疫苗平台

本发明涉及一种新型疫苗平台，该新型疫苗平台包括脂质结合氨基酸序列和寡聚化序列。特别地，脂质结合氨基酸序列和寡聚化序列衍生自晶状体丝蛋白(filensin)，该晶状体丝蛋白是一种没有免疫原性或免疫原性极小的蛋白质。晶状体丝蛋白具有非常强的膜结合能力和寡聚性，使其成为抗原部分的理想载体。提供了新型免疫平台，该新型免疫平台包含编码脂质结合氨基酸序列和寡聚化序列的核酸序列。

背景技术：

1、在病原体(pathogenic agent)以前所未有的速度传播的时代，新型疫苗平台是必不可少的。晶状体丝蛋白是在眼睛晶状体中表达的细胞骨架蛋白。作为由bfsp1、bfsp2和cryaa构成的复合物的一部分，晶状体中间丝的正确形成需要晶状体丝蛋白(tapodi etal.bfsp1 c-terminal domains released by post-translational processing eventscan alter significantly the calcium regulation of aqp0 waterpermeability.experimental eye research 185(2019)107585)。严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus2，sars-cov-2)是冠状病毒科的成员，引起冠状病毒疾病2019(covid-19)，这是一种威胁生命的疾病。介导细胞进入和膜融合的sars-cov-2的突起蛋白(spike protein)是体液免疫应答的主要靶标(watanabeet al.,science 369,330-333(2020)17july)。

技术实现思路

1、本发明涉及一种重组多肽(免疫原性构建体)，该重组多肽包含脂质结合氨基酸序列(lipid binding amino acid sequence，lbd)、寡聚化氨基酸序列(oligomerizationamino acid sequence，od)和免疫原性部分(immunogenic moiety，im)，其中

2、(i)lbd具有低免疫原性或不具有免疫原性，并且具有至多150个氨基酸、优选至多100个氨基酸、优选至多85个氨基酸、或少于85个氨基酸的长度，

3、(ii)od具有低免疫原性或不具有免疫原性，并且具有至多150个氨基酸、优选至多100个氨基酸、优选至多85个氨基酸、或少于85个氨基酸的长度，

4、(iii)im具有至多50个氨基酸、至多40个氨基酸、优选至多30个氨基酸、优选至多25个氨基酸、或少于25个氨基酸的长度，或者im是编码具有至多50个氨基酸、至多40个氨基酸、优选至多30个氨基酸、优选至多25个氨基酸、或少于25个氨基酸的长度的肽的核酸序列。

5、本发明还涉及经分离的核酸分子，该经分离的核酸分子包含编码重组多肽(免疫原性构建体)的核酸序列。

6、优选地，重组多肽(免疫原性构建体)或核酸分子用于在受试者中引起免疫应答的方法中。提供了重组多肽(免疫原性构建体)或核酸分子在制备用于在受试者中引起免疫应答的药物中的用途。

7、在另一方面，提供了一种用于医学的肽，该肽包含衍生自晶状体丝蛋白(bfsp1(beaded filament structural protein 1)；珠丝结构蛋白1)的脂质结合氨基酸序列(lbd，脂质结合域)或者其功能性变体或功能性片段；或由衍生自晶状体丝蛋白(bfsp1；珠丝结构蛋白1)的脂质结合氨基酸序列(lbd，脂质结合域)或者其功能性变体或功能性片段构成。

8、在另一方面，提供了经分离的核酸分子，该核酸分子包含以下核酸序列或由以下核酸序列构成，所述核酸序列编码衍生自晶状体丝蛋白(bfsp1)的脂质结合氨基酸序列(lbd)、或者其功能性变体或功能性片段。优选地，该核酸分子还包含编码od的核酸序列。优选地，该核酸分子用于医学。

9、优选地，该核酸是dna、cdna或rna，优选为包含一个或多个经修饰的核苷酸的dna或cdna、优选为rna、优选为mrna、最优选为包含一个或多个经修饰的核苷酸的rna或mrna。

