m,2h),7.41
–
7.32(m,2h),4.17
–
3.97(m,4h),3.72(s,3h),3.58(m,2h),1.57
–
1.46(m,1h),1.41(m 6h),1.34(m,4h),0.88(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ7.88。lcms m/z＝460.06(m+h)，tr＝1.19min；lc系
统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[1997][1998]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯。向中间体4(63mg，0.190mmol)、((((s)-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2-乙基丁酯(210mg，0.456mmol)和mgcl2(27mg，0.285mmol)在thf(2ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.126ml，0723mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌1小时，冷却，真空浓缩，与dcm共蒸发若干次，溶解于乙腈(4ml)并添加浓hcl(0.4ml)。将所得混合物在室温处搅拌30分钟，并在冰浴下添加nahco3(3ml)。将混合物通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-76％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(s,1h),6.85(m,1h),6.77(m,1h),5.51(m,1h),4.67
–
4.60(m,1h),4.51(m,1h),4.31(m,1h),4.21(m,1h),4.11
–
3.80(m,4h),3.68(s,1.27h),3.63(s,1.73h),1.48(m,1h),1.41
–
1.21(m,10h),0.87(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.58。lcms：ms m/z＝612.29[m+1]；tr＝0.90min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝4.49min(35％)，4.52min(64％)；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[1999]
sp和rp非对映体的拆分。通过sfc(ia,5u,21
×
250mm，20％乙醇)分离产物，得到非对映体：
[2000][2001]
实施例222。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.85(d,j＝4.6hz,1h),6.77(d,j＝4.6hz,1h),5.50(d,j＝4.9hz,1h),4.63(t,j＝5.3hz,1h),4.50(d,j＝5.7hz,1h),4.30(dd,j＝11.1,6.9hz,1h),4.20(dd,j＝11.1,5.7hz,1h),4.07(dd,j＝10.9,5.8hz,1h),3.98(dd,j＝10.9,5.7hz,1h),3.88(ddq,j＝23.9,9.5,7.1hz,2h),3.63(s,3h),1.50(h,j＝6.1hz,1h),1.42
–
1.29(m,7h),1.28
–
1.23(m,3h),0.89(t,j＝
7.5hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.57。lcms：ms m/z＝612.25[m+1]；tr＝0.88min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝4.46min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2002]
实施例223。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.85(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.6hz,1h),5.50(d,j＝4.9hz,1h),4.68
–
4.58(m,1h),4.50(d,j＝5.7hz,1h),4.31(dd,j＝11.1,7.0hz,1h),4.20(dd,j＝11.1,5.7hz,1h),4.03(dd,j＝10.9,5.7hz,1h),3.97
–
3.81(m,3h),3.68(s,3h),1.55
–
1.39(m,j＝6.3hz,1h),1.38
–
1.28(m,7h),1.26(d,j＝7.2hz,3h),0.87(t,j＝7.5hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ13.58。lcms：ms m/z＝612.29[m+1]；tr＝0.89min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝4.45min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2003]
实施例224. 2-(((4ar,6s,7s,7as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4a-氰基-7-羟基-2-氧代四氢-4h-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧杂环己膦-2-基)氧基)苯甲酸乙酯
[2004][2005]
向实施例209(10mg，0.015mmol)在thf(1ml)中的溶液中滴加dbu(6mg，0.037mmol)。将所得混合物在室温处搅拌2小时，然后将反应混合物用etoac稀释，用nh4cl和盐水洗涤，将有机溶剂在真空下蒸发，然后将残余物通过制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.06
–
7.93(m,1h),7.78(s,1h),7.69
–
7.54(m,2h),7.38(td,j＝8.2,7.7,1.7hz,1h),6.85(q,j＝4.6hz,2h),5.74(s,1h),5.68(dd,j＝5.2,2.5hz,1h),5.00
–
4.89(m,1h),4.78(d,j＝5.2hz,2h),4.43
–
4.29(m,2h),1.38(t,j＝7.1hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-13.44。lcms：ms m/z＝502.08[m+1]，tr＝1.14min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.66min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，
8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2006]
实施例225.((s)-(((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2-乙氧基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[2007][2008]
将实施例6(31mg，0.052mmol)溶解于dmf(3ml)中，在室温处在氩气下添加对甲苯磺酸(18mg，0.1mmol)和原酸酯(384mg，2.6mmol)。将溶液搅拌40分钟，用acoet(50ml)稀释，用盐水(4
×
20ml)、饱和nahco3水溶液(20ml)洗涤，并且将溶剂在真空下蒸发。将残余物用制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(s,1h),7.34(t,j＝7.8hz,2h),7.27
–
7.14(m,3h),6.85(d,j＝4.6hz,1h),6.77(d,j＝4.6hz,1h),6.12(s,1h),5.83(d,j＝5.2hz,1h),5.44(dd,j＝7.2,5.2hz,1h),5.04(d,j＝7.2hz,1h),4.70(dt,j＝8.9,4.7hz,1h),4.42(dd,j＝10.4,6.4hz,1h),4.31(dd,j＝10.4,5.3hz,1h),3.97
–
3.82(m,2h),3.80
–
3.67(m,1h),1.77(d,j＝6.7hz,2h),1.69(d,j＝10.0hz,2h),1.55
–
1.38(m,3h),1.38
–
1.25(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.66。lcms：ms m/z＝6.57.11[m+1]，tr＝1.41min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.33min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2009]
实施例226.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)((2-(2-乙基丁氧基)-2-氧代乙基)氨基)磷酰基)甘氨酸2-乙基丁酯
[2010][2011]
2-(2-乙基丁氧基)-2-氧代乙-1-氯化铵。在室温处向甘氨酸(4.2g，55.95mmol)和2-乙基丁醇(60ml，489.15mmol)的混合物中添加tmscl(19.08ml，173.45mmol)。将所得混合物在70℃处搅拌15小时，在60℃处真空浓缩，并与甲苯共蒸发若干次(33ml
×
3)。将所得浆液悬浮于己烷(70ml)中，在室温处搅拌15小时，并通过过滤收集沉淀的固体。将固体在高真空下在30℃处干燥2天，得到中间体，并用于下一反应。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.59(d,j＝6.1hz,3h),4.09(d,j＝5.9hz,2h),3.99(q,j＝5.8hz,2h),1.51(h,j＝6.2hz,1h),1.33(p,j＝7.3hz,4h),0.86(t,j＝7.4hz,6h)。lcms：ms m/z＝159.87[m+1-hcl]；tr＝0.61min；
lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[2012][2013]
(((2-(2-乙基丁氧基)-2-氧代乙基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)甘氨酸2-乙基丁酯。向二氯磷酸4-硝基苯酯(1.700g，6.641mmol)在dcm(20ml)中的溶液中一次性添加2-(2-乙基丁氧基)-2-氧代乙-1-氯化铵(2.60g，13.28mmol)。在室温处在3分钟内向所得混合物中滴加三甲胺(2.76ml，19.92mmol)。将所得混合物在室温处搅拌30分钟，用dcm稀释，用盐水洗涤，真空浓缩，并将所得残余物通过硅胶柱色谱法(0至60％etoac的己烷溶液)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.21(d,j＝9.0hz,2h),7.39(d,j＝8.9hz,2h),4.08(d,j＝5.9hz,4h),3.82(dd,j＝11.0,6.0hz,4h),3.56(s,2h),1.52(p,j＝6.2hz,2h),1.41
–
1.26(m,8h),0.88(t,j＝7.4hz,12h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ10.05。lcms：ms m/z＝502.16[m+1]；tr＝1.36min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[2014][2015]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)((2-(2-乙基丁氧基)-2-氧代乙基)氨基)磷酰基)甘氨酸2-乙基丁酯。向中间体4(63mg，0.190mmol)、(((2-(2-乙基丁氧基)-2-氧代乙基)氨基)(4-硝基苯氧基)磷酰基)甘氨酸2-乙基丁酯(229mg，0.456mmol)和mgcl2(27mg，0.285mmol)在thf(2ml)中的混合物中滴加n,n-二异丙基乙胺(0.126ml，0723mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌2小时，冷却，并通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化。将获得的中间体溶解于乙腈(2ml)并添加浓hcl(0.1ml)。将所得混合物在室温处搅拌30分钟，并在冰浴下添加nahco3水溶液(3ml)。将混合物通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，0％-76％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.82(s,1h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.5hz,1h),5.51(d,j＝5.1hz,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.46
(d,j＝5.6hz,1h),4.35(dd,j＝11.0,6.6hz,1h),4.25(dd,j＝11.0,6.0hz,1h),4.05
–
3.99(m,4h),3.72
–
3.62(m,4h),1.47(ddt,j＝16.1,12.2,6.2hz,2h),1.39
–
1.25(m,8h),0.87(td,j＝7.4,5.8hz,12h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ16.10。lcms：ms m/z＝654.50[m+1]；tr＝1.10min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.29min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2016]
实施例227.实施例30的sp和rp非对映体的拆分
[2017][2018]
通过chiralpack(if,50u,150
×
4.6mm，庚烷70％，异丙醇30％)分离实施例30(14.34mg，0.021mmol)，得到非对映体。
[2019]
实施例227。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.90(s,1h),6.82
–
6.66(m,2h),6.12(s,2h),5.48(d,j＝4.5hz,1h),4.70(td,j＝8.7,4.0hz,1h),4.58(t,j＝5.1hz,1h),4.49(d,j＝5.7hz,1h),4.26(dd,j＝11.3,8.0hz,1h),4.15(dd,j＝11.4,7.9hz,1h),4.08(dd,j＝10.9,5.7hz,1h),3.99(dd,j＝10.9,5.6hz,1h),3.89(s,1h),3.78(s,4h),1.87
–
1.75(m,2h),1.75
–
1.65(m,2h),1.53(m,2h),1.37(m,6h),1.28(m,9h),0.90(t,j＝7.5hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ12.54。lcms：ms m/z＝680.40[m+1]；tr＝0.99min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.40min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2020]
实施例228。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.90(s,1h),6.83
–
6.71(m,2h),6.25(s,2h),5.48(d,j＝4.5hz,1h),4.73(m,1h),4.67(s,1h),4.58(t,j＝
5.1hz,1h),4.49(d,j＝5.7hz,1h),4.26(dd,j＝11.3,8.0hz,1h),4.15(dd,j＝11.3,7.7hz,1h),4.08
–
4.03(m,1h),3.95(m,2h),3.90
–
