脂质体制剂的制作方法

本发明涉及优选地用于治疗癌症、更优选地用于治疗软组织肉瘤的热敏性脂质体及其组合物的领域。

背景技术：

1、已提出将刺激响应性纳米载体诸如热敏性脂质体(thermosensitive liposome；tsl)作为各种活性药物成分的药物递送系统。yatvin等人描述了第一种在加热时释放亲水性活性药物成分的热敏性脂质体制剂[1](基于1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc))。

2、在人类临床试验中评估由needham等人[2]开发的基于溶血脂的热敏性脂质体(lysolipid-based thermosensitive liposome；ltsl)制剂。该制剂由dppc、1-硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(s-lyso-pc)和1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-n-甲氧基(peg)-2000(dspe-peg2000)构成。然而，该制剂在血流中展示出不令人满意的稳定性。

3、为了克服该稳定性问题，开发了1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷酸-外消旋-寡-甘油(pgn)。在2004年，描述了一种用于热敏性脂质体的磷脂组合物dppc/dspc/dppg2 50:20:30(mol/mol)(dppg2-tsl30％)[3]。该制剂已在体外与ltsl制剂进行了广泛的比较。然而，尚未研究如何实现这些制剂的长期储存[4,5]。

4、因此，在本领域中存在实现基于dppg2-tsl的药物递送系统的未满足的需求，所述系统具有合适的稳定性以允许工业规模制造和长期储存。特别地，用于人类患者的热敏性脂质体制剂的临床前开发中的挑战是实现在不影响向患者的实体肿瘤的热诱导局部药物递送所需的温度>39℃下的不稳定性的情况下稳定且可长期储存的制剂。最佳制剂必须在不存在影响患者的治疗功效和安全性的质量关键规格变化的情况下经受住工业规模制造过程并且需要是可长期储存的。

技术实现思路

1、热敏性脂质体

2、在第一方面，本发明提供了一种热敏性脂质体，其包含双层和脂质体内缓冲液，其中所述双层中的1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)的摩尔浓度为至少15％，其中所述热敏性脂质体包含活性药物成分，并且其中所述活性药物成分与包含在所述双层中的脂质之间的摩尔比为0.05至0.3。这样的热敏性脂质体在本技术中被称为根据本发明或本发明的脂质体或者根据本发明或本发明的热敏性脂质体。

3、除非另有明确定义，否则在本发明的上下文中，双层中的脂质的摩尔浓度是指所述脂质的摩尔量与包含在所述双层中的所有脂质的总摩尔量的比率。

4、脂质体是包含至少一个双层和脂质体内缓冲液的球形系统，其中所述脂质体内缓冲液是由所述双层包围的水溶液(参见图1)。如技术人员所熟知的，双层包含两层两亲性分子，其取向方式使得双层的超分子结构的特征在于两个亲水表面由疏水中间体隔开。脂质体的脂质体内缓冲液是由包含在所述脂质体中的双层包围的任何水溶液。脂质体外缓冲液为水溶液，其中所述脂质体是分散的。很明显，脂质体内缓冲液接触双层的凹亲水表面，而脂质体外缓冲液接触双层的凸亲水表面。

5、脂质体可以是单层或多层的。单层脂质体仅含有包围脂质体内缓冲液的单一双层，而多层脂质体包含多于一个双层。在多层脂质体中，外部双层为包围包含在所述多层脂质体中的其他双层的双层。在多层脂质体的上下文中，脂质体内缓冲液是指由外部双层包围的任何水溶液。优选地，包含在多层脂质体中的双层以基本上同心的构型存在。如果在多层脂质体的上下文中提及“所述双层”或“双层”，则意指外部双层。

6、脂质是可溶于非极性溶剂诸如烃中的分子。除非另有明确说明，否则脂质在本文中是指包含在双层中的两亲或疏水分子，其可溶于非极性溶剂。就此而言，术语双层和脂质双层在本技术的上下文中可互换使用。在本技术的上下文中，两亲表面活性剂为脂质。术语脂质优选地仅指可溶于非极性溶剂中的小分子，其中小分子的分子量低于900道尔顿。根据该优选定义，包含在双层中的分子量大于900道尔顿的两亲或疏水蛋白质不是脂质。

7、很明显，(脂质)双层可以包含非脂质组分。(脂质)双层可以包含非两亲分子。例如，疏水小分子可以存在于双层的疏水中间体中，或者亲水肽可以与双层的亲水表面中的一者结合。

8、根据本发明的脂质体可以通过根据本发明的方法来制备，如下文所定义的。

9、热敏性

10、如技术人员所熟知，双层不为静态结构并且其中包含的分子能够在双层平面中移动，即平移和旋转。膜的流动性或移动性是指分子在双层平面中的这种运动可以发生的难易程度。

11、双层可以以特征在于高流动性的液相(液晶相)存在，或以特征在于低流动性的固相(凝胶相、固体凝胶相)存在。其中具有特定组成的双层在特定环境中存在的相主要由温度和包含在所述双层中的分子的特性确定。在固相中，包含在所述双层中的脂质以表明晶体结构的结构化方式有序排列，而在液相中，脂质为无序的并且能够在双层平面中自由扩散。

12、具有特定组成的双层(例如由一组特定摩尔比的特定脂质组成)在温度低于凝胶至液相转变温度的情况下将以固相存在，并且在温度高于凝胶至液相转变温度的情况下将以液相存在。在本技术的上下文中，凝胶至液相转变温度也被称为转变温度或tm。转变温度主要由包含在所述双层中的分子的特性确定，并且因此由包含在所述双层中的脂质确定。

13、脂质的转变温度被定义为包含双层的热敏性脂质体的转变温度，其中所述双层基本上由所述脂质组成。在此上下文中，“基本上由……组成”意指所述双层中的所述脂质的摩尔浓度为至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％。

14、在凝胶至液相转变温度附近的温度下，所述双层的结构包含自由扩散的脂质和有序脂质筏两者。换言之，所述双层的结构介于在低于转变温度的温度下的所述双层的结构与在高于转变温度的温度下的所述双层的结构之间。在本技术的上下文中，双层的转变温度范围为其中所述双层具有这样的混合结构的温度范围。显然，转变温度范围包括转变温度，并且转变温度范围主要由包含在所述双层中的脂质确定。

15、从根据本发明的热敏性脂质体释放活性药物成分是指将所述活性药物成分从所述热敏性脂质体转移至脂质体外缓冲液。在本文中，应理解所述转移并不意味着将所述活性药物成分的所有分子转移至脂质体外缓冲液，而是意味着将给定摩尔百分比(如下文优选地定义)的所述活性药物成分转移至脂质体外缓冲液。优选地，所述活性药物成分包含在所述热敏性脂质体的脂质体内缓冲液中，并且转移是从脂质体内缓冲液至脂质体外缓冲液。

16、在优选的实施方案中，活性药物成分从热敏性脂质体的释放意指至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％或100％的所述活性药物成分在给定时间段内从所述热敏性脂质体转移至脂质体外缓冲液。优选地，所述时间段为30分钟、25分钟、20分钟、15分钟、14分钟、13分钟、12分钟、11分钟、10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、285秒、270秒、255秒、240秒、225秒、210秒、195秒、180秒、165秒、150秒、135秒、120秒、105秒、90秒、75秒、60秒、60秒、55秒、50秒、45秒、40秒、35秒、30秒、25秒、20秒、15秒、10秒或5秒。

17、在更优选的实施方案中，活性药物成分从热敏性脂质体的释放意指至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％或100％的所述活性药物成分在10分钟内从所述热敏性脂质体转移至脂质体外缓冲液。

18、在甚至更优选的实施方案中，活性药物成分从热敏性脂质体的释放意指至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少97.5％、至少98％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％或100％的所述活性药物成分在5分钟内从所述热敏性脂质体转移至脂质体外缓冲液。

19、在最优选的实施方案中，活性药物成分从热敏性脂质体的释放意指至少90％的所述活性药物成分在5分钟内从所述热敏性脂质体转移至脂质体外缓冲液。

20、活性药物成分的转移速率量化所述活性药物成分穿过热敏性脂质体的双层的转运速度。显然，转移速率可以取决于一组环境条件诸如温度。活性药物成分的释放是指热敏性脂质体在一组给定条件下(优选地在超过给定温度下(参见下文))具有活性药物成分的高转移速率的特性。例如，从根据本发明的热敏性脂质体释放多柔比星可以仅在所述热敏性脂质体中包含的双层的转变温度附近的温度下发生，从而允许抗癌药物的热选择性递送。

21、如上所述，活性药物成分从根据本发明的热敏性脂质体的释放优选地是从脂质体内缓冲液至脂质体外缓冲液。在本技术的上下文中，活性药物成分的装载被定义为所述活性药物成分从脂质体外缓冲液转移至脂质体内缓冲液。术语释放和装载优选地用于亲水性、水溶性活性药物成分。

22、优选地，所述释放和装载经由所述活性药物成分从脂质体内缓冲液至脂质体外缓冲液的扩散而发生，或反之亦然，从而所述活性药物成分子在不进行主动转运的情况下通过双层。技术人员熟知，分子通过或穿过(脂质)双层的主动转运意指包含在所述双层中或与所述双层相关的转运蛋白是所述转移所必需的。应注意，主动装载并不意味着主动转运。在该优选定义的上下文中，转移速率(经由扩散)取决于所述活性药物成分的双层渗透性。所述渗透性取决于所述活性药物成分的特征诸如大小、极性、电荷和/或亲水性以及双层的渗漏性。双层的渗漏性为双层的固有渗透性。优选地，对于具有给定电荷的给定活性药物成分，双层渗漏性的提高或降低在本技术中分别定义为所述双层的渗透性的提高或降低。更优选地，所述活性药物成分为抗肿瘤剂，优选地其中所述抗肿瘤剂选自由以下组成的组：伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐以及多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐。最优选地，所述活性药物成分为多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐。

23、包含在根据本发明的热敏性脂质体中的双层的渗漏性为所述热敏性脂质体在药物应用中的用途的重要参数。例如，如果包含在所述热敏性脂质体中的双层的渗漏性将允许在有此需要的患者中释放所述多柔比星，则包含多柔比星作为活性药物成分的根据本发明的热敏性脂质体可以用作药物递送系统。

24、热敏性脂质体在本技术中定义为包含活性药物成分的脂质体，其中所述活性药物成分在特定温度或低于特定温度时不释放，并且其中所述活性药物可以通过将温度升高至略高于所述温度而释放。优选地，所述温度为人体温度。优选地，所述特定温度为36℃至40℃、或36℃至39℃、或36℃至38℃、或36.5℃至37.5℃。在此上下文中，“略高于”意指至少高1℃、或至少高1.1℃、或至少高1.2℃、或至少高1.3℃、或至少高1.4℃、或至少高1.5℃、或至少高1.6℃、或至少高1.7℃、或至少高1.8℃、或至少高1.9℃、或至少高2℃、或至少高2.1℃、或至少高2.2℃、或至少高2.3℃、或至少高2.4℃、或至少高2.5℃、或至少高2.6℃、或至少高2.7℃、或至少高2.8℃、或至少高2.9℃、或至少高3℃、或至少高3.1℃、或至少高3.2℃、或至少高3.3℃、或至少高3.4℃、或至少高3.5℃、或至少高3.6℃、或至少高3.7℃、或至少高3.8℃、或至少高3.9℃、或至少高4℃、或至少高4.1℃、或至少高4.2℃、或至少高4.3℃、或至少高4.4℃、或至少高4.5℃、或至少高4.6℃、或至少高4.7℃、或至少高4.8℃、或至少高4.9℃、或至少高5℃。

25、在优选的实施方案中，热敏性脂质体定义为一种脂质体，其中所述活性药物成分在人体温度或低于人体温度时不释放，并且其中所述活性药物可以通过将温度升高至以下温度而释放：高于39℃、高于39.1℃、高于39.2℃、高于39.3℃、高于39.4℃、高于39.5℃、高于39.6℃、高于39.7℃、高于39.8℃、高于39.9℃、高于40℃、高于40.1℃、高于40.2℃、高于40.3℃、高于40.4℃、高于40.5℃、高于40.6℃、高于40.7℃、高于40.8℃、高于40.9℃、高于41℃、高于41.1℃、高于41.2℃、高于41.3℃、高于41.4℃、高于41.5℃、高于41.6℃、高于41.7℃、高于41.8℃、高于41.9℃、高于42℃、高于42.1℃、高于42.2℃、高于42.3℃、高于42.4℃、高于42.5℃、高于42.6℃、高于42.7℃、高于42.8℃、高于42.9℃、高于43℃、高于43.1℃、高于43.2℃、高于43.3℃、高于43.4℃、高于43.5℃、高于43.6℃、高于43.7℃、高于43.8℃、高于43.9℃或高于44℃。

26、在更优选的实施方案中，热敏性脂质体定义为一种脂质体，其中所述活性药物成分在36.5℃至37.5℃的温度下不释放，并且其中所述活性药物可以通过将温度升高至高于40℃而释放。

27、不受此理论的束缚，活性药物成分从温度略微升高所诱导的热敏性脂质体的转移可以由包含在所述热敏脂质体中的双层从固相至凝胶相的转变引起。在此上下文中，所述双层的转变温度略高于或低于所述活性药物成分不释放的温度。在高于转变温度时，所述活性药物可以通过略微加热(如上文所定义)而释放。在转变温度附近，双层包含处于固相的区域与处于液相的区域两者。在这些相的边界处，脂质的堆积缺陷出现，导致活性药物成分的局部扩散速率较高。换言之，热敏性脂质体中活性药物成分的温度诱导的转移可以经由脂质双层中的开口进行，脂质双层中的开口由于堆积缺陷而在双层转变温度附近出现。与双层完全处于固相的情况相比，在转变温度附近下的双层的渗漏性更高。

28、活性药物成分

29、如技术人员所理解的，包含在根据本发明的热敏性脂质体中的活性药物成分为具有生物或临床活性并且负责与所述热敏性脂质体或与包含所述热敏性脂质体的组合物相关的治疗作用(即药效学作用)的分子。在此上下文中，根据本发明的热敏性脂质体可以设想为用于所述活性药物成分的药物递送系统。优选地，所述治疗作用为治疗、缓解、延迟、治愈和/或预防癌症，更优选地软组织肉瘤。

30、包含在根据本发明的热敏性脂质体中的活性药物成分的纯度和浓度可以用hplc来测定，如实施例1中所述。

31、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分包含在所述脂质体内缓冲液中。

32、在另一个优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少91％、或至少92％、或至少93％、或至少94％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或至少99.5％、或至少99.9％的所述活性药物成分包含在所述脂质体内缓冲液中。

