包含儿茶素7-O-β-D-呋喃芹菜糖苷作为有效成分的用于改善、预防或治疗脱发的组合物的制作方法

本发明涉及包含儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷作为有效成分的用于改善、预防或治疗脱发症的组合物。

背景技术：

1、脱发与其他病理性疾病相比虽不属于病理性问题，但由于脱发影响容貌，在社会生活与心理上对脱发患者带来很大影响。在过去，脱发被认为是一种衰老现象，但近些年人们认识到许多因素都会引起脱发，例如遗传因素、压力、营养失衡、社会活动改变、疾病、分娩、饮食习惯改变、生活不规律、以及过度使用化学美发剂等。脱发的类型大体分为男性型脱发、女性型脱发、斑秃、产后脱发、脂溢性头皮炎脱发，其中比例最高的是男性型脱发。

2、男性型脱发是由遗传因素引起，脱发出现得越早其程度往往更加严重。另一方面，除了遗传因素外，雄性荷尔蒙睾酮经5α-还原酶作用会转化为双氢睾酮(dihydrotestosterone，dht)，而dht会使毛乳头细胞发生萎缩，抑制细胞分裂，导致头发稀疏或脱发。

3、压力引起的脱发主要呈现为斑秃。斑秃是一种部分或全部身体毛发脱落的疾病。常见为头皮上出现几个硬币大小的秃块，其可能由心理压力引起，会发展为头皮毛发、或胡须、眉毛等全身毛发脱落的永久性脱发。

4、此外，压力引起的脱发可能以休止期脱发的形式出现，休止期脱发是指处于正常生长周期的毛发进入休止期而出现的脱发。头发会以3-6年为周期生长与脱落，头发会在生长期停留3-6年，然后进入3-4周的退行期，在3-5个月的休止期后脱落。进入休止期的头发通常约占总发量的10％(约一万股)，因毛发提前进入休止期出现的脱发被称为休止期脱发。

5、igf-1会促进培养中的上皮细胞增殖，并延长毛囊组织的长度，是促进毛发生并调节毛发生长的重要生长因子(itami et al.，1995；hibino&nishiyama，2004)。

6、研究表明，igf-1生长因子会在雄性激素的作用下增加表达，参与睾酮对头发的作用，并在导致雄激素性脱发(androgenetic alopecia)的作用机制中发挥重要作用，还有助于防止衰老、改善失智和抑郁症，预防糖尿病或高血压等生活习惯病，增强免疫力并提高骨密度，防止皮肤老化，并且因可以诱导头发从休止期进入生长期而用于治疗脱发。

7、研究表明tgf-β1可以诱导退行期的生长，将tgf-β1注射到小鼠背部皮肤时，可以通过毛囊增值来减少角质形成细胞数量，与对照组相比时，经tgf-β1给药处理的小鼠中tunel细胞数量增加，tgf-βii型受体(tgf-βii)与tunel反应性的双重可视化表明退行期毛囊的凋亡细胞核与tgfrii实现共定位(colocalization)，使得tgf-βii激动剂与拮抗剂可以基于提前或延迟退行期脱发、多毛症来用作人类毛发生长疾病的有效治疗工具。

8、(foitzik k,lindner g,mueller-roever s,maurer m,botchkareva n,botchkarev v,handjiski b,metz m,hibino t,soma t,dotto gp,paus r(2000).tgf-β1对小鼠毛囊退化(退行期)的体内控制.美国实验生物学联合会会刊，14(5):752-812)。

9、shin等人(2013)指出雄激素源性脱发与tgf-β1分泌密切相关(shin h，yoo hg，inui s，itami s，kim ig，cho ar，lee dh，park ws，kwon o，cho kh，won ch(2013)。人毛囊毛乳头细胞中的活性氧对雄激素诱导生长因子-β1转化的介导作用.bmb reports，46(9):460-464.)

10、转染雄激素受体的小鼠膀胱乳头细胞(dp-6)在雄激素处理后ros生成有所增加，并且dp-6中的tgf-β1分泌经雄激素处理有所增加，相反，雄激素诱导的tgf-β1被n-乙酰半胱氨酸显著抑制，这表明雄激素诱导的tgf-β1以毛囊dpcs中的ros为介质，因此可以用于雄激素源性脱发治疗中的抗氧化疗法。

11、有关生长因子对毛发生长的影响，目前通过许多实验证明生长因子可通过作用于毛囊中的特定部位来参与毛发生长，这些生长因子有表皮生长因子(egf)、胰岛素样生长因子(igf)、成纤维细胞生长因子(fgf)和血管内皮生长因子(vegf)等(tsuboi r(1997).生长因子与毛发生长.kor j invest dermatil，4(2):103-108)。1994年hervert的研究小组发现，缺乏成纤维细胞生长因子(fgf)-5基因的小鼠生长期(anagen phase)异常长使其毛发也相对较长，指出fgf-7、igf-1和hgf是促进毛发生长的旁分泌生长因子(paracrinegrowth factor)(hervert jm，rosenquist t，gotz j，martin gr(1994).毛发生长周期调节剂fgf-5：靶向和自发突变证明.cell，78:1017-1025)。