3.65(m,3h),1.79(m,2h),1.72(m,2h),1.59
–
1.22(m,17h),0.88(t,j＝7.5hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ12.52。lcms：ms m/z＝680.39[m+1]；tr＝0.97min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.38min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2021]
实施例229. 5-丁基1-环己基((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-谷氨酸酯
[2022][2023]
5-丁基1-环己基(叔丁氧基羰基)-l-谷氨酸酯。将boc-l-谷氨酸α环己酯(494mg，1.5mmol)溶解于无水mecn(10ml)中。将1-丁醇(1.37ml，15mmol)和edci(345mg，1.8mmol)添加到反应中，然后将其搅拌45分钟。一次性添加dmap(183mg，1.5mmol)，并将反应搅拌14小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio
2 combiflash hp gold柱，0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.10(m,1h),4.86
–
4.76(m,1h),4.36
–
4.21(m,1h),4.08(t,j＝6.7hz,2h),2.48
–
2.29(m,2h),2.16(m,1h),1.93(m,1h),1.89
–
1.78(m,2h),1.78
–
1.66(m,2h),1.66
–
1.48(m,4h),1.48
–
1.30(m,15h),0.93(t,j＝7.4hz,3h)。
[2024][2025]
5-丁基1-环己基((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-谷氨酸酯。将5-丁基1-环己基(叔丁氧基羰基)-l-谷氨酸酯(420mg，1.09mmol)溶解于10ml4m hcl的二噁烷溶液中并搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩，并将粗残余物直接用于下一步骤中。将二氯磷酸苯酯(162μl，1.09mmol)溶解于5ml无水二氯甲烷中，并在冰浴中在大气氮气下搅拌。将上述制备的粗残余物溶解于无水二氯甲烷(3ml)中并滴加到反应混合物中。将反应混合物搅拌10分
钟，并将三乙胺(334μl，2.4mmol)溶解于3ml无水二氯甲烷中并滴加到反应混合物中。将反应混合物搅拌2小时。一次性添加对硝基苯酚(136mg，0.981mmol)。将三乙胺(167μl，1.2mmol)溶解于3ml无水二氯甲烷中并滴加到反应中。将反应混合物搅拌16小时，并将反应混合物用二氯甲烷(15ml)稀释并用水(3
×
20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(12g sio2combiflash hp gold柱，0-30％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.26
–
8.16(m,2h),7.44
–
7.29(m,4h),7.25
–
7.14(m,3h),4.81
–
4.70(m,1h),4.19
–
4.08(m,1h),4.03(m,2h),3.96
–
3.86(m,1h),2.46
–
2.22(m,2h),2.18
–
2.06(m,1h),2.02
–
1.90(m,1h),1.85
–
1.64(m,2h),1.64
–
1.47(m,3h),1.46
–
1.28(m,4h),0.91(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ-2.68,-2.79。lcms：ms m/z＝563.1[m+1]；561.3[m-1]，tr＝1.62min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝4.58min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。
[2026][2027]
5-丁基1-环己基((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-谷氨酸酯。将中间体4(50mg，0.15mmol)和5-丁基1-环己基((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-谷氨酸酯(110mg，0.195mmol)混合并溶解于1.5ml无水四氢呋喃中。一次性添加氯化镁(43mg，0.45mmol)。添加dipea(131μl，0.75mmol)，并将反应在60℃处搅拌16小时。
[2028]
添加更多的5-丁基1-环己基((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-谷氨酸酯(30mg)和dipea(52μl)。将反应混合物在60℃处搅拌6小时，然后将反应用乙酸乙酯(10ml)稀释并用水(5
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将所得物质溶解于5ml的mecn中并在冰浴中搅拌。滴加浓hcl(水溶液)(300μl)，然后在冰浴中搅拌2小时。将反应用乙酸乙酯(10ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将所得物质用不含酸改性剂的制备型hplc(5％-100％mecn/水)再纯化。将含有期望产物的级分合并并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(m,1h),7.37
–
7.10(m,5h),6.84(m,1h),6.73(m,1h),5.50(m,1h),4.76
–
4.55(m,2h),4.52
–
4.30(m,3h),4.07
–
3.81(m,3h),2.45
–
2.20(m,2h),2.03(m,1h),1.88
–
1.62(m,5h),1.62
–
1.18(m,10h),0.90(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.44,3.47。lcms：ms m/z＝
715.2[m+1]；713.2[m-1]，tr＝1.35min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.28min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝5.528min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2029]
实施例230. 2-(((4ar,6s,7s,7as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4a-氰基-7-乙氧基-2-氧代四氢-4h-呋喃并[3,2-d][1,3,2]二氧杂环己膦-2-基)氧基)苯甲酸乙酯
[2030][2031]
将实施例224(13mg，0.026mmol)溶解于1ml thf中，向该溶液中添加丙酸(12mg，0.16mmol)和dic(13mg，0.1mmol)。将反应混合物在室温处搅拌10分钟，然后添加dmap(9mg，0.07mmol)。将所得混合物在室温处搅拌30分钟，然后蒸发溶剂。将残余物用制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.02(dt,j＝7.9,1.5hz,1h),7.89(s,1h),7.66(ddd,j＝8.9,7.3,1.8hz,1h),7.59(dt,j＝8.3,1.2hz,1h),7.43
–
7.32(m,1h),7.07(d,j＝4.7hz,1h),6.98(d,j＝4.6hz,1h),5.95(dd,j＝5.7,2.6hz,1h),5.92
–
5.85(m,2h),5.01
–
4.86(m,2h),4.38(q,j＝7.1hz,2h),2.52(q,j＝7.5hz,2h),1.39(t,j＝7.1hz,3h),1.20(t,j＝7.6hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-14.26。lcms：ms m/z＝558.0 4[m+1]，tr＝1.29min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.97min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2032]
实施例231.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-丁酰胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[2033][2034]
向实施例211(44mg，0.069mmol)在dcm(2ml)中的溶液中相继添加吡啶(0.055ml，
0.609mmol)和丁酰氯(0.014ml，0.137mmol)。将所得混合物在室温处搅拌2小时并通过添加甲醇(0.1ml)淬灭，用etoac稀释，用盐水洗涤，并用硫酸钠干燥，真空浓缩，并与甲苯共蒸发若干次。将所得残余物溶解于乙腈(2ml)中并添加浓hcl(0.1ml)。将所得混合物在室温处搅拌1小时，并在冰浴下添加nahco3水溶液(2ml)。然后将混合物通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，5％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ8.91(s,1h),8.17(s,1h),7.35(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.27
–
7.17(m,3h),7.15(d,j＝4.7hz,1h),6.91(d,j＝4.7hz,1h),5.56(d,j＝4.6hz,1h),4.65(td,j＝8.5,3.9hz,1h),4.57(t,j＝4.9hz,1h),4.48(d,j＝6.2hz,2h),4.44
–
4.29(m,3h),4.13(s,1h),3.90(tq,j＝9.7,7.1hz,1h),2.66(t,j＝7.4hz,2h),1.70(qd,j＝13.0,11.3,7.4hz,6h),1.54
–
1.45(m,1h),1.44
–
1.18(m,8h),1.00(t,j＝7.4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.81。lcms：ms m/z＝671.32[m+1]；tr＝1.09min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.48min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2035]
实施例232.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-2-氰基-5-(4-十二烷酰胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[2036][2037]
向实施例211(66mg，0.103mmol)在dcm(2ml)中的溶液中相继添加吡啶(0.2ml，2.483mmol)和月桂酰氯(0.036ml，0.155mmol)。将所得混合物在室温处搅拌3小时，并通过添加甲醇(0.1ml)淬灭，用etoac稀释，用水洗涤，并用硫酸钠干燥，真空浓缩，溶解于acn(2ml)中并添加浓hcl(0.1ml)。将所得混合物在室温处搅拌2小时，并在冰浴下添加nahco3水溶液(2ml)。然后将反应混合物通过制备型hplc(phenomenex gemini-nx 10μc18 110
°
a 250
×
30mm柱，5％-100％乙腈/水梯度，25分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ8.88(s,1h),8.16(s,1h),7.35(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.27
–
7.18(m,3h),7.15(d,j＝4.7hz,1h),6.91(d,j＝4.7hz,1h),5.55(d,j＝4.6hz,1h),4.66(dt,j＝8.7,4.5hz,1h),4.57(t,j＝5.1hz,1h),4.47(d,j＝5.7hz,1h),4.41(dd,j＝11.2,6.9hz,1h),4.37
–
4.29(m,2h),4.07(s,1h),3.90(tq,j＝9.7,7.1hz,1h),2.67(t,j＝7.4hz,2h),1.83
–
1.60(m,6h),1.54
–
1.44(m,1h),1.45
–
1.21(m,24h),0.95
–
0.83(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.80。lcms：ms m/z＝783.46[m+1]；tr＝1.56min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含
0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝7.56min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2038]
实施例233.((s)-(((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2-乙氧基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸乙酯
[2039][2040]
将实施例29(34mg，0.063mmol)溶解于dmf(3ml)中，并且在室温处在氩气下添加对甲苯磺酸(21mg，0.12mmol)和原酸酯(461mg，3.1mmol)。将溶液搅拌40分钟，用acoet(50ml)稀释，用盐水(4
×
20ml)、饱和nahco3水溶液(20ml)洗涤，并将溶剂在真空下蒸发。将残余物用制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(s,1h),7.39
–
7.27(m,2h),7.27
–
7.13(m,3h),6.86(d,j＝4.5hz,1h),6.77(d,j＝4.5hz,1h),6.12(s,1h),5.83(d,j＝5.2hz,1h),5.44(dd,j＝7.2,5.2hz,1h),5.03(d,j＝7.2hz,1h),4.40(dd,j＝10.4,6.1hz,1h),4.32(dd,j＝10.4,5.3hz,1h),4.10(qt,j＝7.0,3.6hz,3h),3.96
–
3.84(m,2h),3.73(dq,j＝9.3,7.0hz,1h),1.29(td,j＝6.5,5.0hz,6h),1.24
–
1.11(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.18。lcms：ms m/z＝603.00[m+1]，tr＝1.27min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.951min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2041]
实施例234.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-2-氰基-3,4-二羟基-5-(4-异丁酰胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[2042][2043]
将中间体4(100mg，0.3mmol)和((s)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯(根据wo2011123672制备，150mg，0.33mmol)混合并溶解于3ml无水四氢呋喃中。一次性