33、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为亲水性和/或水溶性的。优选地，水溶性意指在25℃下在水中至少100mg/l、200mg/l、300mg/l、400mg/l、500mg/l、600mg/l、700mg/l、800mg/l、900mg/l、1000mg/l、1500mg/l、2000mg/l、2500mg/l、3000mg/l、3500mg/l、4000mg/l、4500mg/l、5000mg/l、10 000g/l、20000g/l、30 000g/l、40 000g/l或至少50 000g/l的溶解度。

34、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为抗肿瘤剂，优选地其中所述抗肿瘤剂包含在所述热敏性脂质体所包含的脂质体内缓冲液中。

35、在更优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：蒽环类，诸如多柔比星、柔红霉素、伊达比星、表柔比星、阿柔比星、氨柔比星、吡柔比星、戊柔比星和唑柔比星；蒽醌类，诸如米托蒽醌和匹杉琼(pixantrone)；抗肿瘤抗生素，诸如丝裂霉素和博来霉素；长春花生物碱，诸如长春花碱、长春新碱和长春瑞滨；烷化剂，诸如环磷酰胺和盐酸氮芥；喜树碱，诸如拓扑替康、伊立替康(cpt-11)、勒托替康(lurtotecan)、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱和10-羟基喜树碱；嘌呤和嘧啶衍生物，诸如5-氟尿嘧啶、吉西他滨(2',2'-二氟-2'-脱氧胞苷，dfdc)、氟尿苷(fudr)、阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷)、6-氮尿嘧啶(6-au)；氧氮磷环类，诸如环磷酰胺、异环磷酰胺和曲磷胺；紫杉烷类，诸如紫杉醇和多西紫杉醇；鬼臼毒素衍生物，诸如鬼臼乙叉甙和替尼泊苷；铂类化合物，诸如顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂；氨甲喋呤；酪氨酸激酶抑制剂，诸如伊马替尼(imatinib)、吉非替尼、厄洛替尼(erlotinib)、舒尼替尼(sunitinib)、阿达沃替尼(adavosertib)和拉帕替尼(lapatinib)；以及阿糖胞苷类，诸如胞嘧啶阿拉伯糖苷。

36、在甚至更优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星、柔红霉素、米托蒽醌、伊达比星、表柔比星、阿柔比星、氨柔比星、吡柔比星、戊柔比星、唑柔比星、匹杉琼、丝裂霉素、博来霉素、长春花碱、长春新碱、长春瑞滨、环磷酰胺、盐酸氮芥、拓扑替康、伊立替康、勒托替康、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱、10-羟基喜树碱、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、氟尿苷、阿糖胞苷、6-氮尿嘧啶、环磷酰胺、异环磷酰胺、曲磷胺、紫杉醇、多西紫杉醇、依托泊苷、替尼泊苷、顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、氨甲喋呤、伊马替尼、吉非替尼、厄洛替尼、舒尼替尼、阿达沃替尼、拉帕替尼和胞嘧啶阿拉伯糖苷。

37、在最优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分选自由多柔比星、伊立替康、吉西他滨及其药用盐组成的组，更优选地所述活性药物成分选自由多柔比星、伊立替康及其药用盐组成的组，最优选地所述活性药物成分为多柔比星。

38、在本技术的上下文中，活性药物成分是指所述活性药物成分的中性形式以及所有药用两性离子形式以及所有药用盐。例如，本文中使用术语多柔比星至少是指中性多柔比星和盐酸多柔比星。作为另一个实例，本文中使用术语伊立替康至少是指中性伊立替康和盐酸伊立替康。

39、根据本发明的热敏性脂质体可以包含多于一种活性药物成分。优选地，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其包含多柔比星或其药用盐和/或伊立替康或其药用盐和/或吉西他滨或其药用盐。

40、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐，并且其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、优选地0.07至0.09。优选地，提供了一种根据本实施方案的热敏性脂质体，

41、-其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；和/或

42、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；和/或

43、-其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；和/或

44、-其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和/或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，更优选地

45、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，和/或

46、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，和/或

47、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35；和/或

48、-其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示。

49、在本技术的上下文中，多柔比星衍生物优选地为蒽环，诸如柔红霉素、米托蒽醌、伊达比星、表柔比星、阿柔比星、氨柔比星、吡柔比星、戊柔比星或佐柔比星，或蒽醌，诸如米托蒽醌或匹杉琼，多柔比星衍生物最优选地为蒽环。有鉴于此，多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐优选地为蒽环或蒽醌或其药用盐，更优选地为蒽环或其药用盐。显然，多柔比星被视为一种蒽环。

50、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐，并且其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、优选地至少0.20。优选地，提供了一种根据本实施方案的热敏性脂质体，

51、-其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；和/或

52、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；和/或

53、-其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；和/或

54、-其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和/或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，更优选地

55、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，和/或

56、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，和/或

57、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35；和/或

58、-其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示，

59、-其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比低于0.3。

60、在本技术的上下文中，伊立替康衍生物优选地为喜树碱，诸如拓扑替康、勒托替康、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱或10-羟基喜树碱。有鉴于此，伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐优选地为喜树碱或其药用盐。显然，伊立替康被视为一种喜树碱。

61、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，并且其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、优选地至少0.15。优选地，提供了一种根据本实施方案的热敏性脂质体，

62、-其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；和/或

63、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；和/或

64、-其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；和/或

65、-其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和/或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，更优选地

66、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，和/或

67、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，和/或

68、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35；和/或

69、-其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示，

70、-优选地其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比低于0.3。

71、在本技术的上下文中，吉西他滨衍生物优选地为嘌呤或嘧啶衍生物，诸如5-氟尿嘧啶(5fu)、氟尿苷(fudr)、阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷)或6-氮尿嘧啶(6-au)，更优选地为嘧啶衍生物。有鉴于此，吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐优选地为嘌呤、嘧啶衍生物或其药用盐，更优选地为嘧啶衍生物或其药用盐。显然，吉西他滨被视为一种嘧啶衍生物。

72、热敏性脂质体的直径和ζ电位

73、具有给定直径的根据本发明的热敏性脂质体是具有以下的基于面积的粒度的热敏性脂质体：大于所述直径的0.95倍且小于所述直径的1.05倍，优选地大于所述直径的0.975倍且小于所述直径的1.025倍，甚至更优选地大于所述直径的0.99倍且小于所述直径的1.001倍，最优选地其中所述基于面积的粒度等于所述直径。

74、热敏性脂质体群中具有给定直径的根据本发明的热敏性脂质体的存在可以通过动态光散射来确定。优选地，具有给定直径的根据本发明的热敏性脂质体是指经由动态光散射确定的z平均直径。实施例1描述了这样的方法，其中使用dls仪器(zetasizer nanozs,malvern instruments,worcestershire,united kingdom)。该仪器用nanospheretm尺寸标准(125nm，thermo fisher scientific,waltham,ma,usa)校准。

75、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述热敏性脂质体具有至少100纳米的直径。

76、在另一个优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述热敏性脂质体具有100纳米至250纳米、或100纳米至200纳米、或100纳米至150纳米、或110纳米至140纳米、或115纳米至135纳米、或120纳米至130纳米的直径。

77、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述热敏性脂质体具有100纳米至200纳米的直径，其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10，并且其中所述脂质体内缓冲液具有5至8的ph。

78、在更优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径，其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.07至0.09，并且其中所述脂质体内缓冲液具有6.4至8.0的ph。

79、在最优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径。优选地，提供了一种根据本实施方案的热敏性脂质体，

80、-其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐、伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐、以及吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，更优选地其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星或其药用盐、伊立替康或其药用盐以及吉西他滨或其药用盐，并且其中所述活性药物成分包含在脂质体内缓冲液中，更优选地

81、○其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、优选地0.07至0.09，

82、○其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、优选地至少0.20，

83、○其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、优选地至少0.15；和/或

84、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；和/或

85、-其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；和/或

86、-其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和/或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，更优选地

87、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，和/或

88、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，和/或

89、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35；和/或

90、-其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示。

91、具有给定ζ电位值的根据本发明的热敏性脂质体是具有以下ζ电位的热敏性脂质体：大于所述值的0.95倍且小于所述值的1.05倍，优选地大于所述值的0.975倍且小于所述值的1.025倍，甚至更优选地大于所述值的0.99倍且小于所述值的1.001倍，最优选地其中所述基于面积的粒度等于所述值。

92、热敏性脂质体群中具有给定ζ电位的根据本发明的热敏性脂质体的存在可以经由dls仪器(zetasizer nano zs,malvern instruments,worcestershire,united kingdom)来确定，其中在生理盐水中稀释样品之后使用。

93、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其具有-40mv至-10mv、优选地-35mv至-20mv的ζ电位。

94、脂质体内缓冲液ph

95、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述脂质体内缓冲液具有以下ph：5.0至8.0、5.5至8.0、6.0至8.0、6.5至8.0、7.0至8.0、或7.0至7.5。在本技术的上下文中，ph可以通过ph计测量，在两点校准中使用ph参考标准溶液进行校准。

96、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述脂质体内缓冲液具有5.0至8.0的ph并且其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10，或其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18，或其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12。

97、在更优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述脂质体内缓冲液具有6.0至8.0的ph并且其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.07至0.09，或其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.20，或其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.15。

98、在更优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述脂质体内缓冲液具有6.0至8.0的ph。优选地，提供了一种根据本实施方案的热敏性脂质体，

99、-其中所述其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；和/或

100、-其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星、所述多柔比星衍生物或其药用盐、伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐、以及吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，更优选地其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星或其药用盐、伊立替康或其药用盐以及吉西他滨或其药用盐，并且其中所述活性药物成分包含在脂质体内缓冲液中，更优选地

101、○其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、优选地0.07至0.09，

102、○其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、优选地至少0.20，

103、○其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、优选地至少0.15；和/或

104、-其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；和/或

105、-其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和/或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，更优选地

106、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，和/或

107、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，和/或

108、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35；和/或

109、-其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示。

110、双层的脂质组成

111、包含在根据本发明的热敏性脂质体中的双层的组成确定所述热敏性脂质体的温度诱导的释放和稳定性的特征，并且因此确定所述热敏性脂质体的药代动力学特性。就此而言，包含在所述双层中的脂质的特性及其比例是重要的。如实施例1所述，双层的组成可以用tlc确定，并且包含在双层中的脂质的纯度和浓度可以通过hplc确定。

112、根据本发明的热敏性脂质体具有包含dppg2的双层。不受此理论的束缚，具有高度水合二甘油基团的dppg2在所述双层中的存在经由静电和疏水相互作用二者在空间上抑制与血液组分的相互作用，从而使得根据本发明的所述热敏性脂质体是无毒的，如下文所定义。

113、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述dppg2在所述双层中的摩尔浓度为至少15％、或至少16％、或至少17％、或至少18％、或至少19％、或至少20％、或至少21％、或至少22％、或至少23％、或至少24％、或至少25％、或至少26％、或至少27％、或至少28％、或至少29％、或至少30％、或至少31％、或至少32％、或至少33％、或至少34％、或至少35％。

114、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中dppg2在所述双层中的摩尔浓度低于55％、或低于54％、或低于53％、或低于52％、或低于51％、或低于50％、或低于49％、或低于48％、或低于47％、或低于46％、或低于45％、或低于44％、或低于43％、或低于42％、或低于41％、或低于40％、或低于39％、或低于38％、或低于37％、或低于36％、或低于35％、或低于34％、或低于33％、或低于32％、或低于31％、或低于30％、或低于29％、或低于28％、或低于27％、或低于26％、或低于25％、或低于24％、或低于23％、或低于22％、或低于21％、或低于20％、或低于19％、或低于18％、或低于17％、或低于16％。

115、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述dppg2在所述双层中的浓度为至少15％、或15％至55％、或15％至54％、或15％至53％、或15％至52％、或15％至51％、或15％至50％、或15％至49％、或15％至48％、或15％至47％、或15％至46％、或15％至45％、或15％至44％、或15％至43％、或15％至42％、或15％至41％、或15％至40％、或15％至39％、或15％至38％、或15％至37％、或15％至36％、或15％至35％、或15％至34％、或15％至33％、或15％至32％、或15％至31％、或15％至30％、或15％至29％、或15％至28％、或15％至27％、或15％至26％、或15％至25％、或15％至24％、或15％至23％、或15％至22％、或15％至21％、或15％至20％、或15％至19％、或15％至18％、或15％至17％、或15％至16％。

116、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述dppg2在所述双层中的浓度为15％至40％、16％至40％、17％至40％、18％至40％、19％至40％、20％至40％、21％至40％、22％至40％、23％至40％、24％至40％、25％至40％、26％至40％、27％至40％、28％至40％、29％至40％、30％至40％、15％至35％、16％至35％、17％至35％、18％至35％、19％至35％、20％至35％、21％至35％、22％至35％、23％至35％、24％至35％、25％至35％、26％至35％、27％至35％、28％至35％、29％至35％、30％至35％。

117、包含在根据本发明的热敏性脂质体中的双层优选地包含磷脂、更优选地甘油磷脂。

118、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述双层包含1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(pe)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pc)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰丝氨酸(ps)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰肌醇(pi)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰磷酸肌醇(pip)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二磷酸肌醇(pip2)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰三磷酸肌醇(pip3)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰甘油(pg)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(pg2)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰三甘油(pg3)和/或1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰四甘油(pg4)。如上所述，根据本发明的热敏性脂质体包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)，即根据定义的特定类型的pg2。

119、在更优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中包含在所述双层中的1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pc)、1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(pe)和1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)具有以下组合浓度：至少50摩尔％、至少60摩尔％、至少70摩尔％、至少80摩尔％、至少90摩尔％、至少90摩尔％、至少91摩尔％、至少92摩尔％、至少93摩尔％、至少94摩尔％、至少95摩尔％、至少96摩尔％、至少97摩尔％、至少98摩尔％或至少99摩尔％。

120、在更优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中在所述双层中的1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(pc)和1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)具有以下组合浓度：至少50摩尔％、至少60摩尔％、至少70摩尔％、至少80摩尔％、至少90摩尔％、至少90摩尔％、至少91摩尔％、至少92摩尔％、至少93摩尔％、至少94摩尔％、至少95摩尔％、至少96摩尔％、至少97摩尔％、至少98摩尔％或至少99摩尔％。

121、本文所述的(甘油)磷脂可以共价连接至聚乙二醇(peg)、甘油或聚甘油以增加所述(甘油)磷脂的亲水部分的分子量和分子大小。在peg的情况下，这样的(甘油)磷脂据称已经聚乙二醇化(pegylated)。例如，dspe-peg2000为n-甲氧基(peg)-2000-1,2-二酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(pe)。不受此理论的束缚，热敏性脂质体中聚乙二醇化(甘油)磷脂的存在具有与上述dppg2的存在类似的效果，即与血液组分相互作用的空间抑制。