12、jiang等人(1995)发现在影响毛发生长和脱落的内分泌因素中，tgf-β1影响生长期(anagen stage)的毛发生长，导致正常头发提早进入毛发退行期(catagen stage)最终导致脱发，而igf-1、tgf-β2、egf以及fgf等生长因子促进毛发生长并防止毛发细胞退化，可以防止脱发(jiang h，yamamoto s，kato r(1995).局部应用强效免疫抑制剂fk506对休止期小鼠皮肤生长期的诱导作用.j.invest.dermatol，104:523-525)。

13、na hyun-wook等人(2006年)的研究表明，头发的生长与血液循环密切相关，作为激素的胰岛素和作为生长因子(growth factor)的igf-1和egf等可以促进毛发生长并影响毛囊生长。(na hyun-wook,lee chang-hyeon,kwon jin,lee moon-won,jeong han-sol,lee gwang-gyu(2006).journal of dong-eui physiology and pathology,20(2),428-435).

14、米诺地尔(minoxidil)是20世纪70年代初开发的治疗高血压的血管扩张剂，因发现其具有引发多毛症的副作用而用作毛发生长促进剂。尽管毛发生长的机制尚未明确，但通过血管扩张供应营养来促进毛发生长已经得到确认。然而，米诺地尔对已经秃顶的头皮前部没有效果，并且，只有在每天两次坚持涂抹头皮持续6-12个月才有效。米诺地尔的副作用有水肿、心动过速、局部剥脱、皮炎、给药部位酸痛、红斑、皮肤脱皮、瘙痒、干燥、皮肤剥脱、接触性皮炎等，此外还可能诱发多毛症。米诺地尔还可能会通过影响毛发周期，使得休止期脱发(shedding)过量进一步加重脱发，而且停药后会很快恢复到治疗前状态。

15、本文提及的专利文献以及参考文献通过引用并入本文，可以在本文中独立且明确地识别所引用文献。

16、在先技术文献

17、专利文献

18、韩国授权专利第10-2016002号

19、韩国授权专利第10-1659516号

20、韩国公开专利第10-2013-0123626号

技术实现思路

1、要解决的技术问题

2、本发明人致力于开发出更安全且无副作用的天然防脱发剂。经过研究，本发明人发现从榆属植物的超临界萃取残渣中分离的单一化合物儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷(catechin 7-o-β-d-apiofuranoside)化合物可以抑制人毛囊毛乳头细胞中睾酮转化为双氢睾酮(dht)，并且可以有效抑制人毛囊毛乳头细胞因氧化应激出现细胞凋亡(apoptosis)。确认到所述化合物可以作为脱发症治疗剂，由此完成了本发明。

3、本发明的目的在于提供一种用于改善、预防或治疗脱发的组合物。

4、本发明的其他目的以及技术特征将通过下面的说明书、权利要求书以及附图得到具体体现。

5、解决问题的技术方案

6、根据本发明的一方面，本发明提供一种包含儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷(catechin 7-o-β-d-apiofuranoside)化合物作为有效成分的用于预防、改善或治疗脱发症的组合物。

7、本发明的组合物的有效成分儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷是由下面的化学式1表示的儿茶素糖苷化合物。

8、化学式1

9、

10、本发明组合物的有效成分儿茶素儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷(catechin 7-o-β-d-apiofuranoside)可以从天然物质中分离，也可以是化学合成，本领域技术人员显而易见的是化学合成与天然提取具有相同效果。

11、天然榆属植物的超临界萃取残渣的溶剂萃取物中含有大量本发明的儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷化合物，可以通过常规的单一化合物分离方法从该萃取物中获得。

12、在本发明中，榆属植物的超临界萃取残渣(supercritical extract residue)是指用超临界萃取法萃取榆属植物后剩余的残留物(residue)。

13、用于制备本发明超临界萃取残渣的榆属(ulmus)植物包括蔷薇目榆科植物，例如包括黑榆(ulmus davidiana)、春榆(ulmus davidiana var.japonica)、栓皮春榆(ulmusdavidiana var.japonica for.suberosa)、榔榆(ulmus parvifolia)、白榆(ulmuspumila)、裂叶榆(ulmus laciniata)、大果榆(ulmus macrocarpa)等。可以使用最具代表性的黑榆(ulmus davidiana)、春榆(ulmus davidiana var.japonica)。