添加氯化镁(114mg，1.2mmol)。添加dipea(130μl，0.75mmol)，并将反应在50℃处搅拌6小时。添加更多的((s)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯(50mg)，并将反应在50℃处搅拌16小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释，并用碳酸钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将所得中间体(60mg，0.1mmol)溶解于2ml无水四氢呋喃中。添加异丁酸(14μl，0.15mmol)和n,n'-二异丙基碳二亚胺(23μl，0.15mmol)，并将反应混合物搅拌30分钟。添加dmap(12mg，0.1mmol)，并将混合物搅拌2小时。然后将反应混合物加热至50℃，并搅拌3小时。添加更多的异丁酸(14μl)、n,n'-二异丙基碳二亚胺(23μl)和dmap(12mg)。然后将反应混合物在50℃处搅拌18小时。然后添加甲醇(2ml)，并将所得混合物搅拌40分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(2
×
5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-60％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将所得物质溶解于mecn(5ml)中并在冰浴中搅拌。滴加浓hcl(水溶液)(300μl)，并在冰浴中搅拌3小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.18(s,1h),7.37
–
7.26(m,2h),7.26
–
7.11(m,4h),6.96(d,j＝4.7hz,1h),5.59(d,j＝5.0hz,1h),4.93
–
4.84(m,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.50
–
4.31(m,3h),3.92
–
3.71(m,2h),2.96(p,j＝6.8hz,1h),1.30
–
1.20(m,12h),1.09(d,j＝6.5hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.32。lcms：ms m/z＝631.2[m+1]；629.4[m-1]，tr＝1.24min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.01min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝4.900min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2044]
实施例235.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-2-氰基-3,4-二羟基-5-(4-异丁酰胺基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[2045][2046]
将中间体4(100mg，0.3mmol)和中间体74(161mg，0.36mmol)混合并溶解于3ml无水四氢呋喃中。一次性添加氯化镁(114mg，1.2mmol)。添加dipea(130μl，0.75mmol)，并将反应
在50℃处搅拌18小时。将反应用乙酸乙酯(15ml)稀释并用水(2
×
20ml)、碳酸钠水溶液(2
×
20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio2combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将所得中间体(55mg，0.086mmol)溶解于1ml无水四氢呋喃中。添加异丁酸(24μl，0.258mmol)和n,n'-二异丙基碳二亚胺(40μl，0.258mmol)，并将反应混合物搅拌30分钟。添加dipea(45μl，0.258mmol)，并将反应混合物在50℃处搅拌72小时。添加甲醇(2ml)并搅拌40分钟。将所得混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(2
×
10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-70％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，然后溶解于mecn(5ml)中并在冰浴中搅拌。然后滴加浓hcl(水溶液)(300μl)，并将反应混合物在冰浴中搅拌3小时。然后将反应混合物用乙酸乙酯(10ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-80％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩为油状物，将其溶解于mecn和水中，并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.18(s,1h),7.37
–
7.27(m,2h),7.26
–
7.11(m,4h),6.96(d,j＝4.7hz,1h),5.59(d,j＝5.0hz,1h),4.70
–
4.57(m,2h),4.47
–
4.31(m,3h),3.93
–
3.71(m,2h),2.96(p,j＝6.8hz,1h),1.82
–
1.56(m,2h),1.55
–
1.44(m,1h),1.43
–
1.18(m,10h),1.09(d,j＝6.5hz,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.31。lcms：ms m/z＝671.3[m+1]；669.4[m-1]，tr＝1.34min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.34min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝5.465min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2047]
实施例236.((s)-(((3as,4r,6s,6as)-6-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-4-氰基-2-氧代四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[2048][2049]
将实施例1(55mg，0.1mmol)溶解于3ml无水四氢呋喃中。一次性添加1,1'-羰基-二咪唑(24mg，0.15mmol)。添加dmap(2.4mg，0.02mmol)，并将反应混合物搅拌20小时。将反应
混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释并用盐水(2
×
10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将材料溶解于mecn和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ7.83(s,1h),7.39
–
7.27(m,2h),7.27
–
7.12(m,3h),6.69(d,j＝4.6hz,1h),6.60(d,j＝4.5hz,1h),5.68
–
5.57(m,2h),5.53
–
5.44(m,1h),4.99(p,j＝6.3hz,1h),4.50
–
4.33(m,3h),4.07
–
3.91(m,1h),1.36(d,j＝7.1hz,3h),1.24
–
1.19(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，氯仿-d)δ2.67。lcms：ms m/z＝587.1[m+1]；585.3[m-1]，tr＝1.26min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝2.99min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝4.971min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2050]
实施例237.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-((s)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己酯
[2051][2052]
将实施例6(100mg，0.166mmol)溶解于5ml无水四氢呋喃中。添加三乙胺(24μl，0.5mmol)和tmscl(63μl，0.5mmol)，并将反应混合物搅拌1小时。添加更多的三乙胺(70μl)和tmscl(60μl)，并将反应混合物搅拌16小时。将反应减压浓缩，并且将所得物质与无水四氢呋喃(3ml)混合并在室温处搅拌。
[2053]
将boc-l-缬氨酸(54mg，0.249mmol)和n,n'-二异丙基碳二亚胺(39μl，0.249mmol)混合并溶解于1ml无水四氢呋喃中并搅拌25分钟。然后将该混合物添加到上述反应中。添加三乙胺(70μl)，并将反应在室温处搅拌2小时。将boc-l-缬氨酸(54mg，0.249mmol)和n,n'-二异丙基碳二亚胺(39μl，0.249mmol)混合并溶解于1ml无水四氢呋喃中并搅拌25分钟。将所得混合物添加到反应中。添加三乙胺(70μl)，并将反应在室温处搅拌2小时。添加dmap(40mg)并在室温处搅拌16小时。
[2054]
将甲醇(2ml)添加到反应中并搅拌60分钟。将反应用乙酸乙酯(15ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(2
×
5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将所得物质溶解于mecn(5ml)中并在冰浴中搅拌。滴加浓hcl(水溶液)(300μl)。将反应混合物在冰浴中搅拌2小时。滴加更多的浓hcl(水溶液)(200μl)，并将反应在冰浴中搅拌2小时。添加饱和碳酸氢盐水溶
液，得到ph为8-9并搅拌15分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(15ml)稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液(2
×
10ml)洗涤，然后用盐水(5ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。使用0.1％tfa作为改性剂，用制备型hplc(5％-98％mecn/水)纯化所得物质。将含有期望产物的级分合并，用饱和碳酸氢钠溶液中和并用乙酸乙酯(15ml)萃取。将有机萃取物用盐水(5ml)洗涤，经无水硫酸盐干燥并减压浓缩。将残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-5％甲醇/二氯甲烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩。将残余物溶解于mecn和水中并冷冻干燥，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.87(s,1h),7.36
–
7.28(m,2h),7.25
–
7.13(m,3h),6.96(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.53
–
5.49(m,1h),4.69
–
4.57(m,3h),4.50
–
4.38(m,2h),4.34(m,1h),3.88(m,1h),2.24(m,1h),1.82
–
1.59(m,4h),1.53
–
1.43(m,1h),1.43
–
1.17(m,8h),1.04(m,6h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.29,3.30。lcms：ms m/z＝700.2[m+1]；698.4[m-1]，tr＝1.28min；lc系统：thermo dionex ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.31min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝5.282,5.332min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2055]
实施例238.新戊酸(2s,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-氰基-4-羟基-5-((((s)-(((s)-1-异丙氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)四氢呋喃-3-基酯
[2056][2057]
在室温处将n,n
′‑
二异丙基碳二亚胺(0.11ml，0.71mmol)和4-二甲基氨基吡啶(89.4mg，0.73mmol)添加到实施例1(41.3mg，0.07mmol)和新戊酸(76.5ml，0.75mmol)在四氢呋喃(6ml)中的溶液中。在60℃处20小时后，添加甲醇(0.5ml)，并将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，并将所得混合物用水(15ml)和盐水(15ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受制备型hplc(phenomenex gemini 10u c18 axia 250
×
21.2mm柱，30％-70％乙腈/水梯度，含0.1％tfa)，得到呈tfa盐形式的产物。
[2058]
第一洗脱实施例：1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.91(s,1h),7.40-7.29(m,2h),7.23-7.13(m,4h),6.88(d,j＝4.7hz,1h),5.61(d,j＝3.4hz,1h),5.53(dd,j＝5.9,3.4hz,1h),
4.88(p,j＝6.2hz,1h),4.75(d,j＝5.8hz,1h),4.43(dd,j＝11.4,7.3hz,1h),4.34(dd,j＝11.4,7.0hz,1h),4.25(t,j＝11.0hz,1h),3.94-3.74(m,1h),1.27(d,j＝7.0hz,3h),1.24(s,9h),1.16(dd,j＝6.3,4.3hz,6h)。
19
f nmr(376mhz，乙腈-d3)δ-77.08。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.88。lcms：ms m/z＝645.41[m+1]，tr＝0.98min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝4.54min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[2059]
实施例239.新戊酸(2r,3s,4s,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-4-羟基-2-((((s)-(((s)-1-异丙氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)四氢呋喃-3-基酯
[2060][2061]
实施例238的第二洗脱实施例：1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.95(s,1h),7.39-7.31(m,2h),7.25-7.13(m,4h),6.91(d,j＝4.9hz,1h),5.49(d,j＝6.7hz,1h),5.40(d,j＝5.7hz,1h),4.90(p,j＝6.3hz,1h),4.75(t,j＝6.2hz,1h),4.46-4.30(m,2h),4.24(t,j＝11.0hz,1h),3.94-3.78(m,1h),1.29(s,9h),1.27(d,j＝7.0hz,4h),1.17(dd,j＝6.3,1.4hz,7h)。
19
f nmr(376mhz，乙腈-d3)δ-77.06。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.55。lcms：ms m/z＝645.38[m+1]，tr＝0.98min；lc系统：thermo accela 1250uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝4.62min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-9.0min 2-95％acn，9.0min-10.0min 95％acn，2ml/min。