122、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述双层不包含peg。换言之，这样的双层不包含聚乙二醇化脂质。

123、与聚乙二醇化脂质相比，使用dppg2的一个重要优势是磷脂锚的头部基团修饰明显更小(每个甘油单位74da，相对于大约2000da)。因此，1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸-二甘油(dppg2)形成层状而非胶束结构，并且因此可以以高达70摩尔％掺入热敏性脂质体中。另一方面，dspe-peg2000掺入是有限的，因为它就像表面活性剂，其中临界胶束浓度为0.5-1.0μm，并且在高浓度下会损害膜双层稳定性。

124、在以上提及的(甘油)磷脂中，优选地酰基为c14-c22酰基，更优选地c18-20酰基。优选地，酰基选自由以下组成的组：花生基(arachidyl)、二十基(arachyl)、二十二基(behenyl)、巴西烯基(brassidyl)、蜡基、鲸蜡基、十八烯基(elaidyl)、二十二烯基(erucyl)、二十碳烯基(gadoleyl)、geddyl、异硬脂基、月桂基、木蜡基、蒙旦基(montanyl)、蜂花基(myricyl)、肉豆蔻基、油基、棕榈油基、棕榈酰基、岩芹基(petroselinyl)和硬脂基。更优选地，酰基选自由硬脂基和棕榈酰基组成的组。最优选地，酰基为棕榈酰基。

125、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dppc)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dppe)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dspc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dspe)、n-甲氧基(peg)-2000-1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)和/或1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)。

126、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中在所述双层中的1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dppc)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dppe)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dspc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dspe)、n-甲氧基(peg)-2000-1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)和1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)具有以下组合浓度：至少50摩尔％、至少60摩尔％、至少70摩尔％、至少80摩尔％、至少90摩尔％、至少91摩尔％、至少92摩尔％、至少93摩尔％、至少94摩尔％、至少95摩尔％、至少96摩尔％、至少97摩尔％、至少98摩尔％、或至少99摩尔％。在该实施方案的上下文中，应理解并非上文提及的所有脂质均可以(但不应)包含在所述热敏性脂质体中。

127、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dppc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dspc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dspe)、n-甲氧基(peg)-2000-1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)和/或1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)。

128、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中在所述双层中的1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dppc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dspc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dspe)、n-甲氧基(peg)-2000-1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(dspe-peg2000)和1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)具有以下组合浓度：至少50摩尔％、至少60摩尔％、至少70摩尔％、至少80摩尔％、至少90摩尔％、至少91摩尔％、至少92摩尔％、至少93摩尔％、至少94摩尔％、至少95摩尔％、至少96摩尔％、至少97摩尔％、至少98摩尔％或至少99摩尔％。在此实施方案的上下文中，应理解并非上文提及的所有脂质均可以(但不应)包含在所述热敏性脂质体中。

129、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和/或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)。如技术人员清楚的，dppg2是指由式(i)表示的所有化合物；dppc是指由式(ii)表示的所有化合物；dspc是指由式(iii)表示的所有化合物。

130、

131、

132、在本技术的上下文中，除非另有明确说明，否则路易斯结构或式、分子的俗名或系统名称旨在涵盖所有互变异构体(即容易互变的结构异构体)以及这些分子的立体异构体。例如，式(i)包含三个手性碳中心。这些手性碳中心中的一个的立体构型已经明确定义，并且应如此解释。其他两个手性碳中心的立体构型尚未指定。因此，关于这两个手性碳中心的所有差向异构体均由式(i)描述。还应注意，除非另有明确说明，否则路易斯结构或式、分子的俗名或系统名称旨在涵盖所有质子化状态和盐。例如，式(i)也描述dppg2，其中共价连接至磷的氧原子中的一者带负电。

133、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示：

134、

135、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中在所述双层中的1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dppc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dspc)和1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)具有以下组合浓度：至少50摩尔％、至少60摩尔％、至少70摩尔％、至少80摩尔％、至少90摩尔％、至少91摩尔％、至少92摩尔％、至少93摩尔％、至少94摩尔％、至少95摩尔％、至少96摩尔％、至少97摩尔％、至少98摩尔％、或至少99摩尔％、或至少99.5摩尔％、或至少99.6摩尔％、或至少99.7摩尔％、或至少99.8摩尔％、或至少99.9摩尔％。在该实施方案的上下文中，应理解并非上文提及的所有脂质均可以(但不应)包含在所述热敏性脂质体中。

136、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述双层由以下组成：1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dppc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dspc)和1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)。

137、根据本发明的热敏性脂质体的纯度为1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dppc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dspc)和1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)在所述双层中的组合浓度。因此，在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其具有以下纯度：至少50摩尔％、至少60摩尔％、至少70摩尔％、至少80摩尔％、至少90摩尔％、至少91摩尔％、至少92摩尔％、至少93摩尔％、至少94摩尔％、至少95摩尔％、至少96摩尔％、至少97摩尔％、至少98摩尔％、或至少99摩尔％、或至少99.5摩尔％、或至少99.6摩尔％、或至少99.7摩尔％、或至少99.8摩尔％、或至少99.9摩尔％、或100摩尔％。

138、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dppc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dspc)和1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油(dppg2)组合构成包含在所述双层中的分子数量的至少95％，并且

139、-其中所述其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；和/或

140、-其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐、伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐、以及吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，并且其中所述活性药物成分包含在脂质体内缓冲液中，更优选地

141、○其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、优选地0.07至0.09，

142、○其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、优选地至少0.20，

143、○其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、优选地至少0.15，和/或

144、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；和/或

145、-其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；和/或

146、-其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示。

147、应理解，如果双层中的一组脂质的组合浓度为给定摩尔％，则所述双层可以(但不应)包含所述一组脂质中的所有类型的脂质。举例而言，可以将其中dppc和dspc的浓度各为45摩尔％的双层描述为其中dppc、dspc和dppg2的组合浓度为至少90摩尔％的双层。

148、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和/或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55；和/或其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25；和/或其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35。

149、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55；和/或其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25；和/或其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35，优选地

150、-其中所述其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；和/或

151、-其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐、伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐、以及吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，更优选地其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星或其药用盐、伊立替康或其药用盐以及吉西他滨或其药用盐，并且其中所述活性药物成分包含在脂质体内缓冲液中，更优选地

152、○其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、优选地0.07至0.09，

153、○其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、优选地至少0.20，

154、○其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、优选地至少0.15，和/或

155、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；和/或

156、-其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；和/或

157、-其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示。

158、dppc为根据上述优选实施方案的热敏性脂质体中的主要组分，因为其转变温度(41.4℃)略高于体温。通过将dppc与转变温度为54.9℃的少量dspc混合，可以减少体温下不需要的药物渗漏(如下所定义)。

159、溶血脂为两亲分子，其为脂质水解的产物。例如，由dppc中的2-酯键水解产生的1-棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱为溶血脂。优选地，溶血脂为单酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱、单酰基-sn-甘油-3-磷脂酰甘油或单酰基-sn-甘油-3-磷脂酰二甘油。

160、不受此理论的束缚，溶血脂影响包含在根据本发明的热敏性脂质体中的双层的转变温度，从而影响包含在所述热敏性脂质体中的活性药物成分的热诱导的释放。这在实施例5中对于根据本发明的热敏性脂质体显示。因此，在根据本发明的热敏性脂质体中，低浓度的溶血脂为优选的，优选地低于5摩尔％、低于4摩尔％、低于3摩尔％、低于2摩尔％、低于1摩尔％、低于1摩尔％、低于0.9摩尔％、低于0.8摩尔％、低于0.7摩尔％、低于0.6摩尔％、低于0.5摩尔％、低于0.4摩尔％、低于0.3摩尔％、低于0.2摩尔％或低于0.1摩尔％。

161、dppgn磷脂(如dppg2)比标准磷脂(如dppc和dspc)更容易分解。与其他制剂如例如ltsl相比，这增加了稳定根据本发明的热敏性脂质体和根据本发明的组合物的挑战。下面讨论根据本发明的热敏性脂质体和根据本发明的组合物的稳定性。应进一步补充的是，包含在所述热敏性脂质体或组合物中的活性药物成分可以促进或诱导溶血脂的形成。

162、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中包含在所述热敏性脂质体所包含的双层中的溶血脂的浓度低于5摩尔％、低于4摩尔％、低于3摩尔％、低于2摩尔％、低于1摩尔％、低于1摩尔％、低于0.9摩尔％、低于0.8摩尔％、低于0.7摩尔％、低于0.6摩尔％、低于0.5摩尔％、低于0.4摩尔％、低于0.3摩尔％、低于0.2摩尔％或低于0.1摩尔％。

163、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中包含在所述热敏性脂质体所包含的双层中的溶血脂的浓度低于2摩尔％、优选地低于1摩尔％，并且

164、-其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dppc)、1,2-二硬脂基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(dspc)和1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰甘油(dppg2)组合构成包含在所述双层中的分子数量的至少95％；和/或

165、-其中所述其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；和/或

166、-其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐、伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐、以及吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，更优选地其中所述活性药物成分选自由以下组成的组：多柔比星或其药用盐、吉西他滨或其药用盐、以及伊立替康或其药用盐，并且其中所述活性药物成分包含在脂质体内缓冲液中，更优选地

167、○其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、优选地0.07至0.09，

168、○其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、优选地至少0.20，

169、○其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、优选地至少0.15，和/或

170、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；和/或

171、-其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；和/或

172、-其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示。

173、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中包含在所述热敏性脂质体中的双层不包含胆固醇。在本技术的上下文中，不包含胆固醇的双层意指不包含可检测量的胆固醇或其衍生物的双层。在此上下文中，胆固醇的衍生物优选地意指胆固醇酯。

174、包含在根据本发明的热敏性脂质体所包含的双层中的两亲分子具有形成层状或胶束结构的趋势。具有形成胶束结构趋势的两亲分子在热力学上有利于在悬浮液中形成胶束或胶束结构。具有形成层状结构趋势的两亲分子在热力学上有利于在悬浮液中形成层状结构或脂质体。在本技术的上下文中，具有形成胶束结构的高趋势的两亲分子被称为表面活性剂。例如，在本技术的上下文中，大多数溶血脂和dspe-peg2000被视为表面活性剂。

175、不受此理论的束缚，因为根据本发明的热敏性脂质体为层状结构，所以在热力学上不利于所述热敏性脂质体的形成，即所述热敏性脂质体因高浓度的表面活性剂而不稳定。

176、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中表面活性剂的浓度低于5摩尔％、低于4摩尔％、低于3摩尔％、低于2摩尔％、低于1摩尔％、低于1摩尔％、低于0.9摩尔％、低于0.8摩尔％、低于0.7摩尔％、低于0.6摩尔％、低于0.5摩尔％、低于0.4摩尔％、低于0.3摩尔％、低于0.2摩尔％或低于0.1摩尔％。

177、优选的热敏性脂质体

178、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐，并且其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、优选地0.07至0.09，

179、-其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；并且

180、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；并且

181、-优选地其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；并且

182、-其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，

183、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，并且

184、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，并且

185、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35；并且

186、-优选地其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示。

187、优选地，根据以上实施方案的热敏性脂质体包含在合适的药物递送系统中，更优选地用于治疗癌症。

188、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐，并且其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、优选地至少0.20，

189、-其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；并且

190、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；并且

191、-优选地其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；并且

192、-其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，

193、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，并且

194、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，并且

195、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35；并且

196、-优选地其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示。

197、优选地，根据以上实施方案的热敏性脂质体包含在合适的药物递送系统中，更优选地用于治疗癌症。

198、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，并且其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、优选地至少0.15，

199、-其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；并且

200、-其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；并且

201、-优选地其中所述双层不包含胆固醇或其衍生物；并且

202、-其中所述双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，

203、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，并且

204、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，并且

205、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35；并且

206、-优选地其中所述1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)由式(iv)表示。

207、优选地，根据以上实施方案的热敏性脂质体包含在合适的药物递送系统中，更优选地用于治疗癌症。

208、其他热敏性脂质体

209、本发明进一步提供了一种热敏性脂质体，其包含双层和脂质体内缓冲液，其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为至少15％，其中所述热敏性脂质体包含活性药物成分，其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph。这样的热敏性脂质体在本技术中被称为根据本发明或本发明的其他脂质体或根据本发明或本发明的其他热敏性脂质体。

210、上文在根据本发明的热敏性脂质体的上下文中描述的所有优选实施方案和定义适用于根据本发明的其他热敏性脂质体。

211、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的其他热敏性脂质体，其也是根据本发明的热敏性脂质体。

212、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的其他热敏性脂质体，其中所述活性药物成分与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.05至0.3。

213、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的其他热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐，优选地其中所述多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、更优选地0.07至0.09。

214、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的其他热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐，优选地其中所述伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、更优选地至少0.20。

215、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的其他热敏性脂质体，其中所述活性药物成分为吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，优选地其中所述吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、更优选地至少0.15。

216、脂质体的制备

217、包含活性药物成分的脂质体，诸如根据本发明的热敏性脂质体或根据本发明的其他热敏性脂质体，可以通过如技术人员已知的多种不同技术诸如脂质膜水合、乙醇注入和挤出法来制备。在实施例1中，描述了根据本发明的热敏性脂质体的制备。

218、优选地，脂质体可以通过这样的方法来制备，所述方法包括：

219、a)制备未装载的脂质体，其中所述未装载的脂质体包含与所述脂质体具有相同脂质组成的双层，并且其中所述未装载的脂质体不包含包含在所述脂质体中的活性药物成分或其中所述活性药物成分在所述未装载的脂质体的脂质体内缓冲液中的浓度是低的，如下文所定义；

220、ac)优选地挤出所述未装载的脂质体以获得单层脂质体；以及

221、b)将所述未装载的脂质体装载在装载缓冲液中。

222、在根据上述方法制备在脂质体内缓冲液中包含活性药物成分的脂质体(诸如根据实施例1中描述的根据本发明的热敏性脂质体)期间，首先制备在所述脂质体内缓冲液中没有所述活性药物成分或具有低浓度的所述活性药物成分的相应的未装载的脂质体(未装载的脂质体)。接着，在装载期间增加所述脂质体内缓冲液中的所述活性药物成分的浓度。低浓度优选地意指低于最终脂质体的脂质体内缓冲液中所述活性药物成分的浓度的0.1倍、或低于0.01倍、或低于0.001倍、或低于0.0001倍。没有活性药物成分优选地意指没有可检测量的所述活性药物成分。在本文中，所述活性药物成分的浓度可以通过高效液相色谱(hplc)确定，如实施例7所示。

223、如在上述方法的步骤b)中进行的装载是将活性药物成分从脂质体外缓冲液转移至脂质体内缓冲液，由此所述活性药物成分通过双层。在此意义上而言，(活性药物成分的)装载可以设想为(活性药物成分的)释放的逆过程。在本技术的上下文中，装载期间的脂质体外缓冲液也被称为装载缓冲液。

