背景技术：
技术实现思路
1、本发明组合物提供用于鼻内施用的含水制剂，含有作为活性药物的羟钴胺和/或其药学上可接受的盐之一，诸如羟钴胺氯化物、硫酸盐和乙酸盐及类似的衍生物。
2、钴胺素化合物是亲水性大分子(约1350道尔顿)，并且其跨鼻上皮膜转运是细胞旁转运。鼻用制剂中的赋形剂可能促进这样的转运，所述赋形剂打开了鼻上皮细胞之间的紧密连接。
3、我们惊人地发现，在鼻用组合物中包含甘露醇，浓度介于3％-12％(w/v)甘露醇，优选介于5％-10％(w/v)，有利于钴胺素化合物的一致吸收。5％甘露醇与血清等渗(rowe等人，编辑，handbook of pharmaceutical excipients，第7版，london:pharmaceuticalpress，2012)。高于5％(w/v)甘露醇水平是高渗的。
4、令人惊讶地，本发明组合物中的甘露醇是用于经鼻吸收羟钴胺的非常有效的促进剂。具有约1350分子量的亲水性分子羟钴胺只能通过细胞旁路径穿过上皮细胞膜，这意味着其只能通过细胞之间的间隙。本发明制剂中甘露醇的高渗浓度导致组合物对鼻上皮细胞高渗。为了建立渗透平衡，水离开鼻上皮细胞，改善鼻中粘液层的流动性，并引起鼻上皮细胞收缩，同时拉伸细胞之间的紧密连接。拉伸意味着新形成的间隙会在短时期内保持开放，能够使羟钴胺通过鼻细胞之间的间隙扩散进入全身血液循环中。令人惊讶地，这使得甘露醇成为促进持续经鼻吸收羟钴胺的不可或缺的物质。
5、在本发明组合物中，甘露醇不仅提供羟钴胺的一致吸收，而且它增加鼻粘液的流动性，支持且恢复正常粘膜纤毛清除。这可以减少或防止形成红色痂皮。这些特征令人惊讶地使甘露醇成为优选的赋形剂以促进有效经鼻吸收羟钴胺。
6、本发明提供了用于经鼻施用的羟钴胺(和/或其药学上可接受的盐之一)的新制剂，其含有甘露醇和水作为主要赋形剂，具有优化的吸收曲线以实现使钴胺素血液水平升高至不超过2000pg/ml，优选不超过1500pg/ml的最大水平。使用此类组合物，有可能达到生理学上的最大血液水平，并且同时避免很高的血液水平和痤疮样皮炎的固有风险，还提供一致吸收(吸收中变化小)，并且还提供降低的副作用诸如较少的红色痂皮和快速恢复至正常鼻粘膜纤毛清除。
7、本发明提供了用于经鼻施用的组合物，包含以高于0.1％(w/v)的浓度溶解于水中的羟钴胺(和/或其药学上可接受的盐之一)，并含有3％-12％甘露醇，优选介于5-10％甘露醇(都是w/v)。
8、本发明的实施方案提供了用于经鼻施用的组合物，包含以高于0.1％(w/v)的浓度溶解于水中的羟钴胺和/或任何其他药学上可接受的羟钴胺盐，含有例如0.5％或1％或1.5％(w/v)羟钴胺(为羟钴胺或其盐之一)和任选地一种或多种药物赋形剂。
9、在进一步的实施方案中，本发明提供了用于经鼻施用的组合物，包含以0.1％(w/v)和2％(w/v)之间的浓度溶解于水中的羟钴胺和/或任何其他药学上可接受的盐，含有至少3％(w/v)的甘露醇和少于约12％(w/v)甘露醇，并且任选地含有一种或多种选自甘油、丙二醇、聚乙二醇、烷氧基聚乙二醇的溶剂，和一种或多种选自缓冲剂、抗氧化剂、调节ph的物质、表面活性剂、络合剂、稳定剂和增溶剂的其他赋形剂。
10、我们惊人地发现丙二醇是本发明制剂中的重要赋形剂。浓度为2％的丙二醇与血清等渗(rowe等人,编辑，handbook of pharmaceutical excipients，第7版，london:pharmaceutical press，2012)。更高浓度的丙二醇是高渗的，并且它们增加了含有甘露醇的本发明制剂的“高渗效应”。
11、适当地，本公开的组合物在水中可以包含3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％和15％v/v丙二醇作为溶剂与3％-12％甘露醇，更优选地与5％-10％w/v甘露醇组合。此外，在本发明组合物中使用丙二醇作为赋形剂具有惊人的优势，因为已知15％的高渗浓度的丙二醇为有效的防腐剂(rowe等人，loc.cit.)。