10、优选地，脂质结合氨基酸序列是衍生自bfsp1的c-末端的脂质结合氨基酸序列或者其功能性变体或功能性片段。优选地，该肽包含seq id no:1(hbfsp1 g434-t460)的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段、优选seq id no:130的氨基酸序列或其功能性变体或功能性性片段、更优选seq id no:3(hbfsp1 g434-e463)的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段。在优选的实施方案中，肽由seq id no:1或其功能性变体或功能性片段构成、优选seq id no:130的氨基酸序列或其功能化变体或功能片段，更优选seq id no:3或其功能变体或功能化片段。最优选地，lbd包括或由seq id no:3的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段构成。

11、优选地，功能性变体或功能性片段能够结合至脂质(例如，人工脂质体或细胞膜)。优选地，功能性变体或功能性片段具有与seq id no:1、seq id no:130或seq id no:3至少85％、至少90％或至少95％相同的序列。优选地，功能性变体或功能性片段具有与seq idno:1、seq id no:130或seq idno:3至多15个氨基酸、至多10个氨基酸或至多5个不同的氨基酸的序列。

12、优选地，肽(特别是lbd)附接至寡聚化氨基酸序列(od，寡聚化结构域)。提供了一种重组多肽，该重组多肽包含肽。优选地，重组多肽包含lbd和od。优选地，重组多肽包含lbd和im。优选地，重组多肽包含lbd和im、且不包含od。

13、在优选的实施方案中，寡聚化氨基酸序列是卷曲螺旋(coiled coil)结构域，例如三聚体卷曲螺旋或五聚体卷曲螺旋。

14、优选地，寡聚化氨基酸序列衍生自bfsp1。优选地，寡聚化氨基酸序列是衍生自bfsp1的c末端的寡聚化氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段。在优选实施方案中，od包括根据seq id no:2(hbfsp1 l464-p548)的序列或其功能性变体或功能性片段。在又一优选实施方案中，od由根据seq id no:2(hbfsp1 l464-p548)的序列或其功能性变体或功能性片段构成。优选地，od包括或由根据seq id no:123的序列或其功能性变体或功能性片段构成。优选地，od包括或由根据seq id no:124或其功能性变体或功能性片段构成。

15、在另一优选实施方案中，od是人工来源的。优选地，od包括或由seq id no:120的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段构成。优选地，od包括或由seq id no:121的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段构成。优选地，od包括或由seq id no:125的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段构成。优选地，od的功能性变体或功能性片段能够进行寡聚化反应(例如，形成寡聚物或聚合物)。优选地，功能性变体或功能性片段具有与seq idno:2、seq id no:121-125中的任何一者至少85％、至少90％或至少95％相同的序列。优选地，功能性变体或功能性片段具有与seq id no:2、seq id no:121-125中任一者至多50个氨基酸、至多45个氨基酸、更优选至多30个氨基酸、更优选至多15个氨基酸、更优选至多10个氨基酸或更优选至多5个不同的氨基酸的序列。

16、优选地，od包含seq id no:122的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段、或由seq id no:122的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段构成。

17、在另一优选实施方案中，寡聚化氨基酸序列衍生自与bfsp1不同的蛋白质，优选为向受试者施用后具有较低免疫原性或没有免疫原性的蛋白。在最优选的实施方案中，寡聚化氨基酸序列衍生自comp。优选地，寡聚化氨基酸序列包含seq id no:8中所示的序列或其功能性衍生物或功能性部分、或者seq id no:9中所示的序列或其功能性衍生物或功能性部分构成；或由seq id no:8中所示的序列或其功能性衍生物或功能性部分、或者seq idno:9中所示的序列或其功能性衍生物或功能性部分构成。优选地，功能性变体或功能性片段具有与seq id no:2、seq id no:8-9中的任何一者至少85％、至少90％或至少95％相同的序列。优选地，功能性变体或功能性片段具有与seq id no:2、seq id no:8-9中任一者至多50个氨基酸、至多45个氨基酸、更优选至多30个氨基酸、更优选至多15个氨基酸、更优选至多10个氨基酸或更优选至多5个不同的氨基酸的序列。

18、包含衍生自bfsp1的脂质结合氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段的肽可以直接链接至od或经由接头(l)链接至od。优选地，接头是肽接头，优选具有至多10个、优选至多5个氨基酸的长度。最优选地，接头是gg(-甘氨酸-甘氨酸-)。