224、在本发明的一个方面，提供了一种用于制备包含活性药物成分的脂质体的方法，其中所述方法包括如上所述的步骤a)和b)，并且其中所述装载缓冲液具有至少66mm的盐浓度和至少250mosmol/kg的克分子渗透压浓度。更优选地，所述装载缓冲液具有至少66mm的盐浓度和250mosmol/kg至350mosmol/kg的克分子渗透压浓度。优选地，在所述优选方法中的所述脂质体为根据本发明的热敏性脂质体或根据本发明的其他热敏性脂质体。

225、在实施例6中，示出了根据本发明的热敏性脂质体可以通过上述优选方法使用具有66mm的盐浓度和294mosmol/kg或300mosmol/kg的克分子渗透压浓度的装载缓冲液来制备。具体而言，在实施例6中已示出，具有高盐浓度和克分子渗透压浓度的装载缓冲液产生较短的装载时间(对于具有300mosmol/kg的克分子渗透压浓度而不具有海藻糖的缓冲液a为20分钟，对于具有294mosmol/kg的克分子渗透压浓度和8.9％(wt/v)海藻糖的缓冲液c为90分钟)。

226、在本发明的另一个方面，提供了一种用于制备包含活性药物成分的脂质体的方法，其中所述方法包括如上所述的步骤a)和b)，其中所述方法包括缓冲液更换，其中所述方法包括使用装载缓冲液和使用储存缓冲液，并且其中所述储存缓冲液具有低于100mm的盐浓度和高于300mosmol/kg的克分子渗透压浓度。更优选地，所述储存缓冲液具有低于100mm的盐浓度和300mosmol/kg至450mosmol/kg的克分子渗透压浓度。

227、接触包含在根据本发明的脂质体中的双层的水溶液为脂质体外缓冲液。在(药物)组合物的上下文中，如果所述热敏性脂质体分散在所述脂质体外缓冲液中，则所述脂质体外缓冲液被称为储存缓冲液。

228、实施例9表明，采用缓冲液更换至具有低盐水浓度的储存缓冲液的方法导致更少的包含在其中的活性药物成分的渗漏，并且导致更高的分散稳定性。

229、在本技术的上下文中，根据本发明的上述方面的方法被称为根据本发明的方法。必须注意，上面在热敏性脂质体的上下文中提供的定义和实施方案可以比照着适用于在根据本发明的方法的上下文中提及的一般脂质体。例如，热敏性脂质体的直径以与本文描述的制备方法的脂质体的直径相同的方式明确定义。

230、技术人员清楚，根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物也可以通过根据本发明的方法或通过包括根据本发明的方法的方法来制备。

231、与根据本发明的热敏性脂质体或包含根据本发明的热敏性脂质体的组合物有关的任何偏好或实施方案可以与根据本发明的方法组合，意味着这些偏好和实施方案也公开了用于制备这样的热敏性脂质体或组合物的根据本发明的相应方法。

232、在根据本发明的方法的上下文中，很明显，相对于包含在双层中的脂质的浓度可以是指包含在所述未装载的脂质体的双层或所述脂质体的双层中的脂质，因为这些双层的脂质组成是相同的。

233、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中所述装载缓冲液具有至少66mm的盐浓度和250mosmol/kg至350mosmol/kg的克分子渗透压浓度，并且所述储存缓冲液具有低于100mm的盐浓度和高于300mosmol/kg的克分子渗透压浓度。最优选地，所述装载缓冲液具有66mm至120mm的盐浓度和250mosmol/kg至350mosmol/kg的克分子渗透压浓度，并且所述储存缓冲液具有低于100mm的盐浓度和390mosmol/kg的克分子渗透压浓度。

234、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中所述脂质体包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)，优选地其中dppg2在所述脂质体的双层中的摩尔浓度为0.10至0.95、0.10至0.90、0.10至0.85、0.10至0.80、0.10至0.75、0.10至0.70、0.10至0.65、0.10至0.60、0.10至0.55、0.10至0.50、0.10至0.45、0.10至0.40、0.15至0.35、或0.20至0.30。

235、在更优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中所述脂质体为热敏性脂质体。在甚至更优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中所述脂质体为根据本发明的热敏性脂质体或根据本发明的其他热敏性脂质体。在最优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中所述脂质体为根据本发明的热敏性脂质体。

236、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在包含在所述未装载的脂质体中的所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55；和/或其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在包含在所述未装载的脂质体中的所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25；和/或其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在包含在所述未装载的脂质体中的所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35。

237、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中所述未装载的脂质体具有100纳米至200纳米、优选地100纳米至150纳米的直径。

238、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，

239、其中所述活性药物成分为多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐，并且其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、优选地0.07至0.09；或

240、其中所述活性药物成分为伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐，并且其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、优选地至少0.20；或

241、其中所述活性药物成分为吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，并且其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、优选地至少0.15。

242、优选地，根据本发明的方法不包含添加胆固醇或其衍生物。

243、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中包括在所述方法中的步骤a)包括：

244、aa)制备与所述脂质体的双层中的脂质具有相同摩尔比的脂质在有机溶剂中的溶液；

245、ab)将脂质的所述溶液与水溶液混合，

246、其中在不存在所述活性药物成分的情况下所述水溶液具有与包含在所述脂质体中的脂质体内缓冲液基本相同的组成，优选地其中所述水溶液具有5至8、优选地6至8的ph，并且

247、其中所述混合优选地经由有机溶剂注入进行，并且

248、其中所述混合导致形成未装载的脂质体；以及

249、ac)优选地将所述未装载的脂质体挤出以获得单层脂质体。

250、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中包括在所述方法中的步骤a)包括如上所定义的步骤aa)、ab)和ac)，并且其中用于步骤aa)中的所述有机溶剂选自由能够溶解脂质的有机溶剂组成的组，优选地其中所述有机溶剂选自由以下组成的组：氯仿/甲醇9:1(vol/vol)、氯仿、甲醇、异丙醇、乙醇及其混合物。

251、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中包括在所述方法中的步骤a)包括如上所定义的步骤aa)、ab)和ac)，并且其中用于步骤ab)中的所述水溶液包含选自由以下组成的组的缓冲液：(nh4)2so4缓冲液、(nh4)2hpo4缓冲液、磷酸盐缓冲液和hbs缓冲液。

252、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的方法，其中包括在所述方法中的步骤a)包括如上所定义的步骤aa)、ab)和ac)，并且其中所述挤出在脂质呈液相状态的温度下进行。

253、在根据本发明的方法的步骤b)中的未装载的脂质体的所述装载导致所述活性药物成分转移至脂质体外缓冲液，并且在下文中更详细地描述。

254、优选地，所述装载在35℃至39℃、更优选地36℃至38℃、最优选地37℃至38℃的温度下进行。

255、根据本发明的方法优选地进一步包括过滤步骤。

256、上述优选制备方法在图2中例示，其中乙醇注入在步骤(ab)中使用。应注意，图2提及两次缓冲液更换。第一次涉及在步骤(ab)结束时将脂质体外缓冲液更换为装载缓冲液。第二次涉及将装载缓冲液更换为储存缓冲液。

257、优选地，根据本发明的方法包括缓冲液更换。缓冲液更换被定义为由新的脂质体外缓冲液完全或部分替代脂质体外缓冲液。在本文中，应理解，替代可以是调整所述缓冲液中组分的浓度，向所述缓冲液中添加组分，和/或从所述缓冲液中移除组分。用于缓冲液更换的优选方法选自由以下组成的组：切向流过滤(tangential flow filtration；tff)、层析和离心，优选地切向流过滤。

258、被动装载是由所述活性药物成分跨所述双层的浓度梯度驱动的装载。对于根据本发明的热敏性脂质体，在高于所述热敏性脂质体的转变温度的温度下，所述活性药物成分在脂质体外缓冲液中的浓度与所述活性药物成分在脂质体内缓冲液中的浓度之间的高比率导致跨越处于液相的所述双层的转移。高比率优选地意指至少10、或至少100、或至少1000、或至少10000。优选地，在被动装载开始时，在所述脂质体内缓冲液中不存在可检测量的所述活性药物成分。在本文中，所述活性药物成分的浓度通过hplc来确定。在将所需量的活性药物成分转移至脂质体内缓冲液之后，降低温度并且所述双层还原为凝胶相。由于呈凝胶相的双层的渗透性较低，所以在脂质体内中的活性药物成分不会轻易转移至脂质体外缓冲液中，即使脂质体外中活性药物成分的浓度较低。

259、主动装载是由离子跨所述双层的梯度驱动的装载。例如，这可以是铵梯度、质子梯度(即ph梯度)或edta盐梯度。举例而言，多柔比星、伊立替康和吉西他滨(所有这些均为水溶性活性药物成分)可以经由主动装载转移至根据本发明的热敏性脂质体中的脂质体内缓冲液中。这在实施例1中详细描述。

260、优选地，根据本发明的方法包括d)将所述经装载的脂质体在以下条件下储存于储存缓冲液中：在5℃左右的温度下1至5周、在5℃左右的温度下1至10周、在5℃左右的温度下1至15周、在5℃左右的温度下1至20周、或在5℃左右的温度下1至20周、或在-20℃左右的温度下1至16个月、或在-20℃左右的温度下12至16个月。更优选地，所述经装载的脂质体在所述储存后是稳定的，如下文所定义。

261、优选地，根据本发明的方法包括将至少一种赋形剂添加至组织和/或细胞和/或组织和/或细胞中，所述至少一种赋形剂可以进一步有助于增强所述脂质体和/或包含所述组合物的组合物的递送。

262、在优选的实施方案中，提供了一种用于制备脂质体、优选地热敏性脂质体、更优选地根据本发明的热敏性脂质体或根据本发明的其他热敏性脂质体、最优选地根据本发明的热敏性脂质体的方法，所述方法包括：

263、a)制备未装载的脂质体，其中所述未装载的脂质体包含与所述脂质体具有相同脂质组成的双层，并且其中所述未装载的脂质体不包含所述脂质体中包含的活性药物成分，其中制备所述未装载的脂质体的所述a)包括：

264、aa)制备具有与所述脂质体的双层中的脂质相同的摩尔比的脂质在有机溶剂中的溶液，优选地其中所述有机溶剂为氯仿/甲醇9:1(vol/vol)、氯仿或乙醇；以及

265、ab)将脂质的所述溶液与水溶液混合，

266、其中在不存在所述活性药物成分的情况下所述水溶液具有与包含在所述脂质体中的脂质体内缓冲液基本相同的组成，优选地其中所述水溶液具有5至8、优选地6至8的ph，并且

267、优选地其中所述水溶液包含选自由以下组成的组的缓冲液：(nh4)2so4缓冲液、(nh4)2hpo4缓冲液、磷酸盐和hbs缓冲液，并且

268、其中所述混合优选地经由有机溶剂注入进行，并且

269、其中所述混合导致形成未装载的脂质体；以及

270、ac)优选地挤出所述未装载的脂质体，

271、b)通过主动装载，使用装载缓冲液用活性药物成分装载所述未装载的脂质体以形成经装载的脂质体，其中所述装载缓冲液具有66mm至120mm的盐浓度和250mosmol/kg至350mosmol/kg的克分子渗透压浓度，其中所述装载优选地在35℃至39℃、更优选地36℃至38℃、最优选地37℃至38℃的温度下进行；

272、c)由储存缓冲液更换所述装载缓冲液，其中所述储存缓冲液具有低于100mm的盐浓度和高于300mosmol/kg的克分子渗透压浓度，

273、d)优选地将所述经装载的脂质体在以下条件下储存于所述储存缓冲液中：在5℃左右的温度下1至20周、或在5℃左右的温度下1至20周、或在-20℃左右的温度下1至16个月、或在-20℃左右的温度下12至16个月。

274、在优选的实施方案中，提供了一种根据先前实施方案的方法，其中在步骤c)结束时获得的脂质体在步骤d)的所述储存后是稳定的，其中在储存(storing)或储存(storage)后稳定在下文中定义。

275、在更优选的实施方案中，提供了一种根据先前实施方案的方法，优选地其中步骤d)的所述储存在-20℃左右的温度下进行12至16个月，其中在步骤c)结束时获得的脂质体在储存后是稳定的，其中储存后稳定意指：

276、-在步骤c)结束时获得的所述脂质体中包含的活性药物成分的浓度在储存后变化不超过15％；和/或

277、-在步骤c)结束时获得的所述脂质体的直径在储存后变化不超过30％；和/或

278、-在步骤c)结束时获得的所述脂质体中包含的溶血脂在双层中的浓度在储存后增加不超过5％；和/或

279、-所述热敏性脂质体的多分散性或在步骤c)结束时获得的所述脂质体的多分散性在储存后增加不超过0.5，和/或

280、-如果在步骤c)结束时获得的所述脂质体在热处理时具有高选择性递送的特征，则所述脂质体在储存后的热处理时仍具有高选择性递送的特征；和/或

281、-如果在步骤c)结束时获得的所述脂质体为合适的药物递送系统，则所述脂质体在储存后仍为合适的药物递送系统。

282、组合物

283、在本发明的一个方面，提供了一种组合物，其包含根据本发明的热敏性脂质体，优选地其中所述组合物包含至少一种赋形剂，所述至少一种赋形剂可以进一步有助于增强所述组合物或所述热敏性脂质体或所述活性药物成分向组织或细胞或向组织或细胞中的靶向或递送。优选的组织或细胞为肿瘤或肿瘤细胞。此处描述的组合物在本文中被称为根据本发明或本发明的组合物。根据本发明的组合物可以包含一种或多于一种根据本发明的热敏性脂质体。在本发明的上下文中，赋形剂可以是不同的分子，但是其也可以是缀合部分。

284、在优选的实施方案中，所述组合物用作药物，优选地用于治疗、缓解、延迟、治愈和/或预防癌症。所述组合物因此是药物组合物。药物组合物通常包含药用载体、稀释剂和/或赋形剂。在优选的实施方案中，本发明的组合物包含如本文所定义的热敏性脂质体并且进一步包含药用制剂、填充剂、防腐剂、增溶剂、载体、稀释剂、赋形剂、盐、佐剂和/或溶剂。这样的药用载体、填充剂、防腐剂、增溶剂、稀释剂、盐、佐剂、溶剂和/或赋形剂可以例如在remington:the science and practice of pharmacy,第20版baltimore,md:lippincottwilliams&wilkins,2000中找到。