[2062]
实施例240.异丁酸(2s,3r,4s,5r)-2-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-5-氰基-4-羟基-5-((((s)-(((s)-1-异丙氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)四氢呋喃-3-基酯
[2063][2064]
在室温处将n,n
′‑
二异丙基碳二亚胺(0.037ml，0.27mmol)和4-二甲基氨基吡啶(33mg，0.27mmol)添加到实施例1(150mg，0.07mmol)和异丁酸(24mg，0.27mmol)在四氢呋喃(6ml)中的溶液中。在室温处20小时后，添加甲醇(0.5ml)，并将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，并将所得混合物用水(15ml)和盐水(15ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受制备型hplc(phenomenex gemini 10u c18 axia 250
×
21.2mm柱，30％-70％乙腈/水梯度，含0.1％tfa)，得到呈tfa盐形式的产物。
[2065]
第一洗脱实施例：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.03
–
7.96(m,1h),7.38
–
7.12(m,5h),6.92(q,j＝4.5hz,1h),5.66(q,j＝4.0hz,1h),5.55(p,j＝5.2hz,1h),4.83(s,11h),4.72(q,j＝5.3hz,1h),4.50
–
4.34(m,2h),3.83(d,j＝8.7hz,1h),2.69(p,j＝7.2hz,1h),1.31
–
1.12(m,13h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.28。lcms：ms m/z＝631.29[m+1]，tr＝0.96min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.02；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex kinetex c18，2.6μc18 110a，100
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-8.5.0min 2-98％acn，8.5min-10.0min 98％acn，1.5ml/min。
[2066]
实施例241.异丁酸(2r,3s,4s,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-4-羟基-2-((((s)-(((s)-1-异丙氧基-1-氧代丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧基)甲基)四氢呋喃-3-基酯
[2067][2068]
实施例240的第二洗脱实施例：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.03(s,1h),7.39
–
7.30(m,3h),7.27
–
7.15(m,3h),6.96(d,j＝4.7hz,1h),5.50(dd,j＝14.2,6.3hz,2h),4.92(dq,j＝12.8,6.4hz,2h),4.78(dd,j＝6.9,5.7hz,2h),4.40(d,j＝6.1hz,2h),3.86(dq,j＝10.1,7.1hz,1h),2.75(h,j＝7.0hz,1h),1.33
–
1.21(m,8h),1.19(dd,j＝6.2,0.9hz,5h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.20。lcms：ms m/z＝631.29[m+1]，tr＝0.96min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，
50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.13；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex kinetex c18，2.6μc18 110a，100
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-8.5.0min 2-98％acn，8.5min-10.0min 98％acn，1.5ml/min。
[2069]
实施例242.((s)-(((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3-羟基-4-(丙酰氧基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[2070][2071]
在室温处将n,n
′‑
二异丙基碳二亚胺(0.025ml，0.178mmol)和4-二甲基氨基吡啶(22mg，0.178mmol)添加到实施例1(100mg，0.178mmol)和丙酸(13mg，0.178mmol)在四氢呋喃(6ml)中的溶液中。在室温处20小时后，添加甲醇(0.5ml)，并将反应混合物用乙酸乙酯(20ml)稀释，并将所得混合物用水(15ml)和盐水(15ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。使粗残余物经受制备型hplc(phenomenex gemini 10u c18 axia 250
×
21.2mm柱，30％-70％乙腈/水梯度，含0.1％tfa)，得到呈tfa盐形式的产物。
[2072]
第一洗脱实施例：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.92(s,1h),7.32(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.16(dd,j＝16.6,7.9hz,3h),6.93(d,j＝4.6hz,1h),6.81(d,j＝4.5hz,1h),6.52(s,1h),6.08(dd,j＝13.4,10.1hz,1h),5.60
–
5.48(m,2h),4.74(p,j＝6.1hz,1h),4.60(s,1h),4.37(dd,j＝10.9,6.3hz,1h),4.18(dd,j＝11.1,4.5hz,1h),2.36(q,j＝7.5hz,2h),2.05(s,1h),1.15(d,j＝7.1hz,3h),1.11
–
0.99(m,8h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-74.33。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ3.29。lcms：ms m/z＝617.31[m+1]，tr＝0.89min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝7.14min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-19.0min 2-95％acn，19.0min-20.0min 95％acn，2ml/min。
[2073]
实施例243.((s)-(((2r,3s,4s,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-4-羟基-3-(丙酰氧基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯
[2074][2075]
实施例242的第二洗脱实施例：1h nmr(400mhz，乙腈-d3)δ7.93(d,j＝9.2hz,2h),7.37(dd,j＝8.6,7.1hz,3h),7.27
–
7.17(m,5h),7.10
–
7.01(m,2h),6.90
–
6.82(m,2h),5.49(dd,j＝14.5,5.9hz,3h),4.91(p,j＝6.3hz,2h),4.75(q,j＝6.5,5.9hz,2h),4.47
–
4.22(m,6h),2.54(q,j＝7.5hz,11h),1.28(dt,j＝7.4,1.7hz,5h),1.23
–
1.09(m,15h),1.02(s,1h)。
31
p nmr(162mhz，乙腈-d3)δ2.56。lcms：ms m/z＝617.31[m+1]，tr＝0.89min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝7.31min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％tfa的乙腈，含0.1％tfa的水；梯度：0min-19.0min 2-95％acn，19.0min-20.0min 95％acn，2ml/min。
[2076]
实施例244.(2s)-2-(((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)氧基)丙酸2-乙基丁酯
[2077][2078]
(s)-2-羟基丙酸2-乙基丁酯。将2-乙基丁醇(1.8ml，15mmol)溶解于12ml苯中。一次性添加对甲苯磺酸一水合物(190mg，1.0mmol)。将反应混合物在回流下搅拌30分钟。一次性添加l-乳酸(900mg，10mmol)，并将反应混合物在回流下搅拌16小时。然后将反应混合物冷却并用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)洗涤，然后用盐水(10ml)洗涤。将有机萃取物经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(4g sio
2 combiflash hp gold柱，0-10％乙酸乙酯/己烷)纯化。将含有期望产物的级分合并并减压浓缩，得到中间体。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ4.27(q,j＝7.5hz,1h),4.19
–
4.03(m,2h),2.82(bs,1h),1.55(m,1h),1.41(d,j＝6.9hz,3h),1.39
–
1.31(m,4h),0.90(t,j＝7.5hz,6h)。
[2079][2080]
(2s)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氧基)丙酸2-乙基丁酯。将二氯磷酸
ultimate 3000 uhplc；柱：phenomenex kinetex 2.6μc18 100a,50
×
3mm；溶剂：a：含0.1％乙酸的水，b：含0.1％乙酸的乙腈；梯度：0min-0.3min 5％b，0.3min-1.5min 5-100％b，1.5min-2min 100％b，2min-2.2min 100-5％b，2ml/min。hplc：tr＝3.12min；hplc系统：agilent 1100系列；柱：phenomenex gemini 5μc18 110a，50
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水，b：含0.1％tfa的乙腈；梯度：5min内为2-98％b，2ml/min。hplc：tr＝5.267,5.299min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2084]
实施例245.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3-羟基-2-(羟甲基)丙酯
[2085][2086]
将实施例48(100mg，0.16mmol)溶解于3ml acn中，将8ml tfa与1ml水混合，然后将tfa溶液添加到上述反应混合物中，在室温处搅拌30分钟，用nahco3水溶液淬灭，用etoac萃取，蒸发有机溶剂，用制备型hplc纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.81(d,j＝5.5hz,1h),7.31(ddd,j＝13.8,8.5,7.0hz,2h),7.25
–
7.07(m,3h),6.89(t,j＝4.2hz,1h),6.75(dd,j＝4.6,0.9hz,1h),5.50(dd,j＝5.1,2.8hz,1h),4.62(dt,j＝6.9,5.3hz,1h),4.56
–
4.29(m,3h),4.22
–
4.04(m,2h),3.90(dp,j＝9.2,7.1hz,1h),3.65
–
3.49(m,4h),1.96(dp,j＝8.1,5.9hz,1h),1.27(dt,j＝7.3,1.4hz,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.33,3.31。lcms：ms m/z＝607.10[m+1]，tr＝0.93min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝3.30和3.34min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2087]
实施例246.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己基甲酯
[2088][2089]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸环己基甲酯。取(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(7.954g，0.042mol)放入乙腈(90ml)中，并添加环丙基甲醇(4.0g，0.035mol)，然后一次性添加edci(7.069g，0.046mol)和dmap(6.419g，0.053mol)。在室温处搅拌4小时。用二氯甲烷和水稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法0-50％乙
酸乙酯/己烷纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.24(d,j＝7.5hz,1h),4.01
–
3.83(m,2h),3.77(dd,j＝10.7,6.3hz,1h),1.69
–
1.59(m,5h),1.35(s,9h),1.18(dd,j＝24.2,8.9hz,7h),0.92(q,j＝11.5hz,2h)。
[2090][2091]
(s)-1-(环己基甲氧基)-1-氧代丙-2-氯化铵。取(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸环己基甲酯(6.5g，0.023mol)放入无水二氯甲烷(50ml)和4n hcl的二噁烷溶液(17.08ml，0.068mol)中。在环境温度下搅拌4小时。减压浓缩并与二氯甲烷共蒸发。置于高真空下过夜，并且中间体不经纯化即原样用于下一步骤。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.55(s,3h),4.10
–
3.88(m,3h),1.71
–
1.53(m,5h),1.40(d,j＝7.2hz,3h),1.27
–
1.07(m,4h),0.95(q,j＝11.9hz,2h)。
[2092][2093]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己基甲酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-1-(环己基甲氧基)-1-氧代丙-2-氯化铵(2.0g，9.02mmol)和二氯磷酸苯酯(1.342ml，9.02mmol)在无水二氯甲烷(35ml)中的溶液中添加三乙胺(2.8ml，2.78mmol)。将所得混合物在0℃处搅拌2小时。然后添加4-硝基苯酚(1.255g，9.02mmol)和三乙胺(1.4ml，1.39mmol)。在0℃处搅拌2小时后，将反应混合物用et2o稀释并滤出固体。将粗产物减压浓缩并通过硅胶色谱法(80g sio
2 combiflash hp gold柱，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到中间体。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32
–
8.25(m,2h),7.53
–
7.34(m,4h),7.29
–
7.16(m,3h),6.68(dt,j＝13.7,9.8hz,1h),4.06
–