12、低于15％浓度的丙二醇(例如10％)也是高渗的，并且在文献中被归类为具有防腐作用。在本发明组合物中，该作用通过甘露醇的存在被增强，使鼻用羟钴胺组合物的组分的总浓度高渗，使得鼻用组合物充分防腐，具有一致的羟钴胺细胞旁吸收，并且同时提供避免使用相当有毒的防腐剂诸如苯扎氯铵和苯甲醇的可能性。
13、在进一步的实施方案中，本发明还使用组合物提供了作为鼻用喷雾剂或滴剂或鼻用凝胶剂施用的鼻用羟钴胺溶液，该组合物不使用任何防腐剂。在这种情况下，鼻用羟钴胺溶液以无菌方式被生产和/或在生产的最后阶段灭菌和/或存在于密闭的无防腐剂的容器中，以递送鼻用喷雾剂或滴鼻剂或鼻用凝胶剂。
14、也有可能，例如，当使用较大体积的鼻用羟钴胺发明制剂时，鼻用组合物中高浓度的丙二醇不是最佳的。在这种情况下，本发明的另一个实施方案使用组合物提供了作为鼻用喷雾剂或滴剂或鼻用凝胶剂施用的鼻用羟钴胺溶液，该组合物使用山梨酸或山梨酸钾作为防腐剂。在2004年hofmann等人的实验中(arch otolaryngol head neck surgery 2004；130:440-445)，已证明当在鼻用产品中用作防腐剂时，约0.1％(w/w)的山梨酸钾比苯扎氯铵安全得多。
15、山梨酸及其盐，诸如山梨酸钠、山梨酸钾和山梨酸钙，是常用作防腐剂的抗微生物剂。通常，盐优于酸形式，因为它们更易溶于水，但酸形式才是有活性的(维基百科2014，山梨酸)。抗微生物活性的最佳ph为低于ph 6.5。山梨酸盐通常以0.025％至0.10％的浓度使用。因此，本发明在进一步的实施方案中提供了含有山梨酸作为防腐剂的溶液，其ph在4和7之间，优选低于6，更优选在4-6之间。这样的ph也为羟钴胺提供了最佳的稳定性，因为从文献中已知市场上羟钴胺注射剂的ph为酸性。这种酸性ph是用特殊的缓冲剂或用乙酸获得的。例如，注射剂neo-b12具有4.6的ph(www.medsafe.com)。本发明制剂也具有4-7之间的ph。
16、本发明提供了用于经鼻施用的组合物，其包含羟钴胺，每鼻孔剂量体积10-150μl，优选介于25-125μl，更优选25μl、50μl、70μl、90μl或100μl，并且每剂量体积含有介于10-1000μg，优选介于25-750mg，更优选50μg、100μg、250μg或500μg的羟钴胺的量。
17、下述实验证明，人类志愿者从含有高渗浓度的甘露醇和丙二醇的溶液中一致吸收羟钴胺。
18、实验部分：
19、健康志愿者接受50μl鼻用喷雾剂中500μg羟钴胺的剂量，所述喷雾剂含有作为主要成分的羟钴胺、10％w/v甘露醇、10％v/v丙二醇和水(总剂量500μg盐酸羟钴胺)，使用aptar vp7喷雾剂泵。测量到以下羟钴胺血液水平的增加(从ct＝0增加至30分钟后cmax)：
20、423、598、609、562、793、478、537、389pg/ml(＝ng/l)。
21、每500μg羟钴胺的平均增加：549pg/ml(sd＝127pg/ml＝cv23％)
22、当使用5％w/v甘露醇、15％v/v丙二醇和水时，获得了相当的结果。
23、之后，没有一名志愿者经历鼻中刺激或者在鼻中出现红色痂皮。没有一名志愿者的维生素b12 cmax水平超过1500pg/ml。钴胺素水平的平均增加为549pg/ml，并且cv为23％，远低于40％，表明非常一致的吸收。
24、上述结果证明，可能(1)为患者提供维生素b12的鼻用补充疗法，其具有一致的吸收且不会引起非生理学的高血液水平(不超过2000pg/ml或1500pg/ml)，避免(2)注射治疗后，由高血液水平引起痤疮样皮炎的风险，和(3)鼻中不出现红色痂皮，以及(4)避免使用苯扎氯铵和苯甲醇作为防腐剂。