19、核酸分子优选包含编码接头的序列。

20、在某些实施方案中，(多)肽或核酸分子用于在受试者中引起免疫应答的方法中。优选地，(多)肽或核酸分子用于治疗或预防病原体感染的方法中。优选地，(多)肽或核酸分子用于治疗或预防癌症的方法中。

21、优选地，晶状体丝蛋白是人晶状体丝蛋白(hbfsp1)。

22、优选地，铰链区(接头)附接在od的c末端氨基酸上。优选地，铰链区为最多10个、优选最多5个氨基酸长。优选地，铰链区包括甘氨酸(g)。更优选地，铰链区是gg。

23、优选地，od定位在lbd的c末端。

24、在第三方面，生物活性剂直接或通过接头链接至肽。生物活性剂可以是脂质、糖、氨基酸分子、肽、多肽、核酸分子或药物，例如小分子药物。生物活性剂优选为免疫原性表位。生物活性剂优选抗癌剂。生物活性剂可以是癌症标记物或致癌基因。

25、优选地，核酸分子还包含编码生物活性剂的核酸序列。

26、优选地，生物活性剂是免疫原性剂(im)，优选免疫原性氨基酸序列。优选地，im是编码免疫原性氨基酸序列的核酸序列。在某些实施方案中，存在多于一个im。多于一个im可以是来自相同病原体的不同im或来自不同病原体的不同im。核酸序列是dna或rna，优选mrna。在某些实施方案中，包含来自晶状体丝蛋白的lbd的肽与od缀合，该od与生物活性剂缀合、优选与im缀合。肽可以直接或通过接头链接至od。od可以直接或经由接头链接至im。

27、优选地，免疫原性氨基酸序列的长度为至多100个氨基酸或至多50个氨基酸、优选至多25个氨基酸、最优选5-15个氨基酸、或最优选5-25个氨基酸。

28、优选地，免疫原性氨基酸序列来自sars-cov-2，优选来自sars-cov-2的突起蛋白。在优选实施方案中，免疫原性氨基酸序列是s蛋白外环的c端延伸版(p807-d820，seq idno:5)或其任何功能性变体或功能性片段，或者是s蛋白外环的n端延伸版(f802-r815，seqid no:6或f802-k814，seq id no:11)或其任意功能性变体或功能性片段，最优选为s蛋白的外环(p807-r815，seq id no:7或p807-k814，seq id no:10)或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，im包含表1中列出的任何一种或多种序列或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，im包含至少一种来自sars-cov-2的tce或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，im包含来自sars-cov-2的多于一个的氨基酸序列或核酸序列或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，来自sars-cov-2的任何一个序列的功能性变体或功能性片段能够在受试者中引起免疫应答。优选地，来自sars-cov-2的任何一个序列的功能性变体或功能性片段具有与参考序列至多8个氨基酸、或至多5个氨基酸、或至多3个不同的氨基酸的序列。

29、该核酸可以包含控制序列、调节元件或非翻译区。

30、优选地，核酸分子包含根据seq id no:126的序列或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，核酸分子包含根据seq id no:127的序列或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，核酸分子包含根据seq id no 128的序列或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，核酸分子包含根据seq id no 129的序列或其任何功能性变体或功能性片段。

31、在另一方面，提供了一种用于医学的重组多肽，该多肽包含脂质结合氨基酸序列(lbd)和寡聚化氨基酸序列(od)，其中多肽链接至免疫原性部分(im)。提供了一种核酸分子，该核酸分子包括用于重组多肽的编码序列。

32、提供了一种核酸分子，该核酸分子包括用于lbd和od的编码序列。优选地，该核酸分子用于医学。优选地，核酸分子还包含用于im的编码序列。优选地，免疫原性部分是免疫原性氨基酸序列。