3.91(m,1h),3.78(dd,j＝6.5,3.1hz,2h),1.59(d,j＝11.0hz,5h),1.25
–
0.97(m,7h),0.87(t,j＝11.3hz,2h)。
31
p nmr(162mhz,dmso-d6)δ-1.25,-1.50。lcms：ms m/z＝463.10[m+1]；tr＝1.68min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[2094][2095]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己基甲酯。在室温处向中间体4(0.05g，0.151mmol)、中间体((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸环己基甲酯
(0.077g，0.166mmol)和氯化镁(0.022g，0.226mmol)的混合物中添加四氢呋喃(1.5ml)，然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.049ml，0.377mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌3小时。然后将反应混合物减压浓缩，并将获得的残余物溶解于无水乙腈(2ml)中，并在冰浴中冷却，然后滴加浓盐酸(0.1ml，1.2mmol)。将反应混合物在室温处搅拌2小时。2小时后，将反应混合物在冰浴中冷却并用饱和碳酸氢钠溶液中和。将所得混合物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，15％-85％乙腈/水梯度，30分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(d,j＝7.7hz,1h),7.37
–
7.17(m,3h),7.16(d,j＝7.7hz,2h),6.84(dd,j＝4.5,2.0hz,1h),6.73(dd,j＝4.5,1.9hz,1h),5.49(t,j＝5.0hz,1h),4.66
–
4.57(m,1h),4.54
–
4.29(m,3h),3.95
–
3.70(m,3h),1.65(q,j＝11.2,10.5hz,5h),1.30
–
1.13(m,7h),0.97
–
0.85(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25,3.23。lcms：ms m/z＝615.19[m+1]；tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.135min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2096]
sp和rp非对映体的拆分。经由手性制备型hplc(ad-h 5um 21
×
250mm，庚烷70％，乙醇30％)纯化产物，得到非对映体：
[2097][2098]
实施例247.第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.38
–
7.22(m,2h),7.20
–
7.09(m,3h),6.91
–
6.79(m,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.54
–
4.39(m,2h),4.35(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),4.00
–
3.76(m,3h),1.68(d,j＝12.1hz,5h),1.41
–
1.03(m,7h),0.93(q,j＝10.1,8.6hz,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25。lcms：ms m/z＝615.20[m+1]；tr＝1.35min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.13min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2099]
实施例248.第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.33(dd,j＝8.5,7.1hz,2h),7.26
–
7.11(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.0hz,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.49
–
4.24(m,3h),4.02
–
3.58(m,3h),1.79
–
1.44(m,5h),1.33
–
1.04(m,7h),0.89(q,j＝12.1hz,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.23。lcms：
ms m/z＝615.20[m+1]；tr＝1.36min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.144min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2100]
实施例249.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(吡啶-3-基氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯
[2101][2102]
((4-硝基苯氧基)(吡啶-3-基氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯。在0℃处在10分钟内将二氯磷酸4-硝基苯酯(503mg，1.97mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液滴加到l-丙氨酸甲酯盐酸盐(273mg，1.97mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中。添加完成后，滴加三乙胺(0.55ml，3.93mmol)。90分钟后，在0℃处相继添加3-吡啶醇(188mg，1.97mmol)和三乙胺(0.28ml，1.97mmol)，然后使所得混合物升温至室温。30分钟后，将反应混合物用水(2
×
50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用20％-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.53(m,1h),8.43(dq,j＝4.8,1.3hz,1h),8.39
–
8.07(m,2h),7.79
–
7.32(m,4h),4.17
–
3.95(m,1h),3.72
–
3.57(m,3h),1.41
–
1.26(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-0.86,-0.96。lcms：ms m/z＝382.15[m+1]，tr＝1.11min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[2103][2104]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(吡啶-3-基氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯。在室温处，将n,n-二异丙基乙胺(0.13ml，0.76mmol)和氯化镁(43mg，0.45mmol)添加到中间体4(100.0mg，0.30mmol)和((4-硝基苯氧基)(吡啶-3-基氧基)磷酰基)-l-丙氨酸甲酯(171mg，0.45mmol)在四氢呋喃(7.5ml)中的混合物中。将混合物加热至55℃。2小时后，使反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(30ml)稀释，并将所得混合物用水(5
×
20ml)和盐水(20ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。在0℃处，将浓盐酸水溶液(0.53ml)滴加到粗残余物的乙腈(7.5ml)溶液中。将混合物升温至室温。2小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(75ml)和盐水(75ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干
uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[2116][2117]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3,3-二甲基丁酯。在室温处向中间体4(0.05g，0.151mmol)、中间体((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3,3-二甲基丁酯(0.078g，0.174mmol)和氯化镁(0.029g，0.302mmol)的混合物中添加四氢呋喃(0.75ml)，然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.066ml，0.377mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌1.5小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且将获得的残余物用饱和氯化钠溶液和乙酸乙酯稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗残余物经由sio2柱色谱法(40g sio
2 combiflash hp gold柱，100％二氯甲烷-14％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化。收集获得的纯级分并减压浓缩。将获得的残余物溶解于无水乙腈(2ml)中并在冰浴中冷却，然后滴加浓盐酸(0.3ml，3.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却并用3n氢氧化钠水溶液中和。将所得混合物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，15％-85％乙腈/水梯度，30分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(d,j＝7.2hz,1h),7.37
–
7.12(m,5h),6.84(dd,j＝4.5,2.8hz,1h),6.73(dd,j＝4.5,2.0hz,1h),5.50(t,j＝4.7hz,1h),4.62(q,j＝5.6hz,1h),4.54
–
4.29(m,3h),4.11(s,1h),4.15
–
3.99(m,1h),3.93
–
3.81(m,1h),1.49(dt,j＝12.0,7.5hz,2h),1.29
–
1.21(m,3h),0.89(d,j＝7.9hz,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25。lcms：ms m/z＝603.08[m+1]；tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.02min(次要异构体)，5.039min(主要异构体)；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2118]
sp和rp非对映体的拆分。经由手性制备型hplc(ad-h 5um 21
×
250mm，庚烷70％，异丙醇30％)纯化实施例251，得到非对映体：
[2119][2120]
实施例252。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(s,1h),7.33
–
7.24(m,2h),7.19
–
7.11(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.50(d,j＝5.0hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.55
–
4.43(m,2h),4.35(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),4.16
–
4.06(m,2h),3.92
–
3.79(m,1h),1.55
–
1.46(m,2h),1.34
–
1.22(m,3h),0.90(s,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.24。lcms：ms m/z＝603.06[m+1]；tr＝1.20min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.024min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2121]
实施例253。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(s,1h),7.33(dd,j＝8.4,7.3hz,2h),7.27
–
7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.5hz,1h),5.49(d,j＝5.1hz,1h),4.61(t,j＝5.3hz,1h),4.48
–
4.30(m,3h),4.15
–
3.97(m,2h),3.88(dd,j＝9.9,7.1hz,1h),1.47(t,j＝7.4hz,2h),1.26(dd,j＝7.2,1.0hz,3h),0.88(s,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.25lcms：ms m/z＝603.09[m+1]；tr＝1.22min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.045min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2122]
实施例254.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2,2-二甲基丁酯
[2123][2124]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸2,2-二甲基丁酯。取(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(11.11g，0.059mol)放入乙腈(60ml)中，并添加2,2-二甲基丁-1-醇(5.0g，0.049mol)，然后一次性添加edci(9.876g，0.064mol)和dmap(8.967g，0.073mol)。在室温处搅拌4小时。用二氯甲烷和水稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱法0-20％乙酸乙酯/己烷纯化，得到化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.26(d,j＝7.5hz,1h),3.99(p,j＝7.4hz,1h),3.81(d,j＝10.6hz,1h),3.66(d,j＝10.6hz,1h),1.35
(s,9h),1.29(d,j＝18.5hz,3h),0.84
–
0.72(m,11h)。
[2125][2126]
(s)-1-(2,2-二甲基丁氧基)-1-氧代丙-2-氯化铵。取(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸2,2-二甲基丁酯(10.34g，0.038mol)放入无水二氯甲烷(100ml)和4n hcl的二噁烷溶液(47.28ml，0.189mol)中。在环境温度下搅拌4小时。减压浓缩并与二氯甲烷共蒸发。置于高真空下过夜，并且化合物不经纯化即原样用于下一步骤。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.65(s,3h),4.05(q,j＝7.2hz,1h),3.91(d,j＝10.6hz,1h),3.79(d,j＝10.6hz,1h),1.42(d,j＝7.2hz,3h),1.26(q,j＝7.6hz,2h),0.87
–
0.73(m,9h)。
