本技术涉及用于向细胞递送分子载荷(molecular payload)(例如，寡核苷酸)的靶向复合物及其用途，特别是涉及疾病治疗的用途。参考作为文本文件通过efs-web提交的序列表本技术包含已通过efs-web以ascii格式提交并且在此通过引用整体并入的序列表。在2021年7月8日创建的所述ascii拷贝被命名为d082470039wo00-seq-dwy并且大小为160,579字节。
背景技术：
1、肌营养不良(muscular dystrophy，md)是一组以进行性无力和肌肉量减少为特征的疾病。这些疾病是由编码形成健康肌肉组织所需蛋白质的基因中的突变引起的。面肩肱型肌营养不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy，fshd)是一种显性遗传的md类型，其主要影响面部、肩胛和上臂的肌肉。fshd的其他症状包括腹肌无力、视网膜异常、听力下降以及关节痛和炎症。fshd是同时影响成人和儿童的9种md类型中最普遍的，全世界发病率为约每8300人中1人。fshd是由双同源框4(double homeobox 4，dux4)的异常产生引起的，双同源框4是功能未知的蛋白质。编码dux4蛋白的dux4基因位于4号染色体上的d4z4重复区域中，并且通常仅在胎儿发育中表达，此后，其会被包围dux4基因并使之紧凑的d4z4重复的超甲基化所抑制。已经描述了两种类型的fshd，1型和2型。1型(占病例的约95％)与4号染色体上d4z4重复的缺失相关。未受影响的个体通常具有在4号染色体的亚端粒区排列的多于10个重复，而fshd的最常见形式(fshd1)是由阵列收缩至少于10个重复引起的，与骨骼肌中dux4的多样化表达和表观遗传抑制降低相关。染色体4q的两种等位基因变体(4qa和4qb)存在于d4z4的远端区域中。4qa处于具有功能性多腺苷酸化共有位点的顺式形式。4qa等位基因的收缩是致病性的，因为dux4转录物被多腺苷酸化并翻译成稳定的蛋白质。2型fshd(占病例的约5％)与18号染色体上smchd1基因中的突变相关。除了支持性护理和针对疾病症状的治疗外，尚无用于fshd的有效治疗。
技术实现思路
0、发明概述
1、根据一些方面，本公开内容提供了靶向肌细胞以用于将分子载荷递送至那些细胞的复合物。在一些实施方案中，本文中提供的复合物特别可用于递送抑制dux4的表达或活性的分子载荷，例如在患有或怀疑患有面肩肱型肌营养不良(fshd)的对象中。因此，在一些实施方案中，本文中提供的复合物包含与肌细胞表面上的受体特异性结合以用于将分子载荷递送至肌细胞的肌肉靶向剂(例如，肌肉靶向抗体)。在一些实施方案中，复合物通过受体介导的内化被摄取到细胞中，然后分子载荷可被释放以在细胞内部执行功能。例如，经工程化以递送寡核苷酸的复合物可释放该寡核苷酸，使得该寡核苷酸可抑制肌细胞中的dux4基因表达。在一些实施方案中，通过对连接复合物的寡核苷酸和肌肉靶向剂的共价接头进行内体切割而释放该寡核苷酸。
2、本公开内容的一个方面涉及复合物，所述复合物包含与分子载荷共价连接的抗转铁蛋白受体(transferrin receptor，tfr)抗体，所述分子载荷被配置成用于降低dux4的表达或活性，其中所述抗体包含：
3、(i)含有与seq id no：76具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：75具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；
4、(ii)含有与seq id no：69具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：70具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；
5、(iii)含有与seq id no：71具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：70具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；
6、(iv)含有与seq id no：72具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：70具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；
7、(v)含有与seq id no：73具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：74具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；
8、(vi)含有与seq id no：73具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：75具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；
9、(vii)含有与seq id no：76具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：74具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；
10、(viii)含有与seq id no：77具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：78具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；
11、(ix)含有与seq id no：79具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：80具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)；或者
12、(x)含有与seq id no：77具有至少95％同一性的氨基酸序列的重链可变区(vh)；和/或含有与seq id no：80具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(vl)。
13、在一些实施方案中，所述抗体包含：
14、(i)含有seq id no：76的氨基酸序列的vh和含有seq id no：75的氨基酸序列的vl；
15、(ii)含有seq id no：69的氨基酸序列的vh和含有seq id no：70的氨基酸序列的vl；
16、(iii)含有seq id no：71的氨基酸序列的vh和含有seq id no：70的氨基酸序列的vl；
17、(iv)含有seq id no：72的氨基酸序列的vh和含有seq id no：70的氨基酸序列的vl；
18、(v)含有seq id no：73的氨基酸序列的vh和含有seq id no：74的氨基酸序列的vl；
19、(vi)含有seq id no：73的氨基酸序列的vh和含有seq id no：75的氨基酸序列的vl；
20、(vii)含有seq id no：76的氨基酸序列的vh和含有seq id no：74的氨基酸序列的vl；
21、(viii)含有seq id no：77的氨基酸序列的vh和含有seq id no：78的氨基酸序列的vl；
22、(ix)含有seq id no：79的氨基酸序列的vh和含有seq id no：80的氨基酸序列的vl；或者
23、(x)含有seq id no：77的氨基酸序列的vh和含有seq id no：80的氨基酸序列的vl。