33、lbd和od可以通过接头(l)链接。

34、优选地，核酸分子还包含用于一个或多个接头的编码序列。

35、优选地，接头是肽接头，优选具有最多10个、优选最多5个氨基酸的长度。

36、任选且优选地，多肽经由接头(l')链接至免疫原性剂。

37、优选地，接头是肽接头，优选具有最多10个、优选最多5个氨基酸的长度。最优选地，l'是gg。

38、优选地，寡聚化氨基酸序列是卷曲螺旋，例如三聚体卷曲螺旋或五聚体卷曲螺旋。

39、优选地，脂质结合氨基酸序列和寡聚化氨基酸序列衍生自相同蛋白，优选为向受试者施用之后具有较低免疫原性或没有免疫原性的蛋白。优选地，脂质结合氨基酸序列和寡聚化氨基酸序列衍生自晶状体丝蛋白(bfsp1)，更优选衍生自人晶状体丝蛋白(hbfsp1)。

40、替代地，脂质结合氨基酸序列和寡聚化氨基酸序列衍生自不同的蛋白，优选为向受试者施用之后具有较低免疫原性或没有免疫原性的蛋白。

41、优选地，脂质结合氨基酸序列衍生自晶状体丝蛋白(bfsp1)，更优选衍生自人晶状体丝蛋白(hbfsp1)，并且寡聚化氨基酸序列衍生自另一种蛋白。

42、在其它优选实施方案中，lbd源自ph(pleckstrin homology domain，普列克底物蛋白同源结构域)超家族蛋白：例如arf(adp核糖基化因子)、pten、pkc、irs1、发动蛋白、opa、线粒体融合蛋白(mitofusin)、普列克底物蛋白；

43、c1-dag结合超家族蛋白：例如pkc、akap13；

44、c2-超家族蛋白：例如pten、突触结合蛋白(synaptotagmin)、plc、pla；

45、fyve结构域：rhogef、eea1等；px结构域：pld、pi3k、nox(nadph氧化酶)等；enth结构域：epsin、clint1等；anth结构域：hip1、hip1r等；bar结构域：amph、吞蛋白(endophilin)等；ferm结构域：埃兹蛋白(ezrin)、根蛋白(radixin)等；pdz结构域：erbin等；tubby结构域：tub等。

46、在优选实施方案中，寡聚化氨基酸序列衍生自晶状体丝蛋白(bfsp1)，更优选来自人晶状体丝蛋白(hbfsp1)。

47、优选地，脂质结合氨基酸序列是衍生自bfsp1的c-末端的脂质结合氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段。优选地，该肽包含seq id no:1(hbfsp1 g434-t460)的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段、优选seq id no:130的氨基酸序列或其功能性变体或功能性性片段、更优选seq id no:3(hbfsp1 g434-e463)的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段。在优选的实施方案中，肽由seq id no:1或其功能性变体或功能性片段、优选seq id no:130的氨基酸序列或其功能化变体或功能片段、更优选seq id no:3或其功能变体或功能化片段构成。最优选地，lbd包括或由seq id no:3的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段构成。

48、优选地，功能性变体或功能性片段能够结合至脂质(例如，人工脂质体或细胞膜)。优选地，功能性变体或功能性片段具有与seq id no:1、seq id no:130或seq id no:3至少85％、至少90％或至少95％相同的序列：优选地，功能性变体或功能性片段具有与seq idno:1、seq id no:130或seq id no:3至多15个氨基酸、至多10个氨基酸或至多5个不同的氨基酸的序列。

49、优选地，寡聚化氨基酸序列是衍生自bfsp1的c末端的寡聚化氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段。在优选实施方案中，od包括根据seq id no:2的序列(hbfsp1 l464-p548)或其功能性变体或功能性片段。在又一优选实施方案中，od由根据seq id no:2的序列(hbfsp1 l464-p548)或其功能性变体或功能性片段构成。

50、优选地，od包括或由根据seq id no:123或seq id no:124的序列或其功能性变体或功能性片段构成。

51、优选地，od是人工来源的。优选地，od包括seq id no:120的氨基酸序列、或seq idno:121的氨基酸序列、或seq id no:125的氨基酸序列，或它们的功能性变体或功能性片段。