[2127][2128]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2,2-二甲基丁酯。在0℃处在氩气氛下向(s)-1-(2,2-二甲基丁氧基)-1-氧代丙-2-氯化铵(7.9g，37.67mmol)和二氯磷酸苯酯(5.605ml，37.67mmol)在无水二氯甲烷(150ml)中的溶液中添加三乙胺(11.64ml，82.87mmol)。将所得混合物在0℃处搅拌1小时。然后添加4-硝基苯酚(5.24g，37.67mmol)和三乙胺(5.82ml，41.43mmol)。在0℃处搅拌1小时后，将反应混合物用et2o稀释并滤出固体。将粗产物减压浓缩并通过硅胶色谱法(80g sio
2 combiflash hp gold柱，100％二氯甲烷，然后是0-35％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到化合物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.32
–
8.23(m,2h),7.52
–
7.34(m,4h),7.31
–
7.18(m,3h),4.15
–
4.02(m,1h),3.86
–
3.74(m,2h),1.39
–
1.28(m,3h),1.32
–
1.19(m,2h),0.89
–
0.76(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ-1.35,-1.57lcms：ms m/z＝450.94[m+1]；tr＝1.71min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。
[2129][2130]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2,2-二甲基丁酯。在室温处向中间体4(0.05g，0.151mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸2,2-二甲基丁酯(0.078g，0.174mmol)和氯化镁(0.029g，0.302mmol)的混合物中添加四氢呋喃(0.75ml)，
然后添加n,n-二异丙基乙胺(0.066ml，0.377mmol)。将所得混合物在50℃处搅拌1.5小时。然后将反应混合物减压浓缩，并且将获得的残余物用饱和氯化钠溶液和乙酸乙酯稀释。将各层分开并将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将获得的残余物溶解于无水乙腈(1ml)中并在冰浴中冷却，然后滴加浓盐酸(0.1ml，1.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。1小时后，将反应混合物在冰浴中冷却并用饱和碳酸氢钠水溶液中和。将所得混合物通过制备型hplc(phenominex synergi 4u hydro-rr 150
×
30mm柱，15％-85％乙腈/水梯度，30分钟运行)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.79(d,j＝6.9hz,1h),7.40
–
7.08(m,5h),6.87
–
6.80(m,1h),6.75
–
6.70(m,1h),5.49(d,j＝5.0hz,1h),4.61(dt,j＝7.7,5.4hz,1h),4.54
–
4.26(m,3h),3.98
–
3.73(m,2h),3.66(d,j＝10.7hz,1h),1.33
–
1.17(m,5h),0.92
–
0.72(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.26。lcms：ms m/z＝603.10[m+1]；tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.026min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2131]
sp和rp非对映体的拆分。经由手性制备型hplc(ie sfc 5um 21
×
250mm，庚烷70％，乙醇30％)纯化实施例254，得到非对映体：
[2132][2133]
实施例255。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.80(s,1h),7.37
–
7.28(m,2h),7.27
–
7.13(m,3h),6.84(d,j＝4.5hz,1h),6.73(d,j＝4.6hz,1h),5.49(d,j＝5.0hz,1h),4.60(t,j＝5.3hz,1h),4.49
–
4.29(m,3h),3.93(dd,j＝10.0,7.1hz,1h),3.80(d,j＝10.7hz,1h),3.66(d,j＝10.7hz,1h),1.32
–
1.20(m,5h),0.82(s,6h),0.85
–
0.74(m,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.27lcms：ms m/z＝603.06[m+1]；tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.013min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2134]
实施例256。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.78(d,j＝1.4hz,1h),7.28(dd,j＝8.6,7.2hz,2h),7.19
–
7.10(m,3h),6.85(d,j＝4.4hz,1h),6.73(d,j＝4.6hz,1h),5.50(d,j＝5.1hz,1h),4.62(t,j＝5.3hz,1h),4.48(dd,j＝15.3,5.6hz,2h),4.35(dd,j＝10.9,5.2hz,1h),3.99
–
3.87(m,1h),3.84(d,j＝10.7hz,1h),3.77(d,j＝
10.7hz,1h),1.34
–
1.23(m,5h),0.89
–
0.77(m,9h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.26。lcms：ms m/z＝603.06[m+1]；tr＝1.21min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：phenomenex kinetex 2.6μxb-c18 100a,50
×
3.0mm；溶剂：含0.1％甲酸的乙腈、含0.1％甲酸的水；梯度：0min-1.8min 2-100％乙腈，1.8min-1.85min 100％-2％乙腈，1.85min-2.00min 2％acn，1800μl/min。hplc：tr＝5.007min；hplc系统：agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2135]
实施例257.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸(1-甲基环丙基)甲酯
[2136][2137]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(1-甲基环丙基)甲酯。在氩气氛下将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.22g，6.36mmol)添加到(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(1.00g，5.29mmol)在10ml乙腈中的溶液中。15分钟后，添加4-(二甲基氨基)-吡啶(0.71g，5.81mmol)，然后添加(1-甲基环丙基)甲醇(0.51ml，5.29mmol)。将反应在室温下搅拌2小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用5％柠檬酸水溶液(2
×
10ml)洗涤。将有机物用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)、水(5ml)、然后用盐水(10ml)洗涤。将有机物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-10％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ5.06(s,1h),4.49
–
4.28(m,1h),4.05
–
3.83(m,2h),1.44(s,9h),1.40(d,j＝7.2hz,3h),1.12(s,3h),0.53
–
0.43(m,2h),0.41
–
0.32(m,2h)。
[2138][2139]
l-丙氨酸(1-甲基环丙基)甲酯盐酸盐。在0℃处将氯化氢(4m的1,4-二噁烷溶液，3.7ml，14.80mmol)添加到(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(1-甲基环丙基)甲酯(1.85g，7.19mmol)在二氯甲烷(10ml)中的溶液中。1小时后，将反应浓缩。将残余物溶解在二氯甲烷(10ml)中并浓缩(2
×
)。产物无需进一步纯化即用于下一反应。1h nmr(400mhz，氯仿-d)δ8.81(s,3h),4.31
–
4.17(m,1h),4.06(d,j＝11.0hz,1h),3.94(d,j＝11.0hz,1h),1.75(d,j＝7.1hz,3h),1.13(s,3h),0.53
–
0.46(m,2h),0.45
–
0.36(m,2h)。
[2140]
[2141]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸(1-甲基环丙基)甲酯。在0℃处将二氯磷酸苯酯(0.82ml，5.45mmol)和三乙胺(1.58ml，11.36mmol)相继添加到l-丙氨酸(1-甲基环丙基)甲酯盐酸盐(880mg，4.54mmol)在二氯甲烷(15ml)中的悬浮液中。1小时后，然后在0℃处相继添加4-硝基苯酚(0.63g，4.54mmol)和三乙胺(0.79ml，5.8mmol)，然后使所得混合物升温至室温。2.5小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，二甲基亚砜-d6)δ8.34
–
8.27(m,2h),7.55
–
7.37(m,4h),7.31
–
7.17(m,3h),6.78
–
6.65(m,1h),4.13
–
3.97(m,1h),3.89
–
3.76(m,2h),1.31
–
1.21(m,3h),1.02(d,j＝1.5hz,3h),0.49
–
0.37(m,2h),0.35
–
0.23(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，二甲基亚砜-d6)δ-1.25,-1.44。lcms：ms m/z＝433.02[m-1]，tr＝1.75min(次要)，1.77min(主要)；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。
[2142][2143]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸(1-甲基环丙基)甲酯。在室温处将四氢呋喃(0.5ml)添加到中间体4(40mg，0.12mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸(1-甲基环丙基)甲酯(68.17mg，0.16mmol)和氯化镁(17.24mg，0.18mmol)的混合物中。将混合物在室温处搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(0.053ml，0.30mmol)。将反应加热至50℃持续2小时，使反应混合物冷却至室温，并用乙酸乙酯(2ml)稀释。将有机物用水(2ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。在0℃处将盐酸水溶液(0.1ml)滴加到残余物在乙腈(2ml)中的溶液中。1小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(5ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(5ml)和盐水(5ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物通过hplc色谱法(phenomenex gemini 5μm c18 100
×
30mm，5％-100％乙腈的水溶液)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝586.93[m+1]，tr＝1.39min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。
[2144]
sp和rp非对映体的拆分。经由手性制备型hplc(sfc ad-h 5μm，250
×
21mm，水70％，异丙醇30％)纯化产物，得到非对映体：
[2145][2146]
实施例258。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.95(s,1h),7.35
–
7.24(m,3h),7.21
–
7.13(m,3h),6.91(d,j＝4.7hz,1h),5.54(d,j＝5.2hz,1h),4.61
–
4.54(m,1h),4.51
–
4.44(m,2h),4.42
–
4.36(m,1h),4.01
–
3.85(m,3h),1.37
–
1.30(m,3h),1.10(s,3h),0.52
–
0.45(m,2h),0.38
–
0.32(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.32。lcms：ms m/z＝586.93[m+1]，tr＝1.37min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.75min；agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2147]
实施例259。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.01(s,1h),7.38
–
7.28(m,3h),7.27
–
7.16(m,3h),6.93(d,j＝4.7hz,1h),5.53(d,j＝5.2hz,1h),4.56
–
4.52(m,1h),4.45
–
4.34(m,3h),4.00
–
3.88(m,2h),3.79(d,j＝11.1hz,1h),1.37
–
1.30(m,3h),1.08(s,3h),0.45(t,j＝2.8hz,2h),0.36
–
0.27(m,2h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.27。lcms：ms m/z＝586.93[m+1]，tr＝1.39min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.77min；agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2148]
实施例260.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酯
[2149][2150]
(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酯。在氩气氛下将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.43g，12.69mmol)添加到(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸(2.00g，10.57mmol)在10ml乙腈中的溶液中。15分钟后，添加4-(二甲基氨基)-吡啶(1.42g，11.62mmol)，然后添加3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙-1-醇(1.69ml，10.55mmol)。将反应在室温处搅拌2小时。将反应用乙酸乙酯稀释，并用5％柠檬酸水溶液(2
×
10ml)洗涤。将
有机物用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)、水(5ml)、然后用盐水(10ml)洗涤。将有机物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(0-10％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，二甲基亚砜-d6)δ7.32(d,j＝7.3hz,1h),4.15(d,j＝11.6hz,1h),4.08