14、整个榆属植物可以用于本发明的超临界萃取；或者可以使用选自由茎、根、叶、花、果实，以及种子组成的组的榆属植物的一部分。优选地，可以使用榆属植物的茎、枝或根。在本发明中，可以在超临界萃取之前干燥和/或研磨全部或部分所述榆属植物。

15、在本发明中，超临界萃取(supercritical extraction)是指利用超临界状态的流体不经变性提取天然物质中所含香料、色素、油脂或功能性物质的方法。

16、处于超临界状态的流体是指超过超临界点(supercritical point)的既定高温和高压极限，无法区分气体和液体状态的流体。所述超临界流体可以是超临界二氧化碳(supercritical carbon dioxide)等。所述超临界二氧化碳是超过临界温度(31℃)与临界压力(7.5mpa)状态的二氧化碳，是兼具气体和液体性质的流体。

17、本发明的超临界萃取法的非限制性示例有变压法或者温度变化法，其中变压法通过将超临界流体与溶质的混合物在萃取温度等温度下减压膨胀，使超临界流体的溶解能力降低来分离溶质；温度变化法通过升高超临界流体的温度来降低溶解能力，由此对超临界流体和溶质进行分离。

18、在本发明中，所述超临界流体可以与助溶剂一起使用，助溶剂包括本领域常用的极性溶剂，优选使用选自由醇、水、乙二醇、聚乙二醇、碳酸亚丙酯、甲酸、乙酸、乙腈、氯二氟甲烷或其混合物组成的群组。

19、在本发明中，用于超临界萃取的容器只要可以控制温度和压力，并使萃取原料与超临界流体接触即可，没有特别限定。

20、在本发明中，超临界萃取的压力范围可以是100-600以内，超临界萃取的温度范围可以是10-100℃，超临界萃取的超临界流体以及助溶剂的流速可以是10-100g/分钟。本领域技术人员可以在上述范围内适当调整和使用超临界萃取的压力、温度、流体和助溶剂的流速。

21、对于通过所述超临界萃取法获得的榆属植物的超临界萃取残渣，可以通过溶剂萃取来获得萃取物。优选地，所述溶剂萃取是通过榆树的超临界萃取残渣与萃取溶剂的接触工艺来实现。在溶剂萃取之前，可以先干燥和/或研磨所述榆树的超临界萃取残渣。在本发明中，所述萃取溶剂优选使用醇，所述醇可以是包含1-4个碳原子的无水或含水低级醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、正丙醇、异丙醇和正丁醇。

22、在本发明中，可以通过对榆树超临界萃取残渣的溶剂萃取物进一步分馏来获得分馏物。

23、与萃取类似，所述分馏是通过使分馏溶剂与所述萃取物接触来实现。所述分馏中使用的溶剂包括(a)水、(b)醇、(c)所述低级醇和水的混合溶剂、(d)丙酮、(e)乙酸乙酯、(f)氯仿、(g)丁基乙酸盐、(h)1,3-丁二醇、(i)己烷以及(j)乙醚。优选地，可以是使用乙酸乙酯获得的分馏物。

24、可以使用色谱法(chromatography)等本领域公知的单一化合物分离方法从所述分馏物中分离儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷。可用于本发明的单一化合物分离和提纯方法有薄层色谱法(thin layer chromatography，tlc)或高效液相色谱法(high performanceliquid chromatography，hplc)等。

25、在本文中，术语“作为有效成分”是指本发明的儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷化合物的含量足以达到预防、改善或治疗脱发症的效果。

26、如本文的具体实施例证明，本发明的活性化合物儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷可以抑制人毛囊毛乳头细胞(hfdpc)中睾酮经5-α-还原酶(5α-reductase)作用转化为双氢睾酮(dht，dihydrotestosterone)。因此，本发明的化合物可以起到预防、治疗和改善男性型脱发的作用。

27、如本文的另一实施例证明，本发明的活性化合物儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷可以抑制人毛囊毛乳头细胞(hfdpc)因氧化应激发生细胞凋亡(apoptosis)。因此，本发明的化合物可用于改善、预防或治疗脱发症，特别是神经性脱发症。