285、根据本发明的热敏性脂质体可以具有至少一个可电离基团。可电离基团可以是碱或酸，并且可以是带电的或中性的。可电离基团可以作为与带有相反电荷的适当抗衡离子的离子对存在。阳离子抗衡离子的实例为钠、钾、铯、tris、锂、钙、镁、三烷基铵、三乙基铵和四烷基铵。阴离子抗衡离子的实例为氯离子、溴离子、碘离子、乳酸根、甲磺酸根、苯磺酸根、三氟甲磺酸根、乙酸根、三氟乙酸根、二氯乙酸根、酒石酸根、乳酸根和柠檬酸根。

286、根据本发明的药物组合物可以包含增强所述活性药物成分的稳定性、溶解性、吸收、生物利用度、活性、药代动力学、药效学、细胞摄取和细胞内运输的助剂。

287、根据本发明的组合物可以在设定时间下以有效浓度施用至动物、优选地哺乳动物。施用可以经由局部、全身和/或肠胃外途径，例如静脉内、皮下、腹膜内、鞘内、肌内、眼、鼻、泌尿生殖道、真皮内、真皮、肠、玻璃体内、海绵体内、脑内、鞘内、硬膜外或经口途径。

288、包含在根据本发明的组合物中的化合物也可以单独提供，例如以允许根据本发明的组合物的活性组分的顺序施用。在这样的情况下，根据本发明的组合物为至少包含根据本发明的热敏性脂质体的化合物与至少一种赋形剂的组合。

289、如上所定义的，与包含在根据本发明的热敏性脂质体中的双层接触的水溶液为脂质体外缓冲液。在(药物)组合物的上下文中，如果所述热敏性脂质体分散在所述脂质体外缓冲液中，则所述脂质体外缓冲液被称为储存缓冲液。

290、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，其包含储存缓冲液，其中所述储存缓冲液具有以下盐水浓度：低于120mm、或低于110mm、或低于100mm、或低于90mm、或低于80mm、或低于70mm、或低于60mm、或低于50mm、或低于40mm、或低于30mm、或低于20mm、或低于10mm。

291、实施例9表明，特征在于低盐水浓度的根据本发明的组合物导致更少的包含在其中的活性药物成分的渗漏，并且导致更高的分散稳定性。

292、在另一个优选实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，其包含储存缓冲液，其中所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度高于150mosmol/kg、或高于200mosmol/kg、或高于250mosmol/kg、或高于300mosmol/kg、或高于350mosmol/kg、或高于400mosmol/kg。优选地，所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度低于450mosmol/kg、更优选地低于410mosmol/kg。在最优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，其包含储存缓冲液，其中所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度为200mosmol/kg至450mosmol/kg，或其中所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度为300mosmol/kg至450mosmol/kg，或其中所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度为200mosmol/kg至410mosmol/kg，或其中所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度为300mosmol/kg至410mosmol/kg。

293、在另一个优选实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，其包含储存缓冲液，其中所述储存缓冲液包含冷冻保护剂。优选地，所述冷冻保护剂为海藻糖或蔗糖。最优选地，所述冷冻保护剂为海藻糖。

294、在根据本发明的组合物中包含冷冻保护剂允许在低温下储存所述组合物以防止包含在所述组合物所包含的热敏性脂质体中的活性药物成分降解。在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，其中所述组合物在低于0℃、或低于-5℃、或低于-10℃、或低于-15℃、或低于-20℃下储存至少30天后仍为合适的药物递送系统，如上所定义的。

295、实施例9表明，特征在于高克分子渗透压浓度和存在海藻糖作为冷冻保护剂的根据本发明的组合物能够防止活性药物成分降解。

296、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，其中包含在所述组合物中的热敏性脂质体分散于储存缓冲液中，其中所述储存缓冲液的盐水浓度低于100mm和/或所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度高于300mosmol/kg。优选地，根据此实施例的组合物包含冷冻保护剂。

297、在优选的实施方案中，提供一种根据本发明的组合物，其包含分散于储存缓冲液中的根据本发明的多种热敏性脂质体，其中所述热敏性脂质体在所述储存缓冲液中的浓度为10mmol/l至50mmol/l、或15mmol/l至50mmol/l、或20mmol/l至50mmol/l、或25mmol/l至50mmol/l、或30mmol/l至50mmol/l、或35mmol/l至45mmol/l、或37.5mmol/l至42.5mmol/l。优选地，所述储存缓冲液的盐水浓度低于100mm和/或所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度高于300mosmol/kg。

298、在另一个优选实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，其中根据本发明的热敏性脂质体的浓度为35mmol/l至45mmol/l，其中所述热敏性脂质体的多分散性指数(polydispersity index；pdi)低于0.5、或低于0.4、或低于0.3、或低于0.2、或低于0.1、或低于0.09、或低于0.08、或低于0.07、或低于0.06、或低于0.05。优选地，所述储存缓冲液的盐水浓度低于100mm和/或所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度高于300mosmol/kg。

299、在另一个优选实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，其中包含在所述组合物中的根据本发明的热敏性脂质体的直径为100nm至150nm，其中所述热敏性脂质体的多分散性指数(pdi)低于0.5、或低于0.4、或低于0.3、或低于0.2、或低于0.1、或低于0.09、或低于0.08、或低于0.07、或低于0.06、或低于0.05；更优选地其中所述热敏性脂质体的多分散性低于0.1。优选地，所述储存缓冲液的盐水浓度低于100mm和/或所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度高于300mosmol/kg。

300、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，其包含储存缓冲液，其中所述活性药物成分在所述储存缓冲液中的浓度与所述活性药物成分在包含在所述组合物所包含的热敏性脂质体中的脂质体内缓冲液中的浓度的比率低于0.1、或低于0.09、或低于0.08、或低于0.07、或低于0.06、或低于0.05、或低于0.04、或低于0.03、或低于0.02、或低于0.01、或低于0.009、或低于0.008、或低于0.007、或低于0.006、或低于0.005、或低于0.004、或低于0.003、或低于0.002、或低于0.001。

301、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，

302、-其中根据本发明的热敏性脂质体的浓度为10mmol/l至50mmol/l、优选地35mmol/l至45mmol/l；并且

303、-其中所述组合物包含储存缓冲液，其中所述储存缓冲液的盐水浓度低于100mm并且所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度高于300mosmol/kg；并且

304、-其中包含在所述热敏性脂质体中的活性药物成分为多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐，并且其中多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述热敏性脂质体所包含的双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、优选地0.07至0.09；并且

305、-其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；并且

306、-其中包含在所述热敏性脂质体中的脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；并且

307、-优选地其中包含在所述热敏性脂质体中的双层不包含胆固醇或其衍生物；并且

308、-其中包含在所述热敏性脂质体中的双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，

309、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，并且

310、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，并且

311、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35。

312、在更优选的实施方案中，提供了一种根据以上优选实施方案的组合物，其中所述热敏性脂质体的多分散性指数(pdi)低于0.5、或低于0.4、或低于0.3、或低于0.2、或低于0.1、或低于0.09、或低于0.08、或低于0.07、或低于0.06、或低于0.05。

313、在实施例10中表明，根据以上实施方案的组合物为合适的药物递送系统。

314、具体而言，当在-20℃±5℃下储存时，这样的组合物在储存延长的时间段(16个月)后显示为稳定的，其中多柔比星渗漏和热敏性脂质体的直径变化可忽略不计。结果进一步指出，组合物在5℃±3℃下储存时保持稳定达11周。在12个月的储存期间，未观察到磷脂分解的迹象。此外，在六个冷冻和解冻循环中，组合物保持稳定。此外，多柔比星在肿瘤中的累积经由在后肢具有皮下bn175肉瘤的brown norway大鼠的生物分布研究中在体内展示。用组合物处理的动物在经加热的肿瘤中显示出未加热组织中的浓度的15.8倍高的多柔比星浓度。相对于用盐水处理的动物，用组合物处理大鼠显示出显著改善的肿瘤生长延迟(图13)。此外，与等效剂量的非脂质体多柔比星处理相比，组合物还产生显著的肿瘤生长延迟和延长的生存期(图13)。

315、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，

316、-其中根据本发明的热敏性脂质体的浓度为10mmol/l至50mmol/l、优选地35mmol/l至45mmol/l；并且

317、-其中所述组合物包含储存缓冲液，其中所述储存缓冲液的盐水浓度低于100mm并且所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度高于300mosmol/kg；并且

318、-其中包含在所述热敏性脂质体中的活性药物成分为伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐，并且其中伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述热敏性脂质体所包含的双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、优选地至少0.20；并且

319、-其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；并且

320、-其中包含在所述热敏性脂质体中的脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；并且

321、-优选地其中包含在所述热敏性脂质体中的双层不包含胆固醇或其衍生物；并且

322、-其中包含在所述热敏性脂质体中的双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，

323、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，并且

324、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，并且

325、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35。

326、在更优选的实施方案中，提供了一种根据以上优选实施方案的组合物，其中所述热敏性脂质体的多分散性指数(pdi)低于0.5、或低于0.4、或低于0.3、或低于0.2、或低于0.1、或低于0.09、或低于0.08、或低于0.07、或低于0.06、或低于0.05。

327、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的组合物，

328、-其中根据本发明的热敏性脂质体的浓度为10mmol/l至50mmol/l、优选地35mmol/l至45mmol/l；并且

329、-其中所述组合物包含储存缓冲液，其中所述储存缓冲液的盐水浓度低于100mm并且所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度高于300mosmol/kg；并且

330、-其中包含在所述热敏性脂质体中的活性药物成分为吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，并且其中吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述热敏性脂质体所包含的双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、优选地至少0.15；并且

331、-其中所述热敏性脂质体具有100纳米至150纳米的直径；并且

332、-其中包含在所述热敏性脂质体中的脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph；并且

333、-优选地其中包含在所述热敏性脂质体中的双层不包含胆固醇或其衍生物；并且

334、-其中包含在所述热敏性脂质体中的双层包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)和1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)，

335、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)在所述双层中的摩尔浓度为0.45至0.65、优选地0.45至0.55，并且

336、○其中1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.25，并且

337、○其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为0.15至0.35、优选地0.25至0.35。

338、在更优选的实施方案中，提供了一种根据以上优选实施方案的组合物，其中所述热敏性脂质体的多分散性指数(pdi)低于0.5、或低于0.4、或低于0.3、或低于0.2、或低于0.1、或低于0.09、或低于0.08、或低于0.07、或低于0.06、或低于0.05。

339、其他组合物

340、本发明进一步提供了一种组合物，其包含分散于储存缓冲液中的热敏性脂质体，其中所述储存缓冲液的盐水浓度低于100mm并且所述储存缓冲液的克分子渗透压浓度高于300mosmol/kg；其中所述热敏性脂质体包含双层和脂质体内缓冲液；其中1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸二甘油(dppg2)在所述双层中的摩尔浓度为至少15％；并且其中所述热敏性脂质体包含活性药物成分。这样的组合物在本技术中被称为根据本发明或本发明的其他组合物。

341、上文在关于根据本发明的组合物或根据本发明的热敏性脂质体的上下文中描述的所有优选实施方案和定义适用于根据本发明的其他组合物。

342、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的其他组合物，其也是根据本发明的组合物。

343、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的其他组合物，其中所述脂质体内缓冲液具有5至8、优选地6至8的ph。

344、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的其他组合物，其中所述其他组合物包含至少一种赋形剂，所述至少一种赋形剂可以进一步有助于增强所述组合物和/或所述热敏性脂质体向组织和/或细胞和/或向组织和/或细胞中的递送。

345、在优选的实施方案中，提供了一种根据本发明的其他组合物，其中所述活性药物成分为多柔比星、多柔比星衍生物或其药用盐，优选地其中所述多柔比星、所述多柔比星衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为0.06至0.10、更优选地0.07至0.09。

346、在优选的实施方案中，提供一种根据本发明的其他组合物，其中所述活性药物成分为伊立替康、伊立替康衍生物或其药用盐，优选地其中所述伊立替康、所述伊立替康衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.18、更优选地至少0.20。

347、在优选的实施方案中，提供一种根据本发明的其他组合物，其中所述活性药物成分为吉西他滨、吉西他滨衍生物或其药用盐，优选地其中所述吉西他滨、所述吉西他滨衍生物或其所述药用盐与包含在所述双层中的脂质的摩尔比为至少0.12、更优选地至少0.15。

348、药物递送系统

349、药物递送系统为包含活性药物成分的组合物，其中包含在所述组合物中的其他化合物有助于增强所述活性药物成分的稳定性、溶解性、吸收、生物利用度、活性、药代动力学、药效学、细胞摄取和/或细胞内运输。优选地，根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物为药物递送系统。

350、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其中所述热敏性脂质体、所述其他热敏性脂质体、所述组合物或所述其他组合物具有以下特性中的一种或多种，其各自如下定义：

351、-低补体活化，

352、-无过敏反应，

353、-无毒，

354、-长循环半衰期，

355、-不存在abc，

356、-合适的清除率，

357、-合适的生物分布，

358、-热处理后的高选择性递送，

359、-储存后的高稳定性。

360、特征在于上述所有特性的根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物适合用作药物递送系统，如下所说明的，并且在本技术的上下文中被称为合适的药物递送系统。在优选的实施方案中，提供了一种合适的药物递送系统。

361、向动物施用根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物可能导致不良反应，诸如补体系统的活化和过敏反应。

362、如技术人员所知，补体系统为非适应性免疫系统的一部分。补体系统(其中粒性白细胞并且主要是嗜中性白细胞发挥关键作用)的活化可能导致补体活化相关的假性变态反应(complement activation-related pseudoallergy；carpa)。显然，通过施用药物递送系统激活补体系统是不希望的。如实施例2中所说明的，与根据本发明的热敏性脂质体或根据本发明的组合物相关的补体活化可以用c3a、bb及sc5b-9elisa试剂盒在热敏性脂质体温育的人类血浆上在体外确定。低补体活化意指补体活化与阳性对照(酵母聚糖)相比低至少10倍、或低至少9倍、或低至少8倍、或低至少7倍、或低至少6倍、或低至少5倍、或低至少4倍、或低至少3倍、或低至少2倍，其中遵循实施例2中描述的方案，所述补体活化经测定为c3a读数、bb读数或sc5b-9读数。

363、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其中在向动物施用所述(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物之后，所述(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物具有低补体活化。

364、如技术人员所知，过敏反应为严重的快速发作的变态反应。显然，由通过药物递送系统进行施用引起的过敏反应是不希望的。对于(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物，不存在过敏反应(anaphylaxis)或过敏性反应(anaphylactic reaction)被定义为在施用所述热敏性脂质体或所述组合物之后不存在过敏反应，如实施例2中所概述而确定的。

365、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其中在向动物施用所述热敏性脂质体或组合物之后，所述(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物不产生过敏反应。

366、优选地，如果向动物施用所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物具有低补体活化并且不存在过敏反应的特征，则根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物被定义为无毒的。在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其为无毒的。