–
3.95(m,2h),1.37(s,9h),1.25(d,j＝7.3hz,3h),1.13
–
1.09(m,6h)。
[2151][2152]
((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酯。将4m氯化氢的1,4-二噁烷溶液(10ml，40.00mmol)添加到(叔丁氧基羰基)-l-丙氨酸3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酯(1.88g，6.00mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中。1小时后，将反应浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷(15ml)中并冷却至0℃。相继添加二氯磷酸苯酯(1.07ml，7.21mmol)和三乙胺(1.83ml，13.22mmol)。1小时后，然后在0℃处相继添加4-硝基苯酚(0.836g，6.00mmol)和三乙胺(0.92ml，7.00mmol)，然后使所得混合物升温至室温。2.5小时后，将反应混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱法(用0-100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到产物。1h nmr(400mhz，二甲基亚砜-d6)δ8.30(d,j＝8.9hz,2h),7.56
–
7.36(m,4h),7.35
–
7.16(m,3h),6.85
–
6.64(m,1h),4.18
–
3.94(m,3h),1.30
–
1.23(m,3h),1.10(s,6h)。
31
p nmr(162mhz，二甲基亚砜-d6)δ-1.29,-1.46。
19
f nmr(376mhz，二甲基亚砜-d6)δ-76.19,-76.19。
[2153][2154]
((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酯。在室温处将四氢呋喃(0.5ml)添加到中间体4(59mg，0.18mmol)、((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酯(113.52mg，0.23mmol)和氯化镁(25.43mg，0.27mmol)的混合物中。将混合物搅拌20分钟。添加n,n-二异丙基乙胺(77.54μl，0.44mmol)。将反应加热至50℃持续2小时，使反应混合物冷却至室温，并用乙酸乙酯(2ml)稀释。将有机物用水(2ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。在0℃处将盐酸水溶液(0.1ml，12m)滴加到残余物在乙腈(2ml)中的溶液中。1小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(5ml)稀释，并将所得混合物用饱和碳酸钠水溶液(5ml)和盐水(5ml)洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物通过hplc色谱法(phenomenex gemini 5μm c18 100
×
30mm，5％-100％乙腈的水溶液)纯化，得到产物。lcms：ms m/z＝642.97[m+1]，tr＝1.46min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。
[2155]
sp和rp非对映体的拆分。经由手性制备型hplc(sfc ia 5μm，250
×
21mm，水70％，异丙醇30％)纯化产物，得到非对映体：
[2156][2157]
实施例261。第一洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ7.98(s,1h),7.39
–
7.24(m,3h),7.20
–
7.14(m,3h),6.94(d,j＝4.7hz,1h),5.54(d,j＝5.4hz,1h),4.58
–
4.53(m,1h),4.50
–
4.43(m,2h),4.43
–
4.36(m,1h),4.16(d,j＝11.5hz,1h),4.06(d,j＝11.5hz,1h),4.03
–
3.91(m,1h),1.38
–
1.33(m,3h),1.16(s,3h),1.15(s,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.24。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-78.75。lcms：ms m/z＝642.97[m+1]，tr＝1.45min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.92min；agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2158]
实施例262。第二洗脱非对映体：1h nmr(400mhz，甲醇-d4)δ8.02(s,1h),7.38
–
7.32(m,3h),7.27
–
7.17(m,3h),6.95(d,j＝4.7hz,1h),5.53(d,j＝5.2hz,1h),4.55
–
4.50(m,1h),4.43
–
4.33(m,3h),4.13(d,j＝11.5hz,1h),4.00
–
3.92(m,2h),1.33(d,j＝7.2,1.1hz,3h),1.13(s,3h),1.11(s,3h)。
31
p nmr(162mhz，甲醇-d4)δ3.19。
19
f nmr(376mhz，甲醇-d4)δ-78.79。lcms：ms m/z＝642.97[m+1]，tr＝1.40min；lc系统：thermo accela 1250 uhplc；ms系统：thermo lcq fleet；柱：kinetex 2.6μxb-c18 100a，50
×
4.6mm；溶剂：含0.1％乙酸的乙腈，含0.1％乙酸的水；梯度：0min-2.0min 2-100％乙腈，2.0min-3.05min 100％乙腈，3.05min-3.2min 100％-2％乙腈，3.2min-3.5min 2％acn，2μl/min。hplc：tr＝2.91min；agilent 1290 ii；柱：phenomenex kinetex c18,2.6u 110a,100
×
4.6mm；溶剂：a：含0.1％tfa的水：含0.1％tfa的乙腈；梯度：2％-98％b，8.5分钟梯度，1.5ml/分钟。
[2159]
实施例263.((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)-2-氰基-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(4-(叔丁基)苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸乙酯
33p-ntp的碱基匹配的竞争性天然ntp)的混合物来引发反应。在30℃下90分钟后，将5μl反应混合物点在de81阴离子交换纸上。将滤纸用na2hpo4(125mm，ph 9)洗涤三次，每次5分钟，用水和乙醇冲洗，然后风干并暴露于磷光成像仪。使用typhoon trio成像仪和image quant tl软件定量合成的rna，并使用graphpad prism 5.0通过线性回归计算反应速率。使用以下剂量反应(可变斜率)方程(四参数逻辑方程)通过非线性回归分析在prism中计算ic50值：y＝bottom+(top-bottom)/(1+10^((logic
50-x)*hillslope))。
[2171]
实施例267.rsv rnp制备
[2172]
rsv核糖核蛋白(rnp)复合物根据从mason等人(1)中修改的方法制备。将hep-2细胞以7.1
×
104个细胞/cm2的密度平板接种在mem+10％胎牛血清(fbs)中，并且使其在37℃(5％co2)处附着过夜。附着后，将细胞在35ml mem+2％fbs中用rsv a2(moi＝5)感染。感染后20小时，将培养基替换为补充有2μg/ml放线菌素d的mem+2％fbs，并且恢复到37℃持续一小时。然后将细胞用pbs洗涤一次并用35ml pbs+250μg/ml溶血卵磷脂处理一分钟，之后抽吸所有液体。通过将细胞剔除到1.2ml缓冲液a[50mm tris乙酸盐(ph 8.0)、100mm乙酸钾、1mm dtt和2μg/ml放线菌素d]中收获细胞，并且通过重复经过18号针头(10次)来使其溶解。将细胞溶解物置于冰中10分钟，然后在4℃处以2400g离心10分钟。去除上清液(s1)并且在600μl补充有1％triton x-100的缓冲液b[10mm tris乙酸盐(ph 8.0)、10mm乙酸钾和1.5mm mgcl2]中，通过重复经过18号针头(10次)来破坏团块(p1)。将重悬的团块置于冰中10分钟，然后在4℃处以2400g离心10分钟。去除上清液(s2)并在600μl补充有0.5％脱氧胆酸盐和0.1％吐温40的缓冲液b中破坏团块(p2)。将重悬的团块置于冰中10分钟，然后在4℃处以2400g离心10分钟。收集含有富集的rsv rnp复合物的上清液(s3)级分，并且通过在280nm处的uv吸光度确定蛋白质浓度。将等分的rsv rnp s3级分储存在-80℃处。
[2173]
实施例268.rsv rnp测定
[2174]
转录反应含有25μg在30μl反应缓冲液[50mm tris-乙酸盐(ph 8.0)、120mm乙酸钾、5％甘油、4.5mm mgcl2、3mm dtt、2mm乙二醇-双(乙醚)-四乙酸(egta)、50μg/ml bsa、2.5u rnasin(promega)、atp、gtp、utp、ctp和1.5uci[α-32p]ntp(3000ci/mmol)]中的粗制rsv rnp复合物。选择转录测定中使用的经放射性标记的核苷酸以匹配评价其对rsv rnp转录的抑制的核苷酸类似物。以其km一半的最终浓度(atp＝20μm，gtp＝12.5μm，utp＝6μm和ctp＝2μm)添加冷的竞争性ntp。以100μm的最终浓度添加其余三种核苷酸。
[2175]
为了确定核苷酸类似物是否抑制rsv rnp转录，使用6步连续稀释以5倍增量添加化合物。在30℃处孵育90分钟后，用350μl的qiagen rlt溶解缓冲液终止rnp反应，并且使用qiagen rneasy 96试剂盒纯化rna。在65℃处将纯化的rna在rna上样缓冲液(sigma)中变性10分钟，并在含有2m甲醛的1.2％琼脂糖/mops凝胶上运行。将琼脂糖凝胶干燥并暴露于storm磷成像仪屏幕，并且使用storm磷成像仪(ge healthcare)显影。通过两个重复样品的非线性回归分析计算使总的放射性标记转录本减少50％的化合物的浓度(ic
50
)。
[2176]
实施例269.denv-2 modc ec50
[2177]
人单核细胞来源的树突状细胞(modc)源自于在含有gm-csf和il-4的人mo-dc分化培养基(miltenyi biotec)中培养的cd14+单核细胞(allcells)。在第7天，通过机械破坏收获modc，洗涤并悬浮于无血清rpmi中。将modc在无血清rpmi中用vero来源的登革病毒2新几内亚毒株(ngc)以moi＝0.1感染两小时，同时在37℃处轻轻搅动。洗涤细胞并重悬于含10％
血清的rpmi(gibco，补充有丙酮酸钠、neaa、青霉素-链霉素)中。将10^5个细胞一式三份地平板接种在96孔板中，化合物以分级剂量分配(hewlett-packard d300数字分配器)。将所有孔归一化为0.25％dmso。在48小时，用1
×
pbs洗涤细胞并且去除所有上清液。使用rneasy 96板(qiagen)提取总rna，并且用于使用xlt cdna 5
×
supermix(quantabio)生成第一链cdna。cdna在对denv2病毒和gapdh基因表达有特异性的taqman qpcr双链体反应中用作模板。使用prism graphpad软件确定ec
50
值，归一化为阳性对照孔和无化合物的阴性对照孔。
[2178]
实施例270.modc cc50
[2179]
人单核细胞来源的树突状细胞(modc)源自于在含有gm-csf和il-4的人mo-dc分化培养基(miltenyi biotec)中培养的cd14+单核细胞(allcells)。第7天，通过机械破碎收获modc，洗涤并在96孔板中以1
×
10^5-5
×
10^4个细胞/孔一式三份培养，化合物以分级剂量分配(hewlett-packard d300数字分配器)。将所有孔归一化为0.25％dmso。48小时后，添加celltiter glo(promega)并在室温下孵育10分钟，然后在光度计上读数。相对于无化合物和无细胞对照孔计算％活力曲线。使用prism graphpad软件测定cc
50
值。
[2180]
实施例271.denv-2huh-7 ec50
[2181]
将huh7(人肝癌7)细胞保持在含10％fcs的dmem完全培养基中。在测定当天，将细胞胰蛋白酶化(0.1％胰蛋白酶-edta)，洗涤并在无血清dmem中用登革血清型2新几内亚c(ngc)毒株以moi＝0.1感染2小时，同时在37℃处轻轻搅动。2小时后，用无血清培养基洗涤细胞并悬浮于含10％fcs的dmem(gibco，补充有丙酮酸钠、neaa、青霉素-链霉素)中。将10^5个细胞一式三份地平板接种在96孔板中，化合物以分级剂量分配(hewlett-packard d300数字分配器)。将所有孔归一化为0.25％dmso。在48小时，用1
×
pbs洗涤细胞并且去除所有上清液。使用rneasy 96板(qiagen)提取总rna，并且用于使用xlt cdna 5
×
supermix(quantabio)生成第一链cdna。cdna在对denv2病毒和gapdh基因表达有特异性的taqman qpcr双链体反应中用作模板。使用prism graphpad软件确定ec
50
值，归一化为阳性对照孔和无化合物的阴性对照孔。
[2182]
实施例272.huh-7 cc50
[2183]
将人肝癌7(huh7)细胞保持在含10％fcs的完全dmem中。在测定当天，将细胞用0.1％胰蛋白酶-edta胰蛋白酶化，洗涤并在96孔板中以1-2
×
10^4个细胞/孔一式三份培养，化合物以分级剂量分配(hewlett-packard d300数字分配器)。将所有孔归一化为0.25％dmso。48小时后，添加celltiter glo(promega)并在室温下孵育10分钟，然后在光度计上读数。相对于无化合物和无细胞对照孔计算％活力曲线。使用prism graphpad软件测定cc
50
值。
[2184]
实施例273.rsv hep-2 ec50
[2185]
在hep-2细胞中使用感染性细胞病变细胞保护测定确定针对rsv的抗病毒活性。在该测定中，抑制病毒感染和/或复制的化合物对病毒诱导的细胞杀伤产生细胞保护作用，该细胞保护作用可以使用细胞活力试剂定量。这里使用的技术是公开文献中描述的方法的新型改编(chapman等人，antimicrob agents chemother.2007,51(9):3346-53)。
[2186]
从atcc(manassas,vi)获得hep-2细胞并且保持在补充有10％胎牛血清和青霉素/链霉素的mem培养基中。细胞每周传代两次并且保持在亚融合期。在化合物测试之前对rsv毒株a2的商业原液(advanced biotechnologies,columbia,md)进行滴定，以确定在hep-2
细胞中产生期望的细胞病变作用的病毒原液的适当稀释倍数。
[2187]
对于抗病毒测试，使hep-2细胞在大的细胞培养瓶中生长以接近融合，但不是完全融合。以每张板8或40个样品的标准化剂量反应格式，将待测试的化合物在384孔化合物稀释板中的dmso中预先稀释。在板中制备每种测试化合物的3倍连续稀释增量，并将测试样品经由声学转移设备(echo,labcyte)以每孔100nl转移到细胞培养测定的384孔板中。将每种化合物稀释液以单份样品或一式四份样品的形式转移到干燥的测定板中，将测定板储存到准备好进行测定。阳性对照和阴性对照在垂直区块(1列)的板的末端上相反放置。
[2188]
随后，使用先前通过用密度为50,000/ml的细胞滴定而确定的病毒储备液的适当稀释倍数来制备感染性混合物，并且经由自动化(uflow,biotek)向含化合物的测试板中添加20μl/孔。每张板包括阴性对照和阳性对照(各16个重复)以分别产生0％和100％的病毒抑制标准。在感染rsv之后，将测试板在37℃细胞培养箱中孵育4天。孵育后，将细胞活力试剂cell titerglo(promega,madison,wi)添加到测定板中，将测定板短暂孵育，并测量所有测定板中的发光读数(envision,perkin elmer)。rsv诱导的细胞病变作用，即抑制百分比由剩余细胞活力的水平确定。相对于0％和100％抑制对照，针对每个测试浓度计算这些数字，并且通过非线性回归按照抑制rsv诱导的细胞病变作用50％的浓度来确定每种化合物的ec