28、在本文中，术语“脱发”是指由于非正常毛发脱落导致正常应有毛发的区域没有毛发的情况，术语“脱发症”是指由这种脱发引起的状态(condition)。

29、在本发明中，“男性型脱发症”也称为雄激素源性脱发症，是指因遗传因素、雄性激素或老化引起的脱发症。

30、更具体地，在本发明中是指作为雄性激素的睾酮经5α还原酶作用转化为双氢睾酮(dht)引起的脱发症。

31、在本发明中，“神经性脱发症”是指因心理或生理压力导致的脱发症，包括神经性斑秃和神经性休止期脱发症。

32、在本发明中，“神经性脱发症”不仅包括人的神经性脱发症，还包括人以外动物的神经性脱发症。

33、本发明的组合物可以是预防或治疗脱发症的药物组合物形式，并且该药物组合物可以包括药学上可接受的载体。

34、在本文中，术语“预防”是指抑制脱发引起的症状或脱发并发症引起的症状，术语“治疗”是指减轻或消除已经发生的脱发症状或脱发并发症引起的症状。

35、本发明的组合物中的药学上可接受的载体是常用于制剂的载体，非限制性示例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、海藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁、矿物油等。除了上述组分之外，本发明的药物组合物还可以包括润滑剂、润湿剂、甜味剂、芳香剂、乳化剂、混悬剂、防腐剂等。合适的药学上可接受的载体和制剂详细记录在雷氏药学大全(remington's pharmaceutical sciences，第19版，1995)。

36、本发明的药物组合物可以口服或肠胃外给药，在肠胃外给药时可以通过静脉注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、经皮给药等方式给药。

37、本发明的药物组合物的合适剂量根据配制方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病理状况、食物、给药时间、给药途径、排泄速度和反应敏感性等因素有所不同，通常，技术娴熟的医生可以容易地确定治疗以及预防所需有效剂量并给出处方。

38、本发明的药物组合物的日剂量为0.001-10,000mg/kg。

39、本发明的药物组合物是使用本领域技术人员容易实施的方法，利用药学上允许的载体和/或赋形剂配制成单位剂型或装入大容量容器中制备。在这种情况下，剂型可以是油或水介质中的溶液、混悬液或乳化剂，或者可以是提取物、散剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂，并且还可以包括分散剂或稳定剂。

40、根据本发明的另一方面，提供了一种用于预防或改善脱发症的功能性化妆品组合物，其包含儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷作为有效成分。

41、在本发明的功能性化妆品组合物中，脱发症可以包括男性型脱发症或神经性脱发症，术语“脱发症”、“男性型脱发症”、“神经性脱发症”的含义和内容与本发明其他方面的用于改善、预防或治疗脱发症的组合物相同。

42、本发明的功能性化妆品组合物中所含的活性化合物“儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷”相关内容与本发明的其他方面的用于改善、预防或治疗脱发症的组合物相同。

43、在本文中，术语“改善”是指减轻或缓解脱发引起的症状或脱发并发症引起的症状。

44、根据本发明的功能性化妆品组合物可以制备成本领域的任意常规剂型，非限制性示例有溶液、混悬液、乳浊液、膏体、凝胶、霜体、乳液、粉末、皂剂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉状粉底、乳浊液粉底、蜡状粉底和气雾剂。更具体地，可以制备成柔肤水、滋养水、滋养霜、按摩霜、精华液、眼霜、洁面霜、洁面泡沫、洁面水、面膜、喷雾或散粉。

45、当本发明是膏体、霜体或凝胶时，可以使用动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石粉或氧化锌等作为载体成分。

46、当本发明是粉末或喷雾时，可以使用乳糖、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末作为载体成分，特别是喷雾时可以额外包含氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲基醚等促进剂。

47、当本发明是溶液或乳浊液时，可以使用溶剂、增溶剂或乳浊剂作为载体成分，例如水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁基乙二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或失水山梨糖醇。

48、当本发明是混悬液时，可以使用水、乙醇或丙二醇等液体稀释剂、乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯以及聚氧乙烯失水山梨糖醇酯等混悬剂、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂或黄芪等作为载体成分。

49、当本发明是含有表面活性剂的清洁剂时，可以使用脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等作为载体成分。

50、本发明的功能性化妆品组合物除了有效成分和载体成分外，还包括化妆品组合物中常用的成分，例如抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、色素和香料等常规助剂。

51、根据本发明的另一方面，本发明提供一种治疗或改善脱发症的方法，包括将儿茶素7-o-β-d-呋喃糖苷类化合物向需要治疗脱发症的主体(subject)给药的步骤。

52、在一实施方式提供的治疗或改善脱发症的方法中，所述儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷化合物具有抑制睾酮转化为双氢睾酮(dht)的活性。

53、在另一实施方式提供的治疗或改善脱发症的方法中，所述脱发症由双氢睾酮(dht)引起。

54、在另一实施方式提供的治疗或改善脱发症的方法中，所述儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷化合物具有抑制毛乳头细胞因氧化应激发生细胞凋亡的活性。

55、在另一实施方式提供的治疗或改善脱发症的方法中，所述脱发症是男性型脱发症或神经性脱发症。

56、发明效果

57、本发明的儿茶素7-o-β-d-呋喃芹菜糖苷化合物可以抑制人毛囊毛乳头细胞中睾酮经5-α-还原酶作用转化为双氢睾酮(dht)，并且抑制人毛囊毛乳头细胞因氧化应激发生细胞凋亡，由此，可以用作治疗、预防或改善脱发症的活性物质。