367、向动物施用药物递送系统以将包含在所述药物递送系统中的活性药物成分递送至靶标，所述靶标为包含在所述动物或其部分中的细胞、或包含在所述动物或其部分中的组织、或包含在所述动物或其部分中的器官。在本技术的上下文中，所述细胞优选地为肿瘤细胞并且所述组织或其部分优选地为肿瘤。通过药物递送系统递送活性药物成分意指包含在所述药物递送系统中的活性药物成分从所述药物递送系统转移至所述靶标，所述药物递送系统优选地为根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物。

368、不管施用方法如何，根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物优选地将在施用后在所述动物的血流中循环。为了将所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物递送至所述细胞、所述组织、所述器官或其所述部分，需要所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在短时间段内不会从血流中清除。换言之，需要所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物具有长循环半衰期和/或不会导致加速的血液清除(accelerated blood clearance；abc)。这两个概念均涉及清除率，清除率为每单位时间从其中完全移除所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物的血浆体积的药代动力学测量值。

369、长循环半衰期意指所述活性药物成分在动物血流中的体内半衰期高于15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、60分钟、65分钟、70分钟、75分钟、80分钟、85分钟、90分钟、95分钟、100分钟、105分钟、110分钟、115分钟、120分钟、125分钟、130分钟、135分钟、140分钟、145分钟、150分钟、155分钟、160分钟、165分钟、170分钟、175分钟、180分钟、185分钟、190分钟、195分钟、200分钟、205分钟、210分钟、215分钟、220分钟、225分钟、230分钟、235分钟或240分钟。在本文中，动物优选地为人类、大鼠、猫、犬或猪。优选地，所述活性药物成分在动物血流中的体内半衰期为15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、60分钟、65分钟、70分钟、75分钟、80分钟、85分钟、90分钟、95分钟、100分钟、105分钟、110分钟、115分钟、120分钟、125分钟、130分钟、135分钟、140分钟、145分钟、150分钟、155分钟、160分钟、165分钟、170分钟、175分钟、180分钟、185分钟、190分钟、195分钟、200分钟、205分钟、210分钟、215分钟、220分钟、225分钟、230分钟、235分钟、或240分钟至高达720分钟。

370、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其具有长循环半衰期。

371、加速的血液清除(abc)为一种现象，即向动物首次施用活性药物成分或药物递送系统的特征在于清除率显著低于在给定时间段内的后续施用的清除率。换言之，在加速的血液清除的情况下，所述后续施用的特征在于显著更高的清除率，即“加速的”清除。不受此理论的束缚，abc可能是由于所述动物在所述首次施用后的免疫反应。相对于所述首次施用，后续施用优选地为第二次、第三次、第四次、第五次或第六次施用。

372、对于根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物而言，不存在abc定义为以下事实：所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在首次施用后在动物中的循环半衰期为所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在第二次施用后在所述动物中的循环半衰期的不高于150％、或不高于140％、或不高于130％、或不高于120％、或不高于110％、或不高于105％。优选地，不存在abc经由实施例3中概述的方法测量，因为技术人员熟知循环半衰期可以取决于所使用的物种或品系。

373、优选地，对于根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物而言，不存在abc定义为以下事实：所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在首次施用后在动物中的循环半衰期为所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在第二次施用后在所述动物中的循环半衰期的不高于130％，其中所述第二次施用在所述首次施用之后少于30天、或少于29天、或少于28天、或少于27天、或少于26天、或少于25天、或少于24天、或少于23天、或少于22天、或少于21天、或少于20天、或少于19天、或少于18天、或少于17天、或少于16天、或少于15天、或少于14天、或少于13天、或少于12天、或少于11天、或少于10天、或少于9天、或少于8天、或少于7天、或少于6天、或少于5天、或少于4天、或少于3天、或少于2天、或少于1天。

374、更优选地，对于根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物而言，不存在abc定义为以下事实：所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在两次施用后在动物中的循环半衰期为所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在第三次施用后在所述动物中的循环半衰期的不高于150％、或不高于140％、或不高于130％、或不高于120％、或不高于110％、或不高于105％。

375、最优选地，对于根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物而言，不存在abc定义为以下事实：所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在首次施用后在动物中的循环半衰期为所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在第三次施用后在所述动物中的循环半衰期的不高于130％，其中所述第三次施用在所述首次施用之后少于30天、或少于29天、或少于28天、或少于27天、或少于26天、或少于25天、或少于24天、或少于23天、或少于22天、或少于21天、或少于20天、或少于19天、或少于18天、或少于17天、或少于16天、或少于15天、或少于14天、或少于13天、或少于12天、或少于11天、或少于10天、或少于9天、或少于8天、或少于7天、或少于6天、或少于5天、或少于4天、或少于3天、或少于2天、或少于1天。

376、最优选地，对于根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物而言，不存在abc定义为以下事实：所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在首次施用后在动物中的循环半衰期为所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在第二次、第三次、第四次、第五次或第六次施用后在所述动物中的循环半衰期的不高于130％，其中所述第二次、第三次、第四次、第五次或第六次施用在所述首次施用之后少于30天。

377、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其特征在于不存在abc。

378、优选地，如果向动物施用所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物具有长循环半衰期并且不存在abc的特征，则根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物被定义为具有合适的清除率特性。在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其具有合适的清除率特性。

379、通过药物递送系统的活性药物成分的递送优选地为选择性的，意味着所述活性药物成分从所述药物递送系统向所述靶标转移的速率显著高于所述活性药物成分从所述药物递送系统向相应细胞、组织、器官或其部分转移的速率，其中所述相应细胞、组织、器官或其部分与所述靶标具有相同类型但是并非所述靶标的一部分，和/或高于向所述靶标周围的细胞、组织、器官或其部分转移的速率。例如，向肉瘤靶标的选择性递送意指活性药物成分向经加热的肉瘤转移的速率高于向周围脂肪细胞、肌肉细胞或不为肉瘤的一部分并且未经加热的组织转移的速率。在本文中，加热限定靶标。在本技术的上下文中，将此定义为选择性药物递送。在本文中，应理解向非相应细胞、组织、器官或其部分(它们为另一类型和/或不在靶标周围)转移的速率可以高于向所述靶标转移的速率。

380、选择性药物递送导致所述活性药物成分在所述靶标中的局部累积，其中所述活性药物成分在所述靶标中的浓度显著高于所述活性药物成分在相应细胞、组织、器官或其部分中的浓度，其中所述相应细胞、组织、器官或其部分与所述靶标具有相同类型但是不为所述靶标的一部分，优选地其中所述相应细胞、组织、器官或其部分在所述靶标周围。在此优选定义的上下文中，“显著高于”优选地意指高至少10％、高至少20％、高至少30％、高至少40％、高至少50％、高至少60％、高至少70％、高至少80％、高至少90％、高至少100％、高至少110％、高至少120％、高至少130％、高至少140％、高至少150％、高至少160％、高至少170％、高至少180％、高至少190％、或高至少200％、或高至少300％、或高至少400％、或高至少500％、或高至少600％、或高至少700％、或高至少800％、或高至少900％、或高至少1000％、或高至少1100％、或高至少1200％、或高至少1300％、或高至少1400％、或高至少1500％、或高至少1600％、或高至少1700％、或高至少1800％、或高至少1900％、或高至少2000％、或高至少2500％、或高至少3000％、或高至少3500％、或高至少4000％、或高至少4500％、或高至少5000％。甚至更优选地，在此上下文中，“显著更高”意指高10％、或高20％、或高30％、或高40％、或高50％、或高60％、或高70％、或高80％、或高90％、或高100％、或高110％、或高120％、或高130％、或高140％、或高150％、或高160％、或高170％、或高180％、或高190％、或高200％、或高300％、或高400％、或高500％、或高600％、或高700％、或高800％、或高900％、或高1000％、或高1100％、或高1200％、或高1300％、或高1400％、或高1500％、或高1600％、或高1700％、或高1800％、或高1900％、或高2000％、或高2500％、或高3000％、或高3500％、或高至少4000％、或高4500％、或高5000％，至高达高10000％。

381、对于根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物而言，所述选择性药物递送可以通过在向所述动物施用所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物之后局部加热包含在所述动物中的所述靶标来实现。上文已经解释了包含在所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物中的活性药物成分的释放可以在略高于所述动物的体温的温度下发生。因此，不受此理论的束缚，所述活性药物成分从所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物的转移可以仅发生在经局部加热至略高于所述动物的体温的温度的那些细胞、组织、器官或其部分处。

382、应理解动物(优选地人类)的体温是指未出现发热的同一物种的动物的正常体温。

383、对于根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物而言，热处理后的选择性递送在本文中被定义为包含在所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物中的活性药物成分向所述靶标中的释放，其中所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物首先施用至所述动物，其中接着局部加热所述靶标，其中所述局部加热导致所述释放，造成所述活性药物成分在所述靶标中的浓度高于所述活性药物成分在相应细胞、组织、器官或其部分中的浓度，其中所述相应细胞、组织、器官或其部分与所述靶标具有相同的类型但是不为所述靶标的一部分，优选地其中所述相应细胞、组织、器官或其部分在所述靶标周围。

384、就此意义而言，但凡活性药物成分的递送或释放被描述为由所述靶标的(局部)加热或(局部)热处理引起、触发、诱导或促进，应当理解，这意味着活性药物成分的递送或释放在靶标中或附近显著更高，这是由于热处理所引起的温度升高。这并不意味着没有递送或释放并且不意味着只有可忽略不计的递送或释放发生在包含在施用药物递送系统的动物中的其他细胞、组织、器官或其部分中。在本技术的上下文中，加热与热处理可互换使用。在靶标中或附近是指在加热靶标之后温度相对于施加所述加热之前的温度升高(如上文所定义)的所述动物的那些部分。

385、热处理优选地涉及光源诸如灯或近红外激光(near infrared laser；nir)、水浴、流体再循环装置、微波装置、射频消融和/或高强度聚焦超声。

386、优选的热处理涉及将所述靶标加热5分钟、或6分钟、或7分钟、或8分钟、或9分钟、或10分钟、或11分钟、或12分钟、或13分钟、或14分钟、或15分钟、或16分钟、或17分钟、或18分钟、或19分钟、或20分钟、或21分钟、或22分钟、或23分钟、或24分钟、或25分钟、或26分钟、或27分钟、或28分钟、或29分钟、或30分钟、或31分钟、或32分钟、或33分钟、或34分钟、或35分钟、或36分钟、或37分钟、或38分钟、或39分钟、或40分钟、或41分钟、或42分钟、或43分钟、或44分钟、或45分钟、或46分钟、或47分钟、或48分钟、或49分钟、或50分钟、或51分钟、或52分钟、或53分钟、或54分钟、或55分钟、或56分钟、或57分钟、或58分钟、或59分钟、或60分钟、或65分钟、或70分钟、或75分钟、或80分钟、或85分钟、或90分钟、或95分钟、或100分钟、或105分钟、或110分钟、或115分钟、或120分钟。优选地，所述优选的热处理涉及将所述靶标加热至41℃的温度。

387、优选的处理涉及将所述靶标加热至40.0℃、或40.1℃、或40.2℃、或40.3℃、或40.4℃、或40.5℃、或40.6℃、或40.7℃、或40.8℃、或40.9℃、或41.0℃、或41.1℃、或41.2℃、或41.3℃、或41.4℃、或41.5℃、或41.6℃、或41.7℃、或41.8℃、或41.9℃、或42.0℃、或42.1℃、或42.2℃、或42.3℃、或42.4℃、或42.5℃、或42.6℃、或42.7℃、或42.8℃、或42.9℃、或43.0℃的温度。在此上下文中，在给定温度左右意指在高于给定温度减0.5℃且低于给定温度加0.5℃的温度下，优选地在高于给定温度减0.2℃且低于给定温度加0.2℃的温度下，更优选地在高于给定温度减0.1℃且低于给定温度加0.1℃的温度下。优选地，所述优选的热处理涉及将所述靶标加热60分钟。

388、更优选的热处理涉及将所述靶标在40℃的温度下加热5分钟、或10分钟、或15分钟、或20分钟、或25分钟、或30分钟。另一种更优选的热处理涉及将所述靶标在40.0℃的温度下加热5分钟、或10分钟、或15分钟、或20分钟、或25分钟、或30分钟、或35分钟、或40分钟、或45分钟、或50分钟、或55分钟、或60分钟。

389、更优选的热处理涉及将所述靶标在40℃的温度下加热5分钟、或10分钟、或15分钟、或20分钟、或25分钟、或30分钟。另一种更优选的热处理涉及将所述靶标在41.0℃的温度下加热5分钟、或10分钟、或15分钟、或20分钟、或25分钟、或30分钟、或35分钟、或40分钟、或45分钟、或50分钟、或55分钟、或60分钟。

390、更优选的热处理涉及将所述靶标在40℃的温度下加热5分钟、或10分钟、或15分钟、或20分钟、或25分钟、或30分钟。另一种更优选的热处理涉及将所述靶标在42.0℃的温度下加热5分钟、或10分钟、或15分钟、或20分钟、或25分钟、或30分钟、或35分钟、或40分钟、或45分钟、或50分钟、或55分钟、或60分钟。

391、更优选的热处理涉及将所述靶标在40℃的温度下加热5分钟、或10分钟、或15分钟、或20分钟、或25分钟、或30分钟。另一种更优选的热处理涉及将所述靶标在43.0℃的温度下加热5分钟、或10分钟、或15分钟、或20分钟、或25分钟、或30分钟、或35分钟、或40分钟、或45分钟、或50分钟、或55分钟、或60分钟。

392、如果在向动物施用所述(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物之后，包含在其中的活性药物成分在如上所定义的热处理后选择性地递送至所述靶标，则根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物具有或特征在于合适的生物分布。优选地，所述靶标为肿瘤细胞或肿瘤，并且不包含在所述靶标中的所述细胞、组织或器官为未经热处理的心脏、肝、脾、肾、肺或肌肉。合适的生物分布可以如实施例4中所概述的来确定。

393、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其特征在于合适的生物分布。

394、活性药物成分在热处理后从药物递送系统的选择性递送优选地为高的，意味着在向动物施用所述药物递送系统之后，与相应细胞、组织、器官或其部分相比，包含在所述药物递送系统中的更大比例的活性药物成分转移至所述靶标，其中所述相应细胞、组织、器官或其部分与所述靶标具有相同的类型但是并非所述靶标的一部分，优选地其中所述细胞、组织、器官或其部分在所述靶标周围。在此优选定义的上下文中，“更大”优选地意指多至少10％、多至少20％、多至少30％、多至少40％、多至少50％、多至少60％、多至少70％、多至少80％、多至少90％、多至少100％、多至少110％、多至少120％、多至少130％、多至少140％、多至少150％、多至少160％、多至少170％、多至少180％、多至少190％、或多至少200％、或多至少300％、或多至少400％、或多至少500％、或多至少600％、或多至少700％、或多至少800％、或多至少900％、或多至少1000％、或多至少1100％、或多至少1200％、或多至少1300％、或多至少1400％、或多至少1500％、或多至少1600％、或多至少1700％、或多至少1800％、或多至少1900％、或多至少2000％、或多至少2500％、或多至少3000％、或多至少3500％、或多至少4000％、或多至少4500％、或多至少5000％。甚至更优选地，更大意指多200％至多10000％、多300％至多10000％、多400％至多10000％、多500％至多10000％、多600％至多10000％、多700％至多10000％、多800％至多10000％、多900％至多10000％、多1000％至多10000％、多1500％至多10000％、多2000％至多10000％、多2500％至多10000％、多3000％至多10000％、多3500％至多10000％、多4000％至多10000％、多4500％至多10000％、或多5000％至多10000％。