24、在一些实施方案中，所述抗体选自fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、scfv、fv和全长igg。在一些实施方案中，所述抗体为fab片段。
25、在一些实施方案中，所述抗体包含：
26、(i)含有与seq id no：101具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：90具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
27、(ii)含有与seq id no：97具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：85具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
28、(iii)含有与seq id no：98具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：85具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
29、(iv)含有与seq id no：99具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：85具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
30、(v)含有与seq id no：100具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：89具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
31、(vi)含有与seq id no：100具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：90具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
32、(vii)含有与seq id no：101具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：89具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
33、(viii)含有与seq id no：102具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：93具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；
34、(ix)含有与seq id no：103具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：95具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；或者
35、(x)含有与seq id no：102具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no：95具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。
36、在一些实施方案中，所述抗体包含：
37、(i)含有seq id no：101的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：90的氨基酸序列的轻链；
38、(ii)含有seq id no：97的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：85的氨基酸序列的轻链；
39、(iii)含有seq id no：98的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：85的氨基酸序列的轻链；
40、(iv)含有seq id no：99的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：85的氨基酸序列的轻链；
41、(v)含有seq id no：100的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：89的氨基酸序列的轻链；
42、(vi)含有seq id no：100的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：90的氨基酸序列的轻链；
43、(vii)含有seq id no：101的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：89的氨基酸序列的轻链；
44、(viii)含有seq id no：102的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：93的氨基酸序列的轻链；
45、(ix)含有seq id no：103的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：95的氨基酸序列的轻链；或者
46、(x)含有seq id no：102的氨基酸序列的重链；和含有seq id no：95的氨基酸序列的轻链。
47、在一些实施方案中，抗体不与转铁蛋白受体的转铁蛋白结合位点特异性结合和/或其中抗体不抑制转铁蛋白与转铁蛋白受体的结合。在一些实施方案中，抗体与人、非人灵长类和啮齿动物的转铁蛋白受体中的两种或更多种的胞外表位具有交叉反应性。在一些实施方案中，复合物被配置成促进转铁蛋白受体介导的分子载荷内化到肌细胞中。
48、在一些实施方案中，分子载荷是寡核苷酸。在一些实施方案中，寡核苷酸包含含有dux4 rna之互补区的反义链。在一些实施方案中，寡核苷酸包含含有所述dux4 rna的非编码区之互补区的反义链。在一些实施方案中，寡核苷酸包含含有所述dux4 rna的5’或3’utr之互补区的反义链。
49、在一些实施方案中，反义链包含seq id no：151(gggcattttaatatatctctgaact)的至少15个连续核苷酸。
50、在一些实施方案中，反义链包含seq id no：151(gggcattttaatatatctctgaact)的核苷酸序列。
51、在一些实施方案中，寡核苷酸还包含与反义链杂交以形成双链sirna的有义链。在一些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个经修饰核苷间键联。在一些实施方案中，寡核苷酸包含一个或更多个经修饰核苷。在一些实施方案中，一个或更多个经修饰核苷是2’-经修饰核苷。在一些实施方案中，寡核苷酸是磷酸二酰胺吗啉代寡聚物。
52、在一些实施方案中，抗体通过可切割接头与分子载荷共价连接。在一些实施方案中，可切割接头包含缬氨酸-瓜氨酸序列。
53、在一些实施方案中，抗体与分子载荷共价连接，所述共价连接通过与所述抗体的赖氨酸残基或半胱氨酸残基的缀合进行。
54、在一些实施方案中，降低dux4的表达或活性包括降低dux4 rna水平。在一些实施方案中，降低dux4的表达或活性包括降低dux4蛋白水平。
55、本公开内容的另一个方面涉及降低细胞中dux4表达或活性的方法，所述方法包括使细胞与用于促进分子载荷内化到所述细胞中之有效量的复合物接触，任选地其中细胞是肌细胞。
56、本公开内容的另一个方面涉及治疗在4号染色体中具有与面肩肱型肌营养不良相关的d4z4重复的一个或更多个缺失的对象的方法，所述方法包括向对象施用有效量的复合物。