52、优选地，od包括seq id no:122的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段。

53、在优选的实施方案中，寡聚化氨基酸序列衍生自人软骨寡聚基质蛋白(cartilageoligomeric matrix protein，comp)，也称为血小板反应蛋白-5蛋白。优选地，寡聚化氨基酸序列衍生自comp的卷曲螺旋区。优选地，寡聚化氨基酸序列包含或由seq id no:8中所示的序列或其功能性衍生物或功能性部分、或seq id no:9中所示的序列或其功能性衍生物或功能性部分构成。

54、优选地，脂质结合氨基酸序列具有小于约100个氨基酸、优选小于约50个氨基酸、优选小于约45个氨基酸、优选小于约40个氨基酸、最优选小于约35个氨基酸的长度。优选地，脂质结合氨基酸序列具有大于约5个氨基酸的长度。

55、优选地，寡聚化氨基酸序列衍生自bfsp1。优选地，寡聚化氨基酸序列是衍生自bfsp1的c末端的寡聚化氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段。在优选实施方案中，od包括根据seq id no:2的序列(hbfsp1 l464-p548)或其功能性变体或功能性片段。在又一优选实施方案中，od由根据seq id no:2的序列(hbfsp1 l464-p548)或其功能性变体或功能性片段构成。优选地，od包括或由根据seq id no:123的序列或其功能性变体或功能性片段构成。优选地，od包括或由seq id no:124或其功能性变体或功能性片段构成。

56、在另一优选实施方案中，od是人工来源的。优选地，od包括或由seq id no:120的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段构成。优选地，od包括或由seq id no:121的氨基酸序列或其功能性变体或功能性片段构成。优选地，od包括或由seq id no:125的氨基酸序列、或其功能性变体或功能性片段构成。

57、优选地，寡聚化氨基酸序列具有约10-200个氨基酸的长度，优选10-150个氨基酸的长度。

58、优选地，多肽具有以下结构：lbd-od-(l')-im或lbd-(l)-od-(l')-im，其中()表示任选的元素。l和l'是接头部分，并且可以是相同的或不同的。

59、在第四方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包含脂囊泡，例如与多肽或肽结合的脂质体。

60、在另一方面，提供了经分离的核酸序列，所述核酸序列编码根据任何方面的多肽、肽、lbd、od或其功能性变体或功能性片段中的任何一种。在优选实施方案中，核酸序列是rna、例如mrna。在其他优选实施方案中，核酸序列是dna。核酸序列可以包含经修饰的核酸碱基。

61、在任一个方面中，优选地，(多)肽用于在受试者中引起免疫应答的方法中。免疫应答针对免疫原性剂。优选地，(多)肽用于使受试者免疫抵抗病原体(诸如病毒或细菌)的方法中。优选地，病原体是rna病毒、优选冠状病毒、更优选sars-cov-2。受试者是动物、优选哺乳动物、更优选人。

62、在实施方案中，豆蔻酰基还附接至多肽或肽的n-末端。在实施方案中，豆蔻酰化以共翻译的方式发生。

63、优选地，免疫原性氨基酸序列的长度为至多100个氨基酸或至多50个氨基酸、优选至多25个氨基酸、最优选5-15个氨基酸、或最优选5-25个氨基酸。

64、优选地，免疫原性氨基酸序列来自sars-cov-2，优选来自sars-cov-2的突起蛋白。在优选实施方案中，免疫原性氨基酸序列是s蛋白外环的c端延伸版(p807-d820，seq idno:5)或其任何功能性变体或功能性片段，或s蛋白外环的n端延伸版(f802-r815，seq idno:6或f802-k814，seq id no:11)或其任意功能性变体或功能性片段，最优选为s蛋白的外环(p807-r815，seq id no:7或p807-k814，seq id no:10)或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，im包括表1中所列出的任何一个或多个序列。优选地，im包含来自sars-cov-2的至少一种tce。优选地，im包含来自sars-cov-2的多于一个氨基酸序列或核酸序列。

65、该核酸可以包含控制序列、调节元件或非翻译区。

66、优选地，核酸分子包括根据seq id no:126的序列或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，核酸分子包括根据seq id no:127的序列或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，核酸分子包含根据seq id no 128的序列或其任何功能性变体或功能性片段。优选地，核酸分子包含根据seq id no 129的序列或其任何功能性变体或功能性片段。