395、优选地，药物递送系统为根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物。在此上下文中，术语(活性药物成分的)从所述药物递送系统、(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物的(药物)递送、释放、转移可互换使用。

396、作为药物组合物的药物递送系统优选地在储存后是稳定的。在药物递送系统为根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物的情况下，稳定性意指：

397、-相对于储存前的活性药物成分的浓度，包含在所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物中的活性药物成分的浓度在储存后变化不超过15％、优选地不超过10％、最优选地不超过5％；和/或

398、-相对于储存前的所述(其他)热敏性脂质体的直径，所述(其他)热敏性脂质体的直径或包含在所述组合物中的所述(其他)热敏性脂质体的直径在储存后变化不超过30％、优选地不超过20％、最优选地不超过10％；和/或

399、-包含在所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物中的溶血脂在双层中的浓度在储存期间增加不超过5％、更优选地不超过2％、最优选地不超过1％；和/或

400、-所述(其他)热敏性脂质体的多分散性或包含在所述(其他)组合物中的所述(其他)热敏性脂质体的多分散性在储存期间增加不超过0.5、优选地不超过0.3、更优选地不超过0.2，和/或

401、-如果所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存前的特征在于热处理后的高选择性递送，则所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存后的特征仍在于热处理后的高选择性递送；和/或

402、-如果所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存前为合适的药物递送系统，则所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存后仍为合适的药物递送系统。

403、活性药物成分和溶血脂的浓度可以经由hplc确定。直径和多分散性可以经由动态光散射来确定。高选择性递送和合适的药物递送系统在上文中描述。

404、在本技术的上下文中，药物递送系统、根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物的储存为所述药物递送系统、(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物的制备与其向动物施用之间的时间段。特此理解，“储存后”稳定可以意指所述药物递送系统、(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物在一组特定储存条件诸如降低的温度下储存。

405、优选地，储存持续至少1天、或至少2天、或至少3天、或至少4天、或至少5天、或至少6天、或至少7天、或至少8天、或至少9天、或至少10天、或至少11天、或至少12天、或至少13天、或至少14天、或至少15天、或至少16天、或至少17天、或至少18天、或至少19天、或至少20天、或至少21天、或至少22天、或至少23天、或至少24天、或至少25天、或至少26天、或至少27天、或至少28天、或至少29天、或至少30天、或至少5周、或至少6周、或至少7周、或至少8周、或至少9周、或至少10周、或至少11周、或至少12周、或至少13周、或至少14周、或至少15周、或至少16周、或至少5个月、或至少6个月、或至少7个月、或至少8个月、或至少9个月、或至少10个月、或至少11个月、或至少12个月、或至少13个月、或至少14个月、或至少15个月、或至少16个月、或至少17个月、或至少18个月、或至少19个月、或至少20个月、或至少21个月、或至少22个月、或至少23个月、或至少24个月、或至少25个月、或至少26个月、或至少27个月、或至少28个月、或至少29个月、或至少30个月。

406、优选地，储存是从或从1天、或从2天、或从3天、或从4天、或从5天、或从6天、或从7天、或从8天、或从9天、或从10天、或从11天、或从12天、或从13天、或从14天、或从15天、或从16天、或从17天、或从18天、或从19天、或从20天、或从21天、或从22天、或从23天、或从24天、或从25天、或从26天、或从27天、或从28天、或从29天、或从30天、或从5周、或从6周、或从7周、或从8周、或从9周、或从10周、或从11周、或从12周、或从13周、或从14周、或从15周、或从16周、或从5个月、或从6个月、或从7个月、或从8个月、或从9个月、或从10个月、或从11个月、或从12个月、或从13个月、或从14个月、或从15个月、或从16个月、或从17个月、或从18个月、或从19个月、或从20个月、或从21个月、或从22个月、或从23个月、或从24个月、或从25个月、或从26个月、或从27个月、或从28个月、或从29个月、或从30个月至高达5年。

407、优选地，储存在25℃左右、或20℃左右、或15℃左右、或10℃左右、或5℃左右、或0℃左右、或-5℃左右、或-10℃左右、或-15℃左右、或-20℃左右的温度下进行。在此上下文中，在给定温度左右意指在高于给定温度减5℃且低于给定温度加5℃的温度下，优选地在高于给定温度减2℃且低于给定温度加2℃的温度下，更优选地在高于给定温度减1℃且低于给定温度加1℃的温度下。优选地，-20℃左右的温度意指-15℃至-25℃的温度。

408、如果储存在低于0℃的温度下进行，则稳定性还意指在药物递送系统、根据本发明的(其他)热敏性脂质体或根据本发明的(其他)组合物的冷冻和解冻期间和之后满足稳定性条件。这种特性也被称为冷冻和解冻稳定性，并且可以涵盖若干个冷冻-解冻循环。

409、优选地，根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物在至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个冷冻-解冻循环后是稳定的。

410、根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物的分散稳定性意指相对于储存前的所述(其他)热敏性脂质体的直径，所述(其他)热敏性脂质体的直径或包含在所述(其他)组合物中的所述(其他)热敏性脂质体的直径在储存后变化不超过30％、优选地不超过20％、最优选地不超过10％。

411、活性药物成分从根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物的渗漏是从所述(其他)热敏性脂质体或从包含在所述(其他)组合物中的(其他)热敏性脂质体的转移在储存后导致其中的活性药物成分的浓度的降低。优选地，相对于储存前的活性药物成分的总浓度，活性药物成分由于渗漏所致的浓度降低在储存后不超过15％、更优选地不超过10％、最优选地不超过5％。

412、活性药物成分在根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物中的降解为在不存在所述活性药物成分跨所述(其他)热敏性脂质体的双层或跨包含在所述(其他)组合物中的热敏性脂质体的双层的转移的情况下所述活性药物成分在所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物中的浓度的降低。换言之，降解涉及化学转化，由此活性药物成分转化为不具有药物作用、具有降低的药物作用、具有不同的药物作用或具有不利的药物作用的分子。优选地，相对于储存前的活性药物成分的浓度，活性药物成分由于降解所致的浓度降低在储存后不超过15％、更优选地不超过10％、最优选地不超过5％。

413、术语“储存后”优选地意指在5℃左右的温度下至少4周或在-20℃左右的温度下至少12周。更优选地，储存后优选地意指在5℃左右的温度下4至20周或在-20℃左右的温度下12个月至16个月。

414、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、其他热敏性脂质体、组合物或其他组合物，其在5℃左右的温度下储存至少4周或在-20℃左右的温度下储存至少12周或在5℃左右的温度下储存4至20周或在-20℃左右的温度下储存12个月至16个月之后为稳定的，其中

415、-相对于储存前的活性药物成分的浓度，包含在所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物中的活性药物成分的浓度在储存后变化不超过15％、优选地不超过10％、最优选地不超过5％；并且

416、-相对于储存前的所述(其他)热敏性脂质体的直径，所述(其他)热敏性脂质体的直径或包含在所述组合物中的所述(其他)热敏性脂质体的直径在储存后变化不超过30％、优选地不超过20％、最优选地不超过10％；并且

417、-包含在所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物中的溶血脂在双层中的浓度在储存期间增加不超过5％、更优选地不超过2％、最优选地不超过1％；并且

418、-所述(其他)热敏性脂质体的多分散性或包含在所述组合物中的所述(其他)热敏性脂质体的多分散性在储存期间增加不超过0.5、优选地不超过0.3、更优选地不超过0.2；并且

419、-如果所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存前的特征在于热处理后的高选择性递送，则所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存后的特征仍在于热处理后的高选择性递送；并且

420、-如果所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存前为合适的药物递送系统，则所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存后仍为合适的药物递送系统。

421、根据本发明的热敏性脂质体、其他热敏性脂质体、组合物或其他组合物据称在储存后是高度稳定的，或者在本技术的上下文中，(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物在储存后具有高稳定性。

422、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其在5℃左右的温度下储存1至20周后、或在-20℃左右的温度下储存1至16个月后、或在-20℃左右的温度下储存12至16个月后是稳定的，其中包含在所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物中的所述活性药物成分的浓度在储存后变化不超过15％，和/或其中所述(其他)热敏性脂质体的直径或包含在所述组合物中的所述(其他)热敏性脂质体的直径在储存后变化不超过30％，其中包含在所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物中的溶血脂在双层中的浓度增加不超过5％，和/或其中所述热敏性脂质体的多分散性或包含在所述(其他)组合物中的所述(其他)热敏性脂质体的多分散性增加不超过0.5。优选地，如果所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存前的特征在于热处理后的高选择性递送，则所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存后的特征仍在于热处理后的高选择性递送，和/或其中如果所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存前为合适的药物递送系统，则所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物在储存后仍为合适的药物递送系统。

423、与现有技术文献[4]和[5]中提及的热敏性脂质体不同，以下实施例清楚地表明，根据本发明的热敏性脂质体在储存后是稳定的。具体地，实施例7表明，至少0.05至0.3的脂质体内api:脂质比(根据本发明的热敏性脂质体的特征)与在2-8℃下储存至少4周后的稳定性相关。相比之下，[4]指出“将tsl与经包封的300mm柠檬酸盐ph 4在4℃下储存数周会导致磷脂的水解和溶血脂的产生”，而[5]提及“在装载的头20分钟期间未检测到溶血-pc形成，但是60分钟后含量随时间增加至1.1％±1.2％。”

424、此外，如上所述，根据本发明的热敏性脂质体的若干优选方面和实施方案与储存后甚至更高的稳定性相关：

425、-实施例5表明，使用6.0至7.4范围内的脂质体内ph确保磷脂在2-8℃下持续至少4周的稳定性。脂质体内ph为3的相应制剂在2-8℃下储存12周后显示超过10％的脂质降解产物(28.16±1.95％游离脂肪酸和14.1±5.1％溶血脂)，而对于具有ph 6的制剂而言，在所分析的24周内未观察到变化。对于ph 3的制剂，在储存期间的api渗漏也在12周后增加，而ph 6的制剂则未检测到渗漏。与该发现一致，实施例7也表明，与更酸性的ph相比，用作脂质体内缓冲液的更中性的ph导致在2-8℃下脂质赋形剂的分解更慢。

426、-实施例8示出了在热敏性脂质体的直径为100纳米至200纳米时在2-8℃下储存后的稳定性。例如，将囊泡尺寸减至低于100nm的z平均值，制剂易于发生api和脂质赋形剂分解，进而对温度依赖性释放曲线产生负面影响。

427、-实施例9示出了在使用盐水浓度高达100mm和克分子渗透压浓度为至少300mosmol/kg的储存缓冲液时在2-8℃下储存后的稳定性。例如，将储存缓冲液中的盐水浓度从生理浓度(140mm)降低至≤66mm稳定了dppg2-tsl30％-dox以便在2-8℃下储存，从而得到分散体，其显示出囊泡尺寸的显著减慢增加。

428、-实施例9进一步示出了冷冻保护剂诸如海藻糖的存在提高储存后稳定性。具体而言，至少≥8％(w/v)的海藻糖的存在与在至少6个冷冻-解冻循环后稳定的组合物相关。

429、此外，实施例6证明在装载缓冲液中使用高达120mm的盐浓度可以加速多柔比星的主动装载并且因此减少api和脂质的分解。批次中api相关的总杂质含量取决于温育时间，对于30分钟和90分钟分别为<0.10面积％和4.1面积％。批次中脂质相关的总杂质含量也取决于温育时间，对于30分钟和90分钟分别为<0.10面积％和0.13面积％。为了实现制剂的储存，将缓冲液更换为盐浓度低于100mm并且克分子渗透压浓度高于300mosmol/kg的储存缓冲液是优选的。

430、抗癌活性

431、本技术中描述的药物递送系统优选地用于将抗癌药物递送至肿瘤，优选地实体肿瘤。优选地，所述药物递送系统包含热敏性脂质体并且通过加热所述肿瘤来诱导或促进所述递送。

432、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其中所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物展示可检测的抗肿瘤活性。在本发明的上下文中，抗肿瘤活性仅见于肿瘤或其中包含的肿瘤细胞中，而不见于相应的健康、对照、参照、非肿瘤的细胞、组织或器官中。在本发明的上下文中，抗肿瘤活性包括以下至少一种：

433、-所述肿瘤细胞的细胞活力的降低，

434、-在所述肿瘤细胞中诱导细胞凋亡或诱导肿瘤细胞死亡，

435、-抑制所述肿瘤细胞的增殖，

436、-重量增加的抑制或延迟，或重量的减小，和/或所述肿瘤的生长的延迟或抑制。

437、为了能够治疗、缓解、延迟、治愈和/或预防癌症，优选地实体肿瘤，展示出这样的可检测的抗肿瘤活性在本发明中是至关重要的。术语抗肿瘤活性或在肿瘤细胞中的作用在本发明的上下文中可互换使用。很明显，关于根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物使用术语抗肿瘤活性或作用或在肿瘤细胞中的作用不意味着所述(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物进入所述肿瘤或肿瘤细胞。如上所述，众所周知，所述(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物可以用作具有这样的抗肿瘤活性的活性药物成分的药物递送系统。

438、抗肿瘤活性的评估可以定期进行，例如在所治疗的受试者中每周、每两周、每三周、每四周、每一个月、每两个月、每三个月、每四个月、每五个月、每六个月或每年进行。

439、因此，可以定期(例如每周、每月)评估抗肿瘤活性的提高/降低。这种评估优选地针对给定受试者在若干个时间点进行，或者针对给定受试者和健康对照在一个或数个时间点进行。备选地，可以通过在治疗开始后的给定时间点将来自受试者的肿瘤细胞中的所述抗肿瘤活性与来自同一受试者的非肿瘤或健康细胞中的相应活性进行比较来测量这样的抗肿瘤活性。

440、当已检测到抗肿瘤活性至少一次、两次或三次时，根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物据称展现可检测的抗肿瘤活性。