50
值。各种有效的抗rsv工具化合物用作抗病毒活性的阳性对照。
[2189]
实施例274.hep-2 cc50
[2190]
使用细胞活力试剂以与之前针对其他细胞类型描述的类似方式，在未感染的hep-2细胞中与抗病毒活性平行地测定测试化合物的细胞毒性(cihlar等人，antimicrob agents chemother.2008,52(2):655-65.)。用于测定抗病毒活性的相同方案用于测量化合物细胞毒性，不同的是未用rsv感染细胞。相反，将相同密度的未感染细胞混合物以20ul/孔添加到含有预稀释化合物(也为100nl/样品)的板中。然后将测定板孵育4天，随后通过添加相同的celltiter glo试剂进行细胞活力测试，并测量发光读数。未处理的细胞和以2μm嘌呤霉素(sigma,st.louis,mo)处理的细胞分别充当100％和0％细胞活力对照。相对于0％和100％对照针对每种测试化合物浓度计算细胞活力百分比，并且通过非线性回归将cc
50
值确定为使细胞活力降低50％的化合物浓度。
[2191]
实施例275.rsv nhbe ec50
[2192]
从lonza购得正常的人支气管上皮(nhbe)细胞(walkersville，md，目录号cc-2540)并在支气管上皮生长培养基(begm)(lonza，walkersville，md，目录号cc-3170)中培养。细胞每周传代1次-2次，以保持《80％融合。在培养中6次传代后丢弃nhbe细胞。
[2193]
为了进行rsv a2抗病毒测定，将nhbe细胞以每孔7,500个细胞的密度接种在96孔板中的begm中，并使其在37℃处附着过夜。附着后，取出100μl细胞培养基并且使用hewlett-packard d300数字分配器添加3倍连续稀释的化合物。将dmso的最终浓度归一化为0.05％。在添加化合物之后，通过以1
×
10
4.5
个组织培养感染剂量/ml的滴度在begm中添加100μl的rsv a2来感染nhbe细胞，然后在37℃处孵育4天。然后使nhbe细胞平衡至25℃，并且通过取出100μl培养基并添加100μl的cell-titer glo活力试剂来确定细胞活力。将混合物在25℃处孵育10分钟，并在envision发光酶标仪上对发光信号进行定量。
[2194]
实施例276.rsv hae ec
50
[2195]
在空气-液体界面处培养hae细胞并具有暴露于空气的顶侧和与培养基接触的基
底侧。在实验之前，将hae从基于琼脂的运输包装中取出，并使其在1ml的hae测定培养基(air-100-mm,mattek corp)中适应37℃/5％co2过夜。通过用400μl的pbs洗涤顶面两次(利用直接移液法或通过使每个transwell通过含有pbs的槽运行)以去除粘液层来制备hae用于感染。排放顶部腔室的pbs并且轻轻叩击到吸收材料上以尽可能地去除pbs。洗涤后，将细胞转移到含有4倍连续稀释的化合物的新鲜hae维持培养基中，递送到细胞单层的基底侧，并且在hae测定培养基中用100μl的rsv a毒株a2 1000
×
储备液的1:600稀释液(abi，columbia，md，目录号10-124-000)在37℃处在5％co2中顶部感染3小时。去除病毒接种物并且使用先前描述的方法用pbs洗涤细胞的顶面3次。然后将细胞在化合物的存在下在37℃处培养3天。孵育后，使用magmax-96病毒rna分离试剂盒(applied biosystems,foster city,ca，目录号am1836)从hae细胞中提取总rna，并且通过实时pcr定量细胞内rsv rna。将大约25ng纯化的rna添加到含有0.9μm rsv n正向引物和rsv n反向引物、0.2μm rsv n探针和1
×
taqman rna-to-ct 1步试剂盒的pcr反应混合物(applied biosystems,foster city,ca，目录号4392938)中。使用taqman gapdh对照引物组(applied biosystems,foster city,ca，目录号402869)对rna水平进行归一化。rsv a2 hae抗病毒测定中使用的实时pcr引物和探针：rsv n正向引物catccagcaaatacaccatcca、rsv n反向引物ttctgcacatcataattaggagtatcaa、rsv n探针fam-cggagcacaggagat-bhq。
[2196]
实施例277.hrv16 hela ec
50
[2197]
在化合物给药和感染前一天，将含有10％热灭活fbs和1％青霉素/链霉素的完全dmem培养基中培养的h1-hela细胞以3000个细胞/孔接种在96孔板中。一式三份测量每种化合物的抗病毒活性。在感染之前，立即使用hp300数字分配器(hewlett packard,palo alto,ca)将化合物以连续3倍稀释液直接添加到细胞培养物中。将板转移到bsl-2限制中，并且将先前通过滴定确定并在细胞培养基中制备的病毒储备液的适当稀释液添加到含有细胞和连续稀释的化合物的测试板中。每张板包含6个感染的未经处理的细胞孔和6个未感染的细胞孔，这些孔分别充当0％和100％病毒抑制对照。在感染之后，将测试板在设定为33℃/5％co2的组织培养箱中孵育96小时。孵育后，将h1-hela细胞从孵育中取出并使其平衡至25℃。通过取出100μl培养基并添加100μl的cell-titer glo活力试剂来确定细胞活力。将混合物在振荡器上在25℃处孵育10分钟，并在envision发光酶标仪上对发光信号进行定量。相对于0％和100％抑制对照，针对每个测试浓度计算病毒感染的抑制百分比，并且通过4-参数非线性回归按照抑制细胞病变作用50％的化合物的有效浓度来确定每种化合物的ec
50
值。
[2198]
实施例278.hrv1a hela ec
50
[2199]
在化合物给药和感染前一天，将含有10％热灭活fbs和1％青霉素/链霉素的完全rpmi 1640培养基中培养的h1-hela细胞以5000个细胞/孔接种在96孔板中。一式三份测量每种化合物的抗病毒活性。在感染之前，立即使用hp300数字分配器(hewlett packard,palo alto,ca)将化合物以连续3倍稀释液直接添加到细胞培养物中。将板转移到bsl-2限制中，并向含有细胞和连续稀释的化合物的每个孔中添加100μl的hrv1a病毒储备液的1/4000稀释液。每张板包含6个感染的未经处理的细胞孔和6个含有5μm芦平曲韦(rupintrivir)的细胞孔，这些孔分别充当0％和100％病毒抑制对照。在感染之后，将测试板在设定为37℃/5％co2的组织培养箱中孵育96小时。孵育后，将h1-hela细胞从孵育中取
出并使其平衡至25℃。通过取出100μl培养基并添加100μl的cell-titer glo活力试剂来确定细胞活力。将混合物在振荡器上在25℃处孵育10分钟，并在envision发光酶标仪上对发光信号进行定量。相对于0％和100％抑制对照，针对每个测试浓度计算病毒感染的抑制百分比，并且通过4-参数非线性回归按照抑制细胞病变作用50％的化合物的有效浓度来确定每种化合物的ec
50
值。
[2200]
实施例279.hrv14 hela ec
50
[2201]
在化合物给药和感染前一天，将含有10％热灭活fbs和1％青霉素/链霉素的完全rpmi 1640培养基中培养的h1-hela细胞以5000个细胞/孔接种在96孔板中。一式三份测量每种化合物的抗病毒活性。在感染之前，立即使用hp300数字分配器(hewlett packard,palo alto,ca)将化合物以连续3倍稀释液直接添加到细胞培养物中。将板转移到bsl-2限制中，并向含有细胞和连续稀释的化合物的每个孔中添加100μl的hrv14病毒储备液的1/4000稀释液。每张板包含6个感染的未经处理的细胞孔和6个含有5μm芦平曲韦(rupintrivir)的细胞孔，这些孔分别充当0％和100％病毒抑制对照。在感染之后，将测试板在设定为37℃/5％co2的组织培养箱中孵育96小时。孵育后，将h1-hela细胞从孵育中取出并使其平衡至25℃。通过取出100μl培养基并添加100μl的cell-titer glo活力试剂来确定细胞活力。将混合物在振荡器上在25℃处孵育10分钟，并在envision发光酶标仪上对发光信号进行定量。相对于0％和100％抑制对照，针对每个测试浓度计算病毒感染的抑制百分比，并且通过4-参数非线性回归按照抑制细胞病变作用50％的化合物的有效浓度来确定每种化合物的ec
50
值。
[2202]
实施例280.hrvc15和hrvc25 ec
50
[2203]
首先，制备hrv复制子rna。将5ug dna模板(hrvc15或hrvc25)用2μl在neb缓冲液-3中的mlui酶以25μl的最终体积在37℃处线性化3小时。孵育后，在pcr纯化柱上纯化线性化dna，并且使用以下条件进行以下体外转录：10μl的ribomax express t7 2
×
缓冲液、1μl-8μl的线性dna模板(1μg)、0μl-7μl无核酸酶的水、2μl酶混合物t7express。混合20μl的最终体积并在37℃处孵育30分钟。孵育后，添加1μl的rq1不含rna酶的dna酶，并将混合物在37℃处孵育15分钟。然后用megaclear试剂盒(gibco life technologies目录号11835-030)纯化所得rna，并用50μl洗脱缓冲液在95℃处洗脱两次。在转染前一天，将含有10％热灭活fbs和1％青霉素/链霉素的完全rpmi 1640培养基中培养的h1-hela细胞以2e6个细胞/瓶的浓度接种到t-225烧瓶中，并且在37℃/5％co2处孵育过夜。在转染当天，按照标准细胞培养方案对细胞进行胰蛋白酶化，并用pbs洗涤两次。洗涤后，将细胞以1e7个细胞/ml的浓度重悬在pbs中，并将悬浮液储存在湿冰上。使用电穿孔将复制子rna引入h1-hela细胞中。将分别含有10μg复制子c15或1μg c25复制子rna的10μl最终体积移液到4mm电穿孔小杯中。通过轻轻旋转混合h1-hela细胞储备液，并且将先前制备的0.5ml细胞储备液转移到含有复制子rna的小杯中。轻弹合并的溶液以混合。混合后，立即将细胞使用以下设置进行电穿孔：900v、25uf、无限电阻、1个脉冲。将小杯在冰上静置10分钟。孵育10分钟后，每次电穿孔添加19ml环境温度、无酚红且无抗生素的含10％热灭活fbs的rpmi 1640。将150μl(4e4个细胞)的电穿孔细胞悬浮液接种到96孔透明底、白色细胞培养板的每孔中，并在25℃处孵育30分钟。使用hp300数字分配器(hewlett packard,palo alto,ca)将化合物以连续3倍稀释液直接添加到细胞培养物中并且一式三份地测试。添加化合物后，将板在33℃处孵育48小时。然
后通过renilla-glo荧光素酶测定系统测量复制子活性。在信号定量之前，将板从培养箱中取出，并且在从每个孔中取出50ul之后，使板平衡至25℃。按照制造商的方案，制备renilla-glo底物与缓冲液的1:100稀释液，并向每个孔中添加100ul的renill-glo荧光素酶混合物。然后将板在25℃处在轻轻搅动下孵育20分钟，并且使用envision荧光素酶定量读数仪用0.1秒检测设置确定荧光素酶信号。相对于实验中包括的0％和100％抑制对照，针对每个测试浓度计算复制子抑制的抑制百分比，并且通过4-参数非线性回归按照抑制荧光素酶信号50％的化合物的有效浓度来确定每种化合物的ec
50
值。
[2204]
实施例281.denv-2 huh-7 rep ec
50
[2205]
在384孔板(greiner，目录号781091)中，以8个化合物(4个重复)或40个化合物剂量反应格式(3个重复)以每孔200nl声学转移化合物。对于测试的所有板，将巴拉匹韦(balapiravir)、gs-5734和nitd008作为阳性抑制对照连同0％抑制、仅dmso的阴性对照孔一起包括在内。在添加化合物之后，在标准细胞培养程序之后收获含有denv2复制子构建体的huh-7细胞，并且将其在由无庆大霉素的cdmem构成的细胞培养基中调节至1.25e5个细胞/ml的浓度。然后向每个孔添加40μl细胞储备液，最终细胞密度为5,000个细胞/孔。将细胞和化合物的混合物在37℃/5％co2处孵育48小时。在收获细胞之前，通过将3.4mg悬浮到100ul的dmso中以生成60mm储备溶液来制备enduren活细胞底物(promega，目录号e6481)。然后将储备溶液在预温热的cdmem中1:200稀释，并向384孔板的每个孔中添加10ul该稀释溶液。然后将板短暂地以500rpm离心，并将其置于板振荡器上2分钟。混合后，将板在7℃/5％co2处孵育1.5小时，之后在envision光度计上测量发光。相对于0％和100％抑制对照，针对每个测试浓度计算复制子信号的抑制百分比，并且通过4-参数非线性回归按照抑制复制子信号50％的化合物的有效浓度来确定每种化合物的ec
50
值。
[2206]
实施例282.hcv rep 1b和2a ec
50
[2207]
将化合物在384孔板中以十个1:3稀释步骤连续稀释。所有连续稀释在同一384孔板内以每种化合物四个重复进行。添加100μm的hcv蛋白酶抑制剂itmn-191作为对hcv复制100％抑制的对照，同时包含10mm的嘌呤霉素作为100％细胞毒性的对照。向黑色聚苯乙烯384孔板(greiner bio-one,monroe,nc)的每个孔中，用biotekμflow工作站添加90μl含有2000个悬浮hcv复制子细胞的细胞培养基(不含遗传霉素(geneticin))。对于向细胞培养板中的化合物转移，在biomek fx工作站上将0.4μl来自化合物连续稀释板的化合物溶液转移到细胞培养板中。最终测定孔中的dmso浓度为0.44％。将板在37℃处以5％co2和85％湿度孵育3天。hcv复制子测定是多重测定，能够评估来自同一孔的细胞毒性和抗复制子活性两者。首先进行cc
50
测定。抽吸384孔细胞培养板中的培养基，并且使用biotek elx405板洗涤器将孔用各100μl的pbs洗涤四次。用biotekμflow工作站向板的每个孔中添加在1
×
pbs中含有400nm钙黄绿素am(anaspec,fremont,ca)的50μl体积的溶液。将板在室温下孵育30分钟，之后用perkin-elmer envision酶标仪测量荧光信号(激发490nm，发射520nm)。在与cc
50
测定相同的孔中进行ec
50
测定。用biotek elx405板洗涤器抽吸384孔细胞培养板中的钙黄绿素-pbs溶液。用biotekμflow工作站向板的每个孔中添加20μl体积的dual-glo荧光素酶缓冲液(promega,madison,wi)。将板在室温下孵育10分钟。用biotekμflow工作站向板的每个孔中添加含有dual-glo stop&glo底物(promega,madison,wi)和dual-glo stop&gl缓冲液(promega,madison,wi)的1:100混合物的20μl体积的溶液。然后将板在室温下孵育10分
钟，之后用perkin-elmer envision酶标仪测量发光信号。
[2208]
实施例283.hep-2和mt4 cc
50
[2209]
在未感染的细胞中使用细胞活力试剂以之前对于其他细胞类型描述的相似方式确定化合物的细胞毒性(cihlar等人，antimicrob agents chemother.2008,52(2):655-65.)。将hep-2细胞(1.5
×
103个细胞/孔)和mt-4细胞(2
×
103个细胞/孔)平板接种在384孔板中并与含有3倍连续稀释的化合物(范围为15nm至100,000nm)的适当培养基一起孵育。将细胞在37℃处培养4天-5天。孵育后，使细胞平衡至25℃，并且通过添加cell-titer glo活力试剂来确定细胞活力。将混合物孵育10分钟，并且使用envision酶标仪定量发光信号。未处理的细胞和以2μm嘌呤霉素(sigma,st.louis,mo)处理的细胞分别充当100％和0％细胞活力对照。相对于0％和100％对照，针对每个测试的化合物浓度计算细胞活力百分比，并且通过非线性回归按照使细胞活力降低50％的化合物浓度来确定cc
50
值。
[2210]
表3.活性
[2211]
[2212]
[2213]
[2214]
[2215]
[2216]
[2217][2218]
表4.活性
[2219][2220]
表5.活性
[2221]
[2222]
[2223]
[2224]
[2225]
[2226][2227]
表6.活性
[2228]
[2229][2230]
表7.活性
[2231][2232]
虽然为了清楚理解的目的已通过说明和实施例的方式较详细地描述了前述发明，但本领域技术人员将理解，可在所附权利要求书的范围内实践某些变化和修改。此外，本文提供的每个参考文献全文以引用方式并入，其程度如同每个参考文献单独地以引用方式并入。在本技术与本文提供的参考文献之间存在冲突的情况下，本技术应占主导地位。