441、因此，当在至少一个时间点已检测到抗肿瘤活性时，优选地已检测到可检测的抗肿瘤活性。优选地，这样的可检测的抗肿瘤活性已在至少两个、三个、四个、五个时间点检测到。在优选的实施方案中，在受试者的肿瘤细胞中评估抗肿瘤活性。更优选地，所述肿瘤细胞为肉瘤细胞或癌细胞。在优选的实施方案中，所述癌细胞为肺癌、肝细胞癌或结肠癌。在更优选的实施方案中，所述癌细胞为肺癌或肝细胞癌。在优选的实施方案中，所述肉瘤细胞为血管肉瘤、骨肉瘤、皮肤纤维肉瘤突起、上皮样肉瘤、胃肠道间质瘤(gastrointestinalstromal tumor；gist)、卡波西肉瘤(kaposi'ssarcoma)、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、恶性周边神经鞘瘤、黏液性纤维肉瘤、多形性肉瘤、横纹肌肉瘤、孤立性纤维瘤、滑膜肉瘤或未分化多形性肉瘤。

442、肿瘤细胞活力或存活的减少可以至少为参照肿瘤细胞的相应肿瘤细胞活力或存活至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更多的减少，其中引入如下所定义的对照热敏性脂质体。

443、肿瘤细胞凋亡的诱导或肿瘤细胞死亡的诱导可以为至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更多。例如，50％的肿瘤细胞凋亡的诱导或肿瘤细胞死亡的诱导意指一半的用根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物处理的所述肿瘤细胞经历细胞凋亡或细胞死亡。肿瘤细胞活力或存活或死亡可以使用技术人员已知的技术来评估。肿瘤细胞活力和死亡可以使用常规成像方法诸如mri、ct或pet及其衍生形式或在活检中评估。肿瘤细胞活力可以通过在若干个时间点使病变的延伸范围可视化来评估。观察至少一次的病变参照在第一时间点的病变延伸范围的10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更多的减少将被视为肿瘤细胞活力的降低。肿瘤细胞活力可以经由间接atp测量诸如来自promega的celltiter-glo试剂盒来评估。肿瘤细胞凋亡可以通过测量胱天蛋白酶(caspase)-3/7活性来评估。

444、肿瘤细胞增殖的抑制可以为参照肿瘤细胞的相应增殖的至少1％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更多，其中引入如下所定义的对照热敏性脂质体。细胞的增殖可以使用如标准增殖测定的已知技术来评估。这样的增殖测定可以使用活体染色诸如cell titer blue(promega)。这包括底物分子，所述底物分子通过代谢酶转化为荧光分子。荧光水平则反映活细胞和代谢活性细胞的数量。备选地，这样的增殖测定可以确定有丝分裂指数。有丝分裂指数基于与总肿瘤细胞数量相比的增殖阶段的肿瘤细胞数量。增殖细胞的标记可以通过使用抗体ki-67和免疫组织化学染色进行。当有丝分裂指数降低至少20％、至少30％、至少50％或更多时，可以见到肿瘤细胞增殖的抑制(如kearsley j.h.等人,1990中所述)。

445、在某些实施方案中，肿瘤重量的抑制或减少或者延迟的肿瘤生长或肿瘤生长的抑制参照肿瘤可以为至少1％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更多，其中引入如下所定义的对照热敏性脂质体。肿瘤重量或肿瘤生长可以使用技术人员已知的技术来评估。

446、肿瘤生长的检测或肿瘤细胞增殖的检测可以通过使用葡萄糖类似物2-[18f]-氟-2-脱氧-d-葡萄糖(fdg-pet)或[18f]-'3-氟-'3-脱氧-l-胸苷pet的正电子发射断层摄影术测量葡萄糖利用的变化来在体内评估。离体备选方案可以为用ki67对肿瘤活检进行染色。

447、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其用作药物。

448、在更优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其用于治疗、缓解、延迟、治愈和/或预防癌症。

449、优选的癌症选自由以下组成的组：白血病、霍奇金氏淋巴瘤、膀胱癌、乳癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、甲状腺癌、胰腺癌、头颈癌、前列腺癌、胃肠道癌、软组织肉瘤和多发性骨髓瘤。更优选地，癌症为软组织肉瘤。

450、优选地，软组织肉瘤选自由以下组成的组：血管肉瘤、骨肉瘤、皮肤纤维肉瘤突起、上皮样肉瘤、胃肠道间质瘤(gist)、卡波西肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、恶性周边神经鞘瘤、黏液性纤维肉瘤、多形性肉瘤、横纹肌肉瘤、孤立性纤维瘤、滑膜肉瘤和未分化多形性肉瘤。

451、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其用于治疗、缓解、延迟、治愈和/或预防软组织肉瘤。

452、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其系用于治疗、缓解、延迟、治愈和/或预防癌症，优选地软组织肉瘤，其中所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物具有抗肿瘤活性，并且其中所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物具有以下特性中的一种或多种：

453、-低补体活化，

454、-无过敏反应，

455、-无毒，

456、-长循环半衰期，

457、-不存在abc，

458、-合适的清除率，

459、-合适的生物分布，

460、-热处理后的高选择性递送，

461、-储存后的高稳定性。

462、在优选的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其用于治疗、缓解、延迟、治愈和/或预防癌症，优选地软组织肉瘤，其用于治疗、缓解、延迟、治愈和/或预防癌症，优选地软组织肉瘤，其中所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物具有抗肿瘤活性，并且其中所述(其他)热敏性脂质体或所述(其他)组合物为合适的药物递送系统。换言之，根据该实施方案的(其他)热敏性脂质体或(其他)组合物具有抗肿瘤活性、具有合适的清除率和高储存稳定性。

463、判断治疗反应的标准已知为recist(wahl r.l.等人,2009)标准。在本发明的上下文中，患者可以生存和/或可以被视为在更长时间间隔内保持无病状态。备选地，疾病或病况可以已经停止或延迟。在本发明的上下文中，生活质量的改善和观察到的疼痛缓解可以意味着患者可能需要比治疗开始时更少的疼痛缓解药物。备选地或与消耗较少的疼痛缓解药物组合，患者的便秘可以比治疗开始时更少。在此上下文中，“更少”可以意指少5％、少10％、少20％、少30％、少40％、少50％、少60％、少70％、少80％、少90％。患者可能不再需要任何疼痛缓解药物。生活质量的这种改善和观察到的疼痛缓解可以在治疗的至少一周、两周、三周、四周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月或更久后在患者中见到、检测到或评估并且与所述患者开始治疗时的生活质量和观察到的疼痛缓解比较。

464、转移和/或肿瘤细胞迁移发生的延迟可以为至少一周、一个月、几个月、一年或更久的延迟。可以使用mri、ct或回波描记术或者允许检测循环肿瘤细胞(circulating tumorcell；ctc)、无细胞的dna或无细胞的rna的技术来评估转移的存在。后一种测试的实例为cellsearch ctc测试(veridex)，即一种基于epcam的ctc从周边血中的磁性分选。

465、在某些实施方案中，肿瘤生长可以延迟至少一周、一个月、两个月或更久。在特定实施方案中，转移的发生延迟至少一周、两周、三周、四周、一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月或更久。

466、用途

467、在另外的方面，提供了如先前段落所述的根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物用作药物或疗法的一部分的用途。还提供了如先前段落所述的根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物用于制造用于治疗癌症(优选地软组织肉瘤)的药物的用途。

468、优选地，根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物用作药物或疗法的一部分以用于预防、延迟、治愈、缓解和/或治疗癌症，优选地软组织肉瘤。

469、在本发明的该方面的实施方案中，提供了根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其用作药物，优选地用于治疗、预防和/或延迟癌症，优选地软组织肉瘤。

470、方法

471、在另外的方面，提供了一种用于在个体中预防、治疗、治愈、缓解和/或延迟所述个体的细胞、组织或器官中如先前段落所定义的病况或疾病的方法。所述方法病况向有此需要的所述个体或受试者施用根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物。

472、公开了根据本发明的(其他)热敏性脂质体或公开了包含根据本发明的(其他)热敏性脂质体的(其他)组合物或公开了根据本发明的方法的任何偏好或优选实施方案可以与用于在个体中预防、治疗、治愈、缓解和/或延迟所述个体的细胞、组织或器官中的病况或疾病的方法组合，意味着任何这样的偏好或优选实施方案还公开了一种用于预防、治疗、治愈、缓解和/或延迟病况或疾病的相应方法。

473、在本发明的该方面的实施方案中，提供了一种用于预防、治疗和/或延迟癌症(优选地软组织肉瘤)的方法，其包括向受试者施用根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物。

474、在优选的实施方案中，向存在于其中存在肿瘤的器官或组织中的细胞施用根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物。优选地，所述器官或组织包含1％、5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％肿瘤细胞。根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物可以例如通过将包含在所述热敏性脂质体中的双层与抗体或结合至肿瘤的其他部分偶合或缀合而靶向肿瘤细胞。优选地，所述肿瘤与软组织肉瘤相关。

475、在优选的实施方案中，向存在于其中存在肿瘤的器官或组织中的细胞施用根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其中所述肿瘤尚未转移。在另一个优选实施方案中，向存在于其中存在肿瘤的器官或组织中的细胞施用根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物，其中所述肿瘤已经转移。优选地，所述肿瘤与软组织肉瘤相关。

476、在优选的实施方案中，根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物是全身施用的。备选地，在另一个实施方案中，治疗是局部施用的。

477、在另一个优选实施方案中，根据本发明的热敏性脂质体、根据本发明的其他热敏性脂质体、根据本发明的组合物或根据本发明的其他组合物可以与同癌症(优选地软组织肉瘤)相关的疾病或病况的标准治疗(诸如化疗、放疗或手术)组合施用。

478、定义

479、在本文件和其权利要求书中，动词“包含(包括)”及其连词以其非限制性意义使用，以意指包括该词后的项目，但是不排除未具体提及的项目。此外，动词“由……组成”可以替换为“基本上由……组成”，意指如本文所定义的(热敏性)脂质体或组合物可以包含除具体鉴定的那些以外的一个或多个额外组分，所述(一个或多个额外组分不改变本发明的独特特征。此外，提及由不定冠词“一种(a)”或“一个(an)”修饰的要素并不排除存在多于一个要素的可能性，除非上下文明确要求存在一个且仅一个要素。因此，不定冠词“一种(a)”或“一个(an)”通常意指“至少一种(个)”。

480、除非另有说明，否则本文中鉴别的每个实施方案可以组合在一起。本说明书中引用的全部专利和参考文献都通过引用整体结合于此。

481、在本发明的上下文中，“相同”不应狭隘地解释为暗指应考虑同位素的天然丰度—相同优选地应仅指将在绘制的结构式中表示的分子结构。

482、当在本发明的上下文中讨论物质的参数时，假定除非另有说明，否则参数在生理条件下确定、测量或显示。生理条件是本领域技术人员已知的，并且包括水性溶剂系统、大气压、6至8的ph值、室温至约37℃(约20℃至约40℃)范围内的温度和合适浓度的缓冲盐或其他组分。可理解，电荷通常与平衡有关。据称带有或载有电荷的部分是这样的部分，它在载有或带有这样的电荷的状态下比不载有或带有这样的电荷的状态更常见。因此，如本领域技术人员所理解，在本公开中指示带电的原子在特定条件下可以不带电，并且中性部分可以在特定条件下带电。

483、在本发明的上下文中，待评估的参数的减小或增大意指对应于该参数的值的至少5％的变化。更优选地，值的减小或增大意指至少10％，甚至更优选地至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少70％、至少90％或100％的变化。在后一种情况下，情况可能是不再存在与参数相关的可检测值。

484、如本文件中描述的物质作为药物的用途也可以解释为所述物质在制备药物中的用途。同样地，当物质用于治疗或用作药物时，它也可以用于制备用于治疗的药物。

485、当与数值(例如约10)结合使用时，词语“约”或“大约”优选地意指值可以为给定值(10)±0.1％的值。

486、当与给定温度结合使用时，词语“左右”优选地意指在所述给定值减3℃至所述给定值加3℃的范围内，更优选地在所述给定值减2℃至所述给定值加2℃的范围内，最优选地在所述给定值减1℃至所述给定值加1℃的范围内。

487、当与整数结合使用时，词语“介于……之间”是指包括所提及的边界值的范围。例如，如果n为介于1与3之间的值，则n可以为1、2或3。换言之，“介于x与y之间”为“x至y”的同义词。

488、数字列表前面的术语“至少”适用于所述列表中的所有数字，意味着“至少1、2或3”与“至少1、至少2或至少3”具有相同的含义。这比照着适用于诸如“从”和“至”的术语。例如，“1、2或3至4”与“1至4，2至4，或3至4”具有相同的含义。

489、在本发明的上下文中，“由结构x表示”、“结构x的”和“具有结构x”可互换使用。

490、除非另有明确定义，否则在本发明的上下文中的浓度为摩尔浓度。除非另有明确定义，否则在本发明的上下文中提及浓度的百分比为摩尔百分比。因此，除非另有明确定义，否则“％”意指“摩尔％”。

491、除非另有明确定义，否则包含在双层中的化合物的浓度优选地相对于所述双层中脂质的总数量来定义。

492、具体地，在本技术中dppg2的浓度是指双层中dppg2相对于包含在所述双层中的脂质的总数量的摩尔浓度，优选地其中所述双层包含在根据本发明的热敏性脂质体中。

493、在本发明的上下文中，具有“基本上相同的脂质组成”的溶液和/或组合物和/或双层意指对于每种类型的脂质，所述脂质的摩尔浓度在所述溶液和/或组合物和/或双层之间相差小于10％、9.5％、9％、8.5％、8％、7.5％、7％、6.5％、6％、5.5％、5％、4.5％、4％、3.5％、3％、2.5％、2％、1.5％、1％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％。

494、根据本发明的化合物或组合物优选地用于根据本发明的方法或用途中。

495、在本技术的上下文中，术语细胞、细胞系和细胞培养物可互换使用。所有这些术语也包括它们的后代，即由细胞分裂形成的任何和所有后续世代。应当理解，由于有意或无意的突变，所有后代可能不相同。

496、在本技术的上下文中，球形意指大致或基本球形的，并且不应解释为绝对几何特性。具体地，脂质体不限于完美的球形系统，而是还包括大致球形的系统。

497、化合物在组合物、结构或(分子)系统中的摩尔浓度定义为所述化合物的分子数与包含在所述组合物、所述结构或所述系统中的分子总数的比率。

498、组合物、结构或(分子)系统中的第一化合物与第二化合物之间的摩尔比定义为包含在所述组合物、所述结构或所述系统中的所述第一化合物的分子数与在所述组合物、所述结构或所述系统中的所述第二化合物的分子数之间的比率。

499、动物优选地为哺乳动物，更优选地选自由小鼠、大鼠、狗和人类组成的组，最优选地为人类。